JPS60242370A - 免疫診断用着色粒子 - Google Patents
免疫診断用着色粒子Info
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- JPS60242370A JPS60242370A JP9746684A JP9746684A JPS60242370A JP S60242370 A JPS60242370 A JP S60242370A JP 9746684 A JP9746684 A JP 9746684A JP 9746684 A JP9746684 A JP 9746684A JP S60242370 A JPS60242370 A JP S60242370A
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- Japan
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- immunodiagnosis
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- dye
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[技術分野]
本発明は診断精度の低下をきたすことなく着色された免
疫診断用着色粒子に関するものである。
疫診断用着色粒子に関するものである。
[従来技術]
免疫診断用粒子としては、従来、ポリスチレンなどの合
成ポリマーの粒子が用いられてきたが、合成ポリマーは
本質的に無色ないし淡色であり、近年の診断用途別に粒
子を着色して用いたり、あるいは着色することにより診
断の精度を向上させるという要請に応えられるものでは
ない。そのために、免疫診断用粒子を着色する試みが種
々なされてきたが、大抵の場合に診断精度の著しい低下
をきたしていた。
成ポリマーの粒子が用いられてきたが、合成ポリマーは
本質的に無色ないし淡色であり、近年の診断用途別に粒
子を着色して用いたり、あるいは着色することにより診
断の精度を向上させるという要請に応えられるものでは
ない。そのために、免疫診断用粒子を着色する試みが種
々なされてきたが、大抵の場合に診断精度の著しい低下
をきたしていた。
[目的]
そこで、本発明の目的は、診断精度の低下をきたすこと
なく着色のなされた免疫診断用着色粒子を提供すること
にある。
なく着色のなされた免疫診断用着色粒子を提供すること
にある。
[発明の構成]
本発明者らは、上述したような要請と問題点に鑑みて免
疫診断用粒子の着色法を種々検討してきた結果、特定の
顔料、金属粉、染料により粒子を着色すれば、診断精度
は低下せずに、むしろ、向上することを見出し、その認
識の下に本発明を完成した。
疫診断用粒子の着色法を種々検討してきた結果、特定の
顔料、金属粉、染料により粒子を着色すれば、診断精度
は低下せずに、むしろ、向上することを見出し、その認
識の下に本発明を完成した。
すなわち、本発明免疫診断用着色粒子は、(1) Mg
、Ca、Ba、Ai 、Ti、Fe、C:o、Ni、C
u、Zn、Si から選ばれた元素を含む顔料、(2)
Cu、Lんちゅう。
、Ca、Ba、Ai 、Ti、Fe、C:o、Ni、C
u、Zn、Si から選ばれた元素を含む顔料、(2)
Cu、Lんちゅう。
Ag、Au、 An 、Zn、ステンレススチールから
選ばれた金属粉および(3)アゾ系またはキノン系の分
散染料および油溶染料から選ばれた少なくともひとつの
染料のうちの少なくともひとつにより免疫診断用粒子を
着色してなることを特徴とするものである。
選ばれた金属粉および(3)アゾ系またはキノン系の分
散染料および油溶染料から選ばれた少なくともひとつの
染料のうちの少なくともひとつにより免疫診断用粒子を
着色してなることを特徴とするものである。
本発明において用いられる免疫診断用粒子としては、例
えば粒径が0.05〜100 p−rnであって、水に
分散した状態で用いられるものと、2〜10mmの粒子
1個を診断に用いるものとに分けられる。
えば粒径が0.05〜100 p−rnであって、水に
分散した状態で用いられるものと、2〜10mmの粒子
1個を診断に用いるものとに分けられる。
ここで、粒径0.05〜100 g mの免疫診断用粒
子は乳化重合法、シード重合法、沈殿重合法、懸濁重合
法、再分散法などによって製造することができる。粒径
2〜10m+aの粒子は射出成形法により成形するのが
一般的である。
子は乳化重合法、シード重合法、沈殿重合法、懸濁重合
法、再分散法などによって製造することができる。粒径
2〜10m+aの粒子は射出成形法により成形するのが
一般的である。
顔料または金属粉による着色は、これら顔料や金属粉の
存在下に、七ツマ−を重合して着色されたポリマー整置
る方法、これら顔料や金属粉とポリマー溶液の混合液を
分散させて着色されたポリマーを析出させる方法(例え
ば気中乾燥法、液中法発法など)、粒子表面に金属基な
どの可溶性金属化合物を吸着または結合し、顔料または
金属に転換する方法、あるいはポリマーと顔料や金属粉
とを混練する方法などにより行うことができる。
存在下に、七ツマ−を重合して着色されたポリマー整置
る方法、これら顔料や金属粉とポリマー溶液の混合液を
分散させて着色されたポリマーを析出させる方法(例え
ば気中乾燥法、液中法発法など)、粒子表面に金属基な
どの可溶性金属化合物を吸着または結合し、顔料または
金属に転換する方法、あるいはポリマーと顔料や金属粉
とを混練する方法などにより行うことができる。
染料による着色は、染料溶液と粒子とを混合することに
より行うのが一般的であるが、染料を顔料と同様に取り
扱い、上述したような各種方法で着色することもできる
。
より行うのが一般的であるが、染料を顔料と同様に取り
扱い、上述したような各種方法で着色することもできる
。
かかる粒子の材料としては、ポリスチレン、ポリ堪化ビ
ニル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアミド、ポリエス
テル、ポリカーボネートなどのポリマー、およびこれら
ポリマーにカルボキシル基、水酸基、アミン基、アルデ
ヒド基、スルポン酸基などを共重合あるいは化学反応に
より導入したもの、プラズマ処理したものなど、着色を
必要とする合成ポリマーを挙げることができる。この他
にも、多糖類、タンパク質の半合成ポリマー、天然ポリ
マーおよびこれらの混合物、これらと合成ポリマーとの
混合物も免疫診断用粒子としても適用できること勿論で
ある。
ニル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアミド、ポリエス
テル、ポリカーボネートなどのポリマー、およびこれら
ポリマーにカルボキシル基、水酸基、アミン基、アルデ
ヒド基、スルポン酸基などを共重合あるいは化学反応に
より導入したもの、プラズマ処理したものなど、着色を
必要とする合成ポリマーを挙げることができる。この他
にも、多糖類、タンパク質の半合成ポリマー、天然ポリ
マーおよびこれらの混合物、これらと合成ポリマーとの
混合物も免疫診断用粒子としても適用できること勿論で
ある。
あるいはまた、免疫診断用粒子としては、例えば無機物
または無機物を含む粒子による芯に対して上述のポリマ
ーによる外層を被覆して構成したような複層構造であっ
てもよい。その場合には、外層を着色することにより、
芯物質が色を呈する材料であっても、用途別に色分けす
ることが可能となる。ここで、芯としての無機物として
は磁性体が有用であり、粒径2〜10mmの粒子に適用
するのに好適である。
または無機物を含む粒子による芯に対して上述のポリマ
ーによる外層を被覆して構成したような複層構造であっ
てもよい。その場合には、外層を着色することにより、
芯物質が色を呈する材料であっても、用途別に色分けす
ることが可能となる。ここで、芯としての無機物として
は磁性体が有用であり、粒径2〜10mmの粒子に適用
するのに好適である。
かかる粒子の芯材料の磁性体としては、純鉄、低炭素鋼
、ケイ素鋼などの磁芯材料の粒子または微粉末、γ−酸
酸化鉄ラフエライトマグネタイトどの超常磁性体微粉末
が好適である。
、ケイ素鋼などの磁芯材料の粒子または微粉末、γ−酸
酸化鉄ラフエライトマグネタイトどの超常磁性体微粉末
が好適である。
診断精度を低下させずに免疫診断用粒子を着色する顔料
としては、Mg、G:a、Ba、lj 、Ti 、Fe
、Go、Ni 。
としては、Mg、G:a、Ba、lj 、Ti 、Fe
、Go、Ni 。
Cu、Zn、Siから選ばれた元素を含む顔料を用いる
ことができる。具体的には、タルク、石綿、炭酸カルシ
ウム、白艶華、重晶石、硫酸バリウム、アルミナ、群青
、アルミナ中ワイド、カオリン、雲母、シリカ、けいそ
う土、ベントナイト、チタンホワイト、チタンイエロー
、亜鉛華、硫化亜鉛、ベンガラ、鉄黒、黄土、線上、マ
ルスバイオレット、紺青、コバルトブルー、コバルトグ
リーン。
ことができる。具体的には、タルク、石綿、炭酸カルシ
ウム、白艶華、重晶石、硫酸バリウム、アルミナ、群青
、アルミナ中ワイド、カオリン、雲母、シリカ、けいそ
う土、ベントナイト、チタンホワイト、チタンイエロー
、亜鉛華、硫化亜鉛、ベンガラ、鉄黒、黄土、線上、マ
ルスバイオレット、紺青、コバルトブルー、コバルトグ
リーン。
リン酸コーバルト、エメラルドグリーン、海碧、オレン
ジレイキ、銅フタロシアニン、ピグメントグリーン、グ
リーンゴールドにッケルコンプレックス)などが挙げら
れる。
ジレイキ、銅フタロシアニン、ピグメントグリーン、グ
リーンゴールドにッケルコンプレックス)などが挙げら
れる。
これらのうち、特に好ましいのは、白艶華、亜鉛華、群
青、チタンホワイト、チタンイエロー、ベンガラ、鉄黒
であり、これら顔料を添加することにより、診断精度は
向上する。
青、チタンホワイト、チタンイエロー、ベンガラ、鉄黒
であり、これら顔料を添加することにより、診断精度は
向上する。
また、金属粉も顔料として用い得るが、かがる金属とし
ては、Cu、 Lんちゅう、 Ag、Au、 Ai 、
Zn。
ては、Cu、 Lんちゅう、 Ag、Au、 Ai 、
Zn。
ステンレススチールなどが挙げられる。
なお、顔料は界面活性剤やシランカップリング剤などに
より、表面処理しであるものであってもよい。
より、表面処理しであるものであってもよい。
染料としては、アゾ系またはキノン系の分散染料および
/または油溶染料を用いることができる。具体的には、
ディスバーズイエロー3、ディスバーズイエロー7、デ
ィスバーズレッド7などのアゾ系分散染料、ディスバー
ズバイオレット1、ディスバーズバイオレット8、ディ
スパーズブルー26などのキノン系分散染料、ソルベン
トイエロー2、ソルベントイエロー14、ソルベントオ
レンジl、ソルベントレッド23、ソルベントレッド1
などのアゾ系油溶染料、オイルレッド9、ソルベントバ
イオレット13、ソルベントブルー12などのキノン系
油溶染料が挙げられる。これら染料は、粒子ポリマーを
溶解ないし膨潤させる溶媒には溶解するものの、水には
溶解しない。これにより、粒子と染料溶液とを混合し、
あるいは粒子の水性分散液、すなわちラテックスと染料
溶液とを混合することによって、粒子を染色することが
できる。
/または油溶染料を用いることができる。具体的には、
ディスバーズイエロー3、ディスバーズイエロー7、デ
ィスバーズレッド7などのアゾ系分散染料、ディスバー
ズバイオレット1、ディスバーズバイオレット8、ディ
スパーズブルー26などのキノン系分散染料、ソルベン
トイエロー2、ソルベントイエロー14、ソルベントオ
レンジl、ソルベントレッド23、ソルベントレッド1
などのアゾ系油溶染料、オイルレッド9、ソルベントバ
イオレット13、ソルベントブルー12などのキノン系
油溶染料が挙げられる。これら染料は、粒子ポリマーを
溶解ないし膨潤させる溶媒には溶解するものの、水には
溶解しない。これにより、粒子と染料溶液とを混合し、
あるいは粒子の水性分散液、すなわちラテックスと染料
溶液とを混合することによって、粒子を染色することが
できる。
この他の染料によっても染色は可能であるが、粒子の凝
集、染料の脱着あるいは診断精度の低下をもたらすこと
が多い。好ましい染料としては、ツルベットイエロー1
4、ソルベントレッド1、ソルベントブル−12および
これらの混合物が挙げられる。
集、染料の脱着あるいは診断精度の低下をもたらすこと
が多い。好ましい染料としては、ツルベットイエロー1
4、ソルベントレッド1、ソルベントブル−12および
これらの混合物が挙げられる。
顔料、金属粉の使用量はポリマーのlooppm〜1%
程度、染料は0.1〜1ooppln程度である。
程度、染料は0.1〜1ooppln程度である。
以上のように着色された免疫診断用着色粒子を血清また
は血清タンパクで処理することにより、診断精度をさら
に向上させることができる。血清または血清タンパク質
の処理は、粒子に抗体または抗原を感作する前であって
も、感作した後であってもよいが、粒径2〜10mmの
着色された免疫診断用粒子の場合には感作する前にかか
る処理を施しておくのが好適である。
は血清タンパクで処理することにより、診断精度をさら
に向上させることができる。血清または血清タンパク質
の処理は、粒子に抗体または抗原を感作する前であって
も、感作した後であってもよいが、粒径2〜10mmの
着色された免疫診断用粒子の場合には感作する前にかか
る処理を施しておくのが好適である。
血清としては、牛血清、子牛血清、うさぎ血清、羊血清
、にわとり血清、人血清などが用いられ、通常リン酸緩
衝液で2〜20倍に希釈して使用する。血清タンパク質
としては、アルブミン、グロブリン、フィブロインなど
が挙げられるが、アルブミンが好ましい。血清タンパク
質は0.1〜10重量%リン酸緩衝液溶液として使用さ
れる。
、にわとり血清、人血清などが用いられ、通常リン酸緩
衝液で2〜20倍に希釈して使用する。血清タンパク質
としては、アルブミン、グロブリン、フィブロインなど
が挙げられるが、アルブミンが好ましい。血清タンパク
質は0.1〜10重量%リン酸緩衝液溶液として使用さ
れる。
処理方法としては、粒子または粒子の水性分散液と、血
清希釈液または血清タンパク質溶液とを、例えば室温で
2時間混合した後、上澄液を捨て、リン酸緩衝液で洗浄
することができる。
清希釈液または血清タンパク質溶液とを、例えば室温で
2時間混合した後、上澄液を捨て、リン酸緩衝液で洗浄
することができる。
また、本発明による免疫診断用着色粒子に担持される免
疫反応性物質としそは、Bg肝炎ウィルス表面抗原(H
,Bs抗原)、抗HBs抗体、大じゅう毛性ゴナドトロ
ピン(HOG抗原)、抗HOG抗体、イムノグロブリン
G、マイPプラズマ抗原、核酸、核タンパク、エストロ
ゲン、抗エストロゲン抗体などを挙げることができる。
疫反応性物質としそは、Bg肝炎ウィルス表面抗原(H
,Bs抗原)、抗HBs抗体、大じゅう毛性ゴナドトロ
ピン(HOG抗原)、抗HOG抗体、イムノグロブリン
G、マイPプラズマ抗原、核酸、核タンパク、エストロ
ゲン、抗エストロゲン抗体などを挙げることができる。
し実施例]
次に、実施例に従って本発明をより詳細に説明する。
実施例1
フェライト微粉末を4容、量%含む直径4mmのポリス
チレン粒子の表面に、インサート成形法により、顔料に
より着色されたポリスチレンの厚さ1.1 mmの層を
形成し、研磨して直径6mmの球を調製した。
チレン粒子の表面に、インサート成形法により、顔料に
より着色されたポリスチレンの厚さ1.1 mmの層を
形成し、研磨して直径6mmの球を調製した。
顔料としては、白艶華、亜鉛華、チタンホワイト、チタ
ンイエロー、群青、ベンガラ (赤)およびカーボンブ
ラックをポリスチレン100gに対して0.5g使用し
た。酵素標識抗体免疫診断法(EIA)により、B型肝
炎ウィルス表面抗原の検出限界を測定したところ、無着
色粒子はlng /rnll、チタンイエロー、群青、
ベンガラはlng/alj以下、白艶華、亜鉛華、チタ
ンホワイトは0.5ng/muであった。
ンイエロー、群青、ベンガラ (赤)およびカーボンブ
ラックをポリスチレン100gに対して0.5g使用し
た。酵素標識抗体免疫診断法(EIA)により、B型肝
炎ウィルス表面抗原の検出限界を測定したところ、無着
色粒子はlng /rnll、チタンイエロー、群青、
ベンガラはlng/alj以下、白艶華、亜鉛華、チタ
ンホワイトは0.5ng/muであった。
一方、カーボンブラックを用いた場合には、酵素標識抗
体の非特異的な吸着が起こるために、抗原の検出精度は
著しく低下した。
体の非特異的な吸着が起こるために、抗原の検出精度は
著しく低下した。
実施例2
実施例1の粒子を、リン酸緩衝液で4倍に希釈した小生
血清に浸漬し、室温で2時間かきまぜた後に粒子を取り
出し、リン酸緩衝液で3回洗浄した。同様に、EIA法
により、HBs抗原の検出限界を測定したところ、無着
色粒子、カー・ボンブラックにより着色した粒子の検出
限界は実施例1に対して向上しなかったが、チタンイエ
ロー、群青、ベンガラは0.5ng/m文、白艶華、亜
鉛革、チタンホワイトは0.1〜0.2ng/muに向
上した。
血清に浸漬し、室温で2時間かきまぜた後に粒子を取り
出し、リン酸緩衝液で3回洗浄した。同様に、EIA法
により、HBs抗原の検出限界を測定したところ、無着
色粒子、カー・ボンブラックにより着色した粒子の検出
限界は実施例1に対して向上しなかったが、チタンイエ
ロー、群青、ベンガラは0.5ng/m文、白艶華、亜
鉛革、チタンホワイトは0.1〜0.2ng/muに向
上した。
実施例3
固形分濃度10%、平均粒径0.7gmのスチレン−メ
タクリル酸共重合体のラテックス100gに、室温で染
料の0.1%トルエン溶液2m文をかきまぜながら徐々
に添加し、添加終了後に35°Cで2時間かきまぜた。
タクリル酸共重合体のラテックス100gに、室温で染
料の0.1%トルエン溶液2m文をかきまぜながら徐々
に添加し、添加終了後に35°Cで2時間かきまぜた。
スチーム蒸留によりトルエンを除去したところ、粒子の
着色されたラテックスが得られた。染料としてはソルベ
ントイエロー14、ソルベントレッドl、ソルベントブ
ルー12を使用した。
着色されたラテックスが得られた。染料としてはソルベ
ントイエロー14、ソルベントレッドl、ソルベントブ
ルー12を使用した。
スライドテスト法によるリウマチ因子の検出感度はいず
れも無着色のラテ・ンクスと同等であった。
れも無着色のラテ・ンクスと同等であった。
実施例4
固形分濃度10%、平均粒径1.4grnのスチレン−
トリブロモフェニルアクリレート−メタクリル酸共重合
体のラテックス100gに、室温で染料としてソルベン
トレッド1の0.01%クロロホルム溶液5nlをかき
まぜながら徐々に添加し、添加終了後、50 ’Oで2
時間かきまぜた。スチームを吹き込んでクロロホルムを
除去すると、分散している粒子が赤く着色されたラテッ
クスが得られた。
トリブロモフェニルアクリレート−メタクリル酸共重合
体のラテックス100gに、室温で染料としてソルベン
トレッド1の0.01%クロロホルム溶液5nlをかき
まぜながら徐々に添加し、添加終了後、50 ’Oで2
時間かきまぜた。スチームを吹き込んでクロロホルムを
除去すると、分散している粒子が赤く着色されたラテッ
クスが得られた。
マイクロタイター法により、リウマチ因子の検出感度を
測定したところ、無着色ラテックスの感度が4管(血清
希釈倍率400倍)であるのに対し、着色ラテックスの
感度は5管(同800倍)であった。
測定したところ、無着色ラテックスの感度が4管(血清
希釈倍率400倍)であるのに対し、着色ラテックスの
感度は5管(同800倍)であった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1) (1) Kg、Ca、Ba、All 、Ti、F
e、Go、Ni、Cu、Zn、Siから選ばれた元素を
含む顔料、 (2) Cu、 l、んちゅう、八g * Au 、A
I + Zn 、ステンレススチールから選ばれた金
属粉および(3)アゾ系またはキノン系の分散染料およ
び油溶染料から選ばれた少なくともひとつの染料 のうちの少なくともひとつにより免疫診断用粒子を着色
してなることを特徴とする免疫診断用着色粒子。 (以 下 余 白 )
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59097466A JPH0634014B2 (ja) | 1984-05-17 | 1984-05-17 | 免疫診断用着色粒子 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP59097466A JPH0634014B2 (ja) | 1984-05-17 | 1984-05-17 | 免疫診断用着色粒子 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS60242370A true JPS60242370A (ja) | 1985-12-02 |
JPH0634014B2 JPH0634014B2 (ja) | 1994-05-02 |
Family
ID=14193074
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP59097466A Expired - Lifetime JPH0634014B2 (ja) | 1984-05-17 | 1984-05-17 | 免疫診断用着色粒子 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0634014B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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JPS63229367A (ja) * | 1987-02-27 | 1988-09-26 | イーストマン コダック カンパニー | 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途 |
JPS63238462A (ja) * | 1987-03-27 | 1988-10-04 | Eiken Kagaku Kk | 特異結合分析法 |
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JPS5719661A (en) * | 1980-07-09 | 1982-02-01 | Fuji Photo Film Co Ltd | Group of microcapsules for immune reaction and discrimination method using the same |
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-
1984
- 1984-05-17 JP JP59097466A patent/JPH0634014B2/ja not_active Expired - Lifetime
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JPH01214760A (ja) * | 1988-02-23 | 1989-08-29 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | 免疫学的簡易測定方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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JPH0634014B2 (ja) | 1994-05-02 |
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