JPS60214258A - 固体支持体に担持されたウイルス抗原、その製造方法およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はウィルス、特にウィルスの精製、ウィルス抗原
の生産、感作固体を製造するためのそのウィルス抗原の
使用、およびウィルス抗原感作固体のウィルス抗体試験
への使用に関するものである。より詳細には、本発明は
風疹ウィルス、風疹ウィルス抗原、および風疹ウィルス
抗体を検出するための試験に関する。

米国特許第４１９５０７４号明細書は可溶性の風疹ウィ
ルス抗原を生産する方法、並びに風疹ウィルス抗体を検
出するための凝集試験へのその応用を開示している。上
記特許によれば、風疹ウィルスに感染した細胞の組織培
養液を、風疹抗原と反応性の抗体を含むことが知られる
ヒト血清から誘導されたＩ、Ｇを含有するカラムに通し
て免疫吸着により分離し、続いてそのカラムから風疹抗
原物質を溶離し、そして可溶性抗原をゲル濾過クロマト
クラフィーにより選択する。その後、その可溶性抗原は
赤血球に感作するのに使用され、その感作赤血球は直接
凝集反応によりヒト血清試料中の抗体を検出するのに用
いられる。

上記特許によればいわゆる風疹抗原はウィルスそれ自体
からは回収されておらず、従ってそのような風疹抗原物
質はウィルスの構造蛋白質を含んでいないと考えられる
。

本発明の一面からすると、全風疹ウィルス（そのままの
完全な風疹ウィルス、ｍｏｌｅ　ｒｕｂｅｌｌａ　ｖｉ
ｒｕｓ）の破壊および可溶化により得られる可溶性風疹
ウィルス抗原を用いて感作された固体支持体が提供され
る。

本発明の別の面からすると一全風疹ウイルスから可溶性
風疹ウィルス抗原が得られる。

本発明のさらに別の面によれば、風疹ウィルス抗体を検
出するための試験または検定法、並びＱてそのための試
薬キットが提供される。

本発明のさらに別の面によれば、吸着ゲルを使用して非
ウィルス蛋白質および核酸を除くことにより精製ウィル
スを生産する方法が提供される。

また本発明のさらに別の面によれば、ウィルス抗原で感
作された固体支持体の製造方法が提供される。

より詳細には、風疹ウィルス抗原は精製した全風疹ウィ
ルスをその抗原特性を失わしめることなく破壊して可溶
性の風疹ウィルス抗原を与える表面活性剤または洗浄剤
でそのウィルスを処理することにより、完全な風疹ウィ
ルスから単離される。

洗浄剤はその全風疹ウィルスを抗原特性を失わしめるこ
となく破壊しかつ可溶化するのに十分な量で用いられる
。

全風疹ウィルスの破壊のために使用される表面活性剤ま
たは洗浄剤は、その抗原特性を失わしめることなくウィ
ルスを破壊しかつ可溶化する種々多様な表面活性剤また
は洗浄剤のいずれであってもよく、例えば陽イオン性、
陰イオン性および非イオン性表面活性剤が含まれる。そ
のような表面活性剤は当該技術分野で周知であり、代表
的な例としては硫酸エステルのアルカリ金属塩、セッケ
ン、硫酸化油もしくはスルホ／化油、各種のアミン類、
第四アンモニウム塩およびエチレンオキシドとの縮合生
成物などがある。このような洗浄剤および表面活性剤、
並びに全ウィルスを破壊するためのそれらの使用は当該
技術分野で知られている。このような使用に適した洗浄
剤はドデシル硫酸アルカリ塩（例えばリチウ゛ム塩また
はナトリウム塩）、スルホベタイン、デオキシコール酸
塩おヨヒラウロイルサルコシン（サルコシル、　５ａｒ
ｃｏｓｙｌ）である。

風疹ウィルス抗原が凝集検定法での使用のために固体支
持体に担持される場合、洗浄剤または表面活性剤はウィ
ルスを破壊しかつ可溶化して、可溶性のウィルス抗原が
粒子支持体に担持された時にその感作粒子が単分散され
たままであるような大きさの分子量をもつ可溶性ウィル
ス抗原を提供することができるものである。一般に、粒
子の感作用に風疹ウィルス抗原が使用される場合、その
可溶性抗原の分子量はアクリルアミビゲルの電気泳動法
で測定して１２５．ＯＤＤ以下、最も一般的にはｉ　ｏ
　ｏ、ｏ　ｏ　ｏ以下である。

先に示したように、表面活性剤はウィルスを破壊して可
溶化し、かつその抗原特性を失わしめない量で用いられ
る（洗浄剤の量が多すぎると抗原特性が失われるかもし
れない）。一般に、表面活。

性剤対ウィルスの重量比は約０２：１ないし約５：１、
好ましくは約０５：１ないし約１＝１である。その最適
量の選択は本明細書の教示から当該技術分野に習熟した
者が容易に定め５る範囲であると考えられる。

精製ウィルスの処理はウィルス蛋白質を変性させない温
度で行われ、そのような温度は一般に約ろ０℃を超えず
、２０℃ないし２５℃の温度が最も有利である。同様に
、安定性を維持するためにＰＨが選択され、一般にその
ＰＨは例えば８．５であり、最高ＰＨは約８０ないし約
９０である。

精製ウィルスの表面活性剤での処理はウィルスを破壊し
てその可溶化を達成するのに十分な時間桁われる。一般
にそのような破壊および可溶化は５分ないし１２０分程
鹿の時間で達成されるが、ある場合にはより長い時間も
しくはより短い時間が適当であるかもしれない。

最適処理時間の選択は本明；ａ書の教示から当該技術分
野に習熟した者が容易に定めうる範囲であると考えられ
る。

本発明者は、先に記載したように表面活性剤を使用して
全風疹ウィルスを破壊しかつ可溶化することにより、そ
の抗原性を失わずに保有する可溶性風疹ウィルスを提供
することカー、で、きることを見い出した。

先にも述べたように、ウィルスの破壊および可溶化方法
は当該技術分野において以前から実施されており、例え
ばＶａｈｅｒ　ｉ等によるパ風疹ウィルスの構造蛋白質
およびサノユニツ）　”　、　７ｏｕｒｎａｌ　ｏｆＶ
ｊ、ｒｏｌｏｇｙ　、　１０〜１６　”−ジ（１９７２
年１月）を参照されたい。さらに、このような方法は全
風疹ウィルスの構造蛋白質を回収することができ、それ
らは主に６種類の構造蛋白質、すなわち分子量が約６０
，０００ないし約６５，０００ダルトンの構造蛋白質、
分子量が約４０．［Ｉ　ＤＯない１し約５０，０００ダ
ルトンの構造蛋白質、および分子量が約３２，０００な
いし約３８，０００ダルトンの構造蛋白質であることが
知られている。

本発明者はさらに分子量が約ｉ　ｏ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏ　
ないし約１２０．Ｄ　Ｄ　Ｏダルトンの構造蛋白質の存
在を見い出した。

本発明者はこのような方法で回収した構造蛋白質が抗原
特性を失なわずに保有していること、さらにそのような
構造蛋白質が風疹抗体の検定に使用できることを見い出
した。さらにまた、本発明者はこのような構造蛋白質が
初期の風疹抗体、すなわち風疹の発疹後１０日以内の血
清または血漿中に含まれる風疹抗体、を検出することが
できることを見い出した。

本明細書で使用する″風疹ウィルス抗原°”という用語
はこのような方法で回収された１種またはそれ以上のこ
のような構造蛋白質を包含する。

全風疹ウィルスを破壊しかつ可溶化して可溶性風疹ウィ
ルス抗原を得るための上記方法は他のウィルス類、例え
ばウィルスの精製のところで後述するウィルス類、から
ウィルス抗原？得る場合にも適用できる１、このような
ウィルス抗原は、後で述べるように、その後固体支持体
に担持されて検定用のウィルス抗原感作固体を与える。

本発明によれば、全風疹ウィルスの破壊および可溶化が
風疹抗体（初期抗体を含む）と反応し得る抗原性の可溶
性生産物を生成させることを見い糸。それ故、このよう
な方法で得られた生産物を、特に固体支持体に担持させ
て、風疹抗体の検定に使用することにより、発病初期で
さえも風疹抗体を検出することが可能である。

後で述べるように、その回収生帝物は直接凝集反応によ
る検定に対して特に価値があり、そして本発明者はその
ような可溶性風疹ウィルス抗原が自己凝集の問題な（ラ
テックス粒子（特にポリスチレン）に担持され得ること
、すなわち感作粒子は単分散されたままであること、を
見い出した。

表面活性剤で処理される精製全ウィルスは、当該技術分
野で知られた方法による組織培養で産生され、続いて非
ウィルス脂質、核酸および非ウィルス蛋白質を除くため
に精製されたウィルスである。

風疹ウィルスを感染させた細胞を適当な培地で培養する
ことによって、風疹ウィルスを組織培養する方法は当該
技術分野で周知である。風疹ウィルスを産生ずる組織培
養増殖に適した細胞にはｖｅｒｏ細胞、ベビーハムスタ
ー腎細胞（ＢａｂｙＨａｍｓｔｅｒ　Ｋｉｄｎ６７　）
　、プロシンスタビル腎細胞（ＰｒｏｃｉｎｅＳｔａｂ
ｉｌｅ　Ｋｉｄｎｅｙ　）　、および血清インスティチ
ュートウサギ角膜細胞（Ｓｅｒｕｍ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ
ｅ　ＲａｂｂｉｔＣｏｒｎｅａ　）などがある。一般に
、風疹ウィルスを産生ずるために通常使用される組織培
養はまた本発明の目的にかなうものである。

その後、ウィルスは当該分野で知られた方法、例えばＢ
ａｈｅｒｉ等による上記書物で開示された方法、により
精製される。好適な実施態様によれば、ウィルスは本発
明方法に従って精製される。

より詳細には、本発明によるウィルス精製法はイオン強
度とｐＨを調節した水溶液中で濃縮ウィルスを水酸化燐
灰石ゲル（ヒビロキ・／アパタイトゲル）と処理するこ
とを包含する。

さらに詳細に述べると、そのウィルスＩ・ま、−過およ
び濃縮した後に、ウィルスの吸着を最少にするかもしく
は妨げるのに十分高いイオン強度であり、且つ非ウィル
ス蛋白質を吸着させるには十分低いイオン強度をもつ水
溶液中で、ヒトゝロキシアパタイトゲルと接触させる。

イオン強度は燐酸イオンの使用により保たれ、その燐酸
イオンはウィルスの有意な吸着なしに非ウィルス蛋白質
および核酸の効果的な吸着を与えるべく０．０５Ｍない
し１．５Ｍのモル濃度で存在する。大抵の場合に燐酸イ
オン濃度は少なくとも０．０８　Ｍである。

さらに、その吸着は約６〜９のＰＨ，最も一般的には約
７〜８１７）　ＰＨで行われる０浴液のｐＨは適当な緩
衝剤を使用することにより維持される。吸着は０．０１
Ｍないし［１，［）ＯＯｌＭの濃度のＥＤＴＡの存在下
に行われてもよい。ＥＤＴＡおよびその他のキレート化
剤は非ウィルス蛋白質および核酸の吸着を増すが、ウィ
ルス蛋白質の吸着を最少にする働きがある。

本発明の精製に従って進めることにより、高分子量蛋白
質および核酸はゲルに吸着され、こうしてウィルス蛋白
質は同様の分子量をもつ非ウィルス蛋白質から分離され
る。

このような吸着の後に、液体中にまだ残存しているより
低分子量の蛋白質を慣用方法で分離する。

それ故、例えばその後の分離は当該技術分野で知られた
バリヤ一層（遮断層）またはクッションを通して遠心分
離することにより達成される。特に、ウィルス蛋白質は
ショ糖、グリセロール、塩化セシウムおよび硫酸セシウ
ム等の適当なバリヤーを通して遠心分離され、より低分
子量の蛋白質はバリヤー上に残り、そしてウィルス蛋白
質はバリヤーを通って遠心分離され、分離層を形成する
。その後、低分子量蛋白質とバリヤ一層を含む液体は非
ウィルス蛋白質、核酸および脂質などを実質的に含まな
いウィルス蛋白質を残して除去される。

一般に精製ウィルスは１％未満、最も一般的には０、１
％未満の非ウィルス蛋白質、核酸および脂質を含有する
。

上記方法は多種のウィルス類、例えば風疹ウィルス；麻
疹ウィルス；庖疹ウィルス〔単純庖疹ウィルス、帯状水
）Ｑウィルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・
バーウィルス（伝染性単核症）〕；パラインフルエンザ
ウィルス：インフルエンザウィルス；およびデング凱ウ
ィルスなどを含むウィルス類を精製するのに使用、する
ことができるがこれらには限定されない。

こ♀よ・うな精製ウィルスはその後、先ニ述べたように
、ウィルスを破壊してその可溶化を行う表面活性剤で処
理されてウィルス抗原を提供する。

風疹ウィルスの上記精製方法はより優れた方法であるが
、非ウィルス蛋白質、核酸および脂質を分離する他の方
法もまた風疹ウィルスを精製し、続いてそれを表面活性
剤で処理して可溶性ウィルス抗原を生産するのに使用す
ることができる。

全ウィルスの破壊および可溶化により生産されるウィル
ス抗原は、検定で使用するために固体支持体に担持され
る。次の記述は％に風疹ウィルス抗原に関するものであ
るが、その教示は他のウィルス抗原にも適用できる。

全風疹ウィルスを破壊しかつ可溶化することにより生産
した風疹ウィルス抗原は、次いで風疹ウィルス抗体の検
定で使用するために、固体支持体上に担持される。その
ような担持風疹ウィルス抗原は初期の風疹ウィルス抗体
と反応することができる。好適な実施態様によれば、風
疹ウィルス抗原は凝集検定用（（粒状支持体に担持され
るが、その風疹ウィルス抗原は凝集反応以外の方法で風
疹ウィルス抗体を検定するために非粒状支持体（または
粒状支持体上の抗原物質のための非粒状支持体）に担持
され得ることを理解すべきである。こうして、例えば、
担持風疹ウィルス抗原は放射線免疫検定法、螢光検定法
もしくは酵素検定法により風疹ウィルス抗体を検出する
ために固体支持体上に担持される。同様に、本発明の風
疹ウィルス抗原はこのような検定法を用いることにより
非担持形で風疹ウィルス抗体の検定法に使用されること
もできる。それ故、本発明の範囲は、風疹ウィルス抗原
が風疹ウィルス抗体の凝集検定法用１（粒状支持体に担
持されるという好適な実施態様に限定されるものではな
い。

風疹ウィルス抗原はその抗原を担持することができ、か
つ免疫化学反応を妨害することなく検定法に使うことが
できる種々多様な固体支持体のう響を受けないものでな
ければならない。抗原は吸着法、または支持体の活性化
、適当なカップリング剤の使用、もしくは支持体上の反
応性基の使用による共有結合で支持体に担持される。こ
のような方法は一般に当該技術分野で既知である。

支持体は５種々多様な支持体のどれかであり得、好適な
支持体の代表的な例としてはポリスチレン。

ポリプロピレン、置換ポリスチレン（例えばアミン化ま
たはカルボキシル化ポリスチレン）、ホリアクリルアミ
ビ、ポリアミド、ポリ塩化ビニルなどの合成ポリマー支
持体；ガラスピーズまたはアガロース；などが挙げられ
る。その支持体はウィルス抗原を支持体へ直接結合させ
得る反応性基（例えばカルボキシル基またはアミン基）
を含むことができる。

好適な実施態様によれば、その粒状支持体はポリスチレ
ン、アミノ化ポリスチレン、カルボキシル化ポリスチレ
ンまたはポリ塩化ビニルのいずれかであるけれども、本
発明の範囲はこのような支持体に限定されるものではな
いことを理解すべきである。

上に示したように、抗原は吸着法の使用により、または
カップリング剤を用いる共有結合により支持体に担持さ
れる。適当なカップリング剤の代表的な例としてはグル
タルアルデヒドゝ、スクシンアルデヒド、マロンアルデ
ヒドなどのジアルデヒド類；アクロレイン、メタアクロ
レイン、クロトンアルデヒビなどの不飽和アルデヒド９
類；カルボジイミドゝ類；ジインシアネート類；ジメチ
ルアジピメート；塩化シアヌル；などが挙げられる。好
適なカップリング剤の選択は本明細書の教示から当該技
術分野に習熟した者にとって明らかであるだろう。

同様に、抗原は適当な支持体の活性化（例えば臭化グア
ン活性化アガロース）により担持される。

好ましい実施態様によれば、上述したように−その可溶
性風疹ウィルス抗原はポリスチレン（置換または未置換
）もしくはホリ塩化ビニル、最適にはポリスチレン、の
粒状支持体に担持される。

ある場合には可溶性抗原は吸着法で担持され、また他の
場合には共有結合を用いることが必要かもしれない。

ウィルス抗原感作粒状支持体は、風疹ウィルス抗体を凝
集法で測定する検定法に使用するために有利に調製され
る。その粒状支持体には単一粒子中で抗体が架橋を形成
する恐れのある過剰量をさけて、検定に対して有効量の
抗原が提供される。

一般に、可溶性風疹ウィルス抗原対支持体の重量比は１
：１００ないし１　：　５０００である。最適量の選択
は本明細書二の教示から当該技術分野に習熟した者が容
易に定めうる範囲であると考えられる。

１つの方法によれば、抗原が粒子に吸着された後、吸着
抗原を含むその支持体は抗原を含まない支持体部分に蛋
白質コーティングを施すために、その後の免疫化学反応
に不都合な作用を及ぼさない蛋白質でさらに被覆される
。明らかなように、蛋白質コーティングは風疹ウィルス
抗原または検定で使用する血清のどちらとも免疫学的に
反応してはならない。適当な蛋白質の例としては牛血清
アルブミンおよび卵白アルブミンなどがある。支持体上
の風疹ウィルス抗原間のスＲ−スを満たすべき適当な蛋
白質の選択は、本明細書の教示から当該技術分野に習熟
した者が容易に行いうる範囲であると考えられる。

このような蛋白質コーティングは凝集検定用の感作粒子
を製造するためには不必要であることが理解されるべき
である。

風疹ウィルス抗原が固体支持体に担持された後、凝集検
定用の感作粒子を製造する場合に当該技術分野で一般に
行われるように、その感作粒子はポリスチレンに対する
重量比が０．１：１ないし１０：１のポリオキシエチレ
ンソルビタンモノラウレート（ツイーン２０）を含有す
る液体で処理される。

感作粒子は好ましくは合成ポリマー、特にポリスチレン
〔置換（カルボキシル化またはアミノ化）または未置換
〕もしくはポリ塩化ビニルラテックスである。本発明者
は調製した可溶性風疹ウィルス抗原でのこのような粒子
の感作が、前にも述べたように、単分散されたままの（
自己凝集がない）感作粒子を生じさせ、これによりその
感作ラテツクス粒子が風疹抗体を検出するための直接凝
集検定法に都合よく使用され得ることを見い出した。

このような感作粒子は初期の風疹抗体を検出することが
可能である。その上、このような感作粒子は風疹抗体に
対して高い感度をもつ直接凝集検定法を提供することが
できる。

本発明で製造した風疹ウィルス抗原感作粒子は直接凝集
法による風疹抗体検定用キットへの使用に適している。

そのようなキットは適当な容器中に前記の風疹ウィルス
抗原感作粒子に加えて、反応性の血清対照（風疹抗体を
含む）および非反応性の血清対照（風疹抗体を含まない
）を含有する。

好ましい実施態様によれば、それらの試薬のほかに試験
用カードが用意され、検定はその上で行われる。その試
験カードは１種またはそれ以上の検体試料を受け入れる
ための適当な印をつけたいくつかの区域（例えば円で囲
まれた試験区域と、血清対照の各々を受け入れるだめの
適当な印をつけたいくつかの区域とを含む平らな試験表
面を有する。その試験カードと試薬は１個のキット厚装
品中に包装される。

凝集検定法においては、非希釈血清または希釈血清（例
えば１：１０）を感作粒子と接触させて混合する。風疹
ウィルスに対する抗体の存在は肉眼観察しうる凝集によ
り証明される。

このような風疹ウィルス抗原感作粒子はまた風疹ウィル
ス抗体の定ｌ的検定法にも使用することができる。

定量検定法では検体試料は適切に連続希釈され、そして
各連続希釈液に可溶性風疹抗原感作粒子が加えられる。

試料中の抗体量は感作粒子の凝集を示す最大希釈から定
量される。

風疹抗体の定量もしくは定性検定は、検体試料と対照と
を受け入れるための適当な印をつけた区域を包含するカ
ード表面上でさらに感作粒子を加えることにより行うこ
とができる。

本発明はさらに次の実施例について記載するが、本発明
の範囲はこれらに限定されることはない。

ハｏ　（Ｖｅｒｏ　）細胞（アフリカミドリザルの腎組
織から誘導された連続培養細胞株）の培養器−面に細胞
が増殖した回転培養（６８０ｃｒｆＬ２）に細胞あたの
胎児血清を１００，０００分子量以上の分子を保持する
膜〔アミコン（Ａｍ１ｃｏｎ）　ｘＭ　−１００膜〕に
強制通堝させて得たＰ液２％（容量／８駄）を含む標準
培Ｉｔ（１９９培地）中に維持した。培地を毎日変え、
そして赤血球凝集価が１６以上になった培養液に０．０
１Ｍのトリス塩基と０．ＯＩＭのＥＤＴＡとを添加した
。４℃で１時間インキュベートした後、それらはアミコ
ン社製ホロウファイバーの透析濃縮装置で竜初の容量の
１／１０まで濃縮した。

５０００　Ｘ　Ｐで２０分間清澄化した後、２２℃にお
いてｐＨを７６に調整し、ぞして１／１０容量のヒビロ
キシアパタイト懸濁液を加えて、そのスラリーを混合し
ながら４℃で一晩インキユイートシた。

ヒビロキシアパタイトは５０００ＸＦで１５分間遠心分
離して除き、その後濃縮物ろＯｍｌをベツクマｙ　（Ｂ
ｅｃｋｍａｎ　）　５Ｗ２８チユーブ内の６９％（重量
／重量）グリセロール９　ｍｌ上に層状に静置した。

ウィルスは４℃において８２，０００ｘ４で１６時間遠
心分離することにより沈降させ、得られた沈殿物は０．
０１Ｍの炭酸緩衝液（ＰＨ９，５、コーティング緩衝液
）中に再び懸濁した。精製ウィルスは赤血球凝集素含有
量を検定して、−７０℃で保存した。

０．０１Ｍ炭酸緩衝液（ＰＨ９，５）中の精製ウィルス
はドデシル硫酸す）　ＩＪウム（ＳＤＳ）で処理するこ
とにより可溶化した。精製ウィルスは０．０５％（重量
／容量）のＳＤＳを添加して室温で６０分間インキュベ
ートした。

実施例　■ 感作ラテツクスの調製 ポリスチレンラテックス（直径が０．９ミクロンの粒子
）の市販懸濁液を各々２５答量ずつのコーティング緩衝
液で４回洗浄し、コーティング謹衝液中に再懸濁して６
％（８歇／容量）のラテックス）゛静濁液を得た。その
１″酢濁液を３％ラテックス対可溶化ウィルス２：１の
容量比で可溶化ウィルスに直接添加し、そして室イ晶で
１６時間反反転台した。感作ラテツクスは燐酸緩衝化生
理食塩液中の１％牛血清７　／Ｌ／プミン（１％ＢＳＡ
−ＰＢＳ）２０容量で２回洗浄し、そして００５％ポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレート表面活性剤（
ソイ−７２０）および０．０２％ゲンタマイアシノを含
む１％ＢＳＡ−ＰＢＳ中に０．５％の虚で再１好７蜀し
た。

凝集試験 １．４Ｃｒｆｔの円形反応区域を備えたガラス板を使用
した。血清の連続２倍希釈液を１％ＢＳＡ−ＰＢＳ−ツ
イーン２０で調製し、そして各希釈液２５Ｓを別々の円
形反応区域に配置した。感作ラテツクス２５Ｓを添加し
た後、血清とラテックス懸濁液を混合して１００　ｒｐ
ｍで５分間回転させた。風疹ウィルスに対する抗体の存
在は可ｍ的凝集反応で証明された。

実施例■ 実施例１で調製した精製ウィルスヲ、コーティング緩衝
液中室温でろ０分間１％サルコシル水溶液で処理して、
ウィルスを破壊しかつ可溶化した。

その可溶化ウィルスのｐＨを塩酸で６．５に調整し、矢 そして６％カルボキシル化ポリスケレンラテックス（Ｐ
Ｈ６，５の燐酸緩衝液中）２容竜と共に４℃で１時間混
合した。

その溶液にカルボジイミビ力ップリング剤１゜ｍｙ　：
ｐ添加して、その混合物を４°Ｃで一晩混合した。

遠心分離後、その固体を燐酸緩衝化生理食塩液（ＰＢＳ
）に懸濁し、続いて遠心分離後１％ＢＳＡおよび０．０
５％ツイーン２ｏを含むＰＢＳＫ再懸濁した。

上記方法は可溶性風疹ウィルス抗原をラテックスに共有
結合させた。

好適な方法によれば、風疹抗体用の試験カードが提供さ
れる。その試験カート９は反応性対照のための印をつげ
た円、非反応性対照のための印をつけた円、および１種
またはそれ以上の試験試料のための円を含有する。

非希釈血清試料２５パを適当な印をつけた試料のための
円内（Ｃ装置し、そして反応性および非反応性対照２５
Ｓずつもそれぞれの円の中に装置する。

マイクロピＲツタ−を用いて、実施例■の感作ラテック
ス約１’５Ｓを添加し、続いて回転装置で約８分間回転
させ、その後槽やかに手動回転させる。

そのカードは高光度の白熱電球のもと湿潤状態霧 で渥微鏡によって判定する。

反応性対照は明確な凝集を示さねばならず、そして非反
応性対照は凝集を全く示してはならない。

凝集を起こす血清試料はどれも当然反応性であるとして
記録される。

本発明の多数の改良ならびに変法が上記教示から可能で
あり、それ数本発明は特許請求の範囲内で％１（開示し
たものとは別の方法で実施することができるものである
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）全風疹ウィルスの破壊および可溶化により誘導さ
   れた可耐性風疹ウィルス抗原で感作された固体支持体か
   らなる組成物。 （２）固体支持体は粒状支持体である、特許請求の範囲
   第１項に記載の組成物。 （３）可溶性風疹ウィルス抗原はアクリルアミドゲル電
   気泳動法で測定して１２５，０００ダルトン以下の分子
   量を有する、特許請求の範囲第２項に記載の組成物。 （４）粒状支持体はホリスチレンラテックスである、特
   許請求の範囲第５項に記載の組成物。 （５）支持体に担持された抗原は風疹ウィルスの構造蛋
   白質の少なくとも１種から成り、そしてその担持抗原は
   初期の風疹抗体と免疫反応性である、特許請求の範囲第
   １項に記載の組成物。 （６）抗原は粒状支持体に担持される、特許請求の範囲
   第５項に記載の組成物。 （７）感作固体粒子は単分散されたままである、特許請
   求の範囲第６項に記載の組成物。 （８）固体粒子はポリスチレンラテックスである特許請
   求の範囲第７項に記載の組成物・（９）固体支持体は合
   成Ｊ　ＩＪママ−ある、特許請求の範囲第ろ項に記載の
   組成物。 ００）合成ｄセリマーはポリ塩化ビニル、ポリスチレン
   、アミノ化ホリスチレンおよびカルボキシル化ポリスチ
   レ／よりなる群から選択される、特許請求の範囲第９項
   に記載の組成物。 ■　抗原は固体支持体に共有結合さ」する、特許請求の
   範囲第９項に記載の組成物。 （１２）抗原は固体支持体に吸着される、特許請求の範
   囲第９項に記載θ）組成物。 （１３）全風疹ウィルスの破壊および６丁溶化は界面活
   性剤を用いて行われる、特許請求の範囲第２項に記載の
   組成物。 （１４）　界面活性剤はドデシル硫酸アルカリ塩である
   、特許請求の範囲第１６項に記載の組成物。 （凶　全風疹ウィルスの破壊および可溶化により可溶性
   風疹ウィルス抗原を誘導し、そしてその可溶性風疹ウィ
   ルス抗原を固体支、持体に担持させることからなる、可
   溶性風疹ウィルス抗原で感作した固体支持体の製造方法
   。 （１６）固体支持体は粒状支持体である、特許請求の範
   囲第１５項に記載の方法。 （＋７１　可溶性風疹ウィルス抗原はアクリルアミドゲ
   ル電気泳動法で測定して１２５．ＯＤＤダルトン以下の
   分子量を有する、特許請求の範囲第１６項に記載の方法
   。 ０８）粒状支持体はポリスチレンラテックスである、特
   許請求の範囲第１７項に記載の方法。 ０９　支持体に相持された抗原は風疹ウィルスの構造蛋
   白質の少なくとも１種から成り、そして初期の風疹抗体
   と免疫反応性である、特許請求の範囲第１５項に記載の
   方法。 （２０）抗原は粒状支持体に担持される、特許請求の範
   囲第１９項に記載の方法。 （２Ｉ）感作固体粒子ｌ単分散されたままである、特許
   請求の範囲第２０項に記載の方法。 （２つ　固体粒子はポリスチレンラテックスである、特
   許請求の範囲第２１項に記載の方法。 （２３）固体支持体は合成４１Ｊマーである、特許請求
   の範囲第１７項に記載の方法。 （２４）　合成ポリマーはポリ塩化ビニル、ポリスチレ
   ン、アミノ化ポリスチレンおよびカルボキシル化ポリス
   チレンよりなる群から選択される、特許請求の範囲第２
   ６項に記載の方法。 （２５）抗原は固体支持体に共有結合される、特許請求
   の範囲第２３項に記載の方法。 ０６）抗原は固体支持体に吸着される、特許請求の範囲
   第２３項に記載の方法。 （２カ　全風疹ウィルスの破壊および可感化は界面活性
   剤を用いて行われる、特許請求の範囲第１６項に記載の
   方法。 ＋２１Ｃ界面活性剤はドデシル硫酸アルカリ塩である、
   ＋１？ 特許請求の範囲第２７項に記載の方法。 （２９）全風疹ウィルスの破壊および町溶化により誘導
   された可溶性風疹ウィルス抗卯で感作された固体粒子を
   試薬容器中に含む、風疹ウィルス抗体を凝集法で検定す
   るだめのキット。 （３Ｇ）上記キットは検定試料を受け入れるための平面
   をもつ試験カードをさら１（含む、特許請求の範囲第２
   ９項に記載のキット。 （３０粒子はポリスチレンラテックスである、特許請求
   の範囲第３０項に記載のキット。 （３渇　別の試薬容器中に風疹抗体を含む反応性の血清
   対照と風疹抗体を含まない非反応性の血清対照とをさら
   に含む、特許請求の範囲第ろ０項に記載のキット。 （３３）全風疹ウィルスの破壊および町溶化により誘導
   された可溶性風疹ウィルス抗原で感作された固体粒子を
   使用することからなる、風疹ウィルス抗体を検出するた
   めの直接凝集検定法。 （３４）可溶性風疹ウィルス抗原はアクリルアミドゲル
   電気泳動法で測定して１２５，０００ダルトン以下の分
   子量を有する、特許請求の範囲第ろろ項に記載の検定法
   。 Ｃ３！５１　粒子はｌ　ＩＪスチレ／ラテックスである
   、％許請求の範囲第６４項に記載の検定法。 （３６）感作粒子は風疹ウィルスの構造蛋白質の少な（
   とも１種から成り、そして初期の風疹抗体と免疫反応性
   である、特許請求の範囲第６５項に記載の検定法。 （３力　粒子は合成ポリマーである、特許請求の範囲第
   ５４項に記載の検定法。 （支））合成ホＩＪマーはポリ塩化ビニル、ポリスチレ
   ン、アミノ化４１Ｊスチレンおよびカルボキシル化ポリ
   スチレンよりなる群から選択される、特許請求の範囲第
   ５７項に記載の検定法。 （３９）抗原は粒子に吸着される、特許請求の範囲第６
   ７項に記載の検定法。 （４０）　抗原は粒子に共有結合される、特許請求の範
   囲第５７項に記載の検定法。 （４υ　全風疹ウィルスの破壊および町溶化は界面活性
   剤を用いて行われる、特許請求の範囲第３４項に記載の
   検定法。 （４乃　界面活性剤はドデシル４Ａ酸アルカリ塩である
   、特許請求の範囲第４１項に記載の検定法。 （４３１燐酸イオンの存在下にｐＨ６〜９において全ウ
   ィルスをヒビロキシ・アノ３タイトと接触させることか
   らなり、ここで前記燐酸イオンはウィルス蛋白質の有意
   な吸着なしに非ウィルス蛋白質の吸着を奏すべく０．０
   ５Ｍないし１．５　Ｍのモル濃度で存在させる、非ウィ
   ルス蛋白質から全ウィルスを分離するための全ウィルス
   精製法。 （４４）　ウィルスは風疹ウィルスである、特許請求の
   範囲第４５項に記載の精製法。 （４５１ＰＨは７〜８である、特許請求の範囲第４４項
   に記載の精製法。 （４６）全ウィルスの破壊および可溶化により誘導され
   たウィルス抗原で感作された固体支持体からなる組成物
   。 （４７）風疹ウィルス抗体を風疹ウィルス抗原と免疫反
   応させる風疹ウィルス抗体の検定法において、その風疹
   ウィルス抗体を全風疹ウィルスの破壊および可溶化によ
   り誘導された可溶性風疹ウィルス抗原と免疫反応させる
   ことからなる検定法。