JPS60180599A - Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 - Google Patents
Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、微生物の菌体または菌体処理物を酵素源とし
て用いるアデノシンとＤ−ホモシスティンからＳ−１プ
ツシルーＬ−ホモシスティンを動電良く酵素合成して採
取する方法に関する０６−７デノシルーＬ−ホモシステ
ィン（以下、８ＡＨと略称する）は、生体内においてＳ
−７デノシルメチオニン（以下、ｓＡＭと略称する）が
開力するメチル基供与反応で生じる重要な生理活性物質
である・而して、近時、かがる５Ａ）ＩＫ鎮静剤、睡眠
誘発剤などとしての効果が見い出されておシ、その大量
生産が期待されている。
て用いるアデノシンとＤ−ホモシスティンからＳ−１プ
ツシルーＬ−ホモシスティンを動電良く酵素合成して採
取する方法に関する０６−７デノシルーＬ−ホモシステ
ィン（以下、８ＡＨと略称する）は、生体内においてＳ
−７デノシルメチオニン（以下、ｓＡＭと略称する）が
開力するメチル基供与反応で生じる重要な生理活性物質
である・而して、近時、かがる５Ａ）ＩＫ鎮静剤、睡眠
誘発剤などとしての効果が見い出されておシ、その大量
生産が期待されている。
従来、８ＡＨの製造方法として祉すツカロマイセス属ｔ
ｆｃはキャンディメ属の酵母から抽出する方法〔例えば
アーカイ２ス・オノバイオヶｉ 、（） ｙ−・アンド
・バイオフィシ、クス（Ａｒｃｈ、Ｂｆｏｅｈｅｍ。
ｆｃはキャンディメ属の酵母から抽出する方法〔例えば
アーカイ２ス・オノバイオヶｉ 、（） ｙ−・アンド
・バイオフィシ、クス（Ａｒｃｈ、Ｂｆｏｅｈｅｍ。
Ｂｌｏｐｈｙｓ）６９．５７５（１９６２））、ｓＡＭ
からの附木的脱メチル法〔例えばジャーナル・オツ・バ
イオロジカル噂ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈ
ｅｍ） ２４０ 。
からの附木的脱メチル法〔例えばジャーナル・オツ・バ
イオロジカル噂ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈ
ｅｍ） ２４０ 。
２５１２（１９６５））、ｓＡＭからの化学的脱メチル
法〔例えば特公昭４５−３７５３６号〕などが知られて
いる。しかしながら、これらの方法はいずれも非常に経
費がかかシ、工業的製造法メは言い難い。
法〔例えば特公昭４５−３７５３６号〕などが知られて
いる。しかしながら、これらの方法はいずれも非常に経
費がかかシ、工業的製造法メは言い難い。
一方、アデノシンとホモシスティンをＳ−アデノシルホ
モシスティンハイドロラーゼ（Ｆｅ２．３．１．Ｌ以下
、５ＡＨａ１１・と略称する）の存在下に＃素合成する
方法も知られているが、この方法に使用可能なホモシス
ティンはＬ型のホそシスティンに限定されておシ、Ｄ型
のホモシスティンは反応しないことが知られていた〔例
えばジャーナル・オツ・バクテリオロジ−（Ｊ、 Ｂａ
ｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ） １１２ ａ ５６９（１９７
２））。
モシスティンハイドロラーゼ（Ｆｅ２．３．１．Ｌ以下
、５ＡＨａ１１・と略称する）の存在下に＃素合成する
方法も知られているが、この方法に使用可能なホモシス
ティンはＬ型のホそシスティンに限定されておシ、Ｄ型
のホモシスティンは反応しないことが知られていた〔例
えばジャーナル・オツ・バクテリオロジ−（Ｊ、 Ｂａ
ｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ） １１２ ａ ５６９（１９７
２））。
本発明者らは以上のような実状に鑑み、ＳＡＨの酵素的
合成法圧関して種々検討を加えた結果、特定な微生物を
５ＡＨａｓ＠の共存下に用いる場合にはＤ−ホモシステ
ィンから効率よ（ＳＡＨを合成しうろことを見い出し、
本発明を完成するに到った。
合成法圧関して種々検討を加えた結果、特定な微生物を
５ＡＨａｓ＠の共存下に用いる場合にはＤ−ホモシステ
ィンから効率よ（ＳＡＨを合成しうろことを見い出し、
本発明を完成するに到った。
かくして本発明によれば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｍ）属に属しＤ−ホモシスティンをＤＬ−ホ
モシスティンにラセミ化する能力を有する微生物の菌体
または菌体処理物と８ＡＨａｓ・の共存下にアデノシン
とＤ−ホモシスティンを水性媒体中で接触させて反応せ
しめ、ＢＡＨを合成して採取することを特徴とする８Ａ
Ｈの製造法が提供される。
ｏｍｏｎａｍ）属に属しＤ−ホモシスティンをＤＬ−ホ
モシスティンにラセミ化する能力を有する微生物の菌体
または菌体処理物と８ＡＨａｓ・の共存下にアデノシン
とＤ−ホモシスティンを水性媒体中で接触させて反応せ
しめ、ＢＡＨを合成して採取することを特徴とする８Ａ
Ｈの製造法が提供される。
本発明において用いられるＤ−ホモシスティンをＤＬ−
ホモシスティンにラセミ化する能力を有する微生物は、
上記の属に属し菌体または菌体処理物の形態でＤ−ホそ
システィンをＤＬ−ホモシスティンにラセミ化する能力
を有し、かっＳＡＷをＳ−アデノシル−ＤＬ−ホモシス
ティンにう七ミ化する能力は有しないものであればいず
れでもよく、その具体例としてはシュードそナス・グチ
ダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｍ ｐｕｔｉｄａ） ＩＦＯ
１２９９６、ＩＦＯ３７３８、シュードモナス・エルギ
ノーザ（Ｐｓ・ｕｄｏｍｏｎａｓａｓｒｕｇｌｎｏｓａ
） ＩＦＯ３４４５、シュードモナスーマルトフイリア
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｍ ｍａｌ ｔｏｐｈｉ １
ｌａ） ＩＦＯ１２０２０などが挙けられる。またこれ
らの菌の天然及び人工変異−であっても前記のごとき性
質を有するかぎル同様に使用することができる。
ホモシスティンにラセミ化する能力を有する微生物は、
上記の属に属し菌体または菌体処理物の形態でＤ−ホそ
システィンをＤＬ−ホモシスティンにラセミ化する能力
を有し、かっＳＡＷをＳ−アデノシル−ＤＬ−ホモシス
ティンにう七ミ化する能力は有しないものであればいず
れでもよく、その具体例としてはシュードそナス・グチ
ダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｍ ｐｕｔｉｄａ） ＩＦＯ
１２９９６、ＩＦＯ３７３８、シュードモナス・エルギ
ノーザ（Ｐｓ・ｕｄｏｍｏｎａｓａｓｒｕｇｌｎｏｓａ
） ＩＦＯ３４４５、シュードモナスーマルトフイリア
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｍ ｍａｌ ｔｏｐｈｉ １
ｌａ） ＩＦＯ１２０２０などが挙けられる。またこれ
らの菌の天然及び人工変異−であっても前記のごとき性
質を有するかぎル同様に使用することができる。
本発明における８ＡＨの合成方法は、微生物の菌体また
はその処理物の形態でその菌体内に存在するＤ−ホモシ
スティンをＤＬ−ホモシスティンにラセミ化する酵素（
以下、２セマーゼと略称する）の作用を利用するもので
ある。このラセマーゼは微生物を通常の方法で培養する
ことによル調整することができる。微生物を培養する培
地は、炭素源、窒素源、無機塩、有機微量栄養源を含有
する通常の培地でよく、微生物の種類に応じて適宜選択
して使用すれによい。また培養方法は通常、液体培地で
行われるが、固体表面培養によって行うこともできる。
はその処理物の形態でその菌体内に存在するＤ−ホモシ
スティンをＤＬ−ホモシスティンにラセミ化する酵素（
以下、２セマーゼと略称する）の作用を利用するもので
ある。このラセマーゼは微生物を通常の方法で培養する
ことによル調整することができる。微生物を培養する培
地は、炭素源、窒素源、無機塩、有機微量栄養源を含有
する通常の培地でよく、微生物の種類に応じて適宜選択
して使用すれによい。また培養方法は通常、液体培地で
行われるが、固体表面培養によって行うこともできる。
培養条件は微生物の種類に応じて適宜選択すれば良く、
温度１５〜８０℃、Ｐ）３４〜１２の範囲が用いられる
が、一般的には温度２０〜４５℃、−４〜９の範囲で１
０〜９６時間培養すれば良い。培養中には通気攪拌を行
って微生物の生育を促進させることもできる。
温度１５〜８０℃、Ｐ）３４〜１２の範囲が用いられる
が、一般的には温度２０〜４５℃、−４〜９の範囲で１
０〜９６時間培養すれば良い。培養中には通気攪拌を行
って微生物の生育を促進させることもできる。
本発明において用いられる８ＡＨａｇａは、アデノシン
とＬ−ホモシスティンからＳＡＨを合成する酵素活性を
有するものであればその起源はいずれでもよい。例えば
動物、植物、微生物のいずれかの起源よシ得られるもの
を適宜選択して用いれば良いが、通常、５ＡＨａ＠＠を
含有する微生物の菌体またはその処理物の形態で用いる
のが工業的に極めて有利である。
とＬ−ホモシスティンからＳＡＨを合成する酵素活性を
有するものであればその起源はいずれでもよい。例えば
動物、植物、微生物のいずれかの起源よシ得られるもの
を適宜選択して用いれば良いが、通常、５ＡＨａ＠＠を
含有する微生物の菌体またはその処理物の形態で用いる
のが工業的に極めて有利である。
８ＡＨａｍ＠を有する微生物の具体例としては、例えば
アルカリ土類金属、す、カロマイセス属、ゾペレラ属、
ミクロポリス）Ｊ？ ：）属、シゾフィラム属などに属
するものがあシ、よシ具体的には本発明者らが先に出願
した特願昭５８−２０８０７号に記載されているもので
あればいずれも使用することができる。かかる微生物は
通常の培地、通常の培養条件で培養したものでよい。
アルカリ土類金属、す、カロマイセス属、ゾペレラ属、
ミクロポリス）Ｊ？ ：）属、シゾフィラム属などに属
するものがあシ、よシ具体的には本発明者らが先に出願
した特願昭５８−２０８０７号に記載されているもので
あればいずれも使用することができる。かかる微生物は
通常の培地、通常の培養条件で培養したものでよい。
本発明におけるＳＡＨの合成反応は、前記のようにして
培養したラセマーゼを有する微生物あ菌体また社菌体処
理物と８ＡＨａｓ・の共存下に実施される。
培養したラセマーゼを有する微生物あ菌体また社菌体処
理物と８ＡＨａｓ・の共存下に実施される。
例えは、ラセマーゼを有する微生物の培養液中の菌体と
５ＡＨａｓｅを有する微生物の培養液中の菌体とをその
まま混合して使用してもＳＡＷの合成反応は進行する。
５ＡＨａｓｅを有する微生物の培養液中の菌体とをその
まま混合して使用してもＳＡＷの合成反応は進行する。
しかし、培養液中の成分が障害になる場合や菌体量を多
く使用したい場合には両者の培養液から菌体を分離し休
止菌体の形で用いることが好ましい。
く使用したい場合には両者の培養液から菌体を分離し休
止菌体の形で用いることが好ましい。
また貯蔵あるいは取扱いの便宜上、生拍体の代わシに風
乾菌体、凍結乾燥菌体、ア十トン菌体な □どのような
乾燥菌体として用いることもできる。
乾菌体、凍結乾燥菌体、ア十トン菌体な □どのような
乾燥菌体として用いることもできる。
また菌体そのものではなく、菌体磨砕物や菌体抽出物の
ような菌体処理物の状態で使用することも可能である。
ような菌体処理物の状態で使用することも可能である。
更にそれぞれの菌体または菌体処理物ｆ：幇法に従っ−
て固定化して使用することもできる。
て固定化して使用することもできる。
本発明におけるＢＡＨ合成反応はアデノシンとＤ−ホモ
システィンを２マーゼ及びＳＡＨｍｓ＠を有するそれぞ
れの微生物菌体または菌体処理物の存在下に水性媒体中
で接触させることによって行なわれる。反応に供される
Ｄ−ホモシスティンは必ずしも純粋なものである必要は
なく、Ｌ一体との混合物、例えばＤＬ体であっても使用
することができる。例えば化学合成によシ安価に入数で
きるＤＬ体のホモシスティンを使用する場合は、反応系
内においてＬ体のホモシスティンが共存する８ＡＨａｓ
・の作用によりＳＡＭに転換されるとともに、逐次り体
のホモシスティンがラセマーゼによ、９ＤＬ体にラセミ
化されるのですべてのＩ） Ｌ−ホモシスティンをＳＡ
Ｗに転換することが可能であシ、工業的に極めて有利で
ある。
システィンを２マーゼ及びＳＡＨｍｓ＠を有するそれぞ
れの微生物菌体または菌体処理物の存在下に水性媒体中
で接触させることによって行なわれる。反応に供される
Ｄ−ホモシスティンは必ずしも純粋なものである必要は
なく、Ｌ一体との混合物、例えばＤＬ体であっても使用
することができる。例えば化学合成によシ安価に入数で
きるＤＬ体のホモシスティンを使用する場合は、反応系
内においてＬ体のホモシスティンが共存する８ＡＨａｓ
・の作用によりＳＡＭに転換されるとともに、逐次り体
のホモシスティンがラセマーゼによ、９ＤＬ体にラセミ
化されるのですべてのＩ） Ｌ−ホモシスティンをＳＡ
Ｗに転換することが可能であシ、工業的に極めて有利で
ある。
反応の条件は適宜選択すればよく、基質濃度としてアデ
ノシンｆｔ１ ｍＭ以上、好ましくは１０〜５００ｍＭ
、Ｄ−ホモシスティン濃度１１ｍＭ以上、好ましくは１
０〜５００ ｍＭとすればよい。
ノシンｆｔ１ ｍＭ以上、好ましくは１０〜５００ｍＭ
、Ｄ−ホモシスティン濃度１１ｍＭ以上、好ましくは１
０〜５００ ｍＭとすればよい。
なお、本発明におけるホモシスティンなる用語は反応系
内においてホモシスティンを供給する物質（例えばホモ
シスチン、ホモシスティンチオラクトンなど）をも含む
ものとして理解されるべきである。
内においてホモシスティンを供給する物質（例えばホモ
シスチン、ホモシスティンチオラクトンなど）をも含む
ものとして理解されるべきである。
反応における系の−は４〜１２、好ましくは６〜１０に
保てばよく、−の調整は通常の方法、たとえばリン酸カ
リウムバッファー、トリスバッファー、塩化アンモニウ
ムバ、フ−アー、グリシンパ、７アーなどによってｐｌ
整すればよい。
保てばよく、−の調整は通常の方法、たとえばリン酸カ
リウムバッファー、トリスバッファー、塩化アンモニウ
ムバ、フ−アー、グリシンパ、７アーなどによってｐｌ
整すればよい。
反応温度は、反応がよく進行し酵素活性、基質および生
成物に影響のない温度であればよく、通常は１５〜６０
℃、好ましくは２０〜５０℃である。反応時間は基質の
８Ａ）Ｉへの転化率が増大するように設定すればよく、
パッチ式の場合、通常０．１〜４８時間、好ましくは０
．５〜３６時間である。その他、目的に応じて水性媒体
中にア七トン、エタノールの如き有機溶媒や各種の界面
活性剤を添加して反応を行わせることもできる。更に反
応系内のホモシスティ／がホそシスチンに変化するのを
防ぐ為に２−メルカグトエタノールやジチオスレイトー
ルの如き８Ｈ基保膜試薬を添加することができ、窒素雰
囲気下で反応を行わせることもできる。
成物に影響のない温度であればよく、通常は１５〜６０
℃、好ましくは２０〜５０℃である。反応時間は基質の
８Ａ）Ｉへの転化率が増大するように設定すればよく、
パッチ式の場合、通常０．１〜４８時間、好ましくは０
．５〜３６時間である。その他、目的に応じて水性媒体
中にア七トン、エタノールの如き有機溶媒や各種の界面
活性剤を添加して反応を行わせることもできる。更に反
応系内のホモシスティ／がホそシスチンに変化するのを
防ぐ為に２−メルカグトエタノールやジチオスレイトー
ルの如き８Ｈ基保膜試薬を添加することができ、窒素雰
囲気下で反応を行わせることもできる。
かくしてＳＡＨを含有する反応液が得られるが、該反応
液からＳＡＨを採取する方法は公知の方法によればよい
、その分離法としては、例えばＢＡＲ含有液を強酸性力
チオ／交換樹脂に接触させてＢＡＲを吸着させた後、硫
酸で溶出させ、溶出液にリンタングステン酸を加えてＢ
ＡＨを沈殿させる方法、８ＡＨ含有液を活性炭に接触さ
せてＢＡＨを吸着させり後、エタノール／水／濃アンモ
ニア水（５０：５０：１）で溶出させ、溶出液を減圧下
濃縮して濃縮物の−を酢酸で７に調節した後、ＳＡＨを
０℃で晶出させる方法などが例示される。
液からＳＡＨを採取する方法は公知の方法によればよい
、その分離法としては、例えばＢＡＲ含有液を強酸性力
チオ／交換樹脂に接触させてＢＡＲを吸着させた後、硫
酸で溶出させ、溶出液にリンタングステン酸を加えてＢ
ＡＨを沈殿させる方法、８ＡＨ含有液を活性炭に接触さ
せてＢＡＨを吸着させり後、エタノール／水／濃アンモ
ニア水（５０：５０：１）で溶出させ、溶出液を減圧下
濃縮して濃縮物の−を酢酸で７に調節した後、ＳＡＨを
０℃で晶出させる方法などが例示される。
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。ただし本発明はこれらの例のみに限定されるものでは
ない。
。ただし本発明はこれらの例のみに限定されるものでは
ない。
なお、実施例におけるＢＡＨの定量は次のようにして行
った・すなわち、反応終了後、反応液を直ちＫＯ〜５℃
に冷却し、過塩素酸を添加して反応を停止した・次いで
遠心分離にて不溶物を除去したのち、得られた上澄液に
リン酸カリウムバッファー（ｐ）１７．０ ）を添加し
て、生成した過塩素酸カリウムを遠心分ｍｔｔｃよル除
去した。かくして得られた上澄液の所定量を採取して高
速液体クロマトグラフィー（日立製作新製、６３８′−
３０型、カラム： Ｃｏｓｍｏｃｌｌ ５０，６ ｈ
Ｄ＠ｔ＠ｃｔ＠ｒ ：ＵＶ２６０ｎｍ）を用いるととＫ
よ、６ ＢＡＨの定量を実施した。
った・すなわち、反応終了後、反応液を直ちＫＯ〜５℃
に冷却し、過塩素酸を添加して反応を停止した・次いで
遠心分離にて不溶物を除去したのち、得られた上澄液に
リン酸カリウムバッファー（ｐ）１７．０ ）を添加し
て、生成した過塩素酸カリウムを遠心分ｍｔｔｃよル除
去した。かくして得られた上澄液の所定量を採取して高
速液体クロマトグラフィー（日立製作新製、６３８′−
３０型、カラム： Ｃｏｓｍｏｃｌｌ ５０，６ ｈ
Ｄ＠ｔ＠ｃｔ＠ｒ ：ＵＶ２６０ｎｍ）を用いるととＫ
よ、６ ＢＡＨの定量を実施した。
実施例１
グルコース１１／ａｔ 、ペグトン１．５ ｉ／１１ｔ
、酵母エキス０．３１！ ／ ｄＡ −Ｋ２ＨＰＯ４
０，３１１／ ｒｌＬ 、ＮａＣｔＯ，２Ｊｉ’／ ａ
ｔ 、 Ｍｇ８０４・７Ｈ２００，０２１７ｄｔ、寒天
２ｇ７ａｔからなる寒天斜面培地（ｐｌ（７，０）で２
８℃〜２４時間培養したシュードモナス・ゾチダＩＦＯ
１２９９６又はアルカリゲネス・フェカリスＩＦＯ１２
６６９の１白金耳を、グルコース１１１／Ｉｔ 、ペグ
トン１５１／ａｔ 、酵母エキス０．３１／ｄｔ 。
、酵母エキス０．３１！ ／ ｄＡ −Ｋ２ＨＰＯ４
０，３１１／ ｒｌＬ 、ＮａＣｔＯ，２Ｊｉ’／ ａ
ｔ 、 Ｍｇ８０４・７Ｈ２００，０２１７ｄｔ、寒天
２ｇ７ａｔからなる寒天斜面培地（ｐｌ（７，０）で２
８℃〜２４時間培養したシュードモナス・ゾチダＩＦＯ
１２９９６又はアルカリゲネス・フェカリスＩＦＯ１２
６６９の１白金耳を、グルコース１１１／Ｉｔ 、ペグ
トン１５１／ａｔ 、酵母エキス０．３１／ｄｔ 。
に２ＨＰＯ４０，３１／ｄｔ 、 Ｎ＊Ｃ１Ｏ，２１／
ｄｔ 、ＭｇＳＯ４−７Ｈ，００，０２ｉ／ｄｔからな
夛、ｐＨ７，０ＫｉｌｌＮ整、加Ｊ１％ 減Ｉｆした液
体培地５００−に植菌し、２８℃で４０時間振盪培養を
行った。遠心分離にて集菌し、０．１Ｍリン酸カリウム
バ、７アー（ｐＨ８，０）で洗浄した後、再び遠心分離
を行うことによシ湿潤菌体を得た。次いで第１表に示す
量のシュードモナス・プチダＩＦＯ１２９９６の湿潤菌
体及びアルカリゲネス・フェカリスＩＦＯ（Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｉ ｆａ＠ｏａｌ１ｍ） １２６６９の湿潤
菌体を７デノシン１０ｍＭ、Ｄ−ホモシスティン１０
ｍＭ 、リン酸カリウムパｙ ７ ｙ −（ｔＪ（８，
０）１００ｍＭからなる基質溶液１ｄに懸濁し、３０℃
で２時間振盪して反応させた。結果を第１表に示す。
ｄｔ 、ＭｇＳＯ４−７Ｈ，００，０２ｉ／ｄｔからな
夛、ｐＨ７，０ＫｉｌｌＮ整、加Ｊ１％ 減Ｉｆした液
体培地５００−に植菌し、２８℃で４０時間振盪培養を
行った。遠心分離にて集菌し、０．１Ｍリン酸カリウム
バ、７アー（ｐＨ８，０）で洗浄した後、再び遠心分離
を行うことによシ湿潤菌体を得た。次いで第１表に示す
量のシュードモナス・プチダＩＦＯ１２９９６の湿潤菌
体及びアルカリゲネス・フェカリスＩＦＯ（Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｉ ｆａ＠ｏａｌ１ｍ） １２６６９の湿潤
菌体を７デノシン１０ｍＭ、Ｄ−ホモシスティン１０
ｍＭ 、リン酸カリウムパｙ ７ ｙ −（ｔＪ（８，
０）１００ｍＭからなる基質溶液１ｄに懸濁し、３０℃
で２時間振盪して反応させた。結果を第１表に示す。
第 １ 表
実施例２
実施例１と同様な方法で得た第２表に示すれ７ドモナス
属の湿潤菌体５０Ｔｎ９と、アルカリゲネス・フェカリ
スＩＦ０１２６６９の湿潤菌体２５０■を、アデノシン
１０ｍＭ、Ｄ−ホモシスティン１０ ｍＭ、リン酸カリ
ウムバッファー（ｐ）Ｉｓ、ｏ ） １００ｍＭからな
る基質溶液ＩＭに懸濁し、３０℃で２時間振盪して反応
させた。結果を第２表に示す。
属の湿潤菌体５０Ｔｎ９と、アルカリゲネス・フェカリ
スＩＦ０１２６６９の湿潤菌体２５０■を、アデノシン
１０ｍＭ、Ｄ−ホモシスティン１０ ｍＭ、リン酸カリ
ウムバッファー（ｐ）Ｉｓ、ｏ ） １００ｍＭからな
る基質溶液ＩＭに懸濁し、３０℃で２時間振盪して反応
させた。結果を第２表に示す。
第２表
実施例３
グルコース５９／ｄｔ 、ペグトン０．５ ｌ／ａｔ
、酵母エキス０．１１／ｄｔ 、 Ｋ）Ｉ２ＰＯ４０，
２１１／ａｔ 。
、酵母エキス０．１１／ｄｔ 、 Ｋ）Ｉ２ＰＯ４０，
２１１／ａｔ 。
Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｇｌｔｌＬ 、 Ｍｇ８０４・７Ｈ
，００，０２１１／ｄｔ 。
，００，０２１１／ｄｔ 。
寒天２ｇ／ｄｔからなる寒天斜面培地（ｐＨ６，０）で
２８℃、４８時間培養したす、カロマイセス・セレビシ
ェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙａ＊ｍ ｃ＠ｒｅｖ１ｍ１ａ
ａ） ＩＦＯ１８０５の１白金耳を、グルコース５９／
ｌｉｔ 、ペグトン０、５１１７ａｔ 、酵母エキスｏ
、 ｉ １ｉａｔ 、 ＫＨ２ｐｏ４０．２ｉｉａｔ
、 Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｇ／ａｔ 、 ＭｇＳＯ４・７
Ｈ，ＯＯ，０２９／ｃ１ｔからな、９ ｐｉ４６．５に
調整、加熱滅菌した液体培地５００１１１に植菌し、２
８℃で４０時間振盪培養を行った。遠心分離にて集菌し
、０−１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ８，０）で
洗浄した後、再び遠心分離を行うことによシ湿潤菌体を
得た。次いでかかる湿潤菌体３００〜と、実施例１と同
様な方法で得たシュードモナス・プチダＩＦＯ１２９９
６の湿潤菌体５０Ｔｖを７デノシン１０ ｍＭ、 Ｄ−
ホモシスティン１０ ｍＭ 、 リン酸カリウムバッフ
ァー（Ｐ）（８，０）１００ｍＭからなる基質溶液１ゴ
に懸濁し、３７℃で４時間振盪して反応させたところ、
２．１１μｍぬ旬のＳＡＭが生成した。一方、シュード
モナス・プチダＩＰＯ１２９９６の湿潤菌体を共存させ
ないで反応させたところ、８ＡＨの生成は認められなか
った。
２８℃、４８時間培養したす、カロマイセス・セレビシ
ェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙａ＊ｍ ｃ＠ｒｅｖ１ｍ１ａ
ａ） ＩＦＯ１８０５の１白金耳を、グルコース５９／
ｌｉｔ 、ペグトン０、５１１７ａｔ 、酵母エキスｏ
、 ｉ １ｉａｔ 、 ＫＨ２ｐｏ４０．２ｉｉａｔ
、 Ｋ２ＨＰＯ４０，１ｇ／ａｔ 、 ＭｇＳＯ４・７
Ｈ，ＯＯ，０２９／ｃ１ｔからな、９ ｐｉ４６．５に
調整、加熱滅菌した液体培地５００１１１に植菌し、２
８℃で４０時間振盪培養を行った。遠心分離にて集菌し
、０−１Ｍリン酸カリウムバッファー（ｐＨ８，０）で
洗浄した後、再び遠心分離を行うことによシ湿潤菌体を
得た。次いでかかる湿潤菌体３００〜と、実施例１と同
様な方法で得たシュードモナス・プチダＩＦＯ１２９９
６の湿潤菌体５０Ｔｖを７デノシン１０ ｍＭ、 Ｄ−
ホモシスティン１０ ｍＭ 、 リン酸カリウムバッフ
ァー（Ｐ）（８，０）１００ｍＭからなる基質溶液１ゴ
に懸濁し、３７℃で４時間振盪して反応させたところ、
２．１１μｍぬ旬のＳＡＭが生成した。一方、シュード
モナス・プチダＩＰＯ１２９９６の湿潤菌体を共存させ
ないで反応させたところ、８ＡＨの生成は認められなか
った。
実施例４
ジベレラ・７ジクロイ（Ｇｉｂｂ＠ｒ＊１１ａ ｆｕＪ
ｉｋｕｒｏｉ）ＩＦＯ６６０５の菌株を用いること及び
集菌を済過にて行うこと以外は実施例３と同様に反応さ
せたところ、８ＡＨの収量は３．０６μｍｔｓｔ／−で
ありた。比較のため、シュードモナス・プチダＩＦＯ１
２９９６の湿潤菌体を共存させない場合について同様に
反応を行ったところ、ＳＡＨの生成は認められなかりた
。
ｉｋｕｒｏｉ）ＩＦＯ６６０５の菌株を用いること及び
集菌を済過にて行うこと以外は実施例３と同様に反応さ
せたところ、８ＡＨの収量は３．０６μｍｔｓｔ／−で
ありた。比較のため、シュードモナス・プチダＩＦＯ１
２９９６の湿潤菌体を共存させない場合について同様に
反応を行ったところ、ＳＡＨの生成は認められなかりた
。
実施例５
酵母エキス０．２９／ｄｉ 、 ５ｏｌｕｂｌ＠５ｔａ
ｒｃｈ １ ｇ／ｄｌ 。
ｒｃｈ １ ｇ／ｄｌ 。
寒天２９／ｄｔからなる寒天斜面培地（−７，２）で２
８℃、４８時間培養したミクロポリスポラ・アンジオス
ポラ（Ｍｌ ａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ａｎｇｉ ｏ
ｓｐｏｒａ ）ＩＦＯ１３１５５の１白金耳を、ペグト
ン１１１１ｄｉ、肉エキス０．５ ｇ７ｄｌ 。
８℃、４８時間培養したミクロポリスポラ・アンジオス
ポラ（Ｍｌ ａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ ａｎｇｉ ｏ
ｓｐｏｒａ ）ＩＦＯ１３１５５の１白金耳を、ペグト
ン１１１１ｄｉ、肉エキス０．５ ｇ７ｄｌ 。
酵母エキス０．１ｆｌ／ｄ１．ＮａｃＬｏ、５ｇ７ｄｌ
からな、り 、ＰＨ７，１に調整、加熱滅菌した液体培
地５００ｄに植菌し、２８℃で４８時間、振盪培養を行
うこと以外は実施例３と同様に反応させたところ、ＳＡ
Ｈの収量は１．７８μｍｏ々郁であル、シ−−モナスゲ
テ〆ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体を共存させない場合は
ＢＡＨの生成は認められなかった。
からな、り 、ＰＨ７，１に調整、加熱滅菌した液体培
地５００ｄに植菌し、２８℃で４８時間、振盪培養を行
うこと以外は実施例３と同様に反応させたところ、ＳＡ
Ｈの収量は１．７８μｍｏ々郁であル、シ−−モナスゲ
テ〆ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体を共存させない場合は
ＢＡＨの生成は認められなかった。
実施例６
グルコース２９７ｄｉ、酵母エキス０．３ｇ／ｄｔ、ペ
グトン０．３９／ｄｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄ
ｉ 、 Ｍｇ８０４・７Ｈ２００，０５ｇ７ａｔ、’４
天２ｆｌ／ｄｌからなる寒天斜面培地（ｐＨ５，０）で
２８℃、９６時間培養したシゾフィラム・コムネ（Ｓｈ
ｌｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｅｏｒｒｍｕｎｅ ＩＦＯ６５
０４の１白金耳をグルコース２９７ｄｔ、酵母エキス０
．３ ｉ／ｄｔ 、ペグトン０、３ ｇ／ｄｔ 、 Ｉ
Ｇ（２ＰＯ４０，１１／ｄｌ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
００，０５１／ｄｌからな、ｊｌ） ｐｉ４５．０に調
整、加熱滅菌した液体培地５００１１Ｌｌに植菌し、２
８℃で９０時間、振盪培養を行ない濾過にて集菌するこ
と以外は実施例３と同様に反応を行ったところ、０．４
９μｍｏｔ〜のＳＡＨが生成した。一方、シュードモナ
ス・グチダＩＦＯ１−・２９９６の湿潤菌体を共存させ
ない場合はＳＡＷの生成は認められなかった。
グトン０．３９／ｄｌ 、 ＫＨ２ＰＯ４０，１１／ｄ
ｉ 、 Ｍｇ８０４・７Ｈ２００，０５ｇ７ａｔ、’４
天２ｆｌ／ｄｌからなる寒天斜面培地（ｐＨ５，０）で
２８℃、９６時間培養したシゾフィラム・コムネ（Ｓｈ
ｌｚｏｐｈｙｌｌｕｍ ｅｏｒｒｍｕｎｅ ＩＦＯ６５
０４の１白金耳をグルコース２９７ｄｔ、酵母エキス０
．３ ｉ／ｄｔ 、ペグトン０、３ ｇ／ｄｔ 、 Ｉ
Ｇ（２ＰＯ４０，１１／ｄｌ 、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
００，０５１／ｄｌからな、ｊｌ） ｐｉ４５．０に調
整、加熱滅菌した液体培地５００１１Ｌｌに植菌し、２
８℃で９０時間、振盪培養を行ない濾過にて集菌するこ
と以外は実施例３と同様に反応を行ったところ、０．４
９μｍｏｔ〜のＳＡＨが生成した。一方、シュードモナ
ス・グチダＩＦＯ１−・２９９６の湿潤菌体を共存させ
ない場合はＳＡＷの生成は認められなかった。
実施例７
実施例１と同じ方法で得た２種類の湿潤菌体を通風下約
１５時間室温にて乾燥した後、更に五酸化リンを入れた
減圧デシケータ−中、５℃で１日乾燥した。次にこの乾
燥菌体を乳鉢で粉末状にすシつぶし、再び減圧デシケー
タ−中で乾燥することによシ乾燥菌体を１１−襄した。
１５時間室温にて乾燥した後、更に五酸化リンを入れた
減圧デシケータ−中、５℃で１日乾燥した。次にこの乾
燥菌体を乳鉢で粉末状にすシつぶし、再び減圧デシケー
タ−中で乾燥することによシ乾燥菌体を１１−襄した。
アデノシン１０ｍＭ。
Ｄ−ホモシスティン１０ ｍＭ 、リン酸カリウムパッ
：ｙ−ｒ−（ｐ）［ｓ、ｏ）５ｏｎＭからなる基質浴Ｗ
１ ｍｌにシュードモナス・グチダＩＦＯ１２９９６
の乾燥菌体５ダとアルカリゲネス・フェカリスＩＦ０１
２６６９の乾燥菌体４０ダを加え３７℃で１時間振盪し
て反応させた。８ＡＨの収量は５．９０μｍ ｏｔ／ｍ
ｌでありた。
：ｙ−ｒ−（ｐ）［ｓ、ｏ）５ｏｎＭからなる基質浴Ｗ
１ ｍｌにシュードモナス・グチダＩＦＯ１２９９６
の乾燥菌体５ダとアルカリゲネス・フェカリスＩＦ０１
２６６９の乾燥菌体４０ダを加え３７℃で１時間振盪し
て反応させた。８ＡＨの収量は５．９０μｍ ｏｔ／ｍ
ｌでありた。
実施例８
実施例１と同じ方法で調整したシュードモナス・ゾチダ
ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体１０ダ、ラビットより得ら
れた８ＡＨａｓｓ （シグマ社＃り５００Ｕ（ｐＨ７，
０，３７℃で１時間に１ピコモルのＳＡＷを生成する酵
素活性をＩＵとする涜アデノシン１ ｍＭ、 Ｄ −ホ
モシスティン１ ｍＭ 、リン酸カリウムバッファー（
ｐＨ８，０） １００ｍＭからなる基質浴液１ゴに添加
し３７℃で４時間振盪して反応させた。ＳＡＨの収量は
０．０３１μｍｏｔ／ゴでめった。一方、シー−トモナ
ス・グチダＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体を添加しないで
同様に反応を行なったところ、ＳＡＨの生成は認められ
なかった。
ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体１０ダ、ラビットより得ら
れた８ＡＨａｓｓ （シグマ社＃り５００Ｕ（ｐＨ７，
０，３７℃で１時間に１ピコモルのＳＡＷを生成する酵
素活性をＩＵとする涜アデノシン１ ｍＭ、 Ｄ −ホ
モシスティン１ ｍＭ 、リン酸カリウムバッファー（
ｐＨ８，０） １００ｍＭからなる基質浴液１ゴに添加
し３７℃で４時間振盪して反応させた。ＳＡＨの収量は
０．０３１μｍｏｔ／ゴでめった。一方、シー−トモナ
ス・グチダＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体を添加しないで
同様に反応を行なったところ、ＳＡＨの生成は認められ
なかった。
実施例９
実施例１と同じ方法で調整したシュードモナス・グチダ
ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体０．５ｇ及びアルカリゲネ
ス・フェカリスＩＦＯ１２６６９の湿潤菌体３ｇをアデ
ノシン５０ ｍＭ 、 Ｄ−ホモシスティン５０ ｍＭ
。
ＩＦＯ１２９９６の湿潤菌体０．５ｇ及びアルカリゲネ
ス・フェカリスＩＦＯ１２６６９の湿潤菌体３ｇをアデ
ノシン５０ ｍＭ 、 Ｄ−ホモシスティン５０ ｍＭ
。
リン酸カリウムバッフ ７ （ｐＨ８，０） １００
ｍＭ カらなる基質溶液１０ゴに加え、窒素雰囲気下３
７℃で１０時間反応させたところ、反応液中に３３４１
１ｍｏＬ （１２８ｍ９ ）のＢＡＨが合成された。
ｍＭ カらなる基質溶液１０ゴに加え、窒素雰囲気下３
７℃で１０時間反応させたところ、反応液中に３３４１
１ｍｏＬ （１２８ｍ９ ）のＢＡＨが合成された。
その後、水冷下に３０％過塩素酸水溶液０．４ ｍｌを
添加して反応を停止した後、遠心分離によｈｍ体残渣な
どの不溶物を除去した。次いで得られた上清液にＩ Ｍ
ＫＨＣＯ，水溶液を添加しｐＨ６，０に調整し、生成
した過塩素酸カリウムの沈殿を遠心分離にて除去した。
添加して反応を停止した後、遠心分離によｈｍ体残渣な
どの不溶物を除去した。次いで得られた上清液にＩ Ｍ
ＫＨＣＯ，水溶液を添加しｐＨ６，０に調整し、生成
した過塩素酸カリウムの沈殿を遠心分離にて除去した。
かくして得られた上清液を強酸性陽イオン交換樹脂ダウ
エックス５０Ｘ８（Ｈ＋型カラム）に通液したのちカラ
ムを０．０２５チチオジグリコール水溶液および０．０
２５％チオジグリコール含有２Ｎ硫酸で洗浄したのち、
０．０２５％チオジグリコール合有６Ｎ硫酸で溶出され
る部分を集めて、これに２０チリンタングステン酸水溶
液を添加し、生成した沈殿物を遠心分離にて果めて冷水
で洗浄したのち、５倍容吐のアセトン／水（５０／ ５
０ ｖ／ｖ ）に溶解し、イソアミルアルコール／エー
テル（１／１・ｖ／ｖ ）で抽出した後、得られた水層
にＢ ａＣＯ５を加えて−を３．９に調整し、生成した
Ｂ ａ ＳＯ４をｐ過にて除去し、上溝液を凍結乾燥し
たところ、白色固体物７４ダが得られた・シリカダル薄
層クロマドグ２フィー、高速液体クロマドグ２フイー、
ペーノや一クロマトグラフィー、赤外吸収スペクトル、
比旋光度を測定したところ、この白色固体物はＳＡ■で
あることが確認された。
エックス５０Ｘ８（Ｈ＋型カラム）に通液したのちカラ
ムを０．０２５チチオジグリコール水溶液および０．０
２５％チオジグリコール含有２Ｎ硫酸で洗浄したのち、
０．０２５％チオジグリコール合有６Ｎ硫酸で溶出され
る部分を集めて、これに２０チリンタングステン酸水溶
液を添加し、生成した沈殿物を遠心分離にて果めて冷水
で洗浄したのち、５倍容吐のアセトン／水（５０／ ５
０ ｖ／ｖ ）に溶解し、イソアミルアルコール／エー
テル（１／１・ｖ／ｖ ）で抽出した後、得られた水層
にＢ ａＣＯ５を加えて−を３．９に調整し、生成した
Ｂ ａ ＳＯ４をｐ過にて除去し、上溝液を凍結乾燥し
たところ、白色固体物７４ダが得られた・シリカダル薄
層クロマドグ２フィー、高速液体クロマドグ２フイー、
ペーノや一クロマトグラフィー、赤外吸収スペクトル、
比旋光度を測定したところ、この白色固体物はＳＡ■で
あることが確認された。
特軒出願人 日本ゼオン株式会社
Claims (1)
- １、 シュードモナス属に属しＤ−ホモシスティンをＤ
Ｌ−ホモシスティンにラセｉ化する能力を有する微生物
の菌体または菌体処理物と５−７ｒノシルーＬ−ホモシ
スティンハイＰロラーゼの共存下に７ｒノシンとＤ−ホ
モシスティンを水性媒体中で接触させて反応せしめ、Ｓ
−アデノシル−Ｌ−ホモシスティンを合成して採取する
ことを特徴とするＳ−７デノシルーＬ−ホそシスティン
の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035566A JPS60180599A (ja) | 1984-02-27 | 1984-02-27 | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 |
| US06/706,393 US4605625A (en) | 1984-02-27 | 1985-02-27 | Process for producing S-adenosyl-L-homocysteine |
| FR8502810A FR2560213B1 (fr) | 1984-02-27 | 1985-02-27 | Procede de production de la s-adenosyl-l-homocysteine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035566A JPS60180599A (ja) | 1984-02-27 | 1984-02-27 | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60180599A true JPS60180599A (ja) | 1985-09-14 |
Family
ID=12445299
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59035566A Pending JPS60180599A (ja) | 1984-02-27 | 1984-02-27 | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4605625A (ja) |
| JP (1) | JPS60180599A (ja) |
| FR (1) | FR2560213B1 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59146595A (ja) * | 1983-02-10 | 1984-08-22 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 |
| JPS6030679A (ja) * | 1983-07-29 | 1985-02-16 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインハイドロラ−ゼの製造法 |
| US6723321B2 (en) * | 1998-07-31 | 2004-04-20 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Autoinducer synthase modulating compounds and uses thereof |
| US8642581B1 (en) | 2000-02-11 | 2014-02-04 | Brian D. Halevie-Goldman | Compositions and methods for the production of S-adenosylmethionine within the body |
| US20040116351A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-17 | Fast Balance, Inc. | Method for enhancing the natural reward system for exercise |
| WO2017136194A1 (en) * | 2016-02-03 | 2017-08-10 | Albert Einstein College Of Medicine, Inc. | Chemoenzymatic synthesis of s-nucleosyl amino acids (sna), analogs of s-adenosyl-l-methionine and s-adenosyl-l-homocysteine and uses thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU74142A1 (ja) * | 1976-01-08 | 1977-07-22 | ||
| JPS59146595A (ja) * | 1983-02-10 | 1984-08-22 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインの製造法 |
| JPS6030679A (ja) * | 1983-07-29 | 1985-02-16 | Nippon Zeon Co Ltd | Ｓ−アデノシル−ｌ−ホモシステインハイドロラ−ゼの製造法 |
-
1984
- 1984-02-27 JP JP59035566A patent/JPS60180599A/ja active Pending
-
1985
- 1985-02-27 FR FR8502810A patent/FR2560213B1/fr not_active Expired
- 1985-02-27 US US06/706,393 patent/US4605625A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2560213A1 (fr) | 1985-08-30 |
| FR2560213B1 (fr) | 1987-06-05 |
| US4605625A (en) | 1986-08-12 |
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