JPS60137299A - アシル化ペプチドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、低刺戟性で、臭い、色調が良好で、かつ高濃
度、高純度のアシル化ペプチドの製造方法に関する。

アシル化ペプチドは脂肪酸系の界面活性剤として、低刺
戟性であることからシャンプー等に配合され使用されて
いる。しかしながら、従来のアシル化ペプチドは次の欠
点を有していた。まず、天然物である蛋白質を分解して
原料のペプチドを得る工程においてペプチドの劣化が起
こり、そのため、アシル化ペプチドの色調、臭い等が悪
くなる。

次にペプチドのアシル化工程で、アシル化ペプチドの界
面活性により、増粘、ゲル化を起こし、反応率が低下す
るため、２０〜４０％の低固形分のアシル化ペプチドし
か製造することが出来なかった。又その場合、水溶液で
の反応であるため石鹸が副生し、純度を低下させている
。

本発明者等は、これらについて種々検討を加えた結果、
蛋白質分解工程、ペプチド脱気工程、及びアシル化工程
からなるアシル化ペプチドの製造方法を見い出した。

まず、上記の蛋白質分解工程は加水分解によって行われ
るが、一般的な方法として特公昭３８−６４５５１２号
公報に記載されている如く、苛性ソーダ等の使用による
アルカリ分解法がある。しかしながら、このアルカリ分
解法では、副反応としてペプチド結合の分解により多量
のアンモニア態窒素が出来ることが知られており、これ
らのアンモニア、アミンによる色調、臭いの劣化を起こ
すばかりでなく、これを原料として得たアシル化ペプチ
ドは、アンモニア、アミンの脂肪酸アミドを合有し、低
刺戟性を損なう慣れがある。

又、°同様にペプチドの製造に塩酸等の鉱酸を用いる酸
分解法がある。しかし、この方法も副反応が起こり、ト
リプトファン等の分解により黒色不溶性フミンが生成す
るため、このペプチドを原料として得たアシル化ペプチ
ドは色調、臭いが悪いばかりでなく、低刺戟性を損なう
惧れがある。

又、蛋白質の加水分解に有用な方法として特公昭５”’
　１−４１６０　ｓ号公報や特公昭４９−４８２８１号
公報に示されている如き、プロテアーゼによる方法があ
る。本発明者等は、このプロテアーゼ分解法と特定条件
下での脱気、アシル化工程を組み合わせることにより、
色調、臭いが良好で、低刺戟性、高純度、高濃度のアシ
ル化ペプチドを得られることを見い出し、本発明に到っ
た。プロテアーゼとして特公昭４９−４８２８１号公報
に放線菌由来のもの、特公昭５２−４２７７７号公報に
枯草菌由来のものなどが公知であり、本発明で使用でき
るが、特に、糸状菌由来のプロテアーゼが色、臭い、分
解率、アシル化物の物性等において秀れている。

第２の工程としてペプチド脱気工程がある。物質の臭い
は揮発性の有機化合物であり、脱気を行う方法として、
揮発させて除去することは例えば特公昭５２−４２７７
７号公報に記載されている如く一般的な方法である。

しかしながら、本発明に使用される如き、５０〜９０％
の高濃度の液状ペプチドを製造するような例は見い出さ
れない。本発明者等はこれらに更に次のアシル化工程を
組み合わせ本発明に到った。

第３の工程としてアシル化工程がある。通常、特公昭４
９−４８２８１号公報に記載されている如り、アシル化
ペプチドは、ショツテン　バウマン（Ｓｃｈｏｔｔｅｎ
　Ｂａｕｎ＋ａｎｎ）反応により、ペプチド水溶液を苛
性アルカリにてｐｌｌを８〜１２にコントロールし、脂
肪酸ハライドを滴下することにより得ることが出来る。

しかしながら、この方法では、アシル化ペプチドの界面
活性によるゲル化力により、高濃度のアシル化ペプチド
は得られず、３０〜４０％の濃度のものが限度である。

又この方法では、脂肪酸ハライドと、水との副反応によ
り、多量の石鹸が副生し、この脂肪酸の石鹸は皮膚刺戟
性や臭いが強いことや、シャンプー等に応用した場合に
石鹸カスが髪に付着すること等の問題を生じ、高品質の
ものは得られなかった。本発明者等は、これらの問題を
種々検討した結果、蛋白質を蛋白分解酵素により分子量
２００〜１０００に分解した後、これを脱気して得られ
る濃度５０〜９０％の無臭で色調良好なペプチド水溶液
を使用して、エタノール、プロピレングリコール等の低
刺戟性でかつ安全性の高い一価又は二価のアルコールの
存在下で、苛性アルカリでｐＨを８〜１２にコントロー
ルしつつ炭素数８〜２２の脂肪酸クリラッドを反応させ
ることにより、アルコールの存在によりアシル化ペプチ
ドがゲル化しないため、高濃度のアシル化ペプチドが得
られ、かつアルコールの溶媒効果により、反応率が向上
し、石鹸の副生が抑えられるため、高純度のアシル化ペ
プチドが得られ、なおかつこれらのアルコールの静菌効
果により腐敗が抑えられ、又、得られたアシル化ペプチ
ドは臭い、色調が良好でかつ低刺戟性であることを見い
出し、本発明のアシル化ペプチドの製造方法を完成した
。

即ち、本発明のアシル化ペプチドの製造方法は、蛋白質
をプロテアーゼにより分子量２００〜１０００に分解し
、これを脱気して濃度５０〜９０％のペプチド水溶液を
得、然る後、該ペプチド水溶液を、−価又は二価のアル
コールの存在下、ｐＨ８〜１２で、炭素数８〜２２の脂
肪酸ハライドと反応させることを特徴とするものである
。

以下に本発明のアシル化ペプチドの製造方法について詳
述する。

本発明に用いられる蛋白質としては、コラーゲン、ケラ
チン、カゼイン、ゼラチン、大豆蛋白、小麦蛋白、アル
ブミン等があげられ、これらの部分分解物も用いられる
。

本発明に用いられるプロテアーゼとしては、枯草菌、放
線菌、糸状菌由来のアルカリ、中性、酸性のプロテアー
ゼがあげられ、単独又は２種以上が混合されて用いられ
る。本発明に用いられるプロテアーゼは、更に望ましく
は糸状菌由来の中性プロテアーゼが良好である。

本発明において、上記プロテアーゼの使用量は各々の力
価によって変えることが望ましく、蛋白質１００ｇ当た
り５００〜１００．０００単位が望ましく、更に望まし
くは、ｉ、ｏｏｏ〜５０，０００単位が良好である。

本発明において、蛋白分解時のｐｎは３〜１２が望まし
く、各々プロテアーゼの活性度の最も良い範囲で行うこ
とが望ましい。糸状菌由来の中性プロテアーゼを使用し
た場合はｐＨ５〜８が望ましい。

本発明において、蛋白分解時の温度は３０〜６０℃が望
ましく、糸状菌由来の中性プロテアーゼを使用した場合
は４０〜５０℃が望ましい。

本発明において蛋白分解時の時間は所定の分子量（２０
０〜１０００）に達するまで行うが、１００時間以上で
は工業的に不利であり、酵素量、温度等を調整して１０
〜４８時間以内で行うことが望ましい。又、蛋白分解時
に細菌の汚染を防止するためパラベン、Ｄ）ＩＡ等の防
腐剤を添加することが望ましい。

本発明において、ペプチドの脱気は減圧下３０〜１００
℃で行うことが望ましい。３０℃以下では脱気効率が悪
く、１００℃以上では、ペプチドの分解等により品質の
劣化を起こす。本発明において、ペプチドの脱気は、減
圧下で行うことが望ましく、２００ｍｍＨｇ以下の真空
度で行うことが更に望ましい。又、脱気したペプチドは
、５０〜９０％の濃度（固形分）とする。濃度が５０％
以下では、アシル化ペプチドの原料としては、純分が少
ないため、アシル化しても、高濃度のアシル化ペプチド
が得られない。９０％以上では、濃度が高すぎるため、
粘度が高くなり、ハンドリング的に不利であり、又アシ
ル化時にアルコールの溶媒で、分離を起こす惧れがある
ため望ましくない。

本発明においてペプチドのアシル化の場合に用いられる
アルコールとしては、エタノール等の一価アルコールか
、プロピレングリコール、１．３−ブタンジオール等の
二価アルコールが望ましく、これらの単独か２種以上の
配合物が用いられる。

これらのアルコールに更にグリセリン等の多価アルコー
ルを配合することも可能であるが、多量に使用すると、
増粘、ゲル化を起こすために好ましくない。−価アルコ
ールとしてメタノール、ｎ−ブタノール等は反応におい
ては好ましい収率を与えるが、安全性上の問題から使用
することは好ましくない。これらのアルコールは、アシ
ル化ペプチド反応組成物中に５〜３０％含有されるのが
望ましく、５％以下ではゲル化防止効果が無いだけでな
く、防腐効果も無く、又副反応により、石鹸等が生成す
る。３０％以上では、反応中にペプチドの熔解性が悪く
分離し、不均一になるため収率が悪くなり望ましくない
。

本発明によるアシル化ペプチドは、上記３工程により製
造されるものであり、第１の工程でプロテアーゼ分解以
外の方法で得たペプチドは本発明による第２、第３の工
程を経ても、臭い、色調が悪く、刺戟性の強いアシル化
ペプチドとなり、本発明によるアシル化ペプチドと同等
のものは得られない。

同様に第２工程である脱気を行わず、本発明による第１
、第３の工程を経ても、色調は良好であるが、臭いが劣
り、又濃度も低いものとなる。

又、本発明による第１、第２の工程を経ても、本発明に
よる第３の工程を行わなければ、本発明によるアシル化
ペプチドと同様のものは得られない。

本発明によるアシル化ペプチドは、色調、臭い、低刺戟
性に秀れ、高濃度、高純度であり、シャンプー、台所用
洗剤等の低刺戟性洗浄剤のベースとして最適である。

以下に本発明の実施例を示す。　。

実施例１ （工程−１）ニッピ製ゼラチン１００ｇ　（固形分９５
％）に水１００ｇを加え、５０℃で溶解後、ディナチー
ムＡＰ（ナガセ生化学製、糸状菌由来中性プロテアーゼ
、５０，０００単位／ｇ）、１　ｇを添加し、５０℃で
２０時間分解した。得られたペプチドは、ガードナー４
、臭い良好で、分子量４２０、固形分４９％であった。

（工程−２）これを、８０℃で２時間かき混ぜて酵素を
失活させた後、６０℃、５０ｍｍＨｇで脱気し、固形分
６５％、臭いの非常に良好なガードナー５の濃ペプチド
水溶液（脱気ペプチド）を得た。

（工程−３）次に、この濃ペプチド６５ｇにエタノール
１０ｇを加え、苛性ソーダ４０％液でｐＨを８〜１２に
保ちつつ且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、ラウリル
クロライド１９ｇを滴下した後、３０〜４０℃で１時間
熟成した。ｐＨを３３％塩酸で７とし、ラウリン酸ペプ
チドナトリウム（■）１０５ｇを得た。

実施例２ 実施例１に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

（工程−３）この濃ペプチド６５ｇにプロピレングリコ
ール１５ｇを加え、苛性ソーダ４０％液でＧＩＨ８〜１
２に保ちつつ且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、ラウ
リルクロライド１９ｇを滴下した後、３０〜４０℃で１
時間熟成した。ｐＨを３３％塩酸で７とし、ラウリン酸
ペプチドナトリウム（１１）１１０ｇを得た。

実施例３ （工程−１）カゼインナトリウム（固形分９５％）に水
１００ｇを加え、５０℃で溶解後コクラーゼＳＳ（三共
製、糸状菌由来プロテアーゼｓｏ、ｏｏ。

単位／ｇ、）Ｉｇを添加し、５０　’Ｃで１０時間分解
した。得られたペプチドは、ガードナー３、臭い良好で
、分子９３０５であった。

（工程−２）これを、８０℃で２時間かき混ぜて酵素を
失活させた後、６０℃、５０ｎ＋ｍ）Ｉｇで脱気し。

、固形分６５％、臭いの非常に良好なガードナー４の濃
ペプチドを得た。

（工程−３）次に、この濃ペプチド４８ｇにエタノール
１８ｇを加え、苛性ソーダ４０％液でｐＨを８〜１２に
保ちつつ且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、ラウリル
クロライド１９ｇを滴下した後、３０〜４０℃で１時間
熟成した。ｐＨを３３％塩酸でｌとし、ラウリン酸ペプ
チドナトリウム（■）８０ｇを得た。

実施例４ 実施例３に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

（工程−３）この濃ペプチド４８ｇに１．３−ブタンジ
オール１（ｉｇを加え、苛性ソーダ４０％液でｐ１１８
〜１２に保ちつつ且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、
ラウリルクロライド１９ｇを滴下した後、３０〜４０℃
で１時間熟成した。ｐＨを３３％塩酸で７とし、ラウリ
ン酸ペプチドナトリウム（ＩＶ）８２ｇを得た。

実施例５ 実施例１に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

（工程−３）この濃ペプチド６５ｇにエタノール１０ｇ
を加え、苛性ソーダ４０％液でｐＨ８〜１２に保ちつつ
且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、ヤシ脂肪酸クロラ
イド（Ｃ９：８％、ＣＩＯニア％、ＣＩｌ：４８％、Ｃ
１４：　１７％、Ｃｌ６＝９％、Ｃ８８：２％、Ｃ，８
Ｆｌ：６％、Ｃ１ｆＦ２　’＝　３％）２０ｇを滴下し
た後、３０〜４０℃で１時間熟成した。ｐｌ＋を３３％
塩酸で７とし、ヤシ脂肪酸ペプチドナトリウム（■）１
０６ｇを得た。

実施例６ 実施例１に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

（工程−３）この濃ペプチド６５ｇにエタノールＬｏｇ
を加え、苛性ソーダ４０％液でｐＨ８〜１２に保ちつつ
且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、牛脂脂肪酸クロラ
イド（ＣＩ４：２％、Ｃ１６：３５％、Ｃｌ６Ｆ１：２
％、Ｃｌ８：　１４％、ＣＩＩＦ、：４２％、ＣＩｌ？
Ｆ２：４％）３０ｇを滴下した後、３０〜４０’Ｃで１
時間熟成した。ｐｌ＋を３３％塩酸で７とし、牛脂脂肪
酸ペプチドナトリウム（ＶＴ）１１５ｇを得た。

実施例７ 実施例１に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

（工程−３）この濃ペプチド６５ｇにエタノール１２ｇ
を加え、苛性ソーダ４０％液でｐＨ８〜１２に保ちつつ
且つ温度を１０〜２０℃に保ちつつ、なたね油脂肪酸ク
ロライド（０１６：３％、Ｃ１８：１％、Ｃｌ２Ｆ１：
１７％、（，１ｇＦ２：１７％、ＣｌｇＦ３：９％、Ｃ
２０ＦＩ：９％、Ｃ２２Ｆ１：４１％、その他３％）３
２ｇを滴下した後、３０〜４０℃で１時間熟成した。ｐ
Ｈを３３％塩酸で７とし、なたね油脂肪酸ペプチドナト
リウム（■）１２０ｇを得た。

比較例１ 実施例１に示す工程−１で生成したペプチドを使用した
。

これを８０°Ｃで２時間かき混ぜて酵素を失活させた後
、脱気せずにこのペプチド８’　６　ｇにエタノール１
０ｇを加え、苛性ソーダ液でｐＨを８〜１２に保ちつつ
且つ温度を１０〜２０°Ｃに保ちつつ、ラウリルクロラ
イド１９ｇを滴下した後、３０〜４０℃で１時間熟成し
た。ｐＨを３３％塩酸で７とし、ラウリン酸ペプチドナ
トリウム（イ）１２５ｇを得た。

比較例２ 実施例１に示す、工程−１，２を経た濃ペプチドを使用
した。

この濃ペプチド６５ｇに溶剤を使用せず、苛性ソーダ液
でｐＨを８〜１２に保ちつつ且つ温度を１０〜２０°Ｃ
に保ちつつ、ラウリルクロライド１９ｇを滴下したが、
途中でゲル化し反応が困難となり、中止した。

比較例３ ゼラチン１００ｇ（９５％固形分）に水１００ｇを加え
、５０　’Ｃで溶解後、苛性ソーダ１０’ｇを加え、７
０〜８０°Ｃで４時間分解した。得られたペプチドは、
ガードナー８、アンモニア臭が強く、分子量４１０、固
形分５０％であった。

これを、６０°Ｃで５０ｍｍＨｇで脱気し、固形分６５
％、ガードナー９、臭い不良の濃ペプチドを得た。

この濃ペプチド６３ｇにエタノール１０ｇを加え、苛性
ソーダ４０％液でｐｌ＋を８〜１２に保ちつつラウリル
クロライド１９ｇを１０〜２０°Ｃ＆こ冷却しつつ滴下
した後、２０〜３０°Ｃで１時間熟成した。ｐＨを３３
％塩酸で７とし、ラウリン酸コラーゲンペプチドナトリ
ウム（ロ）９５ｇを得た。

上記の実施例１〜７及び比較例１．３で得られたアシル
化ペプチド〔サンプル（Ｉ）〜（■）及ヒ（イ）、（ロ
）〕について〕ツク−キンエルマり−社高速液体クロマ
トグラフィにより組成分析を１１つだ。その結果を下記
の表−１、表−２及び表−３に示す。

表　−１（実施例１〜４） 注）色の欄の数値はガードナー値を示す。

表　−２（実施例５〜７） 注）色の欄の数値はガードナー値を示す。

表　−３（比較例） 注）色の欄の数値はガードナー値を示す。

表−１、表−２及び表−３に示すように、実施例１〜７
のサンプル（Ｉ）〜（■）は、色調、臭いが良好でアシ
ル化ペプチド濃度が高いのに対して、比較例１のサンプ
ル（イ）は、臭いが劣っており、比較例２は製造不能で
あり、比較例３のサンプル（ロ）は色調、臭いが劣って
おり、実施例１〜７のサンプルＨ）〜（■）は比較例の
サンプルより秀れることが判る。

また、上記のサンプル（Ｉ）　、　、（Ｉｔ）及び（イ
）、（ロ）について、更に皮膚に対するクローズバッチ
テストを行った。その結果を下記表−４に示す。テスト
はパネラ−２０人で原液及び１０倍希釈液で行った。

表−４ プル（ＩＩ）は、原液、１０倍希釈液共、１００％（−
）であったのに対し、比較例１のサンプル（イ）は原液
で（±）があり、比較例３のサンプル（ロ）では１０倍
希釈液ですら（±）が見られ、原液では（＋）も見られ
、皮膚刺戟性において実施例のサンプルが秀れることが
判る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１蛋白質をプロテアーゼにより分子量２００〜１０
   ００に分解し、これを脱気して濃度５０〜９０％（重量
   、以下同じ）のペプチド水溶液を得、然る後、該ペプチ
   ド水溶液を、−価又は二価のアルコールの存在下、ｐＦ
   １８〜１２で、炭素数８〜２２の脂肪酸ハライドと反応
   させることを特徴とするアシル化ペプチドの製造方法。 （２）プロテアーゼとして糸状菌由来のプロテアーゼを
   使用することを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記
   載のアシル化ペプチドの製造方法。 （３）ペプチドの脱気を３０〜１００℃で減圧下に行う
   ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載のアシ
   ル化ペプチドの製造方法。 （４１−（ｉ又は二価のアルコールとして、エタノール
   、プロピレングリコール、■、３−ブタンジオールから
   選ばれる１種又は２種以上の混合物を使用し、得られる
   アシル化ペプチド中に、それらが５〜３０％含有され、
   かつ固形分が５０％以上であることを特徴とする特許請
   求の範囲第（１）項記載のアシル化ペプチドの製造方法
   。