JPS60126089A - 抗生物質スピロカルディンａまたはｂ並びにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物質スピロカルテイン（Ｓｐｉｒｏ−ｃ
ａｒｄｉΩ）ＡおよびＢ並びにその製造法に関するもの
である。本発明者らは福島県耶麻郡で採取した土壌から
分離したノカルジア属に属する５ＡＮＫ６４２８２株が
ダラム陽性、グラム隘性細菌に対して有効な新抗生物質
スピロカルテインＡおよびＢを生産することを見出した
。

従って、スピロカルテインＡおよびＢはこれら細菌に起
因するヒト、動物または植物の疾病の予防または治療に
用いられる。

スピロカルディンＡおよびＢを生産する５ＡＮＫ６４２
８２株の菌学的性状は次の通りである。

１）形態学的特徴 ■ＳＰ　［インターナショナル・ストレプトミセス・プ
ロジェクト（：ＩｏｔｅｒｎａｔｉｏｎａｔＳｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓＰｒＯｊθＣｔ）］　’ＭＬ定の培地お
よびワックスマン（１３，Ａ。

Ｗａｋｓｍａｎ）らの勧告〔アクチノミセイテス（Ｔｈ
６Ａｃｔ１ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）　２巻〕の培地上で培
養する。培養は通常２８℃で行う。５ＡＮＫ　６４２８
２株の形態学的特徴は、接種培養の数日後に気菌糸およ
び栄養菌糸に明瞭な分断が観察されることである。

分断菌糸は球状ないし桿状を示す。その他、特殊器官の
形成は観察されない。

２）各種培養基上の諸性状 各珈培養基上で２８℃、１４日間培養したときの性状は
第１表に示す通りである。色調の表示は日本色彩研究所
板”標準色票”のカラーチップナンバーを表わす。

第１表　各種培地上の培養性状 Ｇ：生育　ＡＭ　ｊ気菌糸　Ｒ：裏面 ＳＰ：可治注色素 ３）生理的性質 ５ＡＮＫ　６４２８２株の生理学的性質を第２表に、炭
素源資化性を第３表に示す。

第　２　表　生理学的性質 ＊　培地１　：　トリプトン・イーストエキスブロス（
ＩＳＰＩ）培地２：ペプトン・イーストエキス・鉄寒天
（ＩＳＰ　１５）培地３：チロ７ン寒天（工５Ｐ７） ＋：同化、±＝弱く資化、−：同化せずり　菌体内成分
について 二ム・ビー・レジエバリヤー（Ｍ　、Ｐ　、ＬＢｃｈｅ
ｖａｌｉｅｒ）らの方法〔エイ・ディーラ（Ａ、Ｄｌｓ
ｔｚ）ら著、放線菌の分類（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
　ｔａＸｏｏｏｍｙ）　、　２２５頁１１９８０年〕に
従い、菌体の酸加水分解物のペーパークロマトグラフィ
ーによる分析を行った結果、メンジアミノピメリン酸お
よびアラビノース、ガンクトースが認められ、細胞壁型
のタイプは■型であることが確認された。また全菌体糖
型はＡ型であった。さらにエッチ・モルダルスカ（Ｈ−
Ｍｏｒｄａｒｓｋａ）らの方法〔ジャーナル・オプ・ジ
ェネラル０マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏ
ｆｇｅｃ＋ｅｒａＩＭｉｃｒｏｂ１ｏ１ｏｇｙ）、１１
巻、７Ｔ頁、１９７２年〕に従い、菌体内の脂質を分析
した結果、　ＬＣＮ−ｐ。

（Ｌｉｐｉｄｓ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｏｆ
　Ｎｏｃａｒｄｉａ）が存在していた。

上記の如き５ＡＮＫ　６４２８２株の諸性状のうち特に
■菌糸が分断すること、■細胞壁が■型で全菌体中の糖
型がＡ型であること、■菌体内に１１３Ｎ−Ａが存在す
ること等から５本菌株は、放線菌の中でもノカルジアセ
アエ（Ｎ□ｃａｒｄ１ａｃｅａθ）科のノカルジア（Ｎ
ｏｃａｒｄ、ｉａ）属に属する菌株であることが明らか
となシ、ノカルジア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ
−）　５Ａｙｘ　６４２８２と命名した。

本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究夙に寄託
されておシその微生物受託番号は第６９８６号である。

以上、スピロカルディンＡおよびＢの生産菌について説
明したが、放線菌、特にノカルジア属の諸性質は一定し
たものでなく、自然的、人工的に容易に変化することは
周知の通シであｐ、本発明で使用しうる菌はノカルジア
属に属するスピロカルディンＡおよびＢを生産するすべ
ての菌株を包含するものである。

本発明における培養は、一般放ｗ１菌における培養方法
に準じて行われ、液体培地中での振盪培養あるいは通気
攪拌培養によるのが好ましい。

培地成分としては、たとえば炭素源としてブドウ糖、マ
ルトース、シュクロース、マンニット、糖蜜、グリセリ
ン、テキストリン、澱粉、大豆油、綿実油などが、窒素
源として大豆粉、落花生粉、綿実粉、ファーマミン、魚
粉、コーン・スチープ・リカー、ペプトン、肉エキス、
イースト、イースト・エキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウムなどが、また無機塩として食
塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要に
応じて適宜添加される。

液体培養に際しては、シリコン油、植物油、界面活性剤
等が消泡剤として適宜使用される。

培地のｐＨは中性附近、培養温度は２４℃から３０℃、
特に２８℃前後か好ましい。

培養の経過に伴って生産されるスピロカルディンＡおよ
びＢの力価の経時的変化は、スタフィロコッカス・アウ
レウス（８ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ
）ＦＤＡ　２０９Ｐ　ＪＯ−１を被検菌、としたベーパ
ーディスク（東洋科学産業■製、直径８　ａ、　Ｔｈ１
ｃｋ　）検定法によシ測定される。

通常７２〜１２０時間の培養でスピロカルディンＡおよ
びＢの生産量は最高値に達する。主として培養液中の液
体部分に存在するスピロカルディンＡおよびＢは、培養
終了後、菌体その他の固型部分をけいそう土等をｒ過助
剤とするｒ過操作、あるいは遠心分離によって除去し、
そのｒ液あるいは上清中から抽出・精製す、ることによ
って得られる。

スピロカルディンＡおよびＢは、その物理化学的性状を
利用することによシ、たとえば吸着剤を用いて採取する
ことができる。吸着剤としてはたとえは活性炭、あるい
は吸着用樹脂であルア　７ハー　ライ）　ＸＡＤ−２、
ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−Ｔ等（ローム・アンド・ハース社
製）またはダイヤイオンＨＰ　１０　、　ＨＰ　２０　
、　ＨＰ　２Ｑ　ＡＧ　、　ＨＰ５０　等（三菱化成工
業■社製）が使用される。

スピロカルディンＡおよびＢはスピロカルディンＡおよ
びＢを含む液を上記の如き吸着剤の層を通過させて、ス
ピロカルディンＡおよびＢを含む液に含まれる不純物を
吸着させて取シのソ＜カ、またはスピロカルディンＡお
よびＢを吸着させた後、メタノール水、アセトン杢、ｎ
−ブタノール水などを用いて溶出することによって得ら
れる。また中性脂溶性物質を培養液から採取する方法、
たとえば水と混和しない有機、溶媒（たとえばクロロホ
ルム、酢酸エチル、Ω−フリノールなどの単独または〜
れらの組み合せ）によシ培養ｆ液または水溶液から抽出
することも可能である。更に、スピロカルディンＡおよ
びＢを含む有機溶媒層を稀アルカリ水、稀酸注水などで
洗浄することによシ混在する酸性あるいは塩基性物質を
除去することも可能である。

このようにして得られたスピロカルディンＡおよびＢを
精製するためには、アビセル（旭化成工業■社製）など
のセルロースもしくハセファデツクスＬＨ−２０（ファ
ルマシア社製）などを用いた分配カラムクロマトグラフ
ィー；シリカゲル、アルミナ、フロリジルのような担体
を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；逆相用担体を
用いた逆相カラムクロマトグラフィー；まエバスピロカ
ルディンＡおよびＢと混在する不純物との溶媒に対する
分配率の差を利用した抽出法、あるいは向流分配法など
が有効な方法といえる。以上の精製手段を単独あるいは
適宜組み合せ、反復して用いることによシスピロカルデ
ィンＡおよびＢを精製することができる。あるいは、ス
ピロカルディンＡおよびＢは一般の脂溶性抗生物質と同
じく、培養条件によっては培養液中の菌体部分に存在す
る。この場合はアルコール類、アセトン等の親水性有機
溶媒な用いて抽出し、抽出液よシ溶媒を除去し、次いで
水溶液とした後、培養ｒ液からと同様の方法で抽出・精
製することができる。

このようにして得られたスピロカルディンＡは次の理化
学的および生物学的性状を有する。

１）物質の性状：中性の淡黄色粉末。

２）比旋光度：〔α〕甘せ５２．７°（ｃ　、　０．４
Ｂ　、　０ＨＯ２３）３）　分　子　式＝０２０Ｈ恥０
６（高分解能マススペクトル法によシ測定） ４）分子量：　３６Ｂ　（ＦＤ／ＭＳ）５）　紫外線吸
収スペクトル：λｒｒｍｚ　ｎｍ　（Ｅ”　）０Ｉ１１ メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図
に示した通Ｆ）　２８０　（ａｈ）　ａｍ　（Ｅ’％１
０）Ｇ に極大吸収を示す。

６）　赤外線吸収スペクトルニジｍａｘα−１液膜法で
測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に示す通シであ
る。

７）　核磁気共鳴スペクトル：　ａ　：　ｐｐｍクロロ
ホルム中、内部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）
を使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨ
２）は第３図に示す通シでるる。

８）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、ア（ 七トン、エタノールおよびメタ ノールに可溶、水に不溶。

９）呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸に陽性
。

１０）　薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値　０．３０吸
着剤；メルク社製シリカゲルプレー）Ａ５７１５展り溶
媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１）１１）抗菌スペク
トル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するスピロカルデ
ィンＡの最小発育阻止濃度（ＭＩＯ）は２％グリセリン
−添加感受性ディスク用寒天培地（白水製薬■製）、カ
ビ、酵母類に対しては０．２チイーストエキス添加サブ
ロー寒天培地、嫌気性菌に対してはＧＡＭ寒天培地（白
水製薬■製）、マイコプラズマに対してはフレッシュイ
ーストエキス、ＤＮＡ、リン酸二カリウム、Ｐ（３−Ｇ
添加ＰＰＬＯ寒天培地を用いた寒天培地稀釈法によって
測る。

定した。その結果は第４〜６表に示す通り＋）Ｃ′また
、スピロカルディンＢは次の理化学的および生物学的性
状を有する。

１）物質の性状：中性の淡黄色粉末。

２）比旋光度：〔α］Ｄ　−３５，５’　（Ｃ，０，６
２゜ＣＨＣＬ３−） ３）分子式：Ｃ２ｏＨ３２０６（高分解能マススペクト
ル法により測定） 杓分子険：３６８（／Ｍ８） ５）紫外線吸収スペクトル：λ　ｎｍ（１１％）ｍａｒ
　１２ メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第４図
に示した通り２１１０（ａｈ）ｎｍ（Ｅ１％５）に極大
吸収を示す。

ｃＴｎ ６）赤外線吸収スペクトルニジ　ｍ ｅＬＸ 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは第５図に示す
通りである。

Ｔ）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ６ｐｍ重クロロホル
ム中、内部基準にＴＭ８（テトラメチルシラン）を使用
して測定した核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ　）
は第６゛′図に示す通りである。

８）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エ
タノールおよびメタノールに可溶、水に不溶。

９）呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸に陽性
。

１ｏ）ｉ１層クり？）クラフィー　：　Ｒｆ値０．１５
吸着剤：メルク社製シリカゲルプレート屋Ｔ１５ 展開溶媒：酢酸エチル：ベンゼン（１：１）１１）抗菌
スペクトル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するスピロカルデ
ィンＢの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は２％グリセリン
や添加感受性ディ（スフ用寒天培地（白水製薬（株）装
）、カビ、酵母類に対しては０．２％イーストエキス添
加サブロー寒天培地、嫌気性菌に対してはＧＡＭ寒天培
地（白水製薬（株）製）、マイコ１ラズマに対してはフ
レッシュイ−ストエキス、Ｄ　Ｎ　Ａ　Ｎ　リン酸二カ
リウム、ｐｃ−ａ添加ＰＰＬＯ寒天培地を用いた寒天培
地稀釈法によって測定した。その結果は第４第４表 ＭＩＣ（μ―） 被　検　菌　スピロカザインＡ　スピジυｚ４　ンＢス
タフィロコッカス・アウレウス ＦＤＡ２０９Ｐ　ＪＣ−１６，２５２５スタフイ口コツ
力ｘ−アウレウｘ８ＡＮＫ７０１７５　１．５６　６．
２５スタフイロコツカス・アウレウｘＳＡＮＫ７１２７
５　ｓｏ、ｏ　：＞１００スタフイロコツカス・エビテ
九くティ７ＢＡＮＫ７１５７５　１５６　６．２５スト
レプトコツカス・フェカリス５ＡＮＫフ１γアＢ　６．
２５　２５／９／１ｚ２−ズｉ５−リスＰＣＩ２１９　
０．７８　６．２５ミコバクテリウム・スメク゛マチ２
ＡＴＣＣ８０７３，１３１２，５エツシエリキア・コリ
ーＮＩＨＪＪＣ−２＞１００　＞１００クレブシェラ−
ニュウーＥ：ニエＰＣＩ６０２　０．３９　、１．５８
〜３．１３シュート先ナス・アシトポランス５ＡＮＫ７
２７８２　２５　１００シ：Ｌ−）”−Ｅ＋２・−’−
４４”／−４ＮＣＴＣ１０４９０１００１００セラチア
−？７Ｌ−１ｚツセンス５ＡＮＫ７３０６０　５０　、
）１００プロテウス−ミラビリス５ＡＮＫ７０４６１　
１００　＞１００キヤンデイダ・アルビカンスＹ１１−
１２００　＞１００　）１００ビリキュラリ７−オリゼ
ヱ８ＡＮＫ１４７５８　〉１００　）１００第５表 ＭＩＣ（μφ７） 被　検　菌　スヒｂカルテインＡスピロカルテインＢバ
クテロイテ玄・ンラギリス　６．２５　５（１ノヅテロ
イデＸ・フラギリス・サフジビー・フラギリス　６．２
５　５０ ニー／ザテリウム・ネクロファシエンス　６．２５　５
０フソノくクテリウム・ネクロホシム　１００　）１０
０ベグトストレプトコツカス・ミクロス　６．２５　２
５ペグトストレ１トコツカス・バーブルス　２５　）１
００グロビオニパクテリウム・アクネス　１２．５　１
ＱＱクロストリジウム・ボッリナム　５０　１００クロ
ストリジウム・ソＡづどＬリー　ｓｏ　〉ｔｏ。

クロストリジウム・デイフインル　１２．５　５０第６
表 ＭＩＣ（μ―） 被　検　菌　ストｂかりＡンＡヌとｂかりＡンＢマイコ
グラーズマ・ミコイデスＰＧ１　１２．５　５０マイコ
プラズマ・アガラクテイアエＰＧ２　５０　＞１００マ
イコグラズマ・アースリテイデエスＰＧ６　６ｔ、２５
　５０マイコプラズマ・ボビグニタリウムＰＧ１１　５
０　＞１００マイコグラズマ・プルモニスＰＧ２２　’
　３．１３　５０マイコプラズマ・ガリセプテイカムＰ
Ｇ３１　５０　、）１００マイコプラズマ・カニメＰＣ
）１４　６．２５　２５マイコプラズマ・フエリスＣｏ
　６：２５　５０マイコプラズマ・ホミニスＰＧ２ｆ　
２５　１００マイコプラズマ・ガリセプテイカム８６　
６．２５　５０ウレアプラズマ・ウレアリテイカム（Ｈ
ｕｍａｎ）　１．５６　６．２５上記の如きスピロカル
ディンＡおよびＢの特性を既知抗生物質の諸性状と比較
した結果、一致するものはなく新抗生物質と判定された
。

以上から、スピロカルディンＡおよびＢは各種細菌感染
性疾患を対照とする抗菌剤として使用される。その投与
形態としては皮下注射、静脈内注射、筋肉注射、坐剤な
どによる非経口投与法あるいは錠剤、カプセル剤、散剤
、顆粒剤などによる経口投与法があげられる。投与量は
対象疾患、投与経路および投与回数などによって異なる
が、例えば成人に対して通常は１日５００■乃至２００
０１９を１回または数回に分けて投与するのが好ましい
。

次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。

実施例１ ノカルジアＳＰ、５ＡＮＫ６４２８２株を培地組成−１
で示される培地８０ｍＱ含む５００ｄ容三角フラスコに
一白金耳接種し、２２０　ｒｐｍの回転振盪培養機によ
り２８℃で９６時間培養した。この培養液２５１！／’
Ｉｔ培地組成−２で示される培地５００ｄを含む２を容
三角フラスコ４本に接種し、２２０ｒｐｍの回転振盪培
養機により２８℃で２４時間培養した。得られた培養液
を同一の培地１５１を含む３０を容ジャーファーメンタ
ー２基に各々７５０−ずつ接種し、２８℃、攪拌１５０
回転／分、通気量１０ｔ／分で６Ｔ時間通気攪拌培養し
た。得られた培養ｇｓｏｔｖｃ濾過助剤としてセライト
５４５　（米国ジョンズ・マンビル・７０ダクト・コー
ポレーション製）を１５　ｋｇ加えてｆ遇すると、Ｐ液
３０１　（１）Ｈ７，ｆ　）　ｉＥ得う：ｈり。

この培養ｐ液を１５ノの酢酸エチルで２回抽出し、３０
ｔの飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水し
、減圧下で濃縮乾固すると１．２１の油状物が得られた
。この油状物をベンゼンに溶解し、あらかじめベンゼン
で幽製したシリカゲルカラム（米国マリンクロット社製
、シリカゲル１０ｆ）に吸着させ、ベンゼンで洗浄後、
順次、ベンゼン：酢酸エチルの３：１．１：１．１：２
の混合溶媒で２Ｑｒｎｌずつ分画し展開・溶出した。ス
ピロカルディンＡＨフラクション屋６〜９に溶出され、
スピロカルディンＢはフラクションＡ１０〜１３に溶出
された。

それぞれを減圧下で濃縮乾固すると、スピロカルテイン
Ａが油状物として２６０ｍ９、スピロカルディンＢが油
状物として２３５ｍｇ得られた。得られた相スピロカル
ディンＡは再度シリカゲルカラム（１０ｍｇ）に吸着さ
せ各々６０ｄのベンゼン、クロロホルム、５％アセトン
−クロロホルムの混合溶媒で展開し、５ｍｌずつ分画し
てフラクションＡ３６まで溶出した。スピロカルディン
Ａはフラクション扁１５〜２４に溶出された。

活性分画を併せ減圧下で濃縮乾固することにより２７〜
のスピロカルディンＡが得られた。一方、得られた粗ス
ピロカルディンＢは再度シリカゲルカラム（１ｏｆ）に
吸着させ各々５Ｑｍｊのベンゼン、ベンゼン：酢酸エチ
ルの３：１．２：１．１　：１．１　：２の混合溶媒で
展開し、７ｄずつ分画してフラクション扁４３まテ溶出
した。スピロカルディンＢはフラクション屋１９〜３１
に溶出された。活性分画を併せ減圧下で濃縮乾徊するこ
とにより８０ｍｇのスピロカルディンＢが得られた。

培地組成−１ グルコース　１％ グリセリン　１％ シュクロース　１％ 生イースト　１チ 大豆粉　２％ オートミール０５％ カザミノ酸　０．５％ 炭酸カル５シウム　０，１チ ニツサンデイスホーム ＣＢ−４４２（消泡剤）　００１％ ｐＨ７，０ 培地組成−２ グルコース　２チ ラスターグンＦＫ　１％ 生イースト　０，９％ 肉エキス　０．５％ ポリペプトン　０．５チ 炭酸カルシウム　０．３％ 塩化ナトリウム　０．５％ ニラサンディスホーム ａｓ−４４２（消泡剤）　００１％ ｐＨ７，０ 実施例２ ノカルジアＢＰ、ＢＡＮＫ６４２８２株を培地組成−１
で示される培地８０−を含む５００ｄ容三角フラスコに
一白金耳接種し、２２０　ｒｐｍの回転振盪培養機によ
り２８’Ｃで９６時間培養した。この培養液２５１１１
７ｔ−培地組成−２で示される培地５００１１ｕ！を含
む２を容三角フラスコ２本に接種し、２２０ｒｐｍの回
転振盪培養機により２８℃で４８時間培養した。得られ
た培養液７５０ＩＩｄを培地組成−２で示される培地１
５ｔｔ含む３０７容ジャーファーメンタ−に接種し、２
８℃で２４時間培養した。得られた培養９１５ｔを同一
培地３００ｔｆ含む６００１容タンクに接種し、２８℃
、攪拌１００回転／分、通気量ａｏｏｚ／分で１１５時
間通気攪拌培養した。得られた培養液５ｏｏｚＶＣ濾過
助剤としてセライト５４５’ｔ１５ｋｇ加えてｆ遇する
と、ｆ液２１１０　ｔが得られた。この培養ｆ液′ｔ−
１６０ｔの酢酸エチルで２回抽出し、減圧下で濃縮乾固
すると４３９の油状物が得られた。この油状物をｎ−へ
キサンに溶解し、あらかじめｎ−ヘキサンで調製したシ
リカゲルカラム（米国マリンクロット社製、シリカゲル
２’！ｉ”Ｏｆ　）に吸着させ、各々５０ＯＮの５ｊ１
０．２０．３０゜４０．５０％アセトンを含むｎ−ヘキ
サン溶液の混合溶媒で２０−ずつ分画し展開・溶出した
。

スピロカルディンＡはフラクションＡ５４〜８５に溶出
され、スピロカルディンＢはフラクションＡ８６〜１０
０に溶出された。それぞれを減圧下で濃縮乾固するとス
ピロカルディンＡが乙６ｔ１スピロカルディンＢが４．
５ｆそれぞれ油状物として得られた。得られた粗スピロ
カルディンＡ　７．６　ｔは再度シリカゲルカラム（ｓ
ａｙ）に吸着させ各々３００１１１１／のベンゼン：酢
酸エチルの４：１．３：１．２：１．１　：１の混合溶
媒で展開し、２０Ｍ１ずつ分画して溶出した。フラクシ
ョンＡＩ４〜４４をあつめ、減圧下で濃縮乾固すると、
スピロカルディンＡ　２．４　ｔの油状物が得られた。

一方、得られた粗スピロカルディンＢ　４．１　ｆも同
様に再度シリカゲルカラム（ｓｏｆ）によるクロマトに
付した。各々３００ｄのベンゼン：酢酸エチルの３：１
．２：１゜１　：１．１　：２の混合溶媒で展開し２０
ｄずつ分画して溶出した。フラクションＡ４５〜６０を
あつめ、減圧下で濃縮乾固すると、スピロカルディン８
４７０■の油状物が得られた。得られたスピロカルディ
ンＡおよびＢを逆相クロマトグラフィー（メにり社製、
ローバー・カラム噂すクログレツプＲＰ−８（サイズＢ
））に付して更に精製した。スピロカルディンＡ２．４
ｒ’ｉ４Ｈのメタノールに溶解し、そのうち１肩ｌ″ｆ
ｔあらかじめ５Ｏｑｂメタノール水で調製したローパー
・力２ムリクログレッ１ＲＰ−ｓ　（サイズＢ）に吸着
後、屈折計を用いて溶出液の屈折率を調べながら６０％
メタノール水で展開、溶出した。スピロカルディン、Ａ
はサンプル吸着後３０分より３６分の間に溶出され、活
性分画として＠Ｑｍｌが得られた。劇に残る３ｄのサン
プルについて同様の操作を３回くりかえすと、活性分画
として合計１８０ｍが得られた。得られた活性分画より
、減圧下でメタノールを留去し、１００ｍ＋１ｊの酢酸
エチルで抽出し、抽出液を飽和食塩水で洗浄後、芒硝で
脱水し濃縮乾固することにより黄色粉末のスピロカルデ
ィンＡが１７０１９得られた。

同様に、スピロカルディンＢ　４７０１ｎＱを２　ａｔ
のメタノールに溶解しスピロカルディンＡと同一条件で
同様の操作を行った。スピロカルディンＢはサンプル吸
着後３３分より４３分の間に溶出され活性分画として１
１０　ｗＬｌが得られた。残る１ｍｌのサンプルについ
ても同様の操作をくりかえすと、活性分画として１１０
ｄが得られた。得られた活性分画より、減圧下でメタノ
ールを留去し、１００ｍの酢酸エチルで抽出し、抽出液
を飽和食塩水で洗浄後、芒硝で脱水し濃縮乾固すること
により黄色粉末のスピロカルディンＢが１９０ＩＲｇ得
られた。

本実施例において使用された培地組成−１および２は、
実施例１で使用されたものと同じである。

【図面の簡単な説明】

第１図はスピロカルディンＡの紫外線吸収スペクトルを
示し、第２図は同物質の赤−外線吸収スペクト／Ｉ／を
示し、第３図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。 第４図はスピロカルディンＢの紫外線吸収スペクトルを
示し、第５図は同物質の赤外線吸収スペクトルを示し、
第６図は同物質の核磁気共鳴スペクトルを示す。 特許出願人　三共株式会社 代理人　弁理士樫山庄治 第１頁の続き ■Ｉｎｔ、ＣＩ　、’　識別記号 ■発明者中島　睦男 ＠発明者岩藤　誠吾 庁内整理番号 ７１３８−４Ｃ 所内

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　下記の理化学的性状を有する抗生物質スピロカル
   テインＡ０ １）物質の性状：中性の淡黄色粉末。 ２）比旋光度：〔α〕甘せ５２．７°（Ｃ＋０．４８．
   　ａＨｏｌ、＞３）　分　子　式：　０２０Ｈｓｏ０６
   （高分解能マススペクトル法によシ測定） り分子量：　３６６　（ＦＤ／ＭＳ） ５）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ　”’　（弓工）
   メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１図
   に示した通り２８０　（ａｈ）　ａｍ（Ｅ　１チ１０）
   に極大吸収を示す。 ｃＩｎ ６）赤外線吸収スペクトルニジｍａｘｃＩＬ−１液膜法
   で測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に示す通シで
   ある。 Ｔ）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ：　ｐｐｍクロロホ
   ルム中、内部基準［ＴＭＳ　（テトラメチルシラン）を
   使用して測定した核磁気共鳴スペクト＃　（４００ＭＨ
   ２）　Ｉ／″ｉ第３図に示す通シである。 ８）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エ
   タノールおよびメタ ノールに可溶、水に不溶。 ９）呈色反応８過マンガン酸カリウムおよび硫酸に陽性
   。 １０）薄層クロマトグラフィー：Ｏｆ値　０．３０吸着
   剤；メルク社製シリカゲルプレート　５７１５ 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１）２、　下記
   の理化学的性状を有する抗生物質スピロカルディンＢ０ １）物質の性状：中性の淡黄色粉末。 ２）　比旋光度：　Ｃ（Ｏｆ　−３５，５’　（０，０
   ，６２、（３ＨＯ４）３）　分子式：　０２ａＨｓ２０
   ｔｒ　（高分解能マススペクトル法によシ測定） リ　分子量７３６Ｂ　（ＦＤ／ＭＳ） ５）紫外線吸収スペクトル：λｍａｘ　ｎｍ（、に’チ
   ）１σ メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは紀４図
   に示した通り２８０　（ｓｈ）　ｎ＋ｙ＋１チ （Ｅ、（、ｎ５　）に極太吸収を示す。 ６）赤外線吸収スペクトルニジｒｎａＸｃＩｎ−１液脱
   法で測定した赤外線吸収スペクトルは第５図に示す通シ
   である。 ７）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ：　ｐｐｍ重クロロ
   ホルム中、内部基準にＴＭＳ　（テトラメチルシラン）
   を使用して測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（４０ｏ
   　１１１）ｉｚ）は第６図に示す通シである。 ８）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エ
   タノールおよびメタノールに可溶、水に不溶。 ９）呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸に陽性
   。 １０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値　０．１５吸着
   剤：メルク社製シリカゲルプレート屋　５Ｔ１５ 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１）３　ノカル
   ジア属ＶＣ属するスピロカルテインＡおよびＢ生産菌を
   培養してその培養物よりスピロカルテインＡおよびＢを
   採取することよシなるスピロカルディンＡおよびＢの製
   造法。 ４、　ノカルジア属に属するスピロカルテインＡおよび
   生産菌がノカルジアｓｐ、　５ＡＮＫ　６４２８２株（
   機工研菌寄第６９８６号）である特許請求の範囲第３項
   記載の製造法。