JPS5998087A - ナルゲニシンｃ↓１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＣＰ−５７８２０と指名された新規抗生物質に
関する。その新規抗生物質は抗生物質のナルゲニシン属
の新しい一員であることが確認され、ナルゲニシンＣｔ
　（ｎａｒｇｅｎｉｃｉｎ　ｃｌ）　　と名づげられた
０ナルゲニシンＣ１はアメリカ合衆国、ジョーシア州で
採取した土壌試料から単離されて培養物Ｎ４６７−３２
と指名された新種の微生物の発酵から得られたものであ
る。その培養物Ｎ４６７−と指名される。

次に示されるナルダニシン類はすでに知られている。

さらに、米国特許第４１４８８８３号明細書およ１０２
巻、４２０３ページ（１９，８０年）；ファーレイ（Ｗ
ｈａｌｅｙ）等による第２１回抗菌性薬剤と化学療法に
関するインターサイエンス会議、シカゴ、ＩＬ　、アブ
ストラクト番号１８７．１１月４〜６日、１９８１年；
米国特許第４２２４３１４号明細書およびトーン（Ｔｏ
ｎｅ）等による第２０回抗菌性薬剤と化学療法に関する
インターサイエンス会議、ニューオリンズ、ＬＡ、アブ
ストラクト番号６２．９月２２〜２４日、１９８０年を
参照されたい。

本発明は次の化学構造式（損を有する新規抗生物質を提
供する。

化合物ｆｉｌ）はナルゲニシンＣ１と名づけられ、抗菌
剤として有用である。ナルゲニシンＣ１はノカルジア株
Ｎ４６７−３２　（ＡＴＣｏ　３９１７７）と指名され
たノカルジア属の一菌株を培養することにより得られた
。

本発明はまたナルダニシンＣ１，ナルゲニシンＣ１を含
む医薬組成物およびノカルジアｍＮ４６７−３２　（Ａ
ＴＣＣ３９１７７）の生物学的に純粋な培養物を使用し
て、哺乳動物患者の細菌感染を治療する方法を包含する
。

本発明の抗生物質、ナルゲニシンＧｌはアメリカ合衆国
、ジョーシア州で採取した土壌試料から得られて培養物
Ｈ４６７−３２と指名された新種の微生物を発酵させる
ことにより産生される。この培養物Ｎ４６７−３２はア
メリカ合衆国、コネチカット州、グロトン、ファイザー
社のリアンＨ。

フ７　ｙ　（Ｌｉａｎｇ　Ｈ，Ｈｕａｎｇ）博士により
下に記すような特性を見い出された。

培養物Ｎ４６７−３２はダラム陽性、非抗酸性であり、
また白色の空中菌糸およびクリーム色から黄色がかった
基質中菌糸をもつことで特徴づけられることが判明した
。その細胞壁にはアラビノース、ガラクトース、メンジ
アミノピメリン酸およびノカルドミコリン酸が含まれる
。

培養物Ｎ４６７−３２の接種物は、凍結乾燥したその培
養物をＡＴＯＣ番号１７２のブイヨン培地中に移植し、
そして振盪器を用いて２８℃で４日間増殖させることに
より調製された。その増殖物は遠心分離し、滅菌蒸留水
で３回洗浄し、そしてアクチノミセス隘の微生物を鑑別
するのに通常使用される培地に移植した。インキュベー
ション（保温）は２８℃においてなされ、そしてその結
果の観察はいろいろ異なる時間に行われたが最も共通し
ては１４日１に行われた。

その培養物の特性決定に使用する鑑別培地およびそれら
の組成物についての文献は次の通りであった。

■、トリプトンーＰ母母印キスブイヨン培地ＩＳＰ≠１
培地、Ｄｉｆｃｏ） ２、＠母エキスー麦芽エキス寒天培地（ＩＳＰ≠２培地
、Ｄｉｆｃｏ） ３、オートミル寒天培地（工ＳＰ−＃−３培地、Ｄｉｆ
ｃｏ） ４、無様塩−澱粉寒天培地（ＩＳＰ　＝ｆｌ−４培地、
Ｄｉｒｃｏ） ５、グリセロール−アスパラギン寒天培地（工５Ｐ４１
−５培地、Ｄｉ　ｇｃｏ　） ６、にプトンー酵母エキスー鉄奪天培地（ＩＳＰ＋６培
地、ＤｉｆｃＯ） ７、ゼ９　ｆ　ｙ　９大培地（Ｒ，Ｅ、Ｃ−ｏｒｄｏｎ
およびＪｏＭ、ＭｉｈｍによるＪｒ’、Ｂａｃｔ、　、
　７３．１５〜２７ページ、１９５７年） ８、澱粉寒天培地（同書） ９、有機硝酸ブイヨン培地（同書） １０、デキストロース硝酸ブイヨン培地（Ｓ、Ａ。

ＷａｋｓｍａｎによるＴｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔ
、ｅｓ　、　２巻、培地番号１，３２８ページ、１９６
１年、蔗糖３０９の代りにデキストロース３ｇが使われ
、寒天は除かれる） １１、バレイショーニンジン寒天培地（Ｍ、Ｐ。

ＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒによるＪｒ、”＆ｂ＊＆ｎｄ　
Ｃ１１ｎｘｃａｌ　Ｍｅｄ−＋７１．９３４〜９４４に
一ジ、１９６８年、しかし）ｚレイシフ３０ｙ、ニンジ
ン２，５Ｉおよび幕天２０．！ｌ？を使用するのみ） １２、２％常水寒天培地 １３、ツアペック（Ｃｚａｐｅｋ）−蔗糖寒天培地（Ｓ
、Ａ、ＷａｋｓｍａｎによるＴｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ。

２巻、培地番号１，３２８ページ、１９６１年）１４、
グルコース−アスパラギン寒天培地（同書、培地番号２
，３２８イージン １５、グルコース−酵母エキス寒天培地（同書、培地番
号２９，３３１′ページ） １６、エマーメン（Ｅｍｅｒｓｏｎ）　　寒天培地（同
書、培地番号２８，３３１ページ） １７、栄養寒天培地（同書、培地番号１４゜３３０ペー
ジ） １８、ベネット（Ｂｅｐｎｅｔ、ｔ）寒天培地（同書、
培地番号３０，３３１ページ） １９、−ｒ−トゝンおよびスミスのチロシン寒天培地（
Ｒ，Ｅ、ＧｃｒｄｏｎおよびＭ、Ｍ、Ｓｍ１ｔｈによる
Ｊｒ。

Ｂａｃｔ、、　６９．１４７〜１５０ページ、１９５５
年）２０、　　カゼイン寒天培地（同省） ２１、　　リンゴ酸カルシウム寒天培地（Ｓ、Ａ。

ＷａｋｓｍａｎによるＢａｃｔ、　Ｒｅｖ、　＋　２１
．１〜２９ページ、１９５７年） ２２、スキムミルク（Ｄｉｆｃｏ） ２３、セルロースの利用 （ａ）　　Ｈ，Ｌ、ＪｅｎｓｅｎによるＰｒｏｃ、　Ｌ
ｉｎｎ、　Ｓｏｃ。

Ｎ、Ｓ、Ｗ、、　　５５，２３１〜２４８ページ、１９
３０年ｌｂ）　　Ｍ、ＬｅｖｉｎｅおよびＨ，Ｗ、５ｃ
ｂｏｅｎｌｅｉｎによるＡ　Ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ｂ、１６ｄｉａ　、培地２５１
１．１９３０年 ２４、有機酸の利用（Ｒ，Ｅ、Ｇｏｒｄｏｎ　等による
工ｎｔ、Ｊｒ、Ｓｙｓ’ｔ、Ｂａｃｔ、、　２４．５４
〜６３ページ、１９７４年） ２５、炭水化物の利用および炭水化物から酸の製造（同
書） ２６、馬尿酸およびエスクリンの加水分解（同書） ２７、アテニン、ヒポキサンチン、キサンチンおよび尿
素の分解（同書） ２８、　　リソチームに対する耐性（同書）２９、温度
および５０℃での生存を研究するためＩＳＰ≠２培地に
ココナツツミルク５０獣を添加した培地。

培養物Ｎ４６７−３２は次のような特性を示したが、そ
の除色は常用語で示し、またカラー　二％　：−マ：　
ニアＡ／　　（Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　ｋｎｕａ
ｌ）第４版からのカラーチップ（ｃｏｌｏｒ　ｃｈｊｐ
ｓ）に関連させて示す。

全細胞および糖類分析のために使用した方法はＢ、Ｂｅ
ｃｋｅｒ等によるＡｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　
１２．４２１〜４２３ページ、１９６４年およびＭ、Ｐ
、ＬｅｃｂｅｖａｌｉｅｒによるＪ、Ｌａｂ、Ｃ１１ｎ
、Ｍｅｄ、、７１．９３４〜９４４−＜　−ジ、１９６
８年に記載されたものであった。Ｍ、Ｐ。

Ｌ＋６ｃｈｐｖｐ＋１ｉｅｒ等によるＪ、Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ、、　１０５．３１３〜３１８ページ、１９７１
年に記載された方法を使用して、高圧滅菌した湿った菌
糸体約５４ｇがミコレート分析のために使用された。比
較するため許第４１４８８８３号明細書、４月１０日、
１９７９年）、Ｎ、バラヒナエ　（Ｎ、ｐａｒａｆｆｉ
ｎａｐ）　（Ｊｅｎｓｅｎ）ＷａｋｓｍａｎおよびＨｅ
ｎｒｉｃｉ　ＡＴＣＣ２１５０９、およびＮ、オチチジ
スーカビアルム（Ｎ、Ｏｔｉｔｉｄｉｓ−ｃａｖｉａｒ
ｕｍ）Ｓｎｉｊｄｅｒｓ　ＡＴＣＣ１４６２９が使用さ
れた。

リーム色ないし黄かっ色（２ｅａ、　　２ｇｃに近い）
、盛り上っている、しわがあるかもしくはわずかにでこ
ぼこしている、白色の気菌糸あり：裏面は黄色がかつて
いる（２ｉｃ）　；可溶性色素なし。

朋、灰白色、薄い、滑らか、気菌糸は短くて灰白色；裏
面は灰白色；可溶性色素なし。

いかもしくは中程度、灰白色ないしクリーム色（１１／
２ｃａ）　、薄い、滑らか、気菌糸はクリーム色、裏面
は表面と同じ；可溶性色素なし。

クリーム色ないし黄色がかつている（２ｃａ、　２ｅａ
）、盛り上っている、滑らかないししわが寄っている、
気菌糸は白色；裏面は黄色がかつている（２ｅａＬ可溶
性色素なし。

は中程度、クリーム色（１１／　２ｃａ）、薄い、滑ら
か、気菌糸はクリーム色；裏面はクリーム色；可溶性色
素なし。

グルコース−酵母エキス寒天培地−生長良好、黄色がか
つている（　２ｅａ）、盛り上っている、しわが寄って
いる、気菌糸はないかもしくはまばらにあって白色をし
ている；裏面は黄色がかつている（２ｇａ）　：可溶性
色素なし。

エマーメン寒天培地−生長中程度ないし良好、黄色がか
つている（　２ｅａに近い）、中程度に盛り上っている
、わずかにしわが寄っている、気菌糸は短（てまばらで
あり白色をしている；裏面は黄色がかつている（２ｅａ
、　２ｇａ）　を可溶性色素なし。

栄養寒天培地−生長中程度、クリーム色（１１／２ｃａ
、２ｃａ）　ｓ　ｌ’３ｔいかもしくはわずかに盛り上
っている、滑らか、気菌糸は短くてまばらであり白色を
している；裏面はクリーム色（２ｃａ）　　；　可溶性
色素なし。

（２ｅａ、２ｇａ）、盛り上っている、しわが寄ってい
る、気菌糸は白色：裏面はう丁く黄色がかつている（２
ｇａ）　ｐ可溶性色素は薄く黄色がかつている（２ｅａ
）。

ゴービンおよびスミスのチロシン寒天培地−生長中程度
ないし良好、灰色がかったりＩＪ−ム色（２ｅｃに近い
）、中程度に盛り上っている、滑らかもしくはわずかに
しわが寄っている、気菌糸はないかあるいはまばらであ
って白色をしている；裏面は黄色がかつている（２ｅａ
）　；可溶性色素は暗かっ色（４ｐｇ）。

リンゴ酸カルシウム寒天培地−生長乏しい、クリーム色
（１１／２ｃａ）　、薄い、滑らか、気菌糸はクリーム
色：裏面は無色：可溶性色素なし。

らか、気困糸は白色：裏面は白色ないしクリーム色（１
１／２ｃａ）　；可溶性色素なし。

ゼラチン寒天培地−生長良好、クリーム色（１１／２ｃ
ａ、２ｃａ）　、盛り土っている、清らかないしわずか
にしわが寄っている、気菌糸は白色；裏面はクリーム色
（２ｃａ）　；可溶性色素なし。

澱粉寒天培地−生長良好、クリーム色（２ｃａ）、中程
度に盛り上っている、滑らかないしわずかにしわが寄っ
ている、気菌糸は白色；裏面はクリーム色（２ｃａ）　
；可溶性色素なし。

ジャガイモ−ニンジン寒天培地−生長乏しいかもしくは
中程度、クリーム色（１１／２ｃａ）、薄い、滑らか、
複数のコロニーが孤立して発生するかも知れない、気菌
糸はクリーム色；裏面は無色ないしクリーム色；可溶性
色素なし。

常水寒天培地−生長乏しい、無色ないしうすいクリーム
色（１１／２ｃａ）、薄い、滑らか、気菌糸ないしもし
くはまばう；裏面は無色；可溶性色素なし。

培養物Ｎ４６７−３２をツアはツクー蔗糖ガ天培地に接
種後１５日自家で毎日その培養物について形態学的観察
を行った。基質中菌糸は５日のインキュベーション後ば
らばらにこわれて杆状の細胞になり始めた。１５日後、
気菌糸はまばらで白色、かつ枝分れしていた；気菌糸お
よび基質菌糸の双方は時々ばらばらにこわれて棒状もし
くは長い棒状になり、その棒状物は走査電子顕微鏡で観
察した時２〜５（またはこれより長い）Ｘｏ、６〜０．
８マイクロメーターの大きさでありかつ滑らかであった
。

培養物Ｎ４６７−３２は次のような生化学的性状を示し
た。

１、ダラム陽性：非抗酸性；メラニン産生陰性：硫化水
素の産生陽性：硝酸還元陰性；ゼラチンの液化陰性；エ
スクリンおよび馬尿酸の加水分解陽性；澱粉の加水分解
陰性；キザンチン、アデニンおよびカゼインの分解陰性
：チロシンおよび尿素の分解陽性；リンゴ酸カルシウム
の利用可変性；ヒポキサンチンの分解可変性；ジエンセ
ン（Ｊｅｎｓｅｎ）もしくはレビｙ　（Ｌｅｖｉｎｅ）
　　およびショーエンライン（Ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎ）
　　のセルロースブイヨン培地での増殖なし：ミルク上
での凝結およびペプトン化なし；リソチーム耐性陽性。

げ、有機酸の利用：　酢酸、乳酸、リンゴ酸、プロ上０
オン酸、ピルビン酸およびコハク酸は利用された；安息
香酸、クエン酸、デキストリン、ムチン酸、修酸、フェ
ノールおよび酒石酸は利用されなかった。

ラクトース、グルコース、グリセロール、イノ−／）−
ル、マンニトール、ラフィノース、リボース、チロシン
、澱粉、蔗糖およびトレハロースからは酸が産生された
；アドニトール、アラビノース、セロビオース、ズルシ
トール、エリ）　ＩＪ　）−ル、乳糖、マルトース、マ
ンノース、メレチトース、メリビオース、アルファ〜メ
チルーｄ−グルコシド、ラムノース、ソルビトール、ソ
ルボースおよびキシロースからは酸が産生されなかった
。

ス、ガラクトース、グリセロール、イノシトール、マル
トース、マンニトール、ラフィノース、リボース、チロ
シン、澱粉、蔗糖およびトレハロースは利用された；マ
ンノース、メリビオース、アルファーメチル−ｄ−グル
コシド、ソルビトール、ソルボースおよびキシロースは
利用されたのかどうかわからなかった；アドニトール、
アラビノース、セロビオース、ズルシトール、エリトリ
ト−ル、乳糖、メレチトースおよびラムノースは利用さ
れなかった。

培養物Ｎ４６７−３２の生長速度に対する温度の関係は
次の通りであった：２８℃、優れた生長：２１°０、良
好な生長；３７℃および４５℃、生長せず。その培養物
は５０℃で８時間生存する。

培養物Ｎ４６７−３２の細胞壁にはメンジアミノピメリ
ン酸、アラビノース、ガラクトース、グルコースおよび
マンノースが含まれている。

ミコレート分析はそのミコレート類がノカルト９ミコレ
ート型のものであることを示した。

その培養物Ｎ４６７−３２は形態学的性状およム　に関
係がある。その培養物Ｎ４６７−３２はクリーム色ない
し黄色がかった基質中菌糸；硫化水素の産生；硝酸還元
陰性；ゼラチンの液化陰性；馬尿酸の加水分解陽性；た
ゼインの分解陰性；クエン酸の利用陰性；およびガラク
トース、マンニトールならびにラフィノースから酸産生
の点でＮ・アルゲンチネンシスと異なっている。その培
を物Ｎ４６７−３２はチロシンおよび尿素の分解能力；
硝酸還元陰性；馬尿酸の加水分解陽性；イノシトールお
よびラフィノースから酸の産生：およびソルビトールか
らの酸の産生能力σ】点で−Ｎ２パラヒナエと異なって
いる。Ｎ、オチチジスー力ビアルムと比較した場合、そ
の培養物Ｎ４６７−３２はチロシンの分解陽性；キサン
チンおよび澱粉の分解陰性；硝酸還元陰性；ガラクトー
スおよびラフィノースから酸の産生；およびマンノース
からの酸の産生能力の点で相違している。もっと多（の
菌株が単離されるまで培養物Ｎ４６７−３２はノカルジ
ア属の一員と見なされ、そしてノカルジア株と指名され
る。培養物Ｎ４６７−３２はアメリカ合衆国、メリーラ
ント９州、ロックヒル、パークロニン　ト９ライプ１２
３０１のアメリカンタイプ　カルチャー　コレクション
（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１
１ｅｃｔｉｏｎ）に寄託番号ＡＴＣＣ３９１７７として
１９８２年８月１６日に寄託された。

本発明の抗生物質、ナルゲニシンＣ１はノヵルか株（Ａ
ＴＣＣ３９１７７）　　を発酵させて、その発酵ブイヨ
ン培地からナルゲニシンＣ１を抽出゛することにより得
られる。ナルゲニシンｃｉはクロマトグラフ法や向流分
配法のような一般的な方法を用いてその抽出物から分離
される。

ノカルジア株（ＡＴＣＣ３９１７７）の培養物は糖、澱
粉、グリセロールのような炭水化物源；大豆粕粉、カザ
ミノ酸、酵母エキスのような有機窒素源；穀類可溶物、
魚粉、綿実粕粉のような生長物質；鉄、コバルト、鋼、
亜鉛などの微量元素を含む無機塩；および緩衝剤として
の炭酸カルシウムまたは燐酸カルシウムからなる培地で
振盪攪拌および好気的深部培養条件下２４℃〜３６℃で
生長することができる。

接種物はノカルジア株（ＡＴＣＣ３９１７７）培養物を
接種した斜面培養基もしくはルー（Ｒｏｕｘ）　　のボ
トルから増殖期の細胞をかきとることにより得られる。

斜面培養基およびルーボトルでの初期生長に適した固形
培地はＡＴＣＣ培地番号１７２のものである。

ＡＴＣＣ培地扁１７２ グルコース　　　　　　　　　　　　　１０可溶性澱粉
　　　　　　　　　　　２０酵母エキス　　　　　　　
　　　　　　５ＮＺ　７ミｙ　Ａ　（Ｈｕｍｋｏ）　’
　　　　　　　　　５炭酸カルシウム　　　　　　　　
　　　１蒸留水　　　　　　　　　　全量１０００成Ｋ
ＯＨでｐＨ７，０に修正 添加された寒天　　　　　　　　　　２０※カゼインの
精製した酵素消化物 斜面培養基からの増殖期細胞は振盪フラスコまたは接種
物タンクのいずれかに接種するのに使用され、また別の
方法としては、その接種物タンクは振盪フラスコから接
種される。振盪フラスコでの生長は一般に２日ないし４
日で最高に達するだろうし、一方接種物タンクでの生長
は通常１自生ないし３日で最も有利な時期になるだろう
。発酵槽は完全に無菌の状態でその接種物フラスコまた
はタンクから増殖期のブイヨン培地を接種され、そして
２日ないし５日の間発酵される。通気性は振盪フラスコ
では振盪器上で攪拌することにより維持され、またタン
クでは無菌の空気を培地１容量あたり空気０．５〜２容
量／分の速度で散布器を通すことにより維持される。攪
拌速度は使用する攪拌器の型に依存している。振盪フラ
スコは通常１５０〜２００サイクル／分で運転し、発酵
槽は３００〜６００回／分で回転する。無菌状態は全期
間を通して維持される。温度は２８℃と３６℃の間に調
節する。発酵している間の発泡は精製大豆油のような滅
菌消泡剤で制御することができ、また他の適当な消泡剤
が接種後その組成中にかつ必要であるごとく無菌状態で
添加される。

振盪フラスコは次の培地を使用して作られる。

１７２Ｍ グルコース　　　　　　　　　　　　１０可溶性澱粉　
　　　　　　　　　　　２０酵母エキス　ＢＹＦ３ｏｏ
　　　　　　　　５ＮＺ　７ミンＹＴＴ　（Ｈｕｍｋｏ
）　’　　　　　　　　５燐酸水素二カリウム　　　　
　　　　　０．５肉粉　　　　　　　５ 塩化コバルト　　　　　　　　　　　　０．００２炭酸
カルシウム　　　　　　　　　　　４常　水　　　　　
　　　　　　　　　全量　１ｅｐＨ７，１〜７．２に修
正 欺カゼインの精製した酵素消化物 振盪フラスコ３００＋ｎＩ３あたり上記培地４０ｒ／Ｌ
ｌを分配し、その後１２０℃および１５　ｐ−５−ｉｓ
で３０分間滅菌する。その培地を冷却した後、その培地
にＡＴＣＣ１７２の寒天培地で増殖させたノヵル２１休
（ＡＴＣＣ３９１７７）の斜面培養物から得た増殖期細
胞ｍｆｆ１１ｍを接種する。そのフラスコは１．５〜２
．５インチの移動距離を有する回転振盪器を用いて１５
０〜２００サイクル／分−（ＣＰＭ）で３〜４日間２８
℃において振盪し、その後これは次の培地の一方を２ｅ
含有する４リットルの発酵槽に接種するのに使用される
。

ＡＲ−１ 成　分　　　　　　　　　　　　　ダラム／リットルセ
レロース　　　　　　　　　　　　１０デキストリン７
００　　　　　　　　２０酵母エキス　　　　　　　　
　　　　５ポリペプトン　　　　　　　　　　５ 燐酸水素二カリウム　　　　　　　　　０．５牛肉エキ
ス　　　　　　　　　　　　　５・０塩化コバルト　　
　　　　　　　　　　０．００２炭酸カルシウム　　　
　　　　　　　４水　　　　　　　　　　　　　全量　
１ｅｐＨＧ、７〜７．０に修正 ＬＫ 成　分　　　　　　　　　　　　　　ダラム／リットル
セレロース　　　　　　　　　　　　　１０大豆粉　　
　　　　　　　　　　　　１０トウモロコシデシプン　
　　　　　　　　　５ＮＺ　７ミｙ　ＹＴＴ（Ｈｕｍｋ
ｏ）　ａ″　　　　　１０燐酸水素二カリウム　　　　
　　　　　１．０堪化コバルト　　　　　　　　　　　
　０．００２水　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　全Ｔｉ１ｅｐＨ６，７〜７．０に修正 ※ カゼインの精製した酵素消化物 発酵槽にＬ６１、シリコーン消泡剤を添加して密閉し、
１２０℃および１５　ｐ、ｓ、ｉで４５分間滅菌する。

その発酵槽に１個（２％）もしくは２個（４％）の接種
物フラスコを接種して、１７００回／分で撹拌し、かつ
培地１容量あたり空気１容　　　、量７分の速度でブイ
ヨン培地中に空気を散布させて、３０℃で２日ないし５
日の間発酵を行う。発酵が完了した時点（黄色ブトつ球
菌（ｓ、ａｕｒｅｕｓ）に対する抗生物質のディスク検
定に基づく）でその発酵を中止し、ハイフロ（Ｈｙｆｌ
ｏ、商標名）ス−パーセルまたはセライトのような濾過
助剤を用いてそのままのｐＨで濾過するか、もしくは全
培地をメチルイソブチルケトンまたはｎ−メタノールの
ような溶剤を／３〜／２　容量用いてそのままのｐＨで
抽出する。溶剤は吸引（泡立つ）により水性相から分離
して、粘稠な油になるまで真空濃縮する。培地から分離
した菌糸体のケーキは捨てられる。

大規模発酵へのスケールアップはＭ１７２Ｍ培地を０．
７４含有する振盪フラスコをＡＭすることにより実施さ
れる。その振盪フラスコ接種物は２８℃で３〜４日間発
酵され、２つのサイト９−アーム付きボルトに集めて、
その後ＪＬＫ培地を２５ガロン含有する５０ガロンの発
酵槽に接柚するのに使用される。約１ｅの接種物がそれ
ぞれのタンクで使用される。発酵槽は３日経過後に収穫
する（２５ガロン）。全培地はそのま・計のｐＨでメチ
ルイソブチルケトンレ、容量を用いて抽出し、ポドビエ
ルニアク（Ｐｏｄｂｉｅｌｎｉａｃｋ）　　抽出器で分
離し、溶剤を真空濃縮して油状物を得る。

ノカルジア株（ＡＴＣＣ３９１７７）の発酵からの培地
およびその後の回収流の生物活性はミクロコａｕｒｅｕ
ｓ、　ＡＴＣＣ６５３８）の感受性株を使用することに
より追跡することができる。培地および回収流中の成分
は次の溶剤系：クロロホルム／アセトン３：１の混合溶
剤またはクロロホルム／メタノール９：１の混合浴剤で
のアナルテク（Ａｎａｌ　ｔｅ　ｃｈ）シリカゲルＧＦ
　プレートを使用し、２５４ナノメートルの光線下で観
察することにより視覚化することができ、また上記の黄
色ノドつ球菌もしくは其。ルテウスのいずれかを接種し
た寒天培地をそのプレートにはり合わせ、３７℃で１６
時間インキュヘーションを行ってナルゲニシンＧ１　を
視覚化することができる。

ナルグニシンＣ１は抗菌活性を示し、特に黄色ノド９つ
球菌のようなダラム陽性菌に対して活性を示す。この抗
菌活性は標準的な方法に従って種々の微生物に対するそ
の化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）を測定することによ
り証明される。こうしてそのＭＩＣは［抗生物質の感受
性試験に関する国際共同研究Ｊ　（ｔｈｅ　Ｉｎｔｓｒ
ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅＳｔｕ
ｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　５ｅｎｓｉｔｉｖ
ｉｔｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ。

セクションＢ、６４〜６８ページ、１９７１年）で推せ
んされた方法により測定することができ、それは脳心臓
浸出流（ＢＨＩ）寒天培地および接種反後装置を使用す
る。−晩増殖させた試験管は標準接種物（約０．００２
−中２０，０００〜１０，０００細胞が寒天表面に置か
れるニー皿あたりＢＨＩ寒天培地２０祷）として使用す
るために１００倍に希釈する。初期濃度が５０　ｍｃｇ
／ｍｅである試験化合物の２倍希釈物を１２本使用する
。３７℃で１８時間培養後にその平板を観察する場合、
単一コロニーのものは顧慮しない。試験微生物の感受性
（ＭＩＧ）は肉眼で判断した時完全に生長を阻止するこ
とができるその化合物の最低濃度として解釈される。

ナルゲニシンＣＩはその抗菌活性のために哨乳動物（た
とえばト、ト）の細菌感染を治療するのに適しており、
それは経口的もしくは非経口市に投与される。一般に、
その抗生物質は治療を受ける患者の感染のワ：「類およ
び感染の苦しさの共合ならびに患者自身の体重に依存し
て、経口的には１日０．５〜１ｇの投与量、また非経口
的注射では１日１００〜５００１ｎ９を投与するのが最
も望ましい。

ナルゲニシンＣ１は単独でもしくは製剤上許容される担
体と組合せて投与され、そのような投与は１回の服用量
および多数回の服用量の双方で行われる。

経口投与のために、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ムおよび燐酸二カルシウムのような賦形剤；澱粉、アル
ギン酸およびある種の複合珪酸塩のような崩壊剤；およ
びポリビニルピロリドン、蔗糖、ゼラチンおよびアラビ
アゴムのような結合剤を含有する錠剤が使用される。さ
らに、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル値酸ナトリ
ウムおよびタルクのような滑剤もまた錠剤化の目的のた
めに有用である。同様な種類の固体組成物はまた軟質お
よび硬質−充填ゼラチンカプセルの充填剤として使用さ
れ、好ましい材料には乳糖や高分子量のポリエチレング
リコール類が含まれる。水性懸濁剤および／またはエリ
キシル剤が経口投与用に望まれる場合にはその中の必須
活性成分は水、エタノール、プロピレングリコール、グ
リセロールおよびそれらの種々の混合物のような希釈剤
と共に、種々の甘味剤または風味剤、着色物質または染
料、および所望なら乳化剤および／または懸濁化剤と組
合わされる。

非経口投与のためにはゴマ油、落花生油もしくは水性プ
ロピレングリコール中にナルゲニシンＣ１を含有する溶
液剤が使用される。

実施例 ナルゲニシンＣ１の分離 ノカルジア株（ＡＴＣＣ３９１７７）の発酵からの全ブ
イヨン培地（約２５ガロン）を発酵時のままのｐＨでメ
チルイソグチルケトン（約８ガロン）を用いて抽出した
。その有機抽出物を濃縮し、続いて残渣をヘプタンで細
かくすりつぶして油状物５７９を得た。

その油状物をヘプタン１．Ｏｅの存在下の２５０１のシ
リカゲル６０に分散して、その後５００ｇのシリカゲル
を被覆した２、０リツトルの半融ガラス濾過器に加えた
。そのシリカゲルはへブタンｔ、ｏｅ、ヘプタン：クロ
ロホルム５０：５０（７）Ａ合ｓ剤１．０　ｅ、り四ロ
ホルム４．０ｇ、クロロホルム：酢酸エチル７５：２５
の混合浴剤１．Ｏｔ１？、クロロホルム：酢酸エチル５
０：５０の混合浴剤１．Ｏｇ、クロロホルム：酢酸エチ
ル２５ニア５の混合溶剤１．Ｏｌｌ、それから酢酸エチ
ル４．Ｏｅで順次洗浄した。この一連の精製工程は全て
薄層クロマトグラフ法および生物検定法で監視した。−
り−／ξミーディスク円板状の紙）を既知濃度の抗生物
質溶液（標準品）および未知の溶液に浸し、それらのデ
ィスクは乾燥して黄色ブトつ球菌（ＡＴＣＣ；６５３８
）を接種した寒天培地上に置いた。その寒天培地は３７
℃で一晩インキュベーションを行い、そして阻止帯を比
較した。抗生物質活性がより強い部分ケクロロホルム：
酢酸エチル５０：５０，２５ニア５のそれぞれの混合浴
剤中および酢酸エチルの最初の２リツトル中に見い出さ
れた。これらの浴。

離液を合わせて濃縮し、酢酸エチル５００１ｒＬｅに溶
解し、その後０．５Ｍの第一燐酸ナトリウム次いで０．
５Ｍの第二燐酸ナトリウム緩衝液で抽出（７ｖ）し、最
後に飽和塩化ナトリウム水浴液で抽出した。

酢酸エチルは活性炭１０ｇと共に室温で攪拌し、濾過し
、真空濃縮して灰白色の固体１４ｇを得た。

次にこの固体物質を含有する酢酸エチル浴液をヘプタレ
中で製したシリカゲル６００カラム（直径１インチｘｇ
６ｃＩｎ）の頂部に加えた。１００％へブタンから１０
０％酢酸エチルまでの濃度勾配を有する溶離液を流して
２０ｃｃづつの留出分をカラムから集めた。このカラム
からの適当な留出分を合わせ、その結果生じた油状物を
クロロホルムに溶解して、ヘプタン中に作製した第二の
シリカゲル６０カラム（直径１インチＸ９６ｃｍ）に加
えた。クロロホルムから出発してクロロホルム：アセト
ン３；１までの濃度勾配を有する溶離液な流した０２０
幅づつの留出分を合わせ、蒸発させて油状物を得た。−
晩室温に放置した後白色結晶８００１ｎ９を集めた。そ
の結晶は４０〜５０℃で約４時間高真空下に乾燥した。

ナルゲニシンＣ１は次のような性状を示した。

２．８８．３．００．３．４０．５．７８．５．９０．
６．４２．６．９０．７．１５．７．４０．７．６８．
７．８２．８，０２．８．３５．８．５０．８．９０．
９．００．９．３０．９，５０．９．９０．１０．４０
．１１．４０および１３．４０ミクロンに顕著な吸収。

溶解性：　メタノール、エタノチル、クロロホルム、ジ
クロロメタン、アセトン、メチルイソブチルケトンおよ
び酢酸エチルに溶解する；ヘプタンおよび水に溶解しな
い。

なかった。

公序式：　　ＣａｏＨ４ｔＮＯｔｏ（Ｍ”５７５）元素
分析（クロロホルム／アセトンから再結晶後）：０３０
Ｈ４１ＮＯｌ　ｏ−ＣＨＣ；ｅ３としての計算値　　　
実測値　実測値 炭素（％）　　　　　　５３．５６　　　　　５３．５
７　５３．６８水素（％）　　　　　　６，０９　　　
　　６．０１　６．１０窒素（％）　　　　　　２．０
１　　　　　２．１６　２．０７特許出願人　　ファイ
ザー・インコーホレーテッド第１頁の続き Ｃ１２Ｒ１／３６５）　　　　　　　　　６７６０−４
Ｂ■発　明　者　ウオルター・パトリック・カレン アメリカ合衆国コネチカット州 イースト・ライム・ヘリテイジ ・ロード１７ ■発　明　者　柴用理一部 半田市桐ケ丘３丁目１４番１２号 ０発　明　者　刀根淳祐 知多市佐布理字東金久曾９丁目５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）次式（［１で示される化合物であるナルゲニシン
   Ｃ１゜ （２）式（Ｉｔ）で示される化合物であるナルゲニシン
   Ｃ１からなるヒトを含む曜乳動物の細菌感染治療剤。 ＣＨ３０−ＧＨ２ Ｈ−ＣＩＩ’ＯＨ ３９１７７）　　を炭水化物源および有機窒素源を含む
   栄養培地で振盪し通気しなから好気的深部培養条件下に
   培養して式（…）で示される化合物を産生させ、続いて
   、任意にその化合物を培地から分離することからなる、
   式［１１１で示される化合物であるナルグニシンＣ１の
   製造方法。 ’３９１７７）　　の生物学的に純粋な培養物。 （５）凍結乾燥した形をしている特許請求の範囲第４項
   に記載の培養物。