JPS5953835B2 - ビフイズス菌用選択的糖源 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はビフィズス菌用の選択的糖源に関する。

母乳栄養児は人工栄養児に比べて病気に対する抵抗性が
一般に強いことが知られている。

また、母乳栄養児の腸内がビフィズス・フローラを形成
しているのに対し、人工栄養児ではビフィズス菌が源少
したり、あるいは他の菌が増加していることが知られて
いる。

また、ビフィズス菌には試験管内および動物実験で感染
防御作用のあることも報告されている。

そこで゛、ヒトの腸内をビフィズス・フローラにする研
究が行われて来たが、その結果ビフィズス菌の生育にと
って腸内でも最も要求されるものはエネルギー源として
の糖であろうと考えられるに至り、その方面の研究が行
われている。

腸内でビフィズス菌が利用しうる糖源は、途中で消化さ
れずに回腸や大腸に到達すること、ビフィズス菌以外の
菌が利用しないこと、ビフィズス菌がその糖を良好に利
用することの諸条件を満す必要がある。

そのような糖源としてラクツロースやラフィノースが提
案されているが、ラクツロースはビフィズス菌以外の腸
内細菌、たとえば大腸菌にも利用されるため用量が多少
多くなると下痢を起す欠点がある。

また、ラフィノースについてマウスを用いて実験したと
ころ、経口投与したヒト由来のビフィズス・インファン
テイスがラフィノース投与期間中はかなり増殖するが、
同時に大腸菌の増殖も認められ、必ずしも満足すべきも
のではなかった。

本発明者らはさらにすぐれた糖源を求めて研究を重ねた
結果、本発明に到達した。

本発明は、Ｇ耐β１−４Ｇｌ’ｃα１−２βＦｒｕより
なるビフィズス菌用選択的糖源である。

本発明ノＧａｌβ１−４ＧＩＣα１−２βＦｒｕ （以
下ラクトシュクロースと略称）は乳糖とショ糖の溶液に
レバンシュクラーゼを作用させること、こよって容易に
得ることができる。

反応は約２５−３７℃、好ましくは３０℃前後、ｌＨ３
，５〜７．５、好ましくは但約６で行われる。

かくして安価な糖を用いて収率よくラクトシュクロース
を得ることができる。

本発明のラクトシュクロースは以下に示すようにビフィ
ズス菌を選択的に増殖させる性質を有する。

ビフィズス菌の選択的増殖試験 ラクトシュクロースまたは他の各種糖類を添加した培地
を用いて、ビフィズス菌、大腸菌、ラクトバチルス、ア
シドフィルスおよびストレプトコッカス・フェカリスを
培養し各画の増殖性を調べた。

ビフィズス菌としてはビフィドバクテリウム・インファ
ンテイス５−１２および同・ロングムＥ１４４ｂを用い
た。

その基礎培地は下記の培地■である。

培地Ｉ カザミノ酸（Ｄｉｆｃｏ）
８．０酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ）
４．８ポリペプトン（大玉栄養Ｋ）
３．２システイン
０．４ツイーン８０
１．０ＮａＣ１１，５ 水を加えて５００ｍ１とし、但７．０に調整する。

大腸菌としてはニジエリシア・コリに−１２を、その基
礎培地としては下記の培地ＩＩを用いた。

培地ＩＩ ＫＨ２ＰＯ４１３，６ （ＮＨ４）２ＳＯ４２，０ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ｏ、２ ＦｅＳＯ４−７Ｈ２０５ｘｌｏ ’ 水を加えて５００ｍ１とし、Ｉｆ（７，３に調整する。

ラクトバチルス・アシドフィルスＩＡＭ１０８４および
゛ストレプトコッカス・フェカリスＩＡＭ１００６７の
基礎培地としてはそれぞれ下記の培地ＩＩＩおよびＩＶ
を用いた。

培地ＩＩＩ プロテオース・ペプトンｐＨ３１０ トリブチカーゼ・ペプトン ５酵母エ
キス（Ｄｉｆｃｏ） ３ツイ
ーン８０１ システィン ０．２肝臓
エキス※ ５００ｍ１ミネラ
ル混合物 ５ｍ１ＩＨ６，５
に調整する。

（※肝臓末５．５ｇを水５００ｍ１で抽出したもの）培
地ＩＶ トリブチカーゼ・ペプトン ５．０Ｎａ
２ＨＰＯ４３，５ ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２０２，５ 水を加えて５００ｍ１とし、但７．０に調整する。

高圧蒸気滅菌した上記の培地１ｍｌに、無菌濾過した各
種糖類溶液（２ｍｇ／ｍｌ） １ ｍｌを加え、それ
ぞれの培地に対応する菌を１０４〜１０５Ｃｅｌｌ接種
し、ビフィズス菌の場合はＮ２：０゜＝９：１の嫌気条
件下で４日間、他は好気条件下で２日間、それぞれ３７
℃で培養したのち、６５０ｎｍにおける吸光度により菌
の増殖を判定した。

その結果を第１表に示す。

同表から明らかなようにラクトシュクロースはビフィズ
ス菌に対してラフィノースと同様の選択性を示した。

次いで、種々の腸内細菌についてラクトシュクロースと
ラフィノースの利用性を調べたところ、一部の細菌につ
いてはラクトシュクロースはラフィノースよりも利用さ
れ難いことが判った（第２表）。

以上から明らかなようにラクトシュクロースはラフィノ
ースよりもビフィズス菌に対する選択性においてや・勝
っているのみならず、容易に入手できる点でも優れてい
る。

上記のように、ラクトシュクロースはビフィズス菌の選
択的糖源であるため、それ自体をまたはビフィズス菌と
併用して、下痢症や便秘症に対する整腸剤や血中アンモ
ニア低下剤として使用できるばかりでなく、僅かに甘味
を有し、吸収され難いからイ氏カロリー食品用としても
使用で゛きる。

以下ラクトシュクロースの製造を実施例の形で示す。

実施例 Ｇａｌβ１−４ＧＩＣα１−２βＦｒｕノ製造ｉ 乳糖
２０ｇとショ糖１ｇを８０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液（ＩＨ６
，Ｏ）に溶解して７０ｍ１とした。

これに枯草菌由来のレバンシュクラーゼ６単位（１単位
は３０℃、但７．０で１分間に１μＭのグルコースをシ
ョ糖から遊離する酵素活性を示す）を加えて３０℃に４
８時１間放置した。

次いで反応液を冷却して析出するラフ１〜−スの沈澱を
瀘去し、Ｐ液を活性炭（和光純薬製クロマ１−グラフィ
用活性炭を塩酸処蝉したもの）のカラム（１，８Ｘ ３
０ｃｍ）に加えた。

次いで蒸留水で功ラムをよく洗浄して単糖を洗い流した
の１ち、エタノール濃度を０〜５０％の範囲で順次高く
した溶出液１ 、０００ｍ１で溶出した。

目的とする三糖はエタノール濃度的２０％の溶出分画に
含まれていた。

この分画を分取し、濃縮し、セファテ゛ツクスＧ−１５
を用いたゲル許過でさらに精製し、目的物の分画を採り
、凍結乾燥した。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ｌ Ｇａｌβ１−４ＧＩＣα１−２βＦｒｕよりなる
   ビフィズス菌用選択的糖源