JPS5950318B2 - 新規抗生物質ｓｙ−２物質 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＳＹ−２物質、その製法及びＳＹ
−２物質を有効成分とするコクシジウム症予防治療剤に
関する。

先に本発明者らは、放線菌はストレプトミセス属に分類
されるストレプトミセス・アルプス・ワックスマン・ア
ンド・ペンリッチ第８０６１４号菌（微工研菌寄第４１
９号）が、その培養中に抗菌活性を示す物質を産生まる
ことを見出し、その培養物からサリノマイシン（特開昭
４７−２５３９２号明細書参照）及びＳＹ−２物質（特
開昭５１−８６１９１号明細書参照）を単離した。

本発明者らは更に研究を進めた結果、同じ培養物中にザ
リノマイシン及びＳＹ−１物質とは異なる新規な活性物
質が存在することを発見し、これを単離してＳＹ−２物
質と命名するとともに、本物質が抗微生物活性をするば
かりでなくコクシジウム症の予防及び治療に顕著な効果
を有することを見出した。

本発明はこの知見に基づくもので、新規抗生物物質ＳＹ
−２物質、並びにＳＹ−２物質を生産する能力を有する
ストレプトミセス属菌を溶養し、その培養物からＳＹ−
２物質を採取することを特徴とする、ＳＹ−２の製法で
ある。

更に本発明は、抗生物質ＳＹ−２物質を有効成分とする
コクシジウム症予防治療剤である。ＳＹ−２物質の物性
は後記に示すとおりである。ＳＹ−２物質の生産に使用
されるストレプトミセス・アルプス第８０６１４号菌（
微工研菌寄第４１９号）の菌学的性質は、特願昭５０−
９６９８号（特開昭５１−８６１９１号）明細書に詳記
されている。

本発明によりＳＹ−２物質を得るには、普通に知られて
いる放線菌の培養方法を用いることがでぎるが、工業的
には通気撹拌培養が有利である。

培養温度は２５〜３５℃が適当である。培地としては放
線菌培養に一般に用いられるもの、すなわち炭素源、窒
素源、無機塩類、有機微量成分、消泡剤などを適宜組合
せたものを使用することができる。培養時間は通常７２
〜１６８時間である。培養混合物からＳＹ−２物質の採
取は、ＳＹ−２物質の理化学的性質を利用して行なわれ
る。すなわち本物質が弱酸性脂溶性物質であることを利
用して、各種有機溶媒による抽出法、転溶法、各種吸着
剤によるクロマトグラフイ一などを適宜組合せて用いる
ことにより目的物質を純粋な結晶として得ることができ
る。ＳＹ− ２物質は菌体及び沢液の双方に含まれるの
で、たとえば培養物にメタノール、エタノール、アセト
ン等の水と混和し易い溶媒を加えて抽出し、−Ｐ過し、
Ｐ液中の溶媒を留去したのち、水層を苛性ソーダでＰＨ
７〜９に調節し、酢酸エチル、酢酸ブチル、塩化メチレ
ン、クロロホルム等の水と混和しない溶媒に転溶する。

転溶溶媒を濃縮して残留物をメタノールー水、エタノー
ルー水、アセ ．トンー水等の溶媒系を用いて結晶化す
る。あるいは培養物に沢過助剤を加えて沢過し、菌体を
メタノール、エタノール、アセトン等で抽出し、溶媒留
法後苛性ソーダーでＰＨを７〜９に調整し、酢酸エチル
、酢酸ブチル、クロロホルム等で抽出す，る。一方Ｐ液
は同一溶媒で抽出する。両抽出液を合わせて濃縮し、濃
縮物を前記の方法で結晶化する。夾雑する成分が多い場
合は、スチレン系の吸着樹脂、シリカゲル、アルミナ等
の担体でクロマト．グラフイ一ｔ行ない夾雑物を除去す
る，たとえばアルミナクロマト ラフイ一の場合は、展
開溶媒として酢酸エチルメタノール混合液を用い、溶媒
中のメタゾールの濃度を５％から２０ｑ６に変える段階
溶出法により、ＳＹ−２物質とサリノマイシン、ＳＹ−
１物質及びその他の夾雑物とを分離する。

またシリカゲルクロマトグラフイ一の場合は展開溶媒と
してクロロホルム−メタノール（１００５液量比）混合
液を用いて展開するこりにより、ＳＹ−２物質を他物質
から分離することができる。得られた生物活性溶出区分
を減圧濃縮し、前記の溶媒から結晶化する。以上の各方
法によりＳＹ一２物質の結晶が好収量で得られる。ＳＹ
−２物質（遊離型）の理化学的性質は下記のとおりであ
る。

（１）色及び性状：無色柱状結晶 （２）融点 ：１８６〜１８８℃ （３）比旋光度 ：〔α〕甘−６８５゜（濃度１％、メ
タノール）（４）溶解性 ：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、エータル、四塩
化炭 素、人キサン等に可溶。

水に不溶。

（５）安定性 ：ＰＨ７〜９で安定、ＰＨ５以下でやや
不安定。

（６）呈色反 ：レミユ一、ニンヒドリン、塩化鉄、フ
エーリング、バニリンの各反応は陰性、１０１ｆ６硫 酸で黄色を呈し、ヨードとは 反応して赤褐色を呈する。

（７）元素分析値：Ｃ４２Ｈ７ＯＯｌＯとして，（８）
分子量 ：７３４（マススペクトル法）（９）柴外部吸
収スベクトルリメタノール λ ２８５ｎｍｍ ａＸ （ε＝５８） に極大吸収 ａｌ 赤外部吸収スペクトル： 臭化カリウム錠による吸収スペ クトルは１図に示す。

ＡＤ核磁気共鳴スペクトル： 重クロロホルム中で測定したス ペクトルは第２図に示す。

ａコ 薄層クロマトグラフイー： シリカゲル薄層クロマトグラフ イ一で各種溶媒系にて展開した ときのＲｆ値を第１表に示す。

ネマススベクトルリ モノメチルエステルのマススペク トルを第３図に示す。

抗菌スペクトルは第２表に示すとおりである。

本抗生物質ＳＹ−２物質に類似する物質としては、抗生
物質ＳＹ−１物質があげられ、ＳＹ−エ・物質のモノメ
チルエステルのマススペクトル及び一般構造式は、ＳＹ
−２物質のそれと全く同一である。しかし両者は理化学
的性質において差異がみられ、特にシリカゲル薄層クロ
マトグラフイ一上でのＲｆ値は、第３表に示すごとく明
らかに相違する。従つてＳＹ−２物質はＳＹ−１の新規
な立体異性体と考えられる。以下に抗生物質ＳＹ−２物
質の具体的製造法を事例により示す。

実施例 ブドウ糖２％、可溶性澱粉１ｑ６、大豆紛１ｑ６、食塩
０．２％、塩化カリ０．２％及び炭酸カルシウム０．０
２％を含有する培地にストレプトミセス・アルプス・ワ
ックスマン・アンド・ペンリッチ第８０６１４号菌（微
工研菌寄第４１９号）を接種し、３０℃で４８時間振盪
溶養した。

この培養液１１をブドウ糖４％、可溶性澱粉１％、大豆
紛１．５％、ビール酵母０．４％、食塩０．２係、塩化
カリ０．２％モしてＰＨ７．Ｏの溶体培地１００１（ス
テンレス製２００１タンク内）に接種し、３０℃で通気
量１００１／分の条件下で１２０時間攪 培養した。培
養終了後、培養液を苛性ソーダーでＰＨ８に調整し、珪
藻土２チを加えてＰ過する。

菌体部分は９０９６アセトン水３０１を加えて１時間撹
拌抽出し、デ過後アセトンを減圧下で留去した。次いで
ｎ−ヘキサン２０１で抽出したのち、水層を再び酢酸エ
チル３０１で抽出した。一方Ｐ液はｎ−ヘキサン５０１
で抽出したのち、水層を酢酸エチル５０１で抽出した。
両者からの酢酸エチル抽出液を合わせ、減圧濃縮して１
１とした。濃縮液をあらかじめ酢酸エチルで充填した１
１のアルミナカラムに吸着させたのち、酢酸エチルでよ
く洗浄し、酢酸エチルとメタノールの混台溶媒（メタノ
ール濃度５〜２０チ）で段階溶出し、溶出液を２０ゴず
つフラクシヨンコレクタ一で分収した。

まずメタノール濃度５チの混合溶媒８００ゴで展開する
とＳＹ−１物質区が溶出され、次いでメタノール濃度１
０チの混合溶媒１１で展開するとサリノマイシンが溶出
され、さらにメタノール濃度２０％の混合溶媒１１で展
開するとＳＹ−２物質が溶出された。溶出液を集めて濃
縮すると、抗生物質ＳＹ−２物質の粗粉末３ｇが得られ
た。この粗粉末を再び８０％のアセトン水に溶解し、冷
蔵庫（５℃）に１夜放置するとＳＹ−２物質が結晶イヒ
した。これを沢別して乾燥すると１．２ｇの粗結晶が得
られ、この粗結晶をアセトン水から再結晶すると、ＳＹ
−２物質の遊離型の無色柱状結晶１．０ｇが得られた。
本発明のコクシジウム症予防治療剤は、ＳＹ−２物質を
生理的に無害な固体又は液体の希釈剤と混合し又は混合
しないで散剤、粉剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤などと
して用いられる。

あるいはこれを飼料、飲料水などに混合してもよい。本
剤に用いられる固体担体としては、たとえば小麦粉、大
豆粉、米糠、澱粉、ブドウ糖、酵母、魚粉、タルク、珪
藻土等があげられ、また液体担体としては、たとえば生
理食塩水、蒸溜水、生理的に無害な有機溶媒等が用いら
れる。その他適宜の補助剤たとえば乳化剤、分散剤、懸
濁剤、湿潤剤、ゲル化剤などを添加してもよい。更に殺
菌剤、防腐剤、酵素剤、抗生物質、乳酸菌製剤等を添加
することもできる。本発明のコクシジウム症予防治療剤
は特に固体の状態での使用が好ましく、この場合には有
効成分を市販の飼育飼料あるいは発育促進飼料等の固体
飼料中に攪 、振 又は粉砕等の手段で混入して使用す
るか、あるいは有効成分を前記のような生理的に無害な
担体を含む粉末濃厚物の形で前記飼料に混合してもよい
。

本発明のコクシジウム症予防治療剤を使用するには、モ
の有効成分であるＳＹ−２物質の含量として約０．００
０１重量％以上が適当である。

一般にその投与量は家 、家畜の種類、日令、投与方法
、症状等により変わるが、たとえばにわとりのコクシジ
ウム症予防の目的には、有効成分であるＳＹ−２物質の
割合が約０．００１〜０．０１ｑ６（飼料の全重量に対
し）で投与することが好ましい。また治療の目的には約
０．００５〜 ０．０３チで投与することが好ましい。
これらの場合には飼料中にＳＹ−２物質を濃度が約１０
〜３００ｐｐｍになるように混和する。本剤は特にアイ
メリア・テネラによる疾患の予防及び治療において良好
な結果が得られる。実験例１ （１）供試薬剤： ＳＹ−２物質、 比較物質としての硝酸ジメチ アリウム、クロピドール及びビキノレートを濃度１００
ｐｐｍで用いた。

比較物質の化学構造は下記のとおりである。（２）スポ
ロゾイトリ アイメリア・テネラの感受性面Ｓ）、キノリン系抗コク
シジウム剤の耐性株（８）及びアイメリア・ブルネッテ
イの３株を用い、スポロゾイトはこれらの発育オーシス
トをドラン及びフアルの方法で脱のうさせた。

（３）培養細胞ど培養液 スポロゾイトの培養は鶏胎児細胞、ヒナ腎細胞又はイー
グル培養液で行ない、６Ｘ３２朋のカバースリップを入
れた試験管内で培養した。

（４）試験方法：各薬剤を所定の濃度に溶解した細菌培
養液９ｄに、スポロゾイトを３Ｘ１０個含む液１７！１
１を接種し、４０℃で１時間静置してスポロゾイトを細
胞内に侵入させたのち、メタノールで固定し、ギムザ染
色をした。

各種薬剤の抗コクシジウム作用は、スポロゾイトの細胞
内侵入数を薬剤非添加対照と比較して判定した。すなわ
ちスポロゾイトの細胞内侵入は染色後、顕微鏡５００倍
率でカバースリップの長径を４ケタ鏡検して数をかぞえ
、対照の侵入数を１００％としてその侵入率で比較した
。その結果を第４表に示す。

この結果から、ＳＹ−２物質はスポロゾイトの細胞内侵
入を著明に阻止し、従来使用されている他の薬剤より優
れた結果を示すことが認められた。

実験例２ （１）供試ヒナ：白色レグホン系雄。

（２）接種オーシストと接種量： アイメリア・テネラの胞子形成オーシストを１羽当たり
６８×１０個ずつ経口接種した。

（３）供試薬剤’ 抗生物質ＳＹ−２物質。

（４）供試薬剤の飼料への混合： 第５表に示す飼育飼料に、供試薬剤を１００ｐｐｍの濃
度になるように混合した。

（５）試験方法： 供試ヒナとしては１４日令の健康なヒナを用い、体重平
均が等しくなるように３群に分け、第１群はオーシスト
接種１日前から所定の供試薬剤を含有する飼料で飼育し
、第２群は感染後供試薬剤を含まない飼料で飼育する感
染対照区とし、第３群は非感染対照区とした。

オーシストは第１群及び第２群のヒナに１羽当たり６８
×１０４個のアイメリア・テネラの胞子形成オーシスト
を経口接種した。（６）効果判定基準：抗生物質ＳＹ−
２投与群（第１群）はオーシスト接種１日前から投薬を
開始し、試験終了まで連用した。

ヒナは試験開始時と試験終了時（層殺前）の２回体重を
測定し、試験期間中は朝、夕２回糞の状態の観察と生死
の観察を行なつた。オーシスト接種日より７日目から９
日目まで糞を集め、プランクトン計数盤を用いて糞中の
オーシスト数を求め、オーシスト接種後９日目にへい死
及び生存全例を剖検し、腸管病変の肉眼的観察並びに−
[ヮw腸、空腸、小腸下部及び盲腸部のオーシスト寄生数
を求め、薬剤の効果を判定した。その結果を第６表及び
第７表に示す。増体量とは試験開始日より試験終了日ま
での体重の増加量の和を生存羽数で除したものである、
盲腸病変：鶏のコクシジウム検査法に従う。

盲腸病変の一〜・曲は下記の意味を有する。

一盲腸は全く正常。

＋盲腸の形は正常。

内容物はやや流動性を帯び色も黄色がかる。

盲腸粘膜は部分的に軽度の腫張があり白ぽくなる。

廿盲腸の形はほぼ正常。

粘膜の腫張は全面にみられる。

内容に出血はなく、粘液は黄色みをおび退色している。

粘膜内には少数の白色点状壊死巣や出血斑が見られ る。

＋盲腸の萎縮、変形は明瞭で直腸よりもやや長い程度と
なる。

正常な内容物は全くなく、凝血または灰白色チーズ状の
変性 物が充満していることが多い。

盲腸壁の肥厚は顕著でもろくなり、点状出血斑が まだ残つていることもある。

病変は盲腸基部にまで達するが直腸にまでは達しな い 冊盲腸の萎縮、変形は顕著。

一般にソーセージ状を呈し、その長さは直腸と同じか または短かくなつている。

病変は直腸の１／３〜１／４位の所にまで達する。

その他は＋と同様である。

第６表及び第７表から知られるように、ＳＹ２物質を投
与した群は糞の状態、相対増体率、へい死率、０．Ｐ．
Ｇ、及び剖検所見において優れた治療効果が認められた
。

実験例３ 従来の抗コクシジウム剤、たとえばヒキノレ一ト、アン
プロリウム、メチルベンゾクエード、クロピドール、ス
ルフアジメトキジンなどでは、使期間が長ければ耐性菌
の出現がみられる。

そこで従来の抗コクシジウム剤に耐性を有する野外株を
用いて、本発明の抗コクシジウム剤の効果を試験した。
（１）供試ヒナ：白色レグホン系雄。

（２）接種オーシストと接種量： メチルベンゾクエート４０ｐｐｍに耐性を有するアイメ
リア・テネラの胞子形成オーシストを１羽当たり６．８
×１０４個経口接種した。

（３）供試薬剤：抗生物質ＳＹ−２物質及びアンプロー
ルプラス（大日本製薬社製、抗サイアミン剤）（４）供
試薬剤の飼料への混合： 第４表に示す飼料に第８表に示す供試薬剤をそれぞれ１
０又は１００ｐｐｍになるように混合した。

（５）試験方法 健康ヒナは１４日令時に体重が等しくなるように５群に
分け、第１群はオーシスト接種５日前から抗生物質ＳＹ
−２物質１０ｐｐｍを含む飼料で飼育し、第２群には接
種日から抗生物質ＳＹ−２物質を１００ｐｐｍを含む飼
料で飼育し、第３群には市販の抗コクシジウム剤である
アンプロールプラス１００ｐｐｍを含む飼料をオーシス
ト接種５日前から投与し、第４群はオーシスト感染対照
区とし、第５群は非感染対照区とした。

ォーシストの接種は２１日令時に行い、接種後７日目に
全例を剖検した。（６）効果判定基準： 効果の判定、表の記載は実験例２の場合と同じである。

試験結果は第８表及び第９表に示す。第８〜９表の結果
から抗生物質ＳＹ−２投与群（第１群、第２群）は糞の
状態、０．Ｐ．Ｇ．相対増体率、へい死率及び剖検所見
からコクシジウム症に対する予防及び治療において、市
販の抗コクシジウム剤であるアンプロールプラスより優
れていることが認められた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＹ−２物質の赤外部吸収スペクトル図、第２
図はＳＹ−２物質の核磁気共鳴スペクトル図、第３図は
ＳＹ−２物質モノメチルエステルのマススペクトル図で
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 薄層クロマトグラフィーで展関したときのＲ＿ｆ値が、
   酢酸エチル溶媒で０．１５、酢酸エチル：アセトン（４
   ：１）溶媒で０．３５及び酢酸エチル：ベンゼン（７：
   ３）溶媒で０．０５である、新規坑生物質ＳＹ−２物質
   。 ２ 抗生物質ＳＹ−２物質を生産する能力を有するスト
   レプトミセス属菌を培養し、その培養物かからＳＹ−２
   物質を採取することを特徴とする、次式▲数式、化学式
   、表等があります▼ で表わされ、融点１８６〜１８８℃、シリカゲル薄層ク
   ロマトグラフイーで展開したときのＲ＿ｆ値が、酢酸エ
   チル溶媒で０．１５、酢酸エチルリアセトン（４：１）
   溶媒で０．３５及び酢酸エチル：ベンゼン（７：３）溶
   媒で０．０５である、抗生物質ＳＹ−２物質の製法。 ３ 次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされ、融点１８６〜１８８℃、シリカゲル薄層ク
   ロマトグラフィーで展開したときのＲ＿ｆ値が、酢酸エ
   チル溶媒で０．１５、酢酸エチル：アセトン（４：１）
   溶媒で０．３５及び酢酸エチル：ベンゼン（７：３）溶
   媒で０．０５である抗生物質ＳＹ−２物質を有効成分と
   するコンクシジウム症予防治療剤。