JPS5926273B2 - 発酵法によるコエンチ−ムｑ↓１↓０の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は発酵法によるコエンチームＱ１ｏ（以下ＣｏＱ
、。

と略する）の製造法に関する。さらに詳しくは本発明は
フィロバクテリウム属に属し、コエンチームＱＩＯを生
産する能力を有する微生物を栄養培地に培養して培養物
（特に菌体中）にコエンチームＱ１ｏを生成蓄積せしへ
該培養物からコエンチームＱ１ｏを採取することを特徴
とするコエンチームＱＩＯの製造法に関する。

ＣｏＱｌ（、は広く生物界に分布し、電子伝達系におい
て重要な機能をもつことが知られているが、最近、本物
質が心不全、筋ジストロフィー症その他の症病に対し、
顕著な薬理効果を有することが明らかとなった。

従来、微生物を用いるＣｏＱｌｏの製造法としては、各
種の酵母類を培養する方法（特公昭４８−８８３６ ．
４８−２５５１７ ．５１−１９０３４゜特開昭５２−
１０５２８８ら）あるいは、ロドシューモドナス（特公
昭４７−７９５４．特公昭４８−２１５１９）、アルカ
リゲネス（特公昭５ｌ−１９０３４）、シュードモナス
（特公昭３６−１４２９３．特開昭５２−４４２９０．
同５２−４７９９０）、プロテウス（特公昭３〇−１４
２９３）らの各種細菌類を用いる方法が知られている。

しかしながら、これらの方法ではいずれもＣｏＱ１ｏ生
成量が低く未だ満足すべきものではない。

本発明者らは、さらにすぐれた発酵法によるＣｏＱｌｏ
の製造法について検討した結果、これまで、ＣｏＱ１ｏ
生成能の全く知られていなかったフィロバクテリウム属
に属する菌株が、Ｃ０Ｑ１ｏを生産することを見い出し
、本発明を完成するに至った。

次に本発明をさらに詳しく説明する。

本発明に使用する微生物としてはフィロバクテリウム（
Ｐｈｙｌｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）属に属し、ＣｏＱ
、。

を生産する能力を有する微生物ならば野生株、変異株を
問わずいずれの微生物でも使用するこさができる。

好適な菌としてはフィロバクテリウム・ルビアセアラム
（Ｐ 、 ｒｕｂｉａｃｅａｒｕｍ ） またはフィ
ロバクテリウム・ミルシナセアラム（Ｐ 、 ｍｙｒｓ
ｉ −’ ｎａｃｅａｒｕｍ ）に属し、ＣｏＱｌｏ
を生産する能力を有する菌などがあげられる。

具体的にはフィロバクテリウム・ルビアセアラムＬＭＧ
Ｉ ｔ １ （ＫＹ４３８０）（微工研菌寄第４６３７
号パ フィロバクテリウム・ミルシナセアラムＬＭＧ２
ｔ １、 （ＫＹ４３８１）（微工研菌寄第４６３８
号）などがあげられる。

また、上記フィロバクテリウム属に属するＣ０Ｑ１ｏ生
産菌を親株として誘導される各種の薬剤（抗癌・抗生物
質、アミノ酸アナログ、核酸アナログ、ビタミンアナロ
グ、サルファ剤、呼吸阻害剤、ステロール合成阻害剤、
コエンチームＱアナログなど）に対する抵抗性あるいは
感受性の性質を持った変異株、各種の栄養要求性（アミ
ノ酸要求性、核酸要求性、ビタミン要求性など）、形態
変異株、高分子物質合成能欠失変異株、カタボライトリ
プレッション抵抗性変異株、温度感受性変異株等も本発
明に使用することができる。

なお、上記のフィシマクチリウム・ルビアセアラムおよ
びフィロバクテリウム・ミルシナセアラムの菌学的性質
についてはＤ 、Ｋｎｏｓｅｌ ： Ｚｅｎｔｒａ−１
ｂｌ ｅ 、 Ｂａｋｔｅｒｉｏｌ 、 Ｐａｒａｓｉ
ｔｅｎｋｄ 、 Ｉｎｆｅｋｔｉｏｎｓｋｒ 。

Ｈｙｇ 、Ａｂｔ 、 ２ 貝、、６，７９−１００
（１９６２）およびＪ、ＤＥ ５ｒｒｅｄｔ ａｎｄ
Ｊ 、ＤｅＬｅｙ ： ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪ
、 ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
、 、 ２７ 、２２２−２４０（１９７７）に記載
されている。

本発明に使用する微生物の培養培地としては、炭素源、
窒素源、無機物、その他の栄養物を程よく含有する培地
ならば合成培地、天然培地のいずれもが使用できる。

培地に使用する炭素源は、使用菌が利用可能なものなら
ば、いずれの種類を用いてもよい。

すなわち、グルコース、フラクト−ス、シュークローズ
、廃糖蜜、デンプン、デンプン加水分１ｎイ物などの炭
水化物、グリセリン、ソルビトールなどの糖アルコール
、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アラニン、
グリシンなどのアミノ酸類、乳酸、ピルビン酸、酢酸、
リンゴ酸。

ギ酸、コハク酸、フマル酸、クエン酸、脂肪酸などの有
機酸類、ｎ−パラフィンなどの炭化水素類。

メタノール、エタノール、ブクソールなどのアルコール
類を単独であるいは組み合せて使用できる。

さらに、窒素源、無機塩としては、微生物の培地に通常
使用されるものが利用できる。

使用菌さして栄養要求性を示す菌株を用いる場合には、
その要求性物質を培地中に添加する必要がある。

また、培地あるいは培養液中に各種の物質、例えば、ア
ミノ酸、核酸関連物質、ビタミン類、有機酸類、脂肪酸
類、アルコール類、ステロール類その他ＣｏＱ１ｏ生合
成前駆物質およびその関連化合物を培地に添加すること
によりＣｏＱｌ。

生成量を増加させることができる場合がある。

培養は振盪培養、通気撹拌培養などの好気的条件下で２
０−４０℃でおこなう。

培養中、培養液のｐＨは５〜９程度（特に中性付近）に
維持するのが好ましい。

中和剤としては、アンモニア水、水酸化ナトリウム、水
酸化カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム
、水酸化カリウム、尿素らが用いられる。

培養期間は通常３〜７日間で、培養液中および菌体中の
両方にＣｏＱｌｏが蓄積するが、大部分は菌体中に蓄積
する。

培養物からのＣｏＱｌｏの単離は、常法により溶媒抽出
その他の操作によっておこなうことができる。

次に実施例を示す。

実施例 １ グルコース２ ｆ ／ｄｌ 、ペプトン１グ／ｄｌ 、
酵母エキス１ｆ／ｄｉ、食塩０．５ ｆ ／ｄｌの組成
よりなるｐＨ７，２の種培地３００−を２を容三角フラ
スコに入れて殺菌する。

これに、フィロバクテリウム・ルビアセアラムＬＭＧＩ
ｔ １ （ＫＹ４３８０）（微工研菌寄第４６３７号
）を接種し、３０℃で２４時間振盪培養する。

かくして得られる培養液３００−を下記の組成の発酵培
地３ｔを含む５を容ジャー・ファーメンクーに移し、６
００ｒｌｌｆｆｌの回転数、１分間当り３ｔの通気、温
度３０℃の培養条件下で９６時間通気撹拌培養したとき
培養液１を当り１４．１′ｍｇ−のＣ０Ｑ１ｏが生成し
、ＣｏＱ９の副生は、認められなかった。

なお、２４時間目と４８時間目に、廃糖蜜を５ ｆ ／
ｄｌ （糖濃度換算）づつフィードした。

発酵培地の組成：廃糖蜜５′？／ｄｌ（糖濃度換算）、
硫酸アンモニウム０．５ ’ｉｆ／ｄｉ 、リン酸１カ
リウム０、０５ ？／ｄｌ 、リン酸２カリウム０．０
５１？／ｄｌ。

硫酸マグネシウム・７水塩０．０２５ ？／ｄｌ 、コ
ーン・スチープ・リカー２’ｉ？／ｄｌ、炭酸カルシウ
ム２１７ｄｌ（ｐＨは殺菌前にアンモニア水で７２に調
整する。

）培養液２ｔを遠心分離して乾燥重量として、６０グに
相当する湿菌体をえた。

これを２００ｍ１の水に懸濁し、メタノール４００ｙｄ
、水酸化ナトリウム８０グ、ピロガロール１５１を加え
、８５℃で４５分間還流ケン化後放冷し、ｌｔずつのｎ
−ヘキサンを加え２回抽出操作を行う。

ｎ−へキサン層を集めてこれに無水芒硝を加えて脱水後
減圧下で濃縮し残渣を４．０Ｔｔｌのアセトンに溶解し
、不溶物を戸別除去した後、再び濃縮し、残渣ａ（７の
アセトンに溶解後シリカゲルカラムに流しベンゼ゛ンに
て溶出する。

Ｃ０ＱＩＯを含む両分を集めて濃縮し残渣を５ゴのエタ
ノールに溶解後冷却することにより黄色のＣｏＱ１ｏ粗
結晶１１，８〜を得た。

本島から更にエタノールで再結して得た結晶は、逆相薄
層クロマトグラフィーのＲｆ値、高速液体クロマトグラ
フィーのリテンションタイム、融点、ＮＭＲスペクトル
、元素分析値、赤外吸収スペクトル、紫外部吸収スペク
トルと曲線が、Ｃ０Ｑ１ｏの標品とよい一致を示した。

実施例 ２ 種菌として、フィロバクテリウム・ミルシナセアラムＬ
ＭＧ２ｔｌ （ＫＹ４３８１ ）（微工研菌寄第４６３
８号）を用いるほかは、実施例１と同様に実施したとき
培養液１を当り、２１．１〜のＣｏＱｌｏが生成し、Ｃ
０Ｑ９の副生はみとめられなかった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ フィロバクテリウム属に属し、コエンチームＱＩＯ
   を生産する能力を有する微生物を栄養培地に培養して培
   養物中にコエンチームＱＩＯを生成蓄積せしめ、該培養
   物中からコエンチームＱ１ｏを採取することを特徴とす
   るコエンチームＱ１ｏの製造法。