JPS5925700A - グルコ−スの測定方法およびグルコ−ス検定混合物 - Google Patents
グルコ−スの測定方法およびグルコ−ス検定混合物Info
- Publication number
- JPS5925700A JPS5925700A JP7921183A JP7921183A JPS5925700A JP S5925700 A JPS5925700 A JP S5925700A JP 7921183 A JP7921183 A JP 7921183A JP 7921183 A JP7921183 A JP 7921183A JP S5925700 A JPS5925700 A JP S5925700A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glucose
- compound
- enzyme
- assay mixture
- change
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＩ）Ｉｒ、体のグルコース含駐を測定する方法
、おＪ：びその方法に使用し５ろグルコース検定混合物
に関する。殊に本発明は血液のような生埋液体のグルコ
ース含ｌｆを測定すイ》ための方法おＪ、びグルコース
検定混合物に関する。
、おＪ：びその方法に使用し５ろグルコース検定混合物
に関する。殊に本発明は血液のような生埋液体のグルコ
ース含ｌｆを測定すイ》ための方法おＪ、びグルコース
検定混合物に関する。
Ｊｒｌｌ ７［Ｖのような生埋液体中のグルコースの測
定は病院等で広く行われている。このためにはいくつか
の方法を利用することかでぎ、｛＋ＩＪλ一げ酵素を用
いる比色分析法べ・化学薬剤を用いる方法がある。
定は病院等で広く行われている。このためにはいくつか
の方法を利用することかでぎ、｛＋ＩＪλ一げ酵素を用
いる比色分析法べ・化学薬剤を用いる方法がある。
酵素による検定法が好ましい。現在ノ１↓も用いられて
いる酵素法では、二つの酵素（グルコース・オギシダ−
ｖ ｔ、； 、Ｊ二びはルオキシダーゼ）が月拮１られ
、またこの方法は遊離放出されろ過酸化水素の測定に依
拠している。この方法は多くの欠点を有し、例λ−ば（
８）二つの酵素を必要とし＋Ｉｉ−３Ｋｂであり、Ｄ）
）試料からｃノ）カメラーゼによるｉｉ、Ａ ｆ’ｉン
（ヒ水（くの分Ｗｆ 、 まｔ、−は１．“、゛）酸
化水素が所費の方式ではｌｒ ＜面ｉ１１′成分と反Ｌ
ｒ、、Ｌ −Ｃｔ、±５．」−うなペル」キシダ〜ビの
非！）ケ異反応、のいずれかに起因する９首１１宅性の
ある干渉を受は易い。
いる酵素法では、二つの酵素（グルコース・オギシダ−
ｖ ｔ、； 、Ｊ二びはルオキシダーゼ）が月拮１られ
、またこの方法は遊離放出されろ過酸化水素の測定に依
拠している。この方法は多くの欠点を有し、例λ−ば（
８）二つの酵素を必要とし＋Ｉｉ−３Ｋｂであり、Ｄ）
）試料からｃノ）カメラーゼによるｉｉ、Ａ ｆ’ｉン
（ヒ水（くの分Ｗｆ 、 まｔ、−は１．“、゛）酸
化水素が所費の方式ではｌｒ ＜面ｉ１１′成分と反Ｌ
ｒ、、Ｌ −Ｃｔ、±５．」−うなペル」キシダ〜ビの
非！）ケ異反応、のいずれかに起因する９首１１宅性の
ある干渉を受は易い。
本発明によれば、適切に緩＋１５ｙ化ｌ−だ媒質中の（
１）ビ＝ロキノン従属グルコースヒビロゲナーセ酵素Ｅ
、 Ｇ、第１．１．９９．１７号またを′１フラビン（
ＩＬを１１グルコースデヒビロゲナーゼ酵素１礼、Ｃ１
第１．１．９９．１０号、１５Ｊび（１１）α元されて
−（ｔ ＩＭ Ｉ：、ｆ射吸収！１′ｊ性の変化）ｄよ
び／上た（”、ｔ、 ’＋１イ、気的変化を生じさせる
ことができるｊ”；を元可ｆｉｔ宅比合物、からなろ検
定混合物と、グルコース含有流体の試ｆ１を接ｉつ・ｌ
ｊさせる、Ｑｆ鉢体中存在するグルコースの測定方法が
トｒｅ （Ｉｌ−される。
１）ビ＝ロキノン従属グルコースヒビロゲナーセ酵素Ｅ
、 Ｇ、第１．１．９９．１７号またを′１フラビン（
ＩＬを１１グルコースデヒビロゲナーゼ酵素１礼、Ｃ１
第１．１．９９．１０号、１５Ｊび（１１）α元されて
−（ｔ ＩＭ Ｉ：、ｆ射吸収！１′ｊ性の変化）ｄよ
び／上た（”、ｔ、 ’＋１イ、気的変化を生じさせる
ことができるｊ”；を元可ｆｉｔ宅比合物、からなろ検
定混合物と、グルコース含有流体の試ｆ１を接ｉつ・ｌ
ｊさせる、Ｑｆ鉢体中存在するグルコースの測定方法が
トｒｅ （Ｉｌ−される。
（Ｉｉ、 Ｇ、けＴｉ’、ｎｚｙｍｅ Ｃｏ＋ｎｍｉ
ｏｓｉｏｎエンザイム−＝＋ミッションの略）。
ｏｓｉｏｎエンザイム−＝＋ミッションの略）。
また本発明によれば、い）ピロロキノン従い１グルコー
スデヒドＩツク′リー、ビｆ４Ｖ ｖ＜うＩす、Ｃ１第
１．１．９９．１７号またはフラビン（ｉｅ ｌ＋、＋
ｉグルコーステヒ＋、ｌ 、ゲナーゼ酵素’１１：、Ｇ
、第１．１．９９． ＨＪ号と、（ｉｉ） 、＋８ノｌ
；され−Ｃ屯（ａ ４’、、’＋射吸収！Ｒ性の変化ｌ
・５よび／″上たば心気的す〕化を生じさＩＬ：るごと
が−（晃４．鑵）＋’： ｌ’Ｊ能化金化合物からＩｆ
ろグルコースイ東定７１４自物も１ノア ７Ｒされる。
スデヒドＩツク′リー、ビｆ４Ｖ ｖ＜うＩす、Ｃ１第
１．１．９９．１７号またはフラビン（ｉｅ ｌ＋、＋
ｉグルコーステヒ＋、ｌ 、ゲナーゼ酵素’１１：、Ｇ
、第１．１．９９． ＨＪ号と、（ｉｉ） 、＋８ノｌ
；され−Ｃ屯（ａ ４’、、’＋射吸収！Ｒ性の変化ｌ
・５よび／″上たば心気的す〕化を生じさＩＬ：るごと
が−（晃４．鑵）＋’： ｌ’Ｊ能化金化合物からＩｆ
ろグルコースイ東定７１４自物も１ノア ７Ｒされる。
」−記ｒｃ、ｃ、番号（、Ｌ１生化学「ｌ！１際同盟の
命名法委１＋会（１１Ｇ・［Ｊ１３）の１孝素命名ｌノ
ミにｔ、；いて酵素に月してイ・Ｊ与される酵素１１？
号で３（・ノリ。
命名法委１＋会（１１Ｇ・［Ｊ１３）の１孝素命名ｌノ
ミにｔ、；いて酵素に月してイ・Ｊ与される酵素１１？
号で３（・ノリ。
３１（当には、還元可能化合物は、その、ｌ、２元が、
Ｅイ？＋１ｉ Ｉｆ ＩＡＪ Ｉ’を収牛冒’Ｌ （）
Ｙ）Ｐｋ ＩＦｊｊｌｔ ＰＣ） ＋’） 、ｅ ＋ｌ
： （’）ｒ則’＋ｄ Ｋ 、ｉす：ｌｉ Ｊ：び／コ
Ｅたは゛【１イ子の１，１れれ６・套Ｊ）化１１′両か
ｌＸ） ＋ｊ［極系へ移してｌｌｆ、 ｆＡｒ、を生じ
させ・；）−ロレクトロニク（手段に１つ−Ｃ監０Ｌで
きろよ５ ／、ｒ ｆｌ’、 ｒ？ ｌｊＪ テ、’：
＊ ’−）。、・−Ｌ元町１１Ｈ化合物が、イＳの」４
元を１１１°１！ｉ（い１ζ゛１１基（１吸収□＋：ｔ
１１−・′）変化の測定（例えば分）テ１分１１ｉ法
うに」、；月１．゛１″ｉ′硯さＪ【ろものであるとき
には、その１にａ物は染Ｙ’）で、りノリ５゜ある柚の
化合物は両４１ノを・呈する。ｙ、ｆカニ ｒ＋ｆ ｔ
ｉＨ化合物として使用できる（すなわち染料であると同
時に、エレクトロニクス手段によって監睨される１イ気
的変化を牛じさ亡うる化合物でありうる）。
Ｅイ？＋１ｉ Ｉｆ ＩＡＪ Ｉ’を収牛冒’Ｌ （）
Ｙ）Ｐｋ ＩＦｊｊｌｔ ＰＣ） ＋’） 、ｅ ＋ｌ
： （’）ｒ則’＋ｄ Ｋ 、ｉす：ｌｉ Ｊ：び／コ
Ｅたは゛【１イ子の１，１れれ６・套Ｊ）化１１′両か
ｌＸ） ＋ｊ［極系へ移してｌｌｆ、 ｆＡｒ、を生じ
させ・；）−ロレクトロニク（手段に１つ−Ｃ監０Ｌで
きろよ５ ／、ｒ ｆｌ’、 ｒ？ ｌｊＪ テ、’：
＊ ’−）。、・−Ｌ元町１１Ｈ化合物が、イＳの」４
元を１１１°１！ｉ（い１ζ゛１１基（１吸収□＋：ｔ
１１−・′）変化の測定（例えば分）テ１分１１ｉ法
うに」、；月１．゛１″ｉ′硯さＪ【ろものであるとき
には、その１にａ物は染Ｙ’）で、りノリ５゜ある柚の
化合物は両４１ノを・呈する。ｙ、ｆカニ ｒ＋ｆ ｔ
ｉＨ化合物として使用できる（すなわち染料であると同
時に、エレクトロニクス手段によって監睨される１イ気
的変化を牛じさ亡うる化合物でありうる）。
本発明方法は、任意のグルコース含有ζ１１シ体中のグ
ルコース（Ａ Ｉ＜＋“を測定するのにｒ小用できる。
ルコース（Ａ Ｉ＜＋“を測定するのにｒ小用できる。
殊に本発明方法は血液「１コおよびその曲の生理液体中
のグルコース０１ム度を測定するのに有用である。しか
し本発明方法は、工業的処理工程６１１体（例えばグル
コースイノメラーゼの生産工程の流体）および１発水性
の広範囲なぞの曲のグルコース含有流体中のグルコース
強度を測定するのにも使用できる。
のグルコース０１ム度を測定するのに有用である。しか
し本発明方法は、工業的処理工程６１１体（例えばグル
コースイノメラーゼの生産工程の流体）および１発水性
の広範囲なぞの曲のグルコース含有流体中のグルコース
強度を測定するのにも使用できる。
本発明方法は、酵素グルコース０１ム「１ゲナーゼがグ
ル：Ｉ−スをグルコノラクトンに＾ν化する反応（′＋
：のグルコノラクトンは次いでυ１１水分解されてグル
コン酸と７ｆる）に影響な力えイン反応機構を利用する
。この反Ｌｂ機構はグルコースの各分子から２１１１１
．Ｉの１１ｃ子る・放出させる。グルコース電子から放
出された１１ｆ子は絣元可１１パｆと台管の分子−移り
、七〇Ｕ元可ｆｉｔ：化合物はかくしてａ元され、その
反応を監を兄できるよ５１／Ｃする１νに光１．ｒ 、
ｉび７／または遊猟的変化のための基礎を与える。例え
ば適当な染法１化合物の存在下で、グルコース分子から
の放出電子（］１、染法４山合物の分−ｆを１ｑフｉ、
１２、かくして（例えば分光分析器を用いて）測定でき
る媒′ｅｔの電磁輻射吸収ｔｒ’ｊ ｉ’Ｊ、の変化を
生じさ亡る。Ｈｆしくは、その吸収特性の変化は、スは
りｌ・ルの０１’ ？Ｉ？、領賊で測定できろ色装化で
あイ）。吸収！）ン性の変化の程度は、分光分析器を用
い又適４１な波長にＩＪける光学濃度の変化へ・測定す
ることｅこより、測定できる。直接７１ｆ、予検出σ）
ためには、反応混食物には、研元町１ｊ口化学物から’
ｒｌｆ、子を受取イ）ことができ、またセル（′電池）
の一方の￥Ｆｉ、儂含ｊ ｌｒ、ず非反応性固体□ｒぽ
極（例えば白金または適切に処Ｊ、ｌされた炭素）を入
れる。このセル（市、Ｍ ）は、１−１元反応が生じ５
ろ第２の１「、極（例えば＼限／ ＩＸｘ化、限、標準
１） ロメルＶＫ、極またはフェリシアン化物中の白金
）に」、り接続されろ。塩橋がこの二１１【体系間に液
体接続４・作る。グルコース酸化反応速度を１心気分析
法に」：り直接に監睨できる。、帆ろい（了１ζ°（元
「旧１ヒ化合物θ）還元ａ（ｌｉ；よび＋１１化）（シ
の両ｃ〃誕１ｗの変化は、心イ＋７．７’、’１分析ｆ
ムでｉａＬ’−６・できる。
ル：Ｉ−スをグルコノラクトンに＾ν化する反応（′＋
：のグルコノラクトンは次いでυ１１水分解されてグル
コン酸と７ｆる）に影響な力えイン反応機構を利用する
。この反Ｌｂ機構はグルコースの各分子から２１１１１
．Ｉの１１ｃ子る・放出させる。グルコース電子から放
出された１１ｆ子は絣元可１１パｆと台管の分子−移り
、七〇Ｕ元可ｆｉｔ：化合物はかくしてａ元され、その
反応を監を兄できるよ５１／Ｃする１νに光１．ｒ 、
ｉび７／または遊猟的変化のための基礎を与える。例え
ば適当な染法１化合物の存在下で、グルコース分子から
の放出電子（］１、染法４山合物の分−ｆを１ｑフｉ、
１２、かくして（例えば分光分析器を用いて）測定でき
る媒′ｅｔの電磁輻射吸収ｔｒ’ｊ ｉ’Ｊ、の変化を
生じさ亡る。Ｈｆしくは、その吸収特性の変化は、スは
りｌ・ルの０１’ ？Ｉ？、領賊で測定できろ色装化で
あイ）。吸収！）ン性の変化の程度は、分光分析器を用
い又適４１な波長にＩＪける光学濃度の変化へ・測定す
ることｅこより、測定できる。直接７１ｆ、予検出σ）
ためには、反応混食物には、研元町１ｊ口化学物から’
ｒｌｆ、子を受取イ）ことができ、またセル（′電池）
の一方の￥Ｆｉ、儂含ｊ ｌｒ、ず非反応性固体□ｒぽ
極（例えば白金または適切に処Ｊ、ｌされた炭素）を入
れる。このセル（市、Ｍ ）は、１−１元反応が生じ５
ろ第２の１「、極（例えば＼限／ ＩＸｘ化、限、標準
１） ロメルＶＫ、極またはフェリシアン化物中の白金
）に」、り接続されろ。塩橋がこの二１１【体系間に液
体接続４・作る。グルコース酸化反応速度を１心気分析
法に」：り直接に監睨できる。、帆ろい（了１ζ°（元
「旧１ヒ化合物θ）還元ａ（ｌｉ；よび＋１１化）（シ
の両ｃ〃誕１ｗの変化は、心イ＋７．７’、’１分析ｆ
ムでｉａＬ’−６・できる。
好ましくは本発明方法は本発明の検定混合物を用いて実
施される。これは調製済の検定混合物を採り、それを披
試験グルコースハ゛有ｂＩｆ、体に対して添加し、媒７
ａｔを適当な方式で緩０１１１化すイ）ことに行うこと
力ｔできる。別法として、検定混合物の各成分４でグル
コース含有流体に添ＩＪＩＩ Ｌ、、緩両化することに
より、検定混合物をその場で（ｆｌＪｊ用現場で）作る
こともできる。
施される。これは調製済の検定混合物を採り、それを披
試験グルコースハ゛有ｂＩｆ、体に対して添加し、媒７
ａｔを適当な方式で緩０１１１化すイ）ことに行うこと
力ｔできる。別法として、検定混合物の各成分４でグル
コース含有流体に添ＩＪＩＩ Ｌ、、緩両化することに
より、検定混合物をその場で（ｆｌＪｊ用現場で）作る
こともできる。
グルコースデヒビロゲナーゼｔｒテ累は、それらの酵素
を含む任意の微生物から得ろことができる。
を含む任意の微生物から得ろことができる。
これらのｒツｙ素を含み、これらのＦｉｌ′素源として
有効に使用できるｆ故生物としては、Ｅ、Ｃ，１，１，
９９，１７の源としてのアセトバクター、アシネトバク
タ−、グルコノバクタ−はよびシュート９モナスの菌株
、およびＥ、Ｃ，１，１，９９，１０のｉｈ’ｒｉとし
てのススペルギルスの菌株がある。好ましい１ｅ、Ｇ、
１．１．９９．１７Ｄｒｊは、アシネト／（フタ−・
カルコアセチフス（Ａｃｊｎｅｔｏｌｍｃｌ；ｏｒ Ｃ
ａ１ｃｏａｃａｔ１ｃｕθ） ｌｌｉのＩＷ ！！４、
殊ニ蘭株ＮＯＴ Ｇ ７８４４ （コのｒ’１４株は、
ロフト１ン市コリンデイルアベニュのセントラル・）ξ
／リック・ヘルス・ラボラトリイのナショナル・コｌツ
クジョン・オノ・タイプ・ノノルチュアーズ、Ｉ′ＪＧ
”Ｉ’＜；に寄託され、そこから１０１＋に人手゛（：
きイ））である。
有効に使用できるｆ故生物としては、Ｅ、Ｃ，１，１，
９９，１７の源としてのアセトバクター、アシネトバク
タ−、グルコノバクタ−はよびシュート９モナスの菌株
、およびＥ、Ｃ，１，１，９９，１０のｉｈ’ｒｉとし
てのススペルギルスの菌株がある。好ましい１ｅ、Ｇ、
１．１．９９．１７Ｄｒｊは、アシネト／（フタ−・
カルコアセチフス（Ａｃｊｎｅｔｏｌｍｃｌ；ｏｒ Ｃ
ａ１ｃｏａｃａｔ１ｃｕθ） ｌｌｉのＩＷ ！！４、
殊ニ蘭株ＮＯＴ Ｇ ７８４４ （コのｒ’１４株は、
ロフト１ン市コリンデイルアベニュのセントラル・）ξ
／リック・ヘルス・ラボラトリイのナショナル・コｌツ
クジョン・オノ・タイプ・ノノルチュアーズ、Ｉ′ＪＧ
”Ｉ’＜；に寄託され、そこから１０１＋に人手゛（：
きイ））である。
好ましいＥ、Ｃ，１，１，９９１０諒どしては、ススー
？ルギルス・オリリ１工（Ａｓｐｅｒｇｊ １１ ＬＩ
ＥＩ ｏｒｙｚａｓ ） ＩＷ （：Ｉ、ＡＴＯＣ９１
０２がある（この菌株＋１米国メリーランげ２０８５２
、ロックビレ、１２６０１〕ξ−クローン・ドライノの
アメリノノン・り・ｒノ・カルブ゛ユ了・コレクション
Ａ Ｔ Ｇ Ｃ’、に寄バＩ：され、そこから自由に入
手できる）。
？ルギルス・オリリ１工（Ａｓｐｅｒｇｊ １１ ＬＩ
ＥＩ ｏｒｙｚａｓ ） ＩＷ （：Ｉ、ＡＴＯＣ９１
０２がある（この菌株＋１米国メリーランげ２０８５２
、ロックビレ、１２６０１〕ξ−クローン・ドライノの
アメリノノン・り・ｒノ・カルブ゛ユ了・コレクション
Ａ Ｔ Ｇ Ｃ’、に寄バＩ：され、そこから自由に入
手できる）。
本発明方法で（Ｊ５用されるどきり）酵素は、ｆ−ｒ′
：悟Ｃｌ）形態であってよく（例えば梢刺酵素、〒１自
ｊｌｌ ＋ｔｌ！！エギスあるいは微生）吻の完全、削
胞中に含すれたものＣあってよい）。それは完全、Ｖｌ
ｌｌ １１１．、ｌ中に固定さ才じＣ（・てもよく、カ
ラＪ、中に固定化さＡじ（、い−（も、しく、可耐性酵
素の形で使用されてもＪ、く、或いは曲の適宜な形態で
あってよい。
：悟Ｃｌ）形態であってよく（例えば梢刺酵素、〒１自
ｊｌｌ ＋ｔｌ！！エギスあるいは微生）吻の完全、削
胞中に含すれたものＣあってよい）。それは完全、Ｖｌ
ｌｌ １１１．、ｌ中に固定さ才じＣ（・てもよく、カ
ラＪ、中に固定化さＡじ（、い−（も、しく、可耐性酵
素の形で使用されてもＪ、く、或いは曲の適宜な形態で
あってよい。
グルコースデヒｌ−” Ｅｌゲナーｔ／ ｊＩｌ’ｉ
Ｓ＜ Ｉ！Ｉ−（’；、 １１゜９９１７はピロロキ
ノン（＋ｔ Ｍ酵素であり、その中に１市綴ｈ（とじて
１２０ロギノンをｋんでいる。ピロロキノンは下記（１
１を造な含む化合物であ、６゜直通ピロロキノンは１、
下記のメトギーリナンの構造と類似の構ｊｆｉを有する
。
Ｓ＜ Ｉ！Ｉ−（’；、 １１゜９９１７はピロロキ
ノン（＋ｔ Ｍ酵素であり、その中に１市綴ｈ（とじて
１２０ロギノンをｋんでいる。ピロロキノンは下記（１
１を造な含む化合物であ、６゜直通ピロロキノンは１、
下記のメトギーリナンの構造と類似の構ｊｆｉを有する
。
グルコースグヒ１２０’Ｉ す’ ７’ｌ’７ 素”
Ｃ９１，１゜９９、１０ ｋ’、ｔフラビン従属酵素で
あり、フラビンアデニンジヌクレオチｒ（ＦＡＩ））を
浦綴基として含んでいる。
Ｃ９１，１゜９９、１０ ｋ’、ｔフラビン従属酵素で
あり、フラビンアデニンジヌクレオチｒ（ＦＡＩ））を
浦綴基として含んでいる。
Ｌ′従元ｒＩＴ ｆｉｌ化合物は、グルコースのグルコ
ースデヒビロゲリーービ接触酸化により遊離放出される
電子（／ＣＪ’、 ツーＣＭ 元すレ６ コトがテ？ｔ
、：した＋ｌ： ｌｉＢ ！！’＋ｌ射吸収特性の変化
を生ずるか固体Ｉｆ：極センサーに′１１【子を供与し
５るようにする適宜な化合物であってよい。染料化合物
を使用する場合に、生ずる吸収特性変化は電（（゛ｎス
ペクトルの可７ｊｌ領域、すなわｅ。
ースデヒビロゲリーービ接触酸化により遊離放出される
電子（／ＣＪ’、 ツーＣＭ 元すレ６ コトがテ？ｔ
、：した＋ｌ： ｌｉＢ ！！’＋ｌ射吸収特性の変化
を生ずるか固体Ｉｆ：極センサーに′１１【子を供与し
５るようにする適宜な化合物であってよい。染料化合物
を使用する場合に、生ずる吸収特性変化は電（（゛ｎス
ペクトルの可７ｊｌ領域、すなわｅ。
４５（ｌｎｍ〜７００ ｎｍの間にあるのが好ましい。
々ｆましい染料化合物は２．６−ジクＩＵルフエノール
の酸化型（ＤＣＰＩＦ）である。これらの染料化合物の
還元によって、スペクトルの？ｉＪ睨領域における色変
化が生じ、こｔｔ”はスはクトル光度旧を用いて６００
１ｍにおいて測定するのが便宜である。好ましい染料化
合物以外に、その曲の適当な化合物としては、−１−１
００ｍＶ以下のしｉ゛ツクス１イ位有する化合物が包含
される。
の酸化型（ＤＣＰＩＦ）である。これらの染料化合物の
還元によって、スペクトルの？ｉＪ睨領域における色変
化が生じ、こｔｔ”はスはクトル光度旧を用いて６００
１ｍにおいて測定するのが便宜である。好ましい染料化
合物以外に、その曲の適当な化合物としては、−１−１
００ｍＶ以下のしｉ゛ツクス１イ位有する化合物が包含
される。
本発明のグルコース検定混合物は、好まし２くけグルコ
ースデヒ＋、＃ 、ゲナー１２ Ｉｎ素ど適当ｌ「染料
化合物：ｔ、？ 、１び緩（ＩＩｉｉ剤との凍結乾４：
Ｖ＜混合物」−リな石。
ースデヒ＋、＃ 、ゲナー１２ Ｉｎ素ど適当ｌ「染料
化合物：ｔ、？ 、１び緩（ＩＩｉｉ剤との凍結乾４：
Ｖ＜混合物」−リな石。
緩衝産は、適宜な生理学的に相芥を十の緩動削であって
よい。典１（ｌ！！的な検定γＩＬ合′１々川１の各成
分の１１日よ下記の範囲である。
よい。典１（ｌ！！的な検定γＩＬ合′１々川１の各成
分の１１日よ下記の範囲である。
グルコースデヒドロゲナーゼ ４０〜２００１ｔ’
−（１７’ ｒｙｅ２．６−シクロルフエノールインド
フエノール １０〜１０ ［１／１Ｍこれを緩衝化して
ｐＨ５，５〜９０とする。
−（１７’ ｒｙｅ２．６−シクロルフエノールインド
フエノール １０〜１０ ［１／１Ｍこれを緩衝化して
ｐＨ５，５〜９０とする。
凍結乾燥ｉ１Ｌ合物は適当には薬瓶に入れて供給され、
これは開封してその混合物に水を加えて指定ＩＩ□ｊｕ
１１″シニとすうことができる。
これは開封してその混合物に水を加えて指定ＩＩ□ｊｕ
１１″シニとすうことができる。
不発明のグルコース測定方法の実ノイｊにおいて、適当
な緩’ｆＩ！ｉ＋ １１′、／＋１４Ｌ ｉ＃１中に検
定混合′吻ｖ ；Ｊ、！Ｊ Ｕ’！し、そしてＩ′ｅｌ
ｔ、体試月、１（・ηえばＪ１旧宥の試料を慣用的の方
式でそれに加えろ。ｕｆましくけ０．５〜５ （１ｌｉ
ｔの試料（よた１１０゛侭したものの竹１ｉ１１ｉのさ
１゛〕に大きな容積）を、［］、１〜・５ ＩＩ＋／の
緩ｆハ１１化媒’ＩＩ ＩＩ（： 、ＩＩＩえシ）２．
試験されろ一般的物質である血清は、Ｊｆｌｔ ｔ＋’
Ｑ、 ｈ・１）細胞を除去−「ることにより作らＡ１イ
）。＋ｌ’ｉ（： ＃ ｌ、１シ１１えげ血清を緩１！
ｌｊ化媒質に添加した陵に、１彦当／孟θ１／長（例え
ば６ＱＱｎｍ）で５） ）Ｙ：光ハｆｆｌ １ｌｌｌ＋
定を行い、試験試料のグルコース含）１１を決定１−ろ
。
な緩’ｆＩ！ｉ＋ １１′、／＋１４Ｌ ｉ＃１中に検
定混合′吻ｖ ；Ｊ、！Ｊ Ｕ’！し、そしてＩ′ｅｌ
ｔ、体試月、１（・ηえばＪ１旧宥の試料を慣用的の方
式でそれに加えろ。ｕｆましくけ０．５〜５ （１ｌｉ
ｔの試料（よた１１０゛侭したものの竹１ｉ１１ｉのさ
１゛〕に大きな容積）を、［］、１〜・５ ＩＩ＋／の
緩ｆハ１１化媒’ＩＩ ＩＩ（： 、ＩＩＩえシ）２．
試験されろ一般的物質である血清は、Ｊｆｌｔ ｔ＋’
Ｑ、 ｈ・１）細胞を除去−「ることにより作らＡ１イ
）。＋ｌ’ｉ（： ＃ ｌ、１シ１１えげ血清を緩１！
ｌｊ化媒質に添加した陵に、１彦当／孟θ１／長（例え
ば６ＱＱｎｍ）で５） ）Ｙ：光ハｆｆｌ １ｌｌｌ＋
定を行い、試験試料のグルコース含）１１を決定１−ろ
。
本５＾明方ｒノμ・血液、尿またｆ’、ｒ、 １ｆｌｌ
（ｔ’ｌ検定のためにＳ 、ｏ−試ゐ・２１片で使
用することも可能である。この場針には、染料出自物４
・使）（トｆ°ろ。好ｆｌ、＜は、それは、二１・口・
プループトラゾリウムと、フェナジンメトリールフェー
トもしくはフェナジンエトザルフェートとの混合物であ
る。グルコースの存在下で、その二１・口・ツルーテト
ラゾリウムは無色から暗紫色に変る。フエナジンニｒ−
トサルフエートは、染ネ・１化合物として、または）″
ｑ元可Ｔ１目化合′吻（その還元により１ｆｆ、気的変
化が生じうる）としＣのいずれでも使用できる化合Ｉ吻
である。
（ｔ’ｌ検定のためにＳ 、ｏ−試ゐ・２１片で使
用することも可能である。この場針には、染料出自物４
・使）（トｆ°ろ。好ｆｌ、＜は、それは、二１・口・
プループトラゾリウムと、フェナジンメトリールフェー
トもしくはフェナジンエトザルフェートとの混合物であ
る。グルコースの存在下で、その二１・口・ツルーテト
ラゾリウムは無色から暗紫色に変る。フエナジンニｒ−
トサルフエートは、染ネ・１化合物として、または）″
ｑ元可Ｔ１目化合′吻（その還元により１ｆｆ、気的変
化が生じうる）としＣのいずれでも使用できる化合Ｉ吻
である。
本発明方法は、過度に高度な水亭にまで鞘！１１される
必要がない一種のみの酵素な用い、そしてツノ゛ン誘発
性１ｄよび毒性檗バリル・使用しないことに１．ｊ（・
て有利である。本発明方法にｔｄいて使用できるグルコ
ース濃度］・９０ゲナーゼ酵素ｚ、ｃ、 ｔ １．９９
．１７はその他の糖類（例えばガラクトース１，５よび
一マンノース）に対して多少低い活性を有−「ろが、そ
のことは検定条件下では重大でＧ丁７ｆい。
必要がない一種のみの酵素な用い、そしてツノ゛ン誘発
性１ｄよび毒性檗バリル・使用しないことに１．ｊ（・
て有利である。本発明方法にｔｄいて使用できるグルコ
ース濃度］・９０ゲナーゼ酵素ｚ、ｃ、 ｔ １．９９
．１７はその他の糖類（例えばガラクトース１，５よび
一マンノース）に対して多少低い活性を有−「ろが、そ
のことは検定条件下では重大でＧ丁７ｆい。
マイケリス（Ｍ １．ｃｂθ１１Ｂ）定数ｌぐ１【１は
、酵素触媒反応が飽和状態（無ｊｌｌｔ ）基質？ｆｌ
ｊ １１３：で示すそり）理論的反応速度の半分の速度
で１６行するときの酵素Ｊ）ための基質濃度である。ア
シネトノくフタ−からのグルコースデヒドロゲナーゼＥ
、 ０．１．１．９９．１７についての定数Ｋｒｎは約
２ｍＭで、し）イ）０アス２ルギＡ′ス・オリザエから
のグルコースデヒドロゲナーゼＥ、 Ｇ、 １． ｌ。
、酵素触媒反応が飽和状態（無ｊｌｌｔ ）基質？ｆｌ
ｊ １１３：で示すそり）理論的反応速度の半分の速度
で１６行するときの酵素Ｊ）ための基質濃度である。ア
シネトノくフタ−からのグルコースデヒドロゲナーゼＥ
、 ０．１．１．９９．１７についての定数Ｋｒｎは約
２ｍＭで、し）イ）０アス２ルギＡ′ス・オリザエから
のグルコースデヒドロゲナーゼＥ、 Ｇ、 １． ｌ。
９９１０にライての定数Ｋｍハ約１２０ｍＭである。こ
の結果として、基質濃度に対して反応速度が直線的に比
例する有用範囲がこれら二つの酵素について１０倍異な
ることになる。従って測定されるべきグルコース濃度が
小さいときには低いＫｍ １ｌＮｔ’、’ａ：有する酵
素（この場合にはＥ、 ｃ、 １． ｔ９９．１７）を
用いるのが１ｊｆましい。反対に、血清試料の場合に良
（見られるように、測定されるべきグルコース濃度が比
較的に高いかも知れない時には、高いＫｍ値を有する酵
素（この場合にはＥ、Ｃ。
の結果として、基質濃度に対して反応速度が直線的に比
例する有用範囲がこれら二つの酵素について１０倍異な
ることになる。従って測定されるべきグルコース濃度が
小さいときには低いＫｍ １ｌＮｔ’、’ａ：有する酵
素（この場合にはＥ、 ｃ、 １． ｔ９９．１７）を
用いるのが１ｊｆましい。反対に、血清試料の場合に良
（見られるように、測定されるべきグルコース濃度が比
較的に高いかも知れない時には、高いＫｍ値を有する酵
素（この場合にはＥ、Ｃ。
１、１．９９．１０ ）を用いるのが好ましい。
本発明を以下の実施例によりｈ；（、明する。
実施例 １゜
使用
（ａ） 酵素精製
アシネトバクタ−・カルコアセチフス菌株ＮＧＴ０７８
４４の凍結細胞ベレットを燐ｒ俊塩緩ＹＪｊ液（５０ｍ
Ｍ、 ｐＨ７，０）中に再懸濁させ、その細胞を超音波
で破壊した（６×２分間振動、渦振動の間に２分間の間
隔）。細＆ｌ滓を遠心分離により５０．００ Ｏｒｐｍ
で６０分間にわたり除去し、得られた液を、ｐＨ７，０
の５ ［］ ｎ＋Ｍ燐酸塩緩衝剤液に対して一晩透析し
てから、予め同じ緩゛衝剤′ＩｆＶで平衡比ｔ７てあっ
たＤＥＡＥ ｌ−セファＬｌ −ス（＋５Ｏｐｈａｒｏ
ｓｅ月カラムに適用した。これらの条件下では、グルコ
−ステヒドロゲナーゼ酵素はカラムに結合されないが、
その酵素に付帯する不純物の殆んどはカラムに結合され
る。従って酵素はカラムを通’＋（４Ｌ、その酵素を含
むフラクションが回収された。このように１〜て得られ
た精製酵素を濃縮し、保存した。
４４の凍結細胞ベレットを燐ｒ俊塩緩ＹＪｊ液（５０ｍ
Ｍ、 ｐＨ７，０）中に再懸濁させ、その細胞を超音波
で破壊した（６×２分間振動、渦振動の間に２分間の間
隔）。細＆ｌ滓を遠心分離により５０．００ Ｏｒｐｍ
で６０分間にわたり除去し、得られた液を、ｐＨ７，０
の５ ［］ ｎ＋Ｍ燐酸塩緩衝剤液に対して一晩透析し
てから、予め同じ緩゛衝剤′ＩｆＶで平衡比ｔ７てあっ
たＤＥＡＥ ｌ−セファＬｌ −ス（＋５Ｏｐｈａｒｏ
ｓｅ月カラムに適用した。これらの条件下では、グルコ
−ステヒドロゲナーゼ酵素はカラムに結合されないが、
その酵素に付帯する不純物の殆んどはカラムに結合され
る。従って酵素はカラムを通’＋（４Ｌ、その酵素を含
むフラクションが回収された。このように１〜て得られ
た精製酵素を濃縮し、保存した。
ＤＥＡＥ ［−ヒフアロ〜ズ１カラムを用いての精製前
の粗エキスは、０．６８ ｆｔモル／分／）ｌｌｙ蛋白
の比活性を有した。上記処理後のわ１を製品は、ノノラ
ノ・に適用した酵素のうちの８９係の回収率において、
３．２．”モル７分／”’ｊ イｌｉ白の比活性を有１
〜だ（すなわち精製の結果どして比活性の約５倍の増加
がル）つた）。この４＋！７製酵素をグルコース検定混
合物の製１告に用いた。
の粗エキスは、０．６８ ｆｔモル／分／）ｌｌｙ蛋白
の比活性を有した。上記処理後のわ１を製品は、ノノラ
ノ・に適用した酵素のうちの８９係の回収率において、
３．２．”モル７分／”’ｊ イｌｉ白の比活性を有１
〜だ（すなわち精製の結果どして比活性の約５倍の増加
がル）つた）。この４＋！７製酵素をグルコース検定混
合物の製１告に用いた。
（１））グルコース検定
十Ｍｌ：の」、５にして得られた梢製酵累を用いて、下
記のグルコース検定混合物も・作った。
記のグルコース検定混合物も・作った。
ｌル＝ｒ−ステヒト’ｏｌ’−）−−１’ ： ３０
ミ！Ｊ−’ｌ’−位／ｎｔｌ検定？］１合物 ２．６−ｖクロルフェノニルインド１フェノール＝５０
μＭｐＨ６＊で添加の燐ｆｉ２ ＪｌＫ ｔ’ｃ （＋
ｌｉ７剤： ５０ ＋ｎ）Ａ水を添加して指示濃度とし
ｌ、−０ （？］： ：酵素活ｌｌｌ−ノＩ’ｒ’Ａ 準Ｌｉｌ
ｌｌ’Ｘ ＋ｌｉ Ｏ’ｒ、 ハ、１μモル／分／ｌη
／１．４白である）。
ミ！Ｊ−’ｌ’−位／ｎｔｌ検定？］１合物 ２．６−ｖクロルフェノニルインド１フェノール＝５０
μＭｐＨ６＊で添加の燐ｆｉ２ ＪｌＫ ｔ’ｃ （＋
ｌｉ７剤： ５０ ＋ｎ）Ａ水を添加して指示濃度とし
ｌ、−０ （？］： ：酵素活ｌｌｌ−ノＩ’ｒ’Ａ 準Ｌｉｌ
ｌｌ’Ｘ ＋ｌｉ Ｏ’ｒ、 ハ、１μモル／分／ｌη
／１．４白である）。
反応は、グルコース含有試オ・１（検定混合物中Ｏ〜（
）、 １５ ｎｌｌν（）の添加により開始さＶ、その
反応速度は約１ｆ月１１１にわたり６ ［］ Ｏｌｕτ
１に１．ｓいて吸光度を’ｌ！＃祝−「ろことにより測
定した。１１） ＪＬＩＩ ｉ・ｌｉ度は外挿法により
決定した。
）、 １５ ｎｌｌν（）の添加により開始さＶ、その
反応速度は約１ｆ月１１１にわたり６ ［］ Ｏｌｕτ
１に１．ｓいて吸光度を’ｌ！＃祝−「ろことにより測
定した。１１） ＪＬＩＩ ｉ・ｌｉ度は外挿法により
決定した。
得られた結果は第１図にグラフ−（・示されておりｊｔ
ｌ＋ ｊＪ、１．グルコースの一連の水ｆ＊ ｒｔ’ｉ
、才／、−け公知濃度のグルコースを含む標亭化血清試
、ｔ１を用いて得られたものである。各場合に１０μ！
、の試料を、ｌ ｍｌの反応容積に対して添加した。反
応速度は試験ｌ〜だ範囲にわたってグルコース（、賜度
に対し正比例１２ていた。面清試第４で１ｉＪられ／、
二結果は、ｌｉ’ｌｌ！粋グルコース溶液で得られた結
果ど良く一致ｌ−た。
ｌ＋ ｊＪ、１．グルコースの一連の水ｆ＊ ｒｔ’ｉ
、才／、−け公知濃度のグルコースを含む標亭化血清試
、ｔ１を用いて得られたものである。各場合に１０μ！
、の試料を、ｌ ｍｌの反応容積に対して添加した。反
応速度は試験ｌ〜だ範囲にわたってグルコース（、賜度
に対し正比例１２ていた。面清試第４で１ｉＪられ／、
二結果は、ｌｉ’ｌｌ！粋グルコース溶液で得られた結
果ど良く一致ｌ−た。
２ＦＪ 図に示ｔｊ、＝グラフにｔｔ； １．− Ｃ１
６０（ｌ ｎ ＩＩＩにＩｄける１分当りの初期吸光度
減少を本１１′軸として、（１１ｒ軸の検定混合物中の
グルコース濃度（ｍ）Ａ ）に７・ゴしてプロットした
。このグラフのζ諭」下記の通りである。
６０（ｌ ｎ ＩＩＩにＩｄける１分当りの初期吸光度
減少を本１１′軸として、（１１ｒ軸の検定混合物中の
グルコース濃度（ｍ）Ａ ）に７・ゴしてプロットした
。このグラフのζ諭」下記の通りである。
Ｏ・・・力（留水中のグルコース１７７ 、ｖ！液を用
（・て？Ｕた点。
（・て？Ｕた点。
′騙・・・・バロウス・ウエルプノム１１．から？：Ｉ
られＩ、−（７ツへＩＩ血？〆１を用い−〔旬た点。
られＩ、−（７ツへＩＩ血？〆１を用い−〔旬た点。
実施例 ２゜
（ａ） Ｎ’ｌメ４１′青製
アスはルギルス・オリザコーＡＴｅａ ９１０２の凍結
細胞イレットをメツｉ酸Ｉｎ Ｕｊ ／ｊｉｉ ／′ｃ
す（５［，１ｍ１４． ｐＨ７，０）中に内ＲＳＩ！ｌ
蜀させ、その斥用胞をノＩラスビーズ（０，５７Ｒ肩直
径）と共に超音波で破壊した（４×２分間振動、各振動
の間に２分間の間隔）。細胞滓を遠心分離により５０．
００Ｏｒｐｍで６０分間にわたり除去し、イ！Ｉられた
液ケ、ｐＨ７，０の５０口１Ｍ燐酸緩ｌｉｊ削に対して
一晩透析してから、予め同じ緩衝剤で平衡化してあった
Ｉ）Ｆ、ＡＥ［セファロース−ｊカラムニ適用した。グ
ルコ−スジヒト９０ゲノ゛−ゼはカラムに結合され／ｆ
かったが、不純物の殆んどはこれらの条件下で結合され
た。従って酵素はカラムを通過し、酵素を含むフラクシ
ョンが回収された。このようにして１１１られた精鋼酵
素を濃縮ｒ６よび保存した。
細胞イレットをメツｉ酸Ｉｎ Ｕｊ ／ｊｉｉ ／′ｃ
す（５［，１ｍ１４． ｐＨ７，０）中に内ＲＳＩ！ｌ
蜀させ、その斥用胞をノＩラスビーズ（０，５７Ｒ肩直
径）と共に超音波で破壊した（４×２分間振動、各振動
の間に２分間の間隔）。細胞滓を遠心分離により５０．
００Ｏｒｐｍで６０分間にわたり除去し、イ！Ｉられた
液ケ、ｐＨ７，０の５０口１Ｍ燐酸緩ｌｉｊ削に対して
一晩透析してから、予め同じ緩衝剤で平衡化してあった
Ｉ）Ｆ、ＡＥ［セファロース−ｊカラムニ適用した。グ
ルコ−スジヒト９０ゲノ゛−ゼはカラムに結合され／ｆ
かったが、不純物の殆んどはこれらの条件下で結合され
た。従って酵素はカラムを通過し、酵素を含むフラクシ
ョンが回収された。このようにして１１１られた精鋼酵
素を濃縮ｒ６よび保存した。
Ｄ Ｅ Ａ ｆｉｌ、セファローズを用いての精製前の
粗エキスは０．０２μモ゛ル／分／ηイ１ｆ白の比活性
を有したが、これは上記処理によって、カラムへ適用さ
れた酵素の９２％の回収率で、０．１６μモル／分乙ν
蛋白の比活性に十で増大された（約）３倍のｉｃｙ製）
。＋＋’ｌ製品をグルコース検定（１４合物の製造に用
（・た。
粗エキスは０．０２μモ゛ル／分／ηイ１ｆ白の比活性
を有したが、これは上記処理によって、カラムへ適用さ
れた酵素の９２％の回収率で、０．１６μモル／分乙ν
蛋白の比活性に十で増大された（約）３倍のｉｃｙ製）
。＋＋’ｌ製品をグルコース検定（１４合物の製造に用
（・た。
（旬 グルコース検定
上記で得られた酵素を用いて下記のグルコース検定混合
物を作った。
物を作った。
グルコース・デヒト９０ゲナーゼ：２５ミリ単位／ｍｅ
（ｋ定（１７１合物 ２、１１５− ：）クロルフェノールインビフェノール
： １００／’ｍ燐酸＋、１緩前剤（ｐ１４６．５
） ： ５０ｍＭこれらを指示濃度にするため水にｆｅ
： １１／Ｆｌ〜だ。
（ｋ定（１７１合物 ２、１１５− ：）クロルフェノールインビフェノール
： １００／’ｍ燐酸＋、１緩前剤（ｐ１４６．５
） ： ５０ｍＭこれらを指示濃度にするため水にｆｅ
： １１／Ｆｌ〜だ。
反応は、グ化コース含有試１−巨検定混合物中に０〜２
ｍＭを与えろ）の添加により開始させ、反応速度は６０
０ ｎｍ ＩｔＣｉａけろ吸バ；度ノ低’Ａ１１．’ａ
： 追＆’＋Ｉｌ’ −ｒ にとにより測定した。その
？／Ｊｌｔｌ１反応速度を測定１７た。
ｍＭを与えろ）の添加により開始させ、反応速度は６０
０ ｎｍ ＩｔＣｉａけろ吸バ；度ノ低’Ａ１１．’ａ
： 追＆’＋Ｉｌ’ −ｒ にとにより測定した。その
？／Ｊｌｔｌ１反応速度を測定１７た。
結果は第２図にグラフで示されており、純粋グルコース
の一連の水溶液を用いてイ；；られた。反ＩＣ）速度は
６・（験範囲にわたってグルコース濃度に対し正比例し
ていた。Ｊ６ｔ ？１’／試料で１！１られた結果（図
示せず）は、純粋グルコースを用いて（ｉ）られたこれ
らの結果と良く一致した。
の一連の水溶液を用いてイ；；られた。反ＩＣ）速度は
６・（験範囲にわたってグルコース濃度に対し正比例し
ていた。Ｊ６ｔ ？１’／試料で１！１られた結果（図
示せず）は、純粋グルコースを用いて（ｉ）られたこれ
らの結果と良く一致した。
第２図に示したグラフにおいて６００ｒｏｎにおける１
分間当りの初期吸光度（１ｉ減速度（Ｗ：・Ｉｔｌ＋
） ｌａ′、横軸のグルコース濃度（検定混げ物中のｍ
Ｍ）に灼してプロットした。
分間当りの初期吸光度（１ｉ減速度（Ｗ：・Ｉｔｌ＋
） ｌａ′、横軸のグルコース濃度（検定混げ物中のｍ
Ｍ）に灼してプロットした。
第１図は、実７１ｉｉ例１の結果を示すグラフであり、
縦軸は６００ｎｍにおける初期１分間尚りの吸光度低減
速ハＬ ｓ １＋ｑ軸は検定混合物中のグルコース濃度
（＋ｎＭ）である。 第２図は実施例２の結果を示すグラフであり、七の縦、
（館（４１１は第１図と同じである。 特約・出願人 インハリアル・ケミカル・インダスｉ
・リーズ・ピーエルシ− 手続補正書（方式） １事件の表示 昭和Ｘ７年、に１１ｆ願第 つフ２１ノ 号り１（
、ツー２ω二９すｉＬ ７） ：？、す↓−ｔ−１／
ｎ＝ Ｄ−スｋ ’ｒ’ｊ＝τＡ＜ンン勿 ３補正をする者 事件との関係 出 願 人 住所 名♀゛【 インへ５１１アい１７Ｅ力１し イアデス１
−１１−スじ０−こルー− ４代理人
縦軸は６００ｎｍにおける初期１分間尚りの吸光度低減
速ハＬ ｓ １＋ｑ軸は検定混合物中のグルコース濃度
（＋ｎＭ）である。 第２図は実施例２の結果を示すグラフであり、七の縦、
（館（４１１は第１図と同じである。 特約・出願人 インハリアル・ケミカル・インダスｉ
・リーズ・ピーエルシ− 手続補正書（方式） １事件の表示 昭和Ｘ７年、に１１ｆ願第 つフ２１ノ 号り１（
、ツー２ω二９すｉＬ ７） ：？、す↓−ｔ−１／
ｎ＝ Ｄ−スｋ ’ｒ’ｊ＝τＡ＜ンン勿 ３補正をする者 事件との関係 出 願 人 住所 名♀゛【 インへ５１１アい１７Ｅ力１し イアデス１
−１１−スじ０−こルー− ４代理人
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１） 適切に緩衝化した媒質中の（１）ピロロキノ
ン従ＩＡグルコースデヒ］゛ロゲナーゼ酵素Ｅ、Ｃ，第
１゜１、９９．１７３土たはフラビン従い１グルコース
テヒドロナーゼ酵累Ｅ、 Ｇ、第１１．９９．１１．１
シ（および（１」）還元されて電（１−（″ｉ輻射吸収
特件の食出ｊＪよび／′または′１１Ｌ気的変化を生じ
させろことができろ＆１元可能化合物、からなる検定混
合物とグルコース含有流体の試料な接触させろ、６Ｉｅ
体中に存在するノルコースの６１１１定方法。 （２） グルコース含有６１Ｕ体（ｊ生理液であろ７
）’５ｒｌ・請求の範囲第１項に記載の方法。 （３）調製した検定混合物も・グルコース含４ｉ ？＋
Ｉｃ体に対して添加すること、お」−び媒質を適切な方
法で緩柚ｊ化することを特徴とする！１、テ許８青求の
範囲第１またけ２項に記載の方法。 （４）検定混合物の諸成分をグルコース含有６１ｆ、体
に添加することによりその場で検定混合物を作ること、
および媒質を適切な方法で緩衝化することを特徴とする
特許請求の範囲第１または２項に記載の方法。 （５） グルコースデヒ］パロゲナーゼ酵素は、アセ
トバクター、アシネトバクタ−、グルコノバクタ−また
はシュート９モナスの＋′Ｉ１４１朱から誘導されたＥ
。 Ｃ１第１．１．９９．１７号である特許請求の範囲第１
〜４項のいずれかに記載の方法。 （６）グルコースデヒｌ’ロゲナーゼ酵素は、アシネト
バクタ−・ノノルコアセチクスＩＷ 株ｔＪ ＣＴ Ｇ
Ｗ ６（。 第７８４４号から誘導されたものである特許請求の範囲
第５項に記１しくの方法。 （カ グルコースデヒ１０ゲノーービ酵素は、アスペル
ギルスの菌株から８／ｌ導されｌ、：Ｉｉ：、Ｃ，第１
．１゜９９１０号である特許請求の範囲第１〜４項のい
ずれかに記載の方法。 （８）グルコース含有）、′ロゲナーゼ酵素は１、アス
はルギルス・クリザエ菌株Ａ ’Ｆ ＣＣ寄託第９１０
２号から誘２ｊ！、されたものである４＞ １’■＋Ｖ
求のψ］）囲第７項に記載の方法。 （９）猫元可能化合物は、還元されて電磁輻射吸収特性
の変化を生じうる染料化合物である特許請求の範囲第１
〜８ＩＪ１のいずれかに記載の方法。 Ｏｆ＋） 染事」化合物は、還元されて４５０＋ｕｎ
〜７００ｎｍのスはりｌ・ル領域におけろ電磁波輻射吸
収特性の変化を生じうろものであるｌ′Ｆ！ｉボ１；請
求の範囲第９項に記載の方法。 （１１）染料化合物は、２，６−ジクロルフェノールの
酸化へ１２である特許ｈＩＪ求の口；１）囲ｖ＋ｓ １
ｏ項に記載の方法。 （１カ 紙製試験片を血液、圧出た４：ｒ、 ＋（＋ｔ
（ｆｔの検定に用いる’ｔ’ｚｒＦ請求の範囲第９〜１
１項のいずれかに記載の方法。 （１：タ 染料化合物は、ニド「ノブルー・テトラゾ
リウムとフェナジンメトザルフェート止たはツェナ−）
／工ｉ・ヅルフエ−１・とのγＩＬ合物である特πｆＮ
＋’Ｊ求の＋ｌ１ｉｘ囲第１２項第１２の方法。 （目）、：’！：Ｌ元’＋Ｊ’ ｆｉヒ化合′吻は、そ
の還元によって′１１も気的変化も・生じさせうろイ、
のであ’！ｌ ’ｌ’４ ｉｒｌ’ ｎｒ’ｊ求の範囲
第１〜８項のいずれかに記載の方法。 ０！９ 電気的変化を電気分析法で監視する特許請求
の範囲第１４項に記載の方法。 （ｌＦ９ ’Ｍで１気的変化を’ｆｌｔ （ｉン差分
析（ｌｉで監視−ｆ−，ζ）特θ′［請求の範囲第１４
項に記載の方法。 （１７） グルコース含有流体の試ネ４０．５〜５０
μｔまたはそれを稀釈したものの等価容１°ｋを、検定
γＩＬ合物を含む緩衝化媒質０．１〜５ ＋ｌＩ／−に
添加する特許ｇ／４求の範囲第１〜１６項のいずれかに
記載の方法。 （１〜 （１） ピロロキノンにｆ、 ４．（１グル
コースデヒビロゲナーゼ酵素Ｅ、ｃ、第１．１．９９．
１７号またはフラビンｔＬ ｂ’Ａ ！ルコースデヒト
頴ゲナーゼ酵素Ｅ、 Ｃ。 第１．１．９９．１０りと、 （ＩＩ）還元され−（１ｔ（、ｔ＋’）Ｘ Ｎ−“、１
射１１女収ｌト！を性の変化１、；」、び／または電気
的変化を生じさＶることができる爾元可ｉ）シ化合物と
、 からなるグルコース検定混合物。 （１１１グルコース検定）パロゲナーゼ１１ｒメ・１（
Ｊ、ずにトバクター、アシネトバクタ−、グルコノバク
タ−シトｌこはシ；１ ・１．’−をニブ゛スσ’ ｌ
’＋’ｌ Ｉ十からｒｉ＃ｉ）、りさＪ＋ ７．−１＋
：。 Ｃ１第１．１．９９．１７号である特許請求の範囲第１
８項に記載のグルコース検定混合物。 （２（１１グルコースデヒドロゲナーゼ酵素は、アシネ
トバクタ−・ノノルコアセチクスＮ０ＴＯ寄託第７８４
４号から誘導されたものである特ｉ′ト請求の範囲第１
９．１１′ｔに記載のグルコース検定７１Ｌ合物。 （２」）グルコースデヒドロゲナーゼｒ＋￥素は、アス
はルギルスの菌株から訪梼、され１．、、 ＋＊：、
ｃ、第１．１．９９゜１０号である特許請求の範囲第１
８項に記載のグルコース検定混合物。 （２功 グルコ−スゲヒト９０ゲナーゼ酵メくは、アス
はルギルス・フリザエ１？イ味ＡＴＣＣ寄託第９１０２
−号から誘２．すされたものである特＃Ｉ：Ｎｌ’Ｊ求
の範囲第２１項に記）ｌ戊のグルコース検定混合物。 （２：ｌ） 還元可能化合物は１、：（ｑｔ元きＪじ
（電磁輻射吸収特性の変化を生じさせうる染１１化自−
物である特π１・請求の範囲第１３３〜２２項のいずＪ
＋かに記載のグルコース検定？′ｌｉ、合物。 （、！、＋１ 染料化合物は１．べ°１元されて４５
０ｎｍ 〜７００ｎｍのスはりトル’１ｉｆｊ域におけ
る回磁ｉ１ｉ’、ｌ射吸収Ｍｆ性の変化を生じさせうる
ものである特許請求の範囲第２６項にｉｒ］載のグルコ
ース検定混合物。 Ｑつ 染第１化合物は、２．６−ジクロルフェノールの
酸化型である特許請求の範囲第２４項に記載のグルコー
ス検定混合物。 シ（０還元可能化合物は、１′歳元されてＩＬ電気的変
化生じさせうるものである時ａ′目−４求の範囲第１８
〜２２項のいずれかに記載のグル：１−ス検定γｌ／、
合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8213207 | 1982-05-07 | ||
| GB8213207 | 1982-05-07 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5925700A true JPS5925700A (ja) | 1984-02-09 |
Family
ID=10530218
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7921183A Pending JPS5925700A (ja) | 1982-05-07 | 1983-05-06 | グルコ−スの測定方法およびグルコ−ス検定混合物 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0094161A1 (ja) |
| JP (1) | JPS5925700A (ja) |
| CA (1) | CA1210310A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2004058958A1 (ja) * | 2002-12-24 | 2006-04-27 | 池田食研株式会社 | 補酵素結合型グルコース脱水素酵素 |
| EP2365074A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-09-14 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US8492130B2 (en) | 2006-06-29 | 2013-07-23 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | FAD-conjugated glucose dehydrogenase gene |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8608435D0 (en) * | 1986-04-07 | 1986-05-14 | Cranfield Inst Of Tech | Specific binding assays |
| US5037738A (en) * | 1987-06-03 | 1991-08-06 | Abbott Laboratories | Simultaneous assay for glucose and urea |
| JP2796150B2 (ja) * | 1989-12-20 | 1998-09-10 | 株式会社ヤトロン | フルクトサミンの測定方法 |
| FI905324A (fi) * | 1990-10-29 | 1992-04-30 | Valtion Teknillinen | Enzymatiskt bestaemningsfoerfarande foer aldoser. |
| DE19521019A1 (de) * | 1995-06-13 | 1996-12-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Mittel zur gleichzeitigen kolorimetrischen und elektrochemischen Messung eines Analyten |
| US20080090278A1 (en) * | 2006-03-31 | 2008-04-17 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Method for enhancing stability of a composition comprising soluble glucose dehydrogenase (gdh) |
| CN101454443A (zh) * | 2006-05-29 | 2009-06-10 | 天野酶株式会社 | 黄素腺嘌呤双核苷酸结合型葡萄糖脱氢酶 |
| CN114689736A (zh) * | 2020-12-30 | 2022-07-01 | 上海医药集团股份有限公司 | 一种灵芝多糖含量的检测方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3009862A (en) * | 1958-10-06 | 1961-11-21 | Samuel And Lena Sussman Trust | Method for determining glucose levels in blood and other biological fluids |
| US2999052A (en) * | 1959-03-16 | 1961-09-05 | Miles Lab | Composition for colorimetric test for serum enzymes |
| US3506544A (en) * | 1964-10-09 | 1970-04-14 | Magna Corp | Method of determining microbial populations,enzyme activities,and substrate concentrations by electrochemical analysis |
| CH548029A (de) * | 1971-03-30 | 1974-04-11 | Hoffmann La Roche | Mittel zum glucosenachweis. |
| CS164231B2 (ja) * | 1972-09-28 | 1975-11-07 | ||
| US4120755A (en) * | 1977-04-28 | 1978-10-17 | Beckman Instruments, Inc. | Kinetic method for determination of glucose concentrations with glucose dehydrogenase |
| CA1141637A (en) * | 1979-10-10 | 1983-02-22 | Erma C. Cameron | Cofactor indicator compositions |
-
1983
- 1983-04-15 EP EP83302145A patent/EP0094161A1/en not_active Withdrawn
- 1983-05-06 JP JP7921183A patent/JPS5925700A/ja active Pending
- 1983-05-06 CA CA000427632A patent/CA1210310A/en not_active Expired
Cited By (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2004058958A1 (ja) * | 2002-12-24 | 2006-04-27 | 池田食研株式会社 | 補酵素結合型グルコース脱水素酵素 |
| JP4494978B2 (ja) * | 2002-12-24 | 2010-06-30 | 池田食研株式会社 | 補酵素結合型グルコース脱水素酵素 |
| US10988738B2 (en) | 2002-12-24 | 2021-04-27 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-binding glucose dehydrogenase |
| US11155789B2 (en) | 2002-12-24 | 2021-10-26 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-binding glucose dehydrogenase |
| US11225645B2 (en) | 2002-12-24 | 2022-01-18 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-binding glucose dehydrogenase |
| US11345897B2 (en) | 2002-12-24 | 2022-05-31 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-binding glucose dehydrogenase |
| US9328372B2 (en) | 2005-03-25 | 2016-05-03 | Ikeda Food Research Co., Ltd | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10626434B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-04-21 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US8691547B2 (en) | 2005-03-25 | 2014-04-08 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| EP2380981A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-10-26 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10883133B2 (en) | 2005-03-25 | 2021-01-05 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| EP2368987A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-09-28 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| EP2365073A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-09-14 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US9957543B2 (en) | 2005-03-25 | 2018-05-01 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| EP2365074A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-09-14 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| EP2380980A1 (en) | 2005-03-25 | 2011-10-26 | Ikeda Food Research Co. Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10626433B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-04-21 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10648011B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-05-12 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10669565B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-06-02 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10738341B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-08-11 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10808274B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-10-20 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10815515B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-10-27 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US10851398B2 (en) | 2005-03-25 | 2020-12-01 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Coenzyme-linked glucose dehydrogenase and polynucleotide encoding the same |
| US8492130B2 (en) | 2006-06-29 | 2013-07-23 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | FAD-conjugated glucose dehydrogenase gene |
| US9976125B2 (en) | 2006-06-29 | 2018-05-22 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | FAD-conjugated glucose dehydrogenase gene |
| US9663811B2 (en) | 2006-06-29 | 2017-05-30 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | Biosensor comprising glucose dehydrogenase |
| US9340816B2 (en) | 2006-06-29 | 2016-05-17 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | FAD-conjugated glucose dehydrogenase gene |
| US8882978B2 (en) | 2006-06-29 | 2014-11-11 | Ikeda Food Research Co., Ltd. | FAD-conjugated glucose dehydrogenase gene |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1210310A (en) | 1986-08-26 |
| EP0094161A1 (en) | 1983-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0426624B2 (ja) | ||
| US4211844A (en) | Bilirubin-specific fungal enzyme preparation | |
| JPH0646846A (ja) | フルクトシルアミンデグリカーゼ、その製造法及び該酵素を用いたアマドリ化合物の定量方法 | |
| JPS5925700A (ja) | グルコ−スの測定方法およびグルコ−ス検定混合物 | |
| Moore et al. | Enzymically amplified voltammetric sensor for microliter sample volumes of salicylate | |
| JPS5850719B2 (ja) | トリグリセライドの定量方法 | |
| JPS5819279B2 (ja) | Ｎａｄ（ｐ）ｈ又はサリチル酸塩を測定する方法及び試薬 | |
| CN112763563A (zh) | 一种基于复合材料改性laps芯片检测1,5-脱水葡萄糖醇的方法 | |
| JP2005118014A (ja) | 分析方法およびそれに用いる試薬 | |
| Wuntch et al. | Studies on rates of abortive ternary complex formation of lactate dehydrogenase isozymes | |
| WO1984004328A1 (en) | Process for preparing bilirubin oxidase | |
| De Marcos et al. | Enzymatic determination of ethanol based on the intrinsic fluorescence of alcohol dehydrogenase | |
| KR880012754A (ko) | 신규의 모노글리세라이드 리파제와 그 제조방법 및 이것을 이용한 분석방법 | |
| CN101221129B (zh) | 磺酸化胆汁酸酶荧光毛细分析法及酶荧光定量试剂盒 | |
| Yi et al. | A novel sensitive DNAzyme-based optical fiber evanescent wave biosensor for rapid detection of Pb 2+ in human serum | |
| CN106645071B (zh) | 基于纳米氧化铜测定脲酶的方法 | |
| JPH0650299B2 (ja) | サリチレートの検出方法 | |
| Liu et al. | A Label-free Optical Sensing Platform for Beta-glucosidase Activity Using Protein-inorganic Hybrid Nanoflowers | |
| JP2872983B2 (ja) | １，５−アンヒドログルシトールの定量法及び定量用試薬 | |
| CN110699422A (zh) | 一种基于金纳米簇荧光增强的乳酸检测方法 | |
| JP2001204494A (ja) | 糖化ヘモグロビンの測定キット | |
| Ronzhin et al. | Reusable System for Phenol Detection in an Aqueous Medium Based on Nanodiamonds and Extracellular Oxidase from Basidiomycete Neonothopanus nambi | |
| CN112697720B (zh) | 基于汞离子增敏锇纳米粒子氧化酶活性的肝素酶检测方法 | |
| EP0166505A2 (en) | Isolation and quantitation of alkaline phosphatase | |
| JPS62175197A (ja) | Ｌ−フコ−スの定量方法 |