JPS59187800A - 活性化された部分トロンボプラスチン時間の測定法 - Google Patents
活性化された部分トロンボプラスチン時間の測定法Info
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- JPS59187800A JPS59187800A JP59057507A JP5750784A JPS59187800A JP S59187800 A JPS59187800 A JP S59187800A JP 59057507 A JP59057507 A JP 59057507A JP 5750784 A JP5750784 A JP 5750784A JP S59187800 A JPS59187800 A JP S59187800A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は活性化された部分トロンボプラスチン時間（以
下［ＡＰＴＴ Ｊと略記する）の測光測定法フ、「らび
にそれに適する試薬に関する。
下［ＡＰＴＴ Ｊと略記する）の測光測定法フ、「らび
にそれに適する試薬に関する。
活性化された部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ’Ｊ
’）の測定はトロンボプラスチン時間（プロトロンビン
時間、クイック値）と並んで最もしばしば実施される凝
固試験である。Ａ Ｐ Ｔ ’Ｉ’により凝固の内因性
経路の挙動について結論をひき出すことができる。この
試験のもう一つの重要な用途はへノミリン療法の制御に
ある。ＡＰＴ’ｌｒは高分子キニノーゲン、プレカリク
レインおよび花店因子、第Ｘ因子、第Ｘ因子、第Ｍｆｆ
因子、第Ｖ因子および第１因子、それと並んでまた凝固
抑制剤特にヘパリン療法でのアンチトロンビン■および
フィブリノーゲン分解産物（アンチトロンビン■）に対
しても感受性であり、これらはすべてＡＰＴＴ 全延長
させるものである。
’）の測定はトロンボプラスチン時間（プロトロンビン
時間、クイック値）と並んで最もしばしば実施される凝
固試験である。Ａ Ｐ Ｔ ’Ｉ’により凝固の内因性
経路の挙動について結論をひき出すことができる。この
試験のもう一つの重要な用途はへノミリン療法の制御に
ある。ＡＰＴ’ｌｒは高分子キニノーゲン、プレカリク
レインおよび花店因子、第Ｘ因子、第Ｘ因子、第Ｍｆｆ
因子、第Ｖ因子および第１因子、それと並んでまた凝固
抑制剤特にヘパリン療法でのアンチトロンビン■および
フィブリノーゲン分解産物（アンチトロンビン■）に対
しても感受性であり、これらはすべてＡＰＴＴ 全延長
させるものである。
ＡＰＴＴ測定のための試薬は本質的に燐脂質および適当
な「接触相」活性剤を含有する。接触活性化により花店
因子が活性化され、次にこれが第Ｘ因子およびプレカリ
クレイン全活性化する。
な「接触相」活性剤を含有する。接触活性化により花店
因子が活性化され、次にこれが第Ｘ因子およびプレカリ
クレイン全活性化する。
次に試薬中に含有される脂質およびカルシウムイオンに
より全内因性経路の活性化が起こり、これはフィブリン
凝血塊形成で終了する。この時点までに必要な時間が測
定助変数である。
より全内因性経路の活性化が起こり、これはフィブリン
凝血塊形成で終了する。この時点までに必要な時間が測
定助変数である。
接触相の活性剤としては無機物質特にシーライトまたは
カオリンが使用される。それらと並んでエラグ酸も使用
される（米国特許第３，４８６，９８１号明細書および
ドイツ特許出願公開用２９１５３１０号明細書参照）。
カオリンが使用される。それらと並んでエラグ酸も使用
される（米国特許第３，４８６，９８１号明細書および
ドイツ特許出願公開用２９１５３１０号明細書参照）。
エラグ酸は光学的に明瞭な試薬として凝血塊形成の検出
のための光学的１ｔｌｌｌ定法における利点を有する。
のための光学的１ｔｌｌｌ定法における利点を有する。
１−かしながらＪＢｉ○ｃｈｅｍｊ Ｓ ｔｒｙ−Ｊ第
２０巻第７２５８〜７２６６頁（１９８２年）によれば
有効な種類は金属イオンとエラグ酸との水不溶性複合物
であるべきである。もう一つの活性剤は硫酸デキストラ
ンである。
２０巻第７２５８〜７２６６頁（１９８２年）によれば
有効な種類は金属イオンとエラグ酸との水不溶性複合物
であるべきである。もう一つの活性剤は硫酸デキストラ
ンである。
しかしながら接触相のこれら活性剤は非生理学的であり
そしてまた標準化困難でもある。例えば、カオリン活性
化されたＡＰＴＴの凝固時間は活性剤の粒子寸法に相当
依存する。またい（つかの凝固因子はかかる界面活性物
質に強く吸着されるのでこれらは接触因子の調失に吸着
剤として使用される。しかしながら、それと並んでかか
る試薬中に含有される燐脂質の組成もその結果にとって
重要である。凝血塊形成に至る本来の反応が「カルシウ
ム再添加」により開始される前の予備培養時間の長さも
重要な役割を演 ５− する。これは活性化された凝固因子が血漿性抑制剤特に
アンチトロンビン■により抑制されるからである。
そしてまた標準化困難でもある。例えば、カオリン活性
化されたＡＰＴＴの凝固時間は活性剤の粒子寸法に相当
依存する。またい（つかの凝固因子はかかる界面活性物
質に強く吸着されるのでこれらは接触因子の調失に吸着
剤として使用される。しかしながら、それと並んでかか
る試薬中に含有される燐脂質の組成もその結果にとって
重要である。凝血塊形成に至る本来の反応が「カルシウ
ム再添加」により開始される前の予備培養時間の長さも
重要な役割を演 ５− する。これは活性化された凝固因子が血漿性抑制剤特に
アンチトロンビン■により抑制されるからである。
凝固の生理学的活性剤としてはスルファチドが有効であ
る（ 「Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ第１９巻第１３２２〜１
３３０頁（１９８０年）および「Ｂｌｏｏｄ Ｊ第５９
巻第６９〜７５頁（１９８２年）参照〕。スルファチド
はグリコスフインゴリピツドの種類に属しそしてガラク
トース環にスルフェート基を含有する。
る（ 「Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ第１９巻第１３２２〜１
３３０頁（１９８０年）および「Ｂｌｏｏｄ Ｊ第５９
巻第６９〜７５頁（１９８２年）参照〕。スルファチド
はグリコスフインゴリピツドの種類に属しそしてガラク
トース環にスルフェート基を含有する。
この化合物群には脂肪酸鎖の様式が相異する種種の種類
が属している。これらはすべての組織中において膜特に
脳に多量に検出され、そこから非常に純粋な形態で取得
することもできる。
が属している。これらはすべての組織中において膜特に
脳に多量に検出され、そこから非常に純粋な形態で取得
することもできる。
スルファチドは血漿の接触活性化においてカオリンより
効果がある。
効果がある。
慣用のＡＰＴＴ測定の終点はフィブリン凝血塊の形成で
ある。かかる凝血塊の形成は測定技術的 ６− に追跡困難である。種々の機械的、電気的または光学的
方法全使用する多数の装置が開発された。
ある。かかる凝血塊の形成は測定技術的 ６− に追跡困難である。種々の機械的、電気的または光学的
方法全使用する多数の装置が開発された。
凝固因子にとって色原体基質が導入されて以来、これら
を凝固酵素の測定に使用することも試みられた。色原体
基質の長所は複雑な高分子性の天然基質と反対に低分子
性基質の簡単な標準化可能性にある。凝血塊の形成全測
定する問題はなくなった。
を凝固酵素の測定に使用することも試みられた。色原体
基質の長所は複雑な高分子性の天然基質と反対に低分子
性基質の簡単な標準化可能性にある。凝血塊の形成全測
定する問題はなくなった。
「全体的試験」の実施にもすでに色原体基質が用いられ
た。すなわち「Ｔｈｒｏｍｂｏｓ、 Ｒｅｓ、ｌ 第１
５巻第６５１〜３５８ Ｎ （１９７９年）にばＡＰＴ
Ｔ実施方法が記載されている。これは燐脂質、カルシウ
ムおよび色原体性トロンビン基質Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｊ
、ｐ−Ａ、ｒｇ−ｐＮＡ （８２２３Ｂ ）の存在下に
エラグ酸を用いる内因性経路の活性化に基つく（ここで
ｒ Ｐ ：ｉ、ｐ Ｊはビペコ）Ｊン酸を意味する）。
た。すなわち「Ｔｈｒｏｍｂｏｓ、 Ｒｅｓ、ｌ 第１
５巻第６５１〜３５８ Ｎ （１９７９年）にばＡＰＴ
Ｔ実施方法が記載されている。これは燐脂質、カルシウ
ムおよび色原体性トロンビン基質Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｊ
、ｐ−Ａ、ｒｇ−ｐＮＡ （８２２３Ｂ ）の存在下に
エラグ酸を用いる内因性経路の活性化に基つく（ここで
ｒ Ｐ ：ｉ、ｐ Ｊはビペコ）Ｊン酸を意味する）。
この方法の欠点は非生理的活性剤の使用、色原体水質の
特異性欠如訃よび極端に長い測定時間（通常およそ７４
分）である。個々の因子の感度については不完全なデー
タしか公表されてなかった。
特異性欠如訃よび極端に長い測定時間（通常およそ７４
分）である。個々の因子の感度については不完全なデー
タしか公表されてなかった。
もう一つの方法はＰ、 Ａｉｙａｐｐａ氏により「Ａｎ
ｎ。
ｎ。
Ｎｅｖｒ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、ｊ第８１２
〜８２１貞（１９８１年）に記載されている。この潰１
１定系においては血漿に燐脂質およびカルシウムイオン
の存在下にエラグ酸により５分間活性化しそしてその時
までに形成されたトロンビン全色原体基質を用いて測定
する。この方法はフィブリン形成を来し、それが活性ト
ロンビンを包囲する。またトロンビンは抑制によって再
び不活性化されうる。他方、病原性血漿はたとえ遅れた
としても本来それができるのであるが、選択された培養
時間内で全熱または不完全にしか活性化され侍ない。
〜８２１貞（１９８１年）に記載されている。この潰１
１定系においては血漿に燐脂質およびカルシウムイオン
の存在下にエラグ酸により５分間活性化しそしてその時
までに形成されたトロンビン全色原体基質を用いて測定
する。この方法はフィブリン形成を来し、それが活性ト
ロンビンを包囲する。またトロンビンは抑制によって再
び不活性化されうる。他方、病原性血漿はたとえ遅れた
としても本来それができるのであるが、選択された培養
時間内で全熱または不完全にしか活性化され侍ない。
Ａｉｙａｐｐａ氏により記載された方法では欠乏血漿に
おいては凝固全測定できない。
おいては凝固全測定できない。
今や驚くべきことに、色原体基質を用いる前記ＡＰＴＴ
法の不質的な欠点が特異性の高いトロンビン基質と組み
合せて生理学的活性剤としてスルファチドを使用するこ
とにより除去されうろことが見出された。
法の不質的な欠点が特異性の高いトロンビン基質と組み
合せて生理学的活性剤としてスルファチドを使用するこ
とにより除去されうろことが見出された。
それゆえ本発明は活性剤、凝固活性燐脂質または燐脂質
混合物、カルシウムイオンおよびトロンビンに対する色
原体基質を用い活性化された部分トロンボプラスチン時
間全測定するに当たり、活性剤がスルファチドまたはス
ルファチド混合物であること全特徴とする方法に関する
。
混合物、カルシウムイオンおよびトロンビンに対する色
原体基質を用い活性化された部分トロンボプラスチン時
間全測定するに当たり、活性剤がスルファチドまたはス
ルファチド混合物であること全特徴とする方法に関する
。
本発明はさらに、凍結された形態のスルファチド、燐脂
質、溶性カルシウム塩および色原体基質からなる活性化
された部分トロンビン時間測定の之めの試薬にも関する
。
質、溶性カルシウム塩および色原体基質からなる活性化
された部分トロンビン時間測定の之めの試薬にも関する
。
使用１〜うるスルファチドは、例えばセルパ ９−
（５ｅｒｖａ、 ）社、シダ？ （ＳｉＰｌｍａ ）社
またはスベルコ（８ｕｐｅｌｃｏ ）社から商業上入手
しうる。シリカケ゛ルでの薄層クロマトグラフィーで溶
媒がクロロホルム／メタノール／水（６５：２５：４）
の混合物である場合Ｒｆ値０．２〜０．３好ましくは０
．２５ヲ有しそしてクロロホルム／メタノール（４０：
１５）の場合Ｒｆ値０．２５〜０．６５好ましくは０．
３１會有するスルファチドが使用されるのが好ましい。
またはスベルコ（８ｕｐｅｌｃｏ ）社から商業上入手
しうる。シリカケ゛ルでの薄層クロマトグラフィーで溶
媒がクロロホルム／メタノール／水（６５：２５：４）
の混合物である場合Ｒｆ値０．２〜０．３好ましくは０
．２５ヲ有しそしてクロロホルム／メタノール（４０：
１５）の場合Ｒｆ値０．２５〜０．６５好ましくは０．
３１會有するスルファチドが使用されるのが好ましい。
しかしながらかかるスルファチドはまた記載された方法
、例えば［Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ第１００巻
第６６４〜３７０頁（１９７９年）に記載された方法に
より、または脳のアセトン抽出乾燥粉末からも取得され
うる。価値ある試験濃度は０．１〜５０μＩ／ｍｅであ
る。スルファチドははじめＴ）Ｈ７，６のＮ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
（以下［ＨＥＰＥＳＪと略記する）の５０ミリモル／ｌ
緩衝液中に０．０１Ｅ／ｌ’の濃度で懸−１〇− 濁させそして試薬の調製に使用されうる。
、例えば［Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ第１００巻
第６６４〜３７０頁（１９７９年）に記載された方法に
より、または脳のアセトン抽出乾燥粉末からも取得され
うる。価値ある試験濃度は０．１〜５０μＩ／ｍｅであ
る。スルファチドははじめＴ）Ｈ７，６のＮ−２−ヒド
ロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
（以下［ＨＥＰＥＳＪと略記する）の５０ミリモル／ｌ
緩衝液中に０．０１Ｅ／ｌ’の濃度で懸−１〇− 濁させそして試薬の調製に使用されうる。
燐脂質としては慣用の試薬中に用いられる動物性および
植物性脂質が使用されつる。人間の血小板からの脂質ま
たは人間の胎盤抽出物の使用が特に好ましい。外部経路
をも活性化することのないようにこれら脂質が何らトロ
ンボプラスチン活性を有しないことが重要である。
植物性脂質が使用されつる。人間の血小板からの脂質ま
たは人間の胎盤抽出物の使用が特に好ましい。外部経路
をも活性化することのないようにこれら脂質が何らトロ
ンボプラスチン活性を有しないことが重要である。
トロンビンのための色原体基質はこの試験に使用されう
るためには特異的でなければならない。何故ならばトロ
ンビンは他の同様に活性化される凝固因子の存在下に選
択的に測定される筈だからである。「クロモシムＪ （
Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍ■）ＴＨ（Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ａ、ｒｇ−ｐＮＡ） （ここで「Ｔｏｓｊはトルエン
スルホニル’Ｃ指ｆ ） オよヒｓ ２１６ｏ （Ｂｚ
−Ｐｈｅ−Ｖａｎ、−Ａｒｇ−ｐＮＡ ）は比較的非特
異的であってそしてカリクレインまたは第）（ａ因子お
よび第ｘｌＩａ因子のような他の凝固因子も示す。たと
え接触因子に対する特異性がここでもまたさほど窩くな
いとしてもＳ ２２３８ （ＨＤ−Ｐｈｅ−Ｐｉｐ−Ａ
ｒ、ｑ−ｐＮＡ）の方がより適当である。ｐ−ニトロア
ニリンの他に他の発色団例えばクマリン誘導体を有する
ペプチドも適当であり、その場合加水分解は螢光を測定
することにより追跡される。
るためには特異的でなければならない。何故ならばトロ
ンビンは他の同様に活性化される凝固因子の存在下に選
択的に測定される筈だからである。「クロモシムＪ （
Ｃｈｒｏｍｏｚｙｍ■）ＴＨ（Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ
−Ａ、ｒｇ−ｐＮＡ） （ここで「Ｔｏｓｊはトルエン
スルホニル’Ｃ指ｆ ） オよヒｓ ２１６ｏ （Ｂｚ
−Ｐｈｅ−Ｖａｎ、−Ａｒｇ−ｐＮＡ ）は比較的非特
異的であってそしてカリクレインまたは第）（ａ因子お
よび第ｘｌＩａ因子のような他の凝固因子も示す。たと
え接触因子に対する特異性がここでもまたさほど窩くな
いとしてもＳ ２２３８ （ＨＤ−Ｐｈｅ−Ｐｉｐ−Ａ
ｒ、ｑ−ｐＮＡ）の方がより適当である。ｐ−ニトロア
ニリンの他に他の発色団例えばクマリン誘導体を有する
ペプチドも適当であり、その場合加水分解は螢光を測定
することにより追跡される。
ＡＰＴＴのようなグローバル試験に最も良く適する色原
体Ｒゾチドは、ドイツ特許出願第Ｐ３２４４０３０．８
刊明細書に記載されているようなトロンビン基質である
。これらは発色団として５−アミノ−２−ニトロ安息香
酸の誘導体を含有している。
体Ｒゾチドは、ドイツ特許出願第Ｐ３２４４０３０．８
刊明細書に記載されているようなトロンビン基質である
。これらは発色団として５−アミノ−２−ニトロ安息香
酸の誘導体を含有している。
一般式■
（式中ＲはＣ１〜Ｃ５−アルキルまたは−ＣＩ耳ＣＨ（
Ｃ’Ｈ５）２）ＣＯＯＣＨ５でありそしてＸはＨ−Ｄ−
Ｐｈｅ−１ＢＯＣ−ｔ）ｌｙ−またはトシル−Ｇｌｙ−
である）を有する化合物が使用されるのが好ましい。
Ｃ’Ｈ５）２）ＣＯＯＣＨ５でありそしてＸはＨ−Ｄ−
Ｐｈｅ−１ＢＯＣ−ｔ）ｌｙ−またはトシル−Ｇｌｙ−
である）を有する化合物が使用されるのが好ましい。
基質は非常に低い濃度で使用されるのが好ましい。Ｈ−
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＮＢＳ−イソプロピル
アミド（ここで［＋ＪＢｓＪは５−アミノ−２−ニトロ
安息香酸を意味する）を使用する場合５０μモル／ｌで
最良の結果が達成される。カルシウム濃度は１〜１０ミ
リモル／ Ａ’ ％ 好ましくは５ミリモル／ｌでなけ
ればならない。
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＮＢＳ−イソプロピル
アミド（ここで［＋ＪＢｓＪは５−アミノ−２−ニトロ
安息香酸を意味する）を使用する場合５０μモル／ｌで
最良の結果が達成される。カルシウム濃度は１〜１０ミ
リモル／ Ａ’ ％ 好ましくは５ミリモル／ｌでなけ
ればならない。
スルファチド、燐脂質、色原体基質およびカルシウム塩
好ましくは塩化カルシウム’ｋｐ］（７２〜ａ５のＨＴ
ｆｌＰＥＳまたはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タンのような緩衝液中に溶解または懸濁させる。イミダ
ゾール、グリシルグリシンまたはトリエタノールアミン
の各緩衝液も使用されうる。
好ましくは塩化カルシウム’ｋｐ］（７２〜ａ５のＨＴ
ｆｌＰＥＳまたはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タンのような緩衝液中に溶解または懸濁させる。イミダ
ゾール、グリシルグリシンまたはトリエタノールアミン
の各緩衝液も使用されうる。
本発明による方法は好都合には２５〜６７℃で血漿試料
全恒温槽中でこの温度の試薬と混合す１３− ることにより実施される。反応は測光計中４０５〜４１
０ｎｍにおいて追跡される。
全恒温槽中でこの温度の試薬と混合す１３− ることにより実施される。反応は測光計中４０５〜４１
０ｎｍにおいて追跡される。
代表的な正常血漿では吸光は暫くの間一定のままであり
、そして次に数秒の間に強（上昇する。定められた吸光
差例えば０．１に達するに必要な時間が測定助変数であ
る。原則的には指数曲線の動力学的評価も可能である。
、そして次に数秒の間に強（上昇する。定められた吸光
差例えば０．１に達するに必要な時間が測定助変数であ
る。原則的には指数曲線の動力学的評価も可能である。
定められた基質量の反応は、活性化されたトロンビンが
所定量のフィブリノーゲンと反応しそしてそれにより凝
血塊をひき起こす慣用のＡＰＴＴのそれと同様である。
所定量のフィブリノーゲンと反応しそしてそれにより凝
血塊をひき起こす慣用のＡＰＴＴのそれと同様である。
例により、この新規方法は好ましい形態で内因性経路の
各個因子の活性変化を示すことがわかる。
各個因子の活性変化を示すことがわかる。
ある種の固定された活性化時間ののち、本来の凝血塊釦
至る反応がＣａ（Ｊ？２の添加により開始される慣用の
Ａ、ＰＴＴと対照的に新規方法ではＣａＣｌ２は最初か
ら添加でき、従って１ピペット操作だ＝１４＝ け少なくて済む（モノ試薬）。しかしながら原則上は従
来法と同様の試験システムも本発明による方法で可能で
ある。この目的には色原体はゾチドはｃａｃ１２と一緒
に所定の予備培養時間後にはじめて添加される。予備培
養期間中でもスルファチド試薬に少量のＣａ（Ｊ２ （
約１ミリモル／ｌ）を添加しそしてさらにＣｔａＣｌ
２溶液を添加することにより本来の反応を開始させるの
が好ましいことが証明された。最終濃度はここでもまた
Ｃａ（Ｊ２５ミリモル／！！が最適である。
至る反応がＣａ（Ｊ？２の添加により開始される慣用の
Ａ、ＰＴＴと対照的に新規方法ではＣａＣｌ２は最初か
ら添加でき、従って１ピペット操作だ＝１４＝ け少なくて済む（モノ試薬）。しかしながら原則上は従
来法と同様の試験システムも本発明による方法で可能で
ある。この目的には色原体はゾチドはｃａｃ１２と一緒
に所定の予備培養時間後にはじめて添加される。予備培
養期間中でもスルファチド試薬に少量のＣａ（Ｊ２ （
約１ミリモル／ｌ）を添加しそしてさらにＣｔａＣｌ
２溶液を添加することにより本来の反応を開始させるの
が好ましいことが証明された。最終濃度はここでもまた
Ｃａ（Ｊ２５ミリモル／！！が最適である。
色原体基質と組み合せて血漿の接触活性化にスルファチ
ド金使用することは従来知られていなかった。試薬製造
者はスルファチドを０℃以下で保存すること全推奨する
。スルファチド全必要な他の試薬成分と共に凍結乾燥し
ても全熱安定な生成物音生じない。ＡＰＴＴは常に劇的
に長くブよる。
ド金使用することは従来知られていなかった。試薬製造
者はスルファチドを０℃以下で保存すること全推奨する
。スルファチド全必要な他の試薬成分と共に凍結乾燥し
ても全熱安定な生成物音生じない。ＡＰＴＴは常に劇的
に長くブよる。
驚くべきことに、血清アルブミン、ゼラチン７１：たは
減成されそして交叉結合したコラーゲンの添加により安
定で効果のある試薬が得られる。
減成されそして交叉結合したコラーゲンの添加により安
定で効果のある試薬が得られる。
ただの約０．１〜１％の濃度により良好な活性を有する
凍結乾燥物が調製されうる。
凍結乾燥物が調製されうる。
慣用の試薬におけるように、欠乏血漿と組み合せて内因
性経路の個々の因子の測定が可能である。これには他の
凝固因子の影響全排除するために血漿試料を希釈するが
またはこれを使用される欠乏血漿以上に使用する。
性経路の個々の因子の測定が可能である。これには他の
凝固因子の影響全排除するために血漿試料を希釈するが
またはこれを使用される欠乏血漿以上に使用する。
アミノ酸特にグルタミン、アスパラギンまたはグルタミ
ン酸の添加により試薬のヘパリン感度が高められる。
ン酸の添加により試薬のヘパリン感度が高められる。
以下の例により本発明を説明する。
例
新規試薬の因子感度
試薬
６ミリモル／ｌのＥ（−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−
ＡＮＢＳ−イソプロピルアミド色原体基質（８８２１０
７） ０．１ ｍｌフ
イブラクセル（Ｆｉｂｒａｃｃｅｌ■）１：１０００（
凝固活性な均質な燐脂質複合物、べ一り／グヴエルケ社
製品） ０．５ ｍ１０．０１
？／１３のスルファチｔＴ！ｉＣスヘルコ社製品、シリ
カゲル上ＣＨＣＪ５ ／ＭｅＯＨ／Ｈ２０（６５：２５
：４）でＲｆ＝０．２５１ ０．５ ｔｔ
ｒｌ緩衝液［ＨＥＰＥＳ、 ＮａＣｌ５Ｃａ 、 ２
５、第１１１８７９２号および同第１１５３１３４号明
細書参照） ） ５．
０ ｍｌ混合物 血漿または欠乏血漿（ベーリングヴエルケ社製品）、先
天性筒■因子欠乏血漿 １００μ！試 薬
１−３７
℃でＥ ＝Ｑ、１までの時間を測定した。
ＡＮＢＳ−イソプロピルアミド色原体基質（８８２１０
７） ０．１ ｍｌフ
イブラクセル（Ｆｉｂｒａｃｃｅｌ■）１：１０００（
凝固活性な均質な燐脂質複合物、べ一り／グヴエルケ社
製品） ０．５ ｍ１０．０１
？／１３のスルファチｔＴ！ｉＣスヘルコ社製品、シリ
カゲル上ＣＨＣＪ５ ／ＭｅＯＨ／Ｈ２０（６５：２５
：４）でＲｆ＝０．２５１ ０．５ ｔｔ
ｒｌ緩衝液［ＨＥＰＥＳ、 ＮａＣｌ５Ｃａ 、 ２
５、第１１１８７９２号および同第１１５３１３４号明
細書参照） ） ５．
０ ｍｌ混合物 血漿または欠乏血漿（ベーリングヴエルケ社製品）、先
天性筒■因子欠乏血漿 １００μ！試 薬
１−３７
℃でＥ ＝Ｑ、１までの時間を測定した。
４０５ ｎｍ
次の結果が得られた。
１７−
欠乏血漿 秒
第■因子 １，２００第■因子
１．２０［１第■因子
２０７第■因子
６７８第■因子 ４９８第Ｘ因
子 ４４８第Ｘ因子
５９６第刈因子
３３６Ｉ（ＭＷＫ （高分子キニノーゲン）
３９６カリクレイン
７２０プールされた血漿 １７０ゲ
ゼルシヤフト ＝ｌ ８−
１．２０［１第■因子
２０７第■因子
６７８第■因子 ４９８第Ｘ因
子 ４４８第Ｘ因子
５９６第刈因子
３３６Ｉ（ＭＷＫ （高分子キニノーゲン）
３９６カリクレイン
７２０プールされた血漿 １７０ゲ
ゼルシヤフト ＝ｌ ８−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）活性剤、燐脂質、カルシウムイオンおよびｌ・ロン
ビン用色原体基質を用い活性化された部分トロンボプラ
スチン時間（ＡＰＴＴ）ｅ測定するに当たり、活性剤が
スルファチドｔｉはスルファチド混合物であることを特
徴とする方法。 ２）色原体基質が一般式ｌ （式中、Ｒは０１〜Ｃ５−アルキルまたは−Ｃｎ（ＣＨ
（ｃ″Ｈ＝、 ）２）ｃｏｏｃＨ３でありそしてＸはＨ
−Ｄ−Ｐｈｅ−１Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−またはトシル−（）
ｌｙ−である）を有する化合物であること全特徴とする
前記特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３）スルファチド、燐脂質、溶性カルシウム塩およびト
ロンビンのための色原体基質からなる活性化された部分
トロンボプラスチン時間測定のための試薬。 ４）緩衝液好ましくはｐｎ ７．２〜８．５のＨＥＰＥ
Ｓ全含有することを特徴とする特許 囲第６項記載の試薬。 ５）アミノ酸全含有することを特徴とする前記特許請求
の範囲第６項記載の試薬。 ６）血清アルブミン、ゼラチンまたは減成または交叉結
合したコラーゲン金含有すること全特徴とする前記特許
請求の範囲第６項記載の試薬。 ７）凍結乾燥された形態で存在することを特徴とする前
記特許請求の範囲第６項記載の試薬。 ８）内因性経路の一因子が欠乏した血漿と組み合せた前
記特許請求の範囲第３〜７項のいずれかに記載の試薬の
その因子の測定における使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19833311287 DE3311287A1 (de) | 1983-03-28 | 1983-03-28 | Verfahren zur fotometrischen bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit und reagenz dazu |
| DE3311287.8 | 1983-03-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59187800A true JPS59187800A (ja) | 1984-10-24 |
| JPH0365958B2 JPH0365958B2 (ja) | 1991-10-15 |
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP59057507A Granted JPS59187800A (ja) | 1983-03-28 | 1984-03-27 | 活性化された部分トロンボプラスチン時間の測定法 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS59187800A (ja) |
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| AU (1) | AU582534B2 (ja) |
| CA (1) | CA1250213A (ja) |
| DE (2) | DE3311287A1 (ja) |
| DK (1) | DK162179C (ja) |
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| GR (1) | GR81852B (ja) |
| IE (1) | IE58463B1 (ja) |
| IL (1) | IL71370A (ja) |
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| NZ (1) | NZ207626A (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| HUP0303809A3 (en) | 2001-05-09 | 2011-05-30 | Axis Shield Asa | Assay system |
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| DE2915310A1 (de) * | 1979-04-14 | 1980-10-30 | Behringwerke Ag | Neues partielles thromboplastin und dessen verwendung |
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| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
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-
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-
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- 1984-03-26 ES ES530983A patent/ES530983A0/es active Granted
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- 1984-03-27 JP JP59057507A patent/JPS59187800A/ja active Granted
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- 1984-03-28 NO NO841231A patent/NO164443C/no unknown
Cited By (1)
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