NO164443B - Reagens for bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid. - Google Patents
Reagens for bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid. Download PDFInfo
- Publication number
- NO164443B NO164443B NO841231A NO841231A NO164443B NO 164443 B NO164443 B NO 164443B NO 841231 A NO841231 A NO 841231A NO 841231 A NO841231 A NO 841231A NO 164443 B NO164443 B NO 164443B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- reagent
- determination
- time
- activated partial
- aptt
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 21
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 11
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 11
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 6
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 5
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 11
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 8
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 8
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 8
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 6
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N Ellagic acid Chemical compound OC1=C(O)C(OC2=O)=C3C4=C2C=C(O)C(O)=C4OC(=O)C3=C1 AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N Ellagic acid Natural products OC1=C(O)[C@H]2OC(=O)c3cc(O)c(O)c4OC(=O)C(=C1)[C@H]2c34 ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N 0.000 description 5
- 229920002079 Ellagic acid Polymers 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229960002852 ellagic acid Drugs 0.000 description 5
- 235000004132 ellagic acid Nutrition 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N methylellagic acid Natural products O1C(=O)C2=CC(O)=C(O)C3=C2C2=C1C(OC)=C(O)C=C2C(=O)O3 FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- KZZWQCKYLNIOBT-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-nitrobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(O)=O)=C1 KZZWQCKYLNIOBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 2
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 description 1
- MLONYBFKXHEPCD-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO MLONYBFKXHEPCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 1
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 1
- 108010058861 Fibrin Fibrinogen Degradation Products Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077861 Kininogens Proteins 0.000 description 1
- 102000010631 Kininogens Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000012042 active reagent Substances 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 150000001893 coumarin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- GGWBHVILAJZWKJ-KJEVSKRMSA-N ranitidine hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].[O-][N+](=O)\C=C(/NC)NCCSCC1=CC=C(CN(C)C)O1 GGWBHVILAJZWKJ-KJEVSKRMSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001026 thromboplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Fremgangsmåte til fotometrisk bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid (APTT), hvori et kromogent substrat anvendes. Videre omtales et for denne fremgangsmåte egnet reagens.
Description
Oppfinnelsen vedrører et reagens til fotometrisk bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid (APTT), samt anvendelse derav.
Bestemmelsen av den aktiverte partielle tromboplastintid (APTT) er ved siden av tromboplastintiden (protrombintid, kvikk-verdi) den hyppigst gjennomførte koagulasjonsprøve. APTT beskriver forholdet til den endogene måten av koagula-sjonen. En ytterligere viktig anvendelse av denne prøve ligger i kontrollen av heparinterapi. APTT omfatter høymole-kylære kininogen, prekallikrein og faktorene XII, X, VIII, V og I, dertil også inhibitorene av koagulering, spesielt antitrombin III ved heparinterapien og f ibrinogenspaltpro-duktene (antitrombin VI), som alle forlenger APTT.
Reagenset for bestemmelse av APTT inneholder i det vesentlige fosfolipider og en egnet aktivator av "kontaktfasen". Ved kontaktaktiveringen aktiveres faktor XII, som deretter aktiverer faktor XI og prekallikrein. I reagenser innehold-ende lipider og kalsiumioner kommer det da til en aktivering av den samlede endogene vei, som ender i en f ibrinkoagula-sjonsdanning. En til dette tidspunkt nødvendig måleparameter er tid.
Som aktivatorer av kontaktfasen anvendes uorganiske materialer, fortrinnsvis celitt og kaolin. Dessuten finner også ellagsyre (US-patent 3.486.981 og DE-OS 29 15 310) anvendelse. Ellagsyre byr som optisk klart reagens på fordeler ved anvendelse av optiske målefremgangsmåter til påvisning av koagulatdannelse. Ifølge Bock et al., Biochemistry 20, 7258-7266 (1982) skal riktignok den virksomme art være et vannuoppløselig kompleks av metallioner og ellagsyre. En ytterligere aktivator er dekstransulfat.
Disse aktivatorer av kontaktfåsene er imidlertid ufysio-logiske og også vanskelige å standardisere. Eksempelvis avhenger koaguleringstiden av en kaolinaktivert APTT ganske av aktivatorens partikkelstørrelse. Noen koaguleringsfaktorer absorberes så fast på slike overflateaktive materialer at man benytter disse som absorbenser til preprarering av kon-taktfaktorene. Dessuten er imidlertid også sammensetningen av fosfolipider som inneholder et slikt reagens vesentlig for resultatet. Også lengden av forinkubasjonstiden, etter hvilke den egentlige reaksjon som fører til koagulatdannelse blir startet ved "rekalsifisering", spiller en viktig rolle, da aktiverte koaguleringsfaktorer hemmes ved de plasmatiske inhibitorer, spesielt antitrombin III.
Fysiologiske aktivatorer av koagulering omfatter sulfatider (Fujikawa et al., Biochem. 19 (1980), 1322-1330 og Tans und Griffin, Blood, 59 (1982) 69-75). Sulfatider hører til forbindelsesklasser av glykosfingolipider og Inneholder ved galaktoseringen en sulfatgruppe. Til denne forbindelsesgruppe hører forskjellige typer, med forskjellige typer fettsyre-kjeder. De er påvisbare i alle vev i membranene, i spesielt rikelige mengder i hjernen, hvorav man også kan utvinne det i meget ren form. Sulfatider er mere virksomme enn kaolin ved kontaktaktivering av plasmaet.
Konvensjonelle APTT-bestemmelser omfatter målingen av et fibrinkoagulat. Dannelsen av et slikt koagulat er måleteknisk bare vanskelig å følge. Det ble utviklet en rekke apparater til å benytte i forskjellige mekaniske, elektriske eller optiske fremgangsmåter.
Etter innføring av kromogene substrater for koaguleringsfaktorer ble det også forsøkt å anvende disse for å bestemme koagulerIngsenzymer. Fordelen med kromogene substrater ligger i den enkle standardiserbarhet av de lavmolekylære substrater i motsetning til de komplekse høymolekylære naturlige substrater. Det bortfaller med problemet å måle dannelsen av et koagulat.
Også for gjennomføring av "globalprøven" ble det allerede anvendt kromogene substrater. Således omtaler Yamada og Megura, Thrombos. Res. 15 (1979), 351-358, en metode for gjennomføring av APTT. Denne beror på aktiveringen av den endogene vei med ellagsyre i nærvær av fosfolipid, kalsium og det kromogene trombinsubstrat H-D-Fe-Pip-Arg-pNA (S 2238). Ulempene ved denne fremgangsmåte er anvendelsen av en ufysiologisk aktivator, manglende spesifistet av det kromogene substrat og de ekstremt lange måletider (normal-verdi rundt 7,4 minutter). Over enkeltfaktor-følsomheten ble det bare pulbisert ufullstendige data.
En ytterligere metode omtalt hos P. Aiyappa, Ann. New York Acad. Sei. (1981), S 812-821. I dette målesystem aktiveres plasma ved ellagsyre i nærvær av fosfolipid og kalsiumioner i fem minutter, og det inntil da dannede trombinmåles med et kromogent substrat. Denne metode kan føre til dannelse av fibrin, som inneslutter aktivt trombin. Trombinet kan også bli deaktivert ved hemming. Det er ikke mulig å aktivere patologiske plasmaer fullstendig innen den valgte inkuba-sjonstid, selv om de egentlig er i stand til det. Den av Aiyppa omtalte fremgangsmåte muliggjør Ikke i mangelplasma å måle koagulasjon.
Overraskende ble det nå funnet at vesentlige ulemper ved de omtalte APTT-metoder med kromogene substrater kan fjernes ved anvendelse av et sulfatid som fysiologisk aktivator i forbindelse med et høyspesifikt trombinsubstrat.
Oppfinnelsens gjenstand er derfor et reagens for ett-trinns-bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid, kjennetegnet ved at den består av en buffer, fortrinnsvis HEPES, pH 7,2-8,5, et sulfatid eller en sulfatidblanding, et fosfolipid, et oppløselig kalsiumsalt og et kromogent substrat for trombin.
Oppfinnelsens gjenstand er videre anvendelse av et reagens i kombinasjon med et mangelplasma av en faktor av den endogene vei, for bestemmelse av denne faktor.
Brukbare sulfatider er kommersielt tilgjengelige, eksempelvis fra firmaene Serva, Sigma eller Supelco. Fortrinnsvis anvendes slike sulfatider til tynnsjiktskromatografi på kiselgel og på en blanding av kloroform/metanol/vann 65:25:4 som elueringsmiddel har en RF-verdi på 0,2-0,3, fortrinnsvis 0,25, og med kloroform/metanol 40:15 en RF-verdi på 0,25-0,35, fortrinnsvis 0,31. Slike sulfatider kan imidlertid også fremstilles ifølge Hara og Radin, Anal. Biochem. 100 364-370
(1979) eller av hjerneacetontørkepulver. Hensiktsmessige prøvekonsentrasjoner ligger mellom 0,1 og 50 pg/ml. Sulfatider kan i første rekke suspenderes ved konsentrasjon ved 0,01 g pr. 1. i 50 Mmol pr. liter HEPES-buf fer, pH 7,6, og anvendes for tilberedning av reagenset.
Som fosfolipid kan da anvendes de vanlige reagenser ved anvendte dyr- og plantelipider. Spesielt fordelaktig er anvendelsen av lipider fra menneskelige trombocytter eller et ekstrakt av menneskelig placenta. Viktig er at disse lipider Ikke viser tromboplastisk aktivitet for Ikke også å aktivere den heksogene vei.
Det kromogene substrat for trombin må være spesifikt for å kunne anvendes i denne prøve, da trombin skal måles selektivt ved siden av de andre likeledes aktiverte koaguleringsfaktorer. "Kromozym" TH (Tos-gly-pro-arg-pNA) og S 2160 (bz-fe-val-arg-pNA) er relativt uspesifikke og viser også andre koaguleringsfaktorer, som kalekrein eller faktorene Xa og Xlla. Bedre egnet er S 2238 (HD-fe-pip-arg-pNA), enskjønt spesifiteten heller ikke her er meget høy overfor kontaktfak-torene. Foruten para-nitroanilider finnes det også andre peptidkromoforer, eksempelvis kumarinderivater, idet hydrolysen følges ved måling av fluorescensen.
De for en globalprøve som APTT best egnede kromogene peptider er trombinsubstrater, slike som er omtalt i den tyske søknad P 32 44 030.8. De inneholder som kromoforderivater 5-amino-2-nitrobenzosyre.
Fortrinnsvis anvendes en forbindelse med den generelle formel
I
med R-C^-alkyl eller -CH [CH( CH3 )2] C00CH3 og X = H-D-FE, BOC-Gly- eller Tosyl-Gly.
Substratet anvendes fortrinnsvis i meget liten konsentrasjon. De beste resultater oppnår man med 50 jjMol pr. 1. ved anvendelse av H-D-Fe-Pro-Arg-ANBS-isopropylamid. Kalsiumkon-sentrasjonen bør utgjøre mellom 1 og 10 mMol pr. liter, fortrinnsvis 5 mMol pr. liter.
Sulfatid, fosforlipid, kromogent substrat og kalsiumsaltet, fortrinnsvis kalsiumklorid, oppløses i en buffer som HEPES eller TRIS pH 7,2-8,5 eller suspenderes deri. Også imidazol-, glycylglycin- eller trietanol-amin-buffere er brukbare.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen utføres hensiktsmessig ved 25-37°C, idet en plasmaprøve henger sammen med det tempererte reagens i en termostatert kuvette. I et fotometer følges reaksjonen ved 405-410 nm.
For et typisk normalplasma forblir ekstinksjonen konstant noen tid for deretter sterkt å stige i løpet av få sekunder. Måleparameteren er tiden som er nødvendig for å oppnå en bestemt ekstinksjonsdifferans, eksempelvis 0,1. Prinsipielt er det også mulig med en kinetisk vurdering av den eks-ponensielle kurve. Omsetningen av en bestemt substratmengde er analog til den av en konvensjonell APTT, hvor det aktiverte trombin omsetter en bestemt mengde fibrinogen og dermed utløser koagulatet. Eksempel 1 viser at fremgangsmåten i den foretrukne form, viser endringer av aktiviteten, av hver enkelt faktor i den endogene vei.
I motsetning til konvensjonell APTT, hvoretter en bestemt fast aktiveringstid den egentlige til koagulat førende reaksjon startes ved hjelp av CaC^-tii.-ie ening, kan CaCl2 tilsettes fra begynnelsen. Dette fører i;i 1 ett pipetterIngs-trinn mindre (Monoreagens). Det kromogene peptid tilsettes sammen med CaCl2 først etter en bestemt forinkubasjonstid. Det viser seg da gunstig også under forinkubasjonstidfasen til sulfatidreagenset å sette noe CaClg (ca.l mMol pr. liter) og å starte den egentlige reaksjon ved tilsetning av mere CaCl2-oppløsning. Som sluttkonsentrasjon er også her 5 mMol pr. liter CaCl2 optimalt.
Anvendelsen av sulfatider til kontaktaktivering av plasma i kombinasjon med kromogene substrater var hittil ikke kjent. Reagensfremstillere anbefaler lagring av sulfatidene under 0°C. Lyofilisering av sulfatidene sammen med de nødvendige andre bestanddeler av reagenser førte ikke til noe stabilt produkt. APTT forlenger seg stadig drastisk.
Overraskende oppnår man ved tilsetning av serumalbumingelatiner eller et avbygget og kryssbundet kollagen til et stabilt virksomt reagens. En konsentrasjon på bare ca. 0,1-1% muliggjør fremstillingen av et lyofilisat med god aktivitet.
Som ved vanlige reagenser er forbindelsen med mangelplasma bestemmelsen av enkeltfaktorer av den endogene vel mulig. Hertil blir plasmaprøven fortynnet for å utkoble innvirknln-gen av andre koaguleringsfaktorer eller den anvendes i underskudd til det anvendte mangelplasma.
En tilsetning av aminosyrer, for eksempel glutamin, asparagin eller glutaminsyre, øker reagensets heparin-følsomhet.
Forkortelser:
ANBS 5-amino-2-nitrobenzosyre
Arg Aginin
Gly Glysin
HEPES N-2-hydroksyetylpiperazin-N'-2-etansulfonsyre Fe Fenylalanin
Pip Pipekolinsyre
Pro Prolin
Tos Toluensulfonyl
TRIS Tris(hydroksymetyl)aminometan
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av følgende eksempler.
Eksempel 1
Det nve reagensets faktorfølsomhet.
Claims (4)
1.
Reagens for ett-trinns-bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid, karakterisert ved at den består av en buffer, fortrinnsvis HEPES, pH 7,2-8,5, et sulfatid eller en sulfatidblanding, et fosfolipid, et oppløselig kalsiumsalt og et kromogent substrat for trombin.
2.
Reagens ifølge krav 1, karakterisert ved at det kromogene substratet er en forbindelse med den generelle formel I
hvor
R = C^g-alkyl eller -CH[CH(CH3)2]C00CH3, og X = H - D - FE, BOC-Gly- eller Tosyl-Gly.
3.
Reagens ifølge krav 1, karakterisert ved at det inneholder serumalbumingelatiner eller et avbygget eller kryssbundet kollagen.
4.
Anvendelse av et reagens ifølge et av kravene 1 eller 3, i kombinasjon med et mangelplasma av en faktor av den endogene vei, for bestemmelse av denne faktor.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19833311287 DE3311287A1 (de) | 1983-03-28 | 1983-03-28 | Verfahren zur fotometrischen bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit und reagenz dazu |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO841231L NO841231L (no) | 1984-10-01 |
| NO164443B true NO164443B (no) | 1990-06-25 |
| NO164443C NO164443C (no) | 1990-10-03 |
Family
ID=6194903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO841231A NO164443C (no) | 1983-03-28 | 1984-03-28 | Reagens for bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0123883B1 (no) |
| JP (1) | JPS59187800A (no) |
| AT (1) | ATE67520T1 (no) |
| AU (1) | AU582534B2 (no) |
| CA (1) | CA1250213A (no) |
| DE (2) | DE3311287A1 (no) |
| DK (1) | DK162179C (no) |
| ES (1) | ES530983A0 (no) |
| GR (1) | GR81852B (no) |
| IE (1) | IE58463B1 (no) |
| IL (1) | IL71370A (no) |
| NO (1) | NO164443C (no) |
| NZ (1) | NZ207626A (no) |
| ZA (1) | ZA842240B (no) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4158785A (en) * | 1984-03-26 | 1985-11-01 | International Health Services | A method of determining the clotting time of blood and particulate reagents therefor |
| GB8426004D0 (en) * | 1984-10-15 | 1984-11-21 | Ortho Diagnostic Systems Inc | Coagulation monitoring |
| DE3504405A1 (de) * | 1985-02-08 | 1986-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Bestimmung von prokallikrein |
| SE8702556D0 (sv) * | 1987-06-18 | 1987-06-18 | Kabivitrum Ab | Bestemning av vid proteolys aktiva komponenter |
| US4865984A (en) * | 1988-02-08 | 1989-09-12 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Dynamic continuous flow enzyme reactor |
| DE4006634A1 (de) * | 1990-03-03 | 1991-09-05 | Behringwerke Ag | Funktioneller test zur bestimmung der protein s-aktivitaet |
| JP3180824B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-06-25 | シスメックス株式会社 | 血液凝固試薬 |
| DE59309374D1 (de) * | 1992-05-15 | 1999-03-25 | Immuno Ag | Reagens zur Bestimmung der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (aPTT) |
| AT398983B (de) * | 1992-05-15 | 1995-02-27 | Immuno Ag | Reagens zur bestimmung der aptt |
| AT402074B (de) * | 1993-04-30 | 1997-01-27 | Immuno Ag | Reagens zur bestimmung der aptt |
| ATE177536T1 (de) * | 1993-06-30 | 1999-03-15 | Diagnostische Forsch Stiftung | Messung des aktivierten partiellen thromboplastinzeit (aptt) in einer einstufen- reaktion |
| US5780255A (en) * | 1995-06-09 | 1998-07-14 | Instrumentation Laboratory, S.P.A. | Protein C pathway screening test |
| CA2382143C (en) * | 1999-09-03 | 2005-10-18 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent and test cartridge for determining clotting time |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| AU2002253388B2 (en) | 2001-05-09 | 2006-09-28 | Axis-Shield Asa | Assay system |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3486981A (en) * | 1965-03-15 | 1969-12-30 | Roy E Speck | Substances relating to testing of blood-coagulation |
| DE2915310A1 (de) * | 1979-04-14 | 1980-10-30 | Behringwerke Ag | Neues partielles thromboplastin und dessen verwendung |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| US4487060A (en) * | 1983-05-18 | 1984-12-11 | Glenayre Electronis, Ltd. | Railway brake pressure monitor |
-
1983
- 1983-03-28 DE DE19833311287 patent/DE3311287A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-02-27 DK DK109084A patent/DK162179C/da active
- 1984-03-22 EP EP84103163A patent/EP0123883B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-22 DE DE8484103163T patent/DE3485067D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-03-22 AT AT84103163T patent/ATE67520T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-26 ES ES530983A patent/ES530983A0/es active Granted
- 1984-03-26 GR GR74205A patent/GR81852B/el unknown
- 1984-03-26 NZ NZ207626A patent/NZ207626A/en unknown
- 1984-03-27 ZA ZA842240A patent/ZA842240B/xx unknown
- 1984-03-27 JP JP59057507A patent/JPS59187800A/ja active Granted
- 1984-03-27 CA CA000450594A patent/CA1250213A/en not_active Expired
- 1984-03-27 AU AU26211/84A patent/AU582534B2/en not_active Ceased
- 1984-03-27 IE IE74384A patent/IE58463B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-03-27 IL IL71370A patent/IL71370A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-03-28 NO NO841231A patent/NO164443C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0365958B2 (no) | 1991-10-15 |
| ZA842240B (en) | 1984-10-31 |
| DE3485067D1 (de) | 1991-10-24 |
| DK109084A (da) | 1984-09-29 |
| GR81852B (no) | 1984-12-12 |
| ES8505115A1 (es) | 1985-05-01 |
| EP0123883B1 (de) | 1991-09-18 |
| NZ207626A (en) | 1987-05-29 |
| AU582534B2 (en) | 1989-04-06 |
| CA1250213A (en) | 1989-02-21 |
| EP0123883A3 (en) | 1988-02-10 |
| IL71370A (en) | 1989-06-30 |
| DE3311287A1 (de) | 1984-10-04 |
| NO164443C (no) | 1990-10-03 |
| DK162179C (da) | 1992-03-02 |
| EP0123883A2 (de) | 1984-11-07 |
| IE58463B1 (en) | 1993-09-22 |
| AU2621184A (en) | 1984-10-04 |
| JPS59187800A (ja) | 1984-10-24 |
| ES530983A0 (es) | 1985-05-01 |
| ATE67520T1 (de) | 1991-10-15 |
| IE840743L (en) | 1984-09-28 |
| NO841231L (no) | 1984-10-01 |
| IL71370A0 (en) | 1984-06-29 |
| DK162179B (da) | 1991-09-23 |
| DK109084D0 (da) | 1984-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4784944A (en) | Prothrombin time determining reagent and methods of using and preparing the same | |
| CA1152494A (en) | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes | |
| NO164443B (no) | Reagens for bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid. | |
| US20090087870A1 (en) | Hematological assay and kit | |
| EP0420332A2 (en) | Method for determining the endogenous thrombin potential of plasma and blood, and also a kit for use in said method | |
| JP3469909B2 (ja) | フィブリノーゲン測定のための実用的テストおよび試薬 | |
| US4598043A (en) | Method for quantitatively assaying blood coagulation factor XII in human plasma | |
| US4336186A (en) | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes | |
| AU622895B2 (en) | A method and a kit containing means for the kinetic determination of factor xiii | |
| EP0360871B1 (en) | Method for measuring biological activity of antithrombin iii and reagents for the measurement | |
| US4406832A (en) | Peptide-type substrates useful in the quantitative determination of endotoxin | |
| US4732860A (en) | Process for determining the perkallikrein content and the partial thromboplastin time of a plasma sample | |
| WO1993010262A1 (en) | Protein s chromogenic assay | |
| US5221614A (en) | Method and reagent for determining the biological activity of antithrombin III by measuring coagulation time | |
| JP5192647B2 (ja) | 安定な発色性試験用試薬および凝固診断試験におけるその使用 | |
| Vinazzer | Photometric assay of antithrombin III with a chromogenic substrate | |
| Jorpes et al. | On the assay of thrombin preparations | |
| US20080138843A1 (en) | Method For Determining the Total Clotting Activity of a Blood or Plasma Sample | |
| US5200322A (en) | Method for assaying protein C and measuring kit for the same | |
| HU219457B (hu) | Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra | |
| EP0260707B1 (en) | Method for assaying plasma protein and measuring kit for the same | |
| Tripodi et al. | A chromogenic assay of prothrombin compared with coagulation tests during anticoagulant therapy and liver disease | |
| Graves-Hoagland et al. | Protein S and thrombosis |