HU219457B - Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra - Google Patents

Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra Download PDF

Info

Publication number
HU219457B
HU219457B HU9301316A HU9301316A HU219457B HU 219457 B HU219457 B HU 219457B HU 9301316 A HU9301316 A HU 9301316A HU 9301316 A HU9301316 A HU 9301316A HU 219457 B HU219457 B HU 219457B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
thrombin
reagent
meisothrombin
meizothrombin
heparin
Prior art date
Application number
HU9301316A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9301316D0 (en
HUT64698A (en
Inventor
Hartmut Lang
Berta Moritz
Original Assignee
Baxter Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baxter Aktiengesellschaft filed Critical Baxter Aktiengesellschaft
Publication of HU9301316D0 publication Critical patent/HU9301316D0/hu
Publication of HUT64698A publication Critical patent/HUT64698A/hu
Publication of HU219457B publication Critical patent/HU219457B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent

Abstract

A találmány tárgyát meizotrombint, meizotrombin(desF1)-et vagy ezekkeverékeit és adott esetben egy vagy több aktiválható plazmaproteint,Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmazó diagnosztikai célúreagensek képezik. A találmány szerinti, meizotrombint,meizotrombin(desF1)-et vagy ezek keverékeit és adott esetben egy vagytöbb aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipidekettartalmazó diagnosztikai célú reagenst trombinszubsztrátumokmeghatározására használják, továbbá trombinszubsztrátumokaktiválására, és ezt követően az aktivált trombinszubsztrátummalközvetlenül vagy közvetve kölcsönhatásban lévő plazmaproteinekmeghatározására. A találmány tárgyát képezik továbbá a fentiprotrombinfragmentumokat tartalmazó tesztkészletek is. ŕ

Description

A találmány tárgya meizotrombint, meizotrombin(des Fl)-et vagy keverékeiket tartalmazó új reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra.
A trombinszubsztrátumok meghatározása trombinnal végzett aktiválással fontos módszere a vér- és plazmatermékek jellemzésének. így például a fibrinogén, V faktor, VIII faktor vagy a protein C koncentrációit, illetve aktivitásait trombinnal aktiválva határozzák meg standard módon, plazmatartalmú mintákban.
A trombin egy 36 kD-protein, amelynek központi szerepe van a véralvadási kaszkádban, mivel főfunkciója a fibrinogén fibrinné történő átalakítása, ami az ugyancsak a trombin által aktivált XIII faktor segítségével fibrinhálót alakít ki.
A trombin aktiválja továbbá a véralvadási faktorokat, így a V faktort, a VIII faktort és a protein C-t, és trombocitaaggregációt idéz elő. A trombin hasíthat még egy sor más proteint, így a fibronektint, trombospondint és az apolipoproteint, különböző kollagéneket, aminint stb. [vesd össze: Stocker, Sem. Thr. Hem., 17 (2), 114 (1991) 1. táblázat]. Ezeket a proteineket a leírásban „trombinszubsztrátumoknak” nevezzük.
A véralvadási kaszkádban betöltött fontos szerepe miatt a trombin hatását az aktivitáseffektorok, illetve -inhibitorok in vivő igen pontosan szabályozzák.
Az inhibitorok azonban zavaróan hatnak a trombinszubsztrátumok meghatározásánál, mivel az inhibitorok a mintákban az eredményeket meghamisítják, illetve a meghatározás előtt sokkal nagyobb feleslegben lévő trombinmennyiséget kell alkalmazni a jelenlévő inhibitorok hatásának kiküszöbölése céljából.
Egy fontos trombininhibitor például a heparin az antitrombin III-mal együtt. A heparin gyakorlatilag minden vérmintában előfordul, ha az adott vért közvetlenül a levétel után heparinizálják az idő előtti alvadás megakadályozására, vagyis a vérhez heparint adnak; vagy, ha a beteg például alvadás elleni terápia céljából heparint kapott.
A tulajdonképpeni trombininhibitor, az antitrombin
III. A heparin az antitrombin III hatását erősíti.
Egy heparintartalmú vér- vagy plazmamintánál mindig fennáll tehát annak a kockázata, hogy a trombinkoncentrációs, trombinszubsztrátum-aktiválási vagy -kinetikai meghatározások hamis eredményeket adnak, hacsak a mintákat előzetesen költséges módon nem mentesítik a heparintól, vagy a heparint nem semlegesítik.
Ez egy eljárási művelettel többet tesz szükségessé, ami diagnosztikai eljárások esetén, amelyeknek rutincélokra lehetőleg egyszerűen kivihetőnek kell lenniük, kevéssé előnyös. Minden egyes további eljárási művelet nemcsak nagyobb költséget jelent, hanem egyúttal további potenciális hibaforrás a meghatározási eljárásnál.
A trombin a vérben egy inaktív előproteinjéből, a protrombinból több közbeeső fokozaton át alakul át az érett enzimmé. Az érett enzim két láncból, az A és B láncból áll, amelyek egymással diszulfidhíddal kapcsolódnak.
A meizotrombin vagy meizotrombin(desFl) olyan protrombinfragmentumok, amelyek a protrombin nem tökéletes aktiválásával alakultak át trombinná [vesd össze: Doyle et al.: J. Bioi. Chem., 265 (18), 10693-10701 (1990) 1. ábra]. A meizotrombin(desFl) trombininhibitor távollétében képződik a protrombin aktiválásával. Ekkor először meizotrombin képződik, amely azután az FI-fragmentum lehasadásával proteilitikusan meizotrombin(desFl)-fragmentummá bomlik le. A molekulatömeg eközben körülbelül 72 kD értékről körülbelül 48 kD értékre csökken. Ezek a fragmentumok instabilnak számítanak, mivel autokatalitikusan elbomlanak, például a meizotrombin autokatalízissel gyorsan α-trombinná alakul. A meizotrombin és a meizotrombin(desFl) az ekarin kígyóméreg hatására is előállítható protrombinból.
Doyle és munkatársainak a kísérletei bebizonyították, hogy a marhameizotrombin a protrombinnal ellentétben proteázaktivitást mutat, ami a trombinéhoz viszonyítva igen csekély.
A meizotrombin képes ugyan például a fibrinogént csekély arányban fibrinné hasítani vagy a protein C-t aktiválni, de erre a heparin nincs inhibitorhatással, illetve az inhibitorhatás nagyságrendekkel kisebb [Stocker and Müller: Thrombosis and Haemostasis, 65 (6), Abstract 855 (1991)]. Az is bebizonyosodott azonban, hogy a humán protrombinfragmentumok sokkal instabilabbak, mint például a marhából származók.
Ismeretes továbbá, hogy egyes kígyómérgek trombinszubsztrátumokat hasítanak. Andersson [Haemostasis, 1, 31-43 (1972)] ismerteti több kígyóméreg trombinszerű aktivitását, és ezt a trombinhoz hasonlóan NIH-egység/ml-ben fejezi ki. Kígyómérgek alkalmazása a humán proteinekkel végzett diagnosztika keretében azonban a nemspecifikus kölcsönhatások hátrányával jár. Ezért mindenekelőtt a humán faktorok meghatározására szolgáló diagnosztikai eljárások kifejlesztésénél arra kell törekedni, hogy csak emlősök proteinjei, előnyösen humán proteinek kerüljenek alkalmazásra. Egy meghatározási eljárás lényeges előfeltétele az alkalmazott proteinek egyértelmű reakciója.
A találmány feladata az inhibitorok által okozott hibaforrások elkerülésével új eljárás kidolgozása protrombinfragmentumok alkalmazására. Ezzel a találmány a trombinszubsztrátumok meghatározásának egyszerű és pontos módszerét teszi lehetővé.
A találmány tárgya reagens diagnosztikai célokra, trombinszubsztrátumok meghatározásához, amely meizotrombint, meizotrombin(desFl)-et vagy ezek keverékeit és adott esetben egy vagy több aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmaz.
Bebizonyosodott, hogy ezek a fragmentumok hasítani tudják azokat a szubsztrátumokat, amelyeket a trombin képes átalakítani. Ezek a fragmentumok trombinszerű aktivitással rendelkeznek, ami alatt proteázaktivitást értünk, így trombinszubsztrátumok hasítására képesek, de ezek reakciókinetikája és reakcióparaméterei, így a pH-érték vagy az ionerősség optimuma, az inhibitorok, effektorok, az alloszterikus kölcsönhatások stb. nem feltétlenül azonosak a trombinéval.
A találmány szerinti alkalmazás előnye, hogy az említett anyagok „trombinszerű aktivitása” az antitrombin
HU 219 457 Β
ΙΙΙ-hoz való csekély affinitásuk miatt, a trombinaktivitástól eltérően, heparinra nem érzékenyek. A diagnosztikai meghatározás az említett plazmaproteinek alkalmazásával független tehát a minta heparintartalmától, és így egyszerű módon keresztülvihető.
így a trombinszubsztrátumok, mint a fibrinogén, a faktor V, faktor VIII, faktor XIII és a protein C a fenti protrombinfragmentumokat tartalmazó reagensekkel aktiválva közvetlen úton meghatározhatók.
A találmány szerint nemcsak a trombinszubsztrátumok határozhatók meg, hanem olyan más anyagok is, amelyek a találmány szerint aktivált trombinszubsztrátumokkal valamely módon kölcsönhatásban vannak.
A reagens tehát az aktivált trombinszubsztrátumokon keresztül a véralvadási kaszkád faktorainak indirekt meghatározására is használható. A faktor VIII hozzáadható például egy reagenshez és in situ aktiválható. Ezáltal a IX faktor és ebből a X faktor meghatározása is lehetővé válik.
A találmány tárgyát képezik továbbá tehát meizotrombint, meizotrombin(des Fl)-et vagy keverékeiket és adott esetben egy vagy több aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmazó új reagenseket trombinszubsztrátumok aktiválására, és ezt követően az aktivált trombinszubsztrátummal közvetlen vagy közvetett módon kölcsönhatásban lévő plazmaproteinek, például a véralvadási kaszkád proteinjeinek, így a Xa és Va faktoroknak a meghatározására.
A találmány szerint meizotrombint vagy meizotrombin(desFl)-et, előnyösen humán meizotrombint vagy meizotrombin(desFl)-et alkalmazunk egyenként vagy keverékeik formájában. Ezek az anyagok szabványos módon előállíthatok, például ellenőrzött hasítással, kígyómérgek felhasználásával stb., miközben meglepő módon azt találtuk, hogy ezek az anyagok diagnosztikai vizsgálatokhoz kellő stabilitással rendelkeznek.
A találmány szerinti alkalmazáshoz megfelelnek a géntechnológiával előállított proteinek is, amelyek szerkezetük alapján a trombinéhoz hasonló aktivitást mutatnak, és a trombinhoz hasonlítva az antitrombin III-hoz kisebb affinitással rendelkeznek.
A reagenseket, amelyek az említett protrombinfragmentumokat tartalmazzák, és amelyeket a találmány szerint alkalmazunk, adott esetben liofilizáljuk, és ezek adott esetben még egy aktiválható trombinszubsztrátumot tartalmaznak diagnosztikai célokra való felhasználásra.
A találmány tárgyát képezik olyan reagensek is, amelyek még egy meghatározásra szolgáló reagenst is tartalmaznak.
A találmány tárgyát képezik továbbá egyszerű tesztkészletek (testkit), amelyek a találmány szerinti reagensek mellett még egy meghatározásra szolgáló reagenst is tartalmaznak.
A találmány szerinti tesztkészletek legalább egy trombinszubsztrátum vagy aktivált trombinszubsztrátumokkal kölcsönhatásban lévő anyag meghatározására szolgálnak, és az alábbi komponenseket tartalmazzák :
legalább egy, meizotrombint, meizotrombin(desFl)-et vagy ezek keverékeit és adott esetben egy vagy több, aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmazó reagenst, egy meghatározásra szolgáló reagenst, és előnyös esetben még egy trombinszubsztrátumot.
A meghatározási módszer és a meghatározó reagens természetesen a mintában meghatározásra kerülő anyag jellegéhez igazodik. Az aktivált protein C aktivitását például az S2238 kromogén szubsztrátummal (kabi) határozzuk meg. Meghatározhatjuk az alvadási időt, vagy jelzett anyagokat alkalmazhatunk.
A találmány szerinti eljárás kiviteli módját közelebbről a példák szemléltetik.
Példák
1. Meizotrombin-előállítás és molekulatömeg-eloszlás
1.1 Immobilizált ekarin előállítása
Ekarint (Pentapharm) 250 egység/ml gél koncentrációban BrCN-nal aktivált Sepharose-on (Pharmacia) rögzítünk Axen és munkatársai alábbi eljárása (1967) szerint.
1.2 Meizotrombin előállítása ml, az 1.1. pont szerint előállított gélt 4 egység protrombinnal (plazmából tisztított, DEAE-Sephadexen adszorbeálva, majd kromatográfiásan tovább tisztítva) 0,02 M nátrium-acetát-puffer és 0,15 M NaCl keverékében (pH=5,2) 1 órán át szobahőmérsékleten inkubálunk. Ezután a terméket a géltől szűréssel elkülönítjük.
1.3 Molekulatömeg-eloszlás
Natív SDS-PAGE (nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis) és immunoblotting után (első antitest: nyúlban termelt poliklonális anti F.II antitest; második antitest: peroxidázzal konjugált, kecskében termelt antinyúl antitest) meghatározzuk a molekulatömeg-eloszlást, és mennyiségileg kiértékeljük. A termék a következő molekulatömeg-eloszlásokat mutatja: „trombinszerű aktivitás” 67-75 kD (31% 45-50 kD (40%). Továbbá: > 100 kD (7%), 32-38 kD (13%) és < 20 kD (9%).
Hivatkozás: Axen R., Porath A. R., Emback J. S., Natúré, 214,1392-1404, (1967).
2. Fibrinogénmeghatározás
2.1 Normálplazma alvadási ideje ml liofilizált normálplazmát (referenciaplazma, 100%, gyártja Immuno AG) 1 ml vízben heparin hozzáadásával vagy anélkül (0,0,3,0,6,1,0 és 2,0 E/ml) feloldunk. 200 μΐ plazmát 2 percig inkubálunk 37 °C-on. Ezután 200 μΐ 5,8 NIH-analóg E/ml meizotrombinoldattal (az 1. példa szerint előállítva) vagy 3,3 E/ml, illetve 10,0 NIH-E/m trombinnal (trombinreagens, gyártja Immuno AG) alvadást idézünk elő. A rögképződésig eltelt időt Schnitger-Gross koagulométerrel (gyártja Amelung) mérjük. Az 1. táblázatból látható, hogy a trombinkeverék alvadási idejét a minta heparintartalma meghosszabbítja, míg a mezotrombin hatását a heparin alig befolyásolja.
HU 219 457 Β
0 0,3
Trombin (NIH-Em/ml)
3,3 16,1 96,1
10 7,0 15,6
Meizotrombin (NIH-analóg E/ml)
5,8 5,5 6,1
Alvadási idő (mp) minta heparintartalma (E/ml)
0,6 1,0 2,0
>400 >400 >400
67,4 >400 >400
7,6 8,0 8,
2.2 Hivatkozási görbe fibrinogénre
Liofilizált normálplazmát (vesd össze: 2.1) 1 ml desztillált vízzel és különböző trombininhibitorok hozzáadásával vagy anélkül [1-1 E/ml antitrombin III, heparin vagy antitrombin III/heparin komplex (AtheplexR, Immuno)] feloldunk, és az oldatokat 0,1 M foszfátpufferral (pH = 7,5) különbözőképpen hígítjuk. 100 μΐ próbát 50 μΐ fenti pufferral elkeverünk, és a keveréket 2 percig 37 °C-on inkubáljuk. Ezután 150 μΐ 10,5 NIH-analóg E/ml meizotrombin- (Pentapharm) oldatot vagy 5 NIH-E/ml trombinoldatot (trombinreagens, gyártja Immuno AG) adunk a mintához, és az alvadási időt a 2.1 szerint meghatározzuk.
Alvadási idő trombinnal (mp)
Inhibitor nélkül Inhibitor-hozzáadás
Atheplex ATM Heparin
Minta konc. 17,1 >300 >350 >300
1:2 21,6 61,6 >350 50,4
1:4 27,6 37,1 101,6 36,1
1:8 41,6 38,6 54,6 48,9
Alvadási idő meizotrombinnal (mp)
Inhibitor nélkül Inhibitor-hozzáadás
Atheplex Heparin ATM
Minta konc. 15,1 16,0 19,7 25,5
1:2 23,6 26,6 28,8 31,6
1:4 34,6 36,6 37,1 39,1
1:8 56,1 57,6 54,0 60,6
3. Meizotrombin egy diagnosztikumban mint a véralvadási kaszkád aktivátora
A VIII faktort normálplazmában (vesd össze: 2.1) 0, 1, 2, 5 vagy 10 E heparin/ml hozzáadása után az 1. példa szerint előállított meizotrombinnal (0,3 vagy 5 E/ml) aktiváljuk és indirekt, a Xa-faktoron és egy kromogén szubsztrátumon keresztül meghatározzuk. Ehhez az IMMUNO AG által gyártott „Test Immunochrom F VIII C®” reagenst használjuk a gyártó előírása szerint, az „A” reagenshez, amely foszfolipidet és albumint tartalmaz, meizotrombint adva és a „B” reagenst, amely IXaP-faktort, X-faktort, Ca2+-ionokat, albumint és trombint tartalmaz, polybren nélkül alkalmazva. Ez a teszt trombint tartalmaz, ami lehetővé teszi a trombin és a meizotrombin közvetlen összehasonlítását az aktivált alvadási faktorok meghatározására a tesztrendszerben. A következő táblázat azt mutatja, hogy meizotrombin jelenlétében a VIII faktor aktiválását és meghatározását a plazma heparintartalma kevésbé befolyásolja.
Heparin (E/ml) 0 1 2 5 10
Meizotrombin (NIH-analóg E/ml)
Színkialakulás (%)
0 100 99 95,6 80 52,1
3 100 99 97,4 87,8 73,3
5 100 100 98 92,2 80,1

Claims (4)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Reagens diagnosztikai célokra, trombinszubsztrátumok meghatározásához, amely meizotrombint, meizotrombin(desFl)-et vagy ezek keverékeit és adott esetben egy vagy több aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmaz.
  2. 2. Reagens trombinszubsztrátumok aktiválására és ezt követően az aktivált trombinszubsztrátummal közvetlenül vagy közvetve kölcsönhatásban lévő plazmaproteinek meghatározására, amely meizotrombint, meizotrombin(desFl)-et vagy ezek keverékeit és adott esetben egy vagy több aktiválható plazmaproteint, Ca2+-ionokat és/vagy foszfolipideket tartalmaz.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti reagens, amely egy meghatározásra szolgáló reagenst is tartalmaz.
  4. 4. Tesztkészlet legalább egy trombinszubsztrátum vagy aktivált trombinszubsztrátumokkal kölcsönhatásban lévő anyag meghatározására, amely legalább egy 1. vagy 2. igénypont szerinti reagenst és egy meghatározásra szolgáló reagenst, valamint adott esetben egy trombin-szubsztrátumot tartalmaz.
HU9301316A 1992-05-15 1993-05-06 Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra HU219457B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0100092A AT397391B (de) 1992-05-15 1992-05-15 Verwendung von prothrombinfragmenten

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9301316D0 HU9301316D0 (en) 1993-09-28
HUT64698A HUT64698A (en) 1994-02-28
HU219457B true HU219457B (hu) 2001-04-28

Family

ID=3504644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9301316A HU219457B (hu) 1992-05-15 1993-05-06 Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5529905A (hu)
EP (1) EP0570355B1 (hu)
JP (1) JPH0630793A (hu)
AT (2) AT397391B (hu)
CA (1) CA2096076A1 (hu)
CZ (1) CZ88093A3 (hu)
DE (1) DE59309254D1 (hu)
DK (1) DK0570355T3 (hu)
ES (1) ES2126641T3 (hu)
FI (1) FI107409B (hu)
HU (1) HU219457B (hu)
MX (1) MX9302830A (hu)
NO (1) NO308140B1 (hu)
SK (1) SK48893A3 (hu)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4430204A1 (de) * 1994-08-26 1996-02-29 Behringwerke Ag Arzneimittel, welches als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet ist und seine Verwendung
US6165795A (en) * 1998-06-25 2000-12-26 Cardiovascular Diagnostics, Inc. Methods for performing fibrinogen assays using dry chemical reagents containing ecarin and magnetic particles
DE19904674A1 (de) 1999-02-04 2000-08-31 Haemosys Gmbh Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von Thrombininhibitoren
WO2001004146A2 (en) * 1999-07-09 2001-01-18 Cohesion Technologies, Inc. Ecarin polypeptides, polynucleotides encoding ecarin, and methods for use thereof
US20050221414A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-06 Katalin Varadi Kit for measuring the thrombin generation in a sample of a patient's blood or plasma

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0258920B2 (hu) * 1980-10-09 1990-12-11 Boehringer Mannheim Gmbh
NL8902406A (nl) * 1989-09-27 1991-04-16 Hendrik Coenraad Hemker Prof D Werkwijze voor het bepalen van de endogene trombinepotentiaal van plasma, en bloed alsmede een bij deze werkwijze te gebruiken kit.
DE59109048D1 (de) * 1990-02-14 1998-10-15 Pentapharm Ag Inhibitoren zur antikoagulierenden Vorbehandung von Blutproben
DE69108896T2 (de) * 1990-11-05 1995-08-24 Baxter Diagnostics Inc Verfahren zur bestimmung der konzentration von antikoagulantien.

Also Published As

Publication number Publication date
ATE175243T1 (de) 1999-01-15
NO931772D0 (no) 1993-05-14
ES2126641T3 (es) 1999-04-01
AT397391B (de) 1994-03-25
US5529905A (en) 1996-06-25
FI932194A (fi) 1993-11-16
FI932194A0 (fi) 1993-05-14
NO931772L (no) 1993-11-16
DE59309254D1 (de) 1999-02-11
HU9301316D0 (en) 1993-09-28
NO308140B1 (no) 2000-07-31
FI107409B (fi) 2001-07-31
EP0570355A1 (de) 1993-11-18
MX9302830A (es) 1994-05-31
HUT64698A (en) 1994-02-28
CA2096076A1 (en) 1993-11-16
JPH0630793A (ja) 1994-02-08
ATA100092A (de) 1993-08-15
CZ88093A3 (en) 1993-12-15
DK0570355T3 (da) 1999-08-30
SK48893A3 (en) 1993-12-08
EP0570355B1 (de) 1998-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5741658A (en) Quantitative clotting assay for activated factor VII
Hemker et al. Thrombin generation in plasma: its assessment via the endogenous thrombin potential
US5051357A (en) Method and assay using inactivation of factors Va and VIIIa by activated Protein C to diagnose thrombic disease or assay for Protein C and kit therefor
Bergström et al. Determination of vitamin K sensitive coagulation factors in plasma. Studies on three methods using synthetic chromogenic substrates
AU751525B2 (en) Method for determining the anticoagulatory potential of a sample
Larrieu et al. Comparative effects of fibrinogen degradation fragments D and E on coagulation
CA2333890A1 (en) Corn trysin inhibitor stabilizes blood-derived plasma and improves sensitivity of plasma clotting assays
Tans et al. Autoactivation of human plasma prekallikrein.
JP2003517610A (ja) 血液学的アッセイ及び試薬
EP0830608B1 (en) Thrombosis risk test
AU694931B2 (en) A method for detecting disturbances of the protein C/protein S system
IE840743L (en) Determination of activated partial thromboplastin time
US4948724A (en) Composition, kit and method for assaying heparin and a method for making the composition
CA1079166A (en) Process for the quantitative determination of antithrombin iii
HU219457B (hu) Meizotrombint, meizotrombin(des F1)-t vagy keverékeiket tartalmazó reagens, valamint tesztkészlet diagnosztikai célokra
AU3142393A (en) Protein s chromogenic assay
US6124110A (en) Method for determining activated coagulation factors in plasma and plasma derivatives
Sala et al. Dysfunctional activated protein C (PC Cadiz) in a patient with thrombotic disease
JP3600667B2 (ja) 欠損凝固ｖ因子を検出する試験方法で使用するためのキャリブレータ
HU216866B (hu) Eljárás és reagens fibrinogén meghatározására
JP3127263B2 (ja) 第▲ＶＩＩＩ▼：Ｃａ因子色素原アッセイ
US5476771A (en) Test for quantitative thrombin time
CA2137342A1 (en) Test for quantitative thrombin time
Weinstein et al. Abnormal factor VIII coagulant antigen in patients with renal dysfunction and in those with disseminated intravascular coagulation.
Esmon The role of protein C and thrombomodulin in the regulation of blood coagulation

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee