FI107409B - Protrombiinifragmenttien käyttö - Google Patents
Protrombiinifragmenttien käyttö Download PDFInfo
- Publication number
- FI107409B FI107409B FI932194A FI932194A FI107409B FI 107409 B FI107409 B FI 107409B FI 932194 A FI932194 A FI 932194A FI 932194 A FI932194 A FI 932194A FI 107409 B FI107409 B FI 107409B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- thrombin
- reagent
- meizothrombin
- desf1
- eller
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent
Description
107409
Frotrombiinifragmenttien käyttö
Keksintö koskee meitsotrombiinin, meitsotrombiinin (desFl) tai 5 niiden seosten uutta käyttöä sekä näitä protrombiinifrag mentteja sisältäviä reagenssejä ja testiyhdistelmiä.
Trombiinisubstraattien määritys trombiinin aktivoinnilla muodostaa tärkeän menetelmän veri- ja plasmatuotteiden karak-10 terisoimiseksi. Esimerkiksi fibrinogeenin, tekijä V:n, tekijä VIII:n tai proteiini C:n konsentraatiot tai vastaavasti aktiviteetit määritetään aktivoimalla trombiinilla tavanomaisesti plasmapitoisissa näytteissä.
15 Trombiini on 36 kD-proteiini, jolla on keskeinen merkitys verenhyytymisprosessissa, sillä sen päätehtävänä on fibrinogeenin muunto fibriiniksi, joka muodostaa fibriini-verkoston samoin trombiinin aktivoiman tekijä XIII:n myötävaikutuksella.
20 Tämän lisäksi trombiini aktivoi myös verenhyytymistekijöitä, kuten tekijä V:tä, tekijä VIII:aa ja proteiini C:tä ja saa aikaan trombosyyttiaggregaation. Samoin trombiinilla voidaan lohkaista joukko muita proteiineja, kuten fibronektiini, 25 trombospondiini ja apolipoproteiini, erilaisia kollageenejä, laminiini jne. (ks. taulukko 1 julkaisussa Stocker, Sem. Thr.
... Hem. 17 (2), s. 114 (1991)). Tällaisia proteiineja nimitetään ♦ seuraavassa selityksessä "trombiinisubstraateiksi".
30 Trombiinin tärkeän aseman johdosta verenhyytymisprosessissa sen vaikutusta säätelevät hyvin tarkoin in vivo aktiviteet-tiefektorit tai vastaavasti -inhibiittorit.
Etenkin inhibiittorit ovat kuitenkin häiritseviä määritettä-35 essä trombiinisubstratteja, koska inhibiittorit vääristävät näytteen tulosta tai vastaavasti on ennen määritystä lisättävä paljon suurempi, ylimääräinen trombiinimäärä esiintyvien inhibiittoreiden vaikutuksen välttämiseksi.
2 107409
Eräs tärkeä trombiini-inhibiittori on esimerkiksi hepariini yhdessä antitrombiini III:n kanssa. Hepariinia sisältyy käytännössä kaikkiin verinäytteisiin, jos luovutettu veri hepa-rinisoidaan välittömästi sen ottamisen jälkeen ennenaikaisen 5 hyytymisen estämiseksi, s.o. siihen lisätään hepariinia tai jos potilas on saanut hepariinia esim. antikoagulaatioterapi-aa varten.
Varsinainen trombiinia inhiboida aine on antitrombiini III.
10 Hepariini tehostaa antitrombiini III:n vaikutusta.
Hepariinipitoisessa veri- tai plasmanäytteessä on siis aina olemassa se vaara, että saadaan vääristyneitä tuloksia trom-biinikonsentraatio-, trombiinisubstraattiaktivointi- tai 15 kinetiikkamäärityksissä, mikäli sitä ei ole vapautettu panok- sellisella tavalla edellä hepariinista tai hepariinia ei ole neutraloitu.
Siten tarvitaan ylimääräinen menetelmävaihe, mikä on vähemmän 20 edullista diagnostisissa menetelmissä, joiden tulisi olla mahdollisimman yksinkertaisesti suoritettavissa rutiininomaista käyttöä varten. Jokainen ylimääräinen menetelmävaihe ei merkitse ainoastaan suurempaa työpanosta, vaan se on myös määritysmenetelmän yksi mahdollinen lisävirhelähde.
25 • · 4
Trombiini muodostuu veressä inaktivoidusta esiasteproteiinis-ta, protrombiinista useiden välivaiheiden kautta valmiiksi entsyymiksi. Valmis entsyymi muodostuu kahdesta ketjusta (A-ja B-ketju), jotka ovat yhdistyneet toisiinsa disulfidisillan 30 kautta.
Meitsotrombiini tai meitsotrombiini (desF) ovat sellaisia protrombiinifragmentteja, jotka ovat muodostuneet protrom-biinin aktivoituessa epätäydellisesti trombiiniksi (ks. kuva 35 1 julkaisussa Doyle et ai., J. Biol. Chem. 265 (18), 10693 - 10701 (1990)). Meitsotrombiini (desFl) muodostuu aktivoitaessa protrombiini ilman trombiini-inhibiittoria. Tällöin muo- « 3 107409 dostuu ensin roeitsotrombiini, joka hajotetaan proteolyytti-sesti fragmentin F1 lohkaiseroisen jälkeen meitsotrombiiniksi (desFl) . Molekyylipaino vähenee tällöin suunnilleen 72 kD:sta n. 48 kD:iin. Näitä fragmentteja pidetään epästabiileina, 5 koska ne hajoavat autokatalyyttisesti, esimerkiksi meitsot- rombiini muuntuu nopeasti α-trombiiniksi autokatalyysin johdosta. Meitsotrombiinia ja meitsotrombiinia (desFl) voidaan valmistaa myös ekariinikäärmemyrkyn vaikuttaessa protrom-biiniin.
10
Doylen et ai.:in kokeet ovat osoittaneet, että naudan meit-sotrombiinilla on protrombiiniin verrattuna proteaasiaktii-visuus, joka on hyvin vähäinen trombiiniin verrattuna.
15 Meitsotrombiini pystyy tosin lohkaisemaan vähäisessä määrin esim. fribrinogeeniä fibriiniksi tai aktivoimaan proteiini C:tä, mutta hepariini ei inhiboi sitä tai vastaavasti inhi-bointivaikutus on monta kertaa pienempi (Stocker & Muller, Thrombosis and Haemostasis 65 (6}, Abstract 855 (1991)). On 20 kuitenkin myös osoittautunut, että ihmisen protrombiini- fragmentit ovat olennaisesti epästabiilimpia kuin esimerkiksi naudan vastaavat fragmentit.
On kuitenkin myös tunnettua, että muutamat käärmemyrkyt loh-25 kaisevat trombiinisubstraatteja. Andersson (Haemostasis 1, 31 - 43 (1972)) esittää useiden käärmemyrkkyjen "thrombin like activity" ja ilmaisee tämän trombiinin mukaisesti NIH-yksik-köinä/ml. Käärmemyrkkyjen käytöllä ihmisen proteiineilla suoritettavan diagnostiikan puitteissa on kuitenkin epäspesi-30 fisten vuorovaikutusten haitta (lajin sisäiset vuorovaikutuk set) . Tästä syystä ennen kaikkea kehitettäessä diagnostisia menetelmiä ihmisen tekijöiden määrittämiseksi pyritään käyttämään ainoastaan nisäkäsproteiineja, etenkin ihmisen proteiineja. Olennaisena edellytyksenä määritysmenetelmälle on 35 käytettyjen proteiinien selvä reaktio.
« > ♦ 4 107409
Keksinnön tarkoituksena on saada aikaan protrombiinifrag-menttien uusi käyttö välttämällä inhibiittoreiden aiheuttamat virhelähteet. Siten keksinnön tulee mahdollistaa yksinkertainen ja tarkka menetelmä trombiinisubstraattien määrittämisek-5 si.
Keksinnön kohteena on meitsotrombiinin, meitsotrombiinin (desFl) tai niiden seosten käyttö diagnostisia tarkoituksia varten trombiinisubstraattien määrittämiseksi.
10
On osoittautunut, että nämä fragmentit pystyvät samoin lohkaisemaan substraatteja, joita voidaan saada trombiinista.
15 "Thrombine like activity” merkitsee tässä proteaasiaktiivi- suutta, joka pystyy lohkaisemaan trombiinisubstraatteja, joiden reaktiokinetiikan ja reaktioparametrien, kuten pH- tai ionivahvuusoptimien, inhibiittoreiden, efektoreiden, allos-teeristen vuorovaikutusten jne. on oltava samankaltaisia, 20 mutta ei välttämättä trombiinin vastaavien kaltaisia.
Keksinnön mukaisella käytöllä on se etu, että mainittujen aineiden "thrombin like activity" on hepariinin suhteen epä-herkkä niiden vähäisen affiniteetin johdosta antitrombiini 25 III:n suhteen verrattuna trombiiniaktiivisuuteen. Diagnosti- .. nen määritys käyttämällä mainittuja plasmaproteiineja on siten riippumaton näytteen hepariinipitoisuudesta ja se voidaan suorittaa yksinkertaisella tavalla.
30 Näin ollen trombiinisubstraatteja, kuten fibrinogeeni, tekijä V, tekijä VIII, tekijä XIII ja proteiini C voidaan määrittää suoraan aktivoimalla reagenssilla, joka sisältää mainittuja protrombiinifragmentteja.
35 Keksinnön mukaisesti ei voida määrittää ainoastaan trombiini substraatteja, vaan myös aineita, jotka ovat jollakin tavalla ♦ * 5 107409 vuorovaikutuksessa keksinnön mukaisesti aktivoitujen trom-biinisubstraattien kanssa.
Reagenssia voidaan käyttää siis hyytymisprosessin tekijöiden 5 määrittämiseksi välillisesti aktivoitujen trombiinisubstraat- tien avulla. Tekijä VIII:aa voidaan lisätä esim. reagenssiin ja aktivoida in situ. Siten on mahdollista tekijä IX:n ja tämän lisäksi tekijä X:n määritys.
10 Keksintö koskee tästä syystä myös yllämainittujen protrom- biinifragmenttien tai niiden seosten käyttöä trombiini-sukstraattien aktivoimiseksi, joilla on "thrombin like activity". Näitä protrombiineja ovat siis meitsotrombiini ja meitsotrombiini (desFl). Trombiinisubstraattien aktivoinnin 15 jälkeen määritetään plasmaproteiini, joka on suoraan tai välillisesti vuorovaikutuksessa aktivoidun trombiini-substraatin kanssa.
Keksinnön mukaisesti meitsotrombiinia tai meitsotrombiinia 20 (desFl), etenkin ihmisen meitsotrombiinia tai meitsotrombii nia (desFl) käytetään yksittäin tai seoksena. Nämä aineet voidaan saada käyttöön standardisoidulla tavalla, esimkerilcsi lohkaisemalla valvotusti, käyttämällä käärmemyrkkyjä jne., jolloin yllättävästi on osoittautunut, että niillä on diag-25 nostisia aineita varten tarvittava riittävä stabiilius.
Keksinnön mukaiseen käyttöön sopivat myös geeniteknisesti valmistetut proteiinit, joilla on rakenteensa johdosta trom-biinin kaltainen aktiivisuus ja trombiiniin verrattuna vähäi-30 sempi affiniteetti antitrombiini III:n suhteen.
Keksintö käsittää edelleen reagenssin, joka sisältää meitsotrombiinia, meitsotrombiinia (desFl) tai niiden seoksia ja jota voidaan käyttää diagnostisiin tarkoituksiin trombiini-35 substraattien määrittämiseksi ja trombiinisubstraattien aktivoimi- » · » « 6 107409 seksi ja tämän jälkeen plasmaproteiinin, joka on suoraan tai välillisesti vuorovaikutuksessa aktivoidun trombiinisubstraa-tin kanssa, esimerkiksi hyytymisprosessin proteiinien, kuten tekijä Xa:n ja tekijä Va:n määrittämiseksi.
5
Reagenssit, jotka sisältävät mainittuja protrombiinifragment-teja ja joita käytetään keksinnön mukaisesti, on mahdollisesti lyofilisoitu ja ne sisältävät mahdollisesti edelleen aktivoitavaa trombiinisubstraattia diagnostisia käyttötarkoituk-10 siä varten.
Keksinnön mukainen reagenssi sisältää edelleen yhtä tai useampaa plasmaproteiinia, joka voidaan aktivoida, Ca2+-ioneja ja mahdollisesti fosfolipidejä, tai reagenssin, joka sisältää 15 edelleen ilmaisureagenssia.
Edelleen voidaan valmistaa yksinkertainen testiyhdistelmä, joka sisältää esitettyjen reagenssien lisäksi vielä ilmaisureagenssia.
20
Testiyhdistelmä sisältää vähintään - yhtä reagenssia, joka sisältää meitsotrombiinia, 25 meitsotrombiinia (desFl) tai niiden seoksia, ja joka sisältää lisäksi yhtä tai useampaa plasmaproteiinia, joka voi olla aktivoitu, ja ilmaisureagenssia, ja se voi sisältää edullisesti lisäksi trombiinisubstraattia 30
Ilmaisumenetelmän ja siten ilmaisureagenssin valinta noudat-35 taa tietenkin näytteessä määritettävän aineen luonnetta.
Esimerkiksi aktivoidun proteiini C:n aktiivisuus määritetään kromogeenisellä substraatilla S 2238 (valmistaja Kabi); voi-
* I
107409 7 daan määrittää hyytymisaika tai voidaan käyttää leimattuja aineita.
Keksintöä selitetään vielä lähemmin seuraavilla esimerkeillä. 5
Esimerkkejä: 1. Meitsotrombiinin valmistus ja molekyylipainojakautuma 10 1.1 Immobilisoidun ekariinin valmistus
Ekariini (valm. Pentapharm) sidottiin konsentraatiossa 250 U/ml geeliä BrCn-aktivoituun Sepharoseen (valm. Pharmacia) 15 menetelmän mukaisesti, jonka ovat esittäneet Axen et ai.
(1967) .
1.2 Meitsotrombiinin valmistus 20 1 ml geeliä inkuboitiin protrombiinin (4 U) kanssa (protrom- biini puhdistettu plasmasta adsorboimalla DEAE-Sephadex:iin ja tämän jälkeen edelleen kromatografisesti) 0,02 M Na-ase-taattipuskurissa, 0,15 M NaClrssä, pH 5,2, 1 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Sitten tuote erotettiin geelistä suodatta-25 maila.
1.3 Molekyylipainojakautuma
Natiivisen SDS-PAGE:n ja immunoblottingin jälkeen (1. vasta-30 aine: anti-F.II, polyklonaalinen kaniinista; 2. vasta-aine: peroksidaasi-konjugoitu anti-rabbit-vasta-aine vuohesta) määritettiin molekyylipainojakautuma ja suoritettiin kvanti-fiointi. Tuote omaa seuraavat molekyylipainojakautumat: "thrombin like activity": 67 - 75 kD (31 %), 45 - 50 kD (40 %).
35 Edelleen löydettiin: > 100 kD (7 %), 32 - 38 kD (13 %), <20 kD (9 %) .
j · 8 107409
Viitejulkaisu: Axen R., Porath A. R., Ernback J. S., Nature 214, 1392 - 1404, 1967.
2. Fibrinogeenimääritys 5 2.1 Normaaliplasman hyytymisaika 1 ml lyofilisoitua normaaliplasmaa (Reference Plasma 100 %, valm. Immuno) liuotettiin 1 ml:aan vettä lisäämällä heparii-10 nia tai ilman hepariinia (0, 0,3, 0,6, 1,0 ja 2,0 U/ml). 200 μΐ plasmaa inkuboitiin 2 minuutin ajan 37 °C:ssa. Tämän jälkeen hyytyminen käynnistettiin 200 μ1:1ΐ3 liuosta, jossa oli 5,8 NIH-mukaista yksikköä/ml meitsotrombiinia, valmistettu kohdan 1. mukaisesti, tai 3,3 yksikköä/ml tai vastaavasti 15 10,0 NIH-yksikköä/ml trombiinia (Thrombin Reagent, valm.
Immuno). Aika hyytymän muodostumiseen mitattiin Schnitger-Gross-koagulometrillä (valm. Amelung). Taulukosta 1 nähdään, että näytteen hepariini-pitoisuus pidentää trombiinierien hyytymisaikaa, kun taas hepariini vaikuttaa tuskin ollenkaan 20 meitsotrombiinin vaikutukseen.
Hyytymisaika (s) Näytteen hepariinipitoisuus (U/ml) 25 _ 0 0,3 0,6 1,0 2,0
Trombiini (NIH-U/ml) 3,3 16,1 96,1 > 400 > 400 > 400 10 7,0 15,6 67,4 > 400 > 400 30 Meitsotrombiini (NIH-mukaista yksikköä/ml) 5,8 5,5 6,1 7,6 8,0 8,6 35 2.2 Fibrinogeenin vertailukäyrä
Lyofilisoitua normaaliplasmaa (ks. 2.1) liuotettiin 1 ml:aan tislattua vettä lisäämällä erilaisia trombiini-inhibiittorei- ·, ta (kulloinkin 1 U/ml antitrombiini III:a, hepariinia tai . · · 9 107409 antitrombiini ΙΙΙ/hepariini-kompleksia (Atheplex®, valm. Immuno)) tai ilman näitä ja laimennettiin 0,1 M fosfaatti-puskurilla (pH 7,5) eri tavoin. 100 μΐ näytettä sekoitettiin saman puskurin (50 μΐ) kanssa ja inkuboitiin 2 minuutin ajan 5 37 °C:ssa. Lisättiin 150 μΐ liuosta, jossa oli 10,5 NIH-mu- kaista yksikköä/ml meitsotrombiinia (valm. Pentapharm) tai 5 NIH-U/ml trombiinia (Thrombin Reagent, valm. Immuno), ja sitten määritettiin hyytymisaika kohdan 2.1 mukaisesti.
10 _
Hyytymisaika trombiinin kanssa (s) Inhibiittorilisä
Ei inhib. Atheplex ATIII Hepariini 15 Näyte kons. 17,1 > 300 > 350 > 300 1:2 21,6 61,6 > 350 50,4 1:4 27,6 37,1 101,6 36,1 1:8 41,6 38,6 54,6 48,9 20
Hyytymisaika meitsotrombiinin kanssa (s) Inhibiittorilisä 25 Ei inhib. Atheplex ATIII Hepariini Näyte kons. 15,1 16,0 19,7 25,5 1:2 23,6 26,6 28,8 31,6 1:4 34,6 36,6 37,1 39,1 1:8 56,1 57,6 54,0 60,6 3 0 _ 3. Meitsotrombiini diagnostisessa aineessa hyytymisprosessin aktivaattorina 35
Normaaliplasman (ks. 2.1) tekijä VIII:aan lisättiin 0, 1, 2, 5 tai 10 U hepariinia/ml ja aktivoitiin meitsotrombiinilla, joka oli valmistettu kohdan 1. mukaisesti (0, 3 tai 5 U/ml), ja se määritettiin välillisesti tekijä Xa:n ja kromogeenisen 40 substraatin avulla. Tähän tarkoitukseen käytettiin testiä : Immunochrom FVIII:C® (IMMUNO AG) valmistajan ohjeiden mukai- 10 107409 sesti, jolloin reagenssiin A lisättiin meitsotrombiinia ja reagenssi B käytettiin ilman polybreeniä. Tämä testi sisältää trombiinia, minkä johdosta testijärjestelmässä on mahdollista verrata suoraan meitsotrombiinia ja trombiinia aktivoitujen 5 hyytymistekijöiden määrittämiseksi. Seuraava taulukko osoit taa, että meitsotrombiinin läsnäollessa plasman hepariinipi-toisuus vaikuttaa vähemmän tekijä VIII:n aktivointiin ja määritykseen.
10 ___
Hepariinia (U/ml) 0 l 2 5 10
Meitsotrombiinia 15 (NIH-muk. yksikköä/ml) Värinkehitys (%) 0 100 99 95,6 80 52,1 3 100 99 97,4 87,8 73,3 5 100 100 98 92,2 80,1 2 0
Claims (6)
1. Meitsotrombiinin, meitsotrombiinin (desFl) tai niiden seosten käyttö diagnostisiin tarkoituksiin trombiini- 5 substraattien määrittämiseen.
2. Meitsotrombiinin, meitsotrombiinin (desFl) tai niiden seosten käyttö trombiinisubstraattien aktivoimiseen ja tämän jälkeen sellaisen plasmaproteiinin määrittämiseen, joka on 10 suoraan tai välillisesti vuorovaikutuksessa aktivoidun trombiinisubstraatin kanssa.
3. Reagens, kännetecknad av att den innehäller meizotrombin, meizotrombin (desFl) eller blandningar därav för användning enligt krav 1 eller 2 samt därtill även en 15 eller flera plasmaprotein, vilka kan vara aktiverade, Ca2+-joner och eventuellt fosfolipider.
3. Reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää meitsotrombiinia, meitsotrombiinia (desFl) tai niiden seosta 15 patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaista käyttöä varten ja tämän lisäksi se sisältää yhtä tai useampaa plasmaproteiinia, joka voi olla aktivoitu, Ca2+-ioneja sekä mahdollisesti fosfolipi-dejä.
4. Reagens enligt krav 3, kännetecknad av att den innehäller vidare en detektionsreagens. 20
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi ilmaisureagenssia.
5. Testkit, kännetecknad av att den innehäller minst en reagens enligt krav 3 och - en detektionsreagens. 25
5. Testiyhdistelmä, tunnettu siitä, että se sisältää vähintään 25. yhtä patenttivaatimuksen 3 mukaista reagenssia ja ilmaisureagenssin. 1 « Patenttivaatimuksen 5 mukainen testiyhdistelmä, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi trombiini- 30 substraattia. 12 107409 1. Änvändningen av meizotrombin, meizotrombin (desFl) eller blandningar därav för diagnostiska ändamäl för bestämning av 5 trombinsubstrat. 2. Änvändningen av meizotrombin, meizotrombin (desFl) eller blandningar därav för aktivering av trombinsubstrat och därefter för bestämning av ett plasmaprotein, som växelverkar 10 direkt eller indirekt med det aktiverade trombinsubstratet.
6. Testkit enligt krav 5, kännetecknad av att den vidare innehäller ett trombinsubstrat.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT100092 | 1992-05-15 | ||
| AT0100092A AT397391B (de) | 1992-05-15 | 1992-05-15 | Verwendung von prothrombinfragmenten |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI932194A0 FI932194A0 (fi) | 1993-05-14 |
| FI932194A FI932194A (fi) | 1993-11-16 |
| FI107409B true FI107409B (fi) | 2001-07-31 |
Family
ID=3504644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI932194A FI107409B (fi) | 1992-05-15 | 1993-05-14 | Protrombiinifragmenttien käyttö |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5529905A (fi) |
| EP (1) | EP0570355B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0630793A (fi) |
| AT (2) | AT397391B (fi) |
| CA (1) | CA2096076A1 (fi) |
| CZ (1) | CZ88093A3 (fi) |
| DE (1) | DE59309254D1 (fi) |
| DK (1) | DK0570355T3 (fi) |
| ES (1) | ES2126641T3 (fi) |
| FI (1) | FI107409B (fi) |
| HU (1) | HU219457B (fi) |
| MX (1) | MX9302830A (fi) |
| NO (1) | NO308140B1 (fi) |
| SK (1) | SK48893A3 (fi) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4430204A1 (de) * | 1994-08-26 | 1996-02-29 | Behringwerke Ag | Arzneimittel, welches als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet ist und seine Verwendung |
| US6165795A (en) * | 1998-06-25 | 2000-12-26 | Cardiovascular Diagnostics, Inc. | Methods for performing fibrinogen assays using dry chemical reagents containing ecarin and magnetic particles |
| DE19904674A1 (de) | 1999-02-04 | 2000-08-31 | Haemosys Gmbh | Verfahren zur Bestimmung der Konzentration von Thrombininhibitoren |
| WO2001004146A2 (en) * | 1999-07-09 | 2001-01-18 | Cohesion Technologies, Inc. | Ecarin polypeptides, polynucleotides encoding ecarin, and methods for use thereof |
| US20050221414A1 (en) | 2004-03-31 | 2005-10-06 | Katalin Varadi | Kit for measuring the thrombin generation in a sample of a patient's blood or plasma |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0258920B2 (fi) * | 1980-10-09 | 1990-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | |
| NL8902406A (nl) * | 1989-09-27 | 1991-04-16 | Hendrik Coenraad Hemker Prof D | Werkwijze voor het bepalen van de endogene trombinepotentiaal van plasma, en bloed alsmede een bij deze werkwijze te gebruiken kit. |
| ATE170982T1 (de) * | 1990-02-14 | 1998-09-15 | Pentapharm Ag | Inhibitoren zur antikoagulierenden vorbehandung von blutproben |
| EP0509086B1 (en) * | 1990-11-05 | 1995-04-12 | Dade Produktions AG | A method to determine the concentration of anticoagulants |
-
1992
- 1992-05-15 AT AT0100092A patent/AT397391B/de not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-06 HU HU9301316A patent/HU219457B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-05-12 CA CA002096076A patent/CA2096076A1/en not_active Abandoned
- 1993-05-12 DK DK93890098T patent/DK0570355T3/da not_active Application Discontinuation
- 1993-05-12 ES ES93890098T patent/ES2126641T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-12 CZ CZ93880A patent/CZ88093A3/cs unknown
- 1993-05-12 DE DE59309254T patent/DE59309254D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-05-12 AT AT93890098T patent/ATE175243T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-05-12 EP EP93890098A patent/EP0570355B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-14 MX MX9302830A patent/MX9302830A/es unknown
- 1993-05-14 NO NO931772A patent/NO308140B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-05-14 JP JP5112798A patent/JPH0630793A/ja active Pending
- 1993-05-14 SK SK488-93A patent/SK48893A3/sk unknown
- 1993-05-14 FI FI932194A patent/FI107409B/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-12-08 US US08/351,736 patent/US5529905A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59309254D1 (de) | 1999-02-11 |
| EP0570355A1 (de) | 1993-11-18 |
| NO931772D0 (no) | 1993-05-14 |
| ATE175243T1 (de) | 1999-01-15 |
| FI932194A0 (fi) | 1993-05-14 |
| NO308140B1 (no) | 2000-07-31 |
| FI932194A (fi) | 1993-11-16 |
| JPH0630793A (ja) | 1994-02-08 |
| NO931772L (no) | 1993-11-16 |
| HU219457B (hu) | 2001-04-28 |
| SK48893A3 (en) | 1993-12-08 |
| HUT64698A (en) | 1994-02-28 |
| EP0570355B1 (de) | 1998-12-30 |
| ATA100092A (de) | 1993-08-15 |
| US5529905A (en) | 1996-06-25 |
| MX9302830A (es) | 1994-05-31 |
| CA2096076A1 (en) | 1993-11-16 |
| DK0570355T3 (da) | 1999-08-30 |
| HU9301316D0 (en) | 1993-09-28 |
| CZ88093A3 (en) | 1993-12-15 |
| ES2126641T3 (es) | 1999-04-01 |
| AT397391B (de) | 1994-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jesty et al. | Acetylated prothrombin as a substrate in the measurement of the procoagulant activity of platelets: elimination of the feedback activation of platelets by thrombin | |
| Hofsteenge et al. | Enzymic properties of proteolytic derivatives of human. alpha.-thrombin | |
| Bergström et al. | Determination of vitamin K sensitive coagulation factors in plasma. Studies on three methods using synthetic chromogenic substrates | |
| CA2252983C (en) | Method for determining the anticoagulatory potential of a sample | |
| CA2333890A1 (en) | Corn trysin inhibitor stabilizes blood-derived plasma and improves sensitivity of plasma clotting assays | |
| JP2003517610A (ja) | 血液学的アッセイ及び試薬 | |
| JPH05503223A (ja) | 抗凝固剤濃度測定方法 | |
| AU705596B2 (en) | Method for specifically detecting a coagulation factor V which has an increased stability toward activated protein C in the activated state | |
| AU694931B2 (en) | A method for detecting disturbances of the protein C/protein S system | |
| FI107409B (fi) | Protrombiinifragmenttien käyttö | |
| JPH04293500A (ja) | 第ｖｉｉｉ因子活性を測定するための試薬 | |
| US6124110A (en) | Method for determining activated coagulation factors in plasma and plasma derivatives | |
| Cenni et al. | Activation of the plasma coagulation system induced by some biomaterials | |
| US5753510A (en) | Calibrator for use in test methods for detecting a defective coagulation factor V | |
| Francis Jr | A simplified PTT-based protein C activity assay using the thrombin-thrombomodulin complex | |
| CA2065370C (en) | Factor viii:ca chromogenic assay | |
| CA2421957C (en) | Method for measuring antithrombin activity | |
| US6100050A (en) | Factor VIII:Ca chromogenic assay | |
| Walker et al. | The molecular mechanisms of heparin action: III. The anticoagulant properties of polyanetholesulfonate | |
| US5476771A (en) | Test for quantitative thrombin time | |
| HU216866B (hu) | Eljárás és reagens fibrinogén meghatározására | |
| CA2137342A1 (en) | Test for quantitative thrombin time | |
| Weinstein et al. | Abnormal factor VIII coagulant antigen in patients with renal dysfunction and in those with disseminated intravascular coagulation. | |
| Milstone | Protein thrombokinase and lipoid thromboplastin as distinct factors with complementary functions | |
| Stief et al. | The extrinsic coagulation activity assay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |