JPS59134735A - 抗腫瘍組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 Ａ０発明の分野 この発明は、ヒトを含む動物体における新生物細胞の増
殖を阻害するため、及び腫瘍状態又は癌状態に感受性の
個体の遺伝的又は環境的素質に由米する免疫系不調の治
療のための、インターフェロン（ＩＦＮ　）と組合わせ
た又はインターフェロンを伴わない二重鎖リポース核酸
（ｄｓ　ＲＮＡ　）の使用に関する。この発明はさらに
、腫瘍状態又は癌状態を治療するための、他の化学的薬
剤及び生物学的薬剤と併用するｄｓＲＮＡの使用に関す
る。

Ｂ６発明の背景 ５ＲＮＡ ＩＦＮは、動物細胞中でウィルスの増殖を阻害すること
ができる蛋白質である。これらは細胞に由米し、試験管
内又は生体内で生産され、そして非常に広範囲の物質に
よシ刺激される［　Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｌａｏｆ　Ｂ
ｌｏｃｈｅｍｌｓｔｒｙ　ｔ　ｔｆｆジャー・ウィリア
ムス（Ｒｏｇｅｒ　Ｗｌｌｌｌｍｍｍ　）及びニドウィ
ン、・ランスフォード（Ｅｄｗｌｎ　Ｌａｎ５ｆｏｒｄ
　）　編＋レインフォールド−）Ｊ？ブリッジング（Ｒ
＠ｊｎｈｏｌｄ　Ｐａｂｌｌａｈｌｎｇ）社、１９６７
年〕。ＩＦＮが抗ウィルス作用のｔｌかに抗細胞増殖作
用を有することが知られている（　Ｎａｔｕｒｅ　、　
２６２　、３００　＋　１９７６年：ＦＪｘｐｔｌ。

Ｃｅ１ｌ　Ｒｅｓ、、　１２１　、１１１　、１９７９
年）。さらに、インターフェロンがグラスミノ−ｒン活
性化物員の分泌を低下せしめ（Ｎａｔｕｒｅ　＋　２７
６　＋　８２ＥＬ＋１９７８）、接触阻害を確立しく　
Ｊ、Ｃ１１１Ｂｌｏｌ、。

５６．８４６．１９７３年）、そして半固形寒天中での
新生物細胞の増殖を阻害する（　Ｎａｔｕｒｅ　＋２３
１、．２０．１９７１年）ことが知られている。

ｄ＋５ＲＮＡは種々の分子形（白血球性及び線維芽細胞
性を含む）及び免疫型のヒ）−ＩＦＮのインデューサー
で６って（Ｊ、Ｒ＠Ｎｃｕｌｏ＠ｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
Ｓｏｃｉ！ｔｙ、２３．２９９　、１９７８　）、天然
ｄｓＲＮＡ及び合成ｄｇＲＮＡのいずれもＩＦＮ生産を
刺激することができる。インターフェロン誘発物質とし
てのポリリボイノシン酸とポリリゾシチジン酸の複合体
の形の合成ｄｓ　ＲＮＡ（ｒＩｎ−ｒＣｎ）の使用が、
同えばランプソン（Ｌａｍｐｓｏｎ　）等の米国特許第
３　、６６６　、６４６号において矧られている。ｄｓ
ＲＮＡはＩＦＮ誘発物質であるほか、ＩＦＮＫ：誘導さ
れる２種類の酵素、すなわちプロティンキナーゼ及び２
’−５’オリゴアデニレートシンセターゼの活性化物質
でもある（　Ｐｒｏ、ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｅｌ　、
＋　７５　＋５８９３．１９７８年）。しかしながら、
インターフェロンの抗細胞増殖作用及び抗新生物作用の
分子的基碇は未知であシ、そしてこの発明に先立ってイ
ンターフェロン誘発物質としての機能以外のｄｉ　ＲＮ
Ａの抗細胞増殖効果もなんら知られていなかった。

１、ｄｓＲＮＡの合成不均整類似体 さらに量近、Ｔｓ’ｏ及びカーター（Ｃａｒｔｅｒ　）
の米国％計第４　、１３０．６４１号、及び第４，０２
４，２２２号に開示されているとと（、ＩＦＮはｒｌ　
−ｒＣの不ｎ　　　　　ｎ 均整類似体によっても誘発され得ることが見出された。

これらの特許の記載を引用によりこの明細に組み入れる
。これらの類似体は、ポリリゾシチジン酸）　（ｒＣｎ
）Ｉにそって非対塩基（ウラシル又はグアニン）を導入
することにより　ｒ　Ｉ　ｎ−ｒ　Ｃｎを変形すネこと
によシ、又はポリリボイノシン酸（ｒＩｎ）のリボース
主鎖を変形することによ多形成される。不均整類似体、
特にｒＣ鎖におい゛て変形された類似体は、第１図に示
すごとき一定の構造的要求に合致する限シインターフェ
ロン誘発能力を保有する。第１図において、完全な塩基
対からなるｄｓＲＮＡの長い傾城はインターフェロン誘
、発のために必要でない。実際に、完全な塩基対ｄｓＲ
ＮＡの１／２〜１回転の螺旋が保持されていればインタ
ーフェロン合成を開始する（引金を引く）ための構造上
の先行条件が満たされる。

発明者等は、不均整重合体がヌクレアーゼに暴露された
場合／Ｊｌｌ水分解速度は上昇する（　Ｊ　、Ｍｏ１ｅ
ｃ　。

Ｂｌｏｌ、　、７０　、５６７　、１９７２年）が、こ
れらのｄｓ　ＲＮＡは、インターフェロンの誘発に関し
て変形されていないｒ　Ｉ　ｎ−ｒ　Ｃｎとほとんど異
らない活性を有することを見出した。障害を受けていな
い二重螺旋構造が長時間保持されることによシ、ｄｓＲ
ＮＡに対する薬剤毒性として一般に記載されている他の
多くの生物学的反応が生ずることが報告された。撞々の
ＭＪ物系における不均整類似体ｒ　Ｉ　ｎ　’　ｒ　（
ＣＩ　２１　Ｕ　）　ｎ（アンシリダン（Ａｍｐｌ　Ｉ
ｇｅｎ　）、ＨＥＭリデーチ社の商標〕の研究によシ、
ｒｌｎ−ｒ（Ｃ，２，Ｕ）ｎはｒ　Ｉ　、　・ｒ　Ｃｎ
に比べて毒性が少ないことが示された［　Ｐｏ１ｙ　Ｉ
Ｃｗｉｔｈ　ｍ！５ｒｎａｔｃｈｅｄｂａｓｅｓ　＋　
ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒ
ａｐｙ　。

Ａｕｇｍｅｎｔｉｎｇ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｉｎ　Ｃａｎｃ
＠ｒ　Ｔｈｅｒａｐｙ　。

Ｅ、Ｍ・″−シー（Ｈｅｒｓｈ　）等編、レーブン・プ
レス（Ｒ１ＬＶ＠ｎ　ｐｒｅｓｓ　）−ニューヨーク、
１７７゜１９８１年）。特に、ｒ　ｆ　ｎ−ｒ　（Ｃ，
２＋　Ｕ）。をマウスに反復投与する場合、骨髄要素、
肝細胞、胸腺細胞及び肺細胞を含む非常に感受性の器官
に対する毒性が非常に低（（Ｊ　、Ｍｏ１ｅｃ、Ｂｔｏ
ｌ　、４０　＋　５６７　ｒ１９７２年）、池方棟々の
致命的なウィルスの攻撃に対する保峨において有効であ
る（　Ｍｏ１ｅａ。

Ｐｈａｒｍ、＋１２　、２９９　＋　１９７６年）。

さらに、ｒ　Ｉ　ｎ　’　ｒ　（Ｃ７２・Ｕ）ｎは、Ｉ
■。・ｒＣｎに比べて、家兎において低下した発熱性（
１／１００に低下）、マウス及びヒトの細胞を用いる試
験管内叔験における低い有糸分裂修Ｌｔ４１／ｓ〜１／
１０に低下）、及び家兎及びマウスにおける低下したｄ
ｓＲＮＡ抗体生産性（１１５〜１／１０に低下）を水子
。この低下したｉ＋　ｈ、ｉ毒性の背景に対して、ｒｌ
、−ｒ（Ｃ，、、Ｕ）ｎはインターフェロンを誘発し、
天然キラー（ＮＫ）細胞様能を刺激しく　Ｊ　、Ｉｍｍ
ｕｎｏ　＋　１２４　、１８５２　、１９８０）、そし
て前記の細胞内媒介体である２’−５’−オリゴ−アデ
ニレートシンセターゼ及び特異的プロティ。

ンキナーゼを活性化する（共同発明者の未発光データ）
。従って、種々の試験系（家兎、マウス及びヒト）にお
いて、そして、櫨々の毒性及び治療効果を測定するため
の種々の投与鷺において、不均整類似体ｒｌｎ−ｒ（Ｃ
１２ｙＵ）ｍ（アンシリダン）は強化された治療率を有
することが明らかである。

この不均整誘発物質／活性化物質の調製及び製剤はすで
にｄ己載されている（　Ｊ、Ｍｏ１ｅｃ、ＢＩｏ、７０
　。

５６７　、１９７２　）。

動′＋／／Ｊ細胞内でインターフェロン生産を誘発して
ウィルスによる攻撃に対抗することのみを目的とする変
形ｒｒ、−ｒＣｎｆＡ似体の使用については、例えば前
記の米国特許第４，１３０，６４１号及びｍ　４，０２
４，２２２号に記載されている。しかしながら、インタ
ーフェロンの抗細胞増殖剤としての使用の観点からは、
多くの個体においてＩＦＮは周辺的効果のみ生じさせる
というＩＦＮ療法に対する障害が任在する。従って、比
較的多址のインターフェロンを投与する必要があシ、こ
のために通常のウィルス感染に対するヒトの通常の反応
の過程で生ずることがない程不自然に高い体内ＩＦＮレ
ベルが生ずる。このような商いレベルにおいては、体は
ＩＦＮを外来物質として扱うことができ、そして処理式
れた個体はＩＦＮに対する抗体を形成する能力を有する
。

さらに、特に新生物細胞は、ＩＦＨの治療的性質に対す
る耐性を獲得する能力を有する。後記のごとく、ＩＦＨ
に対する耐性を発生せしめる新生物のこの能力は非−無
作為的表現型（ｎｏｎ−ｒａｎｄｏｍｐｈｅｎｏｔｙｐ
ｅ　）として獲得され、そしてそれ故にＩＦＮのみの使
用に基く細胞増殖の阻害を意図する治療方法に対して深
刻な欠点をもたらす。この発明は、細胞がＩＦＮ耐性を
獲得するか否かにかかわらず癌細胞の増加を停止せしめ
又は劇的に妨害する新規な抗細胞増殖剤及び組成物を開
示することによシ従来技術が有する前記の欠点を除去す
る。

さらにこの発明は、従来技術によシ達成されるレベルニ
比へてインターフェロンの体内レベルが２０〜５０の係
数をもって低いが、非零に大きな治療効果をもたらすイ
ンターフェロン含有組成物、を提供する。ｄａ　ＲＮＡ
を含有するこの発明の組成物は上側的に作用するため投
与に必要なｄｓ　ＲＮＡレベルも同時に従来技術によシ
開示されているそれよシも低い。

過去２年間に、新生物細胞に対する免疫監視機構におけ
るＮＫｉＨ胞集団の中心的役割を支持する多くの報告が
発表された。高いＮＫ−細胞活性を有するマウスは低い
ＮＫ−細胞活性を有するマウスに比べてＮＫ−感受性腫
瘍細胞の増殖に対し高い耐性を有する（　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ、Ｒｅｖ、、　４４　＋　１６５　＋１９７９）。さ
らに最近、選択的ＮＫ細胞欠損を有するベージュマウス
が、正常なＮＫ細胞活性を有する同質遺伝子的マウスに
比べて腫瘍増殖に対して感受性であることが報告された
［Ｎａｔｕｒｅ（０ンドン）　＋　２８４　＋　６２２
　、１９８０　；Ｎａｔｕｒｅ。

２８４．６２４．１９８０）。チェディアクーヒガシ（
Ｃｈｅｄｌａｋ　−Ｈ１ｇａｓ旧）症候群を有するヒト
においても同様の状態が任在し、そしてこの疾患におけ
るＮＫｆ田胞欠損は原因として、これらの患者における
リンノ臂腫の発達と関連することが水製された（　Ｊ、
Ｅｘｐ、Ｍ＠ｄ、、１５１　、１９３９　、１９８０　
：Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　１５１．　１０４９　、１
９８０　；Ｎａｔｕｒｅ　（ロンドン）　、　２８４　
　、　５５３　、１９８０：］。

慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）患者は二仄悪性腫瘍の
高い発生率を有することが知られている。最近、テグラ
ー（Ｚｌｇｌｅｒ　）及びツアーリング（Ｚａｒｌｌｎ
ｇ）（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｅｅｒ＋　２７　、　３２１
　＋　１９８１　）は、白血病細胞を取シ出した後、慢
性白血病患者からのリンパ球中のＮＫ細胞活性を評価し
た。ＣＬＬ患者の多くは、ＮＫ−感受性標的に結合した
リング（球の存在にもかかわらず、最小の又は検知でき
ないＮＫ細胞活性を有する。さらに、多量の免疫抑制剤
によ多処理された腎臓移殖受容体は、約１００倍高い二
次蕾、性腫瘍発生の危険性を有し、そして又非常に抑制
されたＮＫ細胞活性を有し又はこの活性を喪失している
（　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａ口ｏｎ、２９゜２１４．１
９８０）。これに対して、これらの受容体において、抗
体依存性細胞性細胞毒性［ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｓ
ｎｄｅｎｔ　　　ｃｅｌｌ−ｍｅｄｌａｔｅｄｃｙｌｏ
ｔｏｘｌｃｉｔｙ　（ＡＤＣＣ）　）は抑制されない。

このことは、ＮＫ細胞活性の欠損（又は損傷）は非常に
％列的であシ、そして現在のととろ、高い二次悪性腫瘍
発生傾向と関連しているように思われる。

従って、幾つかの別個の研究室によシなされた最近の証
明によシ、ヒトにおける新生物に対する免疫監視機構と
してのＮＫ細胞系の東壁性が確認される。発明者等はこ
こに、ヒトにおけるＮＫ活件の欠損が実際にヒトー癌を
訪導し、そしてこの欠損はインターフェロン単独ではな
くある種の不均整ｄｓＲＮＡｋ併用することによシ完全
に修正され得ることを発見した。

ｌＶ、ＮＫ細胞機能の内的側（至）物質としてのＩＦＮ
インターフェロンのごとき天然制御物質の主要な有用性
は、腫瘍クローン（これが発生する場合には）の生理的
コントロールを強化することにより、そしてＮ　Ｋ　Ｉ
￥（ｉｌ胞系のごとき天然免役経路を強化することによ
って明白な二次腫瘍発生過程を防止する点にある。発明
者等は、内生インターフェロンが存在しない場合これら
の経路の機能は限界レベルよシ低くなっておシ、又は全
く休止していると推論する。さらに、幾つかの別個の研
究室による最近の証明によｆｉ、ＮＫ細胞系の内性活性
化物質としてのインターフェロンの役割が確認されつつ
ある。ハンテ（Ｈａｎｎａ　）及びフィルダー（Ｆｉｌ
ｄｌｅｒ　）　（Ｊ、Ｎａｔ、Ｃａｎｅｅｒ　　Ｉｎｍ
ｔ、、　６４（４）　＋８０．１９８０）は、低ＮＫ細
胞活性を有する３週令マウスをインターフェロン誘発物
質で処理することによＪＮＫ細胞活性が増強され、そし
て転移形成（腫瘍の拡散）が阻害されることを示した。

ライド（Ｒａｉｄ）等（Ｐｒｏｃ、Ｎ１ｔ１．Ａｃａｄ
、Ｓｃｊ　、。

ＵＳＡ、７８（２）、１１７１．１９８１）は、ヌード
マウスを抗−マウスインターフェロン抗血清で処理する
ことによりインターフェロン生産及びＮＫ細胞活性の両
者を低下せしめた。さらに、抗−インターフェロン処理
によシヒトー腫瘍移植成功率、及びヌードマウス中での
増殖が非常に増加した。

この結果は、正常なレベルの内生インターフェロンが、
ＮＫ細胞のごとき免疫系成分を介して間做的に作用する
ことによυ、腫瘍細胞の増殖、侵入及び転移において重
要な役割を演することと一致する。最後に、ニドワード
（Ｅｄｗａｒｄｌｌ　）及びデーデン（Ｂｏｒｄｅｎ　
）　（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ＡＡＣＲ，１１５３＋
１９８１年）は、ＮＫ細胞を抗−インターフェロン抗血
清とプレインキーベートすることによシ正當なヒトのＮ
Ｋ、１ｉｉｆｌ胞活性が減少し又は消滅することを示し
た。すなわち、ヒトにおいてＮＫ細胞が正常に億ｉ粍す
るためには細胞表面に結合したインターフェロンが常に
存在することか必須のようである。すなわち、多くの研
究室による最近の証明によシ、天然キラー細胞系の内生
制御物質としてのインターフェロンの詳細な役割が確認
されつつある。ＩＦＮの内生誘発の概略を第１表Ｖこ示
す。

以下余白 鋼）ｌイ〈 ヒトインターフェロンの誘発　　−・−インターフェロ
ンの型　　誘発物質　　　　　備　　　　考線維芽細胞
型　　ｒＩｏ−ｒＣｎ　　　誘発系にシクロへ含めるこ
とによシ 生産が強化される。

白　　血　球　型　　　　センメイライノ１２ス免　疫
　型　　ＰＨＡ、ＣｏｎＡ　　マクロファージの存在下
でリンパ球 を誘発することに より生産が増強さ れる。

免　疫　ｕｈ異抗原　　リンパ球を特異抗原によシ感作
自な′ ければならない。

リンパ芽球型　　ツ痢つイ秘　腫瘍ウィルスを含細胞は
主としてα 一インターフェロ ン及び少姓のβ− インターフェロン を生産する。

発明者等の測定方法によシＩ　Ｘ　１０−”Ｍ未満の製
置に対応する約１ピコグラム／　ｍｌという微少敞のイ
ンターフェロンを測定することができる。

しばしば、同じ型の細胞が複数の型のインターフェロン
を生産し、ｄ数の遺伝部位の存在が示唆される。

発明者等は、精製ヒト−インターフェロン及びその誘発
物質の両者が、ヒト白血病細胞系（Ｋ５６２）に対する
ヒ）−ＮＫ細胞の細胞毒性を鎗蓄に増加せしめることを
観察した。発明者咎は又、インターフェロンが正盾なヒ
ト−リンパ球を活性化して種々の患者からの新鮮な白血
病細胞を溶解せしめることを見出した（　Ｊ、Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ、、１２４（４）＊　１８５２＋１９８０　：　
Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１２３　、　６３　、１９７９
）。

さらに、ハトレストン（Ｈｕｄｌｅｓｔｏｎｅ　）、メ
リガン（Ｍａｒｌｇｉｎ　）及びオールドスト−ｙ’（
Ｏｌｄｏ−ｇｔｏｎｅ　）　（Ｎａｔｕｒｅ、　２８２
．４１７．１９７９　）は、ナン／ＩＰ腫思者において
ＮＫ活性欠損が生ずるこ七を示唆した。そして、この研
究により、外生インターフェロンが治療効果を伴ってこ
の欠損を修正することができるととが示唆された。

発明の概要 この発明は、ｄｓ　ＲＮＡ、　１４１えばｒＩｎ−ｒＣ
ｎが、ＩＦＮ生産を誘発する本来的能力のほかに抗細胞
増殖効果を発揮する能力を有するという発見に基礎を置
いている。この能力は、ｒＩ−ｒＣ又はそのｎ　　　　
　ｎ 変形された類似体がＩＦＮ耐性（ＩＦＮｒ）ヒト腫瘍細
胞、すなわち高諌鍵のＩＦＮの存在下においても生育し
そして増殖する能力を獲得している腫瘍細胞の増殖を阻
害することができるという事実にょシ最も顕著に証明さ
れる。発明者等はさらに、腫瘍細胞がｒＦＮ耐性であっ
ても、外生インターフェロンをｄｓＲＮＡと組合わせて
使用することによシ、抗細胞増殖作用に関して相乗効果
又Ｆｉ増強された効果が生ずることを確定した。すなわ
ち、ＩＦＮ治療に対して周辺的応答のみを示す個体にお
いて、外生ＩＦＮ及びｄｓ　ＲＮＡを組合わせて使用（
併用）することによ！＋、ｄ＠ＲＮＡのみを使用する治
療により生ずる効果を超える新生物細胞に対するｄａ　
ＲＮＡの強化された抗細胞増殖効果が生ずる。

さらに、ｒＦ’Ｎ僚法は、多くの個体について実行し得
る治療方法を構成する。すなわち、とれらの個体は異状
に高い投与緻レベルのインターフェロンを必伸とせず、
従ってＩＦＮに対する抗体が形成きれる危険性及びＩＦ
Ｎ投与敏に直接関連する他の副作用が生ずる危険性が非
常に少ない。これらの対象において、ｄｓ　ＲＮＡはＩ
ＦＮの作用を増強し、そしてこれによりＩＦＮ療法がさ
らに効果的な治療方法となる。ｆ：って、発明者等の治
療方法及び組成物はＩＦＮのみに基礎を置〈従来の治療
方法を改良し、さらに前記の１又は複数の理由によシこ
の方法以外の方法によっては効果的な治療を営けること
ができない個体に対するこの方法の通用を可能にする。

この発明の好ましい態様においては、ｄｓ　ＲＮＡはｒ
Ｉｎ−ｒＣｎの不均整類似体である。ＭｉＪ記のごとく
、これらの不均整類似体は、非対塩基（すなわちワトソ
ンークリック塩基対を構成しない塩基）、例えはウラシ
ル又はグアニンを滲っていずれか一方の鎖を中断するこ
とによシ得られる。この類似体は、変形されていないｒ
Ｉ　・ｒｃ　　の抗細胞増殖効果ｎ。

を保持しているが不所望の副作用、ρ１」えは発熱、非
特異的細胞死（すなわち正常体細胞の死）、及び抗原性
を発生させる傾向が非常に低下しているため、好ましい
具体列である。

さらにまた、発明者等は、不均整類似体ｒＩｎ・（ｒＣ
４２，Ｕ）ｎ（アンブリダン）が、典型的なｄｓＲＮＡ
、例えばｙｒ　−ｒＣの抗細胞増殖能力と関ｎ　　　　
　ｎ 連させて前記した効果を超える劇的な効果を発揮するこ
とを見出した。さらに詳しくは、この類似体は、腫瘍細
胞における欠点を修正して該ａＩ胞を再プログラムしそ
して機能的に正常化すること、を可能にする。発明者等
は患者から癌細胞を実際に分離し、そしてこの現象を繰
返し観察した。発明者等はさらに、ＩＦＮが実際に前記
の治療に対して障害となる状況においてアンブリダンが
癌細胞正常化剤として有効に機能し得ることを見出した
。

ある種の化学的物質及び生物学的物質が独立して癌細胞
を正常化する幾らかの能力を有することが知られている
。開明者等は、アンブリダンがこのタイプの癌細胞正常
化活性を有するが、ＩＦＮはしばしば逆の効果を肩する
ととすなわち前記の正常化過程を低下せしめ、消滅せし
めることを見出してお少、このことを後ｄ己する。

さらに父、この発明は、家族的背景（すなわち遺＠）に
より又は免疫系の欠損によシ癌発生の素因を有する個体
における免疫不調を修正することをＯＪ能にする。この
能力が非−ＩＦＮ効果であり、そして不均整ｄｓＲＮＡ
が、ＩＦＮの与では生じない重重な程綻において、癌細
胞に影響を与えることができることの証明である。

この発明の治ｆｌｌ成物及び方法は癌、腫瘍及び新生物
細胞の治療のために使用される。ここで「治療」なる飴
は、癌の予防、腫瘍の１且止（部分的又は完全な）、従
来の治療法によってすでに治療てれた患者における腫瘍
の再発の防止、及び癌関連免疫欠損の修正を含む一般的
な用語である。

重要なことに、この発明が一旦臨床的に発現した癌又は
腫瘍の治療に適用されるのみならず、初期の又は前臨床
的なこれらの悪性腫瘍の予防又は消滅のためにも適用さ
れることが確定的に理鳴される。すなわち、癌状態は、
明らかに発現しそして従来の治療法の対象になる画数１
０年にわたシ前臨床的状噛にある。この発明は油力にお
いて、例えば癌への高い傾向を示す背景を有する個体に
おいて臨床的に明らかな段階に達する前に癌を除去する
方法を提供する。他の見方をすれば、癌は潜在的に数１
０年の長きにわたる生物学的連続の単なる一部分であｐ
ｌこの連続の初期は単なる素因である。この発明は、明
らかに発現した癌の修正をもたらすのみならす、この連
続の初期段階において、おそらく癌が実際に発現する数
１０年前に、治療を行うならば癌の予防をも可能にする
であろう。

従ってとの発明は、ヒトを含む動物における癌の治療に
有用な治療方法及び組成物を提供することを目的とする
。ここで「治療」なる語は（癌、腫瘍等との関連で使用
する場合には）ａの予防、腫瘍の阻止（部分的な又は完
全な）、従来の治療法によシすでに治療された患者にお
ける腫瘍の再発防止、腫瘍細胞の正常化、又は癌関連免
疫欠損の修正を含む一般的用語である。

この発明はさらに、治療を必要とする動物にｄｓＲＮＡ
を投与することを％徴とするヒトを含む動物における新
生物細胞の増殖阻害のための改良・された治療方法を提
供することを目的とする。

この発明はさらに、治療を必曹とする動物にｄｓ　ＲＮ
Ａを投与することを４２［とするヒトを合む動物におけ
るＩＦＮ−耐性新生物細力包の増殖を阻害するための改
良された治療方法を提供することを目的とする。

この発明はさらに、ｄａ　ＲＮＡをＩＦＮと組合わせて
動物に投与することを性徴とするヒトを含む動物におけ
る新生物細胞に対するｄｓ　ＲＮＡの抗細胞増殖効果を
増強するための方法及び組成物を提供するととを目的と
する。

この発明はさらに、ｄｓ　ＲＮＡをＩＦＮと組合わせて
動物に投与することを０Ｍとするヒトを含む動物体にお
ける癌細胞又は腫瘍細胞を機能的に正常化する方法を提
供する。

この発明はさらに、アンプリグンを、新生物細胞を正常
化する幾らかの能力を独立して有する他の化学的物質又
は生物学的物質と組合わせてヒトを含む動物に投与する
ことを！ｆｆ＆とする動物体中の癌細胞又は腫瘍細胞を
機能的に正常化するための方法及び組成物を提供するこ
とを目的とする。

この発明はさらに、有効量のアンデリグンを個体に投与
することを％徴とする癌発生の素因を有する個体中の免
疫不調を（ｌｉ正するための方法を提供することを目的
とする。

耐性 前記のごとく、多くの個体がＩＦＮのみの使用を基媚と
する癌治療法に満足に反応しない・従って・高い投与レ
ベルが必要であシ、この結果個体がその体内生成物であ
るＴＦＮに対する耐性を実際に獲得する。その上、生新
物細胞によシ非−無作為的に獲得された表現型として他
の種類の耐性が生ずるという事実は、ｒＦＮのみを使用
して細胞増殖を阻害することを目的とする方法と比べて
この発明の治療組成物及び方法が供するｌｌｊ的な改良
を理解する場合に非常にｆｆ１ｆｆであると考えられる
。ヒトー新生物帷胞がＩＦＮの抗細胞増殖作用に対して
容易に耐性を獲得することを示すために、発明者等はル
リアーデルプリーツク（Ｌｕｒｌａ　−Ｄｅｌｂｒｕｃ
ｋ　）揺動分析を用いてヒ）　−ｆ（Ｔ１０８０線維肉
腫細胞系及びヒ）−４Ｔ４表皮癌細胞系に対する前記の
効果を特色付けた。これにより、表現型としてのＩＦＮ
−耐性の非−無作為的獲得は選択の時点でＮＦＮによシ
誘発されるらしいことが示された。

最初微生物系のために開発されたルリアーデルブリュッ
ク揺拗分析は、ヒト−細胞の集団におけるある棟の表現
型の獲得が無作為的（自発的）過程であるか非−無ｆ′
Ｆ＝為的（誘発的）過程であるかを決定するために使用
する統系的方法を提供する。

最初に単一クローンから始まる一連の個別的培養物を適
当な世代数にわたって増殖せしめる場合、耐性が無作為
的に獲得されるのであれば各培養物中に得られる耐性コ
ロニーの頻度の変動は大きく、耐性が非−無作為的に獲
得されるのであれば小さいであろう。理論的には、変動
対平均の比率されたのでおれば１以下であシ、無作為的
に獲得されたのであれば１以上である。

非−無作為的（誘発される）過程としてのＩＦＮ耐性の
獲得金示すために、ＩＦＮ感受性（ＩＦＮｌｌ）細胞の
クローン性集団をＨＴ１０８０細胞系及びＲＴ４細胞系
から分離した。ＨＴ１０８０クローン系（ＨＴ１０８０
−２）及びＲＴ４クローン系（ＲＴ４−１）は、１２時
間にわたって試験した場合、それぞれ４００ＩＵ／ｌｎ
ｌ及び８０ＩＵ／ｌｄのヒトー線維芽細胞インターフェ
ロンにおいて、完全な増殖阻害を示した。各もとのコロ
ニーから１０個の個別的培養物を確立することにより揺
動分析を開始し、そして選択培地に移植する前に、次の
第２表に示すごとく、各培養物を１６倍化世代にわたっ
て連続的に増殖せしめた。結果を第２表に示す。

第　　２　　表 インターフェロン耐性獲得についての ルリアーデルプリーツク揺動分析 １　　　　３９．３　　　　　７．６　　　　１２６２
　　　３６．９　　　　　２．４　　　　１４５３　　
　　３８．２　　　　　６．１　　　　１２７４　　　
　３５．７　　　　１４．２　　　　１２７５　　　４
１．１　　　　　０．０　　　　９７６　　　　４２．
５　　　　　０．０　　　　’１０２７　　　４４．６
　　　　１８．０　　　　９６８　　　３９．１　　　
　　０．０　　　　１１９９　　　　３７．１　　　　
　２．５　　　　１２２１０　　　　３５．９　　　　
　２．７　　　　１０８変動　　　　７．７３　　　　
３５．２５　　　２２４．０９平均　　　３９．０４　
　　　５．３５　　　１１６．９０補正変動／平均　　
０．１５　　　　　　６．５６　　　　　０．３１ＨＴ
１０８０系についての第２表のデータは、ラーグ（Ｌａ
ｕｇ）等（Ｊ、Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ、　Ｉｎ５ｔ
。

Ｌ←１７３，１９７５）にょシ記載されているように、
半固形寒天中でＨＴ１０８０細胞をクローニングするこ
とによシ得た。激しく増殖中のコロニーを分離し、セし
て２疋の増殖培地を収容した３５簡のディツシュに移し
、ピペッティングを反復することによシ放出し、そして
密着と増殖を可能にした。こうして形成された単層をト
リグシン処理によりグレートから脱着し、そして一連の
増殖のための７５　ｃｍ”のフラスコに移した。こうし
て形成された集合単層（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ　ｒｎｏｎ
ｏｌａｙｅｒ）から成る細胞をトリゾシン処理により脱
着し、そしてディツシュ当シ１００細胞ずつを３５ｍｍ
のディアシ−１０個に接種することにょ１０個の個別的
培養を開始した。集合状態に達した後、各培養物の全細
胞をトリノシン処理によυ脱着し、そして別々の７５備
２のフラスコに移し１０個の培養物を独立に維持した。

最初の個別的培養物を確立してから合計１６倍化世代の
増殖の後、７５ｃｍ”のフラスコ中の集合単層をトリグ
シン処理により脱着し、そしてＩＦＮｒ細胞の頻度を、
ＨｕｌＦＮ−βを含有する液体培地中１００ｍｎディツ
シュ当シＩ　Ｘ　１０４細胞の接種密度において測定し
た。６ＴＧｒの獲得についての揺動分析を、前記の選択
条件（Ｍｕｔａｔ、Ｒｅｓ、７０，２２１．１９８０）
を用いて同時に行った。

ＲＴｄ系についての第２表のデータを得るために、Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ、　６　
＊　２０９〜２８１゜（１９７３］Ｃ記載されている寒
天被覆法によシＲＴ４クローンを分離し、２ｍｇの増殖
培地を含有する３５簡のディツシュに移し、セしてＨＴ
１０８０クローンの場合と同様に処理した。ＲＴ４細胞
を、１００腿デイツシー当シ１×１０舞胞の濃度におい
て工ＦＮ＠有培地に接種した。

ＨＴ−１０８０系及びＲＴＡ系のいずれの場合にも、Ｈ
ｕ　Ｉ　ＦＮ　（ＨＴ　１０８０．１０００　ＩＵ／７
ｎｌ　：　ＲＴ　４．１５０ＩＵ７ｍ／）を含有する増
殖増地（１週間に２回置換）又は６ＴＧ（３μｍ９７ｍ
１）を含有する増殖増地により選択培地を構成した。示
された結果はプレート効果について補正した。無作為サ
ンプリング変動は、個別的培養物と同じ方法で調製した
単一の大培養物において観察される頻度分布を分析する
ことＫより決定した。平均値で割る前に個別的培養物の
変動から無作為サンプリング変動を差引くことによりサ
ンプリング誤差を補正した。これらの研究に使用したヒ
）　−ＩＦＮ−β（線維芽細胞由来）は、コンカナバリ
ンＡ−七ファロース及ヒフェニルーセファａ−スアフィ
ニティークロマ゛トゲ２フィー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅＴｈ、　、　２５１　、７６２０　、１９７６　）
により逐次精製した後２×１０６エＵ／ｍ９蛋白質−（
ＨＥＭリザーチ製、ロックビレ〜、メリーランド）〜２
　Ｘ　１０　　ＩＵ／ｍＡ蛋白質（Ｗ、Ａ、　カーク＝
）ノ比活性を有していた。

ＨＴ１０８０−２集団の場合、各個別的培養物において
、細胞の３．７〜４．５ｑ６がＩＦＮ−含有培地（１ｏ
ｏｏ　ｘＵ／ｍｌ）中でコロニーを形成することができ
た。対照とＮＦＮ処理細胞の間で平均コロニーサイズ及
び細胞形態に差が無かった。この一連の個別的培養物か
ら得られた耐性コロニー数の頻度分布は７．７３の変動
（ＶＩ）を示した。単−犬培養物（ｖ２．無作為サンプ
リング対照）におけ・るコロニー数分布の変動は２．０
４であることが見出された。無作為サンシリング対照に
ついて補正した後、一連の培養物からの耐性コロニー数
の頻度分布のＶＭＲは０．１５であった。これに対して
、ＲＴ４−１細胞を同様に処理した場合、ＩＦＮ耐性コ
ロニーは０．１１係の頻度で生じ、ＨＴ１０８０−２細
胞において観察された頻度に比べて３０〜４０分の１で
あった（第２表）。しかしながら、一連の１０個の個別
的培養から得られた分布の■訊は低く０．３１であるこ
とが見出された。これと同時に行った６−チオグアニン
耐性（６ＴＧｒ）（公知の自発的形質獲得）の獲得につ
いてのＨＴ１０８０−２培養物の試験の結果、補正ＶＭ
Ｒは６，７９であった（第２表）。高いＶＭＲは無作為
的に獲得された形質を示し、そして無作為獲得表現型と
非−無作為獲得表現型を区別するのに１６倍化世代の増
殖で十分であることを示している。ルリア及びデルプリ
ーツクのＰ０法を用い、６ＴＧｒの獲得に関する第２表
に示された値から１．８　Ｘ　１０””変異／細胞／世
代の変異率が計算される。この率は他の系において種々
の場所で得られている公知の変異率と一致する。このこ
とは実験方法の正しさと結果の完全性を証明している。

このようにして分析した場合にＩＦＮ耐性獲得のＶＭＲ
が１より小であることは、インターフェロン耐性が、変
異又は染色体組替のごとき自発的事象の結果としての表
現型ではなく、むしろＩＦＮ処理によシ誘発される表現
型であることを示している。

非−無作為的に獲得された表現型としてのＩＦＮ耐性の
獲得をさらに、ＩＦＨの増殖阻害効果に対する耐性の遺
伝性を試験することによっても特徴付け、この結果を第
２図Ａ及びＣに示した。これらの図は、コロニーをＮＦ
Ｎ含有培地で増殖せしめ、次に分離し、そして１０００
ＩＵ／ｉ／（ＨＴ１０８０　）又は１００　ＩＵ／ｍＡ
（ＲＴ４）のＨｕＩＦＮ−βを合有する培地の存在下で
増殖せしめ、これを試験することにより得た。約１６倍
化世代の増殖の後培地からＨｕＩＦＮ−βを除去し、そ
して細胞のＩＦＮ耐性を、ＩＦＮ不含培地で種々の期間
にわたって増殖せしめた後に試験した。この期間を図面
の簡単な説明の欄に記載した。

耐性集団から誘導された分離コロニーの試験により、Ｎ
ＦＮｒ細胞は、通常は増殖が完全に停止する濃度のＩＦ
Ｈの存在下及び不存在下ておいて同一の世代倍化時間を
有することが明らかになった。

しかしながら、ＩＦＮ耐性が誘発された性質であるとす
る認識と一致して、耐性コロニーは、復帰に種々の時間
を要するが、感受性状態に復帰することが見出された。

ＨＴ１０８０−ＩＦＮｒ細胞のあるクローンはＩＦＮ不
言培地で４週間増殖した後耐性を保持しているが、培地
からＩＦＮを除去した後１５週間で感受性状態に復帰し
く第２図Ａ）、他方耐性ＲＴ４細胞のクローンは分離直
後にはＩＦＮに対して十分に耐性であるが、培地からＩ
ＦＮを除去した後４週間で完全に復帰する（第２図Ｃ）
ことが見出された。フィンター（Ｆｉｎｔｅｒ）（Ｎ、
Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｌｒｏｌ。

旦、４１９．１９６９）の色素吸収法によりＩＦＮの同
一溶液の力価を測定するためのアッセイ細胞として使用
する場合、次の第３表に示すごとく、攻撃ウィルスとし
て水痘性口内炎ウィルスを使用する場合においては耐性
状態にある耐性細胞は少なくともその親と同等に感受性
がある。

第３表 ＩＦＨの抗ウィルス作用に対する親ＩＦＮ８細胞細胞系
　　　　　　　力　価 ＨＴ１０８０−ｃｌ　２　　　ＩＦＮｓｌ、５ＨＴ１０
８０−ｃｌ　２　、　ＩＦＮｒ４．５ＲＴ４−ｃｌ　Ｉ
　　　　ＩＦＮ’　　３０．２ＲＴ４−ｃｌ　Ｉ　　　
　ＩＦＮｒ２８．０この試験は、ＩＦＮのストック溶液
（濃度５゜ＩＵ／ｍＡ　）の力価測定のためのアッセイ
細胞としてＨＴ１０８０系及びＲＴ４系からのＩＦＮ”
細胞又はＩＦＮｒ細胞の集合単層（１，５１ｙｎ直径）
を使用し、攻撃ウィルスとして小庖性口内炎ウィルスを
用いるフィンターの色素吸収法を使用して行った。

第３表のデータは、ＩＦＨの抗細胞増殖作用に対する耐
性が、ＩＦＮの抗ウィルス作用に対する感受性の変化と
必然的に関連するものではないことを示している。しか
しながら、異るウィルスは抗ウイルス状態に関する異る
機構により影響を受は得ること（Ｎａｔｕｒｅ　２８６
＋　Ｊ、７８＋１．９６０：　Ｖｉｒｏｌ　、　３７　
。

８２７＋１９８１　；Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａ
ｄ、　Ｓｃｉ、　７７１２５２８．１９８０）に注意す
る必要がある。

簡単に記載した第２図Ａ及びＣの結果は、ＩＦＨの増殖
阻害効果に対して以前に感受性であった耐性細胞は感受
性の状態に復帰することを示しておシ、この結論はＩＦ
Ｎ耐性は非−無作為的に獲得された表現型であるという
提案を支持している。対照培地及びＩＦＮ−β含有培地
中で形成されたコロニーについて平均サイズの差が観察
されないから、耐性の誘発はＩＦＮ暴露後２４〜４８時
間以内に急速に生じなければならない。あるいは、この
世代の細胞はその生理的状態又は発育状態に依存してＩ
ＦＮｒ又はＩＦＮ’のいずれかの状態で存在するの力・
もしれない。ＩＦＮの添加によシあらかじめ存在してい
た耐性細胞の亜集団が選択され、そしてさらに耐性が維
持されるのかも知れない。

この発明のこの段階の結果はグレッサ−（Ｇｒｓｓｓｅ
ｒ）等のそれと対立する。彼らは、同様の分析により、
耐性表現型は無作為的に獲得され、そして体細胞突然変
異と同じ頻度で生ずる（Ｊ。

Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃｅｒ　　Ｉｎ５ｔ、　　５２＋　　
５５３　＋　　１９７４）と結論した。し力）シながら
、グレソサー等は、１つの大きな腫瘍細胞培養物から分
離された種々のクローンにより示される耐性の比較から
彼らの高い九正を得た。腫瘍細胞の集団からのクローン
性分離体の、ＩＦＨの抗細胞増殖作用に対する感受性は
広範囲に変化し得るという最近の観察（Ｐｒａｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ１．７７　、１４７１．
１９８０）は、このようなりローン間の比較はＩＦＮ耐
性獲得の無作為性の決定に使用することができないこと
を示している。その上、ここに報告された耐性細胞は、
グレッサー等により記載されたそれとは異シ、ＩＦＨの
抗ウィルス作用に対する感受性を保持しており、このこ
とは耐性が単にＩＦＮ受容体の不存在に基ずくものでは
ないことを示しておυ、そしてＩＦＮの増殖阻害効果に
対して耐性を有する、ラウス・サルコマウィルスで変性
されたヒトー線維芽細胞において、ＩＦＨにより抗ウイ
ルス状態が誘発されるとする先報告（Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉ
ｒｏｌ−３３＋　７＋１９７６）と一致する。

抗ウイルス状態の確立におけるｄｓＲＮＡの場与及び外
米性ｄ　ｓ　ＲＮＡの毒性の観点（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ
ｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ　、　７７　、　２５２８　、１９
８のから、ＮＦＮ耐性系は、第２図Ｂ及びＤに示すごと
く、合成ｄｓＲＮＡすなわちｒＩ。・ｒＣｎの抗細胞増
殖作用に対する前記系の感受性に関連して特徴ずけられ
る。

ＩＦＮｒ細胞の増殖に対するｒＩ　−ｒＣｎの効果（す
なわちｄ　ｓ　ＲＮＡ介在毒性）を示す第２図Ｂ及びＤ
を得るために、第２図Ａ及びＣについて記載したのと同
様の実験方法を行った。図中に記載した濃度のＨｕＩＦ
Ｎ−βの存在下でおよそ１６倍化世代増殖せジメタ後、
５　Ｘ　１０’　（ＨＴ１０８０−　ＩＦＮｒ）又Ｈ］
、　Ｘ１０”（ＲＴ４−　ＩＦＮ’）細胞を３朔のディ
ツシュに接種し、そして−夜密着せしめた。次の日（時
間０）に、ディツシュ当υの細胞数を測定し、残シの単
層に図中に記載した種々の濃度のｒＩｎ−ｒＣｎを補給
し、そしてその後２４時ごとにディツシュ当りの細胞数
を測定した。

ＨＴ１０８０−２　（第２図Ｂ）及びＲＴ４−１（第２
図Ｄ）の耐性系は、それぞれこれらの親であるＨＴ１０
８０−２系及びＲＴ４−１系と同様のｒｌｌｌ−ｒｃｙ
１介在毒性を示すことが見出された。ＨＴ１０８０．−
ＩＦＮｒ集団について、細胞増殖を完全に阻害するのに
０．５〜１．０ｍＭのｒＩｎ−ｒＣｎが必要であり、１
ｍＭを超えるｒＩ。・ｒＣｎ濃度においては２４時間以
内に顕著な細胞死が生ずる。このような千件下で培地に
分泌されるＩＦＮ濃度は３Ｉツ句を超えなかった。ＲＴ
４−ＩＦＮｒ細胞における検知し得るｒＩｎ−ｒＣｎ　
　誘発毒性は０．１ｍＭの低濃度において観察され、培
地中における誘発ＩＦＮは検知されなかった。しかしな
がら、ＨＴ１０８０−２細胞において観察される長期の
細胞毒作用と対照的に、ＲＴ４−ＩＦＮｒ細胞の幾つか
のクローンは２４時間後にｄ　ｓ　ＲＮＡ−介在毒性か
ら回復し、そして処理前と同じ増殖速度を示した。２４
時間目又は４８時間目におけるｒ’Ｉ。・ｒＣｆｌの再
添加によシ回復した増殖速度が変化しなかったから、こ
の回復はｒ　Ｉｎ−ｒｃｌが急速に分解した結果ではな
い・ｒＩｎ−ｒＣｎ−処理細胞の培地にヒト−ＩＦＮ−
βに対する抗血清（最終濃度１００中和単位／ｒｎｌｌ
）を添加することによｆ）　ｒＩｎ−ｒＣｎにより誘発
された細胞毒性の程度が低下し又は変化−することがな
く、このことは低い濃度のＩＦＮがｒＩ。・ｒＣｎ−介
在毒性に役割を演じなかったことを示している。

耐性細胞は、ＩＦＮ’親細胞系により示される感受性と
異らないｄ　ｓ　ＲＮＡ−誘発毒性に対する感受性を保
持していることが見出された。このことは、ＩＦＮを用
いる癌の治療のための化学療法管理の開発において重要
な知見であり、そして癌の治療においてＩＦＮのｄｓＲ
ＮＡと併用することがＩＦＮ単独の場合より効果的であ
る可能性を示している。さらに、このデータは、ＩＦＨ
の抗細胞増殖効果における、ＩＦＮで誘発されたｄｓＲ
ＮＡに依存する公知の酵素の役割と対立する。７２時間
までの期間ＩＦＨにより前処理された有糸分裂−刺激正
常ヒトー線維芽細胞においてＩＦＮ−介在増殖阻害の程
度の検知し得る低下が観察されず、そして正常なヒトー
線維芽細胞の感性性系の６週間までの連続サブ培養にお
いて耐性集団が生じないことが示されており、このこと
は正常細胞が容易にＩＦＮ耐性を獲得しないことを示し
ている。

第３図から、ｒＩ。・ｒＣ＋。のどときｄｓＲＮＡが実
際にヒト−新生物細胞に対する高い抗細胞増殖効果を示
すことが認められよう。第３図の基礎として使用したデ
ータは、ＨＴ１０８０細胞（第３表Ａ〜Ｃ）を、１０係
のウシ胎児血清を補給したイーグルの最少必須培地の存
在下で増殖せしめ、そしてＲＴ４細胞（第３図Ｄ−Ｆ）
を１５係のウシ胎児、血清を補給したマツコイ（ＭｃＣ
ｏｙ）培地で増殖せしめることによシ得た。細胞を２　
ｒｎｌの増殖培地を収容した３５調デイツシユ当シ５×
１０細胞（ＨＴ１０８０）又は１×１０細胞（ＲＴ４　
）の濃度で接種し、そして−夜密着せしめた。次の日（
時間０）に、トリプシン処理しそして血球針にょシ計数
することにより２つのディツシュから細胞数を求めた。

ＩＦＮ又ｔｄｒＩｎ、ｒＣｎのいずれかを残りの培養物
に加え、そしてその後７２時間にわたって２４時間ごと
に２枚ずつのディッシーから細胞数を、求めた。ＩＦＮ
又はｒＩ。・ｒｃｌの濃度は第３図中に示す。第３図の
種々のザブプロットを比較することにより、ｒｌｎ−ｒ
ＣｎはＩＦＮ単独と同じオーダーでＮＦ’Ｎ感受性（Ｉ
ＦＮ’）新生物細胞の増殖を阻害することができること
が示される。さらに、そして重要なことに、このデータ
はｄｓＲＮＡが、ＩＦＮ単独の細胞増殖阻害作用に対し
て耐性となっている新生物細胞の増殖を阻害し得ること
を示している。

さらに、次に示す第４表は、ｒＩｎ−ｒｃｎはＩＦＮに
対する中和量の抗体の存在下でもなお抗細胞増殖作用を
示すから、ｒＩｎ−ｒｃｈの抗細胞増殖作用はＩＦＮに
より介在されないことを示している。第４表は、ｒ　Ｉ
ｎ−ｒＣｎ存在下におけるＩＦＨ８及びＩＦＮ”のＨＴ
１０８０−２細胞及びＲＴ４−１細胞のコロニー形成に
対する抗−ヒ）　ＩＦＮ−β抗体の作用を測定し、そし
てｒＩ。・ｒＣｎ単独の作用による新生物細胞系のクロ
ーニング効率の低下を明確に評価することにより得た。

１００鱈のディツシュにＨＴ１０８０細胞（ＩＸＩＯ）
又はＲＴ４細胞（５Ｘ１０）を接種することによりデー
タを得た。次の日に、抗−ＨｕＩＦＮ−β抗体（抗体を
加える場合の最終濃度は２００中和Ｕ／ｍ／）を伴う又
は伴わない各ディツシュに、ｒＩｎ−ｒＣｌｌを含有す
る培地を加えた。８日間（ＨＴ１０８０−ｃ２）又は２
週間（ＲＴ４−ｃｌ　）コロニーを形成せしめ、そして
メタノール固定及びギームサ（Ｇｉｅｍｓａ）染色を行
った。データは、ｒＩｎ−ｒＣｎがＩＦＮ’！又はＩＦ
Ｎｒ新生物細胞系のクローニング効果を区別なく低下せ
しめ、そしてこの効果は前記細胞系に対するＩＦＨの影
響が存在しない場合に大きく生ずる。

以下余白 第４表 ｒｌｌ−ｒｃｌの存在下におけるＩＦＮ”系及びＩＦＮ
ｒ系のクローニング効率に対する抗−ＨｕＩＦＮ−βノ
影響 ＨＴ１０８０−ｃｌ　　２　　　ＩＦＮ８　　　±　　
　　　　０　　　　１００ＩＦＮ”　　　−ＩＦ５Ｍ　
　　　　３ＩＦＮ”　　　＋　　　１０−５Ｍ　　　　
　ＩＨＴ１０８０−ｃｌ　２　　　ＩＦＮｒ　　　±　
　　　０　　　１０゜ＩＦＮｒ　　−１０−３Ｍ　　　
　　２ＩＦＮｒ　　　＋　　　１０−’Ｍ　　　　　　
　２ＲＴ４−ｃｌ　　Ｉ　　　　ＩＦＮ　　　　±　　
　　ｏ　　　　　ｉｏ。

ＩＦＮ”　　　−１０”’Ｍ　　　　８ＩＦＮ８　　　
＋　　　１０−５Ｍ　　　　　　　７ＲＴ４−ｃｌｌ　
　　　ＩＦＮｒ　　ｆ：　　　　　０　　　　１００Ｉ
ＦＮｒ−１０−”Ｍ　　　　８ ＩＦＮｒ＋　　　１０−５Ｍ　　　　７ＩＦＮ耐性をす
でに有する細胞の場合、次の第５表に示す世代倍化時間
のデータにより示されるように、ｒｌｌｌ−ｒｅｎの抗
細胞増殖作用はＩＦＮとの併用投与により強化される。

第５表 高工ＦＮ濃度ニオケルＨＴ１０８０−ＩＦＮｒノ世代倍
化時間 ０　　　　　１７．７　　−　　−　　１６．６０．５
　　　　４９．３　７３．１　９６：９１４２．１１．
０　　　　１３３．８１３９．１１４３．１　１４２．
１２．５　　　　−４２．７−４２．９−３３．０−３
３．７３５咽のクラスターウェルにＨＴ　１０８０細胞
（１×１０５）を接種することによシデータを得た。２
４時間密着せしめた後、培讐物に種々の濃度でＩＦＮ及
び／又はｒＩｎ−ｒＣｎを含有する培地を加えた。処理
後７２時間にわたって２４時間ごとに細胞数を測定する
ことによシ世代倍化時間を測定した。マイナスの符号は
細胞数が晃に減少（細胞の死滅）する期間を時間単位で
示したものである。細胞系がＩＦＮ耐性であるから、Ｉ
ＦＮ単独では抗細胞増殖効果が低く、又は効果がない。

従ってこのデータから、新生物細胞に対する毒性の増加
は、抗細胞増殖効果に対するＩＦＮの単なる附随的な寄
与によるのではなくｒＩｎ−ｒＣｎの作用の強化により
生ずると見ることができる。

アングリグン及びＩＦＮが相乗的組合わせを構成するこ
とは次の第５−Ｂ表のデータによりさらに見ることがで
きる。　　　　　　　　　（Ｊ、下余白第５−Ｂ表 種りのヒト−インターフェロンのみ、又はこれとアンプ
リケ゛ンとの組合せの存在下でのヒト−膀胱癌細胞の試
験管内増殖：アンプリグン久びインターフェロンの混合
の相乗効果 （２５０ＩＲ眸）９８　　４４　　２°２３倍第５−Ｂ
表中の「観察されたアンプリケ・ンの相乗効果」の欄は
、インターフェロン＋アングリケ゛ンの予想される相加
効果を超え、そしてそれよシ高い効果を示す。アンプＩ
Ｊ　ｒン単独では腫瘍細胞の増殖を１４％低下せしめた
。細胞は、５　％　ｃｏ、、。

雰囲気下のベトリ側中で標準的方法によシ増殖せしめ、
そしてすべての結果は３回反復して得た。

使用したインターフェロンは種々の純度（ＩＸＩＯ”Ｉ
　ＲＵ／■蛋白質〜１×１０８■ＲＵ／■蛋白質）を有
し、疎水性アフィニティークロマトグラフィー（力ター
、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓ＋第８巻、３５９〜３７７頁、１９８０）に
より、又は固定化モノクローン抗体によシ精製した。こ
れらすべての技法はこの分野において一般に行われてい
る。構成成分を混合することによシ薬剤の組合わせを調
製し、これを直接腫瘍細胞に加えた。

同時に、処理９前後における腫瘍細胞を、癌遺伝子（ｏ
ｎｃｏｇｅｎ）含量の減少（％）に関して試験した。癌
遺伝子（この明細書において「ｏｎｃ」と略す）は、活
性化された場合に制御されない細胞増殖を惹起すること
ができる、ヒト及び動物の染色体に存在する特異的核酸
配列であシ、言い替えれば悪性それ自体である。癌遺伝
子は腫瘍ウィルスによυヒトを含む生細胞に付与され、
そして遺伝的に伝達され得る。従って癌遺伝子め制御に
よＱ、早期の又は最初のある段階において癌を阻止する
新規かつ自明でない手段が提供される。

上記の実験において測定した癌遺伝子は「ＲｏｕＩＩＢ
ａｒｅ　Ｊ及び［Ｈａｒｖｅｙ　Ｒａｓ　Ｊと称される
ものから成っておシ、これらの活性（発現）を〔プレッ
サー（Ｂｒｅｓａｅｒ）等、　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
　ＮａｔｌｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎ
ｃｅａ＋　Ｕ、Ｓ、＋（印刷中）。

１９８３）に記載されているクイック−プロット（Ｑｕ
ｉｃｋ−ｂｌｏｔ　）法によシ監視した。癌遺伝子７０
−ブを標準法により調製し、そして記載されている通り
、ＮａＩを用いて、ニトロセルロース済紙上で測定を行
った。癌遺伝子活性の低下（チ）を測定する場合の参照
基準として全細胞ＤＮＡ含量を用いた。

重要なことに、アングリグンと試験した各インターフェ
ロンとの組合わせによシ、ヒト−膀胱癌細胞における癌
遺伝子発現に対する相乗的阻害効果が生じた。異なる癌
遺伝子、例えば［ｖ−ｒａｓ−Ｈａｒｖｅｙ　Ｊ、「ｃ
−ｒａｓ−Ｈａｒｖｅｙ　ｊ　Ｎ　ｒ　ｖ−ｒａｓ　−
Ｋｉｒｓｔｅｎ　Ｊ、ｒ　ｖ−ａｂｌ　Ｊ　、ｒｅ−ｍ
ｙｃ　Ｊ、「ｖ−ｓｉｓＪ、「ｃ−ｍｏｓＪ、ｒｖ−ｓ
ａｃ−Ｒｏｕｓ　Ｊ　’Ｉと称される癌遺伝子を有する
他の種々のヒト−癌細胞においても同様の効果が観察さ
れよう。

アンｆＩＪグン治療は、腫瘍がインターフェロンに対し
て耐性になった場合に、患者に医療の機会をもたらす。

典型的な医療ケーススタディ−は次の通９である。中年
の白人男性（Ｆ、Ｚ　）が直腸癌を有すると診断され、
新鮮な腫瘍標本がクローン形成試験の分析のために採取
された（第５−Ｃ表の注を参照）。インターフェロン治
療の開始前には、インターフェロン−β（５００ＩＲＵ
／ｍ／　）に曝露することによシロ３％の腫瘍細胞が死
滅し、６５箇月の治療の後、生検を反復することにょシ
、試験管内において同じ濃度のインターフェロンによシ
死滅する腫瘍細胞は４０チ未満であることが示された。

興味あることには、患者が非常に低い日用量のインター
フェロン（３００，０ＯＯＩＲＵ）の投与を受け、そし
てその腫瘍細胞はなお耐性となった。

（癌を有する成人には１日当シ３００，０００，０００
　ＩＲＵまで投与することができ、この場合にも耐性腫
瘍細胞の発生が導かれる。ン インターフェロン治療の前及び後において、患者（’Ｆ
、Ｚ）の腫瘍細胞はアンプリグンに対して感受性のまま
であり、２！５０μｐ／ｍｌにより常に５６チを超える
腫瘍細胞が死滅した。

第５−Ｃ表に示すごとく、アンゾリグン治療は、腫瘍細
胞がはじめからインターフェロン耐性であった患者につ
いて医療の機会をもたらす。

す、下余白 第５−Ｃ表 腫瘍細胞クローン形成試験における種りの新鮮なヒト−
腫瘍に対するｒＩｎ６ｒ（Ｃ１２＋Ｕ）ｎ（アンプリー
グンの抗細胞増殖（細胞増殖阻害）の活性１、　　　　
　　腎　　　　　　　　９７．６％減少２、　　　　　
腎　　　　　　　　８８．８％減少３、　　　　　　腎
　　　　　　　　８７．９チ減少４、　　　　　腎　　
　　　　　　８７．３％減少５、　　　　　　腎　　　
　　　　　８６．７％減少６、　　　　　　腎　　　　
　　　　８１９％減少７、　　　　　　腎　　　　　　
　　８０．５％減少８、　　　　　　結　腸　　　　　
　７８．５％減少９、　　　　　　腺癌（由来不明）７
２．４チ減少１０、　　　　　　　腎　　　　　　　　
７１８チ減少１１　　　　　　腎　　　　　　　　６８
１％減少１２、　　　　　　　黒色腫　　　　　　６２
．２％減少１３、　　　　　　卵　巣　　　　　　５８
．９％減少１４、　　　　　　黒色腫　　　　　　５７
．８％減少１５、　　　　　　　類癌肺　　　　　　５
・６．０％減少１６、　　　　　　乳　房　　　　　　
５２．１％減少１７、　　　　　　　腎　　　　　　　
　４３．０％減少１８、　　　　　　乳房　　　　　　
　４１．１％　減少１９、　　　　　　腎　　　　　　
　　４０．４％減少２０、　　　　　　平滑筋肉腫　　
　　３７．８％減少２１、　　　　　　子宮内膜間質腫
　　３４．１％減少２２、　　　　　　神経線維肉腫　
　　２９．３％減少２３、　　　　　　類癌腫　　　　
　　１９．７チ減少２４、　　　　　　卵　巣　　　　
　　１９．１％減少２５、　　　　　　結　腸　　　　
　　１８．６％減少２６゜　　　　　中皮腫　　　　　
　１６．９％減少２７、　　　　　　　乳　房　　　　
　　１６．５％減少２８、　　　　　　結　腸　　　　
　　１５．４％減少２９、　　　　　　卵　巣　　　　
　　１１．０％減少３０、　　　　　　結　腸　　　　
　　　９．５％減少３１、　　　　　　黒色腫　　　　
　　　０．０％減少３２、　　　　　　平滑筋肉ＩＩ！
　　　　　　９．３％増加注：すべての試験はアンゾリ
グン濃度２５０μに旬。

において行った。コロニーの計測は細胞の増殖速度に応
じて１０〜２１日目に行日日。方法はサーモ：／　（Ｓ
ａ、１ｍｏｎ　）等、Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅ５ｕｌｔｓＩ
ｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、第７４巻、３０
０〜３０５頁、１９８０：及びＮｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ＋第２９８巻
、　１３２１〜１３２７頁。

１９７８年に記載されている。

第５−Ｃ表は、感受性の基準を、腫瘍細胞コロニーの５
０％以上の減少として定義する場合、ヒト−腫瘍の代表
的な試料の５０％がアンプリグンに対して感受性である
ことを示している。このような基準はこの分野の実施者
によシ認識されておシ、そしてこの測定法における腫瘍
細胞の５０％以上の減少によシ試験薬剤に対する好まし
い臨床反応が予測されることが認められている。腎臓癌
を有する７人の患者の内３人がインターフェロンのみに
対しては反応しなかった。例えば、患者５は非常に高い
濃度のヒト−β−インターフェロン（２，４００ＩＲＵ
／ｙｄ）において３２襲未満の腫瘍細胞の減少を示した
が、この患者はアンズリグンヘの暴露において８６．７
％の減少を示した。

特許請求の範囲における「混合物」なる語は、成分の生
体内活性を調節するため、及び相乗効果を生じさせるた
めの、混合物中のいずれかの成分の不活性担体への付加
（例えばインターフェロンのアルブミンへの付加、又は
アンプリグンのポリカチオン性化合物、例えばポリリジ
ンへの付加）をも含む。

ＮＦＮ及び任意のｄ　ｓ　ＲＮＡ　％すなわち完全に塩
基対をなしたｄｓＲＮＡ又は不均整ｄｓＲＮＡ、の「併
用」投与姉は、両薬剤を医薬混合物として一緒に投与す
る場合及び両薬剤を別々に、しかし同時に、例えば別々
の静脈を通して小形の個体に投与する場合が含まれる。

「併用」投与にはさらに、薬剤の一方を捷ず投与しそし
てそれから短時間後に第二の薬剤を投与する分離投与も
含まれる。これら３種類の態様はそれぞれ固有の利点を
有する。分離同時投与により、例えば各薬剤を別々に制
御することができ、それにより個々の患者について治療
の最適化を行うことができる。分離投与により、例えば
ＩＦＮ単独による細胞に対する弱い効果を確立し、次に
この効果をアンプリグンの使用により強化することがで
きる。最適レベルがすでに確立されている場合には、Ｉ
ＦＮ及びｄｓＲＮＡの混合剤が医薬組成物となることは
もちろんである。これらのことは、１つの薬剤が他のも
のと「併用」されるとするこの発明のすべての場合妬適
用される。

同様に、この発明の薬剤又は組成物は医療分野において
一般に用いられそして知られている任意の経路により投
与することができる。静脈内投与についてはすでに記載
しだが、筋肉内投与、膜内（Ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ）
投与、頭蓋内投与、及び腹腔内投与を含む他の経路の投
与もこの開示の範囲である。

ＩＦＮ及び任意のｄｓＲＮＡ（アンシリダンを含む）を
併用投与する場合、体液すなわち生物内を循還しそして
組織を浸している血清、塩、ビタミン等の溶’７１１　
ｍｌに対して１〜１，０００μｇｄｓＲＮＡのレベルに
なる量においてｄｓＲＮＡを投与するととができる。例
えば、１０ｍ９のｄｓＲＮＡを含有する組成物を体重１
６０　ｔｂの個体に投与する場合、ｄｓＲＮＡレベルは
約１μｇ／ｍｌとなる。同様に、ｄａ　ＲＮＡ　−ＩＦ
Ｎ併用投与の場合のＩＦＮは体液当シ１〜１００，００
０１ＲＵ／ｍ１（ＤＶレベルなる量とする。併用投与方
法は前記の通り、すなわち混合投与、分離同時投与又は
分離逐次投与である。物理的な態様のいかんにかかわら
ず、併用は機能的に相乗的である。

ｄｓＲＮＡ（アンシリダンを含む）を単独で投与する場
合、体液１　ｍｌｌクシ１〜１０００μｇのレベルにな
るような量において投与する。

めに使用するｄ　ｓ　ＲＮＡが不均整ｄｓＲＮＡ、　　
例えばｒ　Ｉ　ｎ・（Ｃ，２，Ｕ、）ｎ（アンシリダン
）である場合にこの発明の好ましい形態が存在する。発
明者等は、不均整ｄｓＲＮＡは完全な塩基対をなすｄｓ
ＲＮＡに比べて穏和な薬理学的効果を発生せしめること
を見出した。

発明者等は臨床試験を行い、この試験はアンシリダンを
使用することによって得られる有利な医療効果を示した
。多発性骨髄腫（２）、急性（１）及び慢性（１）骨髄
性白血病、並びに前立腺癌（１）を含む種々の発達した
悪性疾患を有する５人の患者を、ヒューマンリザーチコ
ミティーの認可と患者の承諾の下にアンシリダンのフェ
ーズＩ〜■の研究として、静脈投与によシ治療した。３
人の患者において抗腫瘍効果が臨床的に証明された。唯
一の有意な副作用は４〜６時間続く一過性の発熱であっ
た。次の例は各患者についての検討結果の詳細である。

例１゜ 第１の患者はＩＦ、Ｇ多発性骨髄腫の８年の病歴を有す
る５９歳の白人の玄妙であった。彼女はメルパラン、プ
レドニゾン、シクロホスファミド及びＢＣＮＴＪを庁む
幾つかの標準的な化学療法剤によりすでに治療を受けて
いた。さらに骨癌を制御するために複数回の局部放射線
療法を受けていた。最も最近において、彼女の発達した
疾恵がへキサメチルメラミンを受容しながら証明された
。骨のＸ線像は、大腿骨、ンモ’）　（ｈｕｍｏｒｉ）
　、骨盤及び頭骨を含むすべての主要な骨において典型
的カ多発性溶解性病変を示した。アンシリダンで治療す
る２箇月前にすべての化学療法剤の投与を中止した。

フィボナッシ（Ｆｊｂｏｎａｃｃｉ　）　（投与量増加
）法の変法を用いて１０の投与量でアンシリダンを投与
した。６週間に合計４５０即を投与した。患者は治療に
良く耐え、そして臨床的に有意な毒性は認められなかっ
た。副作用には悪感、一過性発熱、血清クレアチニン及
びアルカリホスファターゼの穏和な上昇（２倍）が含ま
れた。重要なことに、ｒＩ−ｒＣの場合に観察されてい
る凝固、肝臓又は　　　　ｎ 骨髄機能の異常は観察されなかった。臨床的に有意義な
ことには、尿中カッパー鎖の２４時間分泌速度が治療前
５〜７　Ｆ！／２４時間から治療４〜５週間後１〜２　
ｇ７２４時間に低下したことである。

さちに、治療中の多数の時点において、ＩＦＮ関連細胞
内調停物質である２’−５’−オリゴアデニレートシン
セターゼのレベルが上昇シ、血清インターフェロンのレ
ベルが低いことが証明された。６週間の治療の後、患者
に泌尿器感染、次にダラム陰性敗血症が生じ、そして患
者は死亡した。

例２゜ 第２の患者は、骨、肝臓及び肺に転移した前立腺癌を有
する６６歳の白人の男性であった。さらにこの患者は進
行した心臓病及びうつ血性心臓機能不全を有していた。

アンブリダンを最初に１０■投与した後、患者は激しい
骨癌から急速に救済された。第２回目の１０■の投与の
後、血清前立腺酸性ホスファターゼが６倍上昇した（第
１図）。

肝、腎又は骨髄毒性の徴候はなかった。前立腺酸性ホス
ファターゼの急速な増加はおそらく患者の前立腺腫瘍細
胞に対するアングリダンの特異的効果を示すものであろ
う。共同発明者の他の研究においては、事実、アンブリ
ダンが、すべてのヒ）−生殖泌尿管の種々の癌の増殖を
防止するために非常に効果的であることを確立している
。

例３゜ 第３の患者は、ペンスージョーンズ蛋白尿を伴わないＩ
ｇＧ多発性骨髄腫を有する４８歳の白人の男性である。

この患者には病気の進行と共に３週間に７０■のアング
リダン（１０〜１５ｍ９ずつ１週間に２回）を投与した
。凝固、肝臓、腎、又は骨髄の機能の異状は観察されな
かった。

例４、 第４の患者は、ダウノマイシン、シトシンアラビノシド
及び６−チオグアニンに反応しない急性骨髄性白血病を
有する１６歳の白人の男性であった。患者に３回の漸増
量のアンブリダン（１０■、１５１ｎ９及び３０ｍ９）
を投与した。なんら毒性又は反応が生じなかった。

例５゜ 第５の患者は、慢性段階において常法の治療を５年間受
けた後芽球性発症に入った慢性骨髄性白血病（フィラデ
ルフィア染色体陽性）を有する４５歳の白人の男性であ
った。ｍ　−ＡＭＳＡ及び５−アサシチジンの併用によ
る寛解傾向が得られなくなった時標準的な治療方法が放
棄され、アンブリダンが投与された。患者に、３週間の
休止間隔をおいてｒＩｎ−ｒ（Ｃ１□、Ｕ）ｎ治療を２
サイクル施しだ。

両誘導サイクルの間、連続的な末梢血の計測値（第５−
１表、第５−２表）はアングリダンの分化促進、（すな
わち細胞正常化）活性と一致した。

誘導サイクル２の後、患者を実際に、その体内の白血病
細胞の相当の部分の分化（正常化）を促進しながら白血
球数を制御するように計画された維持養生下においだ。

この治療はアングリダン（１〜２週間ごとに１０ｍ９）
、並びにヒドロキシ尿素（１ｇ）及び６−チオグアニン
（４０■）（それぞれ毎日）の投与から成る。後者の２
つの化合物のみでは病気の抑制に効果的でないことがす
でに証明されている。病気は、４箇月間のこの治療法に
よシ占＜抑制され、そして患者は１０〜１２時間／日の
作業予定を含む通常の活動を取り戻すことができた。き
らに、３２〜５８％の成熟顆粒球及び０．２７％の骨髄
芽球を伴なう１４〜２２，０００／間の安定な白血球細
胞数が維持された。

臨床結果は、アングリダンが種々のヒト−腫瘍に対して
生体内活性を有することを示しだ。副作業は非常に小さ
く、これには４〜６時間継続する一過性発熱を伴う悪感
（５人中４人の患者）、血清クレアチニン及びアルカリ
ホスファターゼの非常に穏和な上昇（５人中１人の患者
において２倍上昇）が含まれる。最も重要なことには、
凝固（血清フィプリノーケ゛ン、フィブリン切断生成物
、プロスロンビン、部分的スロンテフラステン、及び連
続スロンビン時間）、血圧（高血圧又は低血圧）、骨髄
機能（白血球減少症又は血小板減少症）又は腎臓機能（
上記のものをのぞく）の異状は、いずれの患者において
も観察されなかった。

上に例示した臨床的研究のほかに、発明者等はさらに末
梢血についての一連の研究を行い、その結果を第５−１
表及び第５−２表に示した。このデータは、アンノリダ
ンの投与にょシ腫瘍細胞の再プロブラミングが実際に可
能となシ、その機能的正常化が生ずることを確定的に示
している。第５−１表（アンブリダンを用いる治療の第
１サイクルにおける血球数を示す）において、末梢血数
は、骨髄球のピーク（４２％）が後骨髄球のピーク（１
６％）に先行し、そしてこのピークは成熟顆粒球のピー
ク（３６％）Ｋ先行することを示した。同様に、第５−
２表（アンブリダンを用いる治療の第２サイクルにおけ
る血球数を示す）において、骨髄球のピーク（２０％）
は後骨髄球のピーク（１０％）に先行し、このピークは
成熟顆粒球のピーク（３４％）に先行する。

上に結論したように、これらの研究は、腫瘍細胞の再プ
ログラミングを可能にするアングリダンの分化促進作用
を示しておυ、そしてこのために、新鮮な末梢血の骨髄
芽球の試験管内での分化能を注意深く試験した。通常、
発明者等の培養条件下では白血病患者からの芽球性細胞
は全く分化しない。従って、フィコール勾配（細胞の精
製法）を用いて、アングリダン治掠後の末梢血から骨髄
芽球を分離し、そして短時間の培養におくことによって
分化促進作用を試験した。第５図は培養においた直後（
０日）のこれらの新鮮な骨髄芽球の典型的な未熟な悪性
を示す。３日までに白血病細胞の８０〜９０％の細胞質
に分化過程の開始を示すエオシン親和性顆粒が現われた
。７口重でに分化が生じ、さらに、多くの細胞が多くの
細胞質顆粒を含有していた（第６図）。しかしながら試
験管内では、多くの細胞が分化の前骨髄球／骨髄球レベ
ルで遮断され、少量の細胞のみが成熟多形核白血球又は
「バンド」段階に発達した。この結果は、分化プログラ
ムを開始した芽球性細胞の多くが容易に成熟細胞形に発
達する、すなわち完全に正常化する生体内の状況と対照
的である。

これらの結果は、アンブリダンがある種のヒト−腫瘍細
胞に対する抗細胞増殖効九を有するのみならず、腫瘍（
白血病）細胞の分化の末端を実際に促進する新規な性質
、すなわち腫瘍細胞を正常細胞に転化又は再プログラム
する能力、を有することを示している。先行する試験管
内試験において、インターフェロン系はすでに細胞分化
調節能力を示している。ある条件下においてインターフ
ェロンは分化過程を阻害することができ（Ｐｒｏｃ　。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ＋７４　＋　２０
３８．１９７７；Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｔ、ＵＳＡ、７７．４０９９
．１９８０）、一方他の条件下ではインターフェロンは
下等動物における。

細胞分化を促進することができる（Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ
ｓ　、　。

穀、２９１９，１９８０）。特に、トミダ及びその共同
研究者ハ、マウスのインターフェロンが明らかに無関係
の化合物の一群によシ開始された骨髄性白血病（ロ）細
胞の分化の誘発を強化し得ることを示した。

アングリダンの分化促進活性はｄａＲＮＡ分子それ自体
、ｒＩｎ−ｒ（Ｃ１２，Ｕ）によシ誘発されたインター
フェロンの生物学的混合物、又はこの両者に固有のもの
であろう。関与する機構がどうであれ、ヒト−腫瘍細胞
の機能的及び形態学的正常化を刺激する能力はｄｓＲＮ
Ａ、特にアングリダンの全く新規な特徴であシ、そして
発明者等が不変的に見出したこの性質はＩＦＮのみを投
与する場合には容易に観察することができないものであ
る〇 前記のごと（、ＩＦＮは多くの個体及び／又は個個の腫
瘍において周辺的な抗腫瘍効果を有するのみであるから
、高レベルのＩＦＮを投与する必要がちシ、抗体形成及
び他の種々の薬剤関連毒性を含む副作用を伴い、ＩＦ′
Ｎを単独で用いる治療法は実際的でない場合がある。こ
れに対して、他の個体はＩＦＮ治療に対して非常に高い
そして医療的にさらに有意義な反応を示す。ＩＦＨによ
る抗腫瘍治療が最も適切なのはこのタイプの個体に対し
てである。発明者等は、ｄｓＲＮＡ、例えば不均整ｄｓ
　ＲＮＡ（アングリダン）がＮＦＮが、単独で正の医療
反応を示す状況においてさえヒト−腫瘍の治療のために
使用される種々のＩＦＮの効果を増強するような個体を
発見し、ここで記載する。ＩＦＮ抗腫瘍効果増強は個別
化された投与療法の開発において考慮すべき重要ガ点で
ある。上記のごとく、異なる個体、及び異なる腫瘍はＩ
ＦＮ療法に対し異る生物学的反応を示す。ｄｓＲＮＡ、
例えばアングリダンをＩＦＮと併用することによシ、種
々の個体及び／又は腫瘍にわたる生物学的反応の多様性
を回避することができる。ＩＦＮ治療を施すことができ
る個体においては抗腫瘍効果を強化することができる。

他方、ＩＦＨのみに対する反応が全く不十分である個体
の場合には、工ＦＶｄ８ＲＮＡ併用治鉱より他の。

方法によっては実行不可能な抗腫瘍療法プログラムが実
施可能となる。

ｄａＲＮＡＫよるＩＦＮの抗腫瘍効果の増強を評価する
ために、発明者等は、ｄｓＲＮＡ及びＩＦＮの併用効果
を示し、そしてこれら個々の薬剤単独の効果を分離する
ように設計された１つの研究群を構成した。次の第６表
に示すように、この研究群は１つの対照亜群及び５つの
実験亜群から成る。

！ｊＴ系ム 第　　　６　　　表 ｄ＋５ＲＮＡによシヒトー膀胱癌に対するＩＦＮの抗腫
瘍効果の増強 ス） ＋ｒＩｎ−ｒＣｎ ’ＰＪ−ｒＩｎ、ｒＣｎ１００ｍＱ３回／週　　　　　
　９７±３１１アグリダン」 第６表に関し、各亜群はＯ日月にヒト−膀胱癌細胞（Ｒ
Ｔ−４）を注射された１０匹の成熟無胸腺マウスから成
る。ヒト−腫瘍細胞を背部に皮下注射し、こうすること
によって、毛細管を用いて腫瘍の体積を測定することに
よシ腫瘍の増殖を正確に測定できるようにした。すべて
の薬剤は腹腔内注射により投与した。

腫瘍が触知できそして測定できる全期間（１３日日月実
験の終了まで）にわたってＩＦＮ−ｄ＠ＲＮＡ（アンプ
リダン）の併用療法によシ治療された動物はヒト−膀胱
癌細胞の増殖に対する最大の抑制を示した。重要なこと
に、第６表のデーターから一見して明らかな通り、ｄｓ
ＲＮＡ及びＩＦＮの併用抗腫瘍効果は相乗的である。す
なわち、併用効果はＩＦＮ及びｄ　ｓ　ＲＮＡの単独の
寄与の合計によシ予想される効果より大である。従って
、前記の併用効果は単なる付加効果ではなく真の増強効
果である。

ヒトー線維芽細胞インターフェロン（第６表の亜群■）
以外の他のタイプのＩＦＮ（天然の多様なヒトー白血球
インターフェロン及び組換ＰＮＡ技法により細菌中で生
産されたＩＦＮ’ｉ含む）の活性も試験した。すべての
場合において、インターフェロンは、これを単独で注射
した場合にはｄ　ａ　ＲＮＡと一緒に注射した場合又は
ＩＦＮ’ｉ注射し次にｄ　５ＲＮＡを注射した場合に比
べてヒト−腫瘍細胞増殖に対して小さい効果金示した。

これは均整ｄａＲＮＡ（ｒＩ　。

”ｎ’）又は不均整ｄｓＲＮＡ（アンゾリグンーｒ工Ｈ
１ｒ（Ｃ１□、Ｕ）ｎ：］のいずれかであっても同様で
あった。単独投与された任意のＩＦＮにより達成される
ヒト−腫瘍細胞増殖の最も大きな低下は広範囲のＩＦＮ
濃度（１０５〜３Ｘ１０’ＩＲＵ／日）にわたって約３
３チであった。これに対して、ｄｓＲＮＡと併用して１
０５ＩＲＵ、４３という少いＩＦＮによシ治療された動
物においてはヒトー鹿瘍細胞の増殖が６５％又はそれよ
シ大きく低下した。従って、任意の単−形のＩＦＮと併
用されたｄ　ｓ　ＲＮＡは量的に卓越した効果を生じさ
せる。さらに、ヒト−腫瘍は一般に、最大の医療効果を
得るために個別化された治療管理全必要とする。従って
発明者等は、治療計画を個別化する努力をさらに行うこ
とによって不均整ｄｓＲＮＡ　ｆ　ＩＦＮと併用する場
合にはいつでも１０倍又はそれ以上の医療効果が得られ
ると確信する。

データは、ｄｓＲＮＡが天然ＩＦＮ　、合成（すなわち
組換ＤＮＡから誘導されｆｃ）ＩＦＮ、及びノ・イブリ
ッド形ＩＦＮ　、例えば一部分がα−ＩＦＮから誘導さ
れ他の部分がβ−又はγ−ＩＦＮから誘導さ−れたＩＦ
Ｎを含むあらゆる種類のＩＦＮの医療効果を増強するこ
と全町らかに示している。これらはすべてこの発明の範
囲に入る。従って、ｄｓＰＮＡと任意のＩＦＮとの組合
わせは癌に対する、ＩＦＮＪＩ−独の能力をはるかに超
える卓越しｆｃ製剤を構成する。さらに、発明者等が用
いたヒト−腫瘍材料は、ヒトの組織における悪性化過程
及び／又は病理過程に肯定的に寄与し、組織の病変及び
破壊を惹起する。

種々のタイプのウィルス性遺伝情報を含有していること
が知られている。従って重要なことに、これらのデータ
は、ｄ　ｓ　ＲＮＡ−Ｉ　ＦＮの組合せが効果的な抗癌
剤であるのみならず、ウィルス性成分及び疾患に対して
も作用することを示している。たしかに、この発明の医
薬組成物はＩＦＮ治療が示唆される任意の疾患に対して
作用するであろう。この疾患には急性、亜急性、潜伏性
又は慢性段階のいずれかにあるウィルス性疾患、及びウ
ィルス活性が発病に寄与するがヒト−「自己免疫」疾患
が自己永続状態になると消滅するヒト異状免疫疾患を含
む。

任意のｄ　ｇ　ＲＮＡ−Ｉ　ＦＮ併用治療の相乗的強化
における任意のｄａＲＮＡの役割はＩＦＮ誘発剤として
ではないことを強調しなければならない。そうでなけれ
ば相乗作用は観察されないはずである。むしろ、ｄａＲ
ＮＡはＩＦＮの作用全補足してそして完結し、これによ
ってヒト−ウィルス性疾患及び癌の治療においてｄａＲ
ＮＡ又はＩＦＮのいずれか一方のみでは達成され得ない
程度の柔軟性及び有効性を供するという独特の寄与をす
る薬剤である。

■　ヒト−腫瘍細胞の正常化におけるアンシリダン対Ｉ
ＦＮ 前記の■において、ｄｓＲＮＡ　、例えば、アンゾリグ
ンがＩＦＮと一緒になってヒトー肺瘍の増殖を相乗的に
阻害することを示した。発明者等はここで、アンブリダ
ンが、ｊＭ瘍細胞の正常細胞への転化を強化する他の化
学的物質及び生物学的物質と相乗的に機能し得ることを
示す。後に詳細に示す「他の化曾物Ｊはその自体アンプ
リグ９ンと同様にヒトー肺瘍細胞を正常化する幾らかの
能力を有する。

しかしながら、これらの物質のアンブリダンとの組合せ
により相互強化効果が生ずる。発明者等が強調したい重
要な点は、アンブリダン及び前記の物質にＩＦＮが加わ
れば正味効果が相乗作用とは全く逆になるということで
ある。すなわち、アンブリダンと他の正常化物質との組
合わせによって有利に強化された抗１市瘍効果がＩＦＮ
の添加により阻害される。従って、アンブリダンは、Ｉ
ＦＮが行い得ない性質の方法によって新生物細胞に作用
することがデータ（第７表）により示される。従って発
明者等は、追加の抗細胞増殖能力を有するすでにこの明
細書に開示した抗Ｊ康瘍組成物及び方式全提供する。

白血病細胞はその発育過程の初期段階において機能的に
「凍結」され、連続的腫瘍細胞増殖（「自己−更新」）
現象が導かれる。このような制御されない増殖は、健全
な個体において正常細胞が一定臨界濃度又は形状に達し
た場合に停止する通常の細胞増殖の正常なパターンとは
全く異る。

さらに、悪性腫瘍は細胞数に対する正常な身体的生化学
的拘束全上記のように喪失しているのみならず、さらに
細胞の位置に対する身体的拘束をも回避する。・レロえ
ば、白血病細胞細は肺、脳、内臓等に転移する。

他の薬六すと共に使用されるアンブリダンは、この基本
的な生化学的錯乱を修正することができる。

この主張を支持するデータ金第７表に示す。

第７表のデータを得るために、芽球発症にある慢性骨髄
性白血病を有する患者からヒト−白血病。

削１１胞（Ｋ５６２）を得た。Ａａ！胞？、１０％のウ
シ胎児血清〔ジブコ（Ｇｉｂｃｏ））及び１チのペニシ
リン／ストレプトマイシン（ジブコ）を保給したＲＰＭ
ＩＩ６４０培地（ノブコ）中で、３７℃にて５ｑ６ＣＯ
２のもとで培養して維持′−た。誘導のために、１５％
のウシ胎児血清及びＩＬ％のペニシリン／ストレプトマ
イシンに伴うＲＰＭ１１６４０培地中に４〜５Ｘ１０／
ｄの濃度で細胞を接種した。培養物を１μｙ・ゴのアン
ブリダン、棟々の濃度の釉々の分子種（７）ＩＦＮ、及
び０．０５　ｍＭ　（７）　ヘミン（？ビン、シグマ）
にょシ処理した。誘導された細胞を９６時間培養中に維
持した。トリパンブルー排除により培養物の増殖全毎日
計測し、そして０−ジアニシド（シグマ）ヲ用いるベン
ジシン染料にょシヘモクロビンの生産全試験した。

ヘモグロビンの存在を、悪性化造血細胞（白血病細胞）
が内プログラムされ正常な身体構成細胞になったことの
証明として把握した。この存在を、ヘミン及びアングリ
グリの存在下での２４．４８．７２及び９６時間の増殖
の後に監視し、た。各期間後に細胞全ペレット化し、バ
ンクのＢ５５（ジブコ）中で２回洗浄し、そしてスライ
ド上においた。スライドをメタノール９エ 間染色し、除液し、２．５％Ｈ２ｏ２中２１分間置いた
。

―Ｔり′・ ヘミン溶液は、２６■のヘミンｑ　Ｏ，Ｂ　ｍｌの０．
５Ｍ　ＮａＯＨＶＣ溶解し、そして次に１４のＩＭＩ−
リスＨＣ４（ｐ）４７．８〜８．０）により中和するこ
とによシ調製した。溶液を蒸留水によシ１０ｍ１ＶＣ稀
釈し、セして濾過除菌した。この時点でのヘミンの濃度
は４　ｍＭであった。第７表において示されている濃度
は０．０５　ｍＭである。

第７表のデータに関し、ヘミンと称する化学物質に暴露
した場合にある比率の腫瘍細胞が正常化し得ることはす
でによく知られている。発明者等の実験は不均整ｄ　！
ｌ　ＲＮＡによる新規な追加の作用、すなわち悪性化細
胞の正常細胞への転化におけるヘミンのごとき他の化学
的物質又は生物学的物質全補助する能力全確立する。第
■欄と第■欄を比較することによシ増強されたヘミン活
性が明らかに示される。さらに、この実験におけるアン
ブリダンの濃度がアンシリダン自体が正常化効果を有す
るとしても小さい（欄■）ように意識的に選択されてい
ることによシ、不均整ｄａＲＮＡ、アンシリダン及びヘ
ミンの間の相乗作用が明確に示される。発明者等は、１
００μｓ、１０μｐ、１μｇ（第６ｔ）及びＯ，ｘμｉ
含む種々のアンシリダンレベル、並びに種々のヘミン濃
度（０，１ｍＭ　、　０．０５ｍＭ　（第６表）、及び
０．０２５　ｍＭ：］　ｋ用いて同様の誘導実験を行っ
た。すべての場合において、データ中の結果及び傾向は
同等である。

欄■及び■の比較により、工ＦＮかヘミンの正常化効果
を実際に阻害すること、すなわちアンプリグ９ンとヘミ
ンの間の正の相乗効果に対立する効果が示される。さら
に、欄■及び■の比較にょシ、ＩＦＮ７ｊＥヘミン−ア
ングリダン共同作用を部分的に消失せしめることが示さ
れる。ヘミン−アンシリダンの正常化機構がいかなるも
のであっても、前記の比較により、この機構はＩＦＮ誘
発の結果ではないのみならず、前記の機構は実際に、Ｉ
ＦＮＫより少なくとも部分的に遮断され又は廃棄される
ことを結論的に示している。発明者等は、この負のイン
ターフェロンの効果が５〜２０００　ＩＲＵ／ＩｄＫワ
たる広い範囲のＩＦＮ濃度において生ずることを観察し
た。従って発明者等は、ＩＦＮが効果を有さず又は−治
療の障害にさえなる状況において腫瘍細胞全正常化する
方法を提供する。

不均整ｄｓＲＮＡがヘミンの正常化効果全肯定的に強化
し得るという発見はさらに他の化学薬剤及び生物学的薬
剤に拡張される。生物学的薬剤とは生物によシ生産され
又は生物から誘導され、そして一般にその分子量が大き
く複雑であるために公知の化学的（生物学的に対して）
経路により現在のところ一般に合成することができない
物質である。

化学的物質とは、生物にょシ生産され又は生物から誘導
される場合もあるが公知の化学的方法を用いて人工的に
合成される（在庵があってもすぐ手に入る）物質である
。発明者等が「化学的」と称する物質の例には、限定的
な意味ではないが、単独で投与した局舎に１ｉｄｉ瘍細
胞を正常化する幾らかの活性を有する物質、例えばビタ
ミン（特にＡ及びＣ）、ビタミンの前駆体、プロスタグ
ランジン、ホル？ルエステル（ヘミン）及びそのｆＪ’
Ｂ４体、並びにアンシリダン又は他のｄｓＲＮＡにょシ
強化される悪性腫瘍修正機構金倉して癌の発育過程を積
極的に制御し得る化学療法剤が宮まれる。発明者等が「
生物学的」と称する物質にはＩＦＮ（天然ＩＦＮ。

合成ＩＦＮ、及びこれらのペプチドの任意のハイブリッ
ドを含むすべての形のＩＦＮ）、Ｔ−細胞増殖因子、神
経増殖因子等を含むポリベグチド増殖因子、環状ヌクレ
オチド、及び種々の胸腺由来オリゴ被ゾチド及び／又は
ポリペプチド、並びに胸腺又は他の先便器管に作用する
ペプチドが含ま扛る。この発見も又、アンシリダン又は
他のｄ　８　ＲＮＡ　ノ存在下で強化された生理的反応
を生じさせ、腫瘍の予防、腫瘍の阻止Ｃ部分的又は完全
な）及び／又ｔま従来の治療法（例えは手術、照射、化
学療法又はこれらの任意の組合わせ）によりすでに治療
全受けている患者における腫瘍の再発の防止を導く化学
的物質又は生物学的物質による任意の治療に゛拡張壊れ
る。

同様に、発明者等の基本的な例は白血病であり之が、発
明者等の発見は、アンシリダン又は他のｄｓＲＮＡｉ他
の化学的薬剤又は生物学的薬剤と共に使用してヒト腫瘍
細胞をその対応する正常細胞に修正又は再プログラムす
ることができる腫瘍性又は癌性状態、例えば乳、結腸、
前立腺等の腫瘍性又は癌性状態、すなわち白血病と類似
の生化学的錯乱を生じさせる状態にも拡張さヰる。悪性
化過程全土防止、修正し、停止し又は再プログラムする
ことができる薬剤、組成物、及び方法を扶供することに
より、この発明は、悪性化過程が遺伝的素質、環境的又
は他の原因のいずれによるものであるか関係なく、細胞
が前癌状態になった個体におけるヒトのＭｅ逆行せしめ
又は予防する能カケ含む。

発明者等は、肺癌を有する患者を含む研究群の幾らかの
構成員及び癌の高い家族歴金有する固体においてＮＫ細
胞の活性レベルが低いこと？見出した。この発見全詳細
に下記する。

発明者等は、高い癌の家族歴を有する患者のＮＫ細胞の
低い活性が種々のタイプのインターフェロン及び／又は
アンシリダンの添加によシ正常レベルに復帰するか否か
全試験した。最近の報告は、天然タイプ（Ｂｒ　ｉ　ｔ
　、Ｊ−Ｈａｅｍ、＋　５０　。

８５．１９８２）及びクローン化サブタイプ（Ｃａｎ、
Ｒｅｓ、、４２　、１３１２　、１９８２　）のインタ
ーフェロンの間のＮＫ細胞（正常な個体から誘導された
細胞）の増加、効率、の差を示している。発明者等は、
不拘ｑ　ｄ　ａ　ＲＮＡのみが癌が発生する危険性を有
する個体において正常なレベルのＮＫ細胞の増加全達成
する能力を有することを見出した。

第９図（男性及び女性について別々に結果が示しである
）は、癌の高い家族歴を有する個体（４０，０％殺）は
、癌の低い家族歴を有する個体（２７，１％殺）に比べ
てＮＫ細胞活性が有意に低い（ｐ＜ｏ、ｏ　０１　）こ
とを示している。第９図は又、癌の低い家族歴を有する
男性（４３，５チ殺）は癌の低い家族歴を有する男性（
３１，３チ殺）に比べて高いＮＫ細胞活性（ｐ＜０．０
５）を有することを示している。同様に癌の低い家族歴
を有する女性（３３，９％殺）は癌の高い家族歴ヲ有す
る女性（２４，８％殺）に比べて高いＮＫ細胞活性（ｐ
＜０．０５）ケ有する。癌の高い家族歴は、祖父、親及
び兄弟の中に癌（非−黒色腫性皮膚癌以外）′ｆｆ：有
する３人の血縁者を有することを言う。

第１０図は男性（４１，６％殺）は女性（３０，５チ殺
）に比べて有意に高いＮＫ細胞活性（ｐ＜０．００１）
ｋ有すること金示している。この差は癌の低い家族歴金
有する患者について統計的に有意である（ｐ（０，００
５、第１０図）。

第１１図は、ＮＫ細胞活性の差が男性と女性の間の年令
分布の差によるものでないことを示している。女性のＮ
Ｋ活性が男性のＮＫ活性よυ大である１０年代は存在し
ないからである。

すべて、の図に示したＮＫ細胞の結果は別個の４回の測
定（４時間及び５時間、それぞれエフェクター二標的細
胞比２５：１及び５０：１）（それぞれ４通り行う）の
平均値である。どちらのインキュベーション時間及びエ
フェクター二標的細胞比が研究群の構成員の中からＮＫ
細胞欠損の検出に最適であるかを先験的に決定すること
は不可能であった。従って、ＮＫ細胞活性の研究におい
ては常に３種類のインキュベーション時間（３，４、及
び５時間）、及び３種類の異なるエフェクター；標的細
胞比（６，２：１．２５：１、及び５０　：　１　）を
用いた。これら９個の６（１］定のそれぞれを４通り行
ったから、各個体について３６個の別個の測定を行った
。

履行 第１２図は、天然線維等細胞インターフェロン（２００
０Ｕ／ｍｌ、β−ＩＦＮ）が、高イ（）やネルＡ）、正
常の（ツヤネルＢ）、又は低い（パネルＣ，Ｄ、Ｅ及び
Ｆ）ＮＫ活性を有する個体のＮＫ細胞活性全増加せしめ
ることを示す。さらに、個体の線維芽細胞インターフェ
ロンに対するそのＮＫ増加反応は異なる。例えば、・ぐ
ネルＡは正常な喫煙者におけるＮＫ活性がやや筒いレベ
ルから非常に高いレベルに押上げられること？示してい
る。・ＰネルＢは、正常な非喫煙者におけるＮＫ活性が
正常レベルからやや高いレベルに増加すること？示して
いる。個体の１つにおいてはやや低いＮＫ活性（・ぞネ
ルＣ）が正常レベルに刺激された。これに対して、その
他の場合には非常に抑制されたＮＫ活性（−′？ネルＤ
）がわずかに増加した。・ぐネルＥ及びＦにおいては、
癌の高い家族歴を有す全非喫煙者に見られる低いＮＫ活
性が４時間（パネルＥ）及び５時間（パネルＦ）のいず
れにおいてもわずかに上昇した。同様の結果が’Ｉ　−
（Ｌｅｅ　）等（Ｃａｎ。

Ｒｅｓ、、４２．１３１２．１９８２）の方法により調
製されたクローン化サブタイプのα（白血球）インター
フェロン、又はフレイス（Ｃ４ａｅｙｓ）等（Ｂｒｉｔ
、Ｊ、Ｈａｅｍ、、５０　、８５　、１９８２　）に記
載されているような種々の天然タイプのα−及び免疫（
ｒ）−インターフェロンを用いてモ得うれた。重要なこ
とにどの形のインターフェロンも、単独で適用された場
合には、高濃度においてさえ欠損を修正することができ
なかった。

第１２図のデータは、末梢血リンパ球を天然β−ＩＦＮ
と共に（１００ＩＲＵ／ｍＪ）又はこれを伴わないで、
６０分間インキュベートすることにより得た。洗浄後、
ＮＫ細胞活性を測定した。

それぞれ天然の及び組換ＤＮＡ技法によυ製造されたα
（白血球）ＩＦＮ及びγ（免疫）ＩＦＨについて同様の
結果が得られた。すべての場合において欠損はＩＦＮ単
独によっては部分的にのみ修正された。

不均整ｄ　ｓ　ＲＮＡ　ｆ調製し、そしてツアーリング
（Ｚａｒｌｉｎ３）等（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、＋　１２
４　＋　１８５２゜１９８０）に記載されているように
して上記の系において試験し友。この文献の記載全引用
によシこの明細書に組み入れる。すべての場合において
（第４図、）９ネルＣ，Ｄ、Ｅ、Ｆ）、癌が発生する危
険がある患者からのＮＫ細胞が正常な個体（第１２図、
・ぐネルＡ及びＢ）から区別できない程欠損が完全に修
正された。

【図面の簡単な説明】

第１図はＩＦＮ発現のためのｄ　ｓ　ＲＮＡの構造的要
求を模式的に示したものであυ；第２図はＩＦＮの増殖
阻害効果に対する耐性の遺伝性、及び培養中のＩＦＮｒ
細胞の増殖に対するｒＩｎ−ｒＣｎの影響全２種類の新
生物細胞系について示す一連のグラフであって、ＡはＨ
ｕＩＦＮ−β中ＨＴ　１０８０−　ＩＦＮｒ細胞の増殖
、ＢはｒＩ　・ｒＣ中）ＩＴ　１０８０−　ＩＦＮｒ細
ｎ　　　　　ｎ 胞の増殖、ＣはＨｕ　ＩＦＮ−β中ＲＴ　４−　ＩＦＮ
ｒ細胞の増殖、ＤはｒＩｎ−ｒＣｎ中ＲＴ４−ＩＦＮｒ
細胞の増殖をそれとれ示し、Ａ中−△−はＩＦＮ−不含
培地に４週間培養した後、−ム一はＩＦＮ不含培地に１
５週間培養した後、Ｃ中−△−ばＩＦＮ不含培地にＯ週
間培養した後、そして−ム−はＩＦＮ不含培地に４週間
培養した後に試験したものであり；第３図はＩＦＮ’細
胞及びＩＦＮｒ細胞に対するｒＩｎ−ｒＣｎの影響、並
びにＩＦＮＩ！細胞に対するＩＦＨの影響を２種類の新
生物細胞系について示す一連のグラフであって、ＡはＩ
ＦＮの存在下でのＩＦＮ’ＨＴＩ　０８０−Ｃ１２細胞
の増殖、ＢはｒＩｎｌＩｒＣｒの存在下でのＩＦＮ’Ｈ
Ｔ１０８０−Ｃ１２細胞の増殖、ＣはｒＩ。・ｒＣｎの
存在下での■ＦＮｒＨｔ１０８０−Ｃ１２ＩＶ＋Ｉｉｌ
胞の増殖、ＤはＩＦＮ存在下でのＩＦＮｇＲＴ４−Ｃ１
１細胞の増殖、ＥはｒＩ　ｉｒｃ　　の存在下でのＩＦ
Ｎ’ＲＴ４−Ｃ１１細胞ｎ の増殖、そしてＦはｒＩｎ−ｒＣｎの存在下でのＩＦＮ
ｒＲＴ４−Ｃ１１細胞の増殖上水し：第４図は原発性腫
瘍を有する患者全アンプ＋１　ｒン治療した後の５ＧＯ
Ｔ　、ビリルビン、及び種々のホフファターゼのレベル
を示すグラフであシ；第５図はアンプリケ゛ン治療の後
末梢血から分離された白血病骨髄芽球〔ライトーキエム
サ（Ｗｒｉｇｈｔ−Ｇｉｅｍｓａ）株〕の０口重の細胞
質遠心分離標品（生物体の形状）の光学顕微鏡写真であ
す；第６図は７日間培養後の広範囲の細胞質顆粒を含有
する白血病骨髄芽球の標品（生物体の形状）を示す光学
顕微鏡写真であシ；第７図は癌の低い又は高い家族歴金
有しそして癌を有しない正常な個体のＮＫ細胞活性を示
すグラフでおシ；第８図は第７図の結果を男と女に分け
て示したものであり；第９図は第８図の結果全１０年代
ごとに分けて示したものであり；そして第１０図は種々
のタイプの個体における天然インターフェロンによるＮ
Ｋ細胞活性の増強上水し、特に癌発生の素因？有するヒ
トの免疫欠損を部分的にのみ修正する単独投与天然ＩＦ
Ｎの能力を示しており、Ａは正常な喫煙者、Ｂは正常な
非喫煙者、Ｃは癌の高い家族歴を有する非喫煙者、Ｄは
癌の高い家族歴を有する非喫煙者、Ｅは癌の低い家族歴
を有する非喫煙者（４時間測定）、セしてＦはＥと同じ
（但し５時間測定）を示す。 特許出願人 ウィリアム　アルビン　カーター（外１名）特許出願代
理人 弁理士　青　木　　　朗 弁理士　西　舘　和　之 弁理士　福　本　　　積 弁理士　山　口　昭　之 弁理士　西　山　雅　也 第１回 ５ＲＮＡ 第２面 処理後の日数 ＠３０ ２４　４８　７２　　２４　４８　７２　　２４　４８
　７２処理後の経過時間 第４狛 （日） ＦＩＧ、！５ ＦＩＧ、ら 手続補正書（方式） 昭和５９年２　月錦」 特許庁長官　若杉和夫　殿 １、事件の表示 昭和５８年　特許願　　第１６９４８４号２、発明の名
称 抗胛陽組成物 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 （タト（兄） ４、代理人 （外　４　名） ５、補正命令の日付 昭和５９年１月３１日　（発送日） ６、補正の対象 （１）委任状 （２１図　面 ７、補正の内容 （１）別紙の通り （２１図面の浄書（内容に変更なし） ８　添付書類の目録

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ｄｓＲＮＡとインターフェロンとの治療混合物を含
   んで成る治療組成物。 ２、ｄｓＲＮＡがｒｒｎ−ｒＣｎである特許請求の範囲
   第１項記載の組成物。 ３、前記インターフェロンが天然に存在するもの、組侯
   ＤＮＡ技法によシ誘発されたもの、父はノ・イブリド形
   である特許請求の範囲第１項記載の組成物。 ４、前記天然に存在するインターフェロンがヒトー線維
   芽細胞インターフェロン及びヒトー白血球インターフェ
   ロンから成る群から選ばれる特許請求の範囲第３項記載
   の組成物。 ５、前記バイブリド形インターフェロンが一部がα−イ
   ンターフェロンから、そして一部かβ−インターフェロ
   ン又はγ−インターフェロンから誘導されたインターフ
   ェロンである特許請求の範囲第３項記載の組成物。 ６、前記ｄｓ　ＲＮＡが体液中で１〜１ｏｏｏμｙ、’
   ｕのレベルになる量存在し、そして前記インターフェロ
   ンが体液中で１〜１００，０００　ＴＲＵ／ｌｎｉのレ
   ベルになる量存在する特許請求の範囲第１項記載の組成
   物。 ７、前記ｄｓ　ＲＮＡが不均整である特許請求の範囲第
   １項記載の組成物。 ８、前記不均整ｄｉ　ＲＮＡがｒ　Ｉ　ｎ’　ｒ　（Ｃ
   ＋　２　ｒ　Ｕ）ｎである特許請求の範囲第７項記載の
   組成物。 ９、ｄｓＲＮＡと、癌細胞に対して治療的に有利に作用
   する能力を独立して有する他の物質との治療的に有効な
   混合物を含んで成る動物の癌の治療に有用な治療組成物
   。 １０、前記の物質がビタミンＡ及びその前駆体、ビタミ
   ンＣ及びその前駆体、ブロスタグ２ンジン、ファル？ル
   エステル、並びに化学療法剤から成る群から選ばれる特
   許請求の範囲第９項記載の組成物。 １１、前記物質がインターフェロン、ポリペデチド増殖
   因子、環状ヌクレオチド、及び胸腺由来オリゴペゾチド
   又はポリペプチドから成る群から選ばれる特許請求の範
   囲第９項記載の組成物。 １２、前記物質かヘミンである特許請求の範囲第９項記
   載の組成物。