JP2002521451A

JP2002521451A - 抗酸化物質組成物及び該組成物を用いて疾患を処理する方法

Info

Publication number: JP2002521451A
Application number: JP2000562025A
Authority: JP
Inventors: ダイク，ノックスヴァン; エス．サックスメイヤー
Original assignee: エイチエムイーエンタープライゼズ，リミテッドライアビリティカンパニー
Priority date: 1998-07-31
Filing date: 1999-08-02
Publication date: 2002-07-16
Also published as: CA2339004C; DE69934987T2; AU5250799A; IL141160A0; EP1100507A4; ES2279627T3; WO2000006171A1; EP1100507B1; CA2339004A1; EP1100507A1; ATE352306T1; IL141160A; DE69934987D1

Abstract

(57)【要約】哺乳動物の宿主における細胞、組織その他の体の部分に対する損傷の処理は、ヒポキサンチンと、少なくとも一種の生物学的モディファイヤーと共に用いることにより、行なうことができる。前記モディファイヤーは、フリーラジカルスカベンジャー又は代謝阻害剤であってよく、例えば、尿酸、ブチオニンスルフォキシミン、ビタミンＣ、アスピリン又はノルジヒドログアヤレト酸が望ましい。このような配合を用いることにより、例えば、癌、感染症及び神経変性疾患、並びに、放射線療法、高酸素分圧及び化学療法によって引き起こされる損傷を処理することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の背景】発明の分野本発明は、抗酸化物質組成物(antioxidant composition)、より望ましくは抗
酸化物質及び／又は生物活性剤(biologically active agents)の混合物、特に、
酸化的損傷に関連する疾患を処理するのに有効な抗酸化物質及び／又は生物活性
剤の混合物に関する。

【０００２】関連技術の背景と説明酸化的損傷は多くの疾患の原因である。適当な酸化還元状態であることが健康
の基礎であると考えられる。抗酸化性食物は、人体の代謝過程における関連性が
広がっている。老化に関する最近の研究では、抗酸化物質は老化防止作用を有す
ると考えられており、老人の外部徴候と酸化的損傷に対して強い関係を有するこ
とが明らかにされている。酸化的損傷は、癌、リウマチ性関節炎、炎症、動脈閉
塞、糖尿病、神経変性疾患及び老人性黄斑変性などの疾患において認められる。
酸化的損傷の主原因であるフリーラジカルは、環境放射線、大気汚染、過度の肉
体的及び精神的労作により生成される。フリーラジカルは自由電子を有する種に
よって生成され、典型的には、一重項酵素酸素及びヒドロキシルフリーラジカル
、又は特異酵素反応により伝播する。フリーラジカルは別の分子から電子を獲得
するので、フリーラジカルは還元され、別の分子は酸化され、その構造と機能を
変化させる。酸素フリーラジカル種と、関連する多価不飽和脂肪酸脂質の過酸化
生成物の両方の生物学的活性については、広く知られている。例えば、反応性ラ
ジカル種の発生は、イオン化放射線、様々な化学療法剤、老化を含む様々なその
他生物学的過程の細胞毒性効果、及び、発癌性実験のイニシエーション段階及び
プロモーション段階において起こることが知られている。免疫系の種々の細胞に
よって用いられるレスピラトリーバースト現象における反応性フリーラジカルの
発生と放出もまた、外部標的分解の周知な機構である。

【０００３】核酸、蛋白質、酵素及び脂質分子は、全て、フリーラジカル酸化を受ける。脂
質酸化は、細胞膜、細胞器官の膜、それらの間にある膜などの膜系に損傷を及ぼ
す原因となり得る。蛋白質酸化は、細胞構造の酸化に到ることがある。酵素酸化
は、代謝率を変化させる結果となる。核酸損傷、例えば、ＤＮＡ損傷は、細胞変
異及び細胞壊死に到ることがある。このように細胞変化は好ましくなく、癌、心
臓発作、白内障、神経変性疾患、黄斑変性、炎症性疾患などの多くの重大疾患の
原因である。

【０００４】好気性生物では、細胞及び有機体レベルの両方で様々なラジカルスカベンジ機
構が進化し、ヒドロキシルラジカル、スーパーオキシドアニオン、過酸化水素な
どの潜在的致死反応性酸素種から保護することができる。重要なことは、酸素ラ
ジカルは脂質過酸化の長寿命型連鎖反応を開始させることができ、この反応は細
胞から細胞へ伝播されることである。前述したように、これらの過酸化生成物は
、細胞ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白質及び細胞リン脂質を損傷する能力を有している。
フリーラジカルは、一旦生成すると、異なる様々な反応を受ける。これらフリー
ラジカルは、別の非フリーラジカルと反応して、新たなフリーラジカルを作り出
す。また、同じフリーラジカルと反応して、新たに非フリーラジカルを作り出す
。また、異なるフリーラジカルと反応して、新たな非ラジカルを形成する。フリ
ーラジカルは、不飽和脂質と反応して、過酸化脂質を形成する。また、別のフリ
ーラジカルと反応して消滅を引き起こす。これら種々の反応の結果、量の多少は
あるが、毒性分子が生成される。この種の損傷に抗する保護細胞機構として、細
胞の脂質(例えば、αトコフェロール、βカロチン)及び水性(例えば、グルタチ
オン、アスコルビン酸)の両相の中の抗酸化物質及びラジカルスカベンジャーが
あり、スーパーオキシドジスムターゼ及びカタラーゼのような酵素もある。人体
には高プラズマ尿酸レベルが見られるが、これもまた、フリーラジカル保護ファ
クターであることが示されている。フリーラジカルの抑制は、フリーラジカルス
カベンジャーのシステイン、グルタチオン、及び関連細胞スルフヒドリル化合物
のような放射線防護物質が作用するものと仮定される。細胞が酸素発生化合物又
はその他酸化的ストレスに曝されるとき、グルタチオンは酸化され、蛋白質混合
ジスルフィドの他にジチオ基を含むようになる。

【０００５】ビタミンＥは、最も良く研究された抗酸化物質である。最近の研究では、ビタ
ミンＥの補充によって心臓疾患のリスクが低下することが確認されている。多く
の疫学的研究では、癌の発生と、果物及び野菜からの抗酸化物質の消費との間に
おける消極的関連が報告されている。

【０００６】ケルセチンとエピガロカテキン・ギャレイトは両方とも、植物から抽出された
抗酸化物質である。ケルセチンは、様々な果物や野菜の中で見られる共通のフラ
ボノイド抗酸化物質であり、この果物や野菜として、タマネギ、リーク(leak)、
アスパラガス、キャベツ、カラシ(mustard)、観賞植物、ペパー、エンダイブ、
グレープフルーツ、レタス、リンゴ、マンゴ、プラム、ラディッシュ、クロフサ
スグリ、ジャガイモ、ホウレンソウ、ブドウ及び緑茶を挙げることができる。エ
ピガロカテキン・ギャレイト(ＥＧＣｇ)は、緑茶から抽出された抗酸化物質であ
る。これらの抗酸化物質は強い化学的予防効果を有している。

【０００７】この分野では、投与形態が、同時的、付随的又は逐次的であるかどうかを問わ
ず、酸化的損傷に関連する疾患を保護し、予防し、処理し、改善することのでき
る抗酸化物質組成物又はその混合物に対する要請がある。

【０００８】この発明は、フリーラジカル損傷に抗する抗酸化性効果を有する組成物及び混
合物を開示する。組成物は、酸化的損傷に関連する疾患の予防又は処理に有用で
ある。

【０００９】

【発明の要旨】

本発明は、尿酸の前駆物質を治療に有効な濃度で含む組成物に関するもので、
尿酸の前駆物質は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチド、ＲＮＡのヌクレオ
チド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡの遊離塩基、ヒポキサ
ンチン及びキサンチンからなる群から選択されることが望ましい。尿酸の前駆物
質はヒポキサンチンが望ましく、ヒポキサンチンの有効濃度は、約１００ｍｇ/
日乃至約２５ｇ/日の範囲が望ましく、約１ｇ/日乃至約２０ｇ/日の範囲がより
望ましく、約２ｇ/日乃至約１０ｇ/日の範囲がさらに望ましい。組成物は、一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステイン形成の阻害剤、
ＮＯシンターゼの阻害剤、及びこれらの一種又は二種以上の任意の組合せからな
る群から選択される生物活性剤を、治療に有効な濃度で含むこともでできる。

【００１０】本発明の他の実施例は、尿酸の前駆物質と生物活性剤とを含む組成物に関する
ものである。尿酸の前駆物質は、ヒポキサンチンが望ましい。二次抗酸化物質は
、ビタミンＣ、ビタミンＥ又はその２つの組合せであることが望ましい。ＮＯシ
ンターゼの阻害剤は、プレドニゾンであることが望ましく、ホモシステイン形成
の阻害剤は、ビタミンＢ₆又は葉酸であることが望ましい。

【００１１】本発明の他の実施例は、酸化的損傷に関連する疾患状態を処理又は予防するた
めの治療用組成物に関するもので、尿酸の前駆物質を含んでいる。尿酸前駆物質
は、抗酸化物質として、望ましくは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチド、
ＲＮＡのヌクレオチド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡの遊
離塩基、ヒポキサンチン及びキサンチンからなる群から選択されるものを含むこ
とができる。最も望ましい抗酸化物質はヒポキサンチンである。生物活性剤は、
一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステイン形成の阻害剤、ＮＯシンター
ゼの阻害剤、及び、前記の一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステインの
阻害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤の中の二種以上の組合せからなる群から選択さ
れる。二次抗酸化物質は、ビタミンＣ又はビタミンＥから選択されることが望ま
しく、ＮＯシンターゼ阻害剤はプレドニゾンであり、ホモシステイン形成の阻害
剤はビタミンＢ₆であり、ホモシステイン形成の阻害剤は葉酸である。疾患状態を処理する方法は、治療に有効な濃度の尿酸の前駆物質を、単独で又
は前述した既知の生物活性剤と共に投与するものであり、疾患状態は、アルツハ
イマー病、神経変性疾患、酸化的損傷及び癌からなる群から選択される。

【００１２】本発明はまた、酸化的損傷を処理する方法に関するもので、該方法は、尿酸の
前駆物質を、該尿酸前駆物質とは異なる生物活性剤と共に投与するものである。
尿酸の前駆物質は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチド、ＲＮＡのヌクレオ
チド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡの遊離塩基、ヒポキサ
ンチン及びキサンチンからなる群から選択される。尿酸の前駆物質は、ヒポキサ
ンチンが望ましく、生物活性剤は、一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシス
テイン形成の阻害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤、及び、前記の一次抗酸化物質、
二次抗酸化物質、ホモシステインの阻害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤の中の二種
以上の組合せからなる群から選択されることが望ましい。二次抗酸化物質は、ビ
タミンＣ又はビタミンＥ又はその２つの配合物であることが望ましい。

【００１３】ＮＯシンターゼの阻害剤はプレドニゾンが望ましく、ホモ
システイン形成の阻害剤はビタミンＢ₆又は葉酸が望ましい。生物活性剤は、二
次抗酸化物質及びホモシステイン形成の阻害剤、並びにＮＯシンターゼの阻害剤
を含むことができる。尿酸の前駆物質及び生物活性剤は同時に投与されてもよく
、逐次的に投与されてもよい。これらの投与ルートは、経口、舌下、経皮、静脈
及び／又は局部からなる群から選択される。

【００１４】ヒトの悪性腫瘍を処理するために二種以上の抗癌剤を用いる化学療法は、現在
、研究及び診療において用いられている。抗癌薬は、抗代謝薬、アルキル化剤、
構成物質、一般的な活性抑制剤(poisons)等であってよい。癌腫(カルチノーマ)
、黒色種(メラノーマ)、リンパ腫、肉腫(サルコーマ)等の多くの癌に対する相乗
的細胞毒性効果を得るために、また、薬剤耐性細胞の出現を少なくするか又はな
くすために、また、各薬剤の副作用を少なくするために、複数の薬剤が投与され
る。

【００１５】本発明は、宿主に対して尿酸の先駆物質を付随的又は別個に投与することによ
り、インビトロ及びインビボ系における抗酸化物質組成物の治療指数が高められ
るという知見に基づいている。より具体的には、本発明は、フリーラジカルの生
成により哺乳動物の宿主に対して引き起こされる損傷を治療又は予防的処理を施
す方法に関するもので、尿酸の前駆物質を少なくとも一種(例えばヒポキサンチ
ン)と、生物活性化合物、フリーラジカルスカベンジャー又は代謝阻害剤から選
択される抗酸化物質を少なくとも一種を、宿主に対して薬理学的に有効な量を投
与するものである。生物活性剤は、一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステインの阻害剤、
ＮＯシンターゼの阻害剤、及びこれらの一種又は二種以上の組合せからなる群か
ら選択されることが望ましい。その他のフリーラジカルスカベンジャー又は抗酸
化物質の例として、ブチオニンスルフォキシミン(buthionine sulphoximimne)、
ビタミンＣ、インドメタシン、イブプロフェン、Ｎ-アセチルシステイン又はア
スピリンを挙げることができる。他の概念として、本発明は、哺乳動物の宿主への投与に適した組成物を提供す
るもので、該組成物は、尿酸の前駆物質と第２の生物活性化合物、望ましくは抗
酸化物質との混合物を、薬理学的に有効な量を含んでいる。

【００１６】ラジカルが、パーオキシナイトライト等の毒性過酸化物を生成すると、これら
物質の毒性は元のプロジェニターよりも数千倍にもなる。これら化合物は、その
約半分の寿命が親フリーラジカルよりも最大数百万倍も長くなるため、遙かに長
い時間反応することになる。抗酸化物質による抗作用が求められるのは、これら
の新しい毒性物質の反応である。ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白質、脂質及び炭水化物は、これらの毒性過酸化物の標的
である。抗酸化物質は、通常は、ジ-、トリ-又はポリ-フェノールなどのフェノ
ール、グルタチオン又はｎ-アクチルシステインなどのスルフヒドリル化合物又
は尿酸である。尿酸は、ヒト、サル及びダルマチア犬に特有の抗酸化物質であり
、その理由は、血液中に尿酸を分解する酵素(ウリカーゼ)が存在しないため、尿
酸が血液中に蓄積されることによる。尿酸は、血液中や細胞中における抗酸化物
質の主要素である。尿酸レベルの低い人は、疾患が起こると、大量の毒性過酸化
物が生成される虞れがある。しかし、尿酸の前駆物質とその他の二次抗酸化物質
を増やすことにより、過剰な過酸化物の毒性に抗することができる。また、抗酸
化の全体はその構成部分よりも大きいので、抗酸化の相乗作用が起こる。本発明の特徴及び利点については、以下の説明、特許請求の範囲の記載及び添
付の図面を参照することにより、より良く理解されるであろう。

【００１７】［発明の詳細な説明］ここで用いられる「薬学的に許容される(pharmaceutically acceptable)」は
、活性成分の生物活性の有効性を妨げず、投与される宿主に無毒性のキャリヤー
媒体を意味する。ここで用いられる「約」は、示された数値のプラス１０％又はマイナス１０％
を意味する。例えば、約１０グラムとは、９〜１１グラムの範囲を意味する。

【００１８】ここで用いられる「予防又は治療」の処理は、宿主に生物学的損傷の徴候が現
れる前又は後に、抗酸化物質及び／又は生物活性剤を宿主に投与することを意味
する。抗酸化物質又は生物活性剤の投与が、生物学的損傷を引き起こす物質に曝
される前に行われると、その処理は予防(即ち、宿主を損傷から保護する)である
。一方、抗酸化物質又は生物活性剤の投与が、損傷を起こす物質に曝された後に
行われると、その処理は治療(即ち、存在する損傷を緩和する)である。

【００１９】投与のスケジュール及び量は、宿主、疾患及び抗酸化物質の種類に応じて決め
られる。生物学的損傷が感染によって起こる場合、予防処理のための感染前及び
治療処理のための感染の初期段階では、１８時間後に投与が行われ、治療処理の
ための感染の後段階では、感染後１８時間までに投与が行われる。生物学的損傷
が癌である場合、処理後に腫瘍が現れる場合又は存在する腫瘍が除去されず若し
くは減少しない場合、その処理は治療とみなされない。投与効果は時間と共に減
少するが、ヒトの場合、その投与は数箇月間乃至数年間繰り返されることができ
る。癌の予防処理は、患者に癌のための処理が施された後、癌の再発を防ぐため
の投与を意味する。ここで、「フリーラジカルの生成によって宿主に引き起こされる生物学的損傷
」という語が用いられているが、これは、宿主の体内にフリーラジカルが生成さ
れる結果として、宿主の身体の一部又は機能に対してもたらされる細胞、組織そ
の他のあらゆる損傷を意味する。そのように引き起こされる損傷の例として、低
体温症がある。これは、癌処理を施す間に起こるもので、局部的又は全体的なマ
イクロ波の放射、化学療法剤(化学療法)によって生じる損傷、放射線療法、又は
高酸素分圧により、腫瘍の温度が上昇し、ラジカルを生成して細胞を殺し、感染
を起こす。処理された腫瘍細胞は、ラジカル損傷の伝播を促進する。

【００２０】高酸素分圧の例として、未熟児が高圧酸素に曝されて、網膜及び肺の疾患を生
ずる状態を挙げることができる。フリーラジカルの生成によって生ずる損傷を表
すその他の状態もこの定義の中に含めることができる。

【００２１】ここで用いられる「癌」という語は、細胞疾患を含む全ての腫瘍疾患を意味す
るものとし、これには、腎細胞癌、カポジ肉腫、慢性白血病、乳癌、肉腫、卵巣
癌、直腸癌、咽頭癌、メラノーマ、大腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、胃腸癌
、胃癌などを例示することができる。癌は、大腸癌、メラノーマ、腎細胞癌、サ
ルコーマ、肺ガン、腺癌又は乳癌が望ましい。

【００２２】上記定義の中で用いられる「感染」という語は、あらゆる種類の病原性疾患を
意味し、これには、細菌、菌類、ウイルス、原生動物又は寄生生物によって引き
起こされる疾患が含まれる。細菌感染の例として、緑膿菌、大腸菌、破傷風、マ
イコバクテリウム種、連鎖球菌株、ジフテリア及びサルモネラを挙げることがで
きる。菌類感染の例として、クリプトコッカス症、ヒストプラズマ症、カンジダ
種によるその他の感染を挙げることができる。ウイルス感染の例として、Ａ型肝
炎、再発性単純ヘルペス、エイズ、ヘルペス、帯状ヘルペス、インフルエンザ及
びリノウイルスを挙げることができる。感染は細菌が望ましく、グラム陰性感染
がより望ましく、緑膿菌及び大腸菌が最も望ましい。

【００２３】ここで用いられる抗酸化物質という語は、特に区別しない場合、フリーラジカ
ルスカベンジャー又は代謝阻害剤を意味する。「フリーラジカルスカベンジャー
」という語は、哺乳動物を、フリーラジカルの生成によって生ずる生物学的損傷
から保護する全ての化合物又は物質を意味する。この定義には、宿主及び／又は
腫瘍のラジカルスカベンジ能力を変えることにより作用する薬剤だけでなく、直
接のラジカルスカベンジングを通じて作用する薬剤も含まれる。このようなフリ
ーラジカルスカベンジャーは、放射線防護体であり、例えば、ヒポキサンチン、
ブチオニンスルフォキシミン、マレイン酸ジエチルのような化合物、ビタミンＥ
、ビタミンＣ、Ｎ-アセチルシステインのようなシステイン、グルタチオン、メ
トロニダゾール、ビタミンＡのようなレチノイドを挙げることができる。これら
のモディファイヤーの任意の組合せを用いることもできる。ここで用いられたヒ
ト用フリーラジカルスカベンジャーは、ブチオニンスルフォキシミン、ビタミン
Ｃ、ビタミンＥ、又はＮ-アセチルシステインのモディファイヤーである。

【００２４】「代謝阻害剤」は、アラキドン酸カスケードのスクロオキシゲナーゼ及び／又
はリボキシゲナーゼの代謝経路を閉塞又は抑制する化合物又は物質を意味するも
ので、リン脂質はフォスフォリパーゼＡ２又はＣによりアラキドン酸へ転換され
、アラキドン酸はどちらかの代謝経路により進行することがある。このような閉
塞又は抑制は、酵素を含む細胞型の１又は両方の経路を触媒する酵素によるもの
であってよく、又は経路の天然産物の１又は２以上によるものであってよい。代
謝阻害剤の例として、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ノルジヒ
ドログアヤレト酸(４-４'[２,３-ジメチル-１,４-ブタンジイル]-ビス[１,２-ベ
ンゼンディオル])(ＮＤＧＡ)、シス-８,１１,１４-エイコサトリエン-５-ynoic
acid(ＥＴＹＡ)、及び合成(天然に対する語)プロスタグランジン及び／又はロイ
コトリエンがあり、これらは、天然代謝生成物の効果の阻害を、酵素レベルでよ
りも、生産レベルで行なう。アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、及
びＥＴＹＡは、シクロオキシゲナーゼ経路を閉鎖し、これによって天然のプロス
タグランジン、ソンボキサン(thomboxane)及びプロスタサイクリンの生成を阻害
する。高い濃度では、インドメタシンもホスホリパーゼをブロックする。

【００２５】この明細書の中でヒポキサンチン、抗酸化物質又は生物モディファイヤーに適
用された「薬理学的に有効な量」という語は、混合物中の成分の量、又は宿主に
投与された量を意味し、宿主の治療指数の増加をもたらす量である。

【００２６】「治療指数」は、ここでの目的としては、有効性(efficacy)(腫瘍又は感染の
低下又は治癒の程度)、及び宿主に対する毒性に関して定義されることができる
。人間以外の宿主については、有効性が、添加剤対照(例えば、リン酸緩衝生理
食塩水)を用いたときよりも５０％以上増加するとき、また、処理の開始時の平
均体重に対して、有効性の評価期間の終わり時の平均体重の比が０.９０(つまり
、体重減が１０％以下)のとき、治療指数は増加したことになる。平均体重の比
は、毒性の程度を示しており、値が１のとき、毒性がないことを示している。人
間以外の宿主の癌に対する処理が施される場合、達成される有効性の程度は、処
理の開始時の平均腫瘍体積に対して、有効性の評価期間の終わり時の平均腫瘍体
積の比によって測定される。添加剤の対照と比べて、処理後の減少率が５０％以
上のとき、有効性が向上したことを示す。最も望ましい投与量、スケジュール及
び生物学的モディファイヤーの種類は、平均腫瘍体積比が０〜５を達成するとき
のものであり、値が０のときが最適で、治癒を示している。宿主が人間の場合、
リンフォカイン／細胞毒性及び生物学的モディファイヤーでの処理により有効性
が５０％以上増加し、また、毒性を受け入れることができる場合、つまり、熱、
寒け及び／又は全身の倦怠感だけの場合、治療指数は増加したことになる。人間
の宿主の癌に対する処理が施される場合、有効性の程度は、一般的には診療にお
いて、測定された全ての疾患について、生成物の垂直方向の直径を測定すること
により確認される。

【００２７】腫瘍の収縮が、測定された全ての疾患の垂直方向の直径について、生成物の合
計の５０％以上のとき、部分的な応答が起こる。本発明の方法は、尿酸の前駆物質を一種又は二種以上と、抗酸化物質又は生物
活性剤を一種又は二種以上を、哺乳類の宿主、望ましくはヒトの宿主に対して、
薬理学的に有効な量を投与するものである。尿酸(例えばヒポキサンチン)、抗酸
化物質及び生物活性剤の前駆物質は、宿主へ投与する前にインビトロで一緒にし
てもよいし、順番に投与してもよいし、同時に投与してもよい。なお、尿酸の前
駆物質の投与はいかなる場合も、抗酸化物質又は生物活性剤を投与した後、一般
的には２４時間以内に行われる。

【００２８】投与は、経口、皮下、腸管外(parenteral)などの任意の適当な技術を用いて行
なうことができ、腸管外又は経口投与が好ましい。腸管外投与の例として、静脈
内、動脈内、筋肉内及び腹腔内投与を挙げることができ、腹腔内及び静脈内投与
が好ましい。投与処方は、主として、前駆物質、抗酸化物質及び生物活性剤が、
治療又は予防目的のために別々に又は混合物として投与されるかどうかにより、
また、生物活性剤及び宿主の種類、宿主の病歴、前駆物質の抗酸化物質又は生物
活性剤又は細胞毒素の種類、用いられる生物学的モディファイヤーの種類により
決められる。投与量は、前述した治療指数を高めるのに有効な量であらねばなら
ない。ヒトは、マウスやラットよりも処理される時間が長く、この時間は疾患の
過程及び薬剤の有効性の長さに比例している。投与は、１回でもよく、数日間に
亘って多数回行なってもよいが、１回が望ましい。ここでは、保護レベルが５０
％以上とは、処理された宿主の５０％以上が、疾患又は感染に対して改善効果が
認められたことを意味する。この効果には、生存率の向上、快復速度の向上、症
状の改善又は解消などが挙げられるが、これらに限られるものではない。多数回
投与を用いることが望ましい場合、その投与頻度は、例えば、宿主の種類、癌の
種類、投与量などを考慮して決められる。癌又は癌細胞株の種類によっては、毎
日投与することが望ましいものもあるし、１日おき又は２日おきに投与するのが
効果的で、毎日投与しても効果が認められないものもある。医師等は、どの患者
に対しても、日常の経験に基づいて、最適な投与方法及び投与頻度を確認するこ
とができるであろう。癌の場合、最も有効であると考えられる投与量は、腫瘍の
大きさの縮小が認められたり、腫瘍が完全に消滅して再発を起こさない量であり
、また、宿主患者に対する毒性が全くないか、受け入れられる程度の量である。
一般的に、熱、寒け、全身の倦怠感等は受け入れられる程度と考えられる。最適
な投与レベルは、例えば、宿主、癌、投与方法、投与スケジュールの種類、投与
順序、存在する腫瘍の程度、前駆物質及び抗酸化物質モディファイヤーの種類、
許容される毒性の程度等の数多くの要因を考慮して決められる。毒性は、宿主が
ヒトの場合、副作用の程度及び種類によって決められる。なお、治療指数のとこ
ろで説明したように、熱、寒け及び全身の倦怠感については、ここでの考察では
許容できる毒性であるとする。また、体重の減少量、ヒト以外の宿主における所
定時間後の死亡も考慮される。

【００２９】パーオキシナイトライト(ＯＯＮＯ-)は、最近では、例えばアルツハイマー症(
1)、多発性硬化症(2)、パーキンソン病、敗血症、腎毒症、卒中、髄膜炎などの
種々の変性疾患、及び、例えば糖尿病、関節炎(3)などの種々の炎症性疾患との
関係が明らかにされている。この強力な酸化物質は、脳及び皮膚などの様々な組
織部のマクロファージによって生成され、多くの有機標的、特にフェノール及び
スルフヒドリル含有化合物をヒドロキシル化及び／又はニトロ化させる。それは
、不対電子を有するスーパーオキシド(Ｏ-Ｏ-)及び酸化窒素(ＮＯ)のフリーラジ
カルから形成される。不同電子は強い親和性を作り出し、両者を結合してパーオ
キシナイトライトを形成する。パーオキシナイトライトが固有の物質であるのは
、非常に強力な酸化剤であり、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白質、炭水化物及び脂
質などの主な生物学的実体の全てに損傷を生じさせるためである。パーオキシナ
イトライトは、分子状態の過酸化水素と比較すると、酸化剤としての活性は１０
００倍もある。

【００３０】内因性の酸化窒素(Nitric Oxide:ＮＯ)は、例えばｌ-アルギニンの酸化的分解
により、又は過酸化水素又はその他酸化物質の存在下で形成され、またＮＯシン
ターゼの酵素を利用して形成される。ＮＯシンターゼは３種類が知られており、
そのうちの２種は誘導型であり、マクロファージをインターフェロンγ、ウイル
ス、細菌又は外部粒子で刺激すると、酵素の生成を増す。酸化窒素シンターゼは
、ｌ-アルギニンと反応し、シトルリンと酸化窒素を生成する。これは、大量の
ＮＯを生じさせ、マクロファージが免疫機構の中で重要な役割を果たすので、パ
ーオキシナイトライトを生成し、最終的に侵入者を不活性にする。しかしながら
、この機構が不適切に活動すると、パーオキシナイトライトは、ＤＮＡ、ＲＮＡ
、蛋白質及び脂質を含む全ての生物学的実体に接触して攻撃し、病理学的な損傷
をもたらす。それゆえ、ＮＯ生成の制御が重要である。

【００３１】薬理学的な量の抗酸化物質を投与すると、酸化窒素シンターゼの誘導を阻止す
ることができるという報告がある。しかしながら、この処理は、既に大量に形成
されているパーオキシナイトライトに対するものではない。この場合、パーオキ
シナイトライトはスカベンジされなければならない。それゆえ、細胞の内側及び
外側で十分な量の阻害剤又はその前駆物質が利用されねばならず、また、パーオ
キシナイトライトの毒性を抑制するために、阻害剤又はその前駆物質は、パーオ
キシナイトライトに対する抗酸化物質として作用させ、パーオキシナイトライト
を酸化剤として分解し、抗酸化物質を代謝するものでなければならない。図１に
示されるように、血液及び組織中に十分な量の尿酸が存在しており、パーオキシ
ナイトライトのような強力な酸化剤による攻撃を非常に受け易い化学構造である
ことを表している。

【００３２】ヒトのプリン代謝の最終生成物は尿酸である。この物質はすぐれた酸化剤であ
り、殆んど全てのパーオキシナイトライトと直接相互反応することができる。図
２はパーオキシナイトライトと尿酸の相互反応、及び、パーオキシナイトライト
に基づく化学ルミネセンス(化学発光)の関係を示すグラフである。図２は、光(
化学発光)を生じるためのパーオキシナイトライトとルミノールの酸化的反応と
、１０μＭの濃度の尿酸で生成する光との干渉を示している。パーオキシナイト
ライトの濃度も１０μＭであり、最大約９９％までの酸化的反応の抑制は、尿酸
の抗酸化物質の能力を示している。この直接化学反応が行われる間、尿酸はアラ
ントインに転換される。人間の場合、重要なウリカーゼ酵素を有しないため、酵
素触媒による反応は起こらない。尿酸とＯＯＮＯ-パーオキシナイトライトの反
応により、尿酸は、図４の質量分光データに示されるように、アラントイン(５-
ウレイドヒダントイン)に化学変化する。人間、オオザル及びある種のダルマチ
アン犬以外の動物では、アラントインは、プリン代謝の最終生成物である。人間
、サル及びダルマチアン犬は、ウリカーゼ酵素を有しないので、アラントインの
存在により、強力な酸化物質が尿酸を攻撃したことを示している。このような酸
化物質は、パーオキシナイトライト又はおそらく次亜塩素酸塩を通じて最も発生
し易い。

【００３３】最近、多発性硬化症に非常に似た疾患で、アレルギー性脳髄膜炎(ＥＡＥ)と称
される疾患を尿酸で処理した例がある。尿酸はパーオキシナイトライトの天然ス
カベンジャーであり、ＥＡＥにおける損傷の形成を防止するために必須のもので
ある。科学者はマウスに対し、５００ｍｇ/ｋｇの尿酸を１日４回投与したとこ
ろ、投与処理の開始がＥＡＥの臨床症状が出現する前及び出現した後の如何に拘
わらず、生存時間が長くなった。さらに、２千万人の患者について、多発性硬化
症の発生と血液中の高レベル尿酸の記録によれば、２つの疾患は殆んど相互に排
他的であることを表している。これは、高尿酸血症は多発性硬化症を保護する可
能性のあることを意味する。尿酸の分解は、乳児における慢性肺疾患、及びウイ
ルソン病の銅代謝の遺伝性疾患に関与している。尿酸レベルは、インスリン依存
性糖尿病では低下することが認められる。尿酸は、このように人体の抗酸化物質
として重要であり、血液中のヒト血清の抗酸化能力の略全体を占めている[Ryan,
Grayson & Clarke in Ann. Clin. Biochem. 34, 688-689, 1997参照]。この文
献のデータ及びそれに関する説明は、それらへの引用を以て本願への記載加入と
する。

【００３４】尿酸は、組織中で重要な役割を果たす。それは、おそらく慢性酸化剤としてで
はなく、グルタチオンの存在によるためである。体内の尿酸レベルを維持するこ
とは、主として、遺伝子制御により行われると考えられており、食物、組織の消
滅又は転換では、殆んど影響を及ぼすことはなかった。発明者の研究でも、尿酸
が遺伝子制御を受ける間は、食物が血液中の尿酸レベルに影響を及ぼすことを示
している。

【００３５】しかしながら、尿酸は「薬剤」としては明らかに不利な点がある。それは水に
極めて溶解し難いことであり、それゆえ、生物学的利用能が不十分であると考え
られている。薬剤としての使用を妨げる重要な主要因の１つは、血液レベルの上
昇により、尿酸性関節炎の攻撃を引き起こすことである。また、血液レベルが高
いと、腎毒症を引き起こし、おそらく腎不全に到る。

【００３６】それゆえ、人体を酸化的損傷から保護するために、尿酸レベルを高める最良の
方法は、相対的に可溶性で、毒性の最も少ない、尿酸の前駆物質を摂取すること
である。前駆物質の中には、重大な危険を引き起こすものもある。これが大量(
９５ｍｇ/ｋｇ)に投与されると、アデニンは２,８ジヒドロキシアデニンに酸化
され、これが結晶化して腎結石を形成する。

【００３７】ＤＮＡ又はＲＮＡ食物は、毎日２〜４グラムの抽出物を投与すると、他の可能
性がある。この処方は、尿酸レベルを、通常の状態(血液１００ｍｌ中に４.９ｍ
ｇ)から尿酸過剰状態(血液１００ｍｌ中に７.５ｍｇ)に高め、痛風を起こす。さ
らに、ＲＮＡとＤＮＡは両方とも、リボース糖、デオキシリボース糖及びリン酸
塩を含んでおり、プリンを供給する必要はないため、大量の栄養性前駆物質を投
与する必要がある。ヌクレオチドＡＭＰ、ＧＭＰ及びＩＭＰは、ヌクレオシド(
リン酸塩基がなく、リボースが付加されている)ＡＭＰ及びＧＭＰのアデノシン
、グアノシン及びイノシンに相当する。これらは、尿酸レベルを高める能力の点
では等しい。血液の尿酸レベルを高める点については、ヌクレオチドＡＭＰ及び
ＧＭＰは、ＤＮＡ及びＲＮＡよりも効果的である。これは、食物吸収の制限要因
が核酸の加水分解速度であることを示唆する。アデニン、グアニン、ヒポキサン
チン、キサンチン、ＡＭＰ及びＧＭＰの尿酸増加効果が、正常なヒト、尿酸過剰
のヒト及び痛風のヒトにおいて比較された。ＡＭＰ、ＧＭＰ、ヒポキサンチン及
びアデニンは、血液中の尿酸レベルを高めたが、グアニン及びキサンチンは３つ
のグループの全てにおいて効果はなかった。

【００３８】ＡＭＰ、ＧＭＰ及びヒポキサンチンの３つの中で、ヒポキサンチンは尿酸の最
も効果的な前駆物質であると考えられる(図１参照)。経口投与されたヒポキサンチンは、血液中の尿酸レベルを高めるのに最も効果
点な方法であると考えられる。吸入法以外であれば、その他の投入方法も可能の
である。これら物質のどの注入形態も有効であり、これには、座薬により直腸経
由の方法も含まれる。さらに、鼻腔経由又は交換透析も有効である。

【００３９】望ましい実施例において、血液及び尿の中の尿酸の初期レベルは尿酸前駆物質
で処理を施す前に測定される。ヒポキサンチン又は前述した尿酸のその他前駆物
質は、口又はその他のルートを経て毎日投与され、投与量はおそらく毎日２〜１
０グラムの範囲であろう。引き続いて、血液中の尿酸レベルを調べて、７ｍｇ/
１００ｍｌ以下であることを確認する。これは尿酸レベルが過度に高くなるのを
防止して、痛風を防止する。生物学的に個人差があるため、患者は個々に投与量
が定められるべきである。尿酸の治療レベルに達するには、毎日の投与量は２〜
１０グラム前後が必要である。臨床状況によっては、パーオキシナイトライトが
高すぎると、尿酸の消費量が増え、投与量を増す必要性が生じる。

【００４０】人体を強力な酸化剤から保護するために、尿酸の他に、種々の抗酸化物質が尿
酸を補助する治療補助剤として生物学的に重要である。これらの抗酸化物質のレ
ベルを高めると、前述した作用が行われる。これらの抗酸化物質として、アスコルビン酸(ビタミンＣ及び無毒性誘導体、
他エステルＣ、アスコルビン酸Ｃａ⁺⁺)、ビタミンＥ(αトコフェロール又はそれ
と同等のもの)、及びグルタチオンの量を無毒状態に高める前駆物質、例えばｎ-
アセチル-ｌ-システインが挙げられる。これらの３つは環(サイクル)を形成し、
その中で、ビタミンＣとＥがグルタチオンを保護し、結果として還元状態に維持
される。各物質の投与量は病理学に基づいて異なるが、どの場合もその目的は、
パーオキシナイトライトその他強力な酸化物質による損傷から保護するために、
尿酸レベルの増加作用を手助けすることである。

【００４１】隔日又は２日毎の投与処方の場合、少量の短時間作用型の抗炎症ステロイド(
例えばプレドニゾン)を加えることもできる。ステロイドは誘導型ＮＯシンター
ゼを抑制する働きを有し、最終的にパーオキシナイトライトの生成を少なくする
。副腎が生成する天然糖質コルチコイドの抑制を防止するために、投与量は少な
く維持すべきである。他のステロイド系抗炎症薬剤を用いることもできる[Goodm
an & Gilman 9th ed. pp.1473-74-table 59-4参照]。

【００４２】ホモシステインの形成を抑えるために、ビタミンＢ₆と葉酸を毎日２〜３回の
ペースで投与することもできる。この物質は、ｎ-アセチル-ｌ-システインの代
謝物質の可能性があり、ビタミンＢ₆と葉酸を添加することなく長期間使用する
と潜在的な危険性がある。

【００４３】緑茶の葉の抽出物は、抗酸化物質又は生物活性剤として最適であると考えられ
、単独で、又は尿酸の前駆物質と共にすぐれた抗酸化効果をもたらす。エピガロ
カテキン・ギャレイトとケルセチンは、緑茶の葉の抽出物の中で見られるポリフ
ェノール抗酸化物質である。ケルセチンは数種の植物の外皮、クローバーの花、
ブタクサの花粉から抽出される。緑茶を飲むと、癌の危険性が少なく、寿命が長
くなることが疫学的研究において関連づけられている。インビトロの研究では、
ＥＧＣｇは化学予防特性のあることを示した。ケルセチンはＤＮＡを酸化的損傷
から保護し、蛋白質キナーゼ活性を阻害する。これらの結果は、ＥＧＣｇとケル
セチンは、健康維持及び疾患予防に対して潜在的に治療作用のあることを示して
いる。

【００４４】発明者は緑茶の葉の抽出物がパーオキシナイトライトに及ぼす効果について研
究した。この研究は、パーオキシナイトライト(ＯＯＮＯ-)と、酸化によって青
色光を発するルミノールの単純な化学相互作用に基づいている。パーオキシナイ
トライトは半寿命(half life)が１秒よりも短いので、ＳＩＮ-１として知られる
薬剤がパーオキシナイトライトのジェネレータとして用いられる。さらに、パー
オキシナイトライトそのものが、高速注入−混合系と共に直接用いられ、ＯＯＮ
Ｏ-の天然生成に類似するパーオキシナイトライト発生系(ＳＩＮ-１)と、パーオ
キシナイトライトとの間に違いがあるかどうか確認が行われる。パーオキシナイ
トライトは酸化能力のある化合物であり(過酸化水素の等価物よりも１０００倍
以上活性である)、炭水化物、脂質、蛋白質及び核酸を酸化させる。炎症及び／
又は感染を刺激すると、マクロファージと好中球は刺激され、大量のパーオキシ
ナイトライトを作る。

【００４５】茶の健康促進効果は、中国及びインドで何千年も前から認められ、用いられて
いる。緑茶と紅茶は、同じ植物(チャノキ(Camellia sinensis))から由来する。
２つの茶の違いは、主としてその製造過程にある。緑茶は軽く蒸気処理され、ポ
リフェノールの酸化に関係するフェノールオキシダーゼを不活性化し、より多く
の化合物を未酸化状態にする。ポリフェノールは還元又は未酸化状態で残される
ので、パーオキシナイトライト(Ｐ)や次亜塩素酸塩(Ｈ)のような強力酸化物質に
対しても抗酸化物質として強く作用する。なお、次亜塩素酸塩は、過酸化水素、
塩化物イオンの存在下で、ミエロペルオキシダーゼ酵素を経て作られる。これら
の酸化物質が食胞の外側へ不適当にこぼれ出ると、周囲組織に損傷を与え、酸化
に基づく炎症、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化
症、卒中、関節炎、肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、アラローム、その他多くの疾
患等を生じさせる。それゆえ、ポリフェノールの如き易酸化性物質をバイスタン
ダー分子(bystander molecules)として作用させて、強力酸化剤の効果をなくす
ことは適当であるように思われる。茶の中のポリフェノールがこのように作用し
て、抗細菌及び／又は抗ウイルス活性を保護し、癌と突然変異に対抗する。

【００４６】緑茶の中の主なポリフェノールは図５に示されている。最も活性な抗酸化物質
は、エピガロカテキンのギャレイトエステルであるエピガロカテキン・ギャレイ
トであると考えられている。ルミノール依存性化学発光に対する緑茶とその幾つ
かの構成成分の抗酸化効果は、パーオキシナイトライトによって活性化される。
パーオキシナイトライトはルミノールを酸化して、光を発する中間生成物を作る
ので、抗酸化物質は、ルミノールの酸化を妨げることにより、青色光を阻止する
。さらに、発明者が使用したＳＩＮ-１はスーパーオキシドと酸化窒素を生成し
、両者が結合してパーオキシナイトライトを生成する。緑茶の中の抗酸化物質は
、パーオキシナイトライトがＳＩＮ-１から直接又は間接に由来するかどうかに
拘わらず、光の発生を抑える阻害活性をもたらす。しかしながら、パーオキシナ
イトライト、つまりスーパーオキシド及び酸化窒素は、ＳＩＮ-１及びそれらの
製造過程で作られ、それらの集まりが、パーオキシナイトライト単独では不可避
の如く抑制又は阻止される。この研究の目的は、緑茶抽出物及びその主要なポリ
フェノールの幾つかについて、抗酸化物質の活性を測定することである。これは
、パーオキシナイトライトによるルミノールの酸化に抗するために、抗酸化物質
を用いることによって行われ、これによって青色光の発生が抑制される。

【００４７】３つのシドノニミン(sydnonimine)種は、酸化窒素とスーパーオキシドを生成
し、結合してパーオキシナイトライト(ＯＮＯＯ)を生成することが知られている
。発明者はＣ８９-４１４４又はＣ８７-４０９５に対してＳＩＮ-１を選択した
が、その理由は、ＳＩＮ-１は反応速度が最もすぐれていたためである。なお、
全ての光の生成に対しては、Ｃ８９-４１４４が幾分良好であった(図６参照)。
ＳＩＮ-１は発明者の継続実験の基礎を形成し、全てのシドノニミンは次のとこ
ろから入手した：Dr. Karl Schonafnger, Casella-AG Hanauer Landstrasse 526
-6000 Frankfurt am Main 61, Frankfurt, Germany。ＳＩＮ-１は、毎分当たり
約１％(化合物の合計量を基にして)の速度でパーオキシナイトライトを生成する
。ＳＩＮ-１は、１５ｍｇ/５ｍｌの濃度の０.１ＭＰＢＳ緩衝液(ｐＨ７.４)の
中に溶解させた。氷中で保存し、数時間の実験のためにその活性を維持した。パ
ーオキシナイトライト(約５０ｍＭ)を水で１/１０００に希釈した。元の溶液は
０.３ＭＮａＯＨで供給され、これを化合物に安定化させる。一旦希釈されると
、氷の中で維持し、特に希釈後は、速やかに使用する。希釈されたＯＯＮＯ-は
、ｐＨ＝７.４のＰＢＳ緩衝液の中へ注入される。この場合、速やかに注入して
混合することが重要である。その理由は、ＳＩＮ-１とのより緩やかな反応とは
異なり、中和条件下では、ＯＯＮＯ-の半寿命は１秒よりも短いためである。し
かしながら、迅速な反応及び注入／混合はそれほど重要ではないので、ＳＩＮ-
１との反応が遅くなると、その反応が構成要素に分解する機会を与えることにな
る。

【００４８】ルミノールは次のところから入手することができた：Sigma Chemical Company
, St. Louis, Mo 。まず最初に、１ｍｌのＤＭＳＯの中で溶解させ、次に希釈し
て、ｐＨ７.４の０.１Ｍリン酸塩緩衝生理水の中で保存溶液(１０−４Ｍ)を生
成した。

【００４９】緑茶の粉末抽出物の購入先は次の通りである：Pharmanex, Semi Valley, Cali
fornia。その２５０ｍｇを、ｐＨ７.４のリン酸塩緩衝液１０ｍｌの中で溶解し
、保存溶液として用いた。希釈液はＰＢＳを用いて作られ、この保存溶液の試料
は１０倍毎に希釈して１倍から１００万倍の６種類の希釈液を得た。

【００５０】ルミノール溶液(最終濃度０.６ｍモル)１００μｌ、０.１ＭＰＢＳ緩衝液(ｐ
Ｈ＝７.４)に希釈した緑茶の希釈液１００μｌ、緩衝液２００μｌ、ＳＩＮ-１(
最終濃度５.８ｍモル)又は誘導体の溶液１００μｌをピペットで定量し、３ｍｌ
容量の丸底型ルミノメータ管の中に入れた。合計体積は５００μｌである。ＳＩ
Ｎ-１とルミノールとによって作られる光刺激の基準を提供するために、対照用
試料を用いた。最終濃度のこの溶液は、ルミノール１００μｌ、緩衝液３００μ
ｌ、ＳＩＮ-１が１００μｌであった。ＳＩＮ-１又は誘導体は、ピペットによる
定量前に氷の中に維持した。これらは室温で不安定であるため、最後に添加され
た。

【００５１】ルミノメータ管はバーソルド(Berthold)モデルＬＢ９５０５Ｃ管の中に入れら
れた。このＬＢ９５０５Ｃ管は、６チャンネル式のルミノメータであり、温度は
３７℃に設定され、光反応は２０分間測定された。パーオキシナイトライトはル
ミノールと直接反応し、特に圧力依存性注入装置を用いて、気密型シリンジの全
容量(２５００μｍ)の１/５０を注入した。この装置は、４２５ｎｍの青色光を
作り出すもので、メーカーは、Hamilton Co. (特許第３１６１３２３号), Whitt
ier, CAである。なお、この青色光は、このルミノメータのフォトマルチプライ
ヤーの最も鋭敏な検出範囲に相当する。注入装置は、固定針が５.２ｃｍで、気
密型２５００μｌシリンジに連結されている。針のこの長さは、６チャンネル式
のバーソルド・ルミノメータのポートの隔壁へ進入させるために必要であり、パ
ーオキシナイトライトの半寿命が短いため、管の中へ十分に進入して再現可能な
混合を行なうのに必要である。パーオキシナイトライトの注入を繰り返したもの
を図７に示しており、１分間に発生した光を獲得し、これをプロットし、ＩＢＭ
クローンコンピュータ用ＫＩＮＢソフトウエアを用いて積分したものである。Ｓ
ＩＮ-１の場合、成分は分析前に混合され、ＳＩＮ-１は速やかに加えられた。分
析結果は、１分あたりのカウント数として報告され、２０分間に亘って積分され
ている。光曲線は、再生が良好であり、一般的にピーク高さよりも有意であるの
で、光曲線より下の面積を測定した。曲線下の面積(Area Under Curve;ＡＵＣ)
の測定は、装置(Berthold)に備わるＫＩＮＢプログラムを用いて行われた。この
プログラムはＡＵＧの測定方法として、台形近似を利用している。

【００５２】化学ルミネセンスは、ＳＩＮ-１との各反応について、初期の２０分間に亘っ
てまとめられたもので、パーオキシナイトライトについては１分である。反応は
別々の実験において、最低３回繰り返された。全ての棒グラフは平均を表し、関
連づけられた誤差の棒線は標準偏差を表している。有意水準はｐ＝０.０５に設
定され、適当なところで適当なスチューデントのＴ検定から計算された。ブラン
クはＳＩＮ-１又はパーオキシナイトライトなしで実行され、分析では無視され
た自明な(trivial)相対的光信号が作られた。

【００５３】図５は、発明者が分析した緑茶粉末抽出物の中に含まれる種々の成分の構造を
示している。ＳＩＮ-１／パーオキシナイトライト及びルミノールの配合物にみ
られる発光特性に対して、個々の成分の阻害効果を調べるための試験が行われた
。これらのデータは以下に示す結果の基礎を形成するものである。

【００５４】蓋然機構(probable mechanism)により、ＳＩＮ-１はｐＨ＝７.４で加水分解し
、パーオキシナイトライトアニオンを生成するが、蓋然機構は、５員シドノニミ
ン及びその反応の塩基触媒及び開環の結果であり、これによって、酸素を少なく
し、スーパーオキシドアニオン及びラジカル開環化合物を生成する。この化合物
は、転位(rearrangement)があると、酸化窒素ガス(フリーラジカル)を放出する
。２つのフリーラジカルが一緒になって、パーオキシナイトライトアニオンと消
費済み生成物(spent products)を作る。パーオキシナイトライトはルミノールと
反応して、ルミノメータのフォトマルチプライヤーによる検出が容易な青色光を
生成する。

【００５５】図８は、ＳＩＮ-１／ルミノール生成配合物に添加された緑茶の各希釈液に関
する阻害効果を示している。大部分がポリフェノールからなる緑茶抽出物は、最
大強度にあるルミノールベースの光を抑制し、１００００倍希釈及び０.００５
ｍｇで、阻害率は約５０％である。さらに希釈すると、阻害効果は僅かに向上す
るようである。

【００５６】図９は、パーオキシナイトライト及びルミノールについて同様な阻害を示すも
のであるが、５０％阻害位置が緑茶抽出物の１０００倍希釈の投与で起こる点が
異なっており、１０倍希釈が継続するので、阻害は、二相性反応のソート(sort)
として７５％以上まで上昇する。

【００５７】図１０は、ＳＩＮ-１活性ルミノール発光に対する(−)エピカテキンの阻害効
果を示している。０.４５μＭで１：１００００希釈により、約１０％の阻害を
示している。しかしながら、図１１を参照すると、パーオキシナイトライトにつ
いて同じ阻害能力が見られ、１００００乃至１０００００倍希釈のとき、光の７
５〜９５％の阻害が見られる。

【００５８】ＳＩＮ-１活性ルミノール光に対して、ラセミカテキンの阻害効果を観察する
ことができる。図１２において、カテキンの希釈が１：１０００のとき、光の５
０％阻害が観察されるが、その表示後１０倍の希釈では阻害は殆んど観察されな
い。同じようなパターンが図１３におけるパーオキシナイトライトをベースとす
る光について見られるが、５０％阻害効果は、１：１００００希釈まで観察され
ない。１：１０００００希釈では、５０％阻害が見られる。

【００５９】図１４は、ＳＩＮ-１活性ルミノール光に対する(−)エピガロカテキン・ギャ
レイトの阻害効果を示しており、１：１０希釈で１００％の最大強度の阻害が見
られる。しかし、さらに希釈すると、実際は光の発生を刺激する。同じパターン
の挙動が、図１５におけるパーオキシナイトライトをベースとする光を用いるこ
の化合物について見られる。

【００６０】図１４に見られるように、エピカテキン・ギャレイト(−)は、ＳＩＮ-１がル
ミノール光の活性剤として用いられたとき、１：１０００希釈で固体阻害(６０
％)を示した。しかし、パーオキシナイトライトがルミノール光の活性剤として
用いられたとき、１：１０希釈で１００％の光阻害が見られたが、その位置から
引き続いて１０倍希釈では、約２５％の光阻害が見られた(図１５参照)。

【００６１】図１６は、ＳＩＮ-１活性ルミノール光に対するＣ-１エピカテキン・ギャレイ
トの阻害効果を示している。同様なパターンが、図１７におけるパーオキシナイ
トライトをベースにした光について見られる。

【００６２】前述の反応混合物へ添加された抗酸化物質は、一般的には、パーオキシナイト
ライトと直接反応することにより、ルミノールの酸化を妨げる。パーオキシナイ
トライトの源としてＳＩＮ-１を選択したが、その理由は、ＳＩＮ-１は十分な光
を発生し、最も早くピークが現れるからである。さらに、ＳＩＮ-１の要素はこ
の薬剤によって作られるから、パーオキシナイトライトをもっと遅い速度で生成
するのに用いられることができる。このようにして、人体がパーオキシナイトラ
イトの生理学的生成を実際にどのように阻害するのかと同じように、パーオキシ
ナイトライトの個々の構成要素を阻害する機会を得ることができる。

【００６３】緑茶の抽出物は、パーオキシナイトライトと反応することにより、ＳＩＮ-１
からルミノール光が生成されるのを阻害する(図８参照)。また、同じように、パ
ーオキシナイトライトからルミノール光の生成を阻害する。茶の量がμＭであっ
ても、測定可能なレベルの阻害が起こる。２つの図(図８及び図９)を比較しても
、殆んど区別することができない。これら不一致の理由は理論的に説明される。
可能性のあると考えられる説明の１つは、ＳＩＮ-１の性質と純パーオキシナイ
トライト形との比較に関するものである。ＳＩＮ-１は、スーパーオキシドと酸
化窒素の生成により、時間が経過すると分解してパーオキシナイトライトになる
。図９は、茶抽出物の希釈が大きくなっても、ＳＩＮ-１は思った程にも有効で
はないことを示している。しかしながら、図８では、パーオキシナイトライトは
第３番目の希釈で効果は少なくなったが、さらに希釈すると、再び阻害効果を示
した。１つの可能性として、フェノールの中には刺激能力を有するものがあると
考えられる。図５の構造を参照すると、緑茶の構成成分には多くのポリフェノー
ルが含まれていることがわかる。それは、ＳＩＮ-１よりもパーオキシナイトラ
イトを含む管の中で、阻害だけでなく、刺激も起こっているものと理論的に説明
される。

【００６４】酸化物質は、好ましくない物質を人体から取り除くという重要な役割を果たす
。この物質として、細菌、寄生生物及びウイルスを挙げることができる。また、
例えば、パーオキシナイトライト、次亜塩素酸塩／ミエロペルオキシダーゼ、及
びスーパーオキシド／過酸化水素／鉄イオンなどの酸化物質は、高い有毒性をも
たらす。これらの酸化物質は、適切に閉じこめられ、また、他と区別して分けら
れると、侵入者を攻撃して健康を維持するという役割を果たす。これらの反応を
制御できないことが時々あり、ひどい炎症を生ずると慢性関節炎を引き起こすこ
とにもなる。それゆえ、大腸炎、髄膜炎、多くの器官不全に関連する化学反応は
、実際の疾患状態の間では、連続的に高レベルにある。

【００６５】慢性炎症のこれら例の全てにおいて、毒性酸化物質が生成される。酸化物質は
、炎症の徴候を生ずる際に、主たる役割を果たす。それゆえ、論理的には、酸化
物質を制御できないようにする化学剤が抗酸化物質となる。抗酸化物質には、水
溶性(例えばビタミンＣ)と、脂溶性(例えば、ビタミンＥ)のよく知られた２種類
の抗酸化物質がある。さらに、緑茶の中のポリフェノール成分は、体内に既に存
在する抗酸化物質を蓄えるのに重要である。物質が抗酸化物質として作用するか
、酸化物質として作用するかどうかは、その物質が酸化剤−還元剤スケールのど
こにあるかによる。アスコルビン酸は、他の物質に関するスケール上のどこにあ
るかにより、抗酸化物質にも酸化物質にもなり得る。

【００６６】図９はＳＩＮ-１に対する(−)エピカテキンの効果、図１０はパーオキシナイ
トライト活性光に対する(−)エピカテキンの効果を調べた結果を示している。他
のカテキンと比較すると、緑茶抽出物の(−)エピカテキン成分は、パーオキシナ
イトライト又はＳＩＮ-１をベースとする光の阻害量が最も多いことを示した。
図５の構造を検討して、理論的に説明するが、この説明に拘束されることを望む
ものではない。それは、２つのジフェノール環と、６員環状エーテル中のキーキ
ラル炭素でのアルファＯＨを含んでいる。これは、攻撃パーオキシナイトライト
による最も容易なアクセスを可能とした。活性度が第２番目の抗酸化物質はエピ
カテキンの没食子酸のエステルである(−)エピカテキンギャレイトであった。Ｓ
ＩＮ-１とパーオキシナイトライトに対する(−)エピカテキンギャレイトの反応
を、図１５及び図１６に示している。両方の場合とも、化合物は１：１０００倍
希釈で活性であり、阻害は約５０％である。パーオキシナイトライトの攻撃に対
しては、前述の親化合物と同様なアクセスであると期待するであろう。また、そ
れは没食子酸のエステルであるから、体内でエステラーゼを介して容易に加水分
解されるので、(−)エピカテキンは没食子酸を放出する。

【００６７】ラセミカテキンは、図１０及び図１１に示されるように、ＳＩＮ-１又はパー
オキシナイトライトに対して非常に活性である。実際、０.４５ｍモルの保存液
の１０００倍希釈液は、先に用いた両方の酸化物質の約５０％阻害をもたらす。
パーオキシナイトライトに対するこの阻害は１：１００００希釈まで維持される
。

【００６８】最後に、エピガロカテキン・ギャレイトは、０.４５ｍモルの保存液の１：１
００希釈で、ＳＩＮ-１又はパーオキシナイトライト(図１３及び図１４)につい
て、阻害よりも光の刺激を示した。それは、試験した抗酸化物質の中で最も弱い
ことは明らかである。フェノールの１つは３つのヒドロキシルを有し、没食子酸
もまた３つのフェノールヒドロキシルを有することは勿論である。薬剤の投与量
が多くすることも効果的であろう。フェノール又は代謝物質による光の刺激は十
分に研究された減少であり、最近の研究において化学的論理が示されている。

【００６９】 (−)エピカテキンと(−)エピガロカテキン・ギャレイトの投与量が増えると、
ＳＩＮ-１が溶液に添加されたとき色変化が起こった。ルミノメータの中で２０
分間の培養の終わりに、２つの化合物の溶液は明瞭な黄色に変化した。色変化は
、構成成分の酸化的代謝により起こったかもしれない。この現象に対しては、お
そらく構成成分が硝酸化及び／又はヒドロキシル化したものと説明される。

【００７０】前述した情報から、尿酸及び／又は緑茶から単離した化合物を含む処方剤(for
mulation)は酸化的損傷の発生を防止するのに非常に有用であることがわかる。

【００７１】次の表１は、処理の処方例をまとめたものである。どの場合も、投与量は予測
によるものである。実際の投与量は、個人個人の生理学的及び病理学的な条件に
よって異なる。

【００７２】

【表１】

【００７３】プリンを含むどの物質も正しい量が摂取されると、尿酸の濃度を高めることが
できる。なお、ヒポキサンチンは、副作用が最も少なく、おそらく最も効率的な
前駆物質であろう。また、尿酸の即時型前駆物質を殆んど連続的に供給する持効
性物質として用いることもできる。これらの望ましい範囲については、緑茶抽出
物と簡単に組み合わせることができる。

【００７４】このように、かなり詳細にわたって説明したが、そのシーケンスは解明のため
であって、限定するためではない。開示された技術の均等物を含み、当該分野の
人達の理解及び能力の範囲内でなし得る変形及び改良は、特許請求の範囲に含ま
れる。当該分野の専門家であれば、ここに説明した発明の概念から逸脱すること
なく、その説明の実施例に関して、種々の変形及び変更をなすことができるであ
ろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】遊離塩基プリンの尿酸への代謝分解を説明する図である。

【図２】パーオキシナイトライトとルミノールの酸化的反応と、尿酸によるその阻害を
示すグラフである。

【図３】尿酸の種々の分子量における質量スペクトルで、図３Ａは、図３の質量スペク
トルに対応する尿酸についてのフラグメント図である。

【図４】尿酸がパーオキシナイトライトで処理されたとき、アラントインの質量スペク
トルと、尿酸の酸化フラグメントを示している。

【図５】緑茶抽出物から分離された主なポリフェノールを示している。

【図６】シドノニミン種(sydnonimine congeners)の化学ルミネセンスを示すグラフで
ある。

【図７】パーオキシナイトライトを多数回注入したときのルミノール依存性化学ルミネ
センスを示している。

【図８】ＳＩＮ−１に対する緑茶抽出物の阻害効果を示している。

【図９】パーオキシナイトライトに対する緑茶抽出物の阻害効果を示している。

【図１０】ＳＩＮ−１に対する(−)エピカテキンの阻害効果を示している。

【図１１】パーオキシナイトライトに対するエピカテキンの阻害効果を示している。

【図１２】ＳＩＮ−１に対する(±)カテキンの阻害効果を示している。

【図１３】パーオキシナイトライトに対する(±)カテキンの阻害効果を示している。

【図１４】ＳＩＮ−１に対する(−)エピガロカテキンの阻害効果を示している。

【図１５】パーオキシナイトライトに対する(−)エピガロカテキンの阻害効果を示してい
る。

【図１６】ＳＩＮ−１に対する(−)エピカテキン・ギャレイトの阻害効果を示している。

【図１７】パーオキシナイトライトに対する(−)エピカテキン・ギャレイトの阻害効果を
示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/7052 Ａ６１Ｋ 31/7052 31/7105 31/7105 31/711 31/711 35/78 35/78 Ｃ 45/00 45/00 Ａ６１Ｐ 25/28 Ａ６１Ｐ 25/28 35/00 35/00 39/06 39/06 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA30 BA32 BA35 CA14 MA52 MA63 MA66 ZA01 ZA16 ZB21 ZB26 ZC31 4C086 AA01 AA02 AA03 CB07 EA16 GA06 MA52 MA57 MA63 MA66 ZA01 ZA16 ZB21 ZB26 ZC31 4C088 AB45 AC05 BA06 MA52 MA57 MA63 MA66 ZA01 ZA16 ZB21 ZB26 ZC31

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】尿酸の前駆物質を治療に有効な濃度で含んでいる組成物。
【請求項２】緑茶の抽出物を含んでいる請求項１の組成物。
【請求項３】尿酸の前駆物質は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチド
、ＲＮＡのヌクレオチド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡの
遊離塩基、ヒポキサンチン及びキサンチンからなる群から選択される請求項１の
組成物。
【請求項４】尿酸の前駆物質はヒポキサンチンである請求項３の組成物。
【請求項５】ヒポキサンチンの有効濃度は、約１００ｍｇ/日乃至約２５
ｇ/日の範囲である請求項４の組成物。
【請求項６】ヒポキサンチンの有効濃度は、約２ｇ/日乃至約１０ｇ/日の
範囲である請求項４の組成物。
【請求項７】一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステイン形成の阻
害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤及びこれらの一種又は二種以上の任意の組合せか
らなる群から選択される生物活性剤を、治療に有効な濃度で含んでいる請求項１
の組成物。
【請求項８】尿酸の前駆物質と、該尿酸前駆物質とは異なる生物活性剤と
を含んでいる組成物。
【請求項９】尿酸の前駆物質は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチド
、ＲＮＡのヌクレオチド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡの
遊離塩基、ヒポキサンチン及びキサンチンからなる群から選択される請求項８の
組成物。
【請求項１０】尿酸の前駆物質は、ヒポキサンチンである請求項１０の組
成物。
【請求項１１】生物活性剤は、緑茶抽出物の一次抗酸化物質、二次抗酸化
物質、ホモシステイン形成の阻害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤、並びに、前記の
一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシステインの阻害剤、ＮＯシンターゼの
阻害剤の中の二種以上の組合せからなる群から選択される請求項９の組成物。
【請求項１２】二次抗酸化物質は、ビタミンＣ及びビタミンＥからなる群
から選択される請求項１２の組成物。
【請求項１３】ホモシステイン形成の阻害剤は、ビタミンＢ₆及び葉酸か
らなる群から選択される請求項１１の組成物。
【請求項１４】尿酸の前駆物質を含む治療用組成物を投与することにより
、疾患状態を処理する方法。
【請求項１５】尿酸の前駆物質は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡのヌクレオチ
ド、ＲＮＡのヌクレオチド、ＤＮＡのヌクレオシド、ＤＮＡの遊離塩基、ＲＮＡ
の遊離塩基及びキサンチンからなる群から選択される請求項１４の方法。
【請求項１６】尿酸の前駆物質は、ヒポキサンチンである請求項１４の方
法。
【請求項１７】生物活性剤は、一次抗酸化物質、二次抗酸化物質、ホモシ
ステイン形成の阻害剤、ＮＯシンターゼの阻害剤、前記の一次抗酸化物質、二次
抗酸化物質、ホモシステインの阻害剤及びＮＯシンターゼの阻害剤の中の二種以
上の組合せ、並びに、これらの一種又は二種以上の組合せからなる群から選択さ
れる請求項１４の方法。
【請求項１８】疾患状態は、アルツハイマー病、神経変性疾患、酸化的損
傷及び癌からなる群から選択される請求項１４の方法。
【請求項１９】尿酸の前駆物質及び生物活性剤は、同時に投与される請求
項１４の方法。
【請求項２０】尿酸の前駆物質及び生物活性剤は、逐次的に投与される請
求項１４の方法。
【請求項２１】尿酸の前駆物質及び生物活性剤は、投与前に混合される請
求項１４の方法。
【請求項２２】尿酸の前駆物質及び生物活性剤は、経口、舌下、経皮、静
脈又は局部の何れかの投与ルートにて投与される請求項１４の方法。