JPS59134733A - 生物活性物質の製法 - Google Patents
生物活性物質の製法Info
- Publication number
- JPS59134733A JPS59134733A JP58008797A JP879783A JPS59134733A JP S59134733 A JPS59134733 A JP S59134733A JP 58008797 A JP58008797 A JP 58008797A JP 879783 A JP879783 A JP 879783A JP S59134733 A JPS59134733 A JP S59134733A
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- JP
- Japan
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- peptone
- plasminogen activator
- cells
- animal meat
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、動物に由来する細胞を利用して、高収率でプ
ラスミノーゲン活性化因子を製造する方法に関するもの
である。
ラスミノーゲン活性化因子を製造する方法に関するもの
である。
プラスミノーゲン活性化因子としては今日、尿または培
養腎細胞から分離精製されたウロキナーゼ、およびスト
レブトコツキよシ採取されるストレプトキナーゼが血栓
溶解剤として実用に供されている。
養腎細胞から分離精製されたウロキナーゼ、およびスト
レブトコツキよシ採取されるストレプトキナーゼが血栓
溶解剤として実用に供されている。
しかし、これらはフィブリンに対する親和性の 、点で
劣るので、治療に際し必要な効果を得るには大量に投与
する場合が多く、内出血等の副作用が発現することが知
られている。かかる実情から、少量でかつ血栓溶解活性
が高く、副作用の少ない血栓溶解剤が望まれている。
劣るので、治療に際し必要な効果を得るには大量に投与
する場合が多く、内出血等の副作用が発現することが知
られている。かかる実情から、少量でかつ血栓溶解活性
が高く、副作用の少ない血栓溶解剤が望まれている。
一方、本発明者らの一人は、人の正常組織由来細胞の組
織培養液中に、下記の性質を有する新プラスミノーゲン
活性化因子を特徴とする特許出願した（特願昭５７−１
５５６３３号）。
織培養液中に、下記の性質を有する新プラスミノーゲン
活性化因子を特徴とする特許出願した（特願昭５７−１
５５６３３号）。
ａ）分子量： ５ｏｏｏｏ〜８００００ｂ）等電点ニア
、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あシ ｄ）コンカナバリンＡに対するｖＡ和性：あシｅ）至適
ｐＨ： ７〜９．５ ｆ）安置性：６ｏ℃、１０時間で失活セス、Ｉ）Ｈ２〜
３．９８℃、１分で約５チ失活 この新プラスミノーゲン活性化因子は、フィブリン親和
性が高く、少量で効果を有する特徴を持っている（以下
、オ「プラヌミノーゲン活性化因子と呼ぶ）。
、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あシ ｄ）コンカナバリンＡに対するｖＡ和性：あシｅ）至適
ｐＨ： ７〜９．５ ｆ）安置性：６ｏ℃、１０時間で失活セス、Ｉ）Ｈ２〜
３．９８℃、１分で約５チ失活 この新プラスミノーゲン活性化因子は、フィブリン親和
性が高く、少量で効果を有する特徴を持っている（以下
、オ「プラヌミノーゲン活性化因子と呼ぶ）。
本発明者らは、新プラスミノーゲン活性化因子を効率的
に製造する方法について鋭意研究を重ねた結果、ヒトに
由来する二倍体細胞と接触して新プラスミノーゲン活性
化因子を生成せしめる溶液に、多量の動物肉酵素分解ペ
プトンを存在させることによって、該因子の生成量が飛
躍的に増加することを見出し、この知見に基づいて本発
明をなすに至った。
に製造する方法について鋭意研究を重ねた結果、ヒトに
由来する二倍体細胞と接触して新プラスミノーゲン活性
化因子を生成せしめる溶液に、多量の動物肉酵素分解ペ
プトンを存在させることによって、該因子の生成量が飛
躍的に増加することを見出し、この知見に基づいて本発
明をなすに至った。
本発明は、ヒトに由来する正常二倍体細胞であって新プ
ラスミノーゲン活性化因子を生成する能カケ有する細胞
を、ＪｌないしｊＯ％ （ｗｔ／ｖ ）の動物肉酵素分
解ペプトン全含有する溶液と接触させることを特徴とす
る新プラスミノーゲン活性化因子の製造方法である。
ラスミノーゲン活性化因子を生成する能カケ有する細胞
を、ＪｌないしｊＯ％ （ｗｔ／ｖ ）の動物肉酵素分
解ペプトン全含有する溶液と接触させることを特徴とす
る新プラスミノーゲン活性化因子の製造方法である。
本発明で用いられる細胞は、ヒトに由来する正常二倍体
細胞であって、新プラスミノーゲン活性化因子全生成す
る能力を有する細胞が対象となる。
細胞であって、新プラスミノーゲン活性化因子全生成す
る能力を有する細胞が対象となる。
このようなものとしては、たとえば、ヒトの腎、腸、肺
、心臓、輸尿管、皮膚、包皮、舌、甲状腺、胎盤、子宮
由来の細胞および全胎児由来の細胞をあげることができ
る。ここでヒト由来の細胞とは、胎児および新生児由来
の細胞を含む。
、心臓、輸尿管、皮膚、包皮、舌、甲状腺、胎盤、子宮
由来の細胞および全胎児由来の細胞をあげることができ
る。ここでヒト由来の細胞とは、胎児および新生児由来
の細胞を含む。
これらの細胞は通常の細胞の培養に用いられる培養方法
、たとえば「組織培養」 （中井準之助他編集昭和５１
年刊朝倉書店）記載の方法で増殖させた後、本発明に供
することが好ましい。
、たとえば「組織培養」 （中井準之助他編集昭和５１
年刊朝倉書店）記載の方法で増殖させた後、本発明に供
することが好ましい。
細胞は炭素類、屋索源および必要な場合は、無機塩類ま
たは／およびその他の添加物を含む溶液と接触させるこ
とによって、新プラスミノーゲン活性化因子を生産せし
めることができる。さらに本発明の方法にしたがって、
動物肉酵素分解ペプトンを添加することにょシ、新プラ
スミノーゲン活性化因子の生成量を飛躍的に向上させる
ことができる。
たは／およびその他の添加物を含む溶液と接触させるこ
とによって、新プラスミノーゲン活性化因子を生産せし
めることができる。さらに本発明の方法にしたがって、
動物肉酵素分解ペプトンを添加することにょシ、新プラ
スミノーゲン活性化因子の生成量を飛躍的に向上させる
ことができる。
本発明において用いられる動物肉酵素分解ペプトンは、
一般に細菌の培養培地に用いられるものであり、通常プ
ロテオースベプトン、プロテオーゼベプトン、獣肉ペプ
トンと呼ばれるものである。
一般に細菌の培養培地に用いられるものであり、通常プ
ロテオースベプトン、プロテオーゼベプトン、獣肉ペプ
トンと呼ばれるものである。
この動物肉酵素分解ペプトンの調製法は公知であり、た
とえば「細菌培地学講座第二集」 （坂崎利−著、納谷
書店、１９６７年刊）記載の方法にしたがえばよい。す
なわち、動物肉としては、牛、豚、ニット１ハ羊、クジ
ラなどの肉または内臓が用いられるが、このうち牛肉が
最もふつうに用いられる。分解用の酵素としては、トリ
プシン、パパイン、ペプシン、パンクレアチンナトがあ
る。
とえば「細菌培地学講座第二集」 （坂崎利−著、納谷
書店、１９６７年刊）記載の方法にしたがえばよい。す
なわち、動物肉としては、牛、豚、ニット１ハ羊、クジ
ラなどの肉または内臓が用いられるが、このうち牛肉が
最もふつうに用いられる。分解用の酵素としては、トリ
プシン、パパイン、ペプシン、パンクレアチンナトがあ
る。
これらの動物肉は絹挫され、水と混合され、炭酸ナトリ
ウム、濃塩酸などで酵素分解に適したｐＨに調整される
。これに酵素を加え、２０〜４０℃で１〜２０日間、通
常は３７℃で２〜３日間酵素分解を行なう。消化後は分
解酵素を不活性化するためと、未消化のタンパクを熱凝
固させるために１００℃以上に加熱し、濾過によってこ
れを除去したのち、濃縮、乾燥、細末化する。ａ縮（乾
燥の方法には、煮つめて粉末にするのと、真空装置を用
いて低温で濃縮後細末化するのがある。市販品としては
ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社のプロテオースヘプトン（Ｐ
ｒｏｔｅｏｓｅ Ｐｅｐｔｏｎｅ ）、プロテオ−／（
ペプトンＡ ２．７’ロテオースベフトンＡ３、チオペ
プトン（Ｔｈ１ｏｐｅｐｔｏｎｅ ） 、オキソイド（
０ｘｏｉｄ ）社 −のグロテオースペプトンＬ４６、
ペプトンＰＬ４６、ＢＢＬ社のチオトン（Ｔｈ五□ｔｏ
ｎｅ ） 、太五栄養化学社のプロテオースベプトンな
どがある。
ウム、濃塩酸などで酵素分解に適したｐＨに調整される
。これに酵素を加え、２０〜４０℃で１〜２０日間、通
常は３７℃で２〜３日間酵素分解を行なう。消化後は分
解酵素を不活性化するためと、未消化のタンパクを熱凝
固させるために１００℃以上に加熱し、濾過によってこ
れを除去したのち、濃縮、乾燥、細末化する。ａ縮（乾
燥の方法には、煮つめて粉末にするのと、真空装置を用
いて低温で濃縮後細末化するのがある。市販品としては
ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社のプロテオースヘプトン（Ｐ
ｒｏｔｅｏｓｅ Ｐｅｐｔｏｎｅ ）、プロテオ−／（
ペプトンＡ ２．７’ロテオースベフトンＡ３、チオペ
プトン（Ｔｈ１ｏｐｅｐｔｏｎｅ ） 、オキソイド（
０ｘｏｉｄ ）社 −のグロテオースペプトンＬ４６、
ペプトンＰＬ４６、ＢＢＬ社のチオトン（Ｔｈ五□ｔｏ
ｎｅ ） 、太五栄養化学社のプロテオースベプトンな
どがある。
該因子の生産は１５℃ないし４５℃、好ましく１４２５
℃ないし４０℃の範囲で行なわれる。生産のｐＨは５な
いし９、好−？しくＶｉ６ないし８に調節される。生産
の日数は通常４日ないし３０日であるが、３０日を超え
ることも可能である。該因子の生産速度は、生産の後半
では次第に遅くなるので、工業的生産の場合は最も効率
の良い日数が選ばれる。
℃ないし４０℃の範囲で行なわれる。生産のｐＨは５な
いし９、好−？しくＶｉ６ないし８に調節される。生産
の日数は通常４日ないし３０日であるが、３０日を超え
ることも可能である。該因子の生産速度は、生産の後半
では次第に遅くなるので、工業的生産の場合は最も効率
の良い日数が選ばれる。
新プラスミノーゲン活性化因子は、前記の条件下で細胞
から溶液中に放出される。その生成量の測定は、次の方
法で行なった。
から溶液中に放出される。その生成量の測定は、次の方
法で行なった。
９５係凝固フイブリノーゲン（プラスミノーゲン含量約
５０カゼイン単位／７凝固蛋白）全原料として作製した
寒天加フィブリン平板を用い、ウロキナーゼを標準品と
するプレート法で測定した。
５０カゼイン単位／７凝固蛋白）全原料として作製した
寒天加フィブリン平板を用い、ウロキナーゼを標準品と
するプレート法で測定した。
該因子の溶ｉ’ｔ−１１％ゼラチン、Ｏ，１Ｍ塩化ナト
リウムおよび０．１％ｕ化ナトリウム全含む０．０６７
Ｍ ） ＩＪス塩酸緩衝液（ｐＨ８；０ ）で希釈し、
フィブリン平板上で１ｏｉＵ／−のウロキナーゼと同じ
溶解窓を示す該因子溶液の＃度を１ｏｕ／ｒｎｌとした
。ウロキ“ナーゼが混入する溶液全測定する場合には、
ウサギより得た抗ウロキナーゼＩｇＧを１００μ７／−
になるように被験溶液に添加して測定した所望の生成量
−または日数に達した時に、溶液全採集して該因子を回
収する。
リウムおよび０．１％ｕ化ナトリウム全含む０．０６７
Ｍ ） ＩＪス塩酸緩衝液（ｐＨ８；０ ）で希釈し、
フィブリン平板上で１ｏｉＵ／−のウロキナーゼと同じ
溶解窓を示す該因子溶液の＃度を１ｏｕ／ｒｎｌとした
。ウロキ“ナーゼが混入する溶液全測定する場合には、
ウサギより得た抗ウロキナーゼＩｇＧを１００μ７／−
になるように被験溶液に添加して測定した所望の生成量
−または日数に達した時に、溶液全採集して該因子を回
収する。
新プラスミノーゲン活性化因子の回収は、蛋白質の回収
方法として通常用いられる吸着法、塩析法、透析法、ク
ロマトグラフィー法、ゲル濾過法などを単独であるいは
組合せて適用すればよい。
方法として通常用いられる吸着法、塩析法、透析法、ク
ロマトグラフィー法、ゲル濾過法などを単独であるいは
組合せて適用すればよい。
そのような例としては、ハイドロキシアパタイト、硫酸
バリウム等を用いる吸着法、硫酸アンモニウム、塩化ナ
トリウム、硫酸ナトリウム、塩化アンモニウム等による
塩析法、ジエチルアミンエチルセルロース・等によるク
ロマトグラフィー法、アクリルアミドゲル、修飾デキス
トランケル等によるゲル濾過法などを挙げることができ
る。
バリウム等を用いる吸着法、硫酸アンモニウム、塩化ナ
トリウム、硫酸ナトリウム、塩化アンモニウム等による
塩析法、ジエチルアミンエチルセルロース・等によるク
ロマトグラフィー法、アクリルアミドゲル、修飾デキス
トランケル等によるゲル濾過法などを挙げることができ
る。
新プラスミノーゲン活性化因子の具体的な分離精製方法
の一例を挙げれば、組織培養液あるいは濃縮した培養欣
に硫酸アンモニウム金加えて生ずる沈澱を分取し、塩化
ナトリウム金加えたロダンアンモニウム溶液に溶解させ
、抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し、
フィブリンセファロースカラムに吸着させる。これをア
ルギニンを溶出溶媒として用いて得られる溶出液を、さ
らに抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し
た後、凍結乾燥処理し濃縮する。
の一例を挙げれば、組織培養液あるいは濃縮した培養欣
に硫酸アンモニウム金加えて生ずる沈澱を分取し、塩化
ナトリウム金加えたロダンアンモニウム溶液に溶解させ
、抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し、
フィブリンセファロースカラムに吸着させる。これをア
ルギニンを溶出溶媒として用いて得られる溶出液を、さ
らに抗つロキナーゼＩｇ−Ｇセファロースカラムに通し
た後、凍結乾燥処理し濃縮する。
濃縮液をセファデックスＱ−１５０（ファルマシア社登
録商標）を用いゲル濾過することにより、目的のプラス
ミノーゲン活性化因子が得られる。
録商標）を用いゲル濾過することにより、目的のプラス
ミノーゲン活性化因子が得られる。
本物質はプラスミノーゲンを含まないフィブリンは溶解
せず、プラスミノーゲンを含むフィブリン平板上するこ
とから、ブラスーミノーゲン活性化因子であることは明
らかである。
せず、プラスミノーゲンを含むフィブリン平板上するこ
とから、ブラスーミノーゲン活性化因子であることは明
らかである。
かくして得られる本発明のプラスミノーゲン活性化因子
の物理化学的性質は、特願昭５７−１３３６３３号記載
の方法で測定することができ、その性質は先に述べた通
りである。
の物理化学的性質は、特願昭５７−１３３６３３号記載
の方法で測定することができ、その性質は先に述べた通
りである。
かくして得られた新プラスミノーゲン活性化因子の用途
としては、血栓溶解剤としての医薬用途以外に、たとえ
ば、人工血管、人工臓器等の材料に結合させ、血栓の形
成を防止する薬剤として、あるいは血栓症等の診断薬と
しての用途があげられる。
としては、血栓溶解剤としての医薬用途以外に、たとえ
ば、人工血管、人工臓器等の材料に結合させ、血栓の形
成を防止する薬剤として、あるいは血栓症等の診断薬と
しての用途があげられる。
本発明の方法は、従来、プラスミノーゲン活性因子の最
も有力な製造法の欠点であった尿中の該因子の濃度が低
いこと、健康な者の品質の安定した尿を大量に集めるこ
とが難かしいこと、取扱い上で衛生上の問題があること
等の難点が除かれ、品質の安定した濃度の高い原料液を
大量に安定供給することができ、工業的なプラスミノー
ゲン活性化因子の製造方法として好適である。
も有力な製造法の欠点であった尿中の該因子の濃度が低
いこと、健康な者の品質の安定した尿を大量に集めるこ
とが難かしいこと、取扱い上で衛生上の問題があること
等の難点が除かれ、品質の安定した濃度の高い原料液を
大量に安定供給することができ、工業的なプラスミノー
ゲン活性化因子の製造方法として好適である。
次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
よく細挫した牛肉ｓ ｏ ｏ ｒ２精製水１０００ｔｄ
中に入れ、濃塩酸１２．５ｍＡを加えたのち、ペプシン
６グを刃口えて３７℃で２日間、ときどき振りながら消
化した。この消化液を１００℃に５分間加熱し、濾過後
、水酸化ナトリウムを用いてｐＨｋはぼ中性とした。こ
の液を４５℃に保ちながらロータリーエバポレーターで
ａｍ１乾燥して、淡黄かつ色の牛肉ペプシン分解ペプト
ンｔ３０ｆ”ｋ得た。
中に入れ、濃塩酸１２．５ｍＡを加えたのち、ペプシン
６グを刃口えて３７℃で２日間、ときどき振りながら消
化した。この消化液を１００℃に５分間加熱し、濾過後
、水酸化ナトリウムを用いてｐＨｋはぼ中性とした。こ
の液を４５℃に保ちながらロータリーエバポレーターで
ａｍ１乾燥して、淡黄かつ色の牛肉ペプシン分解ペプト
ンｔ３０ｆ”ｋ得た。
次に、ヒト胎児肺出来の正常二倍体細胞（フロー・ラボ
ラトリ−社）に対する牛肉ペプシン分解ペプトンの新プ
ラスミノーゲン活性化因子生成促進効果について調べた
。直径１００１１７１Ａのプラヌチツクシャーレ（ファ
ルコン社）の中で十分生育したヒト胎児肺細胞”Ｋ、表
１に示す組成の溶液を与え、５％の炭酸ガス金倉む空気
中で３７℃に保持し、溶液の新プラスミノーゲン活性化
因子を測定した。その結果を表２に、牛肉ペプシン分解
ペプトンを含まない対照試験と共に示した。牛肉ペプシ
ン分解ペプトンを含有する場合は、無添加に比べ生成量
が著しく向上した。
ラトリ−社）に対する牛肉ペプシン分解ペプトンの新プ
ラスミノーゲン活性化因子生成促進効果について調べた
。直径１００１１７１Ａのプラヌチツクシャーレ（ファ
ルコン社）の中で十分生育したヒト胎児肺細胞”Ｋ、表
１に示す組成の溶液を与え、５％の炭酸ガス金倉む空気
中で３７℃に保持し、溶液の新プラスミノーゲン活性化
因子を測定した。その結果を表２に、牛肉ペプシン分解
ペプトンを含まない対照試験と共に示した。牛肉ペプシ
ン分解ペプトンを含有する場合は、無添加に比べ生成量
が著しく向上した。
表 １
アミノ酸 ｍ９／ＬＬ−アルギニン
塩酸塩 ２１．ＩＬ−シスチン
１２．ＯＬ−グルタミン
２９２０Ｌ−ヒスチジン塩酸・１水塩 １０
．５Ｌ−イソロイシン ２６．２Ｌ−
ロイシン ２６．２Ｌ−リジン塩
酸塩 ３６．５Ｌ−メチオニン
７．５Ｌ−フェニルアラニン
１６．５Ｉｎ９／ Ｌ Ｌ−スレオニン ２５．８Ｌ −ト リ
フニ ト フ ァ ン
４．０Ｌ−チロシン １８．１Ｌ−バリ
ン ２３．４ Ｌ−セリン ３０．２ビタミン Ｄ−ビオチン １．ＯＤ −Ｃａ−
パントテン酸 １．０址化コリン
１．Ｑ葉 酸
１゜ｌ−イゾシトーール １，８ニコ
チンアミド １．Ｑピリドキサール塩酸
塩 １．Ｑリボフラミン
０．１チアミン塩酸塩 １．０その他 ＮａＣ７８００００ ＫＣｊ ４００ ＯＮａ、ＨＰＯ４
・２Ｈ，０６０，０ Ｋ）ｆ２ＰＯ，−６０，０ Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２０１０００ ＣａＣｌ、 （無水） １４
００グルコース １００１００Ｏ０／、
・６Ｈ２０１０００ ＮａＨＣ０，３５００ 表 ２ 実施例２ 十分生育したヒト胎児包皮由来の正常二倍体細胞（フロ
ー・ラボラトリ−社）に、牛肉ペプシン分解ペプトンを
種々濃度添加した表３に示す栄養液を与え、５％の炭酸
ガスを含む空気中で３７℃に７日間保持した。栄養液中
の新プラスミノーゲン活性化因子を測定した結果を図面
に示す。ペプトン含量１．０ないし４．０俤の範囲で者
しい生成量の増加が見られた。
塩酸塩 ２１．ＩＬ−シスチン
１２．ＯＬ−グルタミン
２９２０Ｌ−ヒスチジン塩酸・１水塩 １０
．５Ｌ−イソロイシン ２６．２Ｌ−
ロイシン ２６．２Ｌ−リジン塩
酸塩 ３６．５Ｌ−メチオニン
７．５Ｌ−フェニルアラニン
１６．５Ｉｎ９／ Ｌ Ｌ−スレオニン ２５．８Ｌ −ト リ
フニ ト フ ァ ン
４．０Ｌ−チロシン １８．１Ｌ−バリ
ン ２３．４ Ｌ−セリン ３０．２ビタミン Ｄ−ビオチン １．ＯＤ −Ｃａ−
パントテン酸 １．０址化コリン
１．Ｑ葉 酸
１゜ｌ−イゾシトーール １，８ニコ
チンアミド １．Ｑピリドキサール塩酸
塩 １．Ｑリボフラミン
０．１チアミン塩酸塩 １．０その他 ＮａＣ７８００００ ＫＣｊ ４００ ＯＮａ、ＨＰＯ４
・２Ｈ，０６０，０ Ｋ）ｆ２ＰＯ，−６０，０ Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２０１０００ ＣａＣｌ、 （無水） １４
００グルコース １００１００Ｏ０／、
・６Ｈ２０１０００ ＮａＨＣ０，３５００ 表 ２ 実施例２ 十分生育したヒト胎児包皮由来の正常二倍体細胞（フロ
ー・ラボラトリ−社）に、牛肉ペプシン分解ペプトンを
種々濃度添加した表３に示す栄養液を与え、５％の炭酸
ガスを含む空気中で３７℃に７日間保持した。栄養液中
の新プラスミノーゲン活性化因子を測定した結果を図面
に示す。ペプトン含量１．０ないし４．０俤の範囲で者
しい生成量の増加が見られた。
表 ３
アミノ酸 〜／Ｌ
Ｌ−アラニン ２５．ＯＬ−アルギニ
ン塩酸塩 ７０．ＯＬ−アスパラギン酸
３０．ＯＬ−システィン塩酸塩
０．ＡＬ−シスチン ２０．ＯＬ
−グルタミン酸 ６７、ＯＬ−グルタミ
ン １０００Ｌ−グリシン
５０．ＯＬ−ヒスチジン塩酸・１水塩
２２．。
ン塩酸塩 ７０．ＯＬ−アスパラギン酸
３０．ＯＬ−システィン塩酸塩
０．ＡＬ−シスチン ２０．ＯＬ
−グルタミン酸 ６７、ＯＬ−グルタミ
ン １０００Ｌ−グリシン
５０．ＯＬ−ヒスチジン塩酸・１水塩
２２．。
Ｌ−ヒドロキシグロリン １（１ＯＬ−インロ
イシン ２０．０Ｌ−ロイシン
６０．ＯＬ−リジン塩酸塩
７０．ＯＬ−メチオニン １５．Ｏ
Ｌ−フェニルアラニン ２５．ＯＬ−プロリ
ン ４０．０Ｌ−）リプトファン
１０．ＯＬ−チロシン
４０．ＯＬ−バリン ２５．ＯＬ
−スレオニン ３０．ＯＬ−セリン
２５．０ビタミン
Ｉｎ９／Ｌｐ−アミノ安息香酸 ００５
０アスコルビン酸 ００５０Ｄｃ７ビオ
チン ００１０カルシフエロール
０１００Ｄ −Ｃａ−パントテン酸
００１０コレステロール ０２００塩
化コリン ０５００葉 酸
００１０１−イノシトー
ル ００５０メナジオン
００１０ニコチンアミド ００２５
ニコチン酸 ０．０２５ピリドキ
サール塩酸塩 ００２５ピリドキシン塩酸塩
００２５リボフラビン ０
０１０チアミン塩酸塩 ００１０ＤＬ−
α−トコフェロール燐酸（Ｎａ２） ０’、０
１ ０ツウイン８０ ５，０００ビタ
ミンＡ ０１００その他
Ｉｎｇ／Ｌアデニン塩酸・２水塩
１２１０ＡＭＰ
０２０ＡＴ、Ｐ １００
デオキシリボース ０．５０デキユ
ト。−、、１０００００ Ｌ−グルタチオン ０２０５グアニン
塩酸・１水塩 ０．３３ハイホキサンチン
０．３０リボース
０．５０酢酸す）リウム・５水塩
８５００チミン ０．５０
ウラシル ０．３０キサン
チン ０．５０Ｆｅ（ＮＯｘ）
、 −９Ｈ，Ｏｏ、７゜ＮａＣ１８０００，ＤＯ ＫＣｌ ４００，０ ＯＮ
ａ、ＨＰＯ，・２Ｈ，０６０００ 皿、Ｐｏ、 ６０００Ｍｇ
５Ｏ，・７Ｈ２０１０Ｑ Ｏ０ Ｃａ（／！、（無水） １４０００
ＭｇＣ！４・６Ｈ，０１００００ ＮａＨＣＯ８３５０，００ 実施例３ 本実施例では、種類の異なる動物肉酵素分解ペプトンの
ヒト胎児肺由米正常二倍体細胞筐たはヒト胎児包皮由来
正常二倍体細胞に対する新プラスミノーゲン活性化因子
生成促進効果について調べた。
イシン ２０．０Ｌ−ロイシン
６０．ＯＬ−リジン塩酸塩
７０．ＯＬ−メチオニン １５．Ｏ
Ｌ−フェニルアラニン ２５．ＯＬ−プロリ
ン ４０．０Ｌ−）リプトファン
１０．ＯＬ−チロシン
４０．ＯＬ−バリン ２５．ＯＬ
−スレオニン ３０．ＯＬ−セリン
２５．０ビタミン
Ｉｎ９／Ｌｐ−アミノ安息香酸 ００５
０アスコルビン酸 ００５０Ｄｃ７ビオ
チン ００１０カルシフエロール
０１００Ｄ −Ｃａ−パントテン酸
００１０コレステロール ０２００塩
化コリン ０５００葉 酸
００１０１−イノシトー
ル ００５０メナジオン
００１０ニコチンアミド ００２５
ニコチン酸 ０．０２５ピリドキ
サール塩酸塩 ００２５ピリドキシン塩酸塩
００２５リボフラビン ０
０１０チアミン塩酸塩 ００１０ＤＬ−
α−トコフェロール燐酸（Ｎａ２） ０’、０
１ ０ツウイン８０ ５，０００ビタ
ミンＡ ０１００その他
Ｉｎｇ／Ｌアデニン塩酸・２水塩
１２１０ＡＭＰ
０２０ＡＴ、Ｐ １００
デオキシリボース ０．５０デキユ
ト。−、、１０００００ Ｌ−グルタチオン ０２０５グアニン
塩酸・１水塩 ０．３３ハイホキサンチン
０．３０リボース
０．５０酢酸す）リウム・５水塩
８５００チミン ０．５０
ウラシル ０．３０キサン
チン ０．５０Ｆｅ（ＮＯｘ）
、 −９Ｈ，Ｏｏ、７゜ＮａＣ１８０００，ＤＯ ＫＣｌ ４００，０ ＯＮ
ａ、ＨＰＯ，・２Ｈ，０６０００ 皿、Ｐｏ、 ６０００Ｍｇ
５Ｏ，・７Ｈ２０１０Ｑ Ｏ０ Ｃａ（／！、（無水） １４０００
ＭｇＣ！４・６Ｈ，０１００００ ＮａＨＣＯ８３５０，００ 実施例３ 本実施例では、種類の異なる動物肉酵素分解ペプトンの
ヒト胎児肺由米正常二倍体細胞筐たはヒト胎児包皮由来
正常二倍体細胞に対する新プラスミノーゲン活性化因子
生成促進効果について調べた。
クジラ肉ペプンン分解ペプトンは実施例１と同様の方法
で、５ａａｙのクジラ肉から８４２の同ペプトンを作製
しｆｃ。
で、５ａａｙのクジラ肉から８４２の同ペプトンを作製
しｆｃ。
牛肉パンクレアチン分解ペプトンは、細挫した牛肉５０
０７を精製水１００〇−中に入れ、炭酸ナトリウムでｐ
Ｈヲ約８としたのち、パンクレアチン１５２を加えて５
７℃で２日間消化して作製した。消化後の処理は実施例
１と同じ方法で、同ペプトン１１０２を得た。
０７を精製水１００〇−中に入れ、炭酸ナトリウムでｐ
Ｈヲ約８としたのち、パンクレアチン１５２を加えて５
７℃で２日間消化して作製した。消化後の処理は実施例
１と同じ方法で、同ペプトン１１０２を得た。
市販の動物肉酵素分解ペプトンであるプロテオースペプ
トンおよびラクトアルブミン加水分解物は、ディフコ社
より購入した。
トンおよびラクトアルブミン加水分解物は、ディフコ社
より購入した。
これらのペプトンをそれぞれ１％（ｗｔ／ｖ）含有する
表３に示す組成の培地を準備した。
表３に示す組成の培地を準備した。
ヒト胎児肺細胞まｆｃＩ′ｉヒト胎児包皮細胞を直径１
００＊ｉのプラスチックシャーレ（ファルコン社）中で
十分増殖させた後、上記培地におきかえ、５チの炭酸ガ
スを含む空気中で３７℃に１０日間保持し、新プラスミ
ノーゲン活性化因子生成量を測定し、結果を表４に示し
た。
００＊ｉのプラスチックシャーレ（ファルコン社）中で
十分増殖させた後、上記培地におきかえ、５チの炭酸ガ
スを含む空気中で３７℃に１０日間保持し、新プラスミ
ノーゲン活性化因子生成量を測定し、結果を表４に示し
た。
動物肉を原料としないタンパク分解物であるラクトアル
ブミン加水分解物（ディフコ社）でも新プラスミノーゲ
ン活性化因子生成促進効果は見られたが、動物肉を原料
とするペプトン類は、これをさらに上回る著し、い効果
が見られた。
ブミン加水分解物（ディフコ社）でも新プラスミノーゲ
ン活性化因子生成促進効果は見られたが、動物肉を原料
とするペプトン類は、これをさらに上回る著し、い効果
が見られた。
表 ４
実施例４
本実施例では、種類の異なる細胞に対する牛肉バンクレ
アチン分解ペプトンの新プラスミノーゲン活性化因子生
成促進効果について述べる。
アチン分解ペプトンの新プラスミノーゲン活性化因子生
成促進効果について述べる。
方法は槓々の細胞ｆ（１００ｍＭプラスチックシャーレ
で十分増殖させた後、表１に示した組成の栄養液、また
はこれに１％ラクトアルブミン加水分解物あるいは１％
牛肉バンクレアチン分解ペプトンを添加した栄養液にお
きかえ、５チ炭酸ガスを含む空気中で、３７℃で７日間
保持した。栄養液中のプラスミノーゲン活性化因子を測
定した結果を表５に示す。
で十分増殖させた後、表１に示した組成の栄養液、また
はこれに１％ラクトアルブミン加水分解物あるいは１％
牛肉バンクレアチン分解ペプトンを添加した栄養液にお
きかえ、５チ炭酸ガスを含む空気中で、３７℃で７日間
保持した。栄養液中のプラスミノーゲン活性化因子を測
定した結果を表５に示す。
いずれの細胞においても著しい生成量の増加が見られる
。
。
表 ５
図面は実施例２において栄養液中の新プラスノーゲン活
性化因子を測定した結果を示すグラである。 ）
性化因子を測定した結果を示すグラである。 ）
Claims (3)
- （１） ヒトに由来する正常二倍体細胞であって、下
記の性質を有するプラスミノーゲン活性化因子を生成す
る能力を有す−る細胞を、動物肉酵素分解ペプトンを含
有する溶液と接触させること’ｔ％徴とする該プラスミ
ノーゲン活性化因子の製造法。 ａ ） 分子址：５００００〜８００００ｂ）等電点ニ
ア、０〜８．５ Ｃ）フィブリンに対する親和性：あり ｄ）コンカナバリンＡに対する親和性：ありｅ）至適ｐ
Ｈ： ７〜９．５ ｆ）安定性＝６０℃、１０時間で失活せず、ｐＨ２〜３
．９８℃、１分間で約５％失活 - （２）動物肉酵素分解ペプトンを含有する溶液の該ペプ
トン濃度が０．１〜４チ（ｗｔ／ｖ）である特許請求の
範囲第１項記載の製造法。 - （３） 正常二倍体細胞がヒト由来の肺細胞普たは包
皮細胞である特許請求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58008797A JPS59134733A (ja) | 1983-01-24 | 1983-01-24 | 生物活性物質の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58008797A JPS59134733A (ja) | 1983-01-24 | 1983-01-24 | 生物活性物質の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59134733A true JPS59134733A (ja) | 1984-08-02 |
| JPH0143549B2 JPH0143549B2 (ja) | 1989-09-21 |
Family
ID=11702852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58008797A Granted JPS59134733A (ja) | 1983-01-24 | 1983-01-24 | 生物活性物質の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59134733A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60259187A (ja) * | 1984-04-19 | 1985-12-21 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法 |
-
1983
- 1983-01-24 JP JP58008797A patent/JPS59134733A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60259187A (ja) * | 1984-04-19 | 1985-12-21 | マイルス・ラボラトリ−ス・インコ−ポレ−テツド | プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法 |
| JPH0358270B2 (ja) * | 1984-04-19 | 1991-09-04 | Miles Inc |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0143549B2 (ja) | 1989-09-21 |
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