JPS5867182A - 培養方法及び培地 - Google Patents
培養方法及び培地Info
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- JPS5867182A JPS5867182A JP16347781A JP16347781A JPS5867182A JP S5867182 A JPS5867182 A JP S5867182A JP 16347781 A JP16347781 A JP 16347781A JP 16347781 A JP16347781 A JP 16347781A JP S5867182 A JPS5867182 A JP S5867182A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- cyclodextrin
- culture
- bordetella
- derivative
- Prior art date
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、病原性菌として知られているポ／Ｌ−デテラ
（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌｍ ）属に属する微生物の培養方
法と、その際に使用される培地に関する。
（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌｍ ）属に属する微生物の培養方
法と、その際に使用される培地に関する。
岬ルデテラ属に属する微生物としては、百日＠菌、パラ
１日咳菌、気管支敗血症菌等があり、特に１日＠薗は、
１００日つづくといわれる特有の咳を伴う、気管、気管
支、および小気管支がおかされる急性の感染症である百
日咳の主たる病原菌として知られている。
１日咳菌、気管支敗血症菌等があり、特に１日＠薗は、
１００日つづくといわれる特有の咳を伴う、気管、気管
支、および小気管支がおかされる急性の感染症である百
日咳の主たる病原菌として知られている。
従って、臨床上は、かかる百日咳菌等の迅速・確実な検
出が望まれており、そのためには臨床分離筒の生育を促
進するような培地が必要である。また、百日咳の予防の
ために百日咳ワクチンが用いられているが、通常菌浮遊
液の形で調整されるワクチンを効率良く生産するために
も、百日咳菌の生育を促進するような培地が望ましい。
出が望まれており、そのためには臨床分離筒の生育を促
進するような培地が必要である。また、百日咳の予防の
ために百日咳ワクチンが用いられているが、通常菌浮遊
液の形で調整されるワクチンを効率良く生産するために
も、百日咳菌の生育を促進するような培地が望ましい。
かかる目的のためには、従来、ポルデ・ジャングー培地
（ＢＧ培地）やステイナー・ショルテ（ＳＳ培地）培地
が用いられているが、かかる培地を用いた場合でも、白
日咳鉋叫は培地上で変異をおこし易く安定した培養が―
シ＜、特Ｋ、菌の接種数が少ない場合（ｌＯ３コロニー
のオーダー以下）には、生育が非常に不安定であるとい
う間組点があった。
（ＢＧ培地）やステイナー・ショルテ（ＳＳ培地）培地
が用いられているが、かかる培地を用いた場合でも、白
日咳鉋叫は培地上で変異をおこし易く安定した培養が―
シ＜、特Ｋ、菌の接種数が少ない場合（ｌＯ３コロニー
のオーダー以下）には、生育が非常に不安定であるとい
う間組点があった。
本発明者らは、従来技術の欠点を改良し、ボルデテラ属
に属する鎗主管を安定にかつ効率良く培養する方法につ
き鋭意研究の結果、本発明に到達した。
に属する鎗主管を安定にかつ効率良く培養する方法につ
き鋭意研究の結果、本発明に到達した。
即ち、本発明は、ボルデテラ鴫に属する微生物を培養す
るに際し、培地中にシクロデキストリン又はその誘導体
を加えることを特徴とする、ボルデテラ属に属する微生
物の培養方法と、その際に使用される培地である。
るに際し、培地中にシクロデキストリン又はその誘導体
を加えることを特徴とする、ボルデテラ属に属する微生
物の培養方法と、その際に使用される培地である。
本発明におけるボルデテラ属に属する微生物とは、百日
咳菌、バラ百日咳−１気管支敗血症曹牙工（・・う・ ボルデテラ属に属する微生物の菌、学的性質及び培養条
件婢に関しては、Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ ＋＊ ８版、１９７４年、 Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｋｉｎｓ Ｃｏ、発行や Ｊ。
咳菌、バラ百日咳−１気管支敗血症曹牙工（・・う・ ボルデテラ属に属する微生物の菌、学的性質及び培養条
件婢に関しては、Ｂｅｒｇｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ ＋＊ ８版、１９７４年、 Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａ
ｍｓ ＆ Ｗｉｌｌｋｉｎｓ Ｃｏ、発行や Ｊ。
Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、 １２９巻、第５２３−５５０頁
。
。
１９６９年あるいは細菌学実習提要、Ｍ３版、＃！８０
′＠以下、昭和４７年、丸善発行等があり、すでに公知
である２ シクロデキストリンは、でん粉あるいはでん粉の加水分
解物にＢａｃｉｌｌｕｓ ｍａｅｅｒａｎ＋ｓなどのｍ
ｍ７１ ａ ｓ ｅを作用させて得られる、Ｄ−グリコ
ピラノース基が６〜１０個α−１，４グルコシド結合に
よって環状に結合した王冠状の分子である。
′＠以下、昭和４７年、丸善発行等があり、すでに公知
である２ シクロデキストリンは、でん粉あるいはでん粉の加水分
解物にＢａｃｉｌｌｕｓ ｍａｅｅｒａｎ＋ｓなどのｍ
ｍ７１ ａ ｓ ｅを作用させて得られる、Ｄ−グリコ
ピラノース基が６〜１０個α−１，４グルコシド結合に
よって環状に結合した王冠状の分子である。
そのうち主なものけ６，７または８個のＤ−グリコピラ
／−ス基からなり、それぞれα−２β−１γ−シクロデ
キストリンと呼ばれている。本発明におけるシクロデキ
ストリンとは、前記α。
／−ス基からなり、それぞれα−２β−１γ−シクロデ
キストリンと呼ばれている。本発明におけるシクロデキ
ストリンとは、前記α。
β、ｒ等のシクロデキストリン又はそわらの混合物をい
う。
う。
シクロデキストリフ分子は多数の１級及び２級水酸基を
有するので、単糖類に広く用いられている反応を適用し
て穐々の誘導体が得られる、本発明におけるシクロデキ
ストリン誘導体とはかかる方法で得られる誘導体を意味
し、例えば。
有するので、単糖類に広く用いられている反応を適用し
て穐々の誘導体が得られる、本発明におけるシクロデキ
ストリン誘導体とはかかる方法で得られる誘導体を意味
し、例えば。
アミノシクロデキストリンや７ミノデオキシシクロデキ
ストリンの如き７ミツ化誘導体、７セチルシクロデキス
トリンや二）ｐシクロデキストリンの如きエステル化誘
導体、メチルシクロデキストリン、エチルシクロデキス
トリン、プロピルシクロデキストリン、カルボキシメチ
ルシクロデキストリンの如きエーテル化誘導体（エーテ
ル化シクロデキストリン）がある。本発Ｆ！ｉ４におい
て好ましいのはエーテル化シクロデキストリンであり、
−中でも、ヘキサキス（２，６−〇−ジメチル）α−シ
クロデキストリンやヘプタキス（２，６−０−ジメチル
）β−シクρデキストリン等のメチルデキストリンが特
に好ましい。
ストリンの如き７ミツ化誘導体、７セチルシクロデキス
トリンや二）ｐシクロデキストリンの如きエステル化誘
導体、メチルシクロデキストリン、エチルシクロデキス
トリン、プロピルシクロデキストリン、カルボキシメチ
ルシクロデキストリンの如きエーテル化誘導体（エーテ
ル化シクロデキストリン）がある。本発Ｆ！ｉ４におい
て好ましいのはエーテル化シクロデキストリンであり、
−中でも、ヘキサキス（２，６−〇−ジメチル）α−シ
クロデキストリンやヘプタキス（２，６−０−ジメチル
）β−シクρデキストリン等のメチルデキストリンが特
に好ましい。
本発明において培地とは、ブイヨンやペプトン水などの
従来公知の液状培地、あるいは液状培地に嘩天、ゼラチ
ン、卵白、血清などを加えて固形にした従来公知の固形
培地を意味するが、好ましいのはＳＳ培地、及びこれに
寒天を１〜２ ％ （Ｗ／Ｖ ）程度添加し固化したＳ
Ｓ培地である。
従来公知の液状培地、あるいは液状培地に嘩天、ゼラチ
ン、卵白、血清などを加えて固形にした従来公知の固形
培地を意味するが、好ましいのはＳＳ培地、及びこれに
寒天を１〜２ ％ （Ｗ／Ｖ ）程度添加し固化したＳ
Ｓ培地である。
ＳＳ培地は、１１あたり、グルタミン酸ナトリウム、！
−プμリン、塩化ナトリウム、リン酸２水素カリウム、
塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ト
リスヒドロキシメチルアミンメタンを、それぞれ１０．
７，０．２４゜２．５． ０．５． ０．２． ０．１
． ０．０２． １．５２５Ｉｉを含む水溶液を濃塩酸
でｐｉ（７，６に調整した後、１２１℃で１５分間オー
トクレーブで滅菌して得られる基礎培地に、ｌ−シスチ
ン、硫酸第１鉄、アスフルビン酸、ニアシン、還元型グ
ルタチオンを１７あたり―それぞれ４，１，２゜０．４
，１０１！含む溶液なＳリボ７フイルター（０，４５μ
）で除菌して得られる補液な、基礎培地に対して１．
ＯＳ （Ｖ／Ｖ ）の割合で加★で得られる。
−プμリン、塩化ナトリウム、リン酸２水素カリウム、
塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、ト
リスヒドロキシメチルアミンメタンを、それぞれ１０．
７，０．２４゜２．５． ０．５． ０．２． ０．１
． ０．０２． １．５２５Ｉｉを含む水溶液を濃塩酸
でｐｉ（７，６に調整した後、１２１℃で１５分間オー
トクレーブで滅菌して得られる基礎培地に、ｌ−シスチ
ン、硫酸第１鉄、アスフルビン酸、ニアシン、還元型グ
ルタチオンを１７あたり―それぞれ４，１，２゜０．４
，１０１！含む溶液なＳリボ７フイルター（０，４５μ
）で除菌して得られる補液な、基礎培地に対して１．
ＯＳ （Ｖ／Ｖ ）の割合で加★で得られる。
本発明において、前記培地に添加混合されるシクロデキ
ストリン又はその誘導体の量は、接種される釉の量に依
存するが、例えば、接種される菌がｔＯＳコロニーの場
合には２００〜５０００μｇ／ｇｄ 、 １０＠コロ
ニーの場合には１〜５００μｇ ／ｍｌが適当である。
ストリン又はその誘導体の量は、接種される釉の量に依
存するが、例えば、接種される菌がｔＯＳコロニーの場
合には２００〜５０００μｇ／ｇｄ 、 １０＠コロ
ニーの場合には１〜５００μｇ ／ｍｌが適当である。
かかる培地を用いたボルデテラ属に属する微生物の培養
方法及び条件は＊に限定されるものではなく、従来公知
の方法及び条件を採用できるが、静置培養よりは振と５
培養の方が好ましく、培養温度は３５℃前後、培養時間
は１０〜１００時間が適当である。
方法及び条件は＊に限定されるものではなく、従来公知
の方法及び条件を採用できるが、静置培養よりは振と５
培養の方が好ましく、培養温度は３５℃前後、培養時間
は１０〜１００時間が適当である。
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例１
ポルデテラパタシス（Ｂｏｒｄ＠ｔｅｌｌａ ｐａｒｔ
ｕａｓｉ＋ｓ ）（百日咳１！ｉ）東浜株工相曹の凍結
乾燥１体を１チカザミノ酸溶液Ｋｌｌ濁させ、脱繊維馬
血液を２０チ含むボルデ・ジャングー（Ｂｏｒｄｓ＋ｔ
−Ｇｅｎｇｏｕ）培地（以下ＢＧ培地という）で３５
℃。
ｕａｓｉ＋ｓ ）（百日咳１！ｉ）東浜株工相曹の凍結
乾燥１体を１チカザミノ酸溶液Ｋｌｌ濁させ、脱繊維馬
血液を２０チ含むボルデ・ジャングー（Ｂｏｒｄｓ＋ｔ
−Ｇｅｎｇｏｕ）培地（以下ＢＧ培地という）で３５
℃。
３日間培養した。この菌を１白金耳かき取り、更にＢＧ
培地で２４時間リフレッシュした菌をｓｓ培地に懸濁し
、５Ｘ１０’コｐニー／−の接種菌懸濁液を得た。
培地で２４時間リフレッシュした菌をｓｓ培地に懸濁し
、５Ｘ１０’コｐニー／−の接種菌懸濁液を得た。
予め所定の終濃度（ｔｔｇ／ｌｄ ）となるように、シ
クロデキストリン又はその誘導体を含む１２チ寒天濃度
の固型ＳＳ培地を調製しておき、ｌプレート当りの菌数
が１０３コロニーとなるようにスプレッドした。
クロデキストリン又はその誘導体を含む１２チ寒天濃度
の固型ＳＳ培地を調製しておき、ｌプレート当りの菌数
が１０３コロニーとなるようにスプレッドした。
３５℃で４日間培養後の菌生育状態（コ、−二−数）を
第１表に示した。
第１表に示した。
−・・・・・・ １０個以下
±・・・・・・ ｌＯ〜１００個
＋・・・・・ １００〜５００個
井・・・・・・ＳＯＯ〜１０００個
なお、用いたエーテル化シクロテキストリンは、Ｈ，５
ｅｈｌｅｎｋらの方法（Ａｂｓｔｒ、 Ｐａｐ、 Ａｍ
ｅｒ。
ｅｈｌｅｎｋらの方法（Ａｂｓｔｒ、 Ｐａｐ、 Ａｍ
ｅｒ。
Ｃｈｅｍ、 Ｓｅｅ、 、 １４９． ＴＩＣ、１
９６５参照）Ｋ準拠して合成された。
９６５参照）Ｋ準拠して合成された。
以下、αニジクロデキストリンをα−ＣＤ。
ソｆ））チル化物（ヘキサキス（２，６−０−ジメチル
）ａ−シクロテキストリン）をＭｅα−ＣＤ。
）ａ−シクロテキストリン）をＭｅα−ＣＤ。
エチル化物なＥｔα−ＣＤ、β−シクロデキストリンを
β−ＣＤ、そのメチル化物をＭｅβ−ＣＤ（ヘプタキス
（２，６−０−ジメチル）β−シクロテキストリン）、
エチル化物をＥｔβ−ＣＤと略記する。
β−ＣＤ、そのメチル化物をＭｅβ−ＣＤ（ヘプタキス
（２，６−０−ジメチル）β−シクロテキストリン）、
エチル化物をＥｔβ−ＣＤと略記する。
＃１表から明らかな如く、シクロデキストリン又はその
誘導体を培地に＃加するととＫより、百日ｐＪＥＩＮの
生育が促進されている。また、その効果はα−ＣＤ又は
β−ＣＤよりもそれらのメチル化物又はエチル化物の方
が優れており、α体よりもβ体の方がより優れているこ
とがわかる。
誘導体を培地に＃加するととＫより、百日ｐＪＥＩＮの
生育が促進されている。また、その効果はα−ＣＤ又は
β−ＣＤよりもそれらのメチル化物又はエチル化物の方
が優れており、α体よりもβ体の方がより優れているこ
とがわかる。
実施例２
実施例！と同様の方法で得られた接種１Ｍ懸濁液を、所
定濃度のＭｅβ−ＣＤを含むＳＳ液体培地１０ｍ１に接
種サイズが１０６コロニーとなるように接種し、Ｌ字型
試験管で往復部と５しながら３５℃で培養した。得られ
た培地の濁度（ＯＤ６５０ｍμ）の経時変化は第２表の
通りであった。
定濃度のＭｅβ−ＣＤを含むＳＳ液体培地１０ｍ１に接
種サイズが１０６コロニーとなるように接種し、Ｌ字型
試験管で往復部と５しながら３５℃で培養した。得られ
た培地の濁度（ＯＤ６５０ｍμ）の経時変化は第２表の
通りであった。
第２表
第２表より、Ｍｅβ−ＣＤを培地に１〜５００μｇ／Ｉ
１１／の範囲で添加すると、添加量の増大と共に培地の
濁度が増大、即ち菌の生育が促進されていることがわか
る。
１１／の範囲で添加すると、添加量の増大と共に培地の
濁度が増大、即ち菌の生育が促進されていることがわか
る。
特許出願人 帝人一式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔ＠ｌ１ｍ ）属に属す
る微生物を培養するに際し、培地中にシクロデキストリ
ン又はその誘導体を加えることを特徴とする、ボルデテ
゛う属に属する微生物の培養方法。 １ シクロテキストリンの誘導体がエーテル化シクロデ
キストリンである、特許請求の範囲第１項記載の培養方
法。 １−工゛−チル化シクロデキストリンがメチルシクロデ
キストリンである、特許請求の範囲第２項記載の培養方
法。 ４、 ボルデテラ属に属する微生物を培養するための、
シクロデキストリン又はその誘導体を含有する培地。 翫 シクロデキストリン又はその誘導体を１〜５０００
１ｔｇ／ｄの割合で含有する、特許請求の範囲第４項記
載の培・地。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16347781A JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
| US06/427,039 US4500639A (en) | 1981-10-15 | 1982-09-29 | Culturing Bordetella in media containing etherified cyclodextrin |
| AU89192/82A AU554066B2 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-07 | Cyclodextrin additive to bordetella culture medium |
| CA000413002A CA1198702A (en) | 1981-10-15 | 1982-10-07 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| AT82305465T ATE44979T1 (de) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Verfahren zur zuechtung von mikroben der gattung bordetella und naehrboden. |
| ES516507A ES8404407A1 (es) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Un metodo para el cultivo estable y eficaz de microbios del ginero bordetella. |
| EP82305465A EP0077646B1 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| DE8282305465T DE3279841D1 (en) | 1981-10-15 | 1982-10-14 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium |
| SU823505901A SU1384206A3 (ru) | 1981-10-15 | 1982-10-15 | Способ культивировани бактерий ВоRDетеLLа реRтUSSIS |
| KR8204639A KR870001650B1 (ko) | 1981-10-15 | 1982-10-15 | 보르데텔라 속에 속하는 미생물의 배양방법 및 배양배지 |
| MYPI87000101A MY100052A (en) | 1981-10-15 | 1987-02-05 | Method of culturing microbes belonging to the genus bordetella and culture medium. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16347781A JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5867182A true JPS5867182A (ja) | 1983-04-21 |
| JPS5953833B2 JPS5953833B2 (ja) | 1984-12-27 |
Family
ID=15774613
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16347781A Expired JPS5953833B2 (ja) | 1981-10-15 | 1981-10-15 | 培養方法及び培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5953833B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60152502A (ja) * | 1983-12-17 | 1985-08-10 | コンゾルテイウム・フユール・エレクトロケミツシエ・インヅストリー・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | β‐シクロデキストリンの水溶性エーテルおよびその製法 |
| JPS61271986A (ja) * | 1985-05-27 | 1986-12-02 | Agency Of Ind Science & Technol | リンパ系細胞用培地 |
| JP2016530891A (ja) * | 2013-09-13 | 2016-10-06 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ボルデテラ属種の工業規模培養のための合成培地 |
-
1981
- 1981-10-15 JP JP16347781A patent/JPS5953833B2/ja not_active Expired
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60152502A (ja) * | 1983-12-17 | 1985-08-10 | コンゾルテイウム・フユール・エレクトロケミツシエ・インヅストリー・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | β‐シクロデキストリンの水溶性エーテルおよびその製法 |
| JPH0617361B2 (ja) * | 1983-12-17 | 1994-03-09 | コンゾルテイウム・フユール・エレクトロケミツシエ・インヅストリー・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | β‐シクロデキストリンの水溶性エーテルおよびその製法 |
| JPS61271986A (ja) * | 1985-05-27 | 1986-12-02 | Agency Of Ind Science & Technol | リンパ系細胞用培地 |
| JPS6321469B2 (ja) * | 1985-05-27 | 1988-05-07 | Kogyo Gijutsuin | |
| JP2016530891A (ja) * | 2013-09-13 | 2016-10-06 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ボルデテラ属種の工業規模培養のための合成培地 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5953833B2 (ja) | 1984-12-27 |
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