JPS5859919A - 抗コクシジウム組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、３０．５０４Ｒｐ（酸として、又は金属塩あ
るいは含窒素塩基との壇として）を０．０００１〜９９
．９重量係および動物により消費可能な物質を含む、動
物に与える抗コクシジウム組成物に関する。この組成物
は有用な抗コクシジウム活性、抗菌活性および成長促進
活性を有する。

この新規組成物は、動物の配合飼料または濃厚飼料と、
３０，５０４ＲＰまたはその金属塩または窒素含有塩基
との塩および任意には他の抗コクシジウム剤をあわせて
含有しうる。

適当な効果を浄揮するに要する投与量は、もちろん、飼
料の割合に応じて広範囲に変動しうる。

一般的［３０，５０４ＲＰまたはそれの金属塩または窒
素含有塩基との塩を、　０．００５から０．０４重を嗟
含有すれば十分である。

３０・５０４　ＲＰまたはその金属塩または窒素含有塩
基との塩は、完全飼料中に上記の割合で均一に分散させ
た形で用いうる。

強化用飼料中に、もつとも普通にはビタミンや無機塩の
ような他の添加物とあわせて添加しうる。

これらの強化用飼料は、メインの飼料と混合しうるしま
たはそれの消費にともなって添加してゆく。

それは普通メインの飼料の５から２０憾である。

「プレミックス」として、　０．０５から２０係の５０
ｍ５０４　ＲＰまたはその金属塩または窒素含有塩基と
の塩を飼料用の増量剤で希釈したものを用量し、これを
用いて、完全飼料または強化用飼料を調製してもよい。

この形は、飼料中に活性生成物を均一に分布さすことを
容易とする便宜な中間体である。プレミックス自体は、
９９．９から２０俤の’５０，５０４　ＲＰまたはその
塩を含有する濃縮物Ｋ。

可食性の変性剤たとえば可食性色素、風味剤１分散剤ま
たは凝集防止剤および飼料増量剤を添加調製しうる。

濃縮物およびプレミックスに一般的に粉剤である。強化
用飼料および完全飼料は粉剤でもかまたは常法で調製し
た粒剤でよい。

次忙本発明の詳細な説明する。

例１ 次の組成を有する飼料を調製する。

穀粉（並品”）　　　　　　　　１３．４１係大麦の粉
　　　　　　　　　１３．４１％と５もろこし粉　　　
　　　１３．４１％小麦粉　　　　　　　　　　３１．
３２憾魚粉　　　　　　　　　　　８．９２％大豆粉　
　　　　　　　　　８．９２係脱水かいば粉　　　　　
　　４．５６係酵母エキス　　　　　　　　２．３３係
乾燥粉乳　　　　　　　　　２．６８係壇化ナトリウム
　　　　　　　０．０９係塩化カルシウム　　　　　　
０．８９チ無磯要素　　　　　　　　　　０．０６係複
合ビタミン ビタミンＡ　　　　　　　　　４．ＤＯＯｘ、Ｕ、／ｋ
ｇビタミンＤ３　　　　　　　　１　＃０００Ｉ　、Ｕ
、／　ｋｇ壇化コリン　　　　　　　　１１．５■／ｋ
ｇす？フラビン　　　　　　２．２４即／ゆ０．０２係
の３０．５０　Ａ　ＲＰを添加し飼料中に十分に混ぜる
。

本発明の組成物は３０ｓ５０４　ＲＰまたはその塩を基
材とし１反雛動物（牛、羊および山羊）の成長因子とし
ておよび豚の赤痢治療剤として使用できる。

これらの組成物は１反雛動物または豚の配合飼料および
濃厚飼料混合物より成り、　３０，５０４ｐｐまたはそ
の塩を含有する。

適当な効果を与えるに必要な投与量はもちろん。

動物の種および飼料自体の栄養価に応じて、広範囲に変
動する。

動物１（ｍＫついて５　ｏから２５０１１１７）３０，
５０４ｗを１日量として用いるのが特に有利である。

０．０１から０．１係の本発明の抗生物質を１通常他の
添加剤たとえばビタミンや無機基とあわせて含有する強
化用飼料として−３０＊５０４　Ｒｐを分散さすのが有
利である。これらの強化用飼料は。

メインの飼料と混合しておくかまたはそれが消費される
のに伴なって添加することができる。強化飼料は、普通
は１日の消費量の約１から１０畳とする。それで−３０
＊５０４　ｕ　ｐは、１日の飼料の０．０００１から０
．０１重量％に相当する。

完全飼料または強化用飼料に用いる「プレミックス」は
、飼料増量剤で希釈して、一般的ＫＯ０１から５憾の３
０ｅ５０４　ｕ　ｐを含有する。これは。

抗生物質３０，５０４　ＲＰを飼料に均一に分散さす便
宜な中間体である。この「プレミックス」は一般的に、
可食性の変性剤たとえば可食性色素、風味物質、＃集防
止用分散剤および飼料増量剤を添加した。９９．５から
５チまでの３０ｍ５０４　ｕ　ｐを含有する濃厚物より
一般的に調製する。

濃厚物および「プレミックス」は一般的に粉剤である０
強化用飼料は粉剤でもよくまた常法で調製の粒剤でもよ
い。これらの組成物では、抗生物質３　Ｄ＊５０４　Ｒ
Ｐまたはその塩は、そのままの微粒子かまたは被覆され
た微粒子の形でよい。

３０．５０４　ＲＰは、ストレプトマイセス属に属し、
ストレプトマイセス　がリナリウス（８ｔｒ＠ｐｔｏｍ
ｙｃｅｇ　ｇａｌＬｉｎａｒｉｕｓ　）　ＤＢ　２５，
８８１（ＮＲＲＬ　５．７８５　）と称し、昭和５０年
２月２８日付で寄託番号／１６２９３２にて微生物工業
技術研究所に寄託された新規微生物を培養して得られる
。

３０．５０４　ＲＰは次に示す物理化学的性質を有する
。

外　観：白色の微結晶粉末 溶解性：３０，５０１Ｐは壇素化溶媒たとえばメチレン
クロライドおよびクロロホルム、アルゴールたとえばメ
タノール、およびジメチルホルムアミＹに易溶であり：
アセトンおよび酢酸エチル忙中程度に溶解し、ヘキサン
に僅溶で、そして水に事実上不溶である。なお、溶解性
は、　ｔｈ＠Ｐｈａｒｍａｃｏｐｓ＊　Ｆｒａｎｃｅａ
ｉｓ＠、第９版、第２部、１１６頁（１９７２）１７）
表示法によっている。

Ｐｌ− 百分率組成：３０，５０４ｎｐｉま炭素、水素およてメ
酬素を含有し、その大体の百分率斧Ｗ成１１次のようで
ある。

Ｃ嗟＝６９．４　　Ｈ係＝９．［］　　　０係＝２１．
０メチルホルムアミド溶液中水酸化４デチルアンモニウ
ムで滴定して、中和当量重量を１８３０である。

融　点　（Ｋｏｆｌｓｒ　ｂｅｎｃｈでＰｉ４１１定）
：約２［］０’Ｃ。

旋光度：　３０．５０４　ＲＰのメタノール中１嗟濃度
の溶液とし℃の比旋光度は、大体、次の値を示す。

〔α１＋１０＝−７９°　〔α］！８ｓ＝−１８８０（
α１’ｌＷｇ　＝　−３７８゜紫外線ス被りトル：３０
，５０４Ｒｐ＆！紫外線領域に特徴的吸収を示さない。

赤外線スペクトル：（臭化カリウム錠斉１で濱１１定）
。

このスペクトルは図面に示すが、波長（１ミクロン（上
辺の尺度）または波数はｃｒｒＬ−１（下辺の尺度）を
横軸に目盛り、光学密度を縦軸に目盛る。

３　ＣＬ５０４　ＲＰの主要赤外線吸収＆家、ｃｒｒＬ
−１で表わし表１に示す。

表　　　１ ３．４４０ｇ　１，３２５ｍ　　９１５　ｒｎ３ｅ０３
０ｓｈ　Ｌ３１５ｓｈ　８８０ｖ２９９６０＠　１ｔ２
９５ｓｈ　８６５ｖｖ２＝９３８ｓ　１−２７２ｍ　　
８４５　ｖｖ２．８８０Ｊ！　　　　１−２２５ｖ　　
　　　８２５　ｗ２＃８５５ａＭ　１＃２［１０ｖｖ　
７９２ｍ２．６４０ｍｗ　１，１７２ｍ　　７７５　ｖ
２．０６０ｖｖ　１，１４０ｍ　　７３５　ｖＬ９４５
ｖｗＬ１１５ａｈ　７００　ｖ１ｔ９ｏｏｖｖ　１＊１
００ａｈ　６７５　ａｈＬ７８５ｇｈ　１＃０８５ＪＩ
　　６５５ｍ１ｍ７０５ｇ　１．ｏ７ｏｓｈ　６５０　
ａｈ１１６３２ｍ　ｌ＄０４５ｆｉｈ　６１５　ｍｉ、
５２２ｓｈ　１．ｏｓｓｓ　　５６５ａｈ１．５３５ｖ
ｙ　１−０１２ｍ　　５２５　ｍｌ、４５８ｍ　　９８
０　ｇ　　４９５　ｍｌ　、４ｏｓａｈ　　　　　９５
８　虐　　　　４６５　ｖｗｌ、３８０ｇ　　９３５ｍ
　　４４５　ｖｖａ　＝非常に強い　　８＝強い　　　
　　ｍ＝中程度！＝弱い　　　　　ｖｖ＝＝非常に弱い
　ｓｈ＝肩クロマトグラフィー　２種の溶媒混合物を用
（・るシリカゲルの薄層クロマトグラフィーで！１０，
５０４ＲＰを次のように特徴付けうる。

酢酸エチル／シクロヘキサ／／水／デタノール（５０１
５０／２５１５容量比）でのＲ２は０．４５゜メチレン
クロライド／メタノール（９４／６容量比）でのＲ２は
０．５５゜ ３０．５０４　ＲＰはある種のダラム陽性菌に対して特
に静菌性活性を示す。

いくつかの微生物に対する３　０．５０４　ＲＰの静菌
活性は、この目的に普通に使用する希釈法で測定した。

それぞれの微生物について、規定条件で。

適当な培養プロス中での目に見える発育を阻止する活性
物質の最小阻止濃度を測定した。種々の測定結果を、試
験培地１当たりの物質のミクロダラムで表わす。

毒　性：鶏での５０％致死濃度は、経口１回投与で８５
■／に９゜ 抗コクシジウム活性 ３０．５０４　ＲＰの抗コクシジウム活性は、Ｅｉｍｅ
ｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａまたはＥｌｍｅｒｉａ　ａｃｅ
ｒｖｕ１１ｎａ感染の鶏で測定した。飼料中ｏ、ｏ　ｏ
　ｓから０．０４重量％の無毒濃度で５０，５０４　Ｒ
Ｐを添加する場合に、実質的に抗コクシジウム活性が現
われる。

３０．５０　Ａ　ＲＰ生産菌は、ＤＢ　２５，８８１の
番号を与えられている、即度で採熾された土壌よシ得ら
れた放線菌である。この微生物の１試料は、アメリカ合
衆国、イリノイ州、Ｐｅｏｒｉａ、　ｔｈｅＮｏｒｔｈ
ｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ　Ｋ寄託され、ＮＲＲＬ　５７８５０番
号を受けている。

この微生物は、すでに記載されている種とは一致しない
ので、新種と考え、ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇａｌｌ
ｉｎａｒｉｕｓ、　ＤＢ　２５，８８１の名称を与えた
。

少量の土壌を滅菌蒸留水に懸濁させ、懸濁液を種種の濃
度に希釈し、各希釈液の少量を寒天培地を含有するぺ）
　ＩＪ皿の表面に拡げる。２６℃で数日培養して微生物
を発育させ、さらに検討する目的で分離しようとするコ
ロニーを堆シ出し、寒天培地に移し、さらに豊富に発育
させる。

８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ　
ＤＳ　２５ｙ８８１はシリンダー状から卵状の胞子を形
成する。大きさは１．０から１．２ミクロン１０．８か
ら１．０ミクロン。

胞子柄はクラスター状となる。胞子になったフィラメン
トは、ゆるくそして波状で、しばしば末端でコイル状と
なる。つまシ、やや彎曲した形となるかまたはスパイフ
ル状に巻きしばしば数回巻く。

この胞子形成の様式により、Ｐｒｉｄｈａｍの分類によ
れば、Ｒｅｔｉｎａｃｕｌｕｍ　−Ａｐｅｒｔｕｍ　５
ｅｃｔｉｏｎに分類しうる。

８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ　
ＤＳ　２５ｓ８８１は、２６℃および３７℃でよく発育
するが、５０℃では発育しない。胞子状となった気菌糸
は灰色に着色する。栄養菌糸の色は一般的に培地で変化
し、黄色または帯灰黄色から褐黄色または黄褐色に至る
０Ｈｉｃｋｅｙ　−ａｎｄ　−Ｔｒｅｅｎｅｔ寒天上で
の特殊の可溶性帯褐色桃紫色色素を除いて、観察したす
べての培地で、一般的に非常に強くはないが褐黄色また
は褐灰色から黄褐色に変化する色素を与える。

２６℃での培養で、次の生化学的性質を示す。

メラニン形成　　　　陰性 Ｈ２８生成　　　　　　陰性 チロシナーゼ　　　　陰性 ゼラチン液化　　　　陽性 セルローズ利用　　　陽性 澱粉加水分解　　　　陽性 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ　
ＤＳ　２５＊８８１の培養特性を次表に示す。これらは
、良好な発育状態に達したもので、特に述べぬ限シ、２
６℃で２から３週間培養したものであ′る。これらの特
徴は、放線菌の形態特徴を測定するのに普通に用いられ
ている栄養寒天培地およびゾロスで観察した。寒天培地
は斜面培地による。使用する培地は、アメリカ合衆国、
マサチューセッツ、Ｗａｌｔｈａｍ。

Ｃｈｒｏｎｉｃａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ社刊、Ｓ、Ａ、　
Ｗａｋｓｍａｎ著［Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ　Ｊ記載の処方による。この場合、Ｗのあとに「Ｔｈ
ｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　Ｊ記載の番号を付し
である。他の培地は次のようである。

引用Ａ−［Ｈｌｃｋｅｙ　ａｎｄ　Ｔｒｅｓｎｅｒ寒天
Ｊ　−Ｔ、Ｇ。

Ｐｒｉｄｈａｍ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ａｎｎｕ
ａｌ、１９５６−１９５７．９５０頁　− 引用Ｂ　−［Ｂｏｎｎｅｔ寒天Ｊ　−Ｓ、Ａ、　Ｗａｋ
ｓ＋ｎａｎ−ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅＳ、　２
巻、３３１頁、＆６０−　Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　
ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ社、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　１
９６１ 引用Ｃ−処方Ｗ−２３に２％の寒天を添加する。

引用Ｄ　「酵母エキス寒天Ｊ　Ｔ、Ｇ、　Ｐｒｉｄｈａ
ｍ等、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ａｎｎｕａｌｓ　１９
５６−１９５７．９５０頁 引用Ｅ　　ｒ）マドペーストオートミール寒天ＪＴ、Ｇ
、Ｐｒｉｄｈａｍ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ａｎｎｕ
ａｌ。

１９５６−１９５７．９５０頁 引用Ｆ　「メラニン形成培地ｊ　−Ｓ、Ａ、　Ｗａｋｓ
ｍａｎ　−Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　２
巻、３３３頁１Ａ　４２−　Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ
　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ社１Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　
１９６１ 引用Ｇ　　Ｗ、Ｅ、Ｇｒｕｎｄｙ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ　ａｎｄＣｈｅｍ、ｔ　２　ｔ　４０１　ｅ　１
９５２引用Ｈ［無機塩−澱粉寒天Ｊ　−Ｔ、Ｇ、　Ｐｒ
ｉｄｈａｍ等−Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ａｎｎｕａｌ
、　１９５６−１９５７．９５１頁 引用■　処方ｗ−１に相当する。１．５％のグルコース
を、３％のスクロースに代えて使用する。

引用Ｊ　処方ｗ−１に相当する。１．５％のグリセロー
ルを、３％のスクロースに代えて用いる。

引用Ｋ　処方Ｗ−１８で、１．５％グルコースを３％の
スクロースに代えて用いる。

引用Ｌ　処方Ｗ−１８で、スクロースを除き、小ｒ紙片
を部分的に浸す。

引用Ｍ　　「Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆ
ｏｒ　Ｐｕｒｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｂ
ａｃｔｅｒｉａ　Ｊ　　−８ｏｃｉｅｔｙ　ｏｆＡｍｅ
ｒｉｃａｎ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｉｓｔｒｓ　　
−Ｇｅｎｅｖａ。

Ｎ、Ｙ−Ｌｏ　−１８ 引用Ｎ　「普通ゼラチンＪ　−「Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　
Ｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒ　Ｐｕｒｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　５
ｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｊ−８ｏｃｉｅｔ
ｙ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｉｓｔｓ−Ｇｅｎｅｖａ、Ｎ、Ｙ、Ｉｊ５０−　１８引
用Ｐ　市販スキムミルク粉末、製造者の指示によ）再構
成する。

引用Ｑ　　Ｈ２Ｂ生産検討のために指示された培地。

Ｈ，Ｄ、　ＴｒｅｓｎｅｒおよびＦ、　Ｄａｎｇａ−Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ　ＢａＣ１ｅｒｉＯＩＯ７＜７＋　７
６　ｅ　２３９−２４４　＋１９５８゜ 発育の程度は、良いものから悪い方へ減少する順に、非
常に良好、良好、かなシ良好、中程度、中程度よυ劣る
、貧弱、非常に貧弱、またはなしで表わす。

８ｔｒ＠ｐｔｏｍｙｃｓｇ　ｇａｌｌｉｎａｒｌｕｇ　
Ｄａ　２５＋８８１の性質は、既に記載されているいず
れとも一致しない。

従って、新種であると考えられる。

［Ｔｈ＠Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ＠ｔ＠ｓ　Ｊ　（第２巻、
　８．Ａ。

Ｗａｋｌｌ！１ｌｌＬＨ著、バルチモア、Ｔｈｅ　Ｗｉ
ｌｌｉａｍａ　ａｎａＷ１１ｋｉｎｓ社１９６１年刊）
および「Ｂｅｒｇａ７’ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄａｔ
＠ｒｍｉｎａｔｉｕ＠Ｂａｃｔｓｒ１ｏ１ｏｇｙ　Ｊ　
（７版、Ｔｈ＠Ｗ１１１１ａｍｇ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉ
ｎ−社、バルチモア。

１９５７）Ｋ記載の種のうち、　ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅａｇａｌＬｉｎａｒｉｕｇ　Ｄａ　２５，８８１はｓ
ｔｒｓｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｅｕ−と
もつとも論理的に比較しうる。

実際、　８ｔｒ＠ｐｔｏｍｙｃ＠ｓ　ｈｙｇｒｏｇｃｏ
ｐｉｃｕｇと同様Ｋ。

８ｔｒａｐｔｏｍｙｃ＠ｓ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｇ　
Ｄａ　２５，８８１は、一般的に黄色または帯灰黄色ま
たは褐黄色または黄褐色の栄養菌糸を有し、灰色の胞子
化栄養菌糸を有する。有機培地上でメラニン型可溶性色
素を形成せず、Ｈ２Ｓを生成せず、ゼラチンをゆっくり
と液化し、可溶性色素は形成しない。合成および有機の
両方の培地上で、可溶性色素を生じないかまたは一般的
に非常に強くはない可溶性色素のみを生ずる。帯褐黄色
から帯褐灰色から黄褐色の色素である。これらの特徴に
加えて、特殊な場合として、培養に用いたひとつの培地
つまりＨｌｃｋｅｙａｎｌｌ　Ｔ！ａｎ・ｒ寒天上で可
溶性の帯褐桃紫色色素を生ずる。これは、　ＨｅＤａＴ
ｒｅｇｎｅｒおよびＩＪ。

Ｂａｃｋｕｓ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ　４　、２４３−２５０．１９５６）Ｋよれば、
８＠　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｇ各種菌株の示す性質
で１株によって異なる培地上に認められる。しかし１本
発明の新規微生物は。

ａｍ　ｈｙｇｒｏｓｅｏｐｉｅｕｇの規定される３つの
本質的特徴のうちの２つにおいて異なる。第１Ｋ、胞子
柄の形において、ａｓ　ｈｙｇｒｏｓｅｏｐｔｅｕａの
胞子柄の形に一致しない、そして第２　Ｋ　、Ｂ、　ｈ
ｙｇｒｏｇｃｏ　−ｐｌａｕｓ　Ｋ特徴的な光沢のある
黒色域を、胞子形成気中菌糸中に決して生ずることはな
い。

ｓｏ　ｇａｌｌｌｎａｒｉｕｓ　Ｉ）ｓ　２５８８８１
はまた。やはり。

メラニンを形成せず、一般的に黄色からオレンジ黄色ま
たは帯褐色壺養菌糸を形成し、そして灰色の胞子形成気
中菌糸を形成する８ｔｒ＠ｐｔａｍｙｃａａａｕｒｖｏ
ｆａｅ１ｅｎｓと比較しうる。さらＫＩｌｓ、ａｕｒｅ
ｏ　−ｆａｃｉｅｎｓは多くの培地に可溶性色素を与え
ず、与えるとしても、一般的に弱い黄色から褐色の色素
を与える。ある場合には＊　８　＊　ａｕｒ　ｓｏ　ｆ
ａｃｉ　ｅｎｓの栄養菌糸は赤褐色から紫色であるが、
この場合の色素は培地中に拡散せず、その結果、　ＩＬ
　ｇａｌｌｉｎａ−ｒｉｕ＊　Ｉ）ｓ　２５８８８１の
生じうる可溶性帯褐色の桃−紫色の色素には相当しえな
い。さらに、８゜ａｕｒｓｏｆａｃｉｅｎｇはゼラチン
を液化せず、ゼラチン上でクリーム色の栄養菌糸を形成
し、スキムミルクを凝固せずまたベゾト／化もしない。

他方。

９＠　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｇ　Ｄ８２５．８８１はゼ
ラチンを液化し、黄褐色の栄養菌糸を形成し、スキムミ
ルクを明確にしそして均一にペゾトン化する。それで８
．１　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ＋　Ｄｓ　２５ｓ８８１
は＊　８　ｅ　ａｕｒ＠ｏｆａｃｉ＊ｎ＊とも異なる。

発育のための各種炭素または窒素源の利用能を。

Ｐｒ　ｉｄｈ　Ｊ１！１１およびＧｏｔｔｌｉｅｂ法（
Ｊ＊　ｏｆ　Ｂａｃｔｓ　。

５６．１０７−１１４．１９４８）に従って測定した。

著者の指示した基本培地を用い、グルコースを各種試験
炭素源に代えるか、または。

（ＮＨ４）ｌＩ８０４は各種試験窒素源で代える。

結果を次表に示す。

Ｂｔｒ＠ｐｔｏｍｙｃｅａ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ　
ＤＢ　２５＃８８１またはその生産性変異株（つまり３
０．５０４　ＲＰ　を生産しうる変異株）を培地中好気
的に培養し、培養中に生産された３　０ａ５０４　ＲＰ
をそのままかまたは塩として分離することＫより、３０
１５０４ＲＰを製造する。

８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅａ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｇ　
Ｄｌｌ＋　２５＊８８１は。

表面培養または深部培養で培養しうるが１便宜的には後
者が有利である。この目的では１発酵工業で利用の各種
型の装置を使用しうる。

特に１次の工程で培養を実施することができる。

発酵培地は、同化可能の炭素源および同化可能の窒素源
、無機要素、特にクロライＶ、そして場合によっては成
長因子を本質的に含有せねばならない。そしてこれらの
物質は、明確な形かまたは種種の由来の生物的生産物に
あるごとき複合混合物として添加しうる。

適当な同化可能の炭素源には炭水化物たとえばグルコー
ス、スクロース、マルトース、テキストリン、澱粉およ
び他の炭水化物性物質たとえば糖アルコール（グリセロ
ールを含む）およびある樵の有機酸たとえば乳酸および
くえん酸がある。ある種の動物または植物油たとえばラ
ーｒ油または大豆油もこれらの釉の炭化水素源に代えて
用いうるしまたはそれらに添加しうる。

適当な窒素源は非常に多様である。それらは非常に単純
な化学物質たとえば無機または有機アンモニウム塩、尿
素およびある種のアミノ酸でよい。

蛋白質の形で主として窒素を含有する複合物質たとえば
カゼイン、ラクトアルブミン、グルテンおよびそれらの
氷解生成物、大豆粉、落花生粉、魚粉、肉エキス、酵母
エキス、デイステイラースノルゾル、およびコーンスガ
ープの形でも添加しうる。

添加する無機要素のうち、アルカリまたはアルカリ土金
属のリン酸塩またはカルシウムまたはマグネシウムの炭
酸塩のごときは、緩衝または中和効果を有する。別のも
のは、たとえばアルカリ金属およびアルカリ土金属の塩
化物および硫酸塩は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａ
ｌｌｉｎａｒｉｕｓ　ＤＳ　２５＋８８１の発育および
３０．５ＧＡＲＰの生産に必要なイオン平衡を与える。

最後に、あるものは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇａｌ
ｌｉｎａｒｉｕｓ　ＤＳ　２５ｓ８８１の代謝の活性剤
として作用する。それらは亜鉛、コバルト、鉄、銅およ
びマンガン塩である。

適当な成長因子はビタミン型中性物質たとえばリボフラ
ビン、葉酸およびパントテン酸である。

培地の−は出発時に５．８から７．８の間にすべきであ
シ、なるべくは６．２から７．４までの間とする。

発酵の温度は２５から３０℃までの間であるが、２３か
ら３３℃までの間の温度で満足な生産を達成しうる。発
酵の通気はむしろ広範囲に変動しうる。しかし、分当り
プロスリットルについて０．！１から６リツトルの通気
量が非常に適当であることが分った。３０，５０４ＲＰ
の最大収量は２から８日の培養で達成される９、この時
間は使用する培地に本質的に依存する。

これらの事実から、３０，５０４ＲＰ生産のためのＳｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａｌｌｉｎｗｉｕｓ　ＤＳ　
２５＋８８１培養のための一般的条件は広範囲に変動可
能で、特定の要求に応じて変化させうる。

３０．５０４　ＲＰを培養物よシ分離するには次のよう
にする。酸性の−、一般的には６から６の間。

で、そしてなるべくは５に近い−でｒ過助剤の存在で、
培養物をＦ遇する。３０，５０４ＲＰは戸塊に保留され
るので適当な有機溶媒たとえば低級アルコールたとえば
メタノールまたは塩素化溶媒たとえばメチレンクロライ
ドで抽出する。減圧で濃縮し結晶化さすことによシ有機
溶液よシ粗生成物を分離する。その際適当とあれば３０
．５０４　ＲＰを溶解しない溶媒または溶解しにくい溶
媒を添加し、一定時間冷室中に放置して、３０，５０４
ＲＰの結晶化を完結させる。

ｓｏ、５０４ＲＰは、再結、適当な吸着剤上のクロマト
グラフィーまたは向流分配といった便宜な方法で精製す
る。

次に参考例によ＃）３０，５０４　ＲＰの製造例を示す
。

例２ ａ）発酵 １７０リツトルの発酵槽に次の成分を導入する１ペゾト
ン　　　　　　　１，２００　ｇ酵母エキス　゛　　　
　　６００ｇ グルコース１水和物　　１．−２００ｇ部分的氷解澱粉
　　　　２，４００　＃水道水　　　　　　　　全体を
１１０リツトルとする量１０規定水酸化す）　ＩＪウム
溶液（５０ｍｌ　）を添加し、−を７．３とする。１２
２℃で４０分間蒸気を通して培地を滅菌する。冷却後の
ゾロスの容量は１２０リツトルとなるが、それは滅菌中
の蒸気の凝縮による。−は６．９０となる。

振とうエルシンマイヤーフラスコ中で用意したＳｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇａｌｌｉｎａｒｉｕｓ　ＤＳ　２
５＊８８１の培養物（２００ｍｌ　）を接種する。滅菌
空気を通し、２１時間攪拌通気培養する。それで生産培
養の種にするに適幽な状態となる。

生産培養は８００リツトルの発酵槽中で実施する。仕込
む材料は次のようである。

デイステイラースソルデル　　１２．５１＃スクロース
　　　　　　　　　　１２．５ゆ塩化ナトリウム　　　
　　　　　２．５　ｋｌｉ’硫酸マ硫酸マグネシウム換
水和物　　　１．０ｋｌ？塩化コバルト６水和物め溶液 ２０ｇ／リットル　　　　　　　　　　　　０．５　リ
ットル水道水　　　　　　　　　全体を４６０リツトル
とする量 １０規定水酸化ナトリウム溶液（７２０１１４）を添加
し培地の−を７．５とする。１２２℃で４０分間蒸気を
通し滅菌する。冷却後のゾロスの容量は蒸気の凝縮で５
００リツトルとなる。培地の−は６．４０゜上記１７０
リツトル発酵槽から種培養（５０リツトル）を接種する
。２０５回転／分の一一一ンでかきまぜ滅菌空気を通気
（２０立方米／時）しながら２７℃で１１６°時°間培
養する。

５規定の水酸化ナトリウム溶液（全使用量０．５リツト
ル）を−動的に添加することで、出発時の−が６．５の
限界を切るのを防ぐ。操作終了時？培地の−は７．８５
で容量は４７０リツトルである。

ｂ）抽出 上記条件で得た培地（１，０００１Ｊツトル）を、６規
定塩酸（７リツトル）でｐＨ５の酸性としたあと０．５
時間攪拌する。濾過助剤（３５ｋｇ）と混合した、培地
はフィルタープレスでν遇する。炉塊はフィルター上で
、６規定塩酸で−を５に調整した水（２００リツトル）
で洗う。ｐ液および洗液は除く。

炉塊はメタノール（７００リツトル）中でこね、得られ
た混合物は６規定水酸化ナトリウム溶液（４７０１１１
）でｐＨ７とし、０．５時間攪拌する。

混合物はフィルタープレスで濾過し、ν塊を、フィルタ
ー上でメタノール（１００リツトル）で洗う。

ろ液および洗液をあわせ、減圧（５から１０ｍＨｇ　）
で濃縮し、水性濃縮液（６０リツトル）をうる。この濃
縮物に、６規定塩酸（５８０１１１４）を添加しｐ）１
３とする。次にメチレンクロライＰ（４０リツトル）と
あわせて１０分間攪拌する。２相を分け、水相はメチレ
ンクロライドで、３０リツトルそして２０リツトルで抽
出する。メチレンクロライド抽出液を合併し、水（９リ
ツトル）とかきまぜ、２０ｄの６規定塩酸を添加し、水
相の−を３とする。有機相を分け、水（１８リツトル）
でふたたび洗い、２０ＩＩ７の６規定水酸化ナトリウム
を添加し、水相の−を９．５とする。減圧（５から１０
ｗＨｇ）でメチレンクロライド相を濃縮し約１リツトル
の容量とする。

得られたメチレンクロライド濃縮物はへキサン（１０リ
ツトル）にゆつくシ注入する。溶液は濾過して不活性不
溶物（７，５ｇ）を除去する。涙液を濃縮し約１リツト
ルの容量とする。濃縮物に１リツトルの酢酸エチルを添
加し、水（１リツトル）の存在で攪拌する。６規定塩酸
を添加し、−を３とする。

有機相を分け、１リツトルに°濃縮する。溶液をゾ２ス
４℃に放置すると３０，５０４ＲＰがゆっくりと晶出す
る。得られる結晶をＦ取し４℃でヘキサｙ（５３ｍ／）
で洗い減圧（５から１０ｓｍＨｇ）で６５℃で乾燥する
。粗３０，５０４　ＲＰを酸の形でうる。７６１１０ Ｃ）精製 得られる組成生物（７６、ｌｉ＋）をアセトン（１，５
２０ｔＲ１）に溶解する。活性炭の存在で０．５時間溶
液を攪拌する。懸濁液を濾過し、戸塊をアセトン（１０
０ｍｌ　）で洗う。ろ液および洗液を合併し、水（８５
０ｍｌ　）を添加する。その際０℃でゆつくシとかきま
ぜておく。つぎに４℃に放置する。生成結晶を戸数し、
混合物をアセトンおよび水（１から５倍容葉、１００１
１７）で洗い、６５℃で減圧（５から１０朋Ｈｇ　）で
乾燥する。３０，５０４　ＲＰ　　（６８，５１１）を
うる。

ｄ）　　Ｍｂｉ 生成物（６８１１）をヘキサン（２，８８リツトル）に
溶解する。溶液は７時間攪拌する。その間に生成物はゆ
つくシと再晶出する。プラス４℃で１５時間放置し、結
晶を戸数し、ヘキサン（１０ｏｄ）で洗い、減圧（５か
ら１０ｗＨｇ）で６５℃で１２時間乾燥する。酸型３０
，５０４　ＲＰの最初のフラクション（５０１）が得ら
れる。

減圧下（５から１（ｌｎＨｇ）母液を０．４１に濃縮し
、これを＋４℃で１２時間放置して、第２フラクシヨ・
ンを得ることができる。生成した結晶を炉別し、ヘキサ
ン（２０１１））で洗い、減圧下（５から１０ｍｍＨｇ
）、３５℃で１２時間乾燥する。

酸型の３　ｏ＊５０４　ＲＰの第２フラクシヨン（１０
＆）が得られる。

【図面の簡単な説明】

図面は３０，５０４　ＲＰの赤外線吸収スペクトルであ
る。 代理人　浅　村　　　皓 外名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 酸又は金属塩あるいは含窒素塩基との壇として。 ３０ｓ５０４　ＲＰを０．０００１から９９．９重量係
   および動物に消費可能な物質を含有することを特徴とす
   る。抗コクシジウム組成物。