JPS5858340B2 - Ｎ↓−ε↓−トリメチル↓−Ｌ↓−リジン塩 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なＮ−ε−トリメチル−Ｌ −ＩＪジン塩
、その製法及びそれらを含んでなる医薬組成物に関する
。

より詳しく述べれば、本発明はグルタミン酸の一分子と
で生成されたＮ−ε−トリメチル−Ｌ −１，）ジンの
新規な塩に関する。

Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンは多数の種類、例えば
放線菌類及び哺乳類に、並びに沢山のいろいろな植物中
に結合した形態でもしくは遊離の形態で検出される公知
化合物である。

ベタインタイプの基本アミノ酸に属するこの化合物及び
、Ｎジメチルリジン、メチル化アルギニン等のような近
接関係にある化合物の正確な生物学的役割は現在に至る
まで明らかにされてなかった（ Ｔｙｉｈａｋ外ｒＬｉ
ｆｅ ５ｃｉｅｎｃｅ Ｊ 、２０（１９７７）３８５
）。

最近、Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンがヒトの胎盤か
ら単離された（Ｔ、Ｔｏｍｉｔａ及びに、Ｎａｋａｍｕ
ｒａ 「Ｚ −Ｐｈｙｓｉｏｌ −Ｃｈｅｍ −Ｊ３５
８（１９７７）４１３）ことは生長しつつある生物にお
けるその生理的もしくは生化学的役割を暗示するもので
あろう。

遊離Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジン塩基は細胞に有害
であり、かつ、塩の形でしか受容体に付き得ないので、
インビトロの検査において不活性である。

上記事実により、Ｎ−ε−トリメチルＬ −’Ｊジンは
必ずその塩の形で単離され、かついろいろな研究に用い
て来た。

最も広く研究されている塩の一種にはジシュウ酸塩があ
る（Ｔ。

Ｔａｋｅｍｏｔｏ外「薬学雑誌Ｊ８４（１９６４）１１
７６；日本特許明細書第２４７９０号（１９６５）、同
第０９５２９号（１９６８）及び同第２８０９２号（１
９６８）、フランス特許明細書第１４４２３１８号、並
びにＭ 、 Ｔ ａｋｅｈａｒａ外「日本化学雑誌ＪＩ
ＯＩ（１９６９））。

これは安定性はあるが、明らかに薬理目的には使用でき
ない。

他に試験を多く行った塩には対応モノ−及びジー塩酸塩
がある（イギリス特許明細書第８６５１５７号：フラン
ス特許明細書第 １４４２３１８号； Ｊ 、 Ｐ ｕｓｋａｓ及びＥ
−Ｔｙｉｈａｋ ：「Ｐｅｒｉｏｄｉｃａ Ｐｏ１ｙｔ
ｅｃｈｎｉｃａｊ １３、（１９６９）２６１ ； Ｊ
−Ｈ−８ｅｅｌｙ及びＮ、’Ｌ−Ｂｅｎｏｉｔｏｎ、「
Ｃａｎｄ−Ｊ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ｊ ４８ （１９７
０）１１２２ ； Ｒ−Ａ、Ｃｏｘ及びＣ−Ｌ 、Ｈｏ
ｐｐｅｌ、「Ｂｉｏｃｈｅｍ−Ｊ 、Ｊ、１３６（１９
７３）１０８３）しかしながら、これらの塩は極めて吸
湿性が高く、貯蔵性及び投与に関して非常に不利である
。

Ｎε−トリメチル−Ｌ−ＩＪジンの他の塩、例えば、Ｎ
−ε−トリメチル−Ｌ−リジンの臭化水素酸塩（フラン
ス特許明細書第１４４２３１８号）、クエン酸塩（Ｈ、
Ｏｚａｗａ外「薬学雑誌」８７（１９６７）９３５）、
ジ−ｐ−ヒドロキシアゾベンゼン−ｐ′−スルホン酸塩
（Ｒ，Ｔ 、ＭａｒｋｉｗｒＢｉｏｃｈｅｍ−Ｍｅｄ−
Ｊ１３（１９７５）２３；Ｙ−Ｋａｋｉ ｍ ｏｔｏ及
びＳ −Ａｋａｚａｗａ −ｒ Ｊ −Ｂ ｉｏｌ −
Ｃｈｅｍ、Ｊ２４５（１９７０）５７５１ ：Ｔ−Ｔｏ
ｍｉｔａ及びＫ 、Ｎａｋａｍｕｒａ 、 「Ｚ −Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ −Ｃｈｅｍ−Ｊ３５８（１９７７）４１
３）、ニコチン酸塩（フランス特許明細書第１４４２３
１８号）及びＮ−アセチル−Ｌ−アミノ−コハク酸塩（
フランス特許明細書第１４４２３１８号）も記載されて
いるがこれらの塩は安定性及び実際の適用の要件に満た
ない６ 本発明の目的は安定な、即ち、吸湿性でなく、貯蔵性が
良好で、投与形態への転換が容易であり、一定の組成を
有し、かつ水溶液中では生理食塩溶液とほぼ同じｐＨ値
を有する、新規で、医薬として適用可能なＮ−ε−トリ
メチル−Ｌ−リジン塩を提供することにある。

今般、Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンとグルタミン酸
の一分子とで形成された塩は上記要件を満たすことが判
った。

前記Ｎ−ε−） ＩＪメチルＬ〜リジンモノグルタミン
酸塩（以下、ＴＭＬ（Ｅ＝ １ ｕと略す）は特に有利
であることが判った。

本発明の別の局面によれば、上記塩はＮ−ε−トリメチ
ル〜Ｌ−ＩＪジンを水溶液中でグルタミン酸と反応させ
ることにより製造される。

この方法の好ましい態様によれば、出発原料の水溶液を
合併し、そして反応が終ったとき、得られた反応混液を
蒸発し、そして得られた蒸発残渣を所望ならば再結晶後
に乾燥する。

本発明による化合物の薬理学的性質は下記の検査によっ
て説明される。

ＮＫ／Ｌｙ腫瘍細胞を移植したマウスに及ぼすＴＭＬ−
Ｇｌｕの影響を調べた。

この試験は次のようにして行った：生後８週経ったＣＦ
ＬＰ♀マウス５０匹（それぞれ体重は２０ないし２２ｙ
′である）各々に、ＮＫ／Ｌｙ腹水癌細胞を５Ｘ１０”
個／匹の用量で腹腔内に移植した。

マウス２５匹を対照として用い、そして残り２５匹には
癌細胞を移植して２．５．９．１１．１３及び１９日白
花ＴＭＬ−Ｇｌｕの１ｏｏ■／に９用量を腹腔内に投与
した。

１９日白花はまだ生存している５匹のマウスにだけ上記
処置を施した。

マウスの血球計算に関、し前記処置の効果を下記表に示
す。

上記データからはＮＫ／Ｌｙ癌の増殖による重篤な貧血
はこれらのマウスをＴＭＬ−Ｇｌｕで処置したときにか
なり減ることが明白に示された。

ＬＤ５ｏ腹腔内（マウス） −１５００１ｎ９／に９以
上生後１２週間経った、健康な雌のＤＢＡ／２マウスの
胸腺、骨髄、牌臓及び回腸粘膜並びに生体内（ｉｎ
ｖｉｖｏ）で増殖しているＮＫ／Ｌｙ腹水癌細胞におけ
るチミジン（３ＨＴｄＲ）の分布を調べるために試験を
行った。

マウス５匹からなる群において試験を行い、続けて４回
くり返した。

ＴＭＬ−Ｇｌｕを腹腔内に１００■／に９の用量で投与
した。

上記用量のＴＭＬ−Ｇｌｕで処置した２４時間後には、
３ＨＴｄＲの胸腺での取込みは８５±７％増加し、牌臓
での取込みは７５±８％、そしてＮＫ／Ｌｙ癌細胞では
９４±１１％増加した。

１０時間目に３ＨＴｄＲが骨髄細胞に混入した量は５７
±４％、４８時間目には７２±５％増加した。

ＮＫ ／ Ｌｙ腫瘍細胞の場合において、混入量は４８
時間後でさえ更に増加し、その量は１２４±１４％に達
した。

ＴＭＬ−Ｇｌｕを腹腔内に投与したとき、回腸粘膜への
混入量は増加しなかったが、経口投与の場合には、処置
後３２時間目に５０±９％の増加が認められた。

”ＨＴｄＲの混入量の増加は細胞がＤＮＡ合戒台底始し
た、即ち活性になったことを指摘するものである。

新規なＮ−ε−トリメチル−Ｌ−リジン塩がリンパ球細
胞に及ぼす変形効果をヒトの細胞の培養物（ｃｕｌｔｕ
ｒｅ ）においても試験した。

健康な供血者の末梢血液からフイコールーウロミロ（Ｆ
ｉｃｏｌｌＵｒｏｍｉｒｏ ）勾配によってリンパ球を
単離した。

このリンパ球を２０℃において同一組織の血清を含有す
るパーカー１９９媒地にｍｌ中細胞５Ｘ１０５個の濃度
で懸濁させ、そして引続いて３７℃の温度において９６
時間インキュベートした。

この培養物を三つの群に分けた。

第一群はＴＭＬ・２ＨＣ１の１００μｆ／ｍｌ用量で処
置し、第二群はＴＭＬ−Ｇｌｕの１００ μ？ ／ｒｕ
ｌ用量で処置し、他方第三群を対照とした。

前記変形効果は３ＨＴｄＲの混入量により特徴付けられ
た。

３ＨＴｄＲを１１μＣ１／ｒＩｌｌの濃度で投与した。

培養を中断する３時間前にこの投与を行ったが、前記培
養は初めてから４８．７２及び９６時間して中断させた
。

ＤＮＡに結びついた活性は熱い過塩素酸で抽出後に液体
シンチレーション法によって測定した。

得られた結果は下記表に示した通りである。

これらの細胞がとりわけ活性になるという仮説はそれら
が倍増をはじめることによって立証される。

従って、腫瘍細胞の総数のなりゆきも測定された。

約２０匹のＣＦＬＰマウス（雌）にＮＫ／Ｌｙ腫瘍細胞
を移植した。

１０匹のマウスには腫瘍細胞を移植した２４時間後から
開始して日用量１００■／に９のＴＭＬ−Ｇｌｕを続け
て８日間投与した。

比較のためにマウスを１０匹使った。

処置後９日してマウスを殺し、そしてマウスの重量及び
腫瘍細胞の総数を調べた。

この処置で腫瘍細胞の総数は対照に対して３５％の増加
を来たすことが判った。

最後に、マウスの体液及び細胞質免疫反応に及ぼすＴＭ
Ｌ−Ｇｌｕの影響を観察した。

比較のために、Ｌ−６−フェニル−２・３・５・６−チ
トラヒドロイミダゾ〔２・１−ｂ）−チアゾール（レバ
ミゾール（Ｌｅｖａｍｉｓｏｌ））を用いた。

生後２週間経ったメスのＤＢ人／２マウス１０匹からな
る群のそれぞれについて試験を行った。

抗原として羊の赤血球を用い、これを腹腔内から投与し
た。

肯定的な対照として、大腸菌の内生毒素及びレバミゾー
ル２ないし５■／に９（体重）の重版用量を投与した。

前記抗原を投与する前、２週間以内に、ＴＭＬ−Ｇｌｕ
を体重にｇ当たり１００■用量で５回及び体重にｇ当た
り１００ｍ９の用量で１回と二通りの方法で腹腔内に投
与した。

血液凝集素力価（ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｅ
ｔｉｔｒｅ ）は”タカクシ−（ＴａｋｊＬｃｓｙ）
”微量滴定器によって測定した。

ＴＭＬ−Ｇｌｕで予備処置を一回行っても観察できる効
果はなかったが、予備処理を反復して行ったところ、レ
バミゾールとほぼ同じ力価の増加を来たした。

しかしながらレバミゾールはいろいろな望ましくない副
作用を有する、例えば、胃腸管に有害である。

しかし、ＴＭＬ−Ｇ ｌｕは天然物質の塩であり、生体
内に存在するのでこのような副作用がない。

細胞質免疫反応はレグランジ（Ｌｅｇｒａｎｇｅ ）ら
が記載する実験モデルを基礎にして調べた。

このモデルは赤血球細胞（羊）をくりかえして添加した
後の、マウスの足の厚みの増加を観察することに基づく
。

概して、これらの薬剤は、体液免疫反応を刺激し、最初
には対照と比較して成長を低下させ、やがて数日後には
、その間に成長が低下した対照に対して成長の増進をも
たらす。

マウスを体重−当たり１００１ｎ９のＴＭＬ−Ｇｌｕで
５回予備処置したときにも、約２週間後に同一傾向が認
められた。

上記試験で得られた結果に基づいて、 ＴＭＬ−Ｇｌｕは下記の利点を有している：（１）沢山
の細胞に細胞塞栓剤（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃｓ ）に対
して感作させるので、公知の細胞性塞栓性薬剤（ｃｙｔ
ｏｓｔａｔｉｃ ａｇｅｎｔ ）と組合せて腫瘍の化
学療法に有利使用できる。

（２）血球計算及び回腸粘膜に関し、増殖増進効果を有
するので、適当な時に使用するとき、細胞塞栓剤の毒性
を低下させる。

（３）単独で投与したときでさえ、血球計算に有益な影
響を有するので、腫瘍性貧血及びいろいろな原因で生じ
た貧血の処置に成功裡に使用できる。

（４）その免疫促進効果は体液免疫性の低下を併発する
腫瘍及び他の疾病の治療に利用できる。

前記の薬理学的試験の結果から明らかなごとく、この発
明の化合物は、例えば１００■／に９の投与量で腹腔内
投与することができ、この場合特に腫瘍性貧血に対する
療法剤として有効である。

本発明による方法は以下に記載の非限定例によって詳し
く説明される。

これらの例及び本明細書全体に亘って用いた略号は文献
（ｒ Ｊ−Ｂｉｏｌ 。

Ｃｈｅｍ、Ｊ２４７、（１９７２）９７７）中に一般的
に用いたものである。

最も使用頻度の高い略語ＴＭＬはＮ−ε−トリメチル−
Ｌ−リジンである。

本発明による化合物を製造する間、蒸発は必ずビュッヒ
ロータペーパー装置（ＢｉｉｃｈｉＲｏｔａｖａｐｏｒ
ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ）中で行った。

融点はトド’） （Ｔｏｔｔｏｌｉ） （ビュツヒ）装
置中で測定した。

フィクション層（Ｆ １ｘｉｏｎ １ａｙｅｒ）上で
薄層クロマトゲラ六二Ｗつた。

溶媒混液として、クエン酸５０ 、 ナトリウム
５０１、濃塩酸７就及び蒸留水５００ｗＬｌの混液を用
いた。

クロマトグラムの展開はメタノール８０ｍ１１氷酢酸２
０ｍ１ニンヒドリン０，２り及び硫酸銅０．ｉの混液で
行った。

例Ｉ Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンモノグルタミン酸塩 クロマトグラフィーで一様なＮ−ε−トリメチル−Ｌ−
リジン５０ｏｚ（０，２６５モル）を蒸留水５００ｍ１
に溶かした。

この混合物を５０℃に加熱し、そして同温度の蒸留水５
００ｍ１中のＬ−グルタミン酸３９．０Ｐ（０，２６５
モル）の溶液と合併した。

得られた溶液を５０℃で３０分間攪拌し、次に５１のノ
ーリット木炭で脱色した。

数分間攪拌した後、前記溶液を汗過し、そして減圧下で
蒸発乾固した。

この溶液の温度が５０℃を越えないように注意しなげれ
ばならなかった。

結晶性蒸発残渣を五酸化リンの存在下、一定の重量にな
るまで真空中で乾燥した。

収量：Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンモノグルタミン
酸塩（融点：１０４−１０７℃） ９５〜９８Ｐ 〔α）ｊ”−十５．１ｓ°（Ｃ−１、水）アミノ酸分析
：Ｇｌｕ ： １．０ （Ｌ） ；ＴＭＬ ：１．１３
（１） 分析 Ｃ１４Ｈ３ｏＯ６Ｎ３・２Ｈ２０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＩＮ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンモノグルタミン酸塩
   。 ２Ｎ−ε−トリメチル−Ｌ−リジンモノグルタミン酸塩
   を含んで成る抗腫瘍性貧血剤。