JPS5847448A - 抗変異原性剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （６）　発明の背景 本発明は抗変異原性剤、殊に食品及び嗜好品中の変異原
性物質を不治性化するための抗変異原性剤に関する。

近年、人体の組織又は器官における発癌原因の探究と関
連して、生物に対し突然変異を起こさせる物質（変異原
性物質）が注目を浴びてしする。この変異原性物質のす
べてが、自体直接的な発癌原因であるかどうか今のとこ
ろ明らかではないが、少くとも変異原性と発癌性との間
番こ高度の相関性が存することは識者の認めるところで
あって、このため変異原性を確認する手段として微生物
に対する突然変異性の存否を指標とするＡｍｅｓ（エイ
ムス）法その他の生物検定法が考案され、生活関連物質
の発癌性検定のため広く利用されている。

しかしどのように見切な検索を行ったとしても、生活関
連物質の全部について検定することは事実上不可能であ
る。のみならず、食品のように、大吉の昔からヒトの生
活と密接に結びついている物品の場合には、たとえその
中に変異原性物質が見つかったとしても、当該食品の摂
取を禁止するような法的措置を採るのは難しい。

今日、多くの変異原性物質のうちで食品中に含まれるこ
とが明らかなものとしては、ダイアセチル、タール等が
あり、また加工食品においては焼魚、ステーキ、焼肉、
ハンバーグ等の焼成食品や紅茶、コーヒー等のカフェイ
ン飲料及びブランデー、バーボンウィスキー、ラム等の
アルコール飲料にも変異原性が認められている。

さらに天然食品そのものであっても、ワラビ中には発癌
性を疑われているニトロン化合物が含まれている。さら
に食品ではないが、タバコのタール中にも３，４−ベン
ツピレンなどの発癌性物質が存在するのは周知のことで
ある。

以上概観したように、多くの食品における変異原性物質
の存在は、余りにも普遍的な事実であるために、予防医
学や優生学上の立場からたとえ望ましくない食品であっ
ても、これをヒトの食品のリストから除くのは非常に困
難である。

特に対象が天然食品それ自体である場合には、その食用
禁止は殆んど不可能で、あると云ってよい。本発明は食
品や嗜好品の特殊性に鑑み、それらの中に変異原性物質
が含まれている場合は無論、たとえ変異原性物質の存在
が疑われる場合でも、当該物質の変異原性を消滅させる
か又はこ、れを減弱させることによって、当該食品等の
安全性を向上させ、ひいては当該食品等に対する信頼性
を回復させようとするものである。因みに、従来からも
変異原性の減弱を目指す試みは多少行われており、例え
ばタバコの変異原性低減剤としてタンニン酸、糖類など
が発表されているが（特開昭５６−１５６８１．同５３
−１３６５９７．　　同は比較的小さく、しかも食品中
の変異原性物質については効果がない。

しかるに、本発明者らは全く別の観点から食品及び嗜好
品中の変異原性物質の不活化手段について鋭意研究に努
めた結果、ここに亜硫酸塩酸性亜硫酸塩（亜硫酸水素塩
）、ピロ亜硫酸塩酸性亜硫酸塩又は無水亜硫酸が食品及
び嗜好品中の変異原性物質の不活化剤として著しい効力
を有する事実を発見した。これらの化合物中で、亜硫酸
ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム。

ピロ硫酸カリウム、亜ニチオン酸ナトリウム及び無水亜
硫酸等は、既に食品用の漂白剤、保存料又は酸化防止剤
として使用され、食品添加物としての用途を有するもの
であるが、食品中の変異原性物質を不活化する効果は全
く知られておらず、−従ってこれらを食品や嗜好品の抗
変異原性剤として利用する用途は全く新規な事項であ本
発明によれば、ダイア七チル及びグリオキサールの変異
原性は、前記物質に対し３倍のモル数の亜硫酸イオン（
ｓｏ’、−＞により完全に不活化される。またコーヒー
の変異原性は、レギ具う−。

インスタント共に亜硫酸塩を二酸化イオウ（ＳＯ，）と
して２ＯＮ３００ｐｐｍ含有させることによりほぼ又は
完全に不活化されることができる。同様に、バーボンウ
ィスキー、アップルブランデー、ラム等のアルコール飲
料の変異原性も、同様二酸化イオウとして２０＝３００
ｐｐｍの、ＳＯ；−添加により概ね又は゛完全に不活化
される。さらにタバコのタール中に含まれる変異原性物
質も、亜硫酸塩又は無水亜硫酸により同様に不活化され
る。なお、以上の抗変異原性作用は、亜硫酸塩及び二酸
化イオウ（無水亜硫酸）の他、酸性亜硫酸塩（ＭＩ（Ｓ
ｏ、）ｅは１価の金属原子を現わす。以下同じ。）、ピ
ロ亜硫酸塩ＣＭＢＳ２０ｓ）及び亜ニチオン酸塩（Ｍ、
Ｓ、Ｏ，）でも殆んど同様である。し゛かも上記添加濃
度の範囲内では、対象の食品又は嗜好品の風味に全く又
は殆んど影響を与 本発明は、以上の知見に基づき、亜硫酸塩、酸ム塩、カ
リウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシ
ウム−塩等のアルカリ土類金属塩及びアルミニウム塩等
の無毒の金属又はアンモニウム塩基の塩類の形で使用さ
れるが、特にカリウム塩及びナトリウム塩は水溶性、安
定性及び食品添加、物とし、ての許容性の点で最適であ
る。以下代表的な塩類の組成及び分解点を第１表として
一括表示する（括弧内は分解点）。

米溶液としてのみ存在 本発明剤は通常粉末や溶液の形で被処理食品又は嗜好品
と均密に混ぜ合わされて使用される。

しかし所望により密閉室内でガス状ＳＯ，＋はり燻蒸処
理することも可能である。また対象がコーヒーの場合に
は、砂糖、コーヒークリーム、粉末クリーム等の中へ粉
末又は溶液の形で混入してもよい。あるいはレギュラー
コーヒーの浸出液を濾過するためのフィルターペーパー
又はクロスに所望の塩を浸漬耐着させることもできる。

さらにタバコの場合は、塩の水溶液又は香味付用液の形
でタバコ葉に適用するか、又は特に巻煙草の場合には、
用紙自体又はフィルターを適当な塩溶液で含浸する。

（Ｑ実　施　例 （１）変異原性及び変異原性抑制効果の測定方法０）方
法：プレインキエベーシ翳ン法（杉材。

長地；ケミカルミエータジエンス、第６巻、４１頁（１
９８１））による。

曝ｉ）使用菌株：ヒスチジン要求性のサルモネラ　タイ
フィミュリウム（５ａ１ｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕ
ｒ　ｉｕｍ）Ｔａ２０５株（以下″Ｓ’、　Ｔａ２０５
株“と略す。） （→試料の調製 （イ）化学物質の場合：ダイアセチル又はグリオキサー
ルは蒸留水に溶かす。一方、所定量の亜硫酸ナトリウム
、硫酸水素 ナトリウム（酸性亜硫酸ナトリウム）。

ピロ亜硫酸ナトリウム、亜ニチオン酸 ナトリウム及び無水亜硫酸も夫々蒸留 水に溶解し、両液を５０μノづつ混合する。

（ロ）レギュラーコーヒー 焙煎コーヒー豆をその２０ｇ当り２５〇−の熱蒸留水で
抽出し、抽出液をコーヒ ーフィルターペーパー（カリタ製Ａ１２）で濾過する。

濾液を凍結乾燥し、乾重 量を測定後、蒸溜水に溶かす。一方、 所定量の亜硫酸ナトリウム！亜硫酸水 素ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム。

亜ニチオン酸ナトリウム及び無水亜硫 酸も夫々蒸溜水に溶解し、両液を５０μｌづつ混合する
。

（ハ）インスタントコーヒーの場合：インスタントコー
ヒーは蒸溜水に溶かす。一 方、所定量の亜硫酸カリウム、亜硫酸 水素ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウム。

亜ニチオン酸ナトリウム及び無水亜硫 酸も夫々蒸溜水に溶かし、各溶液を５０μｌづつ混合す
る。

に）タバコタールの場合：自動吸煙機で集めたタバコタ
ールをジメチルスルホキ シド（以下’ＤＭＳＯ“と略す）に溶かす。

一方、所定量の亜硫酸す）　ＩＪウム、亜硫酸水素ナト
リウム、ピロ亜硫酸カリ ウム、亜ニチオン酸ナトリウム及び無 水亜硫酸は夫々蒸溜水に溶解し、両液 を夫々５０μノづつ採って混合する。対照として５０％
ＤＭＳＯ液を用いる。

（ホ）アルコール飲料の場合：亜硫酸ナトリウム、亜硫
酸水素ナトリウム、ピロ亜 硫酸カリウム、亜ニチオン酸ナトリウ ム及び無水亜硫酸の各所定量を夫々蒸 留水１．０−に溶解し、直ちにアルコール飲料中に添加
し、３０分間室温下に放置する。添加された飲料の２５
−５０−をロータリーエバポレータを用いて４０′ｃ以
下で減圧乾個させ、乾個物を１−の見 に溶解させる。

（神変異原性の測定 前（＠、（イ）〜（ホ）により得られた各試料の１００
ｊＪ／に０．５−の８９ｍ１ｘ　（還元型ニコチン酸ア
ミドアデニンジヌクレオシド（ＮＡＤＰＨ）−産生糸と
肝ホモジェネートの９，０００　ｇ上。

清とを合わせたもの）か又は０．１Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液ｃ　ｐＨ９，４）及び０．１−のサルモネラ菌（
前−記ＴＡ１００株）培養液を加える。この混合液を３
７℃で８０分間振盪後、溶解した２−の軟寒天に加え、
０．１％グルコース寒天プレートに拡げる。なお、前さ
せるのに必要な１０．１μｍｏｌｅ／２−軟寒天／然変
異株として数える。なお、変異菌の発生抑制率は、 ■結　果 （ｉ）亜硫酸ナトリウムのグリオキサール及ｑに対する
変異原性抑制効果 結果は下表（第２表及び第３表）に示さ。、各表から、
グリオキサール２．８１ｍＭでは、亜硫酸ナトリウム８
．０ｍＭの添加で、ダイアセチル４，２０ｍＭでは、亜
硫酸ナトリウム１２ｍＭの添加で、前者個有の変異原性
が完全に消滅１下余白） 第　　　　２　　　　表 第　　　　３　　　　表 ＄　第２表と同じ。

（ｉｉ）含イオウ酸塩類のレギュラーコーヒーに対先述
の方法で調製したコーヒー豆抽出エキス粉オ各２−□−
５’Ｌ−，１０キー、−夫５Ｎ及び２０■を各々蒸留水
中に溶かし５０μｌとする。一方、含イオウ酸の塩類は
、夫々二酸化イオウとして２４０ｐｐｍとなる濃度に蒸
留水で全量５０μノに溶解し、両者を混合する。これを
０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，４）ｏ、ｓ
−と前記Ｓ、　Ｔａ２０５株の培養物０．１４の混合液
と混合し、前（Ｑ　（１）の如く培養し下表（第４表）
の結果を得た。

第　　４　　表 一上表゛の如く、含イオウ酸塩類の中で・亜硫酸ナトリ
ウム以外の３種−の塩類は、二酸化イオウとして１２０
ｐｐｍの濃度でコーヒーエキス２０■に含まれる変異原
物質を完全に無効化することができる。亜硫酸ナトリウ
ムの成績は他の３者に比べやや劣るようであるが、これ
が本質的なものであるのか、あるいは実験の性質上避け
られない偏差であるのか今のところ明らかでない。

（ｉ０含イオウ酸塩類のインスタントコーヒーに対する
効果（その１） 市販インスタントコーヒー粉末各２．５１１９．５■。

１０Ｗｖ、１５ｑ及び２０ｍｙを蒸留水に溶かし５０１
１１とする。一方、亜硫酸ナトリウムを二酸化イオウと
して夫々Ｏｐｐｍ、２５ｐｐｍ、　５０ｐｐｍ、８０ｐ
ｐｍ及び２４０ｐｐｍになるよ−うに蒸留水で各５０μ
ｌに溶解し、両液を合併した上、前記レギュラーコーヒ
ーの場合と同様にリン酸塩緩衝液０．５Ｉｎ！及び菌培
養液０．１−を加え、先述のテストを５回反復した。結
果を下表（第５表）に示す。

表中の数値は５回のテストの平均値である。

第　　５　　表 ・　括弧内は抑制率圀を示す。

上記の示す如く、亜硫酸濃度２４０　ｐｐｍ　では変異
原性が完全に抑制される。亜硫酸濃度８０ｐ　ｐｍにお
いても大部分の変異４が不活化されているので、実用的
には１１００ｐｐ程度の濃度で添加されれば充分であろ
う。

（→含イオウ酸又はその塩類のインスタントコーヒーに
対する変異原性抑制効果（その２）０亜硫酸ナトリウム
、亜硫酸水素ナトリウムピロ亜硫酸カリウム、亜ニチオ
ン酸ナトリウム及び無水亜硫酸を、夫々二酸化イオウと
して２４０ｐｐｍを添加した結果を下表（第６表）とし
て示す。表示の如く、この添加量では被験菌Ｓ、　Ｔａ
２０５株に対する変異原性は完全番と消滅している、な
お、盲検として行った比較実験では、二酸化イオウとし
て２．４０ｐｐｍの発育に全く影響を与えないことが確
認された。

（Ｖ）含硫イオウ酸塩類のタバコ、タールに対する変異
原性抑制効果 タバコタール５００μｇをＤＭＳＯに溶解して５０μノ
にした。一方、亜硫酸水素ナトリウム５０μｇを同じく
蒸留水に溶かし、前記タール溶液と混合して試料とした
。結果を下表（第７表）に示す。表示の如くタバコター
ルの変異原性はｉｏ量の亜硫酸水素ナトリウムの添加に
より完全に消失している。

第　　７　　表 ０）亜硫酸のアルコール飲料に対する変異原性抑制効果
（その１） として夫々２０ｐｐｍ、　６０ｐｐｍ、　１２５ｐｐｍ
及び２５０ｐｐｍとなるように無水亜硫酸を加える。結
果を下−表（第８表）に示す。表示の如く、２５０ｐｐ
ｍの添加で検体の変異原性は完全に抑制される。

（以下余白） 第　　８　　表 「 （ｖｉ　ｉ）亜硫酸塩類のアルコール飲料に対する変異
原性抑制効果（その３） 市販のラムに対して二酸化イオウとして１５０ｐｐｍに
相当する濃度の亜硫酸ナトリウム及び無水亜硫酸を加え
、前（シ）と同様にテストした。

結果を下表（第９表）に示す。表示のとおり、カルバト
スの変異原性は二酸化イオウとして１５０ｐｐｍの亜硫
酸ソ゛−ダ又は無水亜硫酸の添加゛°”’）％４１４Ｃ
“Ｌ、ＴＩ、）６　ｏ、、、、。、第　　９　　表 （ｖｉｌ）亜硫酸塩類のアルコール飲料に対する変異原
性抑制効果（その３） 市販のラムに対して二酸化イオウとして１５０ｐｐｍ相
当量の亜硫酸ナトリウムを加え、前（助と同様に変異原
性の抑制効果を調べた。結果を下表（第１０表）に示−
す。表示の如く、無水亜硫酸として１５０ｐｐｍに相当
する量の亜硫酸ナトリウムの添加により、プレート当り
２．５−の検体による変異原性は完１全に消失する。

第　　１０　　表 以上詳述したとおり、本願発明剤は飲食物や嗜好品に含
まれる変異原性物質を不活化する効果があるので、食品
及び嗜好品の安全性を向上することにより保鍵、優生及
び予防疫学上多大の価値を有する。

昭和５７角を月３日 特許庁長官島田春物　　殿 １、事件の表示 １８８５６　年特許　　順路１４４２７２　　号２、発
明の名称　　杭変異原性剤 ３、　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ４、代理人 （１）　　明細書第１頁、第１１行目：「不治性化する
ため」とあるのを「下皿性化するため」に改める。

（２）　　同、同頁第１６行目ｉ「自体直接的」とある
のを「土星自体直接的」に改める。

（３）　　同、同頁、末行：「変異原性を確認する」と
あるのを「変異原性をＵする」に改める。

（４）　　同第２頁、下から２行目：「ワラビ中」の句
のうち「中」の文字を削除する。

（６）　　同、同頁、末行から同第３頁、１行目にかけ
て「発癌性を疑われているニトロソ化合物が含まれてい
る。」とあるのを「発癌性（７）　　ｔａｍとが知られ
ている（Ｅｖａｎｓら　１９６５°　　ユと１五Ｊｉｄ
ｌめ１める。

（６）　　同、第５頁、、第３行目：「前記物質に対し
３倍の」とあるのを了前記物質に対′し少なくとも約３
倍の」に改める。

（７）　　同、同頁、第１θ行目：「同様二酸化」とあ
るのを「且１に二！逃」に改、める。

（８）　　同、同頁　　、第１１行目：　ｒｓｏ３−添
加により」とあるのをｒａｇ　　ａｓｏ添細により」に
改め（９）　　同第７頁、第３行目：「嗜好品と均密に
」とあるの°を「嗜好品と均一に」に改める。

（ｌＯ）同、同頁、１１〜１２行目：「蒸留水」とある
のを「皇１蒸留水−１４工」１」Ｌユ」と改める。

（川　同、８頁、下から８行目：「（ロ）レギュラーコ
ーヒー」とあるのを「（ロ）ｉｔｓ月コーヒーＩＬｌ＆
Ｊと改める。

θ′４　　同、同頁下から７行目：「焙煎コーヒー豆」
とあるのを「ｌ亙焙煎コーヒー豆見＊ｍ７Ｊと（１１同
、９買占行目と４行目の間に下車を挿入「（ハ）自家焙
煎コーヒー豆の場合 豆の種類：アラビカ種　サントス扁２ 焙煎材ニラツキーコーヒーロースタ−（ガス直火型、−
容量３．６ｋｐ　５ＬＲＡ２）焙煎条件、＝１回当り豆
３．６１ｖを使用態時間　　　前後の重量 Ａ：浅煎り Ｂ：中煎り　　１４分間　　　　２．５ｋｇ０：深煎り
　　１８分間　　　　２．３　ｋｇ（ｂ）　　コーヒー
抽出液の調製 ヒー豆の微粉末を加え、再び１０分間煮沸する。

この煮沸液に重ねて新たなコーヒー豆の粉末５００９を
加え、なお１０分間煮沸後濾過し、テスト用のコーヒー
抽出液を得る。

（ｃ）　　亜硫酸の添加 上のコーヒー抽出液の固形分をＡＴＡＧＯＤＩＧニーＴ
ＡＩＬ　ＲＥＦＲＡｏＴｏＭｚＴｘＲＭｏＤｍＬＤＢＸ
−５０で測定し、その固形分に対して食品添加用亜硫酸
す）　ＩＪウム（漏水、純度９８％）を６水準で添加溶
解させる。

（ｔｌ　−１）：噴霧乾燥二上の亜硫酸添加コーヒー抽
出液を、Ｙａｍａｔｏ　Ｍ工Ｎ工５ＰＲＡＹ　Ｍｏｄｅ
１６０　Ｒを用い入口温度：１１０〜１３３＠Ｏ、出ロ
温度＝５２〜５７＠Ｏ乾燥空気：　０．４５　ｒｒｌ／
分、噴霧空気量：１１／／分、試料送出量：　８８ｍ／
／分の条件で処理し、抽出液５００ｇから乾燥試料２５
ｇを得る。

（ｄ−２）凍結乾燥二上の亜硫酸添加コーヒー抽出液を
、小型凍結乾燥装置（エムニス機器■製凍結乾燥器モデ
ル６ＯＲを用い、下記の条件でフリーズドライを行う。

冷媒温度ニー５５〜５５°Ｃ（メタノール）、真空度”
　５Ｘ　１０”’　Ｔｏｒ’ｒ 収量：抽出液１００ｇから１０９゜」 （１４）同、同頁、４行目：「（））・・・」とあるの
を「坦・・・」と改める。

（以下余白） （１５）　　同、同頁、１１行行目：に）・・・・・・
」とあるのを「囲・・・・・・」と改める。

０＠　同、同頁、最下行：「（ホ）・・・・・・」とあ
るのを［ｆｌ　・・−・・Ｊと改める。

（１η　同、１０頁、下から５行目：「ｐＨ９，４」と
あるのをｒｐＨ：、４　Ｊに改める。

０樽　同、同頁、下から３行目：「８０分」とあるのを
「２０分」と改める。

０Ｉ　　同、１１頁、２行目：　ｒｌＯ，１μｍｏｌｅ
／２ｄ　Ｊとあるのを「担μｍｏ　１　ｅ／２ｄＪと改
める。

−同、同頁、４行目：「コロニー数」とするのを「１♂
個の生存菌数当りのコロニー数」と改める。

＠　同ｓ１３頁、１行目：「・・・・抑制効果」とある
のを「・・・・・・抑制効果（そのｌ）」と改める。

（（２）同、１３頁、２行目：「先述の方法」とあるの
を「先述（ロ）の方法」と改める。

（ト）同、同頁、８行目：　ｒ（ｐＨ９：４）　’Ｊと
あるのを「（ｐ町、４）」と改める。

（４）　同、１４頁、４行目：「亜硫酸ナトリウムｊ以
下、同頁、８行目：「でない。」までの文を以下のと右
りに改める。

「因み番こ、本実験では亜硫酸ナトリウム添加コーヒー
エキス粉末（コーヒーエキス末量’１５’ｌｆ及び２０
１９）における復帰変異コロニー数は０ではないが、こ
れは恐らく実験誤差によるもので菖（ホ）同、同頁８行
１と９行目の間に下車を挿入す「含イオウ酸塩類のレギ
エラーコーヒーに対する変異原抑制効果（その２） 前記ｆ）の方法で調製された亜硫酸ナトリウム添加濃縮
コーヒー粉末（スプレードライ品及びフリーズドライ品
）の前記変異原性テストの結果は下表（第５表）のとお
りであった。

〔以下余白〕

第　　５　　表 ４）インスタントコーヒー１２４分当り（１５帽Ｖｑ（
固形分３ｇ））として上表のように、変異原性の最も高
い中煎りコーヒーの場合でも、コーヒーエキス粉末１ｍ
当り２０〜の５０３の添加で変異原性は完全に消滅して
いる。」 （１）同、同頁、下から２行目：「（第５表）」とある
のを「第互表」と改める。

（ロ）同、５頁、１行目：「第５表」とあ葛のを「第１
表」と改める。

（１）同、同頁、最下行：「（第６表）」とあるのを「
（第１表）」と改める。

７行目：「第６表」とあるのを「 第１表」と改める。

（１）同、同頁「第６表（補正後の第７表）ｌｋの横軸
の見出中「亜ニチオン酸」とあるのを「亜ニチオン酸ナ
トリウム」゛と改める。

＠）　同、同頁、下から５行目：「含硫イオウ酸メ′」
とあるのを「含イオウ−・・・・」と改める（「硫」の
文字を削る。）。　　　− Ｃ３２）　　同、１７頁、１行目：「（第７表）」とあ
るのを「（第土表）」と改める。

（１）同、同頁、５行目：「第７表」とあるのを「郊υ
」と改める。

（帥　同、同頁、下から２行目：「（第８表）」とある
のを［（第９表）ｊと改める。

（１）同、１８頁、１行目：「第８表」とあるのを「第
１表」と改める。

（（ロ）同、同頁、下から４行目：「（第９表）」とあ
るのを「（第狂表）」と改める。

＠）同、１９頁、１行目：「第９表」とあるのを「第す
表ｊと改める。

（以　上） 手続補正書（自発） 昭和５７年２月５日 特許庁長官　島　１）春物殿 １、事件の表示 昭和５６年　　特　許　順路１４４２７２号２、発明の
□名称　　抗変異原性剤 事件との関係　特許出願人 ４、代理人 ５、　補正命令の日付　　なし ６、　補正により増加する発明の数　　なし７、補正の
対象　明細書の「発明の詳細な説明」の項ｒ　（ｉｖ）
含イオウ酸塩類」と改める。

（２ｍ同、１５頁、下から６行目：「（１◇含イオウ酸
」とあるのを「■　含イオウ酸」と改める。

ヲ「（」含イオウ酸」と改める。

（４）同、１７頁、下から７行目：「（ｖｌ）亜硫酸の
」とあるのを「（聾９亜硫酸の」と改める。

（５）同、１８頁、下から９行目：［（７ｉｉ）亜硫酸
塩類の」とあるのを「（ｖｉｉｉ）亜硫酸塩類の」と改
める。

（６）（同、１９頁、下から８行目、　「（ｖｔｕ）亜
硫酸塩類の」とあるのをｒ　（ｉＸ）−亜硫酸塩類の」
と改める。

★へ硫）は２月６日島正書にて削除ずみ。

手続補正書 昭和５７年２月２６日 特許庁長官島田春物　殿 １、事件の表示 昭和５６年　　特許順路１４４２７２号２、発明の名称
　　抗変異原性剤 ３、　補正をする者 事件との関係　特許出願人 １ｐｔｔｉ（名称）　　　藉　易　　ｗＶ４、代理人 訂正　明　　　細　　　書 １、発明の名称 抗変異原性剤 （１）　　亜硫酸塩、酸性亜硫酸塩、ピロ亜硫酸Ｎ亜ニ
チオン酸塩又は無水亜硫酸を有効成分とする抗変異原性
剤。

３、発明の詳細な説明 囚　発明の背景 本発明は抗変異原性剤、殊に食品及び嗜好品中の変異原
性物質を不活性化するための抗変異原性剤に関する。

近年１人体の組織又は器管における発癌原因の探究と関
連して、生物に対し突然変異を起こさせる物質（変異原
性物質）が注目を浴びている。この変異原性物質のすべ
てが、それ自体直接的な発癌原因であるかどうか今のと
ころ明らかではないが、少くとも変異原性と発癌性との
間に高度の相関性が存することは識者の認めるところで
あって、このため変異原性を検出する手段として微生物
に対する突然変異性の存否を指標とする＾ｍｅｓ（エイ
ムス）法その他の生物検定法が考案され、生活関連物質
の発癌性検定のため広く利用されている。

しかしどのように京間な検索を行ったとしても、生活関
連物質の全部について検定することは事実上不可能であ
る。のみならず、食品のように、大吉の昔からヒトの生
活と密接に結びついている物品の場合には、たとえその
中に変異原性物質が見つかったとしても、当該食品の摂
取を禁止するような法的措置を採るのは難しい。今日、
多くの変異原性物質のうちで、食品中に含まれることが
明らかなものとしては、ダイアセチル、り・−ル等があ
フ、また加工食品においては、焼魚、ステーキ、焼肉、
ハンバーグ等の焼成食品や紅茶、コーヒー等のカフェイ
ン飲料及びブランデー。

バーボンウィスキー、ラム等のアルコール飲料にも変異
原性が認められている。さらに天然食品そのものであっ
ても、ワラビには発癌性の存することが知られている（
Ｅｖａｎｓら。

１９６５　：広野ら、１９７５）。さらに食品ではない
が、タバコのタール中にも３，４−ベンツピレンなどの
発癌性物質が存在するのは周知のことである。

以上概観したように、多くの食品における変異原性物質
の存在は、余りにも普遍的な事実であるために、予防医
学や優生学上の立場からだとえ望ましくない食品であっ
ても、これをヒトの食品のりヌトから除くのは非常に困
難である。特に対象が天然食品それ自体でおる場合には
、その食用禁止は殆んど不可能であると云ってよい。本
発明は食品や嗜好品の特殊性に鑑み、それらの中に変異
原性物質が含まれている場合は熱論、たとえ変異原性物
質の存在が疑われる場合でも、当該物質の変異原性を消
滅させるか又はこれを減弱させることによって、当該食
品等の安全性を向上させ、ひいてｉ′当該食品等に対す
る信頼性を回復させようとするものである。因みに、従
来からも変異原性の減弱を目指す試みは多少性われてお
υ、例えばタバコの父異原性低減剤としてタンニン酸、
糖類などが発表されているが（特開昭ｆｉ６−１５６８
１．同５８−１８６５９７゜同５８−９１１９７等）％
これら抗変異原性低下剤の効力は比較的小さく、しかも
食品中の変異原性物質については効果がない。

しかるに、本発明者らは全く別の観点から食品及゛び嗜
好品中の変異原性物質の不活化手段について鋭意研究に
努めた結果、ここに亜硫酸塩、酸性亜硫酸塩（亜硫酸水
素塩）、ピロ亜硫酸塩、亜ニチオン酸塩又は無水亜硫酸
が食品及び嗜好品中の変異原性物質の不活化剤として著
しい効力を有する事実を発見した。

これらの化合物中で、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナ
トリウム、ピロ硫酸カリウム、亜ニチオン酸ナトリウム
及び無水亜硫酸等は、既に食品用の漂白剤、保存料又は
酸化防止剤として使用され、食品添加物としての用途を
を不活化する効果は全く知られておらず、従ってこれら
を食品や嗜好品の抗斐異原性剤として利用する用途は全
く新規な事項である。

本発明によれば、ダイアセチル及びグリオキサールの変
異原性は、前記物質に対し少なくとも約８倍の七歩数の
亜硫酸イオン（ＳＯ３−）によシ完全に不活化される。

またコーヒーの変異原性は、レギュラー、インスタント
共に亜硫酸塩を二酸化イオウ（Ｓｏｎ）として２０〜３
０〇−含有させることＫよシはぼ又は完全に不活化され
ることができる。同様に、バーボンウィスキー、アップ
ルブランデー、ラム等の７ルコール飲料の変異原性も、
同じく二酸化イオウとして２０〜３００−の亜硫酸塩の
添加によシ概ね又は完全に不活化される。さらにタバコ
のタール中に含まれる変異原性物質も、亜硫酸塩又は無
水亜硫酸によシ同様に不活化される。なお、以上の抗変
異原性作用は、亜硫酸塩及び二酸化イオウ（無水亜硫酸
）の他、酸性亜硫酸塩（ＭＨ５Ｏａ）　（Ｍは１価の金
属原子を表わす。以下同じ。）、ピロ亜硫酸塩（Ｍｉｓ
ｔ０６）及び亜ニチオン酸塩（ＭｇＳｇＯ４）でも殆ん
ど同様である。しかも上記添加濃度の範囲内では、対象
の食品又は嗜好品の風味に全く又は殆んど影響を与えな
いことも見出された。

本発明は、以上の知見に基づき、亜硫酸塩、酸性亜硫酸
塩、ピロ亜硫酸塩、亜ニチオン酸塩又は無水亜硫酸を有
効成分とする抗変異原性剤を必須の構成要件とする。こ
こに無水亜カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム
塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩及びアルミ
ニウム塩等の無毒の金属又はアンモニウム塩基の塩類の
形で使用されるが、特にカリウム塩及びナトリウム塩は
、水溶性。

安定性及び食品添加物としての許容性の点で最適である
。以下代表的な塩類の組成及び分解点を第１表としぞ一
括表示する（括弧内は分解点）。

第　　　１　　　表 米溶液としてのみ存在 本発明剤は通常粉末や溶液の形で被処理食品又は嗜好品
と均一に混ぜ合わされて使用される。しかし所望によシ
密閉室内でガス状ＳＯ，により燻蒸処理することも可能
であ乞。

また対象がコーヒーの場合には、砂糖、コーヒークリー
ム、粉末クリーム等の中へ粉末又は溶液の形で混入して
もよい。あるいはレギュラーコーヒーの浸出液ｔｍ過す
るため−フィーー゛−ルターベーバー又はクロスに所望
の塩を浸漬付着させることもできる。さらにタバコの場
合は、塩の水溶液又は香味付用のシェリー酒中に該塩を
溶解したてレーバー溶液の形でタバコ葉に適用するか、
又は特忙巻煙草の場合には、用紙自体又はフィルターを
適当な塩溶液で含浸する。

（Ｃ１実施例 ■　変異原性及び変異原性抑制効果の測定方法 村、長尾；ケミカルミュータジェンス。

第第６巻、　４１頁（１９８１）による。

（ＩＩ）使用菌株：ヒスチジン要求性のサルモネラ　タ
イフィミュリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ）ＴＡ１００株（以下”Ｓ、　ＴＡ　１００
株〃と略す。）　　　　　　　　　′ （１１０試料の調製 （イ）化学物質の場合：ダイアセチル又はグリオキサー
ルは蒸留水に溶かす。一 方、所定量の亜硫酸ナトリウム、硫酸 水素ナトリウム（酸性亜硫酸ナトリウ ム）、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜ニチ オン酸ナトリウム及び無水亜硫酸も夫 々無菌蒸留水（以下同じ）に溶解し、両液１に５０μｌ
づつ混合する。　　　゛（ロ）市販焙煎コーヒ。豆の場
合：市販焙煎コーヒー豆の微゛粉末をその２０ｇ当シ熱
蒸留水で抽出し、抽出液を コーヒーフィルターベニパー（カリタ 製＆１２）で濾過する。濾液を凍結乾燥し、乾重量を測
定後、蒸溜水に溶かす。

一方、所定量の亜硫酸ナトリウム、亜 硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸カリ ウム、亜ニチオン酸ナトリウム及び無 水亜硫酸も夫々蒸溜水に溶解し、両液 を５０μｌづつ混合する。

（ハ）自家焙煎コーヒー豆の場合： （ａｌ　　コーヒー豆の焙煎 豆の種類：アフビカ種　サント騙２ 焙ｕ機：ラッキーコーヒーロースタ ーニ（ガス直火型、容量１吻５ＬＲＡ２）焙煎条件＝１
回当シ豆８．６に９を使用焙煎程度　焙煎時間　焙煎後
の重量 Ａ：浅煎り　　１０分間 Ｂ：中煎＃）　　１４分間　　　　２．５　ｋ’ＩＣ：
深煎夛　　１８分間　　　　２．８　ｋｇ（ｂ）　　コ
ーヒー抽出液の調製 焙煎コーヒー豆の微粉末５００ｇに 湯４１を加え、１０分間煮沸後、布で 濾過する。濾液に新たに同量のコー ヒー豆の微粉末を加え、再び１０分 間煮沸する。この煮沸液に重ねて新 たなコーヒー豆の粉末５００ｇを加え、なお１０分間煮
沸後濾過し、テスト用 のコーヒー抽出液を得る。

（０）亜硫酸の添加 上のコーヒー抽出液の固形分を ＡＴＡＧＯＤＥＧＩ−↑ＡＬ　ＲＥＥＲＡＣＴＯＭＥＴ
ＥＲＭＯＤＥＬ　ＤＢＸ−５０で測定し、その固形分に
対して食品添加用亜硫酸ナトリ ウム（無水、純度９８％皆水準で添加 溶解させる。

（１１１ｍ末化法 （ｄ−１）：噴霧乾燥：上の亜硫酸添 加コーヒー抽出液を、Ｙａｍａｔｏ　ＭＩＮＩ　−５Ｐ
ＲＡＹ　Ｍｏｄｅｌ　６０Ｒを用い入口温度＝１１０〜
１８３℃、出口温度：５２〜５７℃乾燥空気：０．４！
ｌ＋ｎ／／分、噴霧空剣量＝１１／／分、試料送出量：
８８譚ｌ／分の条件で処理し、−抽出液５００ｇから乾
燥試料２５ｇを得る。

（ｄ−２）凍結乾燥：上の亜硫酸添加 コーヒー抽出液を、小型凍結乾燥装 置（エムニス機器■製凍結乾燥器モ、デ／Ｌ／　６０Ｒ
を用い、下記の条件でフリーズドライを行、う。） 冷媒温度ニー５５〜５５℃（メタノール）、真空度：　
５Ｘ１０−’　Ｔｏｒｒ 収量：抽出液１００ｇから１０ｇ。

に）　インスタントコーヒーの場合：インスタントコー
ヒーは蒸溜水に溶かす。

一方、所定量の亜硫酸力１１ウム、亜硫酸水素ナトリウ
ム、ピロ亜硫酸カリウ ム、亜ニチオン酸すトリウム及び無水 亜硫酸も夫々蒸溜水に溶かし、各溶液 を５０μｌづつ混合する。

（ホ）タバコタールの場合：自動吸煙機で集めたタバコ
タールをジメチルスルホ キンド（以下〃ＤＭＳＯ；ｚと略す）に溶かす。

ム及び無水亜硫酸は夫々蒸溜水に溶解 し、両液を夫々５０μｌづつ採って混合する。対照とし
て５０％ＤＭＳＯ液を用いる。

（へ）　アルコール飲料の場合：亜硫酸ナトリウム、亜
硫酸水素ナトリウム、ピロ 亜硫酸カリウム、亜ニチオン酸ナトリ ウム及び無水亜硫酸の各所定量を夫々 蒸溜水１．　（ｈｓｌに溶解し、直ちにアルコール飲料
中に添加し、３０分間室温下 に放置する。添加された飲料の２５〜５０ｍ１　ｋロー
タリーエバポレータを用いて４０℃以下で減圧乾個させ
、乾個物を１ｍｌのＤＭＳＯに溶解させる。

Ｏｖ）　　変異原性の測定 前（ｉｕ）、（イ）〜（へ）により得られた各試料の１
００μｌに０．１Ｍ　　リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７，４）及び０．１ｇ／のサルモネラ菌（前記Ｔａ２０
５株）培養液を加える。この混合液を３７°Ｃで２０分
間振盪後、溶解した２１ＩＩｌの軟寒天に加え、０，１
％グルコース寒天プレートに拡げる。なお、前記軟寒天
には菌をプレート上で数回分裂させるのに必要な０．１
μｍｏｌｅ／２ｇｌ軟寒天／プレートのヒスチジンを加
えておく。３７°Ｃで４８時間静置後、プレート上の１
０８個の生存菌数当りのコロニー数を復帰突然変異株と
して数える。なお、変異菌の発生抑制率は、 厘結果 （１）亜硫酸ナトリウムのグリオキサ−ρ及びダイアセ
チルに対する変異原性抑制効果 結果は下表（第２表及び第３表）に示さることが判る。

　　　　５ （以下余白） 第　　２　　表 ＊゛対照コロニー数を控除した残数（以下同じ）第　　
８　　表 ＊　第２表と同じ に対する変異原性抑制効果（七の讐） 先述（ロ）の方法で調製したコーヒー豆抽出エキス粉末
各２ダ、５ダ、　１０ダ、１５岬及び１ＭＩを各々蒸溜
水中に溶かし５０μｌとする。一方、含イオウ酸の塩類
は、夫々二酸化イオウとして２４０Ｆとなる濃度に蒸溜
水で全量５０μｌに溶解し、両者を混合する。これを０
．１Ｍ　　リン酸ナトリウム緩衝液（ｔｔＨ７，４）０
．５ｍｌ　ト前記１Ｇ１．ｉ↑）Ａ（ｗｔ１株の培養、
物０．．１　ｍの混合液と混合し、前１ｏ（１）の如く
培養し下表（第４表）の結果を得た。

（以下空白） 第　　４　　表 上記の如く、含イオ７つ酸塩類の中で亜硫酸ナトリウム
以外の３種の塩類は、□二酸化イオウとして１２０Ｆ？
”の濃度でコーヒーエキス２０〜に含まれる変異原物質
を完全に無効化することができる。

因みに、本実験では亜硫酸す）　ＩＪウム添加コーヒー
エキス粉末（コーヒーエキス末量１５９及び２０岬）に
おける復帰斐異コロニー数はＯではないが、これは恐ら
く実験誤差によるものであろう。

（ＩＩＩ）　　含イオウ酸塩類のレギュラーコーヒーに
対する変異原抑制効果（その２） 前記（ハ）の方法で調製された亜硫酸ナトリウム添加濃
縮コーヒー粉末（スプレードライ品及びフリーズドライ
品）の前記変異原性テストの結果は下表（第５表）のと
おりであった。

（以下空　白） 第　　６　　表 ２）　、５ｏａＩＩＦ／固形分ｇ ８）コーヒー粉末１１）η当少 ４）インスタントコーヒー１杯分当り（１５（ｌｄ／”
イ（固彰分８ｇ））とじて上表のように、変異原性の最
も高い中煎粉末１ｇ当、ＨＯ１１９の８０８の添加で変
異原性は完全に消滅している。

０％ｈ　含イオウ酸塩類のインスタントコーヒーに対す
る効果（その１） 市販インスタントコーヒー粉末各２・５１ｇ９゜５ｊｌ
Ｆ、１０ｊｌＦ、１５１Ｐ及び２０ｘｖを蒸留水に溶か
し５０μｌとする。一方、亜硫酸ナトリウム８０Ｐ及び
２４０Ｐになるように蒸留水で各５０μｌＶｃ溶解し、
両液を合併した上、前記レギュラーコーヒーの場合と同
様にリン酸塩緩衝液０．５ｍ及び菌培養液０．１−を加
え、先述のテストを５回反復した。結果を下表（第６表
）に示す。

表中の数値は５回のテストの平均値で ある。

第　　　６　　表 上記の示す如く、亜硫酸濃度２４０Ｐでは変異原性が完
全に抑制される。亜硫酸濃度８０Ｗａにおいても大部分
の変異原性が不活化されているので、実用的には１００
Ｐ程度の濃度で添加されれば充分であろう。

（ｖ）含イオウ酸又はその塩類のインスタントコーヒー
に対する変異原性抑制効果 （その２） 亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリ ウム、ピロ亜硫酸カリウム、亜ニチオン酸ナトリウム及
び無水亜硫酸を、夫々二酸化イオウとして２４０１？”
を添加した結果を表（第７表）として示す。表示の如く
、の添加量では被験菌８．ＴＡＩｇ□株に対す変異原性
は完全に消滅している。なお 盲検として行った比較実験では、二酸 イオウとして２４０ｗ−の添加では菌の発育全く影響を
与えないことが確認された 第　　　７　　　表 する変異原性抑制効果 タバコター／’５００Ｉｌり゛をＤＭＳＯＫ溶解シテ５
０μｌｌ／Ｃした。一方、亜硫酸水素ナトリ下　　　ム
５ｏμｇを同じく蒸溜 ζ　　　−ｉ溶液と混合して試料とし念。結果をる　　
　下表（第８表）に示す。表示の如くタバコ、　　　タ
ールの変異原性はし、。量の亜硫酸水素す化　　　トリ
ウムの添加にょフ完全に消失している。

Ｋ　　　　第８表 （Ｖｌ）　　亜硫酸のアルコール飲料に対する変異原性
抑制効果（その１） 市販のパーポンウィスキーに二酸化イ オウトシテ夫ｋ　２０ｐ、　６０ｐ、　１２５ＦＦＩ及
び２５ＯＦＦＷとなるように無水亜硫酸を加える。結果
を下表（第９表）ＶＣ示す。表示の如く、２５０Ｐの添
加で検体の変異原性は完全に抑制される。

ン 問Ｏ亜硫酸塩類のアルコール飲料に対するて１５ＯＦＦ
に相当する濃度の亜硫酸ナトリウム及び無水亜硫酸を加
え、前６Ｖ）と同様にテストした。結果を下表（Ａｌ　
ｏ表）Ｋ示す。

表示のとおシ、カルドパスの変異原性は二酸化イオウと
して１５ＯＦＦｍの亜硫酸ソーダ又は無水亜硫酸の添加
にょシ完全に消滅している。

０沁　亜硫酸塩類のアルコール飲料に対する変異原性抑
制効果（その３） 市販のラムに対して二酸化イオウとし て１５０？ＩＳ相当量の亜硫酸ナトリウムを加え、前Ｇ
Ｖ）と同様に変異原性の抑制効果を調べた。結果を下表
（第１１表）に示す。表示の如く、無水亜硫酸として１
５０Ｐに相当する童の亜硫酸ナトリウムの添加により、
プレー）当ｆｉ２．５艷の検体による変異原性は完全に
消失する。

第　　１１　　衷 以上詳述したとおり、本願発明剤は飲食物や嗜好品に含
まれる変異原性物質を不活化する効果があるので、食品
及び嗜好品の安全性を向上することによシ保健、優生及
び予防疫学上多大の価値を有する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １１）　　亜硫酸塩、酸性亜硫酸塩、ピロ亜硫酸塩、亜
   ニチオン酸塩又は無水亜硫酸を有効成分とする抗変異原
   性剤。