JPS5841836B2 - 可溶性肝臓ウリカ−ゼ、その製法及び尿酸の測定法 - Google Patents
可溶性肝臓ウリカ−ゼ、その製法及び尿酸の測定法Info
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- JPS5841836B2 JPS5841836B2 JP57117076A JP11707682A JPS5841836B2 JP S5841836 B2 JPS5841836 B2 JP S5841836B2 JP 57117076 A JP57117076 A JP 57117076A JP 11707682 A JP11707682 A JP 11707682A JP S5841836 B2 JPS5841836 B2 JP S5841836B2
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、低いｐＨ値でも可溶性の肝臓ウリカーゼ、そ
の製法及び尿酸の測定にそれを使用することに関する。
の製法及び尿酸の測定にそれを使用することに関する。
ウリカーゼは、広く動物界に分布し、殊に動物の肝臓中
に存在する酵素であり、これは、酸素の存在下に、次の
反応式に示すように尿酸を酸化してアラントイン、Ｈ２
Ｏ２及びＣＯ２を形成する反応に触媒作用をする： 前記反応に基づき、肝臓ウリカーゼは、反応生成物殊に
Ｈ２Ｏ２をそのために慣用の方法で測定することによる
尿酸の測定のために好適であるはずである。
に存在する酵素であり、これは、酸素の存在下に、次の
反応式に示すように尿酸を酸化してアラントイン、Ｈ２
Ｏ２及びＣＯ２を形成する反応に触媒作用をする： 前記反応に基づき、肝臓ウリカーゼは、反応生成物殊に
Ｈ２Ｏ２をそのために慣用の方法で測定することによる
尿酸の測定のために好適であるはずである。
しかしながら、肝臓ウリカーゼの重大な１つの欠点は、
この酵素は比較的高いｐＨ値、通例９〜１１においての
み可溶性であることである。
この酵素は比較的高いｐＨ値、通例９〜１１においての
み可溶性であることである。
従って、肝臓ウリカーゼにより触媒作用をうけた反応を
、例えば生じたＨ２０□の酵素による測定のために必要
であるような他の反応と連結することは困難である。
、例えば生じたＨ２０□の酵素による測定のために必要
であるような他の反応と連結することは困難である。
それというのも、そのためには一般にほぼ中性のｐＨ値
が必要であるからである。
が必要であるからである。
中性ｐＨ値でも充分に可溶性であるウリカーゼも公知で
あるが、これらは、微生物例えばカンジダ・ウチリ、；
ｚ、 （Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ）又はアスペ
ルギルス・フラツフ（Ａｓｐｏｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａ
ｖｕｓ ）から得られるはずであり、従ってその分析の
目的の使用性を制限する程度に著しく高価である。
あるが、これらは、微生物例えばカンジダ・ウチリ、；
ｚ、 （Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ）又はアスペ
ルギルス・フラツフ（Ａｓｐｏｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａ
ｖｕｓ ）から得られるはずであり、従ってその分析の
目的の使用性を制限する程度に著しく高価である。
このことは、ヨーロッパ特許出願公告第００１２４４６
号明細書から公知のストレストマイセスからの酸性ウリ
カーゼにもあてはまる。
号明細書から公知のストレストマイセスからの酸性ウリ
カーゼにもあてはまる。
従って、本発明は、肝臓例えば豚肝臓から９より高いｐ
Ｈ値で溶出させることのできる入手容易な酵素を、前記
欠点を除き、この酵素を中性又は酸性の媒体中でも使用
することができるように変えることを課題としている。
Ｈ値で溶出させることのできる入手容易な酵素を、前記
欠点を除き、この酵素を中性又は酸性の媒体中でも使用
することができるように変えることを課題としている。
この課題は、本発明により、担体物質としての水溶性の
多糖類、ポリ酸無水物、ポリビニルピロリドン又は酸無
水物に共有結合していて、なお６より低いｐＨ値でも可
溶である肝臓ウリカーゼにより解決される。
多糖類、ポリ酸無水物、ポリビニルピロリドン又は酸無
水物に共有結合していて、なお６より低いｐＨ値でも可
溶である肝臓ウリカーゼにより解決される。
本発明は、意外にも、前記種類の水溶性物質に結合され
た肝臓ウリカーゼは、その他のその特性をあまり変える
ことなしに、中性ｐＨ値においてだけでなく、酸性領域
でも極めて可溶性である事実に基づいている。
た肝臓ウリカーゼは、その他のその特性をあまり変える
ことなしに、中性ｐＨ値においてだけでなく、酸性領域
でも極めて可溶性である事実に基づいている。
従って、本発明による調製物は、１〜１１のｐＨ−値で
の溶解性に関して優れている。
の溶解性に関して優れている。
更に、本発明により変性された酵素は、ｐＨ５，０まで
で、可溶性であるだけでなく、活性でもあり、例えばｐ
Ｈ７，０では、ｐＨ９，５の最適ｐＨ値で測定した活性
の約４０％をも有する。
で、可溶性であるだけでなく、活性でもあり、例えばｐ
Ｈ７，０では、ｐＨ９，５の最適ｐＨ値で測定した活性
の約４０％をも有する。
従ってこれは、中性媒体中での尿酸の測定のためにも極
めて好適である。
めて好適である。
天然の肝臓ウリカーゼは、一般に、９．５より高いｐＨ
値ではじめて溶解し、９．０より低いｐＨ値では溶液か
ら再び沈殿する。
値ではじめて溶解し、９．０より低いｐＨ値では溶液か
ら再び沈殿する。
しかしながら、本発明により変性された形では、ｐＨ１
までもその溶解性が残存する。
までもその溶解性が残存する。
本発明による肝臓ウリカーゼは、その特性に基づき、す
べての公知のウリカーゼとは容易に区別することができ
る。
べての公知のウリカーゼとは容易に区別することができ
る。
更に、本発明により変性された肝臓ウリカーゼは、その
免疫学的特性は不変のまま保持し、従って担体結合した
形でも、免疫学的には肝臓ウリカーゼとして認められ、
他の起源のウリカーゼとは区別することができる。
免疫学的特性は不変のまま保持し、従って担体結合した
形でも、免疫学的には肝臓ウリカーゼとして認められ、
他の起源のウリカーゼとは区別することができる。
酵素の特性を担体固定により変えることができることは
公知である。
公知である。
例えば、活性の変化、最適ｐＨ値の移動、ミカエリス定
数、特異活性及び酵素の安定性の変化は文献に記載され
ている。
数、特異活性及び酵素の安定性の変化は文献に記載され
ている。
しかしながら可溶性担体への結合により１酵素の溶解特
性を、本発明の生成物におけるように著しく変えること
ができることは公知ではなかった。
性を、本発明の生成物におけるように著しく変えること
ができることは公知ではなかった。
工でチーム（Ｅｎｚｙｍｅ ） ２６巻（１９８１年）
４９〜５３頁の記載から、酵母ウリカーゼ（Ｃａｎｄｉ
ｄａｕｔｉｌｉｓからの）をポリエチレングリコールに
結合し、この際に、その免疫学的特性に関して検査した
可溶性生成物が得られたことは公知である。
４９〜５３頁の記載から、酵母ウリカーゼ（Ｃａｎｄｉ
ｄａｕｔｉｌｉｓからの）をポリエチレングリコールに
結合し、この際に、その免疫学的特性に関して検査した
可溶性生成物が得られたことは公知である。
この場合、溶解性の変化は報告されていない。
可溶性担体物質としては、本発明の範囲では多糖類が優
れている。
れている。
特に水溶性デキストランが優れている。
しかしながら、他の可溶性の多糖類例えば殊に可溶性デ
ンプン、糖又は合成糖ポリマーを用いても良好な結果が
得られた。
ンプン、糖又は合成糖ポリマーを用いても良好な結果が
得られた。
糖類としてはサツカライド、例えばサッカロースが特に
好適であることが立証された。
好適であることが立証された。
単糖類及び三糖類と例えばエビハロゲンヒドリンとの反
応により得られるような高分子量のポリマーも好適であ
ることが立証され、本発明の範囲での多糖類の中に入る
。
応により得られるような高分子量のポリマーも好適であ
ることが立証され、本発明の範囲での多糖類の中に入る
。
しかしながら、好適な担体物質は、多糖類のみに限られ
るものではなく、酸無水物、ポリ酸無水物又はポリビニ
ルピロリドンも好適である。
るものではなく、酸無水物、ポリ酸無水物又はポリビニ
ルピロリドンも好適である。
好適な酸無水物の例は無水コハク酸であり、ポリ酸無水
物の例は、メチルビニルエーテルと無水マレイン酸との
コポリマーである。
物の例は、メチルビニルエーテルと無水マレイン酸との
コポリマーである。
スクシンイミド誘導体も好適であると立証された。
ミカエリス定数ＫＭ及び最大速度■ｍａｘは、本発明に
より変性された酵素では、天然の肝臓ウリカーゼに比べ
ていくらか変えられている。
より変性された酵素では、天然の肝臓ウリカーゼに比べ
ていくらか変えられている。
この変化は、ある程度、担体物質の分子量に依り決まる
ことは明らかである。
ことは明らかである。
この場合ＫＭ−値はまったく影響されず、■ｒｎａＸは
担体の分子量に反比例して小さくなる。
担体の分子量に反比例して小さくなる。
殊に高分子量の担体物質例えばデンプン及びデキストラ
ンでは、最低１００００分子量が存在すべきである。
ンでは、最低１００００分子量が存在すべきである。
本発明により変性された肝臓ウリカーゼの分子量は、担
体物質の分子量に依り決まる。
体物質の分子量に依り決まる。
例えばデキストランＴＩＯで変性された酵素に対しては
、１８００００〜２０００００ダルトンの分子量が測定
され、デキストランＴ４０では、３５００００〜５００
０００ダルトンの分子量が存在した。
、１８００００〜２０００００ダルトンの分子量が測定
され、デキストランＴ４０では、３５００００〜５００
０００ダルトンの分子量が存在した。
この分子量測定はクエン酸塩緩衝液（ｐＨ５，８）中で
のゲルクロマトグラフィにより実施した。
のゲルクロマトグラフィにより実施した。
天然の肝臓ウリカーゼの分子量は、この条件下では、酵
素の不溶解性に基づき測定できない。
素の不溶解性に基づき測定できない。
ミカエリス定数ＫＭ及び最大速度■ｍａＸを天然゛のウ
リカーゼ及び酵素用担体物質としての前記の２種のデキ
ストランに関して測定した。
リカーゼ及び酵素用担体物質としての前記の２種のデキ
ストランに関して測定した。
結果は次のとおりであった：
本発明により変性された肝臓ウリカーゼは、硫酸アンモ
ニウムでもはや沈殿可能ではないが、アセトンでは良好
に沈殿する。
ニウムでもはや沈殿可能ではないが、アセトンでは良好
に沈殿する。
アセトン沈殿は、活性の保持下に可逆的である。
従って、これは、殊に本発明の酵素の単離のためにも好
適である。
適である。
高温度（６０℃）でのこの酵素の温度安定性は、天然酵
素におけるよりも著しく良好である。
素におけるよりも著しく良好である。
後者はこの温度で２００分後に当初活性の５％のみを有
するが、本発明による酵素の活性は、同じ時点でなお８
２％であった。
するが、本発明による酵素の活性は、同じ時点でなお８
２％であった。
６０℃で２４０分の後には、天然酵素は不活性であり、
本発明による酵素は当初活性のなお７９％を有する。
本発明による酵素は当初活性のなお７９％を有する。
本発明による酵素の製造は、公知方法で行なう。
即ち水溶液中のウリカーゼに、水溶液中でＮＨ２基と反
応する基少なくとも１個を有する溶けた担体物質を、９
〜１■ＯｐＨ値で反応させる。
応する基少なくとも１個を有する溶けた担体物質を、９
〜１■ＯｐＨ値で反応させる。
ブロムシアン又は塩化シアヌルで活性化されたＯＨ−基
を有する担体物質を用いで特に良好な結果が得られた。
を有する担体物質を用いで特に良好な結果が得られた。
このカップリングは、０℃〜室温の温度範囲で行なうの
が有利であるが、それより高い温度も低い温度も使用で
きる。
が有利であるが、それより高い温度も低い温度も使用で
きる。
１０．０〜１１、ＯのｐＨ値でこのカンプリングを行な
うのが有利である。
うのが有利である。
しかしながら、当業者に公知の他の酵素固定法を使用す
ることもできる。
ることもできる。
できるだけ高い活性収率を得るために、酵素対担体分子
のモル比を、酵素のＮＨ２−基の比較的小部分のみが変
性されるように選択するのが有利であると立証された。
のモル比を、酵素のＮＨ２−基の比較的小部分のみが変
性されるように選択するのが有利であると立証された。
このことは、殊に、低分子量の担体物質の場合にあては
まる。
まる。
その都度の好適な量比は、種々の担体量を用いる予備実
験で、その都度の所望活性収率に応じて容易に決定する
ことができる。
験で、その都度の所望活性収率に応じて容易に決定する
ことができる。
カップリング反応の終結後に、本発明による酵素は、例
えばアセトンの添加により沈殿させかつ単離させること
ができる。
えばアセトンの添加により沈殿させかつ単離させること
ができる。
しかしながら、得られた溶液を有利に透析により予め精
製した後に凍結乾燥させるのが有利である。
製した後に凍結乾燥させるのが有利である。
この凍結乾燥時に、酵素の凍結乾燥時に通例使用される
ような安定剤を添加するのが有利である。
ような安定剤を添加するのが有利である。
特に、凍結乾燥用の安定化性添加物として、サッカロー
ス及びマンニットが好適であることが立証され、これら
は単独で又は混合して使用することができる。
ス及びマンニットが好適であることが立証され、これら
は単独で又は混合して使用することができる。
本発明による酵素調製物は、前記のように、尿酸の測定
のために極めて好適である。
のために極めて好適である。
このために好適な本発明による試薬は、本発明による可
溶性肝臓ウリカーゼ、緩衝液、Ｈ２Ｏ２、アラントイン
又はＣＯ２の測定用の系より戒る。
溶性肝臓ウリカーゼ、緩衝液、Ｈ２Ｏ２、アラントイン
又はＣＯ２の測定用の系より戒る。
存在する尿酸量の尺度として、例えば酸素電極を用いる
酸素吸収を測定することも可能である。
酸素吸収を測定することも可能である。
次に実施例につき本発明を説明する。
例１
（ａ） 酵素の予備調製
ウリカーゼ（ＢＭ１５０７４６．３０〜５０Ｕ／ｍｌ、
９〜１０Ｕ／歪白質７ｉＱ） ５ ｆヲ、４℃で、炭酸
ナトリウム／重炭酸ナトリウム−緩衝液（０，１Ｍ、
ｐＨ１０，２） ４ Ｘ ２１に対して透析させる。
９〜１０Ｕ／歪白質７ｉＱ） ５ ｆヲ、４℃で、炭酸
ナトリウム／重炭酸ナトリウム−緩衝液（０，１Ｍ、
ｐＨ１０，２） ４ Ｘ ２１に対して透析させる。
この際に、澄明な酵素溶液が得られる。
（ｂ） デキストランの活性化
ロート社（Ｆｉｒｍａ Ｒｏｔｈ、 Ｋａｒｌｓｒｕｈ
ｅ ）製の可溶性デキストラン（平均分子量１００００
、２００００．４００００及び５００００）を、ｐＨ１
０，６でブロムシアン（Ｍｅｒｃｋ社製）で活性化する
。
ｅ ）製の可溶性デキストラン（平均分子量１００００
、２００００．４００００及び５００００）を、ｐＨ１
０，６でブロムシアン（Ｍｅｒｃｋ社製）で活性化する
。
このために、デキストラン３０１を水３１中に溶かし、
２Ｎ苛性ソーダで、ｐＨ１０，６まで調節する。
２Ｎ苛性ソーダで、ｐＨ１０，６まで調節する。
攪拌下に、フロムシアン合計９〜１５グを３１宛４０分
かかつてこのバッチに加える。
かかつてこのバッチに加える。
この場合、ｐＨ値を、自動滴定装置を用いて２〜５Ｎ苛
性ソーダの添加によりｐＨ１０，６に保持する。
性ソーダの添加によりｐＨ１０，６に保持する。
活性化反応は、もはや苛性ソーダを消費しなくなる際、
（この場合約１．５〜２時間後）に、終了する。
（この場合約１．５〜２時間後）に、終了する。
澄明溶液が得られるから、このｐＨ値を２Ｎ塩酸でｐＨ
１０，０に調節する。
１０，０に調節する。
このように活性化したデキストランを２時間かかつて、
２０℃で水に対して充分透析させる。
２０℃で水に対して充分透析させる。
（ｃ）ウリカーゼの結合
予備調製した酵素溶液（ａ）を激しい攪拌下に活性化さ
れたデキストラン溶液（ｂ）と−緒にする。
れたデキストラン溶液（ｂ）と−緒にする。
全量３．１〜３．２７．ｐＨ１０，１〜１０．３ｏ４℃
又は室温で１６時間かるく攪拌する。
又は室温で１６時間かるく攪拌する。
この時間の後に、使用した活性の約８０％がなお存在し
た。
た。
バッチは澄明である。（ｄ） 変性されたウリカーゼ
の精製 変性されたウリカーゼを引続き０．０４Ｍクエン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ！５．ｓ、アジ化ナトリウム０．０
１％含有）に対して透析させる。
の精製 変性されたウリカーゼを引続き０．０４Ｍクエン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ！５．ｓ、アジ化ナトリウム０．０
１％含有）に対して透析させる。
時間は約３時間。
引続き、この溶液にサッカロース３０Ｐ及びマンニラ）
４５Ｐを加え、濾過して澄明にする。
４５Ｐを加え、濾過して澄明にする。
次いで溶液を凍結乾燥させる。使用した活性の７５％が
凍結乾燥物中に存在する。
凍結乾燥物中に存在する。
例２〜１２
条件及び担体物質を代えて、例１の方法を繰り返した。
条件及び結果を次表に示す。例１３
グリセリン中のウリカーゼ５ ｍｌ （Ａ、酵素蛋白質
２３５■）を水４５７７１１中に入れ、水浴中で、１５
分の間隔で固体の無水コハク酸２×２５■を添加する。
２３５■）を水４５７７１１中に入れ、水浴中で、１５
分の間隔で固体の無水コハク酸２×２５■を添加する。
滴定装置を用いて０．５ＮａＯＨの添加により、ＮａＯ
Ｈがもはや消費されなくなるまでｐＨ値を９．８で一定
に保持する長欠に、バッチを水で２５０１ｒＬｌまで稀
釈し、更に無水コハク酸２７■を添加し、ｐＨ９，８で
前記のように反応停止するまで充分滴定する。
Ｈがもはや消費されなくなるまでｐＨ値を９．８で一定
に保持する長欠に、バッチを水で２５０１ｒＬｌまで稀
釈し、更に無水コハク酸２７■を添加し、ｐＨ９，８で
前記のように反応停止するまで充分滴定する。
活性はなお４４％である。酵素蛋白質対無水コハク酸の
比は３：１である。
比は３：１である。
このバッチを引続き１Ｍクエン酸でｐＨ５，５まで調節
する。
する。
澄明のままである。引続き、０．０４Ｍクエン酸ナトリ
ウム（ｐＨ５，５、Ｎａ−アジド０．０１％含有）に対
して透析させる。
ウム（ｐＨ５，５、Ｎａ−アジド０．０１％含有）に対
して透析させる。
生じるわずかな濁りを遠心分離除去する。活性：３３％
。
。
サッカロース１．２ Ｐ及びマンニラ） １．８ ｆの
添加の後に凍結乾燥。
添加の後に凍結乾燥。
凍結乾燥物：収量３．７１、特異活性０．１７８Ｕ／■
：活性ロスなし。
：活性ロスなし。
安定性：３週間＋４℃−当初活性の１００％〃 ＋３５
℃−〃 ５５％ 例１４ グリセリン中のウリカーゼ１ｒｒＬｌ（Δ酵素蛋白質２
０Ｉｎ９）を水２４ｍ１中に加え、水浴中で、攪拌下に
、ガントレツ（ＧＡＮＴＲＥＺ）ＡＮｌ ７９ （メチ
ルビニルエーテルと無水マレイン酸とからのコポリマー
）２５即を加える。
℃−〃 ５５％ 例１４ グリセリン中のウリカーゼ１ｒｒＬｌ（Δ酵素蛋白質２
０Ｉｎ９）を水２４ｍ１中に加え、水浴中で、攪拌下に
、ガントレツ（ＧＡＮＴＲＥＺ）ＡＮｌ ７９ （メチ
ルビニルエーテルと無水マレイン酸とからのコポリマー
）２５即を加える。
ｐＨ値を滴定装置を用いて０．ｌＮＮａＯＨを９．８に
保持し、次イテ、水２５ｍ１をもう１度加える。
保持し、次イテ、水２５ｍ１をもう１度加える。
反応停止後に１Ｍクエン酸でｐＨを５，８まで調節する
。
。
バッチは澄明のままである。当初活性の６０％がなお存
在する。
在する。
安定性：溶液中の活性は、１６時間後に当初値の３３％
まで低下し存２日後に１７％まで、かつ４日後に１２％
まで低下する。
まで低下し存２日後に１７％まで、かつ４日後に１２％
まで低下する。
例１５
ガントレッＡＮ１７９ ６■のみを用いて例１４に記載
の方法を繰り返す。
の方法を繰り返す。
ｐＨを５．８に戻した後１６時間後に、当初活性の４８
％、３日後になお３８％が存在する。
％、３日後になお３８％が存在する。
１６時間後に濁りが認められる。
例１６
デキストランＴ４０ ６？を水４０ｍ１中に溶かし、水
浴中で±０℃に冷却する。
浴中で±０℃に冷却する。
次に、塩化シアヌル（２・４・６−ドリクロルーｌ・３
・５−トリアジン）６００■を低温冷却したジメチルホ
ルムアミド１０ｍ１中に溶かし、バッチに加える。
・５−トリアジン）６００■を低温冷却したジメチルホ
ルムアミド１０ｍ１中に溶かし、バッチに加える。
０．５Ｎ ＮａＯＨの添加によりｐＨ値を０．５に調
節し、保持する。
節し、保持する。
反応終了後（もはやｐＨ変化しない）に、この活性化さ
れたデキストランを、低温冷却したアセ１７６２倍過剰
量で３回再沈殿させることにより精製する。
れたデキストランを、低温冷却したアセ１７６２倍過剰
量で３回再沈殿させることにより精製する。
アセトン沈殿物をそれぞれ氷水で溶かす。この精製した
このデキストランは、溶液としても又は凍結乾燥物とし
ても、蛋白質固定のために使用することができる。
このデキストランは、溶液としても又は凍結乾燥物とし
ても、蛋白質固定のために使用することができる。
ウリカーゼの固定のために、０．０２５ＭＮａＨＣＯ３
／Ｎａ２ｃｏ３−緩衝液（ｐＨ１０，２）中の酵素蛋白
質１１（透析物として）及び活性化されたデキストラン
（水溶液）を−緒にし、水を充填して３００１１Ｌｌと
する。
／Ｎａ２ｃｏ３−緩衝液（ｐＨ１０，２）中の酵素蛋白
質１１（透析物として）及び活性化されたデキストラン
（水溶液）を−緒にし、水を充填して３００１１Ｌｌと
する。
引続き、攪拌下に室温で１６時間インキュベートする。
固定及び凍結乾燥の制御：
バッチを１Ｍクエン酸でｐＨ５，５〜５．８に調節し、
室温で３時間放置する。
室温で３時間放置する。
この場合、乳白光及び濁りは現われてならない。
固定された酵素を含有する澄明溶液を、サッカロース６
？及びマンニット９グの添加の後に、ｐＨ９，０に調節
し、カルバミン酸アンモニウム７５０即を加え、かつ凍
結乾燥させる。
？及びマンニット９グの添加の後に、ｐＨ９，０に調節
し、カルバミン酸アンモニウム７５０即を加え、かつ凍
結乾燥させる。
活性収率は、使用した活性に対して７５〜８０％である
。
。
３５℃で３週間貯蔵の後に、活性は約３０％だけ低下し
た。
た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 担体物質としての水溶性の多糖類、ポリ酸無水物、
ポリビニルピロリドン又は酸無水物に共有結合していて
、なお６より低いｐＨ値で可溶性であることを特徴とす
る、可溶性肝臓ウリカーゼ。 ２１〜１１のｐＨ値で可溶性である、特許請求の範囲第
１項記載の肝臓ウリカーゼ。 ３ 可溶性多糖類はデキストランである、特許請求の範
囲第１項記載の肝臓ウリカーゼ。 ４Ｅ’ｌ溶性多糖類は、可溶性デンプン、糖又は合成糖
ポリマーである、特許請求の範囲第１項記載の肝臓ウリ
カーゼ。 ５ 担体物質としての水溶性の多糖類、ポリ酸無水物、
ポリビニルピロリドン又は酸無水物に共有結合していて
、なお６より低いｐＨ値で可溶性である肝臓ウリカーゼ
を製造するために、公知方法で、水溶液中のウリカーゼ
と、水溶液中でＮＨ２基と反応しうる基少なくとも１個
を有する溶けた担体物質とを、ｐＨ９〜１１で反応させ
ることを特徴とする、可溶性肝臓ウリカーゼの製法。 ６ ブロムシアン又は塩化シアヌルで活性化された多糖
類を担体物質として使用する、特許請求の範囲第５項記
載の方法。 ７ 得られた担体物質結合したウリカーゼの溶液を、サ
ッカロース及び／又はマンニットを加工て凍結乾燥させ
る、特許請求の範囲第５項又は第６項のいずれか１項記
載の方法。 ８ 担体物質としての水溶性の多糖類、ポリ酸無水物、
ポリビニルピロリドン又は酸無水物に共有結合していて
、なお６より低いｐＨ値で可溶性である肝臓ウリカーゼ
を尿酸の測定に使用することを特徴とする、尿酸の測定
法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19813126759 DE3126759A1 (de) | 1981-07-07 | 1981-07-07 | Loesliche leber-uricase, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5816680A JPS5816680A (ja) | 1983-01-31 |
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| JP (1) | JPS5841836B2 (ja) |
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| DE (2) | DE3126759A1 (ja) |
| DK (1) | DK159688C (ja) |
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-
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