DK159688B - Oploeselig baerer-bundet lever-uricase, fremgangsmaade til dens fremstilling og anvendelse - Google Patents
Oploeselig baerer-bundet lever-uricase, fremgangsmaade til dens fremstilling og anvendelse Download PDFInfo
- Publication number
- DK159688B DK159688B DK296682A DK296682A DK159688B DK 159688 B DK159688 B DK 159688B DK 296682 A DK296682 A DK 296682A DK 296682 A DK296682 A DK 296682A DK 159688 B DK159688 B DK 159688B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- uricase
- soluble
- liver
- carrier
- enzyme
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 11
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 10
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 polysaccharide activated bromocyan Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 32
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 28
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 6
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical group ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 4
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- UPBDXRPQPOWRKR-UHFFFAOYSA-N furan-2,5-dione;methoxyethene Chemical compound COC=C.O=C1OC(=O)C=C1 UPBDXRPQPOWRKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- XJRBAMWJDBPFIM-UHFFFAOYSA-N methyl vinyl ether Chemical compound COC=C XJRBAMWJDBPFIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- SKIIKRJAQOSWFT-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[1-(2,2-difluoroethyl)piperidin-4-yl]oxy-4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound FC(CN1CCC(CC1)OC1=NN(C=C1C=1C=NC(=NC=1)NC1CC2=CC=CC=C2C1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)F SKIIKRJAQOSWFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXCXWVLIDGPHEA-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-[(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CN1CCN(CC1)CC DXCXWVLIDGPHEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTSVYUUXJSMGQC-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1,3,5-triazine Chemical compound ClC1=NC=NC=N1 HTSVYUUXJSMGQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003443 succinic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
Description
i
DK 159688 B
Opfindelsen angår en ved lave pH-værdier opløselig bærer-bundet lever uricase, en fremgangsmåde til dens fremstilling og dens anvendelse til bestemmelse af urinsyre.
Uricase er et enzym, der er vidt udbredt i dyreriget og 5 især forekommer i leveren hos dyr. Det katalyserer oxidationen af urinsyre i nærværelse af oxygen under dannelse af allantoin, H202 09 C02' efter følgende reaktionsligning: 2 h20 + urinsyre + 02 -> allantoin + H2°2 + C02* På grund af ovennævnte reaktion ville lever-uricase egne sig 10 godt til bestemmelse af urinsyre, idet et af reaktionsprodukterne, især H202, bestemmes efter hertil sædvanlige metoder. En væsentlig ulempe ved lever-uricasen ligger dog i, at enzymet kun er opløseligt ved forholdsvis høje pH-værdi-er, normalt mellem pH 9 og 11. Det er derfor vanskeligt at 15 koble den af lever-uricasen katalyserede reaktion med andre reaktioner, som f.eks. er nødvendige til enzymatisk bestemmelse af det dannede H202, da der hertil i reglen kræves omtrent neutrale pH-værdier.
Således er en af de almindeligste enzymatiske farveprøver 20 for uricase bestemmelsen via katalase og farvedannelse af formaldehyd, acetylacetone og ammoniak. pH-optimum for uricasereaktionen ligger mellem pH 9 og 10 og for katalasereaktionen mellem pH 4 og 9. Kondensationsreaktionen af formaldehyd, ammoniak og acetylacetone har imid-25 lertid sit maksimum ved pH 7. For at farvedannelses- reaktionen kan blive hastighedsbestemmende, og dermed også kinetiske målinger kan udføres, hvormed måleresultaterne foreligger efter meget kort tid, kræves en neutral pH-værdi.
2
DK 159688 B
Fra Clin.Chem. 24 (1978), 1813-1817 og 25 (1979), 1744-1748, kendes immobiliseret uricase til bestemmelse af urinsyre. Med immobiliseret uricase er man imidlertid begrænset til bestemmelse af urinsyre i gennemstrømnings-5 reaktoren. Til bestemmelse af urinsyre ved de sædvanlige fremgangsmåder med fotometer behøver man imidlertid et opløseligt enzym.
Der kendes ganske vist uricaser, som også er opløselige ved 10 neutral pH-værdi, men disse har dog måttet udvindes af mikroorganismer såsom Candida utilis eller Aspergillus flavus og er derfor væsentligt dyrere, hvilket begrænser deres anvendelighed stærkt til analytiske formål. Dette gælder også for en fra EP-A1-0012446 kendt sur uricase fra Streptomyces.
15 Det er derfor opfindelsens opgave at ændre det i og for sig let tilgængelige enzym fra lever, som f.eks. kan opløses fra svinelever ved pH-værdi over 9, på en sådan måde, at de ovenfor beskrevne ulemper fjernes, og enzymet også kan anvendes i neutralt eller surt medium.
20 Denne opgave løses ifølge opfindelsen med en lever-uricase, som er ejendommelig ved, at den foreligger covalent bundet til et vandopløseligt polysaccharid, polysyreanhydrid, poly= vinylpyrrolidon eller syreanhydrid som bærerstof og stadig er opløselig ved pH-værdier under 6.
DK 159688 B
3
Opfindelsen er baseret på den overraskende omstændighed, at en lever-uricase, som bindes til et vandopløseligt bærer-stof af den nævnte art, uden væsentlig ændring af dens øvrige egenskaber ikke blot er opløselig ved neutrale pH-5 værdier, men også udmærket opløselig i det sure område.
Præparater ifølge opfindelsen udmærker sig endog ved opløselighed ved pH-værdier mellem 1 og 11.
Desuden har det vist sig, at det ifølge opfindelsen modificerede enzym ikke blot er opløseligt ved pH-værdier ned 10 til 5,0, men også er aktivt, og f.eks. ved pH-værdi 7,0 stadig udviser ca. 40% af aktiviteten målt ved dens optimale pH-værdi på 9,5. Det egner sig derfor udmærket til bestemmelse af urinsyre, også i neutralt medium.
Naturlig lever-uricase går i almindelighed først i opløsning 15 ved pH-værdier på 9,5 og højere og udfælder igen af opløsningen ved pH-værdier under 9,0. I den ifølge opfindelsen modificerede form bevares opløseligheden dog ned til pH 1. Lever-uricasen ifølge opfindelsen kan på grund af denne egenskab let skelnes fra alle kendte uricaser. Det er desuden 20 bemærkelsesværdigt, at den modificerede lever-uricase ifølge opfindelsen bevarer sine immunologiske egenskaber uforandret og derfor også i den bærerbundne form kan erkendes immunologisk som lever-uricase og skelnes fra uricaser af anden op:>-rindelse.
25 Det er kendt, at egenskaberne af enzymer kan ændres ved bærerfiksering. Der er således beskrevet en forandring af aktiviteten, forskydning af pH-optimet, forandring af Michaelis-
DK 159688B
4 konstanten/ den specifikke aktivitet og stabiliteten af enzymer. Det har dog ikke været kendt, at ved binding til opløselige bærere kan opløselighedsegenskaberne af et enzym ændres så drastisk, som tilfældet er med produktet ifølge 5 den foreliggende opfindelse. Fra Enzyme 26, 49-53 (1981) er det kendt at binde en gær-uricase (fra Candida utilis) til polyethylenglycol, hvorved man får et opløseligt produkt, hvis immunologiske egenskaber er blevet undersøgt. Herved er der dog ikke berettet om nogen forandring af op-10 løseligheden.
Som opløselige bærerstoffer foretrækkes ifølge opfindelsen polysaccharider. især foretrækkes en vandcpLØselig dextran. Meget gode resultater er også blevet opnået med andre opløselige polysaccharider, f.eks. opløselig stivelse, sukker-15 arter eller syntetiske sukkerpolymere. Blandt sukkerarterne viste saccharideme, såsom saccharose, sig som særligt egnede. Også højmolekylære polymere af mono- og disaccharider, der fås f.eks. ved omsætning med epihalogenhydrin,har vist sig godt egnede og er indbefattet blandt polysacchariderne 20 inden for opfindelsens rammer.
De egnede bærerstoffer er dog ikke begrænset til polysaccha® rider, idet også syreanhydrider, polysyreanhydrider eller polyvinylpyrrolidon er egnede. Et eksempel på et egnet syreanhydrid er ravsyreanhydrid, og et eksempel på et poly® 25 anhydrid er en copolymer af methylvinylether med maleinsyre® anhydrid. Også ravsyreimidderivater har vist sig egnede.
Michaelis-konstanten KM og maksimalhastigheden V er no get ændret hos det ifølge opfindelsen modificerede enzym i sammenligning med den naturlige lever-uricase. Det har vist 30 sig, at denne ændring til en vis grad er afhængig af molekylvægten af bærerstoffet. Derved påvirkes K^-værdien næppe, medens V formindskes omvendt proportionalt med bærerens 5
DK 159688 B
molekylvægt. Især hvor det drejer sig om højmolekylære bærermaterialer såsom stivelse og dextran, skal molekylvægten være mindst 1.000.
Molekylvægten af den ifølge opfindelsen modificerede lever-5 uricase afhænger af molekylvægten af bærermaterialet. Således blev der for et med dextran T 40 modificeret enzym konstateret en molekylvægt mellem 180.000 og 200.000 Dalton, medens molekylvægten med dextran T 40 lå mellem 350.000 og 500.000 Dalton. Molekylvægtsbestemmelsen blev udført ved 10 gelkromatografi i citratstødpude ved pH 5,8. Molekylvægten af den naturlige lever-uricase kan ikke bestemmes under disse betingelser på grund af enzymets uopløselighed.
Michaelis-konstanten KM og maksimalhastigheden V ^ blev bestemt for naturlig uricase og for uricase bundet til de 15 to ovennævnte dextranbærermaterialer, og de fremkomne resultater var som følger: KM M ' JjakS. j. :· i M [U/mg protein] —6
Naturlig uricase 3,17 · 10 10,5
Uricase/dextran T 10 5,0 · 10~® 5,6 20 Uricase/dextran T 40 3,17 · 10 ® 3,7
Den modificerede lever-uricase ifølge opfindelsen kan ikke mere fældes med ammoniumsulfat, men fældes godt med acetone. Acetonefældningen er reversibel under bevarelse af aktiviteten. Den egner sig derfor især også til isolering af en-25 zymet ifølge opfindelsen.
Enzymets temperaturstabilitet ved højere temperaturer (60°C) er væsentligt bedre end hos det naturlige enzym. Medens sidstnævnte ved denne temperatur efter 200 minutter kun udviser 5% af begyndelsesaktiviteten, er aktiviteten af enzy-30 met ifølge opfindelsen til samme tidspunkt endnu 82%. Efter 6
DK 159688 B
250 minutter ved 60°C er det naturlige enzym inaktivt, men enzymet ifølge opfindelsen udviser endnu 79% af udgangsaktiviteten.
Fremstillingen af enzymet ved fremgangsmåden ifølge opfindel-5 sen er ejendommelig ved, at man omsætter uricasen i vandig opløsning med det opløste bærermateriale, som indeholder mindst én i vandig opløsning med grupper reaktionsdygtig gruppe ved pH 9 - 11.
Særligt gode resultater blev opnået med bærerstoffer, som 10 bærer OH-gruppen aktiveret med cyanogenbromid eller cyanur= syrechlorid. Koblingen sker hensigtsmæssigt ved temperaturer mellem 0°C og stuetemperatur, men der kan dog også anvendes højere eller lavere temperaturer. Fortrinsvis sker koblingen ved pH-værdier mellem 10,0 og 11,0.
15 Der kan dog også anvendes de andre for fagmanden velkendte metoder til enzymfiksering.
For at opnå et størst muligt aktivitetsudbytte har det vist sig fordelagtigt at vælge de molære forhold mellem enzym og bærermolekylet således, at kun en forholdsvis lille del af 20 NH^-grupperne i enzymet modificeres. Det gælder især med lavmolekylære bærermaterialer. De egnede mængdeforhold kan let konstateres ved forudgående forsøg med forskellige bærermængder på basis af de aktivitetsudbytter, som fås i hvert enkelt tilfælde.
25 Efter afslutning af koblingsreaktionen kan enzymet ifølge opfindelsen udfældes f.eks. ved tilsætning af acetone, og isoleres. Fortrinsvis bliver den fremkomne opløsning dog lyofiliseret, hensigtsmæssigt efter forudgående rensning ved dialyse. Ved frysetørringen tilsættes fortrinsvis stabili-30 seringsmidler, der sædvanligvis anvendes ved lyofilisering 7
DK 159688 B
af enzymer. Særligt egnede har vist sig som stabiliserende tilsætninger til lyofiliseringen saccharose og mannit, der kan benyttes hver for sig eller sammen.
Enzympræparater ifølge opfindelsen egner sig, som allerede 5 nævnt, udmærket til bestemmelse af urinsyre. Et hertil egnet reagens ifølge opfindelsen består derfor af opløselig lever-uricase ifølge opfindelsen, stødpude og et system til bestemmelse af H202, af allantoin eller af C02· Det er også muligt at måle oxygenoptagelsen, f.eks. med en oxygen-10 elektrode, som mål for den tilstedeværende urinsyremængde.
De følgende eksempler belyser opfindelsen nærmere.
EKSEMPEL· 1.
a) Fremstilling af enzymet.
5 g uricase (30 - 50 U/ml, 9-10 U/mg protein) 15 dialyseres ved 4°C over for 4x2 liter natriumcarbonat/na= triumbicarbonat-stødpude (0,1 M, pH 10,2). Derved fås en klar enzymopløsning.
b) Aktivering af dextran.
Opløselige dextraner fra firma Roth, Karlsruhe (gennemsnits-20 molekylvægt 10.000, 20.000, 40.000 og 500.000) aktiveres med bromcyan (Fa. Merck) ved pH 10,6.
Til dette formål opløses 30 g dextran i 3 liter vand og indstilles til pH 10,6 med 2N natronlud. Under omrøring tilsættes ialt 9 - 15 g bromcyan i 3 g-portioner i løbet af 25 40 minutter. pH-værdien holdes ved hjælp af en autotitra- tor på 10,6 ved tilsætning af 2 - 5n natronlud. Aktiveringsreaktionen er afsluttet, når der ikke mere forbruges natron- 4> 8
DK 159688 B
lud/ hvilket er tilfældet efter ca. 1 1/2 - 2 timer.
Der foreligger så en klar opløsning, hvis pH-værdi indstilles til 10,0 med 2N saltsyre. Den således aktiverede dex= tran dialyseres tilstrækkeligt over for vand i løbet af 5 2 timer ved 20°C.
c) Binding af uricasen.
Den fremstillede enzymopløsning a) bliver under kraftig omrøring forenet med den aktiverede dextranopløsning b). Det samlede rumfang er 3,1 - 3,2 liter, pH-værdien.10,1 - 10,3. 10 Der omrøres let i 16 timer ved 4°C eller stuetemperatur.
Efter denne tid er stadig ca. 80% af den oprindelige aktivitet til stede. Materialet har et klart udseende-.
d) Rensning af den modificerede uricase.
Den modificerede uricase dialyseres derefter over for 0,04M 15 natriumcitratstødpude, pH 5,8 (indeholdende 0,01% natrium= acid). Varighed ca. 3 timer. Derefter sættes 30 g saccha= rose og 45 g mannit til opløsningen, og man filtrerer klart. Opløsningen lyofiliseres så.
75% af den oprindelige aktivitet findes i lyofilisatet.
20 EKSEMPEL 2 - 12.
Fremgangsmåden i eksempel 1 blev gentaget under ændring af betingelserne og bærerstofferne. Betingelserne og resultaterne er vist i nedenstående tabeller.
Eksempel 2 3 4 5 € 9
DK 159688 B
Uricase (mg protein) 50 50 50 200 500
Uricase (aktiverede 360 360 360 1.800 5.000 5 enheder) Bærer: dextran: molvægt 40.000 40.000 40.000 40.000 40.000 andet - - - Vægtforhold, bærer: BrCN 2:1 2:1 2:1 2:1 2:1 10 Vægt forhold, bærer: protein 2:1 4:1 8:1 4:1 6:1 varighed: timer 16 16 16 3+13 16 temperatur °C 4° 4 4 35° 4° 4°
Stødpude til Kalium-phosphat, K-phosph., 0,04M
lyofilisat 0,07 M, pH 7,0 0,07 M citrat, pH 7,0 pH 5,8 15 Tilsætning ved Saccharose, lyofilisering - - - mannit
Udbytte, g lyofilisat 0,178 0,420 0,700 1,7
Eksempel 23456 2 0 Aktivitets udbytter: % efter fiksering 91 85 68 82 81 % efter lyofili- _ _ _ 77 sering
Spec, aktivitet (U/mg lyofilisat) 1,32 0,61 0,30 0,76 0,21 25 Stabilitet (restaktivitet; . - 33% 100% efter 3 uger ved 35°C)
Eksempel 78 9 10
DK 159688 B
Uricase (mg protein) 500 100 200
Uricase (aktivering i enheder) 5.000 720 1.800 5 Bærer: dextran: molvægt 20.000 --,% andet - Ficoll 70 Saccharose
Aktivering, bærer: BrCN 2:1 2:1 2:1
Binding, 10 bærer: protein 6:1 3:1 4:1 varighed, timer 16 16 16 temperatur °C 4 4 4 1) En rørsiikker-epichlorhydrin-ccpolymer W 70.000.
Eksempel 7 8 9 15 Stødpude til 0,04 M citrat, Kalium-phosphat-stødpude lyofilisering pH'5·,8 0,07 M, pH 7,0
Tilsætninger ved Saccharose lyofilisering Mannit
Udbytte, g lyofilisering - 0,7 1,0 20 Aktivitetsudbytter: % efter fiksering 70% 85% 43% % efter lyofilisering - - 36%
Spec, aktivitet (U/mg lyof ilisat) 0,21 0,73 0,68 25 Stabilitet (restaktivitet 100% - 51% efter 3 uger ved 35¾)
Eksempel 10 11 11
DK 159688 B
Uricase (mg protein) 10.000 100
Uricase (aktivering 100.000 900 i enheder) 5 Bærer, dextran: molvægt 40.000 40.000 andet
Aktivering, bærer: BrCN 2:1 5:1
Binding, 10 bærer: protein 4:1 6:1 varighed, timer 16 16 temperatur °C 4° 4°
Stødpude til 0,04 M citratstødpude, 0,04 M citratstødpude, lyofilisering pH 4,8 pH 5,8
Tilsætninger ved Raffinose + mannit Saccharose + mannit 15 lyofilisering
Udbytte, g lyofilisat 185
Aktivitetsu3fcytter: % efter fiksering 82 90 % efter lyofilisering 71,5 20 Spec, aktivitet (U/mg lyofilisat) 0,37
Stabilitet (restaktivitet 92% efter 3 uger ved 35¾)
Eksempel 12 12
DK 159688 B
Uricase (mg protein) 40.000
Uricase (aktivering 40.000 i enheder) 5 Bærer, dextran: molvægt 40.000 andet
Aktivering, bærer: BrCN 2:1 10 Binding, bærer: protein 6:1 varighed, timer 16 temperatur °C 25°
Stødpude til 0,04 M citrat, lyofilisering pH 5,8 15 Tilsætninger ved lyofilisering Saccharose + mannit
Udbytte, g lyofilisat 1,127
Aktivitetsudbytter: % efter fiksering 80 20 % efter lyofilisering 69
Spec, aktivitet (U/mg lyofilisat) 0,24
Stabilitet (restaktivitet ^00% efter 3 uger ved 25 350C) 13
DK 159688 B
EKSEMPEL· 13..
5 ml uricase i glycerin = 235 mg enzymprotein indføres i 45 ml vand, og i isbad tilsættes med et tidsmellemrum på 15 minutter 2 x 25 mg ravsyreanhydrid i fast form. pH-værdien holdes konstant på 9,8 ved tilsætning af 0,5N NaOH 5 ved hjælp af en titrator, indtil der ikke mere forbruges
NaOH. Materialet fortyndes så til 250 ml med vand, og der tilsættes yderligere 27 mg ravsyreanhydrid, og ved pH 9,8 titreres videre som i det foregående, indtil reaktionen ophører. Aktiviteten er stadig 44%.
10 Forholdet enzymprotein:ravsyreanhydrid = 3:1. Reaktionsblandingen indstilles derpå til pH 5,5 med 1M citronsyre.
Den forbliver klar.
Derefter sker dialyse over for 0,04M Na-citrat, pH 5,5, indeholdende 0,01% Na-azid. Den optrædende svage uklarhed 15 centrifugeres fra. Aktivitet 33%. Lyofilisering efter tilsætning af 1,2 g saccharose og 1,8 g mannit. Lyofilisat: Udbytte 3,7 g, specifik aktivitet 0,178 U/mg, intet aktivitetstab.
Stabilitet: 3 uger ved 4°c = 100% af udgangsaktiviteten, 20 3 uger ved 35°C= 85% af udgangsaktiviteten.
EKSEMPEL· 14.
1 ml uricase i glycerin = 20 mg enzymprotein indføres i 24 ml vand, og i et isbad tilsættes under omrøring 25 mg Gantrez AN 179 (copolymer af methylvinylether og maleinsyreanhydrid). 25 pH-værdien bliver med 0,ln NaOH og en titrator holdt på 9,8, og derefter tilsættes igen 25 ml vand.
Efter at reaktionen er ophørt, indstilles til pH 5,8 med 1M citronsyre. Reaktionsblandingen forbliver klar. Der findes 14
DK 159688 B
stadig 60% af udgangsaktiviteten. Stabilitet: aktiviteten i opløsningen falder efter 16 timer til 33%, efter 2 dage til 17%, og efter 4 dage til 12% af udgangsværdien.
EKSEMPEL 15.
5 Eksempel 14 gentages, men med kun 6 mg Gantrez AN 179. 16 ti mer efter genindstilling af pH-værdien til 5,8 findes der stadig 48%, efter 3 dage 38% af udgangsaktiviteten. Efter 16 timer kan der ses en uklarhed.
EKSEMPEL 16.
10 6 g dextran T 40 opløses i 40 ml vand og afkøles i isbad til
•J· Q
-0 C. Derefter opløses 600 mg cyanursyrechlorid (2,4,6-tri= chlor-l,3,5-triazin) i 10 ml dybkølet dimethylformamid og sættes så til reaktionsblandingen. pH-værdien bliver ved tilsætning af 0,5n NaOH indstillet til og holdt på 5,0.
15 Efter endt reaktion (ingen pH-ændring mere) renses den aktiverede dextran ved genudfældning tre gange med det dobbelte rumfangsoverskud af dybkølet acetone. Acetonebundfaldet opløses i isvand.
Den rensede dextran kan nu anvendes til proteinfiksering, 20 enten som opløsning eller som lyofilisat.
Med henblik på fiksering af uricasen bliver 1 g enzymprotein (som dialysat) i 0,025 M NaHC02/Na2C02“Stødpude, pH 10,2, og den aktiverede dextran (vandig opløsning) ført sammen og fyldt op til 300 ml med vand.
25 Derefter inkuberes ved stuetemperatur under omrøring i 16 timer.
Claims (8)
1. Opløselig bærer-bundet lever-uricase, kendetegnet ved, at den foreligger covalent blindet til et vandopløseligt polysaccharid, polysyreanhydrid, polyvinylpyrro-lidon eller syreanhydrid og stadig er opløselig ved pH- 15 værdier under 6.
2. Lever-uricase ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er opløselig ved pH-værdier mellem 1 og 11.
3. Lever-uricase ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det opløselige polysaccharid er en dextran.
4. Lever-uricase ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det opløselige polysaccharid er opløselig stivelse, saccharider, saccharose, højmolekylære polymerer af mono-og disaccharider. DK 159688 B
5 Nl^-grupper reaktionsdygtig gruppe, ved pH 9 - 11.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af en lever-uricase ifølge krav 1-4, kendetegnet ved, at man omsætter uricasen i vandig opløsning med det opløste bærermateriale, som indeholder mindst én i vandig opløsning med
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at man anvender et med bromcyan eller cyanurchlorid aktiveret polysaccharid som bærermateriale.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 5 eller 6, kendeteg-10 net ved, at man blander den fremkomne opløsning af den bærerbundne uricase med saccharose og/eller mannit og lyo-filiserer.
8. Anvendelse af en uricase ifølge krav 1-4 til bestemmelse af urinsyre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3126759 | 1981-07-07 | ||
| DE19813126759 DE3126759A1 (de) | 1981-07-07 | 1981-07-07 | Loesliche leber-uricase, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK296682A DK296682A (da) | 1983-01-08 |
| DK159688B true DK159688B (da) | 1990-11-19 |
| DK159688C DK159688C (da) | 1991-04-15 |
Family
ID=6136304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK296682A DK159688C (da) | 1981-07-07 | 1982-07-01 | Oploeselig baerer-bundet lever-uricase, fremgangsmaade til dens fremstilling og anvendelse |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4460683A (da) |
| EP (1) | EP0069379B1 (da) |
| JP (1) | JPS5841836B2 (da) |
| AT (1) | ATE27967T1 (da) |
| DE (2) | DE3126759A1 (da) |
| DK (1) | DK159688C (da) |
| IE (1) | IE53578B1 (da) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3515586A1 (de) * | 1985-04-30 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes sarcosinoxidase-praeparat |
| DE3541186A1 (de) * | 1985-11-21 | 1987-05-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Wasserloesliche, stabilisierte peroxidasederivate, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung zur bestimmung von wasserstoffperoxid |
| USD299556S (en) | 1986-09-16 | 1989-01-24 | Marshbanks, Inc. | Electric candle |
| JPH0648982B2 (ja) * | 1986-10-06 | 1994-06-29 | 株式会社日立製作所 | アミラーゼの分離精製方法およびそれに用いる吸着剤およびその分離精製装置 |
| JPS6467186A (en) * | 1987-09-04 | 1989-03-13 | Kanebo Ltd | Modified superoxide dismutase |
| DE3888943T2 (de) * | 1987-12-11 | 1994-10-13 | Monsanto Co | Verfahren zur Verkapselung. |
| JPH0269180A (ja) * | 1988-09-02 | 1990-03-08 | Daicel Chem Ind Ltd | 高分子化酵素及びその製造方法 |
| DE4011084A1 (de) * | 1990-04-05 | 1991-10-10 | Boehringer Mannheim Gmbh | Saccharid-modifizierte, wasserloesliche proteine |
| FR2733914B1 (fr) * | 1995-05-11 | 1997-08-01 | Sanofi Sa | Composition de liquide stable contenant de l'urate oxydase et composition lyophilisee pour sa preparation |
| US6541606B2 (en) | 1997-12-31 | 2003-04-01 | Altus Biologics Inc. | Stabilized protein crystals formulations containing them and methods of making them |
| US6451572B1 (en) | 1998-06-25 | 2002-09-17 | Cornell Research Foundation, Inc. | Overexpression of phytase genes in yeast systems |
| US6783965B1 (en) * | 2000-02-10 | 2004-08-31 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates |
| EP2277998B1 (en) | 1998-08-06 | 2016-04-20 | Duke University | Urate oxidase |
| CA2338665C (en) | 1998-08-06 | 2011-01-18 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Peg-urate oxidase conjugates and use thereof |
| US20060188971A1 (en) * | 1998-08-06 | 2006-08-24 | Duke University | Urate oxidase |
| BR0009516B1 (pt) * | 1999-03-31 | 2013-09-10 | vetor recombinante e célula hospedeira microbiana. | |
| US6841370B1 (en) | 1999-11-18 | 2005-01-11 | Cornell Research Foundation, Inc. | Site-directed mutagenesis of Escherichia coli phytase |
| US6913915B2 (en) * | 2001-08-02 | 2005-07-05 | Phoenix Pharmacologics, Inc. | PEG-modified uricase |
| EP1450627B1 (en) * | 2001-10-31 | 2012-09-05 | Phytex, Llc | Use of phytase containing animal food |
| EP1604008B1 (en) * | 2002-09-13 | 2010-12-22 | Cornell Research Foundation, Inc. | Using mutations to improve aspergillus phytases |
| WO2008051178A2 (en) * | 2006-04-12 | 2008-05-02 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Purification of proteins with cationic surfactant |
| US8148123B2 (en) * | 2005-04-11 | 2012-04-03 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| US20080159976A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-07-03 | Jacob Hartman | Methods for lowering elevated uric acid levels using intravenous injections of PEG-uricase |
| US8188224B2 (en) | 2005-04-11 | 2012-05-29 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Variant forms of urate oxidase and use thereof |
| US7811800B2 (en) | 2005-04-11 | 2010-10-12 | Savient Pharmaceuticals, Inc. | Variant form of urate oxidase and use thereof |
| JP2008545665A (ja) * | 2005-05-23 | 2008-12-18 | ユニベルシテ ドゥ ジュネーブ | 高体温による処置のための注入可能な超常磁性ナノ粒子および高体温インプラントを形成するための使用 |
| US7919297B2 (en) | 2006-02-21 | 2011-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase |
| US8540984B2 (en) * | 2006-08-03 | 2013-09-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Phytases with improved thermal stability |
| US8192734B2 (en) | 2007-07-09 | 2012-06-05 | Cornell University | Compositions and methods for bone strengthening |
| US20110171268A1 (en) * | 2008-03-24 | 2011-07-14 | Althea Technologies, Inc. | Uricase compositions and methods of use |
| EP4635567A3 (en) | 2009-06-25 | 2025-12-03 | Horizon Therapeutics USA, Inc. | Methods and kits for preventing infusion reaction risk and antibody-mediated loss of response by monitoring serum uric acid during pegylated uricase therapy |
| CN110234340A (zh) | 2016-11-11 | 2019-09-13 | 好利恩风湿病制药有限责任公司 | 泼尼松和尿酸酶分子的组合疗法及其用途 |
| US20200237881A1 (en) | 2019-01-30 | 2020-07-30 | Horizon Pharma Rheumatology Llc | Reducing immunogenicity to pegloticase |
| US12121566B2 (en) | 2019-01-30 | 2024-10-22 | Horizon Therapeutics Usa, Inc. | Methods for treating gout |
| CN115011586B (zh) * | 2022-07-22 | 2024-07-23 | 江苏恰瑞生物科技有限公司 | 一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法 |
| US12269875B2 (en) | 2023-08-03 | 2025-04-08 | Jeff R. Peterson | Gout flare prevention methods using IL-1BETA blockers |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3625827A (en) * | 1968-09-27 | 1971-12-07 | Monsanto Co | Water-soluble polymer-enzyme products |
| JPS6031472B2 (ja) * | 1978-12-14 | 1985-07-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 酸性ウリカ−ゼ |
| JPS55135590A (en) * | 1979-04-05 | 1980-10-22 | Mihama Hisaharu | Modified asparaginase and uricase and their preparation |
-
1981
- 1981-07-07 DE DE19813126759 patent/DE3126759A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-06-24 IE IE1510/82A patent/IE53578B1/en not_active IP Right Cessation
- 1982-07-01 DK DK296682A patent/DK159688C/da active
- 1982-07-02 US US06/394,562 patent/US4460683A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-07-05 AT AT82105993T patent/ATE27967T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-07-05 EP EP82105993A patent/EP0069379B1/de not_active Expired
- 1982-07-05 DE DE8282105993T patent/DE3276637D1/de not_active Expired
- 1982-07-07 JP JP57117076A patent/JPS5841836B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3276637D1 (en) | 1987-07-30 |
| JPS5816680A (ja) | 1983-01-31 |
| EP0069379A3 (en) | 1984-10-17 |
| DE3126759A1 (de) | 1983-01-27 |
| US4460683A (en) | 1984-07-17 |
| JPS5841836B2 (ja) | 1983-09-14 |
| DK296682A (da) | 1983-01-08 |
| EP0069379B1 (de) | 1987-06-24 |
| DK159688C (da) | 1991-04-15 |
| IE821510L (en) | 1983-01-07 |
| ATE27967T1 (de) | 1987-07-15 |
| IE53578B1 (en) | 1988-12-21 |
| EP0069379A2 (de) | 1983-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK159688B (da) | Oploeselig baerer-bundet lever-uricase, fremgangsmaade til dens fremstilling og anvendelse | |
| Graves et al. | 15 α-Glucan phosphorylases–Chemical and physical basis of catalysis and regulation | |
| US4910135A (en) | Water-soluble peroxidase derivatives | |
| Brandt et al. | Covalent attachment of proteins to polysaccharide carriers by means of benzoquinone | |
| Tracey | Chitinase in some Basidiomycetes | |
| US3625827A (en) | Water-soluble polymer-enzyme products | |
| Tarentino et al. | The purification and properties of a β-aspartyl N-acetylglucosylamine amidohydrolase from hen oviduct | |
| US4950609A (en) | Stabilized sarcosine oxidase preparation | |
| DE4011084A1 (de) | Saccharid-modifizierte, wasserloesliche proteine | |
| Elyakova et al. | Isolation and certain properties of alginate lyase VI from the mollusk Littorina sp | |
| US3278392A (en) | Water insoluble enzymes | |
| US3794563A (en) | Preparation of immobilized enzymes | |
| Inouye et al. | Interactions between Streptomyces subtilisin inhibitor (SSI) and α-chymotrypsin | |
| Barker et al. | 591. The enzymic synthesis and degradation of starch. Part VIII. The use of mixtures of P-and Q-enzymes in the synthesis of starch-type polysaccharides | |
| US3679661A (en) | Preparation of water-soluble,dyed substrates for amylase assay | |
| EP0128975B1 (en) | Biologically active conjugates and their preparation and use | |
| Germain et al. | Relation between stabilization and rigidification of the three‐dimensional structure of an enzyme | |
| Poerio et al. | A comparison of potato and vertebrate lactate dehydrogenases | |
| US3741871A (en) | Preparation of immobilized enzymes | |
| US3833555A (en) | Polysaccharide cyclic carbamate containing compounds | |
| Kleppe et al. | Purification and Characterization of the Lytic Enzyme N‐Acetylmuramyl‐l‐alanine Amidase of Bacteriophage T7 | |
| Givol | Inactivation of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase by a bifunctional reagent | |
| Gemeiner et al. | Preparation of p-aminobenzyl cellulose and its utilization for immobilization of enzymes | |
| US4879221A (en) | Process for determination of γ-GTP activity | |
| US3753857A (en) | Phosphate modified proteinasealtered starch |