JPS5820196A - グルタチオンの製造法 - Google Patents
グルタチオンの製造法Info
- Publication number
- JPS5820196A JPS5820196A JP56120544A JP12054481A JPS5820196A JP S5820196 A JPS5820196 A JP S5820196A JP 56120544 A JP56120544 A JP 56120544A JP 12054481 A JP12054481 A JP 12054481A JP S5820196 A JPS5820196 A JP S5820196A
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- JP
- Japan
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- glutathione
- microbial cell
- activity
- microorganism
- synthetase activity
- Prior art date
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- Granted
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/185—Escherichia
- C12R2001/19—Escherichia coli
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明（１グルタチオンの製造法に関し、更に詳しくは
グルタチオンの合成ＷＩ素系の制御機構が解除されたエ
シェリヒア属に属する微生物の菌体よ ２− り抽出法に・よってグルタチオンを製造する方法に関す
る。
グルタチオンの合成ＷＩ素系の制御機構が解除されたエ
シェリヒア属に属する微生物の菌体よ ２− り抽出法に・よってグルタチオンを製造する方法に関す
る。
グルタチオンはＬ−グルタミン酸、Ｌ−システィン及び
グルシンより成るトリペプチドであり。
グルシンより成るトリペプチドであり。
肝疾患治療剤、解毒剤などとして有用な物質であり、ま
た生化学的試薬としても有用な物質である。
た生化学的試薬としても有用な物質である。
従来、微生物を用いてグルタチオンを製造する方法とし
ては、酵母菌体よりグルタチオンを抽出する方法、膜透
過性のよい乾燥酵母にＬ−グルタミン酸、Ｌ−システィ
ン及びグリシンを含有する基質溶液を接触させてグルタ
チオンを生成させる方法、酵母や大腸菌の菌体に基質溶
液を接触させてグルタチオンを生成させるに際しＡ〒Ｐ
再生系を共役させる方法などが知られている。しかしな
がら、工業的製法上してみた場合、これらの方法はグル
タチオンの生産量が必ずしも満足しつるものでなかった
。
ては、酵母菌体よりグルタチオンを抽出する方法、膜透
過性のよい乾燥酵母にＬ−グルタミン酸、Ｌ−システィ
ン及びグリシンを含有する基質溶液を接触させてグルタ
チオンを生成させる方法、酵母や大腸菌の菌体に基質溶
液を接触させてグルタチオンを生成させるに際しＡ〒Ｐ
再生系を共役させる方法などが知られている。しかしな
がら、工業的製法上してみた場合、これらの方法はグル
タチオンの生産量が必ずしも満足しつるものでなかった
。
本発明者らは、かかる状５ｉ””Ｉｔみ、微生物を用い
て工業的有利にグルタチオンを製造する方法。
て工業的有利にグルタチオンを製造する方法。
い出すべ（種々研究を重ねた結果、エシェリヒア属に属
し、γ−グルタミルシスティン合成酵素活性及びグルタ
チオン合成酵素活性を有し、かつグルタチオンによるｒ
−グルタミルシスティン酵素への阻害が解除された微生
物が菌体内に著量のグルタチオンを蓄積することを見い
出し９本発明を完成するに至った。
し、γ−グルタミルシスティン合成酵素活性及びグルタ
チオン合成酵素活性を有し、かつグルタチオンによるｒ
−グルタミルシスティン酵素への阻害が解除された微生
物が菌体内に著量のグルタチオンを蓄積することを見い
出し９本発明を完成するに至った。
即ち１本発明は上記微生物を培養し、かくして得られた
菌体よりグルタチオンを抽出することからなるグルタチ
オンの製造法である。
菌体よりグルタチオンを抽出することからなるグルタチ
オンの製造法である。
本発明で使用する微生物は、エシェリヒア属に属し、ｒ
−グルタミ、ルシステイン合成酵素（Ｍ、Ｃ０６、３，
２，２，、以下本酵素を０８１−Ｉと称する）活り 性及びグルタチオン合成酵素（−４ｔ、 Ｃ，６，３，
２，３，、以下本酵素をＧＳＨ−１［と称する〕活性を
有し、かつグルタチオンによるＧＳＨ−１への阻害が解
除された微生物であればいずれも使用することができ、
かかる微生物の代表的な例としてはＧ８Ｈ−■活性及び
ＧＳＨ−１［活性を有し、かつグルタチオンによるＧＳ
Ｈ−Ｉへの阻害が解除されたエシェリヒア・コリが好適
に挙げられる。
−グルタミ、ルシステイン合成酵素（Ｍ、Ｃ０６、３，
２，２，、以下本酵素を０８１−Ｉと称する）活り 性及びグルタチオン合成酵素（−４ｔ、 Ｃ，６，３，
２，３，、以下本酵素をＧＳＨ−１［と称する〕活性を
有し、かつグルタチオンによるＧＳＨ−１への阻害が解
除された微生物であればいずれも使用することができ、
かかる微生物の代表的な例としてはＧ８Ｈ−■活性及び
ＧＳＨ−１［活性を有し、かつグルタチオンによるＧＳ
Ｈ−Ｉへの阻害が解除されたエシェリヒア・コリが好適
に挙げられる。
上記菌株は例えば次の如くして取得することができる。
まず、ＧＳＨ−■活性及びＧ Ｓ Ｈ−１［活性を有す
るエシェリヒア・コリの野性株（例えば、工Ｖエリヒア
・コリＢ５５５）に変異を誘起せしめてシスティン要求
株及びメチルグリオキサール耐性株を取得する。変異の
誘起は通常の変異誘起処理により行なうことができ９例
えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンの如キ変異誘起剤で処理するととＣより実施すること
ができる。システィン要求株の取得は変異誘起処理して
帰られる菌株をシスティン２×ＩＣ″Ｍを含む最少培地
（例えば、 ＫｆｉＨＰＯ４０，７％ 、ＫＨＩ ＰＯ
２０゜３ ％ 、 （ＮＨ４）ｓＢＯ４０，１％、グル
コース０．５−の組成の培地、以下ＤＭ培地と称する）
で培養し。
るエシェリヒア・コリの野性株（例えば、工Ｖエリヒア
・コリＢ５５５）に変異を誘起せしめてシスティン要求
株及びメチルグリオキサール耐性株を取得する。変異の
誘起は通常の変異誘起処理により行なうことができ９例
えばＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ンの如キ変異誘起剤で処理するととＣより実施すること
ができる。システィン要求株の取得は変異誘起処理して
帰られる菌株をシスティン２×ＩＣ″Ｍを含む最少培地
（例えば、 ＫｆｉＨＰＯ４０，７％ 、ＫＨＩ ＰＯ
２０゜３ ％ 、 （ＮＨ４）ｓＢＯ４０，１％、グル
コース０．５−の組成の培地、以下ＤＭ培地と称する）
で培養し。
生じた小コロニーを釣菌分離することにより取得するこ
とができる。一方、メチルグリオキサール耐性株は前記
の変異誘起処理して帰られる菌株をメチルグリオキサー
ルを含むＤＭ培地に培養し。
とができる。一方、メチルグリオキサール耐性株は前記
の変異誘起処理して帰られる菌株をメチルグリオキサー
ルを含むＤＭ培地に培養し。
生じた大きなコロニーを釣菌分離することにより取得す
ることがてきる０次いで、上記で取得した ５− システィン要求株を含む最少培地に上記メチルグリオキ
サール耐性株を培養し、コロニーの周辺にハローを作ら
ないコロニーを釣菌分離して０８Ｈ−Ｉ欠損株（例えば
、エシェリヒア・コＩＪ Ｃ９１２）を取得する。次い
で、この０８１−７欠損株に前記と同様の処理手段で変
異を誘起せしめたのち、８−ハイドロキシキノリンを含
むＤＩ培地で培養し、生ずるコロニーを釣菌分離するこ
とにより、ｃｓｎ−４活性及びａｓｖ＋−ｘ活性を有し
。
ることがてきる０次いで、上記で取得した ５− システィン要求株を含む最少培地に上記メチルグリオキ
サール耐性株を培養し、コロニーの周辺にハローを作ら
ないコロニーを釣菌分離して０８Ｈ−Ｉ欠損株（例えば
、エシェリヒア・コＩＪ Ｃ９１２）を取得する。次い
で、この０８１−７欠損株に前記と同様の処理手段で変
異を誘起せしめたのち、８−ハイドロキシキノリンを含
むＤＩ培地で培養し、生ずるコロニーを釣菌分離するこ
とにより、ｃｓｎ−４活性及びａｓｖ＋−ｘ活性を有し
。
かつグルタチオンにＢ ｏ Ｂ ＩＩ −Ｘ ｆｐの阻
害が解除された菌株を取得することがてきる。かくして
得られる菌株の例としては９例えばエシェリヒア・コ＋
７ ｎ Ｃ９１２（微工研条寄第 ４７ 号）が挙げ
られる。
害が解除された菌株を取得することがてきる。かくして
得られる菌株の例としては９例えばエシェリヒア・コ＋
７ ｎ Ｃ９１２（微工研条寄第 ４７ 号）が挙げ
られる。
上記の如（して取得した本発明の微生物を培養するに際
して用いられる培地としては、炭素源。
して用いられる培地としては、炭素源。
窒素源、無機物などを程よ（含有するものであれば０合
成培地または天然培地のいずれも使用できる。炭素源と
しては９例えばグルコース、シュークロース、フラクト
ース、でん粉、でん粉細水分 ６− 解物、糖蜜などの種々の炭化水素が使用でき、その使用
量は０．５〜５．０％程度が好ましい。また窒素源とし
ては１例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンそニウム。
成培地または天然培地のいずれも使用できる。炭素源と
しては９例えばグルコース、シュークロース、フラクト
ース、でん粉、でん粉細水分 ６− 解物、糖蜜などの種々の炭化水素が使用でき、その使用
量は０．５〜５．０％程度が好ましい。また窒素源とし
ては１例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンそニウム。
炭酸アンモニウム、酢酸アンモニラ＾などの各種の無機
および有機アンモニウム類、あるいはペプトン、酵母エ
キス、コーンスチーリ プ一カー、カゼイン加水分解物などの窒素性有機物など
が使用でき、その使用量は０．５〜λ〇−程度が好まし
い。更に無機物としては１例えばリン酸第−水素カリウ
ム、リン酸第二水素カリウム。
および有機アンモニウム類、あるいはペプトン、酵母エ
キス、コーンスチーリ プ一カー、カゼイン加水分解物などの窒素性有機物など
が使用でき、その使用量は０．５〜λ〇−程度が好まし
い。更に無機物としては１例えばリン酸第−水素カリウ
ム、リン酸第二水素カリウム。
硫酸マグネシウム、硫酸マンガンなどが使用でき、その
使用量はａ、ｏｏｓ〜０．５−程度が好ましい。
使用量はａ、ｏｏｓ〜０．５−程度が好ましい。
培養は振とう培養あるいは通気かく拌培養などの好気的
条件下に行なうのが好ましい。培養温度は２５〜３７℃
が好ｊＩｉてあり、培養期間は通常１６〜４０時間程度
で充分である。かくして１体内に着量のグルタチオンが
蓄積する。
条件下に行なうのが好ましい。培養温度は２５〜３７℃
が好ｊＩｉてあり、培養期間は通常１６〜４０時間程度
で充分である。かくして１体内に着量のグルタチオンが
蓄積する。
培養終了後、菌体内のグルタチオンを抽出する。グルタ
チオンの抽出は水で加熱抽出することによって容畠に実
施する仁とができる。抽出液より−７− グルタチオンを単離するには、該抽出液をイオン交換樹
脂処理の如き公知の方法で処理することによって行なう
ことができる。
チオンの抽出は水で加熱抽出することによって容畠に実
施する仁とができる。抽出液より−７− グルタチオンを単離するには、該抽出液をイオン交換樹
脂処理の如き公知の方法で処理することによって行なう
ことができる。
以下本発明の実施例を示す。
実施例 ｌ
下記第１表に示す菌株をグルコース０．５％、リン酸第
−水素カリウム０．３％、リン酸第二水素カリウム０７
チ、硫酸マグネシウム費・！水和物０．０１チ、硫酸ア
ンモニウム０．１チの組成の培地（ｐ８７．０）に接種
し、３７℃で１６時時間表う培養した。培養終了後、遠
心分離により菌体を集め、０゜８５ｅ！−生理食塩水で
洗浄後、菌体中のグルタチオンを水で加熱抽出した。抽
出液中のグルタチオン量を定量し、ｌＩ体ＩＦ（湿重量
ン当りのグルタチオン蓄積量（μｍｏｌｅ）を算出した
。その結果は下記第１表の通りであった。
−水素カリウム０．３％、リン酸第二水素カリウム０７
チ、硫酸マグネシウム費・！水和物０．０１チ、硫酸ア
ンモニウム０．１チの組成の培地（ｐ８７．０）に接種
し、３７℃で１６時時間表う培養した。培養終了後、遠
心分離により菌体を集め、０゜８５ｅ！−生理食塩水で
洗浄後、菌体中のグルタチオンを水で加熱抽出した。抽
出液中のグルタチオン量を定量し、ｌＩ体ＩＦ（湿重量
ン当りのグルタチオン蓄積量（μｍｏｌｅ）を算出した
。その結果は下記第１表の通りであった。
特開昭５８−２０１９６（３ン
第 １ 表
Claims (1)
- （１） エシェリヒア属に属し、ｒ−グルタデル２１
フ４２合成酵素活性及びグルタチオン合成酵素よりグル
タチオンを抽出することを特徴とするグルタチオンのｍ
ａ法。 １２Ｊ 微生物がｒ−グルタミルシスティン合成酵素
活性及びグルタチオン合成酵素活性を有し、かりである
特許請求の範−第１硝配戦の製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56120544A JPS5820196A (ja) | 1981-07-30 | 1981-07-30 | グルタチオンの製造法 |
| DE8282304039T DE3279950D1 (en) | 1981-07-30 | 1982-07-30 | Novel microorganisms derived from microorganisms of the genus escherichia by mutation and their use in the preparation of glutathione |
| ES514571A ES8400771A1 (es) | 1981-07-30 | 1982-07-30 | "un procedimiento para la preparacion de glutation". |
| EP82304039A EP0071485B1 (en) | 1981-07-30 | 1982-07-30 | Novel microorganisms derived from microorganisms of the genus escherichia by mutation and their use in the preparation of glutathione |
| CA000408484A CA1187432A (en) | 1981-07-30 | 1982-07-30 | Microorganism and its use for the preparation of glutathione |
| ES522801A ES8500328A1 (es) | 1981-07-30 | 1983-05-30 | "un procedimiento para la preparacion de glutation" (como divisional de la solicitud de patente de invencion numero 514.571, presentada el 30 de julio de 1982) |
| US06/670,675 US4596775A (en) | 1981-07-30 | 1984-11-13 | Microorganism and its use for the preparation of glutathione |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56120544A JPS5820196A (ja) | 1981-07-30 | 1981-07-30 | グルタチオンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5820196A true JPS5820196A (ja) | 1983-02-05 |
| JPH0147154B2 JPH0147154B2 (ja) | 1989-10-12 |
Family
ID=14788919
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56120544A Granted JPS5820196A (ja) | 1981-07-30 | 1981-07-30 | グルタチオンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5820196A (ja) |
-
1981
- 1981-07-30 JP JP56120544A patent/JPS5820196A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0147154B2 (ja) | 1989-10-12 |
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