JPS58177918A - 胎盤分解物によるメラニン生成抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、人又は牛の正常分娩後の新鮮な胎盤を凍結保
存しておき、必要に応じて、水中で凍結融解させ、細片
泥状物となし、脱血、脱脂、脱水を行ったのちの細片さ
れた胎盤組織物に対し、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液を用
い、アルカリ分解させて得られることを特徴とする、新
規な胎盤分解物によるメラニン生成抑制剤今一４１１に
関する。

胎盤をスタート原料にしたメラニン生成抑制剤について
は、すでに本発明者によって、公開特許公報〔昭５３−
１４２５１５）がある。本発明者らは、さらに胎盤から
の分解物について種々の研究を続けた結果、ＩＮの水酸
化す）　ＩＪウム溶液を用い、加温下で処理することに
よって得られたエキスには、著明なチロシナーゼ活性抑
制作用を有し、これによってメラニン色素の生成が抑制
されることを見出し、本発明を完成するに至った。

以下に、実施例により、具体的に述べる。

［実施例１− 出発原料として、人々又は牛の正常分娩後の胎盤を水洗
し、ビニール製の袋に入れて密閉し、ただちにマイナス
１５℃以下の冷凍保存を行ったものを用い、これを水道
水の流水槽内に浸しながら凍結融解を行い、融解したら
剪断攪拌機（特殊機化工業製、Ｒ−２５Ｂ横倒式）に投
入し、３００Ｏｒｐｍの回転速度で泥状化組織物となし
て、この泥状化組織物を取りだし、圧搾機を用いて圧縮
させて、含まれていた血液及び水分をとり除いた微細な
細片状組織物８００りに対して、アセトン２．５〜３１
程度の入った容器内に入れて、２昼夜浸漬する。浸漬が
終ったら・、吸引ろ過を行ない、残留物をかきまぜなが
ら、過剰の水を加え、更に吸引ろ過を行う。

これによって脱脂すると共に、用いた水分及びアセトン
を除去する。このとき、今だアセトンが残留するよ２な
場合は、風乾又は減圧下でアセトンを除去する。完全に
アセトン除去が出来たら（以下、このアセトン処理済の
ものを脱脂プラセンターと呼ぶ）、これに対し、ＩＮ、
水酸化す）　ＩＪウム液８００づの入った容器内に入れ
、６０〜８０℃の湯浴上で４〜８時間の分解を行う。こ
の加温中は、ときどき撹拌棒で、ゆっくりとかきまぜる
。４〜８時間の湯浴上での操作によって、脱脂プラセン
ターは、はとんど分解されて粘稠な溶解液状を呈する。

この溶解物に対して、有機酸として乳酸又は、酢酸や、
あるいは無機酸の塩酸や硫酸を用いて、ｐＨを５．５〜
７．０附近に調整し、吸引ろ過すると、黄褐色の透明な
粘稠のある液体として、約１７−１．５７が得られる。

この液体を、エバポレータ−テ減圧濃縮によるか、スプ
レィ−乾燥又は凍結乾燥すると、微黄色の結晶性の粉末
状物として、約１００ｇ前後の収量が得られる。この粉
末は水溶性であり、良く溶解する。ｐＨ調整後、吸引ろ
過して得られた液体も、これを乾燥して得られた粉末も
、いずれもメラニン生成抑制作用を強く示す。

上述した実施例の工程中で、ｐＨ調整したのち、吸引ろ
過して得られた液体は、そのままでも、メラニン生成抑
制剤として用いることが出来るが、外用剤又は化粧品類
として用いる際には、得られた液体に対し、ｌ−３・ブ
チレングリコールを３０％になるように加えてがら、７
０〜８０℃で２時間の加熱滅菌を行ったものを用いると
、その後の安定性が良い。

第１表には、上記した実施例により、１〜３・ブチレン
グリコールを３０％添加した胎盤分解物の液体（原液と
して第１表には記載した）をもとに、メラニン生成抑制
作用について調べた成績結果を示す。

第１表に示すごと＜、ｌ−３・ブチレングリコールを３
０％含有した液＃−（原液）で、８６．５％のメラニン
生成を阻害し、又、さらに水を加えて、５０％に希釈し
たものでも６６．７％の阻害作用を示すことがわがった
。第１表の試験法は、酵素「チロシナーゼ」を用い、銅
イオンの存在下で、次の反応組成系において、３７”Ｃ
恒温槽において、１時間放置後における作用を、６４０
ｎｍの吸光度を測定する方法により行った。

（第１表）〔メラニン生成抑制作用〕※（反応組成） 基質：Ｌ−チロシン　０．１％・・・・・・・Ｑ、５ｍ
／１　／　１５　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ’　６．８　）
−＠２．□Ｃｕ十＋イオン（Ｃ！ｕ’ｓｏ　　溶液）−
１１０，０５チロシナーゼ　１η／ｌｎｌ・・・・・・
・・・・・ユ、。

阻害剤（蒸留水）・・・・・・・・・・・・・・・・・
・２，０次に、本升明による胎盤分解物の液体について
の物性値などについて調べてみると、以下に示すごとく
となり、出発原料が人胎盤と牛脂盤による異いとしては
、アミノ酸組成比に若干の違いが認められたが、その他
は、はぼ類似したパターンを示した。

（コ−）物性値及び溶解性 屈折率　　：　１．３６８〜１．３７０蒸発残分　：　
１．３４〜１＋５４　　％１）　　Ｈ：　　５＋０〜７
．０ 総窒素量　：　０．０９〜０．１３０　　ｍ９　／　ｄ
／比　　　重　　、、２０　　　□、。１−〜□、。３
０ 溶解性については、水、１−３・ブチレングリコールな
どのポリオール系溶剤及びエタノールに１溶けやすく、
各種の油脂類には不溶である。

（２）アミノ酸組成 第２表は、アミノ酸の組成を示したものであるが１この
アミノ酸は、実施例１で得られたところのｐＨ調整し、
吸引ろ過したのちの液体を用い１これを、６Ｎ塩酸で約
１１０℃、２４時間の加水分解を行ってがら１水浴上で
蒸発乾固しながら、塩酸を除いたものを検体とし、これ
をアミノ酸オートアナライザーにて分析したものである
。

（第２表）〔アミノ酸組成〕 第２表中には、人胎盤から得られた液体によるものであ
るが、牛脂盤と比べると、アスパラギン酸、ヒスチジン
、リジンがやや低く示された。第２表中の数値は、検出
されたアミノ酸の全体を１００としたときの、各々のア
ミノ酸の含有率（重量％）を示したものである。アミノ
酸組成から見ると、本発明による胎盤分解物は、塩基性
アミノ酸が少なく、酸性アミノ酸が多いことがわかった
。又、アミノ酸組成の多いものとしては、アスパラギン
酸１２〜１６％内外、グルタミン酸１２〜１８％内外、
グリシン１２〜１８％内外、ロイシン７〜１２％内外で
あった。

（３）ゲルろ過による溶出図（第１図参照）実施例１に
よって得られたｐＨ調整後の吸引ろ過して得た液体中に
含有する物質について、ゲルろ過性（セファデックスＧ
−５０使用）によって、高分子−低分子の順に溶出させ
、ｌチューブ３−を採取して、分光光度計により２８０
ｎｍで、Ｏ，Ｄ、を測定する。セファデックスＧ−５０
の粒子内に拡散しうる試料溶質の分子量は、ａ０００〜
ｌ　５．　ＯＯＯである。その結果は第１図に示すごと
くであった。尚、分子量についての測定に当っては、標
準物質として、ブルーデキストラン：分子量２００万、
トリプシン二分子量２３．３００　、ミオグロブリン：
分子量１７、２００を用いた。

ゲルろ過による溶出図から、本発明による胎盤分解物は
、約３万位の蛋白質、８．ＱＯＯ−１５、ＯＯＯのポリ
ペブタイド、８，０００以下のポリペブタイドと、アミ
ノ酸を含有することがわかった。

（４）安定性 実施例１で、ｐＨ調整後吸引ろ過した液体に対し、１−
３・ブチレングリコールが３０％になるように添加し、
加熱滅菌を行ったものの安定性について、これを９０〜
９．５℃で、１〜６時間の加熱処理を行い、色度（４７
０ｎｍ）、ｐＨ１外観（オリの発生の有無）について測
定した。その結果は、第２図に示すごとくであった。ｐ
Ｈや外観については６時間の苛酷条件下に対しても変化
は認められなかったが、色度は２時間経過により、約３
％の増加、６時間経過では、約７％増加することがわか
った。これに対し、１−３・ブチレングリコールを添加
しない場合では、経時的に、オリの発生の増加、色度の
増加が；時間経過後に急速に認められた。

したがって、製剤化の際には、出来る限り５０〜６０℃
以下が望ましい。

一方、ＰＨ領領域安定性についてＳ　ｐＨ４〜１１の水
溶液中に、添加したときでは、本発明による液体は、ｐ
　Ｈ５，０以下で白濁し、ｐ　Ｈ５゜０以上では、透明
な水溶液の状態を示し、はとんど変化は認められなかっ
た。しかし、ｐＨがアルカリ側に傾くにつれて、色度（
４７０ｎ　ｍ）も若干増加する傾向を示した。したがっ
て、ローションタイプ以外のものでｐＨが５．０以下の
クリーム、乳液状の製品中には、配合することも可能で
あるが、最適な処方上のｐＨの範囲としては、５．０〜
１０．０である。したがって、化粧石けん類などにも、
配合出来る利点がある以上、本発明による胎盤分解物の
液体について、その特長を物性を主体に述べてきたが、
１−１−３・ブチレングリコールを添加したものは、化
粧品類や、その他の外用塗布剤としては、そのままで使
用することも出来、安定性も良いことがわかった。又、
各種の軟膏剤（クリームベース）などとの配合性も良く
なることがわかった〇 一方、１−３・ブチレングリコールを添加させないで、
吸引ろ過したのちの液体をもとに、減圧濃縮乾燥、噴霧
乾燥、凍結乾燥して得た、１反 結晶状の粉末は、内会用として用いることも出来る。又
、この粉末は再び水溶液とすることが出来、はとんど全
溶するので、注射用としても利用できる。

外用塗布の場合の添加量は、１−３・ブチレングリコー
ルの３０％を加えた液体において、メラニン生成抑制作
用からみると、第１表からして、５〜１０％以上が望ま
しいが、しかし、保湿作用については、１％以上を処方
中に添加することによって、十分な効果が得られる。又
、クリームや乳液の処方中に添加すると、その仕上がり
製品のきめとすべりが良くなり、たとえば処方中の油脂
ベースのべたつきを少なくすることが出来る。また、化
粧品類や軟膏剤中のベースとして用いられる油脂類に対
しては、十分な乳化又は分散されている場合、弱い抗酸
化作用を示し、さらに油脂類に対する抗酸化剤として知
られている、オリザノールとの併用は、相乗的な抗酸化
作用を示し、製品の安定性を高める。抗酸化剤としての
利用の場合は、処方中に０．２〜　　　　　　　　　　
２＋ｏ％程度で十分な効果が得られる。

次に、実施例で得られた液体について、蛋白質系以外の
各種の微量に含まれる生理活性成分にづいて、スタート
原料が人胎盤がら得たものについて、４０ット分を混和
した液体をもとにしｔヒ。

分析を硼→鴫→−一その結果を゛ 典傘第３表中に示す。又、この４０ット分の混和した液
体をもとに、元素分析（元素組成）につい・て調べた結
果は、第４表に示すごとくであった。

（第３表）〔各種微量含有活性成分の定量値〕（次のペ
ージへ続く） （前のページに続く） （第４表）〔元素組成比〕 （５）安全性 本発明による胎盤分解物は、その液体を用いて、経口投
与するとき、急性毒性値は、マウスで１　ｋｇ当り４〇
−以上となり、まったく心配はない。又、　　　　　−
アナフィラキシ−反応についても試験したが、とくに異
状は認められなかった。経皮に対する塗布試験において
も、何ら異状は認められなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明による胎盤分解物によるメラニン生成
抑制剤のゲルろ過による溶出図。 第２図は、本発明による胎盤分解物の液体に、１−３６
ブチレングリコ一ル３０％になるように加えたところの
溶液の熱安定性を示す。 第３図は、本発明による胎盤分解物による、赤外線吸収
スペクトルのパターン（臭化カリウム錠法による）。 第４図は、本発明による胎盤分解物の液体を用いて、波
長２２０〜３５０の０．Ｄ、で測定したときの紫外部吸
収スペクトルのパターン。 特許出願人 −丸ファルコス株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 正常分娩後の人又は牛の胎盤を、ただちに凍結保存し、
   凍結された胎盤を、流水槽内に浸しながら凍結融解され
   次第、剪断攪拌機に投入し、’　３０００　ｒ　ｐ　ｍ
   の回転速度で、泥状化組織物となしてから、圧搾機でプ
   レスして脱血と脱水を行ない、圧搾後の胎盤微細片状組
   織物７〜１５部に対し、アセトン３〜７部を加え、２昼
   夜浸漬してから吸引ろ過し、次いで、過剰の水を加え１
   １吸引ろ過を行い、用いた水分及びアセトンと共に、浸
   漬によって得られたアセトン可溶物を除去したのち、Ｉ
   Ｎ水酸化す）　ＩＪウム溶液８０〜１５０部を加え、６
   ０〜８０℃の湯浴上で、時々攪拌しながら、４〜８時間
   の加温を行ったら、加温をやめて静置し、冷却させてか
   らその水層部を分取して、乳酸を用いてｐＨが、５．０
   〜７．０に調整してから、吸引ろ過を行って得られるこ
   とを特徴とする、胎盤分解物によるメラニン生成抑制剤
   →養寺蘂。