JPS58172552A - 抗ストレプトリジンo−ラテツクス試薬およびその製法 - Google Patents
抗ストレプトリジンo−ラテツクス試薬およびその製法Info
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- JPS58172552A JPS58172552A JP58044627A JP4462783A JPS58172552A JP S58172552 A JPS58172552 A JP S58172552A JP 58044627 A JP58044627 A JP 58044627A JP 4462783 A JP4462783 A JP 4462783A JP S58172552 A JPS58172552 A JP S58172552A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発gAはストレプトリジン0に対する抗体を測定する
ためのラテックス試薬ならびにかかる試薬の製法に関す
る。
ためのラテックス試薬ならびにかかる試薬の製法に関す
る。
ストレプトリジンOはランスフィールド(Lan−a@
fi・111 )ム群、Cヒト群および0群のβ−溶血
性連鎖球菌の細胞外新陳代aim物である。これはヒト
に特異的な抗体の形成を惹起する。とトの血液中におけ
るこの袂□゛1体濃度の検出ならびに関知は診断上重要
である。その塩山は濃度の上昇は連鎖球菌感染の存在を
九は先行感染を表わしそして連鎖球菌により惹起される
強直性を椎炎、ベヒテレフ氏病(Bechterews
chs Krank−h・1t )、糸球体腎炎、ア
ンギーナ、狸紅熱、丹毒、扁桃炎、肺炎または敗血症の
診断上の徴候でありうる。
fi・111 )ム群、Cヒト群および0群のβ−溶血
性連鎖球菌の細胞外新陳代aim物である。これはヒト
に特異的な抗体の形成を惹起する。とトの血液中におけ
るこの袂□゛1体濃度の検出ならびに関知は診断上重要
である。その塩山は濃度の上昇は連鎖球菌感染の存在を
九は先行感染を表わしそして連鎖球菌により惹起される
強直性を椎炎、ベヒテレフ氏病(Bechterews
chs Krank−h・1t )、糸球体腎炎、ア
ンギーナ、狸紅熱、丹毒、扁桃炎、肺炎または敗血症の
診断上の徴候でありうる。
抗ストレプトリジ10を測定するには既にラテックス凝
集試験が知られている。
集試験が知られている。
しかしながら既知のラテックス試薬は実施条件下に充分
に安定なわけではなくそして感度が速かに失われるかま
たは増大する。
に安定なわけではなくそして感度が速かに失われるかま
たは増大する。
今や驚ろくべきことに抗ストレプトリジンOを測定する
ための安定なラテックス試薬の調製を可能にする方法が
見出された。
ための安定なラテックス試薬の調製を可能にする方法が
見出された。
この方法は、ストレプトリジンOを二官能性低分子化合
物お・よび場合によりガンマグロブリ/マ九はガンマグ
ロブリンのFab断片と反応させそして生成物を既知方
法によりラテックスに吸着させることにある。
物お・よび場合によりガンマグロブリ/マ九はガンマグ
ロブリンのFab断片と反応させそして生成物を既知方
法によりラテックスに吸着させることにある。
従って本発明はストレプトリジン0を二官能性低分子化
合物および場合によりガンマグロブリンまたはガンマグ
ロブリンのFat)断片と反応させそして生成物を既知
方法により担体好ましくはラテックスに吸着させること
を特徴とする、ストレプトリジンOに対する抗体を測定
するためのラテックス試薬の製法に関する。
合物および場合によりガンマグロブリンまたはガンマグ
ロブリンのFat)断片と反応させそして生成物を既知
方法により担体好ましくはラテックスに吸着させること
を特徴とする、ストレプトリジンOに対する抗体を測定
するためのラテックス試薬の製法に関する。
本発明はさらにかかる試薬を含有する薬剤にも関する。
ガンマグロブリンまたはかかる本のの?Lkl s分へ
のストレプトリジ10の結合は対応する抗体の結合性質
を変えない。生成物は安定なラテックス試薬の調製に適
する。本発明の意味におけるガンマグロブリンとしては
例えば牛ガンマグロブリン、そのFat)断片またはヒ
トガンマグロブリンの?亀す断片のような動物性ガンマ
グロブリンが適する。
のストレプトリジ10の結合は対応する抗体の結合性質
を変えない。生成物は安定なラテックス試薬の調製に適
する。本発明の意味におけるガンマグロブリンとしては
例えば牛ガンマグロブリン、そのFat)断片またはヒ
トガンマグロブリンの?亀す断片のような動物性ガンマ
グロブリンが適する。
反応性の二官能性化合物としては蛋白質中の官能基と結
合するものがあげられる。好撞しいのは下記一般式 %式%) アニオン−”N*CH(Cも)4CHN、了ニオンーH
1CマCH−x−HC9CH(モ42.−当−1電、O
−)を有するジアルデヒド、ビスオキシラン、アミノビ
ニルスルホ/、ビスジアゾニウム塩または水溶性カルボ
ジイミドである。
合するものがあげられる。好撞しいのは下記一般式 %式%) アニオン−”N*CH(Cも)4CHN、了ニオンーH
1CマCH−x−HC9CH(モ42.−当−1電、O
−)を有するジアルデヒド、ビスオキシラン、アミノビ
ニルスルホ/、ビスジアゾニウム塩または水溶性カルボ
ジイミドである。
しかしながら特に好ましいのはグルタルジアルデヒドで
ある。反応成分は任意の順序で一緒にされうる。
ある。反応成分は任意の順序で一緒にされうる。
好ましい方法は次のとおりである。ストレプトリジン、
ガンマグロブリンまたはそのFab断片および二官能性
試薬からの生成物を調製するKは、ガンマグロブリンま
たはFab断片に1〜10重量部の二官能性試薬を加え
そしてこの混合物をpH7〜10および0〜20℃にお
いて2〜5時間攪拌する。過剰のグルタルジアルデヒド
試薬を好ましくはセファデックス(El@phadez
■)G25またはセファデックス050カラムにより分
離し、そして生成物を1〜5重量部のストレプトリジン
0とpH7〜1011・および0〜30℃で反応させる
。
ガンマグロブリンまたはそのFab断片および二官能性
試薬からの生成物を調製するKは、ガンマグロブリンま
たはFab断片に1〜10重量部の二官能性試薬を加え
そしてこの混合物をpH7〜10および0〜20℃にお
いて2〜5時間攪拌する。過剰のグルタルジアルデヒド
試薬を好ましくはセファデックス(El@phadez
■)G25またはセファデックス050カラムにより分
離し、そして生成物を1〜5重量部のストレプトリジン
0とpH7〜1011・および0〜30℃で反応させる
。
特に好ましいのは、ストレプトリジン0を含有するガン
マグロブリン1+はFab断片成分を1:α1〜10の
割合で二官能性化合物と混合しそして0〜20℃で1〜
10時間攪拌することによる一段階反応における反応で
ある。二官能性化合物としてアルデヒドが使用される場
合未反応のアルデヒド基は既知方法で例えばグリシンの
よりなアミノ醗で中和されうる。
マグロブリン1+はFab断片成分を1:α1〜10の
割合で二官能性化合物と混合しそして0〜20℃で1〜
10時間攪拌することによる一段階反応における反応で
ある。二官能性化合物としてアルデヒドが使用される場
合未反応のアルデヒド基は既知方法で例えばグリシンの
よりなアミノ醗で中和されうる。
本発明による試薬を得るために反応生成物をラテックス
懸濁液と混合する。
懸濁液と混合する。
ラテックスとしてはそれ自体既知の重合体ラテックス特
にポリスチレンラテックスが適当である。
にポリスチレンラテックスが適当である。
得られる試薬は、ストレプトリジン0を二官能性試薬お
よびガンマグロブリンまたはかかるものの?ab断片と
・・反応させる場合に最も安定性がよい。しかしながら
ガンマグロブリンまたは’tab成分が反応中に存在し
ない場合も安定性は高められる。
よびガンマグロブリンまたはかかるものの?ab断片と
・・反応させる場合に最も安定性がよい。しかしながら
ガンマグロブリンまたは’tab成分が反応中に存在し
ない場合も安定性は高められる。
本発明方法により調製された試薬は室温においてのみな
らず温度負荷条件下においても比較的安定である。
らず温度負荷条件下においても比較的安定である。
例 1
ストレプトリジン010tおよびガンマグロブリンのt
ab断片2fを蒸留水0.51と混合しそして攪拌する
。4°Cで約30分後にストレプトリジン0が溶解した
。これを毎分10000回転で遠心分離17そして沈降
物を捨てた。
ab断片2fを蒸留水0.51と混合しそして攪拌する
。4°Cで約30分後にストレプトリジン0が溶解した
。これを毎分10000回転で遠心分離17そして沈降
物を捨てた。
この溶液に、PBS (燐酸塩緩衝された食塙婢液)9
00−中に溶解した2 5 % (W/V)グルタルジ
アルデヒド溶液4WLlを加えそして4℃で5時間攪拌
した。この共役物(コンジュゲート)にグリシン1tを
加えそして4℃でさらに12〜16時間攪拌した。
00−中に溶解した2 5 % (W/V)グルタルジ
アルデヒド溶液4WLlを加えそして4℃で5時間攪拌
した。この共役物(コンジュゲート)にグリシン1tを
加えそして4℃でさらに12〜16時間攪拌した。
ラテックス試薬の調製は既知方法によ抄遂行された。こ
れには共役物を牛またはヒトのアルブミンと混合しそし
て標準物を希釈することKより一整される所望の感度に
到達するまでポリスチレンラテックスを加えた。この方
法で調製されたラテックス試薬を用いて血液中の抗スト
レブ) IJレジンを確聞し九。これは既知方法による
小胃中におけるストレプトリジン0に対する抗体の半宇
量的測定にも使用された。
れには共役物を牛またはヒトのアルブミンと混合しそし
て標準物を希釈することKより一整される所望の感度に
到達するまでポリスチレンラテックスを加えた。この方
法で調製されたラテックス試薬を用いて血液中の抗スト
レブ) IJレジンを確聞し九。これは既知方法による
小胃中におけるストレプトリジン0に対する抗体の半宇
量的測定にも使用された。
例 2
ストレプトリジン0 10Fおよびガンマグロブリンの
1Fab断片4tを蒸留水[1,5tと混合しそして攪
拌し虎。4℃で約30分後にストレプトリジン0が溶解
した。これを毎分10000回転で遠心分離しそして沈
降物を捨てた。この溶液に、PBE1800m中に溶解
した25嚢グルタルジアルデヒド溶液5dを加えそして
4℃で5時間攪拌した。過剰のグルタルジアルデヒドを
セファデックス050カラムで分離しそして共役物を濃
縮後にラテックスA8L試薬の調製に使用した。
1Fab断片4tを蒸留水[1,5tと混合しそして攪
拌し虎。4℃で約30分後にストレプトリジン0が溶解
した。これを毎分10000回転で遠心分離しそして沈
降物を捨てた。この溶液に、PBE1800m中に溶解
した25嚢グルタルジアルデヒド溶液5dを加えそして
4℃で5時間攪拌した。過剰のグルタルジアルデヒドを
セファデックス050カラムで分離しそして共役物を濃
縮後にラテックスA8L試薬の調製に使用した。
例 3
ストレプトリジン05fを蒸留水250dと混合しそし
て攪拌した。
て攪拌した。
4℃で30分後にストレプトリジンOが溶解した。これ
を毎分10000回転で遠心分離しそして沈降物を捨て
た。この溶液に、PB85001中に溶解した2 5
% (w/v)グルタルジアルデヒド溶液60m1を加
えそして4℃で2時間攪拌し虎。過剰のグルタルジアル
デヒドをセファデックスG50カラムで分離した。
を毎分10000回転で遠心分離しそして沈降物を捨て
た。この溶液に、PB85001中に溶解した2 5
% (w/v)グルタルジアルデヒド溶液60m1を加
えそして4℃で2時間攪拌し虎。過剰のグルタルジアル
デヒドをセファデックスG50カラムで分離した。
溶出液を約6001となるまで濃縮し′#:、にの溶液
KPB8100m中に溶解したFabl!tr片2fを
加えそして4℃で12〜16時間攪拌した。
KPB8100m中に溶解したFabl!tr片2fを
加えそして4℃で12〜16時間攪拌した。
グリシン1fをこの溶液に加えそしてさらに16時間攪
拌した。共役物をラテックス試薬の調製に使用した。
拌した。共役物をラテックス試薬の調製に使用した。
例1におけるジアルデヒドを0.1〜10重量部の1−
アミノ−4−β−オキシエチルスルホン酸エステル(ハ
ラ塩基エステル)t&1dl−シクロへキシル−3−(
2−モルホリノエチル)−カルボジイミドp−1ルエン
スルホン酸で置換すると、比肩1〜うる性質を有する試
薬が得られた。度広条件(pH,温度)はそれぞれ使用
された試薬に適合された。
アミノ−4−β−オキシエチルスルホン酸エステル(ハ
ラ塩基エステル)t&1dl−シクロへキシル−3−(
2−モルホリノエチル)−カルボジイミドp−1ルエン
スルホン酸で置換すると、比肩1〜うる性質を有する試
薬が得られた。度広条件(pH,温度)はそれぞれ使用
された試薬に適合された。
例 4
ガンマグロブリンの11Fa’b断片2tを4℃にお込
て蒸留水に溶解した。水100−中グルタルジアルデヒ
ド25Fの溶液4−と、PB8 (燐酸塩緩衝された食
塩水、溶液)1,500wItの混合物を先に得られ九
溶液に加えそしてこのパッチを+4℃で5時間攪拌した
。過剰のグルタルジアルデヒドをセファデックス050
カラムを軽て分離しそしてFab断片およびグルタルジ
アルデヒドとの反応生成物を限外ν過によシ濃縮した。
て蒸留水に溶解した。水100−中グルタルジアルデヒ
ド25Fの溶液4−と、PB8 (燐酸塩緩衝された食
塩水、溶液)1,500wItの混合物を先に得られ九
溶液に加えそしてこのパッチを+4℃で5時間攪拌した
。過剰のグルタルジアルデヒドをセファデックス050
カラムを軽て分離しそしてFab断片およびグルタルジ
アルデヒドとの反応生成物を限外ν過によシ濃縮した。
PB8500d中ストレプトリジン0の1(lを前記溶
液に加えそしてこのパッチを4℃で16時間攪拌した。
液に加えそしてこのパッチを4℃で16時間攪拌した。
このコンジュゲートはラテックスAEIL試薬の製造に
使用された。
使用された。
例 5
ガンマグロブリンのFab断片2tを+4℃において蒸
留水15〇−中に溶解し九。水10〇−中グルタルジア
ルデヒド25fの溶液2−と、PB81500−の混合
物を先に得られた溶液に加えそして得られたfggを+
4℃で5時間攪拌した。五6tのMg804・7 H2
Oを含有する蒸留水60〇−に溶解し九ストレプトリジ
ン6ft−加えそして混合物を+4℃で16時間攪拌し
た。濃縮後、コンジュゲートはラテックスム8L試薬の
製造に使用された。
留水15〇−中に溶解し九。水10〇−中グルタルジア
ルデヒド25fの溶液2−と、PB81500−の混合
物を先に得られた溶液に加えそして得られたfggを+
4℃で5時間攪拌した。五6tのMg804・7 H2
Oを含有する蒸留水60〇−に溶解し九ストレプトリジ
ン6ft−加えそして混合物を+4℃で16時間攪拌し
た。濃縮後、コンジュゲートはラテックスム8L試薬の
製造に使用された。
同様の性質を有する試薬が前記各例中のジアルデヒドを
11〜10重量部の1−アミノ−4−l−オキシエチル
スルホン酸エステル(ノラに−スエステル)または1−
シクロヘキシル−3−(2−モルホリノエチル)−カル
ボジイミドp−)ルエンスルホン酸で置き換えることに
より得られた。反応条件(pJ負温度は各場合に使用さ
れる試薬に適合させた。
11〜10重量部の1−アミノ−4−l−オキシエチル
スルホン酸エステル(ノラに−スエステル)または1−
シクロヘキシル−3−(2−モルホリノエチル)−カル
ボジイミドp−)ルエンスルホン酸で置き換えることに
より得られた。反応条件(pJ負温度は各場合に使用さ
れる試薬に適合させた。
ゼルシャフト
、・二″′::Z□′
−Sら−1
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1)ストレプトリジンOを二官能性低分子化合物および
場合によりガンマグロブリンまたはガンマグロブリンの
F’ab断片と反応させそして生成物をラテックスに吸
着させることを特徴とする、抗ストレプトリリン0−ラ
テックス試薬の製法。 2)ラテックスがスチレンホモポリマーまたはスチレン
コポリマーであることを特徴とする前記第1項記載の方
法。 3)ガンマグロブリンがヒトガンマグロブリンであるこ
とを%倣とする前記第1〜2項記載の方法。 4) pab断片がヒトガンマグロブリンの断片であ
ることを特徴とする前記第1〜2項記載の方法。 5)ガンマグロブリンが牛ガンマグロブリンであること
を特徴とする前記第1〜2項記載の方法。 6)二官能性化合物が一般式 %式%) アニオン″NQCH(CHfi)、CHN犬アニオ/−
H*c、、−、cH−x−HC,、W、CHI (r
=−c4.−cc4−cz−ca、o−)マ R”−N=C=N−R” (”−0+ ca
3゜−CH,−CM、−C6H。 r=−(ca、)、−N(cH,I)、−aCl。 −CH寓CM諺Q−a8c C,H,90SH)のうち
の1化合物であることを特徴とする前記第1項記載の方
法。 7)二官能性化合物がグルタルジアルデヒドであること
を特徴とする前記第1項記載の方法。 8)前記第1〜7項の1項記載の生成物を含有すること
を特徴とする薬剤。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3210080.9 | 1982-03-19 | ||
DE19823210080 DE3210080A1 (de) | 1982-03-19 | 1982-03-19 | Anti-streptolysin o-latex-reagenz und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS58172552A true JPS58172552A (ja) | 1983-10-11 |
JPH0333232B2 JPH0333232B2 (ja) | 1991-05-16 |
Family
ID=6158715
Family Applications (1)
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