JPS58162295A - 動植物の遺伝形質変換方法 - Google Patents
動植物の遺伝形質変換方法Info
- Publication number
- JPS58162295A JPS58162295A JP57042959A JP4295982A JPS58162295A JP S58162295 A JPS58162295 A JP S58162295A JP 57042959 A JP57042959 A JP 57042959A JP 4295982 A JP4295982 A JP 4295982A JP S58162295 A JPS58162295 A JP S58162295A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dna
- animal
- cells
- red blood
- vegetable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は動植物の遺伝形質を変換する方法に関する。
動植物の育種や品種改良を行なったり、有用な生産物を
効率的に生産させる目的で動植物の細胞の遺伝形質を変
換せしめる試みがなされている。動植物の遺伝形質変換
方法の１つとして、赤血球ゴースト内にＤＮＡを取り込
ませ、該赤血球ゴーストを動物細胞と融合させる方法が
知られている（たとえば、工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆＯｙｔｏｌｏｇｙ、 ｖｏｌ、６
２．２６〜６７頁参照）。この方法では、赤血球懸濁液
の浸透圧を変化させることによってＤＮＡを赤血球ゴー
スト内に取り込ませるのであるが、実際にはＤＮＡはほ
とんど取り込まれず、また取り込まれる場合でも低分子
のＤＮＡのみが取り込まれるにすぎない。そのため、目
的とする動植物細胞の遺伝形質の変換を満足し得る程度
に行なうことは出来なかった。
効率的に生産させる目的で動植物の細胞の遺伝形質を変
換せしめる試みがなされている。動植物の遺伝形質変換
方法の１つとして、赤血球ゴースト内にＤＮＡを取り込
ませ、該赤血球ゴーストを動物細胞と融合させる方法が
知られている（たとえば、工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆＯｙｔｏｌｏｇｙ、 ｖｏｌ、６
２．２６〜６７頁参照）。この方法では、赤血球懸濁液
の浸透圧を変化させることによってＤＮＡを赤血球ゴー
スト内に取り込ませるのであるが、実際にはＤＮＡはほ
とんど取り込まれず、また取り込まれる場合でも低分子
のＤＮＡのみが取り込まれるにすぎない。そのため、目
的とする動植物細胞の遺伝形質の変換を満足し得る程度
に行なうことは出来なかった。
本発明者は、赤血球にＤＮＡを効率よく取り込ませる方
法について研究を重ねた結果、ＤＮＡを含む溶液に赤血
球を懸濁し、この懸濁液を急速に凍結したのち解凍する
ことによりＤＮＡが赤血球内に封入されることを知見し
、しかもこの場合に封入されるＤＮＡ 量は従来法よ如
も多いことを見出した。さらに、赤血球内に取り込まれ
る］）ＮＡはその分装置を問わず、高分子量のものでも
封入される。したがって、このようにして得られたＤＮ
Ａを封入した赤血球ゴーストを動植物細胞と融合せしめ
れば、多量のＤＮＡが、しかもその分子量の制約を受け
ることなく該細胞内に導入されることとなる。本発明は
かかる知見に基いて完成されたものである。
法について研究を重ねた結果、ＤＮＡを含む溶液に赤血
球を懸濁し、この懸濁液を急速に凍結したのち解凍する
ことによりＤＮＡが赤血球内に封入されることを知見し
、しかもこの場合に封入されるＤＮＡ 量は従来法よ如
も多いことを見出した。さらに、赤血球内に取り込まれ
る］）ＮＡはその分装置を問わず、高分子量のものでも
封入される。したがって、このようにして得られたＤＮ
Ａを封入した赤血球ゴーストを動植物細胞と融合せしめ
れば、多量のＤＮＡが、しかもその分子量の制約を受け
ることなく該細胞内に導入されることとなる。本発明は
かかる知見に基いて完成されたものである。
本発明はＤＮＡを含む等張水溶液に赤血球を懸濁した懸
濁液を急速に凍結せしめた後解凍して得たＤＮＡを封入
している赤血球ゴーストと、動物細胞またはプロトプラ
スト化した植物細胞とを融合せしめることによシ、動物
細胞または植物細胞にＤＮＡを取り込ませることを特徴
とする動植物細胞の遺伝形質変換方法である。
濁液を急速に凍結せしめた後解凍して得たＤＮＡを封入
している赤血球ゴーストと、動物細胞またはプロトプラ
スト化した植物細胞とを融合せしめることによシ、動物
細胞または植物細胞にＤＮＡを取り込ませることを特徴
とする動植物細胞の遺伝形質変換方法である。
本発明に用いる赤血球は特に制限されないが、赤血球内
にＤＮＡが含まれていない補乳類の赤血球が好ましい。
にＤＮＡが含まれていない補乳類の赤血球が好ましい。
赤血球の採取は普通の方法、たとえば抗凝血剤の入った
注射器で採血したのち、等張燐酸緩衝液（ＰＢＳ、 ｐ
Ｈ７，２）で洗浄し、遠心分離により白血球と血清を除
くことによって得られる。このようにして得た赤血球は
生理食塩水に懸濁して保存する。
注射器で採血したのち、等張燐酸緩衝液（ＰＢＳ、 ｐ
Ｈ７，２）で洗浄し、遠心分離により白血球と血清を除
くことによって得られる。このようにして得た赤血球は
生理食塩水に懸濁して保存する。
また、ＤＮＡを溶解する等張水溶液についても任意のも
のを使用できるが、通常はｐＨを中性付近に保つために
適したＰＢＳなどのバッファーを用いる。赤血球内に封
入されるべきＤＮＡについては分子量の制約がなく、低
分装置のものから高分子量のものまで可能であり、目的
に応じて適切なりＮＡを選択すればよい。たとえばホル
モン、酵素などの有用物質の生産を司るＤＮＡ、 高等
動植物の育種９品種改良に有用なりＮＡなどを適宜選択
することができる。等張渡中のＤＮＡ濃度については任
意であるが、低濃度であれば赤血球内に取り込まれる量
も当然に少なくなる。しかし、ＤＮＡを高濃度に存在さ
せても一部は利用されずに懸濁液に残存するので無駄が
ある。
のを使用できるが、通常はｐＨを中性付近に保つために
適したＰＢＳなどのバッファーを用いる。赤血球内に封
入されるべきＤＮＡについては分子量の制約がなく、低
分装置のものから高分子量のものまで可能であり、目的
に応じて適切なりＮＡを選択すればよい。たとえばホル
モン、酵素などの有用物質の生産を司るＤＮＡ、 高等
動植物の育種９品種改良に有用なりＮＡなどを適宜選択
することができる。等張渡中のＤＮＡ濃度については任
意であるが、低濃度であれば赤血球内に取り込まれる量
も当然に少なくなる。しかし、ＤＮＡを高濃度に存在さ
せても一部は利用されずに懸濁液に残存するので無駄が
ある。
一方、ＤＮＡを含む等張渡に懸濁する赤血球の量につい
ては、一般的には赤血球１ （ｐａｃｋｅｄｖｏｌｕｍ
ｅ ）に対して液体４以上となるようにすることが望ま
しい。
ては、一般的には赤血球１ （ｐａｃｋｅｄｖｏｌｕｍ
ｅ ）に対して液体４以上となるようにすることが望ま
しい。
上記懸濁液を凍結する場合、−１ｏ″ＣＣ以下度とする
ことが望ましく、冷媒としては冷凍アルコール、ドライ
アイス・アセトン、 液（［素などの既知のものの中か
ら適当なものを選択すればよい。本発明では懸濁液を急
速に凍結（１分〜ＳＯ分程度）させることが必要であわ
、そのためには、たとえば上記冷媒中で懸濁液をゆつく
シ攪拌しながら凍結させるとよい。
ことが望ましく、冷媒としては冷凍アルコール、ドライ
アイス・アセトン、 液（［素などの既知のものの中か
ら適当なものを選択すればよい。本発明では懸濁液を急
速に凍結（１分〜ＳＯ分程度）させることが必要であわ
、そのためには、たとえば上記冷媒中で懸濁液をゆつく
シ攪拌しながら凍結させるとよい。
次に、凍結した懸濁液を解凍して用いるが、解凍は室温
に放置すればよい。かくしてＤＮＡが封入された赤血球
ゴーストが得られる。
に放置すればよい。かくしてＤＮＡが封入された赤血球
ゴーストが得られる。
動植物細胞についても目的に応じて適切なものを選択す
ればよく、育種や品種改良を目的とするときは高等動植
物の細胞を用いる。一方、有用な物質の生産に利用する
ときは動植物の培養細胞を用いる。もちろん、下等動植
物細胞であってもよい。しかし、細胞の大きさが小さす
ぎるものは適当でない。なお、植物細胞については予め
プロトプラスト化しておく必要がある。
ればよく、育種や品種改良を目的とするときは高等動植
物の細胞を用いる。一方、有用な物質の生産に利用する
ときは動植物の培養細胞を用いる。もちろん、下等動植
物細胞であってもよい。しかし、細胞の大きさが小さす
ぎるものは適当でない。なお、植物細胞については予め
プロトプラスト化しておく必要がある。
プロトプラスト化は既知の手法によって行なうことがで
き、たとえば植物細胞にβ−１，５−グルカナーゼを作
用させて細胞壁を溶解、除去する方法が適用できる。
き、たとえば植物細胞にβ−１，５−グルカナーゼを作
用させて細胞壁を溶解、除去する方法が適用できる。
動物細胞とＤＮＡの封入された赤血球ゴーストを融合さ
せる方法は、センダイウィルス（ａｖｙ）を用いる方法
やポリエチレングリコールまたはポリビニルアルコール
を用いる方法が知られている。また、植物細胞のプロト
プラストとゴーストとの融合にはポリエチレングリコー
ルまたはポリビニルアルコールが用いられる。たとえば
次の方法により行なうことができる。タバコ（Ｎ１ｃｏ
ｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ、 ｃｖ Ｓａｍｓｕ
ｎ ）の１２〜１５葉期の中葉を取り、裏表皮をビンセ
ットで剥離し、剥離面を酵素液〔１％０ｅｌｌｕｌａｓ
ｅ ０ｒｒｏｓ＋ｕｋａ Ｒ−１０，０，０５％ Ｍａ
ｃｅｒｏｚｙｍｅ ０ｎｏＡ止ａ Ｒ−１０（Ｋｉｎ
ｌｃｉ Ｙａｌｃｕｌｔ Ｏｏ、）０５Ｍ５Ｍマンニラ
ｐＨは薄いＫＯＨで５．８に調製〕に浮かべ２６°Ｃで
５時間時々かき混ぜながら培養する。
せる方法は、センダイウィルス（ａｖｙ）を用いる方法
やポリエチレングリコールまたはポリビニルアルコール
を用いる方法が知られている。また、植物細胞のプロト
プラストとゴーストとの融合にはポリエチレングリコー
ルまたはポリビニルアルコールが用いられる。たとえば
次の方法により行なうことができる。タバコ（Ｎ１ｃｏ
ｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ、 ｃｖ Ｓａｍｓｕ
ｎ ）の１２〜１５葉期の中葉を取り、裏表皮をビンセ
ットで剥離し、剥離面を酵素液〔１％０ｅｌｌｕｌａｓ
ｅ ０ｒｒｏｓ＋ｕｋａ Ｒ−１０，０，０５％ Ｍａ
ｃｅｒｏｚｙｍｅ ０ｎｏＡ止ａ Ｒ−１０（Ｋｉｎ
ｌｃｉ Ｙａｌｃｕｌｔ Ｏｏ、）０５Ｍ５Ｍマンニラ
ｐＨは薄いＫＯＨで５．８に調製〕に浮かべ２６°Ｃで
５時間時々かき混ぜながら培養する。
培養後、４層のガーゼで濾過し、未分解の組織等を除く
。プロトプラスト懸濁液を７００ ｒＩＩＩＩｎ＋２分
間の遠心分離を行ない、プロトプラストを集める。この
ペレットに０．５ Ｍマンニットを加え５回達心洗浄を
行なう。次に、１０ ｍＭ ０ａＱ４ 。
。プロトプラスト懸濁液を７００ ｒＩＩＩＩｎ＋２分
間の遠心分離を行ない、プロトプラストを集める。この
ペレットに０．５ Ｍマンニットを加え５回達心洗浄を
行なう。次に、１０ ｍＭ ０ａＱ４ 。
２０％目？リエチレングリコール、０７Ｍマンニットを
含む１０ ｍＭ ＴｒｉＢ−ＨＯｔ、 ｐＨ７，６を２
１ワツセルマンに入れ、約１０’（１１１／の赤血球ゴ
ースト５５μｔとプロトプラストのペレット５０μｔを
同時に加え素早く混合する。３７°Ｃで１５分間培養し
たのち１０ ｍＭ ０ａ０４を含む０．７Ｍマンニット
を８１加えよく混ぜ合わせる。
含む１０ ｍＭ ＴｒｉＢ−ＨＯｔ、 ｐＨ７，６を２
１ワツセルマンに入れ、約１０’（１１１／の赤血球ゴ
ースト５５μｔとプロトプラストのペレット５０μｔを
同時に加え素早く混合する。３７°Ｃで１５分間培養し
たのち１０ ｍＭ ０ａ０４を含む０．７Ｍマンニット
を８１加えよく混ぜ合わせる。
かくして、ＤＮＡが取り込まれた動植物細胞が得られる
。この場合、動植物細胞に融合する赤血球ゴーストは１
個のみのときもあるが、複数個の赤血球ゴーストが融合
することもある。
。この場合、動植物細胞に融合する赤血球ゴーストは１
個のみのときもあるが、複数個の赤血球ゴーストが融合
することもある。
このようなときには、 ＤＮＡが取り込まれる量も多く
なる。
なる。
このように、本発明によればＤＮＡの種類が制約されず
に、しかも多量に動植物の細胞の細［１ｔへＤＮＡを直
接導入することができるので、宿主細胞の遺伝形質が変
換される確率は従来のリン酸カルシウム法に比べて非常
に高いものとなる。さらに本発明の特徴は同時に多量の
細胞にＤＮＡを導入できることであり、標的細胞の数に
は制限はないことである。
に、しかも多量に動植物の細胞の細［１ｔへＤＮＡを直
接導入することができるので、宿主細胞の遺伝形質が変
換される確率は従来のリン酸カルシウム法に比べて非常
に高いものとなる。さらに本発明の特徴は同時に多量の
細胞にＤＮＡを導入できることであり、標的細胞の数に
は制限はないことである。
次に、本発明を実施例により説明する。
実施例１
ＤＮＡとしてプラスミドｐＢＲ５２２に単純ヘルペスウ
ィルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子を組込んだものを
用い、このＤＮＡ ｔ−ＰＢ８ （ＩＪン酸緩衝生理食
塩水＋ｐｕｚ２） に１８９．乙ｄとなるように溶解し
、これにヒト赤面ｆｉ（２Ｘ１０９程度の個数）α２
ｄ （ｐａａｋｅｄ ｖｏｌｕｍｅ ）を加えた。次に
、これを冷媒ドライアイス−アルコール（−ＳＯｏＣ）
にゆるく振とうしながら浸漬して凍結させた。凍結した
のち取如出し、室温下で解凍せしめた。解凍したヒト赤
血球をＰＢＳにて５０００ｈｉｍ’ｓ分の条件で洗浄し
た。このようにして得られた赤血球の中にはヘモグロビ
ンの代シにＤＮＡが封入されている。
ィルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子を組込んだものを
用い、このＤＮＡ ｔ−ＰＢ８ （ＩＪン酸緩衝生理食
塩水＋ｐｕｚ２） に１８９．乙ｄとなるように溶解し
、これにヒト赤面ｆｉ（２Ｘ１０９程度の個数）α２
ｄ （ｐａａｋｅｄ ｖｏｌｕｍｅ ）を加えた。次に
、これを冷媒ドライアイス−アルコール（−ＳＯｏＣ）
にゆるく振とうしながら浸漬して凍結させた。凍結した
のち取如出し、室温下で解凍せしめた。解凍したヒト赤
血球をＰＢＳにて５０００ｈｉｍ’ｓ分の条件で洗浄し
た。このようにして得られた赤血球の中にはヘモグロビ
ンの代シにＤＮＡが封入されている。
上記の如くして得たヒト赤血球ゴーストをＰＢＳに１０
重量％となるように懸濁した。一方、チミジンキナーゼ
欠損のマウスＬＩ［［Ｉ胞を同じＰＢＳに１０重１ｌｉ
ｉｔ％となるように懸濁した。これシン ら２種の懸濁液それぞれ［１２５ｍを４０℃の下で混合
した。
重量％となるように懸濁した。一方、チミジンキナーゼ
欠損のマウスＬＩ［［Ｉ胞を同じＰＢＳに１０重１ｌｉ
ｉｔ％となるように懸濁した。これシン ら２種の懸濁液それぞれ［１２５ｍを４０℃の下で混合
した。
センダイウィルス１０００ＨＡＵ（赤血球凝集価の単位
）をぺ） ＩＪ皿に入れ、該ペトリ皿の上方２０ｃｒｎ
の位置から２０Ｗの紫外線を５分間照射して不活性化し
た。このようにして不活性化したセンダイウィルスα５
１１／を前記の懸濁液混合物α５耐と混ぜて４°Ｃで１
５分間放置したのち、振とうしながら５７°Ｃに昇温し
た。これによシ赤血球と細胞の間で融合が起こり赤血球
中のＤＮＡがＩＩ！１８胞内に取込まれた。
）をぺ） ＩＪ皿に入れ、該ペトリ皿の上方２０ｃｒｎ
の位置から２０Ｗの紫外線を５分間照射して不活性化し
た。このようにして不活性化したセンダイウィルスα５
１１／を前記の懸濁液混合物α５耐と混ぜて４°Ｃで１
５分間放置したのち、振とうしながら５７°Ｃに昇温し
た。これによシ赤血球と細胞の間で融合が起こり赤血球
中のＤＮＡがＩＩ！１８胞内に取込まれた。
この細胞をＨＡＴ培地に培養し、分裂した細胞数（％）
を４日後に調べた。さらに ３Ｈ−チミジン存在下で２
日間培養し、オートラジオグラフでａＨの核への取り込
みを観察することによってチミジンキナーゼ活性を新し
い遺伝形質として獲得して、細胞の遺伝形質が変換され
たことを確めた。
を４日後に調べた。さらに ３Ｈ−チミジン存在下で２
日間培養し、オートラジオグラフでａＨの核への取り込
みを観察することによってチミジンキナーゼ活性を新し
い遺伝形質として獲得して、細胞の遺伝形質が変換され
たことを確めた。
特許出願人 古 沢 温
式 理 人 弁理士 久保田藤部
８−
Claims (1)
- ＤＮＡを含む等張水溶液に赤血球を懸濁した懸濁液を急
速に凍結せしめた後解凍して得たＤＮＡ を封入して
いる赤血球ゴーストと、動物細胞またはプロトプラスト
化した植物細胞とを融合せしめることにより、動物細胞
または植物細胞内にＤＮＡを取シ込ませることを特徴と
する動植物細胞の遺伝形質変換方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57042959A JPS58162295A (ja) | 1982-03-19 | 1982-03-19 | 動植物の遺伝形質変換方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57042959A JPS58162295A (ja) | 1982-03-19 | 1982-03-19 | 動植物の遺伝形質変換方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58162295A true JPS58162295A (ja) | 1983-09-26 |
| JPS6114795B2 JPS6114795B2 (ja) | 1986-04-21 |
Family
ID=12650561
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57042959A Granted JPS58162295A (ja) | 1982-03-19 | 1982-03-19 | 動植物の遺伝形質変換方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58162295A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106267421A (zh) * | 2016-07-01 | 2017-01-04 | 翁炳焕 | 母胎血型不合血浆净化器 |
-
1982
- 1982-03-19 JP JP57042959A patent/JPS58162295A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106267421A (zh) * | 2016-07-01 | 2017-01-04 | 翁炳焕 | 母胎血型不合血浆净化器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6114795B2 (ja) | 1986-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bone et al. | Isotopes incorporated in the nucleic acids of Trypanosoma mega | |
| FITZSIMONS et al. | Separation and purification of protoplast types from Commelina communis L. leaf epidermis | |
| CN111235087B (zh) | 一种棉花原生质体制备方法 | |
| CN109355246B (zh) | 一种拟南芥叶肉细胞原生质体及其制备方法和应用 | |
| US11077148B2 (en) | Acellular biologic composition and method of manufacture | |
| JP2000510707A (ja) | カッサバプロトプラストの生産及び形質転換方法 | |
| CN113444678A (zh) | 制备单细胞核悬液的方法、单细胞测序方法及试剂盒 | |
| Medzon et al. | Structural features of vaccinia virus revealed by negative staining, sectioning, and freeze-etching | |
| CN107267549A (zh) | 一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法 | |
| Kamo et al. | Embryogenic callus formation from maize protoplasts | |
| CN109207419A (zh) | 甘蔗原生质体超低温保存方法 | |
| CN110499278A (zh) | 一种银杏叶原生质体分离纯化以及瞬时转化的方法 | |
| Knox et al. | Mentor pollen techniques | |
| Fowke et al. | Electron microscopic observations of cultured cells and protoplasts of Ammi visnaga | |
| CN105647965A (zh) | 一种柑橘原生质体转化及提纯方法 | |
| JPS58162295A (ja) | 動植物の遺伝形質変換方法 | |
| Ito | Studies on the behavior of meiotic protoplasts: I. Isolation from microsporocytes of liliaceous plants | |
| Han et al. | Protoplast isolation and transient transformation system for Ginkgo biloba L. | |
| Flick et al. | Dissociating tissues into cells and the development of Hydra from aggregated cells | |
| CN109112150A (zh) | OsLUT2基因在水稻光保护中的应用 | |
| Saunders et al. | Chemically induced fusion of plant protoplasts | |
| CN110358722A (zh) | 一种山苍子叶肉细胞原生质体的制备方法 | |
| CN107868797A (zh) | 一种捕光色素蛋白基因Lhcx3在提高三角褐指藻抵御高光强中的应用 | |
| Hughes et al. | Scanning electron microscopy of barley protoplasts | |
| JPH05227947A (ja) | 鳥類原始生殖細胞の分離方法 |