JPS58129992A - アデノシン一リン酸をアデノシン三リン酸へ変換する方法 - Google Patents
アデノシン一リン酸をアデノシン三リン酸へ変換する方法Info
- Publication number
- JPS58129992A JPS58129992A JP57010337A JP1033782A JPS58129992A JP S58129992 A JPS58129992 A JP S58129992A JP 57010337 A JP57010337 A JP 57010337A JP 1033782 A JP1033782 A JP 1033782A JP S58129992 A JPS58129992 A JP S58129992A
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- JP
- Japan
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- adenosine
- atp
- converting
- enzyme
- diphosphate
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアデノシン−リン酸（ＡＭＰ）’にアデノシン
ニリン酸（ＡＤＰ）へ変換する酵素およびＡＤＰをアデ
ノシン三リン＆（ＡＴＰ）へ変換する酵素を用いてＡＭ
ＰｔＡＴＰに変換する方法に関するものである。
ニリン酸（ＡＤＰ）へ変換する酵素およびＡＤＰをアデ
ノシン三リン＆（ＡＴＰ）へ変換する酵素を用いてＡＭ
ＰｔＡＴＰに変換する方法に関するものである。
生体内において、生命を維持するために数多くの生合成
反応が酵素を触媒として営まｎている。
反応が酵素を触媒として営まｎている。
それらのうち特に重要な結合反応を行なうに当ってはＡ
ＴＰがエネルギー源または補助因子として必簀である。
ＴＰがエネルギー源または補助因子として必簀である。
この際、ＡＴＰはエネルギー源または補助因子として働
いたのちＡｔ）ＰまたはＡＭＰに分解され消費されてし
まうことになる。一方。
いたのちＡｔ）ＰまたはＡＭＰに分解され消費されてし
まうことになる。一方。
最近、生体内の反応を工業的に工場内の反応器中で再現
しようとする試みが盛んに行なわれるようになってきて
いる。これは近代化学工業の見直しから生体丙反応の省
エネルギー性、無公害性などが注目されるようになった
もので６Ｊ）、％にファインケミカルの分野において必
須の技術になろうとしており、加水分解反応、異性化反
応などの技術分野においてはすでに実用化が成功してい
る。
しようとする試みが盛んに行なわれるようになってきて
いる。これは近代化学工業の見直しから生体丙反応の省
エネルギー性、無公害性などが注目されるようになった
もので６Ｊ）、％にファインケミカルの分野において必
須の技術になろうとしており、加水分解反応、異性化反
応などの技術分野においてはすでに実用化が成功してい
る。
しかし、結合反応においては上述のようにＡＴＰという
高価な物質をエネルギー源または補助因子として消費す
るために少なくとも鮭済的には成り立ちえないという問
題点が実用化を妨けている。
高価な物質をエネルギー源または補助因子として消費す
るために少なくとも鮭済的には成り立ちえないという問
題点が実用化を妨けている。
すなわち、ＡＴＰが消費さｎた産物であるＡＤＰ。
ＡＭＰ 、特に最低のエネルギーレベルに消費さｎつく
したＡＭＰ’１ＡＴＰに再生変換することがこの問題点
を打開する重要な技術となるのである。
したＡＭＰ’１ＡＴＰに再生変換することがこの問題点
を打開する重要な技術となるのである。
このような観点から、ＡＴＰの再生変換に関する研究が
種々行なわれている。たとえは、生体内では解糖糸の反
応などによりＡＴＰの生産が行なわれているので、とｎ
を利用した試みが知られている。すなわち、微生物一体
を用いて消費されたＡＴＰの再生補給を行なうというも
のなどがある。
種々行なわれている。たとえは、生体内では解糖糸の反
応などによりＡＴＰの生産が行なわれているので、とｎ
を利用した試みが知られている。すなわち、微生物一体
を用いて消費されたＡＴＰの再生補給を行なうというも
のなどがある。
しかし、これは副反応の併発、変換効率の８ｉなどの点
で実用のレベルには達していない。一方。
で実用のレベルには達していない。一方。
本発明のような最適生育温度が５０”Ｃないし８５°Ｃ
の微生物の産生する酵素ではないが、ＡＴＰ変換酵素の
利用も試みらｎている。たとえば、ホワイトサイズらは
アデノシンを酵素的に変換して得たＡＭＰを通常のアデ
ニル酸キナーゼおよび酢酸キナーゼでＡＴＰに変換して
いる（ジャーナル・オブ′・アメリカン・ケミカル・ソ
サエティ、 １００巻。
の微生物の産生する酵素ではないが、ＡＴＰ変換酵素の
利用も試みらｎている。たとえば、ホワイトサイズらは
アデノシンを酵素的に変換して得たＡＭＰを通常のアデ
ニル酸キナーゼおよび酢酸キナーゼでＡＴＰに変換して
いる（ジャーナル・オブ′・アメリカン・ケミカル・ソ
サエティ、 １００巻。
１号、３０４負、 １９７８年）。しかし、こｎらの例
は本発明と一見似ているようでＦｉｉるが９反応に長時
間を景し、変換効率もめまシ高くない上に、化学工業的
なレベルでの長期間の運転には利用できないものである
。
は本発明と一見似ているようでＦｉｉるが９反応に長時
間を景し、変換効率もめまシ高くない上に、化学工業的
なレベルでの長期間の運転には利用できないものである
。
本発明者らは、４１に最低のエネルギーレベルに分解し
た産物であるＡＭＰをＡＴＰに変換再生することにつき
鋭意研究を重ねてきたが、最適生育 ゛温度が５０℃
ないし８５℃である微生物の産生する変換酵素１＊用す
ると、短時間、高収率で長期間安定してＡＭＰをＡＴＰ
に変換できることを見いだし本発明を完成するに至った
。以下１本発明につき、さらに評細に説明する。
た産物であるＡＭＰをＡＴＰに変換再生することにつき
鋭意研究を重ねてきたが、最適生育 ゛温度が５０℃
ないし８５℃である微生物の産生する変換酵素１＊用す
ると、短時間、高収率で長期間安定してＡＭＰをＡＴＰ
に変換できることを見いだし本発明を完成するに至った
。以下１本発明につき、さらに評細に説明する。
本発明はＡＭＰｔ−ＡＤＰに変換することと、ここで生
成したＡＤＰｔＡＴＰに変換することから成る。ＡＭＰ
をＡＤＰに変換する酵素としてはアデニル酸キナーゼが
使用され、この際ＡＭＰへのリン酸供与体としてＡＴＰ
が使用逼れる。次いでＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素と
しては酢酸牛ナーゼ、カルバミン酸キナーゼ、クレアチ
ンキナーゼ、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、ピルビ
ン酸キナーゼ、ポリリン酸キナーゼなど多くの本のが使
用できるが、リン酸供与体の価格、ＡＴＰへの変換活性
、＃素の入手の容易さなどを勘案すると酢酸キナーゼを
使用するのが最も有利であり。
成したＡＤＰｔＡＴＰに変換することから成る。ＡＭＰ
をＡＤＰに変換する酵素としてはアデニル酸キナーゼが
使用され、この際ＡＭＰへのリン酸供与体としてＡＴＰ
が使用逼れる。次いでＡＤＰをＡＴＰに変換する酵素と
しては酢酸牛ナーゼ、カルバミン酸キナーゼ、クレアチ
ンキナーゼ、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ、ピルビ
ン酸キナーゼ、ポリリン酸キナーゼなど多くの本のが使
用できるが、リン酸供与体の価格、ＡＴＰへの変換活性
、＃素の入手の容易さなどを勘案すると酢酸キナーゼを
使用するのが最も有利であり。
この際リン酸供４体としてはアセチルリン酸が使用さｎ
る。このように、アデニル酸キナーゼと酢酸キナーゼを
使用するに際して各酵素のリン酸供与体としてはＡＴＰ
とアセチルリン酸を使用することになるが、リン酸供与
体としてのＡＴＰは蝋終変換物であるＡＴＰを循環使用
することができるの工、結局リン酸供与体としてはアセ
チルリン酸だけを供給すれはよいことになる。このよう
なシステム化により効率的な設計がはかれるのも。
る。このように、アデニル酸キナーゼと酢酸キナーゼを
使用するに際して各酵素のリン酸供与体としてはＡＴＰ
とアセチルリン酸を使用することになるが、リン酸供与
体としてのＡＴＰは蝋終変換物であるＡＴＰを循環使用
することができるの工、結局リン酸供与体としてはアセ
チルリン酸だけを供給すれはよいことになる。このよう
なシステム化により効率的な設計がはかれるのも。
これら両酵素の利点でらる。
以上のように二種類の変換酵素を使用することによりＡ
ＭＰ’１ＡＴＰに変換することが可能になるが、これだ
けでは実用的なものとはならない。
ＭＰ’１ＡＴＰに変換することが可能になるが、これだ
けでは実用的なものとはならない。
すなわち、これら酵素は最適生前′温縦が５０″Ｃない
し８５℃である微生物の産生する酵素であることが必費
である。このような微生物としては、バチルス・ステア
ロサーモフィルス、バチルス・プレビス、バチルス・コ
アギユランス、バチルス・サーモプロテオリティクス、
バチルス・アシドカルタリウスなどのバチルス属の微生
物、クロストリジワム属の斂生物、サーモアクテノマイ
セス属の微生物、アクロモバクタ−義の微生物、ストレ
フトマイセス属の微生物、ミクロポリスボラ属の微生物
、サーマス・アクアティクス、サーマス・サーモフィル
ス、サーマス−７ラグスなとのサーマス馬の微生物、サ
ーモミクロビウム属の微生物、カルブリア属の微生物な
どがめげられる。また、これら微生物の遺伝子を導入し
た常温生育微生物も含まれる。なお、これら微生物の中
でもアデニル酸キナーゼ、酢酸キナーゼの両酵素の産生
に特に適したものはバチルス・ステアロサーモフィルス
である。この微生物から得られる両酵素は精製が容易で
あり、比活性が高い。
し８５℃である微生物の産生する酵素であることが必費
である。このような微生物としては、バチルス・ステア
ロサーモフィルス、バチルス・プレビス、バチルス・コ
アギユランス、バチルス・サーモプロテオリティクス、
バチルス・アシドカルタリウスなどのバチルス属の微生
物、クロストリジワム属の斂生物、サーモアクテノマイ
セス属の微生物、アクロモバクタ−義の微生物、ストレ
フトマイセス属の微生物、ミクロポリスボラ属の微生物
、サーマス・アクアティクス、サーマス・サーモフィル
ス、サーマス−７ラグスなとのサーマス馬の微生物、サ
ーモミクロビウム属の微生物、カルブリア属の微生物な
どがめげられる。また、これら微生物の遺伝子を導入し
た常温生育微生物も含まれる。なお、これら微生物の中
でもアデニル酸キナーゼ、酢酸キナーゼの両酵素の産生
に特に適したものはバチルス・ステアロサーモフィルス
である。この微生物から得られる両酵素は精製が容易で
あり、比活性が高い。
このように、最適生育温度が５０℃ないし８５℃の微生
物の産生する変換酵素を使用することによシ初めて本発
明の完成を見たわけであるが、こｎら酵素の使用に当た
り換型反応器、カラム型反応器などを使用することがで
きる。換型反応器の場合はＡＴＰが低分子物質、＃素が
高分子物質であるので本発明の酵素社その′ｔま使用す
ることができる。この際、生成ＡＴＰは膜の働きにより
反応器の外へ流出させることか可能でめシ、ｉｌ＊＃ｉ
膜の働きによシ反応器の中にとどめることが可能である
ので、ＡＭＰのＡＴＰへの変換を連続的に行なうことが
できる。カラム型反応儲の場合社使用酵素を適当な担体
、九とえばセルロース、デキス架橋ポリアクリルアミド
などのようなビニルポリアミノ＊’＊＋はポリアミドの
誇導体、ガラス、ア７？ ルミナ、ヒドロキシア―タイトなどのような無機物の誘
導体、などに結合、包括あるいは吸着せしめて、いわゆ
る固定化酵素としてカラムに充填して使用することがで
きる。この場合、カラム中に反応液を流すことによシ連
続的Ｋ ＡＭＰ Ｔｈ ＡＴＰに変換することができる
。
物の産生する変換酵素を使用することによシ初めて本発
明の完成を見たわけであるが、こｎら酵素の使用に当た
り換型反応器、カラム型反応器などを使用することがで
きる。換型反応器の場合はＡＴＰが低分子物質、＃素が
高分子物質であるので本発明の酵素社その′ｔま使用す
ることができる。この際、生成ＡＴＰは膜の働きにより
反応器の外へ流出させることか可能でめシ、ｉｌ＊＃ｉ
膜の働きによシ反応器の中にとどめることが可能である
ので、ＡＭＰのＡＴＰへの変換を連続的に行なうことが
できる。カラム型反応儲の場合社使用酵素を適当な担体
、九とえばセルロース、デキス架橋ポリアクリルアミド
などのようなビニルポリアミノ＊’＊＋はポリアミドの
誇導体、ガラス、ア７？ ルミナ、ヒドロキシア―タイトなどのような無機物の誘
導体、などに結合、包括あるいは吸着せしめて、いわゆ
る固定化酵素としてカラムに充填して使用することがで
きる。この場合、カラム中に反応液を流すことによシ連
続的Ｋ ＡＭＰ Ｔｈ ＡＴＰに変換することができる
。
これらの方法は、いずれも９本発明の最適生育温度が５
０°Ｃないし８５°Ｃの微生物の産生する酵素を使用す
ることにより可能もしくは容易になり九ものでおる。す
なわち、従来の酵素は、換型反応器の場合、非固定化状
態では酵素活性が極く短時間しか持続しないために連続
使用には耐えられないものであったし、カラム温反応器
の場合は一定化によって酵素の活性持続期間は長くなる
ものの本発明の醇′Ｘを固定化したものと比較すると極
めて低レベルのものでらり、また固定化時に失活しやす
いので固定化操作が面倒でるるといった難点もあったの
でおる。これらの問題点は本発明にいう酵素を使用する
ことによって一挙に解決できたのであり、こｎは本発明
によって成しえた４Ｉ練すべき利点である。
０°Ｃないし８５°Ｃの微生物の産生する酵素を使用す
ることにより可能もしくは容易になり九ものでおる。す
なわち、従来の酵素は、換型反応器の場合、非固定化状
態では酵素活性が極く短時間しか持続しないために連続
使用には耐えられないものであったし、カラム温反応器
の場合は一定化によって酵素の活性持続期間は長くなる
ものの本発明の醇′Ｘを固定化したものと比較すると極
めて低レベルのものでらり、また固定化時に失活しやす
いので固定化操作が面倒でるるといった難点もあったの
でおる。これらの問題点は本発明にいう酵素を使用する
ことによって一挙に解決できたのであり、こｎは本発明
によって成しえた４Ｉ練すべき利点である。
本発明に使用する酵素は最適生育温度が５０°Ｃないし
８５℃の微生物の産生する酵素である。したがって、常
識的には常温付近では酵素活性が現出せず、使用上極め
て不利が予想さｆたのであるが。
８５℃の微生物の産生する酵素である。したがって、常
識的には常温付近では酵素活性が現出せず、使用上極め
て不利が予想さｆたのであるが。
鴬くべきことに常温付近でも極めて短時間で効率よ＜Ａ
ＭＰをＡ Ｔ Ｐに変換できることがわかった。
ＭＰをＡ Ｔ Ｐに変換できることがわかった。
さらに驚くべきことに、とｎら酵素を産生ずる微生物の
最適生育温度付近ではむしろＡＭＰをＡＴＰに効率よ（
変換することが困難で・あり、＊適生育温度の５°Ｃ以
下が限度であることが判明した。すなわち１本発明の実
施に当たって、ＡＭＰｔ−ＡＴＰへ変換する温度は常温
付近ないし酵′Ｘ産生微生物の最適生育温度の５℃以下
に設定するのが好ましい。
最適生育温度付近ではむしろＡＭＰをＡＴＰに効率よ（
変換することが困難で・あり、＊適生育温度の５°Ｃ以
下が限度であることが判明した。すなわち１本発明の実
施に当たって、ＡＭＰｔ−ＡＴＰへ変換する温度は常温
付近ないし酵′Ｘ産生微生物の最適生育温度の５℃以下
に設定するのが好ましい。
本発明の実施に当たってｐｉ（とじては中性付近。
すなわち、６．５〜１１．好ましくは６．５〜９．ｏ、
さらに好ましくは７〜８の範囲が使用される。緩衝液と
してはこれらのｐＨに適し九通常のものを使用すること
ができる。たとえば、７付近ではりンゾ 酸塩、イミダ＝杢−ル塩などｔ−ｉけることができる。
さらに好ましくは７〜８の範囲が使用される。緩衝液と
してはこれらのｐＨに適し九通常のものを使用すること
ができる。たとえば、７付近ではりンゾ 酸塩、イミダ＝杢−ル塩などｔ−ｉけることができる。
本発明を使用する仁とにより前記のような反応器を用い
てＡＭＰｔ２）ＡＴＰへの変換を効率よく長期間安定し
て行なうことが可能になった。したがって、最初に述べ
たような生体内で行なわｎている結合反応全生体外の化
学工業的な反応として行なう、いわゆるバイオリアクタ
ーの稼働が可能になる。たとえば、生体内の最も重要な
反応であるアミノ酸活性化酵素によるタンパク合成反応
やペプチド合成反応などはＡＴＰをエネルギー源として
必要とし、その際、使用される高価なＡＴＰはＡＭＰ
ｖｃ消費分解さｎるために、生体外でこの反応を行なう
場合、ＡＭＰｔ−ＡＴＰに変換再生する欠 ことが実用上不可轡なことでめった。本発明によｎばこ
のような反応の実用化が可能になシ、その価値は工業上
側シ知れないものがある。
てＡＭＰｔ２）ＡＴＰへの変換を効率よく長期間安定し
て行なうことが可能になった。したがって、最初に述べ
たような生体内で行なわｎている結合反応全生体外の化
学工業的な反応として行なう、いわゆるバイオリアクタ
ーの稼働が可能になる。たとえば、生体内の最も重要な
反応であるアミノ酸活性化酵素によるタンパク合成反応
やペプチド合成反応などはＡＴＰをエネルギー源として
必要とし、その際、使用される高価なＡＴＰはＡＭＰ
ｖｃ消費分解さｎるために、生体外でこの反応を行なう
場合、ＡＭＰｔ−ＡＴＰに変換再生する欠 ことが実用上不可轡なことでめった。本発明によｎばこ
のような反応の実用化が可能になシ、その価値は工業上
側シ知れないものがある。
なお、上のように目的とする合成反応とＡＴＰの再生反
応とを組み合わせる場合、生成ＡＭＰ ｆｆｉ目的生成
物、リン酸供与体の反応生成物などから分離するシステ
ムも必要になる。これはクロマトグラフィなどの技術に
より可能となり、目的とする反応系、ＡＴＰの再生系、
ＡＭＰの分離系の三者を組み合わせたシステムとして完
成さｎることになる。また、この際、ＡＴＰ’を水溶性
高分子化しておけばＡＭＰ （ここでは水溶性高分子化
ＡＭＰ）の分離系を省略あるいは簡単化することも可能
である。
応とを組み合わせる場合、生成ＡＭＰ ｆｆｉ目的生成
物、リン酸供与体の反応生成物などから分離するシステ
ムも必要になる。これはクロマトグラフィなどの技術に
より可能となり、目的とする反応系、ＡＴＰの再生系、
ＡＭＰの分離系の三者を組み合わせたシステムとして完
成さｎることになる。また、この際、ＡＴＰ’を水溶性
高分子化しておけばＡＭＰ （ここでは水溶性高分子化
ＡＭＰ）の分離系を省略あるいは簡単化することも可能
である。
本発明はこのようにＡＴＰの再生利用に極めて有利に適
用できるものであるが、観点をがえてＡＭＰｔ原料とし
たＡＴＰの生産法としてとらえることもできる。すなわ
ち、ＡＴＰは医薬品としても重要な物質でＴｏ！り、工
業的レベルで生産されている。しかし、現行法の発酵法
では副産物ができやすいとか生産性が悪いなどの問題が
ありＡＴＰの価格も高いものにならざるを兄なかった。
用できるものであるが、観点をがえてＡＭＰｔ原料とし
たＡＴＰの生産法としてとらえることもできる。すなわ
ち、ＡＴＰは医薬品としても重要な物質でＴｏ！り、工
業的レベルで生産されている。しかし、現行法の発酵法
では副産物ができやすいとか生産性が悪いなどの問題が
ありＡＴＰの価格も高いものにならざるを兄なかった。
しかし９本発明によればこのような問題点を排除するこ
とが可能となるのである。本発明にはこのような目的も
包含されている。
とが可能となるのである。本発明にはこのような目的も
包含されている。
以上詳細に述べたが９次に実施例によりさらに具体的に
説明する。
説明する。
実施例１．比較例１
０．５ｒｎＭＡＴＰ、０．５ｍＭＡＭＰ、１．２ｍＭア
セチルリン酸、０．０４％アジ化ナトリウムおよび１０
ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０ｍＭイミダゾール−塩
酸緩衝液、 ｐＨ７，５、１００ｍに、バチルス・ステ
アロサーモフィルスＵＫ ７８８株（微工研菌寄第５１
４１号、最適生育温［６０°Ｃ）から得られた酢酸キナ
ーゼおよびアデニル酸キナーゼのそれぞれ１０００単位
および２００単位を溶解し、２００ｓ／容の反応用ガラ
ス容器に入ｎた。この溶液を攪拌しながら、かつベリス
タティックポンプを用い分画分子量が１０゜Ｏｏｏでめ
るホロー７アイバー（アミコンｈａＨｔＰＩＯタイプ）
内に圧送し、ホローファイバー内を通過した溶液は反応
用ガラス容器にもどし、一部沖過さｎた溶液は別の容器
にうけとるとともに。
セチルリン酸、０．０４％アジ化ナトリウムおよび１０
ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０ｍＭイミダゾール−塩
酸緩衝液、 ｐＨ７，５、１００ｍに、バチルス・ステ
アロサーモフィルスＵＫ ７８８株（微工研菌寄第５１
４１号、最適生育温［６０°Ｃ）から得られた酢酸キナ
ーゼおよびアデニル酸キナーゼのそれぞれ１０００単位
および２００単位を溶解し、２００ｓ／容の反応用ガラ
ス容器に入ｎた。この溶液を攪拌しながら、かつベリス
タティックポンプを用い分画分子量が１０゜Ｏｏｏでめ
るホロー７アイバー（アミコンｈａＨｔＰＩＯタイプ）
内に圧送し、ホローファイバー内を通過した溶液は反応
用ガラス容器にもどし、一部沖過さｎた溶液は別の容器
にうけとるとともに。
濾過速度と同じ一流速で０．５ｍＭＡＴＰ、０．５ｍＭ
ＡＭＰ、１．２ｍＭアセチルリン酸、０．０４％アジ化
ナトリウムおよび１０ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０
ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液、ｐＨ７，５（基質溶
液）を反応用カラス容器に補充した（アミコン社製ホロ
ーファイバーシステムＤＣＺ型わるいはＣＨ４型を使用
した）。本実施例では１反応溶液をホローファイバーに
送液する流速を１時間に２１ｉｔｅｒで、かつ濾過速度
２よび基質溶液の補充速度を１時間に２００−で、操作
温度は室温で７日間行った。
ＡＭＰ、１．２ｍＭアセチルリン酸、０．０４％アジ化
ナトリウムおよび１０ｍＭ塩化マグネシウムを含む５０
ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液、ｐＨ７，５（基質溶
液）を反応用カラス容器に補充した（アミコン社製ホロ
ーファイバーシステムＤＣＺ型わるいはＣＨ４型を使用
した）。本実施例では１反応溶液をホローファイバーに
送液する流速を１時間に２１ｉｔｅｒで、かつ濾過速度
２よび基質溶液の補充速度を１時間に２００−で、操作
温度は室温で７日間行った。
ＡＭＰよりＡＴＰへの変換率の測定は、 ＰＮＨ２−１
０充填カラムを用いる高速液体クロマトグラフィーによ
シ定量分析した。（実施例１） 別にエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃ
ｏｌｉ 。
０充填カラムを用いる高速液体クロマトグラフィーによ
シ定量分析した。（実施例１） 別にエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃ
ｏｌｉ 。
最適生育温度３７°Ｃ）の酢酸キナーゼ（ベーリンガー
・マンハイム社製）ンよび非微生物起源の１り筋肉のア
デニル酸キナーゼ（ペーリンガー・マンハイム社製）を
用いて同様の実験を行った。（゛比較例１） その結果、実施例Ｉにおいてはわずか１０分後にＡＴＰ
変換率が９８％に達し、かつ７日後におけるＡＴＰ変換
率も９８％を維持していた。一方、比較例１においては
１０分後にＡＴＰ変換率が７２％に達し次が徐々に変換
率は低下し、５日後にはほぼＡＴＰｆ換率が０％になっ
た。
・マンハイム社製）ンよび非微生物起源の１り筋肉のア
デニル酸キナーゼ（ペーリンガー・マンハイム社製）を
用いて同様の実験を行った。（゛比較例１） その結果、実施例Ｉにおいてはわずか１０分後にＡＴＰ
変換率が９８％に達し、かつ７日後におけるＡＴＰ変換
率も９８％を維持していた。一方、比較例１においては
１０分後にＡＴＰ変換率が７２％に達し次が徐々に変換
率は低下し、５日後にはほぼＡＴＰｆ換率が０％になっ
た。
実施例２
活性化ＣＨ−セファロース４Ｂ（ファルマシア社製）５
ｆｔガラスフイルター上で１ｍＭ塩酸１０００１で３回
洗浄と膨１１ｍ１を繰返したのち、５０ｍＭホウ酸緩衝
液、 ｐＨ８，３、１００ｍ？にけん濁し、バチルス・
ステアロサーモフィルスＮＣＡｌ３Ｏ３株（最適生育温
ｆｆ１６０°Ｃ）よシ得られたｉｌｌ″駿キナーゼの上
記緩衝液の溶液１ｇ＃ｔ、５０００単位を加えて４（Ｊ
’Ｃでゆっくり振とうしながら３０分間反応した。反応
混合液をガンスフイルターで濾過し、ついで得らｎた同
定住酢酸キナーゼ複合体ｆ０．５Ｍｋｍｌを含む５０
ｍＭトリス−塩酸緩衝液、ｐＨ８，０，各２００１で３
ｆｆｌ！Ｉ洗浄し、さらに２５ｍＭイミダゾール−塩酸
緩衝液。
ｆｔガラスフイルター上で１ｍＭ塩酸１０００１で３回
洗浄と膨１１ｍ１を繰返したのち、５０ｍＭホウ酸緩衝
液、 ｐＨ８，３、１００ｍ？にけん濁し、バチルス・
ステアロサーモフィルスＮＣＡｌ３Ｏ３株（最適生育温
ｆｆ１６０°Ｃ）よシ得られたｉｌｌ″駿キナーゼの上
記緩衝液の溶液１ｇ＃ｔ、５０００単位を加えて４（Ｊ
’Ｃでゆっくり振とうしながら３０分間反応した。反応
混合液をガンスフイルターで濾過し、ついで得らｎた同
定住酢酸キナーゼ複合体ｆ０．５Ｍｋｍｌを含む５０
ｍＭトリス−塩酸緩衝液、ｐＨ８，０，各２００１で３
ｆｆｌ！Ｉ洗浄し、さらに２５ｍＭイミダゾール−塩酸
緩衝液。
ｐＨ７，５，各２００ ｍ／で３卸洗浄した。固定化さ
れた酢酸キナーゼの単位は２５００単位であった。以上
の操作を酢酸キナーゼの代りにアデニル酸キナーゼの５
００単位を用いて同様に行ったところ、２００単位のア
デニル酸キナーゼの固定された複合体が得られた。これ
ら両夜合体を内径２３で長さが１０１のガラス製カラム
に充填し、 ０．５ｍＭ ＡＴＰ 、 ０．５ｍＭＡＭ
Ｐ、１．２ｍＭアセチルリン酸および１０ｍＭ塩化マグ
ネシウムを含む５０ ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液、
ｐＨ７，５、’ｔ ２００ ｍ／時間の流速でカラム
上部より通液した。カラムおよびカラムへの供給溶液の
温度はいずれも３７°Ｃに保って行った。下部より溶出
さｎた反応液中のＡＴＰ濃度を高速液体クロマトグラフ
ィーにより定量したところ、カラムへの通液１５分後に
はすてにＡＭＰは検出されず９８．２％のＡＴＰ２よび
１．８％のＡＤＰが検出さｎた。
れた酢酸キナーゼの単位は２５００単位であった。以上
の操作を酢酸キナーゼの代りにアデニル酸キナーゼの５
００単位を用いて同様に行ったところ、２００単位のア
デニル酸キナーゼの固定された複合体が得られた。これ
ら両夜合体を内径２３で長さが１０１のガラス製カラム
に充填し、 ０．５ｍＭ ＡＴＰ 、 ０．５ｍＭＡＭ
Ｐ、１．２ｍＭアセチルリン酸および１０ｍＭ塩化マグ
ネシウムを含む５０ ｍＭイミダゾール−塩酸緩衝液、
ｐＨ７，５、’ｔ ２００ ｍ／時間の流速でカラム
上部より通液した。カラムおよびカラムへの供給溶液の
温度はいずれも３７°Ｃに保って行った。下部より溶出
さｎた反応液中のＡＴＰ濃度を高速液体クロマトグラフ
ィーにより定量したところ、カラムへの通液１５分後に
はすてにＡＭＰは検出されず９８．２％のＡＴＰ２よび
１．８％のＡＤＰが検出さｎた。
Claims (4)
- （１）アデノシン−リン酸をアデノシンニリン酸へ変換
するに際して、最適生育温度が５０°Ｃないし８５°Ｃ
である微生物の産生ずるアデノシン−リンＩｌｌアデノ
シンニーリン酸に変換する酵素およびアデノシンニリン
酸をアデノシンニリン酸へ変換する酵素を組み合わせる
こと全特徴とするアデノシン−リン酸のアデノシンニリ
ン酸への変換方法。 - （２）アデノシン−リンｗ１ヲアデノシンニリン酸へ変
換する酵素およびアデノシンニリン酸をアデノシンニリ
ン酸へ変換する酵素が固定化用担体に結合、包括または
吸着した固定化酵素である特許請求の範囲第１項記載の
変換方法。 - （３）アデノシンニリン酸をアデノシンニリン酸へ変換
する酵素がアデニル酸キナーセでろり、アデノシンニリ
ン酸をアデノシンニリン酸へ変換する酵素が＃−酸キナ
ーゼである特許請求の範囲Ｗ１１項記載の変換方法。 - （４）アデノシン−リン酸をアデノシンニリン酸へ変換
する温度が、 ％＃素を産生ずる微生物の最適生育温度
の５°Ｃ以下である特許請求の範囲第１項記載の変換方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010337A JPS58129992A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | アデノシン一リン酸をアデノシン三リン酸へ変換する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57010337A JPS58129992A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | アデノシン一リン酸をアデノシン三リン酸へ変換する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58129992A true JPS58129992A (ja) | 1983-08-03 |
| JPH0525479B2 JPH0525479B2 (ja) | 1993-04-13 |
Family
ID=11747375
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57010337A Granted JPS58129992A (ja) | 1982-01-26 | 1982-01-26 | アデノシン一リン酸をアデノシン三リン酸へ変換する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58129992A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019510504A (ja) * | 2016-04-06 | 2019-04-18 | グリーンライト バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＧｒｅｅｎｌｉｇｈｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． | リボ核酸の無細胞的生産 |
| US11274284B2 (en) | 2015-03-30 | 2022-03-15 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free production of ribonucleic acid |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0029976A1 (en) * | 1979-11-22 | 1981-06-10 | Unitika Ltd. | A biologically pure culture of strain IFO 14093 and a process for producing an intracellular component herefrom |
-
1982
- 1982-01-26 JP JP57010337A patent/JPS58129992A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0029976A1 (en) * | 1979-11-22 | 1981-06-10 | Unitika Ltd. | A biologically pure culture of strain IFO 14093 and a process for producing an intracellular component herefrom |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11274284B2 (en) | 2015-03-30 | 2022-03-15 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free production of ribonucleic acid |
| JP2019510504A (ja) * | 2016-04-06 | 2019-04-18 | グリーンライト バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＧｒｅｅｎｌｉｇｈｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． | リボ核酸の無細胞的生産 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0525479B2 (ja) | 1993-04-13 |
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