JPS58121259A - ベスタチン新規誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 物としてのべス！チン誇導体に＠する。

先に本発明者らはア電ノベデチ〆−ゼに対すゐ阻害作用
や抗癌性増強作用に着目し、ペスタチンの化学構造に類
似する新規ジイデチド化会物ＯＩＩ造及びこれらの生理
活性作用にりいて確認した（％開昭５２ー１３６１１８
号公報）。また本発明者らはさらにペスタチンの構造と
活性について研究を重ね、新らたにトリペグチド型のペ
スタチン閤連化合物を合成し、これらの化金物がアζノ
ペデテメーゼ阻害作用や免疫増強作用を有することを見
い出した（％願昭５５ー９１６９１号）。

青謔、本発明者も紘、一般式（Ｉ）で表わされる本発明
〇化舎物を製造し、これら化合物がア電ノペデチメーゼ
阻書作用をもち且つ細胞免疫賦活作用をもつことを確認
した。

すなわち、本発明によると、一般式 ％式％） 〔式中、ム紘次式 占■２ ＯＮＦ１２ で示される（Ｓ）一アスパラギン残基又拡次式】 で示される（Ｒ）一アス／ｆｗＰギン残基又拡次式（Ｃ
Ｈ２）３ Ｈ Ｃ÷ｌｆｆｉ Ｈ２ て示される（Ｒ）一アルギニン残基である〕で表ワされ
るペスタチン誘導体が提供される。

本発明の化合物（１）の例には次のものがある。

（＋）　　（２８．　３Ｂ）−　３−アミノー２−ヒド
ロキク−４一フェニルプタノイル−（Ｓ）一ロイシル−
（Ｓ）一アスノ４ライン。（化合物Ｉ＆１）。

＜２１　　（２８．　３Ｒ）−　３−アミノー２−に：
）’セキＳ／−４一フェニルプタノイルー（８）−ｔ！
（シル−（Ｒ）−アスパラギン（化合物Ｉ＆２）。

（３）　　（２１１．　３Ｂ）−　３−７電ノー２−ヒ
ドロキシ−４一フェニルツタノイル−（８）一ロイシル
−（Ｒ）−フルギエン（化合物ム３）。

一般式（夏）の本発明化合物の製造拡、一般的Ｋａ、次
式＠： Ｈ （ＣＩＩ３）２ て表わされるペス！テン（特開昭５１　−　１７ｇ７号
会報参ｊｌＩ）と、次式（ｍ） ＨＥＮ−ＣＩ−ＣＯＯＨ　　　　　　　　　（ｆｉｒ）
扉 〔式中、１は式ＨｚＮＣＯＣＨｔ−のカルバモイルメチ
ル基又は式 Ｈ２Ｎ　−Ｃ−ＮＴｉ　−（ＣＨ２）ｓ　−ｌ Ｈ ＯダアニゾルーＮ−デー：Ｉぜル基であシ、傘はＣＢ）
又は（Ｒ）の立体配位を示す〕で表わされるアンノ酸を
通常の方法で縮合させるか若しく紘、必要により反応Ｋ
ｌ！与しないアミノ基、　水酸基、　カルボン除幕又は
グアニジル基を通常Ｏｇ＆−基にて保饅した後、通常の
方法で縮合させ、次いて該保護基を脱離させることから
なる方法によシ行い得る。式（Ｉｌ）の化合物と式（Ｉ
Ｉｌ）の化合物の縮合はペプチド結合の形成によって行
われるが、この縮合は常法、例えばジシクロへキシルカ
ルボシイきドを用いるカルボシイミド法、ヒドロキシコ
ハク駿イミドエステル等の活性エステル法、イ電〆ゾー
ル等の活性アミド法、ヒドラジンなどのアジド法又しク
ロル炭酸エチル等ｒｖｓ合酸無水物法尋で実施できる。

縮合に用いる溶媒として杜通常のペプチド結合形成に用
いられる溶媒を使用できる。例えはテトラヒドロフラン
（ｉ町）、ジオａＦｔンなどＯエーテル類、酢酸エチル
などのエステル類、アセトンなどのケトン類、塩化メチ
レンなどのへロｒン化員化水素類、ジメチルホルムアミ
ドなどＯアｔＰＩＩＩＩ又紘アセトニトリルなどＯニド
ダル類が挙げられゐ。官能基が保護されている場合、飼
えに活性エステル法で縮合する場合はＮ−メチルモルホ
リン、トリエチルア電ン等Ｏ有様第３塩基の存在下で反
応は好適に行なわれゐ。保護基０脱離１１４ツジクムを
触媒とする接触還元、酢酸中Ｏ臭化水素、トリフロロ酢
酸、有機溶媒中の塩化水素による加水分簿法等のペプチ
ド化学における常法てｌＩ！論で會る。

次に本発明化金物の生部活性について述べる。

■　アンノペデテメーゼＢＫ対する阻害活性試験渋ニ ア電ノペデテメーゼＢ活性ＯＩＩ定はホップスら（Ｖ、
に、Ｈｅｐｓｍ　ａｔ、　ａｌｅ　ｒムｒｅｈｉｖｅｓ
　ｏｆ　Ｂｉｏ＠ｈ＠ｍ１−ａｔｒｙ　＊ｉｕｌ　１ｉ
ｅｐｈｙｓｉ＠ｓ　Ｊ　１１４．５５）（１９６６）　
）の方法を改良して行つ九。即ち、Ｏ・１ｍＭ０アルゼ
ニンーｌ−ナフチルア建ＦＯ−ｇｄＫｏ・ＩＭ）リス−
塩酸緩衝液１・Ｏｄ、検体を含む溶液０・７ｄを加え九
混合溶液（−７・Ｏ）を３フ０Ｃで３分間加熱した後、
ホップスらの方法による酵素精製法でグル濾過剤、セフ
ァデックス（登録商標）Ｇ　−１００”ｔ’精製したア
ξノペグテメーゼＢ溶液の０．２−を加え、３７°Ｃで
３０分間反応させた後、１・Ｏｗｑ／ａｔの濃度でガー
ネットＧＢＣ（０−アミノアゾトルエンジアゾニウム塩
）を含み、且つ１０−の濃度の界面活性剤、ツイン（登
録商標）２０を含む１．０Ｍ酢酸緩衝液ＣＰ８４．２）
Ｏ−６ｄを加え、室温に１５分間放置した後、５１ｔＯ
ｎｍにおける吸光度（ａ）を測定した。同時に検体を含
まない緩衝液のみを用いた盲検の吸光度ｔ）を測定し、
アミノペプチダーゼＢ阻害率（６）を式（ｂ−ａ）／ｂ
ＸＩｏ。

により計算した。

結果： 上記試験法によシ各検体の幾つかの濃度における阻害車
を求め、それによシ５ｏ−阻害濃度（ＩＣ）　　を帰納
した。その結果を第１表に示す。

０ 第１表 表中の略号拡次のことを意味する ＢＳＴ　：　　ペスタチン Ａｓｐ　　：　　アメ／４ツギン Ａｒｇ　：　　アルギニン ＢＳＴ−：　　（２８，３Ｒ）　−３−アミノ−２−ヒ
ドロキシ−４−フェニルブタノイル−８−ロイシル基■
　細胞性免疫に対する効果 細胞性免疫に対する作用を羊赤血球を抗原に用い、これ
をマクス足髄に接種して得られる遅鷺型過敏症反応（Ｄ
ＴＨ反応）をル標として検討し九。

試験法： 羊赤血球１０　個を０・０５ｄＣ）生理食塩水に浮遊さ
せ、ＣＤＦ　＋　　雌性８退会マウスの足魅皮下に接種
し、このとき試料を生理食塩水に溶解し、試料をミリポ
アフイルメーで一過した後、経口で０．５１１ｆ／に９
投与した。その４日後マウスの他の一方の足踏に羊赤血
球１０　個を皮下注射して２４時間後にマウスの足踏の
厚さをノギスで測定し厚さの増加率幡）を計算して判定
した。

結果： 第２表に示す 第２表　羊赤血球に対するＤＴＨ成立に与える効果本物
質の毒性を実施例の化合物について評価し九。すなわち
ＩＣＲ系！クス（雄、５退会、体重２０ｆ、一群６匹）
Ｋ供試化食物＋　００　ｑ／ｋｌを腹腔内投与したとこ
ろ、何れの化合物の場合とも食倒が生存した。

以上の結果、本発明のペスタチン新規誘導体社低投与量
で細胞性免疫を増強することが明らかである。この強い
免疫賦活作用によシこれらの物質が癌免疫療法あるいは
感染防禦剤として広く用いられ得ることを示している。

本発明のベスタテン誘導体を免疫賦活剤として用いる場
合は経口、注射、直腸基剤のいずれでもよく、各種の一
調整剤、安定化剤、賦形剤などを添加してそれぞれの形
態の製剤とすることができる。投与量は症状によシ異な
るが、成人では１人１日１回５０〜２００ｓｖを経口投
与するのがよい。

以下本発明の実施例を示すか、本発明は何らこれらに＠
定されるものではない。

実施例１ （２８，３Ｒ）−３〜アミノ−２−ヒドロキシ−４−フ
ェニルブタノイルー（Ｓ）−ロイシル−（Ｓ）−アスパ
ラインの合成ペスタチンを公知の方法（Ｂｎｌｌｅｔ＊
ｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅＣｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ
　ｏｆ　Ｊａｐａｎ　４６．　１２６９　（１９７３）
　）でＮ−ｔ−ブトキクカルボニル化して得られる（２
８．３Ｒ）−３−Ｎ−ｔ−！トキシカルボニル７ミノー
２−ヒドロキン〜４−フェニルブタノイル−（Ｓ）−ロ
イシン１．０９５　ｆｌＮ−ヒドロキシコへり酸イきド
３０８ｑをテトラヒドロンラン５ｄに溶解し、水冷後ジ
シクロへキシルカルボシイミド５５３１９を加え２日間
、水冷下反応させる。室温で溶媒を減圧留去後、酢酸エ
テル３−を加え、不溶物を許去する。ろ液を濃縮乾固し
、１・４０？０Ｎ−ｔ−Ｂｏｔ−ＢＳＴ−Ｎ−ヒトｏ＊
シコハｌ酸イミドエステルを得る。

この活性エステルに（Ｓ）−アメ／４ラギンーｔ−ブチ
ルエステル塩酸塩６０フη、Ｎ−メチルモルホリン０．
２９６ＩＩＩｔを加えＴＨＦ　８　ｍに溶解し、水冷下
１０時間、＊潟で１０時間反応させる。溶媒を留去後酢
酸エチル２００ｍｇに残液を溶解し、この溶液を水、１
０慢コハク酸、５嗟重曹水で順次洗い、その後水洗３回
を行なう。無水硫酸！ダネシウム上で有機層を乾燥後、
濾過、溶媒の減圧留去を行う。得られた残渣をアセトン
＋５０艷に熱時溶鱗し、約１０−まで濃縮すると（２８
，３Ｒ）−３Ｎ　−ｔ−プトキシカルボニルアζノー２
−ヒドロキシ−４−フェニルブタノイル−（８）−ロイ
シル−（Ｓ）−アスパライン−ｔ−ツチルエステルが無
色勅末として析出するので、これをＦＩＩＩＬする。収
量ト１１ｖ０本物質Ｈｒｎマススペクトルでｍ／・　５
７９（Ｍ＋１）を与える。

本物質１．ｏ　７　ｔをアニソール１．５ｄ％ジオキサ
ン３０−に溶解し水冷後、６Ｎ塩酸ジオキサン溶液１０
ａｄを加える。水冷下、１時間反応後溶媒を減圧留去す
る。得られた粗末を水に溶解し、凍結乾燥し、７２０ｖ
の標記物質の塩酸塩を得る。吸湿も５ 〔α］　　　−１Ｌフ０　（ｃ区１．０．　　ＩＮ−ｆ
ＩＣ／）、　　　−１７，３′（ｅ＝　１．０．水） 質量分析　Ｃｒｒｖ’ｅ　）　：　４２３　（Ｍ＋１　
）元素分析ｉ（Ｃ，。ＨｊｌＮ４０４”として）：実測
値　Ｃ：　５１．６２　％　、　Ｈ：　６．４３　％　
、　Ｎ　：１２．０２　＊　　、Ｃ１：　　７．９５　
憾計算！　　Ｃ：　５２．３３憾、Ｈ；６劃２慢、Ｎ：
１２．２１　　俤　、　Ｃ／　：　　７．７２　憾ＴＬ
Ｃ：Ｒｆ＝０．４ｇ 展開系：ｎ−ブタノール−酢酸−水（３：ｌ：１）ＴＬ
Ｃ板シリカゲル（メルク社Ａｒｔ、　　５７１５　）実
施例２ （２８，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フ
ェニルブタノイル−（Ｓ）−ロイシル−（Ｒ）−アスパ
ラギンの合成実施例１で用いた（Ｓ）−アスパラギン−
ｔ−グチルエステル塩酸塩の代シに（Ｒ）−アスパラギ
ン−１−グチルエステル塩酸塩を用いた以外は実施例１
と同様に反応、処理した級、−を調整し標記物質を得た
。融点１４１〜１４７°Ｃ（分解）、〔α２５〕＝８．
５°（ｄ　−１，０、ＩＮ−ＭＣＩ）　、質量分析（ｍ
／・）４２３　（Ｍ＋１）。

実施例３ （２８，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フ
ェニルツタノイル−（Ｓ）−ロイシル−（Ｒ）−アルギ
ニンの合成 （２８，３Ｒ）−３−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルア
ミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルシタノイル−（８
）−ロイクンｇ８・４１１９と（Ｒ）−ＮＧ−ニトロア
ルギニン・ベンジルエステル−ジーｐ−）ルエンスルホ
ンＩｌ！　１３０４　ｍｇヲテトラヒドロフラン１ｄに
溶解し、Ｎ−メチルモルホリン０．０２２ｄとＮ−ヒド
ロキシコハク酸イミド３４岬を加えて氷冷する。これに
ジシクロへキシルカルボシイミドδ４ダを加え水冷下２
４時間攪拌反応させた。生じた尿紫鰐導体をＦ去し、濃
縮乾固した残渣に酢酸エチル５ＬＩＩｔを加え溶解し、
１規定塩酸５−１１規定苛性ソ一ダ水溶液５ｄ１蒸留水
５ｍ／で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥する。硫
酸マグネシウムを枦去後、濃縮乾固して１４０ｓｖの粉
末として（２Ｓ、　３Ｒ）−３−Ｎ−ペンジルオ中シカ
ルボニルアξノー２−ヒドロキシ−４−フェニルブタノ
イル−（８）−ロイシル−（Ｒ）−ＮＧ−ニトロアルギ
ニンペンジルエステルヲ得り。

前記の粉末ｌｌ７ｍｇをジオキサン２・５−と蒸留水０
・２５ｄと酢酸０・２５ｍの混液に加え、更にパラジウ
ム黒２５岬を加えて７２時間、３気圧の水素で加水素分
解した。触媒を枦去した後濃縮し、少量の蒸留水を加え
、６規定塩酸で−２・ＯＫ調整し、クロマト用カーボン
（和光紬薬＄１）１００ｗＩＯカラムに吸着せしめ、蒸
留水で展開精製し、溶離液を濃縮乾固して１５５ｑの粉
末として標記物５ 質を得た。融点１６０〜１７８ｃｃ（分解）、〔α〕０
−６．５°（ｃ＝　１．０　、　ＩＮ−ＭＣＩ　）　、
質量分析値はｍ／　ｅ　４６５　（Ｍ＋ｌ　）　　を与
えた。坂口反応社陽性であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ％式％） 〔式中、ムは次式 ＣＨ２ ０ＮＨ２ で示される（Ｓ）−アスΔツギン残基又拡次式で示され
   る（凰）−アス／＃ラギン残基又紘次式（Ｒ） −ＨＮ−ＣＨ−ＣＯＯＨ （ＣＨ２）ｓ Ｎ’Ｈ Ｃ寓皿 ｔＭｍ で示される（凰）−アルゼエン残基である〕で表わされ
   るベスタチン誘導体。 ！１．　　（２８，３Ｒ）−３−７電ノー２−ヒドロキ
   シ−４−フェニルツタノイル−（８）−ロイシル−（８
   ）−アスパラギンである特許請求の範囲第１項記載の化
   舎物。 Ｉｌ、　　Ｃ２８，Ｕ）−３−ア電ノー２−ヒドロキシ
   −４−フェニルツタノイル−（８）−ロイシル−（Ｒ）
   −アスパラギンである特許請求ｏ＠ｎ第１項記載の化合
   物。 ４、　　（２Ｓ、　３Ｒ）−３−７ミノ、−２−ヒドロ
   キシ−４−フェニルブタノイル−（Ｓ）−ロイシル−（
   Ｒ）−アルゼ二ンである特許請求の範囲第１項記載の化
   合物。