JPS58109444A - エイコサペンタエン酸又はそのエステル、ドコサヘキサエン酸又はそのエステルの分離精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明ｔｊ長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステル混
合物からエイコサペンタエン酸（以下ＥＰＡと略す）又
はそのエステル、ドコサヘキサエン酸（以下ＤＨＡと略
す）又はそのエステルを分帷精製する方法に関する。

ＥＰＡは全てシス型の二重結合を５個有する炭素数２０
の直鎖脂肪酸であり、ＤＨＡは全てシス型の二重結合を
６個有する炭素数２２の直鎖脂肪酸である。これらの脂
肪酸は多くの二重結合を有しているために、熱、光、酸
素に対して極めて不安定であり、容易に重合、酸化、二
重結合の転位を起こしやすい液体である１、 ＥＰＡとＤＨＡは海産動物の油脂、特にイワシ。

サバ、サンマ等の体重やタラ、イカ等の肝油中に他の長
鎖脂肪酸とともにグリセリドの形で存在している。海産
動物の油脂中には炭素数が１２乃至２４個の直鎖の飽和
及び不飽和脂肪酸が２０種類以上も含まれており、Ｅ　
Ｐ　Ａ含有量は約５〜１５％、ＤＨＡ含有量は約５〜１
０蟹である。

グリセリドの形で存在するＥＰＡやＤＨＡを分離精製す
るために、従来、先ず油脂をエステル交換反応により低
級アルキルエステル混合物とした後蒸留するか、又はぼ
素による分別精製する方悲が行なわれているが、この方
法で得られるＥＰＡ又はそのエステル、ＤＨＡ又はその
エステル（以下、ＥＰＡ　、ＤＨＡ等と略す）の純度は
３０〜５０％程変である。これを更に高純庶にする方法
としては、■薄層クロマトグラフィー、■シリカゲル銀
イオンクロマトグラフィー、■逆相分配クロマトクラフ
ィー等の方法が知られているが、いずれの方法もそれぞ
れ欠点を有している。即ち、■は分析方法の１つであり
、極微量のサンプルを調製するには適していても、大量
に分離・精製することはできない。■は吸着クロマトグ
ラフィーであり、繰返し使用するとシリカゲル相体の吸
着力が失なわわ、分離能が無くなるだめ実用的でない。

更にこの場合は重金属である銀が溶出し製品を汚染する
問題があり、医薬品原料や食品強化剤原料となるＥＰＡ
又はＤ　ＨＡの精製としては不適当である。■はオクタ
デシル基をシラノール結合で保持している市販の逆相分
配クロマト担体、例えばウォーターズ社の調製用ＰＡＫ
−５００／Ｃ１８カラム、デュポン社のＰａｒｍａｐｈ
ａｓ・ＯＤＳ充填カラム等を用いて、テトラヒドロフラ
ンとアセトニトリル又は低級アルコールの混合液に水又
は酢酸水溶液を加えた溶離液を流してカラムクロマト精
製する方法であり、クロマト担体の耐久性もあり、比較
的大量の試料を処理できる一ヒ、純度８０〜９０腎の製
品が得られるという利点を有している。しか１７ながら
、この方法で得られるＥＰＡ、ＤＴ（Ａ等は油脂及び長
鎖脂肪酸製品の規格として重要な遭酸化物価（油脂又は
脂肪酸１１１４中に含まれている過酸化物量をヨウ素の
ミリ当量で表示した数値、以下ＰＯｖと略す）が著１−
１＜高いという欠点がある。

過酸化物１は人間を含め哺乳動物に対して極めて強い毒
性を示ｊ、、ＰＯＶの高いね悪な食用油脂を含む食品を
食べると、下痢、嘔吐９発熱、更に体重減少等を起し、
時には死亡することが知られており、例えば、我が国で
は即席めんについて厳しく規制されている如く極めて有
害な物質であるー。

ＥＰＡ　、ＤＨＡ等は主に医薬品・食品関係で使用され
るため、食用油脂と同等もしくはそれ以上にＰＯｖは低
くなければならない。

ＰＯｖを低下させる方法として、通常は活性炭。

酸性白土処理叫による過酸化物の吸着や分解、又は過酸
化物を含む油脂を加熱して分解する等の方法が知られて
いる。しかし乍ら、これ等の方法によりＥ　Ｐ　Ａ　＋
　Ｄ　ＨＡ　Ｊ’中の過酸化物を除去すると、ｐｏｖＶ
Ｊ、ある程度低下するが、同時に活性炭や酸性白土の混
入及び過酸化物の分解により生ずる種種の不純物の混入
が起とり、製品が汚染され製品の品質が低下するから好
ましくｌい。

従って、汚染されることなくｐｏｖの低い製品を得るた
めには、ＰＯＶを上昇させない方法でＥＰＡ　、ＤＭＡ
等を分離精製することが重要である。

本発り］の目的は、逆相分配クロマトグラフィ−法によ
り長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステル混合物より
ｐｏｖの低い高純度のＥ　Ｐ　Ａ、ＤＨＡ叫を分離精製
することにある。

本発明の分離精製法は、クロマト担体としてシリカゲル
系又は合成高分子系逆相分配クロマト用担体を充填した
カラムに長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステルの混
合物を注入後、水−低級アルコールー脂肪族ケトン、酢
酸エチル及びアセトニトリルから成る群から選択される
少なくとも１種の成分よりなる混合溶液を溶離液として
通液することを特徴とする。

本発明で使用されるシリカゲル系担体としては、特に限
定されるものではないが、好ましくは炭素数８〜１８の
アルキル基を側鎖として保持するものが好ましく、特に
オクタデシル基をシラノール結合によシ保持しているも
のが１′好ましい。また、合成高分子系担体としては、
好壕しくけ炭素数８〜１８のアルキル基、もしくはオク
タデシル基又持する多孔性合成高分子であ勺、具体的に
はポリビニルステアレート系、ポリオクタデシルアクリ
レート糸、ポリオクタデシルメタクリレート系等が例示
され得る。

本発明溶離液の各成分は一般の有機溶剤と同様に、自然
状態で長期保存しても、それ自身は実質的に過酸化物を
生ずることがなく、クロマト精製に用いるときけ加熱速
流により溶存酸素を除去するのみで十分である。溶離液
として一般的に用いられているテトラヒドロフラン、エ
ーテル、ジオキサン等はそれ自身が空気中の酸素を吸収
して過酸化物を生成するだめ、これ等を含む溶離液を用
いてＷＰＡ　、ＤＨＡ等を精製するとＰＯｖが著しく上
昇する。例えば高速液体クロマト用溶剤として市販され
ている高純度のテトラフランでもＰＯｖは１〜２であり
、これを直鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステル混合
物からＥＰＡ　、ＤＨＡ等を分離するクロマト用溶離液
とすべくこれに水とメタノールを加え、脱酸素のために
３０分間加熱還流して得られる液はＰＯｖが通常５〜１
０に上昇する。これをクロマト用溶離液として用いてＥ
ＰＡ　。

ＤＨＡ等をクロマト精製すると、ガスクロマトグラフィ
ー法での純址は高くなるが、比較例に示した如く、ｐｏ
ｖが著しく、例えば５０〜３００程度に上昇する、 本発明溶離液の一成分として選択される脂肪族ケトン、
酢酸エチル、アセトニトリルは溶離液に対するＥＰＡ又
はＤＨＡの溶解度を増加させると共に、クロマト担体に
対する長鎖不飽和脂肪酸エステルの分配を減少させる性
質があるので、精製を行う試料の不純物の種類と量によ
り、又精製の目標とする純度により、溶剤の種類と混合
割合を選択する必皆があＺが通常は１０〜４０容量π、
好１しくは２０〜３０容景％である・ 前記脂肪族ケトンとしてはアセトン、メチルエチルケト
ン、ジエチルケトン等が皐げられるが、水・溶性、親油
性及び沸点等の関係から特にアセトンが好ましい。

溶離液中の含水量を増すと、クロマト精製時の不純物ピ
ークの分離能は高まるが、ＥＰＡ、ＤＭＡ等の溶解度が
低下し、単位クロマト担体当りの処理−′が低下したり
、溶離液の必要匍が著しく増加するので前述の如く不純
物の種類と含量及び目標純度に応じて調整する必脚があ
り、゛通常は１０〜２５容旬π、好壕しくは１５〜２０
芥量πである。

低級アルコールの混合比は、水と、脂肪族ケトン、酢酸
エチル及びアセトニトリルから成る＃から選択された成
分の残余とする。例えば水が２５容吋％、アセトニ）　
ＩＪルが２０容量％の場合は残余の５５容量蟹が低級ア
ルコールの混合割合である。

前記低級アルコールとしては、炭素数１〜３のメタノー
ル、エタノール＋　１　７’ロピルアルコール、１１ｏ
−プロピルアルコールが使用され得るが、好ましくはメ
タノールである。

クロマト溶離液の脱気方法として超音波照射法があるが
、この方法では処理温度での溶解度に相当する酸素が残
るので不満足である。また溶・離液を攪拌しつつ不活性
ガスを吹き込み置換していく方法もあるが、溶剤の蒸発
損失が大きく且つ長時間を要するので工業的には不適当
である。従って、本発明では、前述の如く加熱速流によ
り溶存酸素を完全に除去する。すなわち、溶離液を窒素
等の不活性ガス中で、常圧又は減圧下で５〜６０分間加
熱還流する方法を利用する。

シリカゲル系又は合成高分子系逆相分配クロマト用担体
を充填したカラムに、ＥＰＡ又けＤＨＡを含む長鎖脂肪
酸又はその低級アルキルエステル混合物を注入し、前記
溶離液を通液して逆相分配クロマトグラフィーを行う本
発明の方法によれば、％以上に精製でき、そのＰＯＶは
殆んどの場合１０を越えることはない。

以下、実施例で本発明を更に詳しく説明する。

実施例１ イワシ油を常法によりメチルエステル化した後メタノー
ル中で尿素分別し、二重結合が３以下の脂肪酸エステル
を尿素付加俸結晶として炉別後、炉液から不飽和度の高
い脂肪酸エステルを回収し、０、１　ｗｍＨｇ　　で真
空精留して純度７５％のＥＰＡメチルエステル（ｐｏｖ
　：　２．３　）ヲ（ｉた。その７ｇを、常圧で３０分
間加熱還流し脱酸素した水−メタノール−アセトン（容
積混合比：１５−６０−２５）混合液７００ｃｃに溶解
し、ウォーターズ社の調製用パックカラムｓ　ｏ　Ｏ／
Ｃ＋ｓ　（直径５．７（：ＩＩＬ。

長さ３０（ｙｎ）に注入した後、同一混合組成の脱酸素
した溶離液をｔｏｏｃｃ／分の流速で流し、クロマト分
離を行った５、カラムから溶出する液はウォーターズ社
の高感度示差屈折計（Ｒ４０１）で検出し、記録した後
、第１図の矢印部分を分取した。

分を液を減圧濃縮後に約４０℃で真空乾燥すると、無色
透明な油状物が３．５ｇ得られた。ガスクロマトグラフ
ィー法によるＥＰＡメチルエステルの純度は９８．６％
であり、日本油化学協会制定の基準油脂分析試験法によ
るＰＯｖは４．５であった。

〔ガスクロマトグラフィー分析条件〕

カラム：ＤＥＧＳ（１０％）６０〜８０メツシユ。

Ｕｎｌｐｏｒｔ　　ＨＰ　（ガスクロ工業に、に製）３
　ｗ　Ｘ　２麓ガラスカラム 温度：２００℃ キャリヤーガス：ヘリウム 検出器：ＦＩＤ検出器 計算法：Ｃ−ＲＩＡ型クロマトバック（島津製作所）に
よる各成分ピークの面積比 をにとする。

実施例２ イワシ油のメチルエステルから実施例１と同様にして得
られた純度６３％のＤＭＡメチルエステル（ＰＯＶ：３
．３）６ｇを、１１例１　トｌｉ［Ｋ　して脱酸素した
水−メタノール−アセトニトリル（容積混合比：２Ｏ−
６０−２０）混合溶液８００ＣＣに溶解し、ウオーメー
ズ社の調製用パックカラム５００／Ｃｔａ　（ｉｍ直径
、　７　ｃｍ　、長さ３０ｃｍ）に注入した後、同一混
合液組成の脱酸素１−た溶離液を１００ｃｃ／分の流速
で流しクロマト分離を行った。

カラムから溶出する液は実施例１と同じ示差屈折計で検
出し記録した後、第２図の矢印部分を分取した。

分取液を実施例１と同じく処理して無色透明の油状物２
，１ｑを得た。ガスクロマトグラフィー法によるＤＭＡ
メチルエステルの純度は９１．６％であり、ｐｏｖけ４
．４であった。

寒施夛」 ステアリン酸ビニルＳｏ部、酢酸ビニル６０ｓ。

トリアリルイソシアネート（架橋剤）２４部、ｎ−オク
タン（溶剤）４０部、酢酸エチル（溶剤）８０部を混合
し、懸濁剤としてポリエチレンオキサイドを用い、重合
開始剤としてラウリルパーオキサイドを使用して、窒素
ガス気流中で攪拌しながら６０℃で１６時間重合させた
ところ、ステア　□リン酸ビニル系の球状多孔性合成高
分子クロマト担体が得られた１、メタノール及びアセト
ンで十分に洗浄後篩分し粒径が５３〜２５０μの部分を
得た。これを直径４ｃＩｒＬ×長さ３０ｃＩＬのガラス
製クロマト管に充填し、下記の溶離液を流し十分に置換
をした。このカラムにタラ油から実施例１と同様ＫＬ、
て得た純度８１．５％のＥＰＡメチルエステルｒｐｏｖ
：ａ、ｏ）の１０ｇを３０分間加熱還流し脱酸素した水
−メタノール−メチルエチルケトン（容積混合比：１５
−６Ｏ−２５）混合液１０００ｃｃに溶解したものを注
入し、向：′様に脱酸素した前記混合液を４０ｃｃ／分
の速度で流しクロマト分離をした。

カラムからの溶出液は実施例１と同様に示差屈折計で検
出ｌ−記録した。第３図の矢印部分を分取し実施例１と
同様に処理すると、無色透明の油状物５．８ｇが得られ
た。ガスクロマトグラフィー法によるＥＰＡメチルエス
テルのＮＵは９８．３にであり、ＰＯｖけ５．９であっ
た。

実施例４ タラ油から実施例１と同様にして得た純＆５７．３％０
ＤＨＡメチルエステＡ、（ＰＯＶ　：　２．６　）ノロ
２を、３０分間加熱還流し脱酸素しだ水−メタノール−
アセトン（容積混合比：１５−６Ｏ−２５）混合液６０
０ＣＣに溶解ｌ２、オクタデシルメタクリレ−）６０部
、エチレングリコールジメタクリレート１２部、ｎ−オ
クタン２０部、酢酸エチル４０部にポリエチレンオキサ
イドを懸濁剤と（７て、捷タラウリルパーオキサイドを
重合開始剤として加え、６０℃で１６時間重合反応を行
って得られた粒径５３〜３５０＃の球状のオクタデシル
メタクリレート系の合成高分子クロマト担体を充填した
カラム（直径４停、長さ３０ＣＩＩＩ）に注入し、前記
同様にして脱酸素した同一組成の混合液を溶離液として
、４０ＣＣ／分の流速で流しクロマト分離をした。

カラムからの溶出液は実施例１と同様に示差屈折計で検
出し、記録した。第４図の矢印部分を集め実施例１と同
様に処理すると、１．２９の無色透明の油状物が得られ
た。ガスクロマトグラフィー法によるＤＨＡメチルエス
テルの純度は８８．５％であり、ｐｏｖは５．３であっ
た。

実施例５ イワシ油をエタノール中で常法に従いアルカリケン化し
、硫酸で酸性としてからヘキサン抽出して得られたイワ
シ油脂肪酸混合物をメタノール中で尿素分別して、ＥＰ
Ａ含量４１　ｗｔＸ　　、　Ｄ　ＨＡ含量２２ｗｔ％で
ある濃縮物を得た。その５ｇを水−メタノール−アセト
ン混合液（容積混合比２１８−５２−３０）２００−に
溶解し１、実施例１と同じクロマトカラムに注入１、同
一組成の混合液を溶離液として１５０ｍｊ／分の流速で
流してクロマト精製を行った。

力２ムからの溶出液は高感度示差屈折針で検出し記録し
た。第５図の矢印部公人及びＢを分取し、実施例１と同
様に処理してそれぞれ１．１ｇ及び０．６ｇの無色透明
な油状物を得た。フラクションＡ及びＢのメチル化後の
ガスクロマトグラフィー法による純度分析値とｐｏｖは
次の通りである。

（Ａ）　　ＥＰＡ：９７．５％、　ＤＨＡ　：　１．１
％、　ＰＯＶ　：　５．１（ｎ）　　ａｐＡ：　　ｓ、
ｓ％、ＤＨＡ：　７７．９％、ＰＯＶ：　４．８比較例 イワシ油から実施例１と同様にして得た純度７５％のＫ
ＰＡメチｋ　工、Ｘチル（ＰＯＶ：２．３）の７ｇを常
圧、窒素ガス中で３０分間加熱還流し脱酸素した水−メ
タノール−テトラヒドロフラン混合浴液（容積混合比：
２Ｏ−６０−２０）の７００ｃｃに溶解し、ウォーター
ズ社製の調製用バックカラム５００／Ｃ，、（直径５．
７釧、長さ３０１）に注入した後、前記の脱酸素した混
合液を溶離液として１ｏＯｃｃ／分の流速でクロマト分
離をした。

溶出液は実施例１と同様に第６図の矢印部分を分取し実
施例１と同様に処理すると無色透明の油状物３．６９が
得られた。ガスクロマトグラフィー法によるＥＰＡメチ
ルエステルの純度は９８，１％であったが、日本油化学
協会制定の基準油脂分析試験法によるＰＯｖは１８５と
なり著しく上昇した。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第５図は本発明実施例１〜５の溶離曲線を示し
、第６図は比較例の溶離曲線を示す。 代理人　　川　　　口　　義　　雄 １９− 第１図 ゛　　湾旧時間（分） 第２図 省呂時開　（分） 第３回 第４図 溶量時間（峙） 第６図 浩呂Ｆｆｆ　閂　（分） 手続補正書 昭和５７年２　月１２日 特許庁長官　島　１）春　樹　　殿 １、事件の表示　昭和５６年　特　願第１８５９５３号
２、　発明の名称　　エイコサペンタエン酸又はそのエ
ステル、ドコサヘキサエン酸又はそのエステルの分離精
製法３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ４、　代　理　　人　　　東京都新宿区新宿１丁目１番
１４号　山田ビル７、補正のｔｔ［明細書及び図面 ８　補正の内容（１）明細書全文を別紙のとおシ補正す
る。 （２）添付図面中、第７図を追加する。 明　　　　細　　　　書 １、発明の名称 エイコサペンタエン酸又はそのエステル、ドコサヘキサ
エン酸又はそのエステルの分離精製法 ２、特許請求の範囲 （１）長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステルの混合
物をシリカゲル系又は合成高分子系逆相分配クロマト用
担体を充填したクロマトカラムに注入し、水１０〜３０
容量俤と低級アルコール４０〜７０容量チと脂肪族ケト
ン、酢酸エチルおよびアセトニトリルより成る群から選
択される少なくとも１種の成分１０〜４０容量チとから
成る混合液を溶離液として通液し逆相分配クロマトグラ
フィーを行うことを特徴とする長鎖脂肪酸又はその低級
アルキルニスチルの混合物よりのエイコサペンタエン酸
又はそのエステル、ドコサヘキサエン酸又はそのエステ
ルの分離精製法。 １− （２）　　クロマト用担体がオクタデシル基をシラノー
ル結合により保持しているシリカデり系クロマト用担体
であることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の
方法。 （３）　　クロマト用担体がオクタデシル基又はステア
リル基をエステル結合により保持している合成高分子系
担体であることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記
載の方法。 （４）溶離液を予め加熱還流して溶存酸素を除去するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、発明の詳細な説明 本発明は長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステル混合
物からエイコサペンタエン酸（以下ＥＰＡと略す）又は
そのエステル、ドコサへ午すエン酸（以下ＤＨＡと略す
）又はそのエステルを分離精製する方法に関する。 ＥＰＡは全てシス型の二重結合を５個有する炭素　　ヘ
ー数２０の直鎖脂肪酸であり、ＤＨＡは全てシス型の二
重結合を６個有する炭素数２２の直鎖脂肪酸である。こ
れらの脂肪酸は多くの二重結合を有しているために、熱
、光、酸素に対して極めて不安定であり、容易に重合、
酸化、二重結合の転位を起こしやすい液体である。 ＥＰＡとＤ阻Ｍ海産動物の油脂、特（てイワシ、サバ、
サンマ等の体重やタラ、イカ等の肝油中に他の長鎖脂肪
酸とともにグリセリドの形で存在している。海産動物の
油脂中には炭素数が１２乃至２４個の直鎖の飽和及び不
飽和脂肪酸が２０糧類以上も含まれており、ＥＰＡ含有
量は約５〜１５チ、ＤＨＡ含有着は約５〜１０俤である
。 ゛グリセリドの形で存在するＥＰＡ＋ＤＨＡを分離精製
するために、従来、先ず油脂をエステル交換反応によシ
低級アルキルエステル混合物とした後蒸留するか、又は
尿素による分別精製する方法が行なわれているが、この
方法で得られるＥＰＡ又はそのエステル、　ＤＨＡ又は
そのエステル（以下、　ＥＰＡ。 ＤＨＡ等と略す）の純度は３０〜５０チ程度である。 これを更に高純度にする方法としては、■薄、１−クロ
マトグラフィー、■シリカゲル銀イオンクロマトグラフ
ィー、■逆相分配クロマトグラフィー等の方法が知られ
ているが、いずれの方法もそれぞれ欠点を有している。 即ち、■は分析方法の１つであり、極微輩のサングルを
調製するには適していても、大量に分離・ｎＭすること
はできない。 ■は吸着クロマトグラフィーであシ、繰返し使用すると
シリカゲル担体の吸着力が失なわれ、分離能が無くなる
ため実用的でない。更にこの１合は重金４である銀が溶
出し製品を汚染する問題があり、医薬品原料や食品強化
剤原料となるＥＰＡ　５１Ｈ鼾仏の精製法としては不適
当である。■はオクタデシル基をシラノール結合で保持
している市販の逆相外にクロマト担体、例えばウォータ
ーズ社の調製用ＰＡＫ−５００／Ｃ１８カラム、デュポ
ン社のＰｅｒｍａｐｈａａｅ　ＯＤＳ充填カラム等を用
いて、テトラヒドロフランとアセトニトリル又は低級ア
ルコールの混合液に水又は酢酸水溶液を加えた溶離液を
流してカラムクロマト精製する方法であり、クロマト担
体の耐久性もあり、比較的大鹸の試料を処理できる上、
純ｖ８０〜９０チの製品が得られるという利点を有して
いる。しかしながら、この方法で得られるＥＰＡ、ＤＨ
Ａ４Ｊは油脂及び長鎖脂肪酸製品の規格として重要な過
酸化物価（油脂又は脂肪酸１ゆ中に含まれている過酸化
物］１をヨウ素のミリ幽門で表示した数値、以下ＰＯｖ
と略す）が著しく上昇するという欠点がある。 過酸化物は人間を含め哨乳動吻に対して極めて強い毒性
を示し、ｐｏｖの高い粗悪な食用油脂を含む食品を食べ
ると、下痢、（遍吐１発熱、更に体取減少等を起し、時
には死亡することが知られており、例えば、我が国では
即席めんについて厳しく規制されている如く極めて有害
な、白質である。 ＥＰＡ、ＤＨＡ等は主に医薬品・食品関係で使用される
ため、食用油脂と同等もしくはそれ以上にＰＯｖは低く
なければならない。 ＰＯｖを低下させる方法として、通常は活性炭。 酸性白土処Ｊ」等による過酸化物の吸着や分解、又は過
酸化物を含む油脂を加熱して分解する等の方法が知られ
ている。しかし乍ら、これ等の方法によりＦｌ：ＰＡ　
、ＤＨＡ等中の過酸化物を除去すると、ｐｏｖはある程
度低下するが、同時に活性炭や酸性白土の混入及び過酸
化物の分解により生ずる種々の不純物の混入が起こり、
製品が汚染され製品の品質が低下するから好ましくない
。 従って、汚染されることなく　ｐｏｖの低い製品を得る
ためには、ＰＯｖを上昇させない方法でＥＰＡ、。 ＤＨＡ等を分離精製することが重要である。 本発明の目的は、逆相分配クロマトグラフィー法により
長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステル混合物より　
ｐｏｖの低い高純度のＥＰＡ　、　ＤＨＡ等を分離精製
することにある。 本発明の分離精製法は、クロマト担体としてシリカダル
系又は合成高分子系逆相分配クロマト用担体を充填した
カラムに長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステルの混
合物を注入後、水−低級アルコールー脂肪族ケトン、酢
酸エチル及びアセトニトリルから成る群から選択される
少なくとも１種の成分よりなる混合溶液を溶離液として
通液することを特徴とする。 本発明で使用されるシリカダル系担体としては、特に限
定されるものではないが、好ましくは炭素数８〜１８の
アルキル基を側鎖として保持するものが好ましく、特に
オクタデシル基をシラノール結合により保持しているも
のが好ましい。また、合成高分子系担体としては、好ま
しくは炭素数８〜１８のアルキル基、もしくはオクタデ
シル基又はステアリル基の如き脂肪酸残基を側鎖として
保蝕−ト７＋！６Ｌ工ＩＨｔ）＞Ｆｍ　宣１：Ｌヱ−ｙ
＄　＜　　ｈ　　　　日　／）　ｋｈ　Ｉｆｆ　＋−＋
　］＋＋ビニルステアレート系、ポリオクタデシルアク
リレート系１，１？リオクタデシルメタクリレート系等
が例示され得る。 本発明溶離液の各成分は一般の有機溶剤と同様に、自然
状的で長期保存しても、それ自身は実質的に過酸化・物
を生ずることがなく、クロマト精製に用いるときは加熱
還流により溶存酸素を除去するのみで十分である。溶離
液として一般的に用いられているテトラヒドロフラン、
ニー４ル、ノオキサン等はそれ自身が空気中の酸素を吸
収して過酸化物を生成するため、これ等を含む溶離液を
用いてＥＰＡ　、　Ｄ）ｔＡ等を精製するとＰＯｖが著
しく旧姓する。例えば高速液体クロマト用溶剤として市
販されている高純妾のテ］・ラフランでもＰＯｖは１〜
２であり、これを直鎖脂肪酸又はその低級アルキル−・
チー混合物からｇＰＡ　、　ＤＨＡ等′：を分離するり
・〜ト用溶離液とすべくこれに水とメタノールを加え、
脱酸素のために３０分間加熱還流して得られる液はＰＯ
ｖが通常５〜１０に上昇する。これをクロマト用溶離液
として用いてＥＰＡ、ＤＨＡ等をクロマト精製すると、
ガスクロマトグラフィー法での純度は高くなるが、比較
例に示した如く、ＰＯｖが５０〜３００に上昇する。 本発明溶離液の一成分として選択される脂肪族ケトン、
酢酸エチル、アセトニトリルは溶離液に対するＥＰＡ又
はＤＨＡの溶解度を増加させると共に、クロマト担体に
対する長鎖不飽和脂肪酸エステルの分配を減少させる性
質があるので、精製を行う試料の不純物の種類と量によ
り、又精製の目標とする純度により、溶剤の種類と混合
割合を選択する必要があるが通常は１０〜４０容掛係、
好ましくは２０〜３０容殿チである。 前記脂肪族ケトンとしてはアセトン、メチルエチルケト
ン、ノエ−ｆ）ｖケトン等が挙げられるが、水溶性、親
油性及び沸点等の関係から特にアセトンが好ましい。 溶離液中の含水量を増すと、クロマト精製時の不純物ピ
ークの分離能は高まるが、ＥＰＡ　、　Ｄ）（Ａ等の溶
解度が低下し、単位クロマト−）ｆ１体当りの処理量が
低下したり、溶離液の必要緻が著しく増加するので前述
の如く不純物の種類と含着及び目標純度に応じて調整す
る必要があり、Ｉ１ｍ常は１０〜３０容１Ｌ好ましくは
１５〜２５引０である。 低級アルコールの混合比は、水と、脂肪族ケトン、酢酸
エチル及びアセトニトリルから成る群から選択された成
分の残余とする。例えば水が２５容量係、アセトニトリ
ルが２０容ｄ％の場合は残余の５５Ｗｍ％が低級アルコ
ールの混合割合である。 Ａ！］記低級アルコールとしては、炭素数１〜３のメタ
ノール、エタノール、ｎ−、ｐロビルアルコール、１８
ｏ−グロビルアルコールが使用され得るが、好ましくは
メタノールである。 があるが、この方法では処理温度での溶解度に相当する
酸素が残るので不満足である。また溶離液を攪拌しつつ
不活性ガスを吹き込み置換していく方法もあるが、溶剤
の蒸発損失が大きく目つ長時間を要するので工業的には
不適当である。従って、本発明では、前述の如く加熱還
流により溶存酸素を完全に除去する。すなわち、溶離液
を窒素等の不活性ガス中で、常圧又は減圧下で５〜６０
分間加熱還流する方法を利用する。 シリカゲル系又は合成高分子系逆相分配クロマト用担体
を充填したカラムに、ＥＰＡ又はＤＨＡを含む長鎖脂肪
酸又はその低級アルキルエステル混合物を注入し、前記
溶離液を通液して逆相分配クロマトグラフィーを行う本
発明の方法によれば、ＥＰＡ又はその低級アルキルエス
テルを純度９５係以上にＤＴ（Ａ又はその低級アルキル
エステルは純度８８チ以上に精製でき、そのｐｏｖが１
０を越える以下、実施例で本発明を更に詳しく説明する
。 実施例１ イワシ油を常法によりメチルエステル化しに後メタノー
ル中で尿素分別し、二重結合が３以下の脂肪酸エステル
を尿素付加俸結晶として戸別後、Ｐ液から不飽和度の高
い脂肪酸エステルを回収し、Ｑ、ｌ　Ｉｎｎ　ｆｌｇで
真空精留して純度７５％のＫＰＡメチルｘ　メチル（Ｐ
ＯＶ　：　２．３　）を得た。その７−ｇを、常圧で３
０分間加熱還流し脱酸素した水−メタノール−アセトン
（容積混合比：１５−６Ｏ−２５）混合液７００ｃｃに
溶解し、ウォーターズ社の調製用パックカラム５００　
／Ｃ１Ｂ　（直径５．７　ｃｍ　、長さ３０ｆ潴）に注
入した鎌、同一混合組成の脱酸素した溶離液を１００ｃ
ｅ／分の流速で流し、クロマ］・分離を行った。カラム
から溶出する液はウォーターズ社の高感度示差屈折計（
’Ｒ４０１）で検出し、記録した後、第１図の矢印部分
を分取した。分取液を減圧濃縮後に約４０°０で真空乾
燥すると、無色透明な油状物が３．５ｇ得られた。がス
クロマトグラフイー法によるＥＰ入メチルエステルの純
度は９８６チであり、日本油化学協会制定の基準油脂分
析試験法によるＰＯｖは４．５であった。 〔ガスクロマトグラフィー分析条件〕 カラム：　ＤＥＧＳ　（１０％）６０〜８０メツシユ。 Ｕｎｉｐｏｒｔ　ＨＰ　（ガスクロ工業に、に製）３ｍ
ｍ×２ｍガラスカラム 温　度：２００°０ キャリヤーガス：ヘリウム 検出器：　ＦＩＤ検出器 計算法：　Ｃ−ＲＩｋ型クロマト・マッグ（島津製作所
）による各成分ピークの面積比を係 とする。 実施例２ イワシ油のメチルエステルから実施例１と同様にして得
られた純度６３チのＤＨＡメチルエステル（ＰＯＶ　：
　３．３　）６　、！ｉ＋を、実施例１と同様にして脱
酸素した水−メタノール−アセトニトリル（客積混合比
：２Ｏ−６０−２０）混合溶液８００　ｃｃ　　に溶解
し、ウォーターで社の調製用肩ツクカラム５００１０１
６　（＋ｍ径５．７　＋−’ｍ　）長さ３０　・二ｍ　
）に注入した（★、同一混合液組成の脱酸素した溶離液
を１００ｃｅ／分のｒ）犯速でｔ准しクロマト分離を行
った。 カラムから溶出する液は実施例１と同じ示差屈折針で検
出し記録した後、第２図の矢印部分を分取した。 分取液管実施例１と同じく処理して無色透明の油状物２
．１Ｎｔ得九。ガスクロマトグラフィー法によるＤＨＡ
メチルエステルの純度は９１．６％であり、ｐｏｖは４
．４であった。 実施例３ ステアリン１債ビニル６０部、ｌ’４［ビニル６０部。 トリアリルイソシアネート（架ａ＋′ＩＩ）２４部、ｎ
−オクタン（Ｐ４制）４０を年、酢酸エチル（溶ｌ−１
）８０部を混合し、懸濁＋ｊｌとして、］セリエチレン
オギサイドを用い、重合開始剤としてラウリル・ぜ−オ
キサイドを使用して、窒素ガス気流中で省拌しながら６
０°Ｃで１６時間重合させたところ、ステアリン酸ビニ
ル系の球状多孔性合成高分子クロマト担体が得られた。 メタノール及びアセトンで十分に洗浄後篩分し粒径が５
３〜２５０μの部分を得た。これを直径４鑞×長さ３０
ｃｔｎのガラス製クロマト管に充填し、下記の溶離液を
流し十分に置換をした。とのカラムにタラ油から実施例
１と同様にして得た純度８１．５１０ＥＰＡメチルエス
テル（ＰＯＶ：３．０）のｌ（ｌを３０分間加熱還流し
脱酸素した水−メタノール−メチルエチルケトン（容積
混合比：１５−６Ｏ−２５）混合液１０００ｃｃに溶解
し友ものを注入し、同様に脱酸素した前記混合液を４０
ｃｃ／分の速度で流しクロマト分離をした。 カラムからの溶出液は実施例１と同様に示差屈姻；朴１
噂幻ｋ　１−ＩＪ　　Ｉ　　　’ｊ−ム　１４−　　　
竺　ワ　が刀ｉ１ｈ二印立１１１　　式−１：Ｌ　Ｔｌ
ｈし実施例１と同様に処理すると、無色透明の油状物５
．８ｇが得られた。ガスクロマトグラフィー法によるＩ
ＰＡメチルエステルの純度は９８．３　％であり、ｐｏ
ｖは５．９であった。 実施例４ タラ油から実施例１と同様にして得た純度５７．３俤の
ＤＨＡメ−Ｆ−ル、：ｃ　ステル（ＰＯＶ：　２．６　
）の６ｇを、３０分間加熱−Ｊ１１流し脱酸素した水−
メタノール−アセトン（容積混合比：１５−６Ｏ−２５
）混合１６００ｅｅに溶解し、オクタデシルメタクリレ
ート６０ｍ、エチレングリコールジメタクリレート１２
部、ｎ−オクタン２０部、酢酸エチル４０部にポリエチ
レンオキサイドを懸濁剤として、またラウリル・母−オ
キサイドを重合開始剤として加え、６０°０で１６時間
重合反応を行って得られた粒径５３〜３５０μの球状の
オクタデシルメタクリレ−４糸の合成高分子クロマト担
体を充填したカラム（直径４　ｃｍ　、長さ３０ｃｍ）
に注入し、前記同様にして脱酸素した同一組成の混合液
を溶離液として、４０ｃｃ／分の流速で流しクロマト分
離をした。 カラスからの溶出液は実施例１と同様に示差屈折計で検
出し、記録した。第４図め矢印部分を集め実施例１と同
様に処理すると、１，２ｇの無色透明の油状物が得られ
た。がスクロマトダラフィー法によるＤＨＡメチルエス
テルの純度は８８．５　％であり、ＰＯＶｒｉ５．３で
あった。 実施例５ イワシ油をエタノール中で常法に従いアルカリケン化し
、硫酸で酸性としてからヘキサン抽出して得られたイワ
シ油脂肪酸混合物をメタノール中で尿素分別して、ＥＰ
Ａ含量含量４奮 ２２ｗｔチである濃縮物を得た。その５ｇを水−メタノ
ール−アセトン混合液（容積混合比：１８−５２−３０
）２００ｉｊに溶解し、実施例１と同じクロマトカラム
に注入し、同一組成の混合液を溶離液として１５Ｑｉｌ
ｌ／／分の流速で流してクロマト精製を行　だ。 カラムからの溶出液は高感度示差屈折計で検出し１１己
録した。第５図の矢印部分Ａ及びＢを分取し、実施例１
と同様に処理してそれぞれ１．１ｇ及び０、６ｇの無色
透明な油状吻を得た。フラクションＡ及びＢのメチル化
後のガスクロマトグラフィー法による純度分析値とＰＯ
Ｖは次のＩ亀りである。 （Ａ）ＥＰＡ：　９７．５％，　ＤＨＡ：　１．１　％
　、　ＰＯＶ：５．１（８）　　ｇｐ人＝５．５チ，Ｄ
Ｈ入ニア、７．９儂，ＰＯＶ：４８実施例６ イワシ油をエタノール中で常法に従いアルカリケン化し
、硫酸で酸性としてからヘキサン抽出して得られたイワ
シ油脂肪酸混合物をメタノール中で尿素分別して、ＥＰ
Ａ含量４　１　ｗｔ係，　ＤＨ＆含量２２ｗｔ％である
濃縮ｌ吻を１４Ｉた。その５ｇを水−メタノール−アセ
トン混合ｉ（容積混合比＝２３−５７−２０）３００＋
ａｊ！に溶解し、実施例１と同じ離液として１００ｍＪ
／分の流速で流してクロマト精製を行った。 カラムからの溶出液は高感度示差屈折計で検出し記録し
た。第７図の矢印部公人及びＢを分取し、実施例１と同
様に処理してそれぞれ１．１ｇ及び０、６Ｎの無色透明
な油状物を得た。フラクション人及びＢのメチル化後の
ガスクロマトグラフィー法による純度分析値とＰＯｖは
次のｉＭりであった。 （Ａ）　　ＥＰＡ：９５．７％，ＤＩ（Ａ：３ｆｌ＊，
ＰＯＶ：４．２（Ｂ）　　ＥＰＡ：　６．０％，ＤＨＡ
ニア５．２％，ＰＯＶ：４．０比較例 イワシ油から実施例１と同様にして得た純度７　５　％
（ＤＦ．Ｐ／ｌｙ’ｆルｘ：ｘチル（　ｐｏｖ：　２．
３　）　０７Ｉを常圧、窒素がス中で３０分間加熱還流
し脱酸素した水−メタノール−テトラヒドロフラン混合
溶液（容積混合比：２Ｏ−６０−２０）の７００ｃｃＶ
Ｃ．ｅｌ解し、ウォーターズ社製の調製用・母ツクカ注
入した後、ｒｉｆＩ記の脱酸素し要理合液を溶離液とし
て１００ｅｃ／分の流速でクロマト分離をした。 溶出液は実施例１と同様に第６図の矢印部分を分取し実
施例１と同様に処理すると無色透明の油状物３．６ｇが
得られた。ガスクロマトグラフィー法によるＥｌメチル
エステルの純度は９８．１％であったが、日本油化学協
会制定の基準油脂分析試験法によるＰＯｖは１８５とな
り著しくＥ昇し念。 ４、図面の簡単な説明 第１〜第５図及び第７図は本発明実施例１〜６の溶離曲
線を示し、・窮６図は比較例の溶離曲線を示す。 ２０− 溶出時間ｃ分）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　長鎖脂肪酸又はその低級アルキルエステルの
   混合物をシリカゲル系又は合成高分子系逆相分配クロマ
   ト用担体を充填したクロマトカラムに注入し、水１０〜
   ２５容骨％と低級アルコール４０〜７０芥量％と脂肪族
   ケトン、酢酸エチルおよびアセトニトリルより成る群か
   ら選択される少なくとも１種の成゛分１０〜４０容縦％
   とから成る混合液を溶離液として通液し逆相分配クロマ
   トグラフィーを行うことを特徴とする長鎖脂肪酸又はそ
   の低級アルキルエステルの混合物よりのエイコサペンタ
   エン酸又はそのエステル、ドコサヘキサエン酸又けその
   エステルの分離Ｍ！Ｉｉ！法。
2. （２）　　クロマト用担体がオクタデシル基をシラノー
   ル結合により保持しているシリカゲル系クロマト用相体
   であることを特徴とする特許請求の範囲第（１＋項にｕ
   ｉミルの方法。
3. （３）　　クロマト用担体がオクタデシル基又はステア
   リル基をエステル結合により保持１．ている合成高分子
   系担体であることを特徴とする特許請求の顧〕、囲第＋
   ＩＩ項に記載の方法３゜
4. （４）溶離液を予め加熱還流して溶存酸素を除去するこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第ｆｉ＋項に記載の方法
   。