JPH09104894A - クロマトグラフィーによる方法 - Google Patents
クロマトグラフィーによる方法Info
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- JPH09104894A JPH09104894A JP8213516A JP21351696A JPH09104894A JP H09104894 A JPH09104894 A JP H09104894A JP 8213516 A JP8213516 A JP 8213516A JP 21351696 A JP21351696 A JP 21351696A JP H09104894 A JPH09104894 A JP H09104894A
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- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
- C11C1/00—Preparation of fatty acids from fats, fatty oils, or waxes; Refining the fatty acids
- C11C1/005—Splitting up mixtures of fatty acids into their constituents
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- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/40—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism using supercritical fluid as mobile phase or eluent
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
- C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C51/47—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
- C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 脂肪酸及び／又は脂肪酸エステルの混合物か
ら、有用な不飽和脂肪酸をそのまま、又はその誘導体の
形で回収する方法を提供すること。 【解決手段】 酸化アルミニウム、又は、アルカリで前
処理した酸化アルミニウムを固定相として使用し、超臨
界又は液体二酸化炭素を移動相とするカラムクロマトグ
ラフィーにより、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合
物から、分子中に少なくとも１６個の炭素原子を有する
不飽和脂肪酸又はこのような脂肪酸の誘導体を回収す
る。
ら、有用な不飽和脂肪酸をそのまま、又はその誘導体の
形で回収する方法を提供すること。 【解決手段】 酸化アルミニウム、又は、アルカリで前
処理した酸化アルミニウムを固定相として使用し、超臨
界又は液体二酸化炭素を移動相とするカラムクロマトグ
ラフィーにより、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合
物から、分子中に少なくとも１６個の炭素原子を有する
不飽和脂肪酸又はこのような脂肪酸の誘導体を回収す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、不飽和で場合によ
り誘導体の形である脂肪酸を、他の成分、例えば、飽和
で場合により誘導体の形の脂肪酸、とのこれらの混合物
からカラムクロマトグラフィーにより回収する方法に関
する。
り誘導体の形である脂肪酸を、他の成分、例えば、飽和
で場合により誘導体の形の脂肪酸、とのこれらの混合物
からカラムクロマトグラフィーにより回収する方法に関
する。
【０００２】栄養学及び医学的観点からの不飽和、特に
ポリ不飽和脂肪酸（「ＰＵＦＡ」と略す）には長期にわ
たり科学的関心がもたれているところである。ある種の
脂肪酸、特にＰＵＦＡは、重要な生物学的作用（とりわ
け、血小板凝集、炎症並びにアレルギー）を担う、プロ
スタノイド化合物、とりわけプロスタグランジン、トロ
ンボキサン及びロイコトリエンの前駆体であることは、
よく知られている。特に、２つの「ω−３」−ＰＵＦＡ
（最初の二重結合が、この酸の末端メチル基から３番目
の炭素原子に位置する）であるエイコサペンタエン酸
（「ＥＰＡ」）とドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）
は、「文明病」、特に心血管疾患、例えば、心筋梗塞と
コレステロールレベルの上昇、の治療と予防に有効な物
質として有用である。また、ω−６−ＰＵＦＡ（最初の
二重結合を６番目の炭素原子に有する）と同様ω−３−
は、幼児の全身の成長と共に網膜と脳の成長において必
須の役割を果たすという知見も知られている。したがっ
て、ω−３−及びω−６−ＰＵＦＡは母乳中に検出する
ことができる；母乳で育てられる子供が、母乳で育てら
れない子供よりも有意に速く発育することは確かに真実
である。更には、特にエイコサペンタエン酸とドコサヘ
キサエン酸は、動脈硬化症の制御、コレステロールレベ
ルと血中脂肪レベルの低下、また血小板凝集、慢性炎症
（例えば、慢性関節リウマチや神経皮膚炎）、及びアレ
ルギーの防止における有用な活性に関して、最近集中的
に研究されている。
ポリ不飽和脂肪酸（「ＰＵＦＡ」と略す）には長期にわ
たり科学的関心がもたれているところである。ある種の
脂肪酸、特にＰＵＦＡは、重要な生物学的作用（とりわ
け、血小板凝集、炎症並びにアレルギー）を担う、プロ
スタノイド化合物、とりわけプロスタグランジン、トロ
ンボキサン及びロイコトリエンの前駆体であることは、
よく知られている。特に、２つの「ω−３」−ＰＵＦＡ
（最初の二重結合が、この酸の末端メチル基から３番目
の炭素原子に位置する）であるエイコサペンタエン酸
（「ＥＰＡ」）とドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）
は、「文明病」、特に心血管疾患、例えば、心筋梗塞と
コレステロールレベルの上昇、の治療と予防に有効な物
質として有用である。また、ω−６−ＰＵＦＡ（最初の
二重結合を６番目の炭素原子に有する）と同様ω−３−
は、幼児の全身の成長と共に網膜と脳の成長において必
須の役割を果たすという知見も知られている。したがっ
て、ω−３−及びω−６−ＰＵＦＡは母乳中に検出する
ことができる；母乳で育てられる子供が、母乳で育てら
れない子供よりも有意に速く発育することは確かに真実
である。更には、特にエイコサペンタエン酸とドコサヘ
キサエン酸は、動脈硬化症の制御、コレステロールレベ
ルと血中脂肪レベルの低下、また血小板凝集、慢性炎症
（例えば、慢性関節リウマチや神経皮膚炎）、及びアレ
ルギーの防止における有用な活性に関して、最近集中的
に研究されている。
【０００３】天然の油脂、特に魚油、海洋動物油及び植
物油は、ω−３−及びω−６−ＰＵＦＡの重要な供給源
であり、これらは主にグリセリドやリン脂質の形で存在
し、多くの好ましくない二次産物や不純物を伴ってい
る。前述のω−３−ＰＵＦＡであるエイコサペンタエン
酸とドコサヘキサエン酸は主に魚油中にあり、一方例え
ばω−６−ＰＵＦＡであるアラキドン酸やリノール酸は
主に動物脂肪や植物油、例えばトウモロコシ油、中に存
在する。前述した、ＰＵＦＡを摂取又は投与することに
よる利点と、食事でとる油脂中の目的の長鎖ＰＵＦＡの
全含有量が約１０〜２１％の範囲である（例えば、魚油
中のω−３−及びω−６−ＰＵＦＡは約１２〜１８％の
範囲にある）という事実からすると、適切な摂取量のω
−３−ＰＵＦＡをとるためには日常の食事で大量の魚を
消費しなければならない。しかしこのことは、種々の理
由により実際的でない。したがって幾つかの製造業者
は、何十年も市販されていた天然濃度の油を含有する魚
油を販売することに加えて、エステル又は再置換したト
リグリセリドとして可能な限り純粋な形の濃縮ＰＵＦＡ
を含有するカプセルを販売している。可能な限り純粋な
個々のＰＵＦＡに対する需要は依然としてある。
物油は、ω−３−及びω−６−ＰＵＦＡの重要な供給源
であり、これらは主にグリセリドやリン脂質の形で存在
し、多くの好ましくない二次産物や不純物を伴ってい
る。前述のω−３−ＰＵＦＡであるエイコサペンタエン
酸とドコサヘキサエン酸は主に魚油中にあり、一方例え
ばω−６−ＰＵＦＡであるアラキドン酸やリノール酸は
主に動物脂肪や植物油、例えばトウモロコシ油、中に存
在する。前述した、ＰＵＦＡを摂取又は投与することに
よる利点と、食事でとる油脂中の目的の長鎖ＰＵＦＡの
全含有量が約１０〜２１％の範囲である（例えば、魚油
中のω−３−及びω−６−ＰＵＦＡは約１２〜１８％の
範囲にある）という事実からすると、適切な摂取量のω
−３−ＰＵＦＡをとるためには日常の食事で大量の魚を
消費しなければならない。しかしこのことは、種々の理
由により実際的でない。したがって幾つかの製造業者
は、何十年も市販されていた天然濃度の油を含有する魚
油を販売することに加えて、エステル又は再置換したト
リグリセリドとして可能な限り純粋な形の濃縮ＰＵＦＡ
を含有するカプセルを販売している。可能な限り純粋な
個々のＰＵＦＡに対する需要は依然としてある。
【０００４】
【従来の技術】ＰＵＦＡを含有する混合物、例えば、魚
油、海洋動物油又は植物油自体、あるいはこれらの精製
したもの、のアルカリ加水分解、続いてアルコール、特
にエタノール、による再エステル化により、対応するア
ルキルエステルが生成する。続くアルキルエステル混合
物の分離技術については、とりわけ超臨界ガス、特に二
酸化炭素、による向流抽出により、存在する炭素原子の
数に応じて実質的な分離が行われることは知られてい
る。このように、同じか又は比較的近い炭素原子数を有
する比較的高純度のＰＵＦＡ、例えばエイコサペンタエ
ン酸（Ｃ20）とドコサヘキサエン酸（Ｃ22）の６０％純
度の混合物、の画分が得られる。経験上、このような飽
和度（二重結合の数）に応じて分離しようとすることは
可能ではない。しかし、個々のＰＵＦＡの生理学的活性
を研究するために、かなり高純度の画分が必要である。
従前の分離方法は不適切なため、とりわけ、例えば個々
のω−３−ＰＵＦＡであるエイコサペンタエン酸とドコ
サヘキサエン酸が別々に作用するのか、あるいは相乗的
に作用するのかを解明することは未だできていない。こ
のことはドコサヘキサエン酸と常に一緒に投与されるこ
ととなるドコサペンタエン酸にも当てはまる。
油、海洋動物油又は植物油自体、あるいはこれらの精製
したもの、のアルカリ加水分解、続いてアルコール、特
にエタノール、による再エステル化により、対応するア
ルキルエステルが生成する。続くアルキルエステル混合
物の分離技術については、とりわけ超臨界ガス、特に二
酸化炭素、による向流抽出により、存在する炭素原子の
数に応じて実質的な分離が行われることは知られてい
る。このように、同じか又は比較的近い炭素原子数を有
する比較的高純度のＰＵＦＡ、例えばエイコサペンタエ
ン酸（Ｃ20）とドコサヘキサエン酸（Ｃ22）の６０％純
度の混合物、の画分が得られる。経験上、このような飽
和度（二重結合の数）に応じて分離しようとすることは
可能ではない。しかし、個々のＰＵＦＡの生理学的活性
を研究するために、かなり高純度の画分が必要である。
従前の分離方法は不適切なため、とりわけ、例えば個々
のω−３−ＰＵＦＡであるエイコサペンタエン酸とドコ
サヘキサエン酸が別々に作用するのか、あるいは相乗的
に作用するのかを解明することは未だできていない。こ
のことはドコサヘキサエン酸と常に一緒に投与されるこ
ととなるドコサペンタエン酸にも当てはまる。
【０００５】ＰＵＦＡ、特に分子内に少なくとも１６個
の炭素原子を有する栄養学的に及び医学的に興味がもた
れるＰＵＦＡを分離することにより、炭素原子数のみで
なく二重結合の数に応じてそれぞれのＰＵＦＡが利用で
きるようになり、こうしてＰＵＦＡは日常の栄養補給と
してだけでなく、特に医薬として投与することができる
こととなる。
の炭素原子を有する栄養学的に及び医学的に興味がもた
れるＰＵＦＡを分離することにより、炭素原子数のみで
なく二重結合の数に応じてそれぞれのＰＵＦＡが利用で
きるようになり、こうしてＰＵＦＡは日常の栄養補給と
してだけでなく、特に医薬として投与することができる
こととなる。
【０００６】幾つかの文献が分取用超臨界流体クロマト
グラフィー（「ＳＦＣ」と略す）の分野で出されてお
り、これらの大部分はM. Perrut の率いるグループの業
績によるものである〔例えば、LC-GC (Magazine of Liq
uid and Gas Chromatography)6, 10 (1988), 914 を参
照〕。これらの文献によると、魚油から得られ、対応す
るエチルエステルに再エステル化されたドコサペンタエ
ン酸とドコサヘキサエン酸は、ＳＦＣを使用する充填カ
ラムで分離して分取することができる。シリカ充填カラ
ムを使用すると、エイコサペンタエン酸とドコサヘキサ
エン酸はそれぞれ９６％と８５％の純度を達成すること
ができた。ドコサペンタエン酸の分離に関する情報はな
いが、ドコサヘキサエン酸で達成された８５％という相
対的に低い純度から考えて、この方法ではドコサペンタ
エン酸を分離することは不可能であることが示唆され
る。
グラフィー（「ＳＦＣ」と略す）の分野で出されてお
り、これらの大部分はM. Perrut の率いるグループの業
績によるものである〔例えば、LC-GC (Magazine of Liq
uid and Gas Chromatography)6, 10 (1988), 914 を参
照〕。これらの文献によると、魚油から得られ、対応す
るエチルエステルに再エステル化されたドコサペンタエ
ン酸とドコサヘキサエン酸は、ＳＦＣを使用する充填カ
ラムで分離して分取することができる。シリカ充填カラ
ムを使用すると、エイコサペンタエン酸とドコサヘキサ
エン酸はそれぞれ９６％と８５％の純度を達成すること
ができた。ドコサペンタエン酸の分離に関する情報はな
いが、ドコサヘキサエン酸で達成された８５％という相
対的に低い純度から考えて、この方法ではドコサペンタ
エン酸を分離することは不可能であることが示唆され
る。
【０００７】不飽和脂肪酸又はその誘導体を、これらを
含有する植物又は動物混合物から回収するＳＦＣカラム
クロマトグラフィー法はヨーロッパ特許（ＥＰ）第５５
８，９７４号により公知となった。この方法では超臨界
又は液体二酸化炭素が移動相として使用され、特に規定
されたコーティング相が固定相として使用される。この
固定相は、通常シリカゲル又は酸化アルミニウムよりな
る基本構造を特徴とし、この基本構造が、それぞれ、例
えばアミノ基（例えばアミノプロピル中に）又はニトロ
基、あるいはフェニル基又はシアノ基（例えばシアノプ
ロピル中に）を含有する物質中に存在するような、遊離
電子対及び／又は多重結合を有するコーティング相と共
に提供されることが必要である。二酸化炭素を移動相と
するが、コーティングされていない基本構造（特に酸化
アルミニウム）を使用するＳＦＣカラムクロマトグラフ
ィーによって個々のＰＵＦＡの分離が有効に行えること
は、ヨーロッパ特許（ＥＰ）第５５８，９７４号では何
ら示唆されていない。
含有する植物又は動物混合物から回収するＳＦＣカラム
クロマトグラフィー法はヨーロッパ特許（ＥＰ）第５５
８，９７４号により公知となった。この方法では超臨界
又は液体二酸化炭素が移動相として使用され、特に規定
されたコーティング相が固定相として使用される。この
固定相は、通常シリカゲル又は酸化アルミニウムよりな
る基本構造を特徴とし、この基本構造が、それぞれ、例
えばアミノ基（例えばアミノプロピル中に）又はニトロ
基、あるいはフェニル基又はシアノ基（例えばシアノプ
ロピル中に）を含有する物質中に存在するような、遊離
電子対及び／又は多重結合を有するコーティング相と共
に提供されることが必要である。二酸化炭素を移動相と
するが、コーティングされていない基本構造（特に酸化
アルミニウム）を使用するＳＦＣカラムクロマトグラフ
ィーによって個々のＰＵＦＡの分離が有効に行えること
は、ヨーロッパ特許（ＥＰ）第５５８，９７４号では何
ら示唆されていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、脂肪
酸及び／又は脂肪酸エステルの混合物からカラムクロマ
トグラフィーにより、有用な不飽和脂肪酸をそのまま又
はその誘導体の形で、特に前もって調製したこれらの脂
肪酸の低級アルキルエステルとして、回収するための新
規な方法を提供することであり、即ち技術の現状の問題
点を大部分解決した方法を提供することである。
酸及び／又は脂肪酸エステルの混合物からカラムクロマ
トグラフィーにより、有用な不飽和脂肪酸をそのまま又
はその誘導体の形で、特に前もって調製したこれらの脂
肪酸の低級アルキルエステルとして、回収するための新
規な方法を提供することであり、即ち技術の現状の問題
点を大部分解決した方法を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明の方法は、脂肪酸
及び／又は脂肪酸誘導体の混合物から、固定相として酸
化アルミニウム、場合によりアルカリで前処理したもの
を使用することを特徴とし、超臨界又は液体二酸化炭素
を移動相としたカラムクロマトグラフィーにより分子中
に少なくとも１６個の炭素原子を有する不飽和脂肪酸又
はこのような脂肪酸の誘導体を、回収する方法である。
及び／又は脂肪酸誘導体の混合物から、固定相として酸
化アルミニウム、場合によりアルカリで前処理したもの
を使用することを特徴とし、超臨界又は液体二酸化炭素
を移動相としたカラムクロマトグラフィーにより分子中
に少なくとも１６個の炭素原子を有する不飽和脂肪酸又
はこのような脂肪酸の誘導体を、回収する方法である。
【００１０】
【発明の実施の形態】原則本発明の方法は、前もって減
圧下にしておくこともできる脂肪酸及び／又は脂肪酸誘
導体の混合物を、超臨界又は液体二酸化炭素の移動相と
一緒にして、全混合物を、場合により次に移動相を追加
して、前述の固定相を充填したクロマトグラフィーカラ
ムに適用し、次いで溶出し、この溶出は、固定相と混合
物の個々の成分との間の強力な相互作用を考慮して、温
度と圧力条件を選択して行われるのであり、これらの成
分の一時的な分離が達成され、検出手段により測定され
る受器中での連続的検出（測定）後にカラムから逐次溶
出される二酸化炭素に溶解されている成分（溶出液）を
集めて、集めた物質から減圧（揮発化）により二酸化炭
素を除去し、最終的に得られた分離された成分、即ち
「画分」（とりわけ目的の不飽和の脂肪酸又は脂肪酸誘
導体）は、個々の受器中においては、二酸化炭素を含ま
ない。必要であれば、カラムからの溶出脱離の後、溶出
液は、成分を更に十分に分離するために１つ以上の更な
るこのようなクロマトグラフィー法を行うことができ
る。これは、必要な純度に達していない任意の画分につ
いても適用される。
圧下にしておくこともできる脂肪酸及び／又は脂肪酸誘
導体の混合物を、超臨界又は液体二酸化炭素の移動相と
一緒にして、全混合物を、場合により次に移動相を追加
して、前述の固定相を充填したクロマトグラフィーカラ
ムに適用し、次いで溶出し、この溶出は、固定相と混合
物の個々の成分との間の強力な相互作用を考慮して、温
度と圧力条件を選択して行われるのであり、これらの成
分の一時的な分離が達成され、検出手段により測定され
る受器中での連続的検出（測定）後にカラムから逐次溶
出される二酸化炭素に溶解されている成分（溶出液）を
集めて、集めた物質から減圧（揮発化）により二酸化炭
素を除去し、最終的に得られた分離された成分、即ち
「画分」（とりわけ目的の不飽和の脂肪酸又は脂肪酸誘
導体）は、個々の受器中においては、二酸化炭素を含ま
ない。必要であれば、カラムからの溶出脱離の後、溶出
液は、成分を更に十分に分離するために１つ以上の更な
るこのようなクロマトグラフィー法を行うことができ
る。これは、必要な純度に達していない任意の画分につ
いても適用される。
【００１１】本発明の方法を実施すると、少なくとも１
６個の炭素原子を有する不飽和脂肪酸の混合物中に元々
存在する誘導体、例えば、低級アルキルエステル又は天
然トリグリセリドが用いた混合物から得られるが、脂肪
酸自体を目的とするならば、これは従来法、例えば、低
級アルキルエステル又はトリグリセリドを鹸化すること
により、その誘導体から得ることができる。また、この
ような化学処理後に得られた不飽和脂肪酸の濃縮が十分
でない場合には、各々の生成物について、得られる溶出
物で必要な純度が達成されるまで本発明の方法を行うこ
とができる。
６個の炭素原子を有する不飽和脂肪酸の混合物中に元々
存在する誘導体、例えば、低級アルキルエステル又は天
然トリグリセリドが用いた混合物から得られるが、脂肪
酸自体を目的とするならば、これは従来法、例えば、低
級アルキルエステル又はトリグリセリドを鹸化すること
により、その誘導体から得ることができる。また、この
ような化学処理後に得られた不飽和脂肪酸の濃縮が十分
でない場合には、各々の生成物について、得られる溶出
物で必要な純度が達成されるまで本発明の方法を行うこ
とができる。
【００１２】少なくとも１６個の炭素原子を分子中に有
する少なくとも１つの不飽和脂肪酸又はその誘導体を含
有する任意の混合物が、本発明の方法で使用される脂肪
酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合物として適切である。
即ち、とりわけトリグリセリド、アミド、リン脂質、ラ
クトン及び塩の形の目的の脂肪酸、更には他の脂肪酸や
これらのトリグリセリドのような誘導体、ステロール、
例えばコレステロール、ビタミン、例えばトコフェロー
ル、及び不純物と通常考えられている物質、例えばポリ
クロロビフェニル（ＰＣＢ）、ポリ芳香族炭化水素（Ｐ
ＡＨ）、除草剤、ダイオキシン、重金属、飽和脂肪酸又
はその誘導体の酸化生成物及び分解産物、前段階で使用
した濃縮又は精製工程などからの残留溶媒又は試薬を含
む植物又は動物（海洋動物を含む）由来の油脂を使用す
ることができる。あるいは、前もって精製及び／又は化
学処理、特にエステル化又は再エステル化した粗物質
（油脂）を使用することができる。好適には、トリグリ
セリドが存在するとき、対応する油脂、場合により前も
って精製されたもの、を酸又はアルカリ加水分解して、
ここに含まれるトリグリセリドを対応する酸に変換する
か、あるいは低級アルキルアルコール、特にＣ1-6 −ア
ルキルアルコール、特にエタノールでエステル化して、
不飽和及び飽和脂肪酸のトリグリセリドをエステル交換
して対応する低級アルキルエステルにする。この加水分
解又はエステル化は従来法で行うことができる。好適な
原料、場合により前もって精製及び／又は化学処理され
たものは、魚油、例えばサーディン油及びマグロ油、こ
れらは最も需要のあるエイコサペンタエン酸及びドコサ
ヘキサエン酸の有用な供給源であるため、更には動物脂
肪及び植物油、例えばトウモロコシ油、こちらも多くの
需要のあるアラキドン酸及びリノール酸の有用な供給源
であるため、であり、魚油が特に好適な原料である。
する少なくとも１つの不飽和脂肪酸又はその誘導体を含
有する任意の混合物が、本発明の方法で使用される脂肪
酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合物として適切である。
即ち、とりわけトリグリセリド、アミド、リン脂質、ラ
クトン及び塩の形の目的の脂肪酸、更には他の脂肪酸や
これらのトリグリセリドのような誘導体、ステロール、
例えばコレステロール、ビタミン、例えばトコフェロー
ル、及び不純物と通常考えられている物質、例えばポリ
クロロビフェニル（ＰＣＢ）、ポリ芳香族炭化水素（Ｐ
ＡＨ）、除草剤、ダイオキシン、重金属、飽和脂肪酸又
はその誘導体の酸化生成物及び分解産物、前段階で使用
した濃縮又は精製工程などからの残留溶媒又は試薬を含
む植物又は動物（海洋動物を含む）由来の油脂を使用す
ることができる。あるいは、前もって精製及び／又は化
学処理、特にエステル化又は再エステル化した粗物質
（油脂）を使用することができる。好適には、トリグリ
セリドが存在するとき、対応する油脂、場合により前も
って精製されたもの、を酸又はアルカリ加水分解して、
ここに含まれるトリグリセリドを対応する酸に変換する
か、あるいは低級アルキルアルコール、特にＣ1-6 −ア
ルキルアルコール、特にエタノールでエステル化して、
不飽和及び飽和脂肪酸のトリグリセリドをエステル交換
して対応する低級アルキルエステルにする。この加水分
解又はエステル化は従来法で行うことができる。好適な
原料、場合により前もって精製及び／又は化学処理され
たものは、魚油、例えばサーディン油及びマグロ油、こ
れらは最も需要のあるエイコサペンタエン酸及びドコサ
ヘキサエン酸の有用な供給源であるため、更には動物脂
肪及び植物油、例えばトウモロコシ油、こちらも多くの
需要のあるアラキドン酸及びリノール酸の有用な供給源
であるため、であり、魚油が特に好適な原料である。
【００１３】脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合物は
通常希釈せずに超臨界又は液体二酸化炭素と一緒に、本
発明で使用される固定相を充填したクロマトグラフィー
カラムに適用されるが、前もって適切な溶媒、例えば低
級アルカン、好適にはｎ−ヘキサンに溶解してもよい。
しかし好適にはこの混合物は希釈しないで使用される。
通常希釈せずに超臨界又は液体二酸化炭素と一緒に、本
発明で使用される固定相を充填したクロマトグラフィー
カラムに適用されるが、前もって適切な溶媒、例えば低
級アルカン、好適にはｎ−ヘキサンに溶解してもよい。
しかし好適にはこの混合物は希釈しないで使用される。
【００１４】本発明の方法に使用される超臨界二酸化炭
素は、公知のように少なくとも約３１℃の温度で少なく
とも約７３バールの圧力で維持される二酸化炭素の形態
であり、純粋に液体でも純粋に気体でもないが、この２
つの物理的形態のハイブリッドである。本発明の方法で
それに代えて使用できる液体二酸化炭素は、約３１℃未
満の温度と約７３バールを超える圧力を有する。二酸化
炭素を使用する利点は、その非毒性、非引火性であるこ
とと、分離した不飽和脂肪酸又はその誘導体に有害な可
能性のある残留物を残さないで、集めた溶出液を減圧に
することにより容易に除去できることにある。更に二酸
化炭素は、高純度かつ安価に広く入手可能であり、そし
て必要であれば、移動相の一部として有機共溶媒（「モ
ディファイアー」）、例えば、上述のｎ−ヘキサン、更
には低級アルカノール、例えばメタノール又はエタノー
ル、及び低級脂肪族ケトン、例えばアセトンと共に使用
することができる。二酸化炭素の臨界温度は室温よりそ
れほど高くないという、また本発明により回収すべき不
飽和脂肪酸又は脂肪酸誘導体は温度感受性（熱不安定
性）であるという、これらの理由により、二酸化炭素
は、本発明の方法で用いる移動相として非常に適切であ
る。
素は、公知のように少なくとも約３１℃の温度で少なく
とも約７３バールの圧力で維持される二酸化炭素の形態
であり、純粋に液体でも純粋に気体でもないが、この２
つの物理的形態のハイブリッドである。本発明の方法で
それに代えて使用できる液体二酸化炭素は、約３１℃未
満の温度と約７３バールを超える圧力を有する。二酸化
炭素を使用する利点は、その非毒性、非引火性であるこ
とと、分離した不飽和脂肪酸又はその誘導体に有害な可
能性のある残留物を残さないで、集めた溶出液を減圧に
することにより容易に除去できることにある。更に二酸
化炭素は、高純度かつ安価に広く入手可能であり、そし
て必要であれば、移動相の一部として有機共溶媒（「モ
ディファイアー」）、例えば、上述のｎ−ヘキサン、更
には低級アルカノール、例えばメタノール又はエタノー
ル、及び低級脂肪族ケトン、例えばアセトンと共に使用
することができる。二酸化炭素の臨界温度は室温よりそ
れほど高くないという、また本発明により回収すべき不
飽和脂肪酸又は脂肪酸誘導体は温度感受性（熱不安定
性）であるという、これらの理由により、二酸化炭素
は、本発明の方法で用いる移動相として非常に適切であ
る。
【００１５】本発明の方法で固定相として使用される酸
化アルミニウム、そして、これは本発明の特徴である
が、有利には非対称形又は好適にはビーズ様（球形）の
粒子として存在し、これは可能な限り均一に充填され、
粒径は約５〜２５μm である。このようなビーズ様酸化
アルミニウムは市販品として容易に購入することができ
る。市販されている酸化アルミニウムの例としては、ア
ルスファー（Aluspher）（登録商標）Ａｌとスフェリソ
ルブ（Spherisorb）アルミナを挙げることができ；前者
は、比表面積ＳBET １７０m2/g、細孔容積Ｖp ０．５ml
/g、孔径Ｄ １００Å、及び粒径ｄｐ50５μm を有し、
一方後者は、ＳBET ９３m2/g、Ｄ １３０Å、及びｄｐ
50は同様に５μm を有する。種々の製造業者、例えばＩ
ＣＮバイオメディカル社（ICN Biomedicals Inc.）から
破砕物質は入手可能である。これらの酸化アルミニウム
は、粒度分布３〜６μm 、７〜１２μm 、１０〜１８μ
m 又は１８〜３２μm を特徴とする。これらの物質の比
表面積ＳBET は２００m2/gであり；細孔容積と孔径は球
形物質と同等である。
化アルミニウム、そして、これは本発明の特徴である
が、有利には非対称形又は好適にはビーズ様（球形）の
粒子として存在し、これは可能な限り均一に充填され、
粒径は約５〜２５μm である。このようなビーズ様酸化
アルミニウムは市販品として容易に購入することができ
る。市販されている酸化アルミニウムの例としては、ア
ルスファー（Aluspher）（登録商標）Ａｌとスフェリソ
ルブ（Spherisorb）アルミナを挙げることができ；前者
は、比表面積ＳBET １７０m2/g、細孔容積Ｖp ０．５ml
/g、孔径Ｄ １００Å、及び粒径ｄｐ50５μm を有し、
一方後者は、ＳBET ９３m2/g、Ｄ １３０Å、及びｄｐ
50は同様に５μm を有する。種々の製造業者、例えばＩ
ＣＮバイオメディカル社（ICN Biomedicals Inc.）から
破砕物質は入手可能である。これらの酸化アルミニウム
は、粒度分布３〜６μm 、７〜１２μm 、１０〜１８μ
m 又は１８〜３２μm を特徴とする。これらの物質の比
表面積ＳBET は２００m2/gであり；細孔容積と孔径は球
形物質と同等である。
【００１６】固定相として（未処理の）酸化アルミニウ
ムを直接使用する代わりに、酸化アルミニウムを使用前
にアルカリ前処理することもできる。この前処理は原則
的に、約１０〜約１３のｐＨ範囲で数時間以上、有利に
は約８〜約２０時間以上、粒状酸化アルミニウムを、ア
ルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物、例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は水酸化カ
ルシウムの水溶液と接触させるものである。アルカリ金
属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物水溶液の濃度
は、有利には約０．０１M 〜約０．１M の範囲である。
必要であれば、使用上実用向きの値にその水溶液の粘性
を調整するために、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ
土類金属水酸化物水溶液に、水混和性又は水溶性有機溶
媒を補充することができる。これは、例えば、極性有機
溶媒であるアセトニトリル又はアセトンを用いて行え
る。約１３のｐＨ値を有する、アセトニトリルと０．１
M 水酸化ナトリウム水溶液の１０：９０（v/v)混合物が
特に適切であることが判った。
ムを直接使用する代わりに、酸化アルミニウムを使用前
にアルカリ前処理することもできる。この前処理は原則
的に、約１０〜約１３のｐＨ範囲で数時間以上、有利に
は約８〜約２０時間以上、粒状酸化アルミニウムを、ア
ルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物、例
えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は水酸化カ
ルシウムの水溶液と接触させるものである。アルカリ金
属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物水溶液の濃度
は、有利には約０．０１M 〜約０．１M の範囲である。
必要であれば、使用上実用向きの値にその水溶液の粘性
を調整するために、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ
土類金属水酸化物水溶液に、水混和性又は水溶性有機溶
媒を補充することができる。これは、例えば、極性有機
溶媒であるアセトニトリル又はアセトンを用いて行え
る。約１３のｐＨ値を有する、アセトニトリルと０．１
M 水酸化ナトリウム水溶液の１０：９０（v/v)混合物が
特に適切であることが判った。
【００１７】実用上の理由で酸化アルミニウムのアルカ
リ前処理は、有利には既にクロマトグラフィーカラムに
充填した酸化アルミニウムに、数時間以上、好適には約
１２〜１６時間でアルカリ性溶液を連続的に流して、次
にこうして前処理した酸化アルミニウムを、カラムから
出てくる洗液が中性になるまで蒸留水で洗うことにより
行われる。前処理した酸化アルミニウムから残留水を除
去するために、カラムを５０℃と９０℃の間で約４〜１
０時間加熱して、続いて低級アルカン、好適にはｎ−ヘ
プタンで数時間、好適には８〜２０時間前処理した酸化
アルミニウムを洗うことが適切である。次いで、こうし
て前処理した酸化アルミニウムを本発明の方法の固定相
として使用することができる。アルカリで前処理した酸
化アルミニウムの使用は、本発明の方法の好適な一面で
ある。
リ前処理は、有利には既にクロマトグラフィーカラムに
充填した酸化アルミニウムに、数時間以上、好適には約
１２〜１６時間でアルカリ性溶液を連続的に流して、次
にこうして前処理した酸化アルミニウムを、カラムから
出てくる洗液が中性になるまで蒸留水で洗うことにより
行われる。前処理した酸化アルミニウムから残留水を除
去するために、カラムを５０℃と９０℃の間で約４〜１
０時間加熱して、続いて低級アルカン、好適にはｎ−ヘ
プタンで数時間、好適には８〜２０時間前処理した酸化
アルミニウムを洗うことが適切である。次いで、こうし
て前処理した酸化アルミニウムを本発明の方法の固定相
として使用することができる。アルカリで前処理した酸
化アルミニウムの使用は、本発明の方法の好適な一面で
ある。
【００１８】本発明の方法における移動相として使用さ
れる二酸化炭素を超臨界又は液体範囲に維持するため
に、固定相を充填したクロマトグラフィーカラム中に二
酸化炭素を導入する間だけでなく続いての溶出の間も、
ある温度と圧力条件を維持する必要がある。本方法は有
利には約３０℃〜約１００℃の温度範囲で約１４０バー
ル〜約３２０バールの圧力で行われるが、未処理の酸化
アルミニウムの代わりにアルカリで前処理した酸化アル
ミニウムが使用される時には、他は同等の条件である
が、適切な圧力はもっと低い。好適には、温度範囲は約
４５℃〜約７５℃であり、対応する圧力範囲は約２２０
バール〜約２６０バールである。二酸化炭素の濃度は圧
力と温度を介して調整することができ、前記温度と圧力
範囲では最適な二酸化炭素濃度は、約７２０kg/m3 〜約
８５０kg/m3 である。
れる二酸化炭素を超臨界又は液体範囲に維持するため
に、固定相を充填したクロマトグラフィーカラム中に二
酸化炭素を導入する間だけでなく続いての溶出の間も、
ある温度と圧力条件を維持する必要がある。本方法は有
利には約３０℃〜約１００℃の温度範囲で約１４０バー
ル〜約３２０バールの圧力で行われるが、未処理の酸化
アルミニウムの代わりにアルカリで前処理した酸化アル
ミニウムが使用される時には、他は同等の条件である
が、適切な圧力はもっと低い。好適には、温度範囲は約
４５℃〜約７５℃であり、対応する圧力範囲は約２２０
バール〜約２６０バールである。二酸化炭素の濃度は圧
力と温度を介して調整することができ、前記温度と圧力
範囲では最適な二酸化炭素濃度は、約７２０kg/m3 〜約
８５０kg/m3 である。
【００１９】本発明の方法の実施において、固定相とし
て酸化アルミニウムを用いることにより、種々の不飽和
の脂肪酸又は脂肪酸誘導体、存在する場合には飽和の脂
肪酸又は脂肪酸誘導体を、一方では鎖の長さ（Ｃ原子の
数）により、そしてもう一方では飽和度（二重結合の
数：この数が大きいほど、飽和度が低い）によりクロマ
トグラフィーでの分離ができる。二重結合の一定の数か
らは、飽和度による選択性が支配的であると考えられ
る。分離すべき脂肪酸又は脂肪酸誘導体が、例えばエル
カ酸（２２個のＣ原子、１個の二重結合：“２２：
１”）のようにただ１個の二重結合を有するならば、鎖
の長さによる選択性は明らかに従属的であり、この脂肪
酸又は誘導体は、より短いが不飽和度の高い不飽和脂肪
酸又は誘導体、例えば２０：５の脂肪酸であるエイコサ
ペンタエン酸、のレンジの前に溶出する。一方、２０：
５、２２：５及び２２：６の脂肪酸（各々エイコサペン
タエン酸、ドコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン
酸）の溶出において、同じ数の二重結合を有する短い鎖
の酸に対してより長い鎖の酸、そして、飽和度の高い酸
に対して飽和度の低い酸は各々の場合に固定相に長く残
留するため、最初に２０：５の脂肪酸が溶出し、次いで
２２：５の脂肪酸、そして最後に２２：６の脂肪酸が溶
出する。特に後者のレンジ（Ｃ原子の数２０〜２２及び
／又は二重結合の数５〜６）に、栄養学及び医学の分野
で非常に重要な不飽和脂肪酸があり、ここでは過剰なテ
ーリングなしに明確なクロマトグラフィー分離が達成さ
れる必要がある。
て酸化アルミニウムを用いることにより、種々の不飽和
の脂肪酸又は脂肪酸誘導体、存在する場合には飽和の脂
肪酸又は脂肪酸誘導体を、一方では鎖の長さ（Ｃ原子の
数）により、そしてもう一方では飽和度（二重結合の
数：この数が大きいほど、飽和度が低い）によりクロマ
トグラフィーでの分離ができる。二重結合の一定の数か
らは、飽和度による選択性が支配的であると考えられ
る。分離すべき脂肪酸又は脂肪酸誘導体が、例えばエル
カ酸（２２個のＣ原子、１個の二重結合：“２２：
１”）のようにただ１個の二重結合を有するならば、鎖
の長さによる選択性は明らかに従属的であり、この脂肪
酸又は誘導体は、より短いが不飽和度の高い不飽和脂肪
酸又は誘導体、例えば２０：５の脂肪酸であるエイコサ
ペンタエン酸、のレンジの前に溶出する。一方、２０：
５、２２：５及び２２：６の脂肪酸（各々エイコサペン
タエン酸、ドコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン
酸）の溶出において、同じ数の二重結合を有する短い鎖
の酸に対してより長い鎖の酸、そして、飽和度の高い酸
に対して飽和度の低い酸は各々の場合に固定相に長く残
留するため、最初に２０：５の脂肪酸が溶出し、次いで
２２：５の脂肪酸、そして最後に２２：６の脂肪酸が溶
出する。特に後者のレンジ（Ｃ原子の数２０〜２２及び
／又は二重結合の数５〜６）に、栄養学及び医学の分野
で非常に重要な不飽和脂肪酸があり、ここでは過剰なテ
ーリングなしに明確なクロマトグラフィー分離が達成さ
れる必要がある。
【００２０】本発明の方法を実施する時の温度と圧力条
件だけでなく、固定相として未処理酸化アルミニウムを
使用するかアルカリで前処理した酸化アルミニウムを使
用するかいずれを選択するかによって分離の結果が影響
される。一般に、温度を上げるか圧力をさげると異なっ
た脂肪酸の溶出液は、経時的に分れて溶出し、圧力を上
げるか温度を下げると一緒に溶出されるため、これらの
パラメーターを任意に変化させて本発明の方法の経時変
化を決定することができる。酸化アルミニウムのアルカ
リ前処理により、その表面上の活性中心（ルイス酸及び
塩基が支配的）をブロックすることができるため、この
酸化アルミニウムはその極性が弱められる。溶出の順序
はこの処理により改変されないが、極性多重不飽和脂肪
酸のテーリングは減少して溶出時間は大幅に短くなる。
例えば、未処理酸化アルミニウムで６５℃で２８０バー
ルで本発明の方法が実施される時、最後に溶出される２
２：６の脂肪酸が、かなりのテーリングを伴って約３０
分後には溶出されるとすると、アルカリ処理した酸化ア
ルミニウムで同じ温度と圧力下で行うと、テーリングは
非常に減少して、溶出がほぼ１／３時間後に達成され
る。このため、アルカリで前処理した酸化アルミニウム
を使用することは本発明の方法において未処理の中性酸
化アルミニウムを使用することよりも好適である。
件だけでなく、固定相として未処理酸化アルミニウムを
使用するかアルカリで前処理した酸化アルミニウムを使
用するかいずれを選択するかによって分離の結果が影響
される。一般に、温度を上げるか圧力をさげると異なっ
た脂肪酸の溶出液は、経時的に分れて溶出し、圧力を上
げるか温度を下げると一緒に溶出されるため、これらの
パラメーターを任意に変化させて本発明の方法の経時変
化を決定することができる。酸化アルミニウムのアルカ
リ前処理により、その表面上の活性中心（ルイス酸及び
塩基が支配的）をブロックすることができるため、この
酸化アルミニウムはその極性が弱められる。溶出の順序
はこの処理により改変されないが、極性多重不飽和脂肪
酸のテーリングは減少して溶出時間は大幅に短くなる。
例えば、未処理酸化アルミニウムで６５℃で２８０バー
ルで本発明の方法が実施される時、最後に溶出される２
２：６の脂肪酸が、かなりのテーリングを伴って約３０
分後には溶出されるとすると、アルカリ処理した酸化ア
ルミニウムで同じ温度と圧力下で行うと、テーリングは
非常に減少して、溶出がほぼ１／３時間後に達成され
る。このため、アルカリで前処理した酸化アルミニウム
を使用することは本発明の方法において未処理の中性酸
化アルミニウムを使用することよりも好適である。
【００２１】クロマトグラフィーカラムから連続して溶
出する二酸化炭素に溶解された成分（溶出液）の検出
は、好適にはＵＶ検出器と、次にフレームイオン化検出
器（ＦＩＤ）で連続して行われる。ＵＶ検出器は二重結
合の数による成分の評価ができるため、個々の成分につ
いて構造の評価を限定的に行うことができる。ＦＩＤを
使用することにより、受器中の異なる溶出液の区分が電
子的に行われる。このような技術は、各コレクションか
ら二酸化炭素を除去（減圧により）する方法同様、それ
自体公知である。
出する二酸化炭素に溶解された成分（溶出液）の検出
は、好適にはＵＶ検出器と、次にフレームイオン化検出
器（ＦＩＤ）で連続して行われる。ＵＶ検出器は二重結
合の数による成分の評価ができるため、個々の成分につ
いて構造の評価を限定的に行うことができる。ＦＩＤを
使用することにより、受器中の異なる溶出液の区分が電
子的に行われる。このような技術は、各コレクションか
ら二酸化炭素を除去（減圧により）する方法同様、それ
自体公知である。
【００２２】本発明の方法は、２０：５の脂肪酸である
エイコサペンタエン酸、及び２２：６の脂肪酸であるド
コサヘキサエン酸の回収、それぞれ直接に又はその誘導
体として、好適にはエチルエステル、としての回収に特
に適している。
エイコサペンタエン酸、及び２２：６の脂肪酸であるド
コサヘキサエン酸の回収、それぞれ直接に又はその誘導
体として、好適にはエチルエステル、としての回収に特
に適している。
【００２３】
【実施例】本発明は以下の実施例に基づき説明される。
【００２４】実施例１ 本方法の実施 エタノールでエステル化した魚油からの成分、特に不飽
和脂肪酸エチルエステルのクロマトグラフィーによる回
収を研究するために、カルロエルバ・インスツルメンツ
（Carlo Erba Instruments）による装置（図１参照）を
使用した。この装置に二酸化炭素（ＣＯ2)シリンダーを
介して連続的に移動相を供給した。移動相は、超臨界範
囲（約３１℃以上、約７３バール以上のＣＯ2)又は臨界
以下の範囲で圧力と温度条件を選択して操作することが
できる。
和脂肪酸エチルエステルのクロマトグラフィーによる回
収を研究するために、カルロエルバ・インスツルメンツ
（Carlo Erba Instruments）による装置（図１参照）を
使用した。この装置に二酸化炭素（ＣＯ2)シリンダーを
介して連続的に移動相を供給した。移動相は、超臨界範
囲（約３１℃以上、約７３バール以上のＣＯ2)又は臨界
以下の範囲で圧力と温度条件を選択して操作することが
できる。
【００２５】ＣＯ2 はシリンダーからポンプチャンバー
中に引き入れて、そこでサーモスタットを使用して最初
に−６℃に凝縮した。フラスコをステップモーターを介
して操作して、移動相を目的の圧力に圧縮した。スプレ
ーポンプの圧力とカラムオーブンの温度はコンピュータ
により調整することができた。移動相は目的の圧力で装
置内を流れて、最初に注入系を通過する。ここで流動し
て通過する移動相に、双方向バルブを介して試料を添加
した。この添加時間は場合により０から９９９msecの間
で変化させてもよい。添加する試料の容量は常に０．５
μl であった。次に試料は移動相と共にカラムへと進ん
だ。ここで、固定相と試料溶液の個々の成分との間の相
互作用の強度が異なることに基づいて、混合物の分離が
起こった。混合物の個々の成分は（理想的な場合）連続
してカラムから溶出した。カラムはオーブン内に置いて
あるため、温度によって溶出挙動を変化させることも可
能であった。カラムで分離した物質（とりわけ不飽和脂
肪酸エチルエステル）の検出（測定）は、ＵＶ検出器
と、次にフレームイオン化検出器（ＦＩＤ）で連続して
行った。
中に引き入れて、そこでサーモスタットを使用して最初
に−６℃に凝縮した。フラスコをステップモーターを介
して操作して、移動相を目的の圧力に圧縮した。スプレ
ーポンプの圧力とカラムオーブンの温度はコンピュータ
により調整することができた。移動相は目的の圧力で装
置内を流れて、最初に注入系を通過する。ここで流動し
て通過する移動相に、双方向バルブを介して試料を添加
した。この添加時間は場合により０から９９９msecの間
で変化させてもよい。添加する試料の容量は常に０．５
μl であった。次に試料は移動相と共にカラムへと進ん
だ。ここで、固定相と試料溶液の個々の成分との間の相
互作用の強度が異なることに基づいて、混合物の分離が
起こった。混合物の個々の成分は（理想的な場合）連続
してカラムから溶出した。カラムはオーブン内に置いて
あるため、温度によって溶出挙動を変化させることも可
能であった。カラムで分離した物質（とりわけ不飽和脂
肪酸エチルエステル）の検出（測定）は、ＵＶ検出器
と、次にフレームイオン化検出器（ＦＩＤ）で連続して
行った。
【００２６】実施例２ 酸化アルミニウム固定相のアルカリ前処理 酸化アルミニウムを充填したクロマトグラフィーカラム
を、数時間（１２〜２４時間）アセトニトリル中の０．
１M 水酸化ナトリウム水溶液の混合物（９０：１０％v/
v)で濯ぎ処理した。結果としてこの溶液のｐＨ値は１３
になった。カラムを蒸留水で洗浄して中性にし、約４〜
１０時間５０℃と９０℃の間に加熱して、続いてｎ−ヘ
プタンで１２〜１８時間コンディショニングさせた。
を、数時間（１２〜２４時間）アセトニトリル中の０．
１M 水酸化ナトリウム水溶液の混合物（９０：１０％v/
v)で濯ぎ処理した。結果としてこの溶液のｐＨ値は１３
になった。カラムを蒸留水で洗浄して中性にし、約４〜
１０時間５０℃と９０℃の間に加熱して、続いてｎ−ヘ
プタンで１２〜１８時間コンディショニングさせた。
【００２７】実施例３ 本方法の実施（別の実施態様） 内径を大きくしたカラム操作のため、結果として流量を
増加させるために、ニューウェイズオブアナリティクス
（New Ways of Analytics)装置（図４参照）を使用し
た。この装置にＣＯ2 導管を介して連続的に移動相を供
給した。この移動相は、超臨界範囲（約３１℃以上、約
７３バール以上のＣＯ2)又は臨界以下の範囲で、圧力と
温度条件を選択したものに従って操作することができ
た。この目的のため、ＣＯ2 容器から圧力モジュールＰ
Ｍ−１０１のサーモスタット中に流入するＣＯ2 を、サ
ーモスタットを使用して−６℃に凝縮した。空気フラス
コポンプで移動相を３００バール〜４００バールの圧力
に圧縮した。圧縮した移動相を、ここに連結した圧力低
下モジュールＰＲ−１０２で目的の圧力に低下させて、
圧力モジュールＰＭ−１０１の操作により起こる更なる
圧力変動を抑制した。移動相は、圧力低下モジュールＰ
Ｒ−１０２で選択した圧力で装置内を流れて、最初に注
入バルブを通過する。ここで６方向バルブ（レオダイン
（Rheodyne）７１２５）を介して、流動する移動相に試
料を注入した。注入する試料の容量は、５μl から数ミ
リリットルまでの適切な試料サイズを種々選択すること
ができる。次に試料は移動相と共にカラムへと進んだ。
ここで、固定相と試料溶液の個々の成分との間の相互作
用の強度が異なることに基づいて、混合物の分離が起こ
った。理想的な場合、混合物の個々の成分は連続してカ
ラムから溶出した。カラムは加熱キャビネット内に置い
てあるため、温度によって溶出挙動に影響を及ぼすこと
も可能であった。カラムで分離した物質は、ＵＶ検出器
を介して記録して、そこからクロマトグラフィーソフト
ウェアに伝達した。このソフトウェアによって、分離さ
れた成分の流出を可能にするバルブのスイッチ切り替え
ができた。続いて圧力放出ユニットＰＥ−１０３を介し
て超臨界相の圧力放出を行った。
増加させるために、ニューウェイズオブアナリティクス
（New Ways of Analytics)装置（図４参照）を使用し
た。この装置にＣＯ2 導管を介して連続的に移動相を供
給した。この移動相は、超臨界範囲（約３１℃以上、約
７３バール以上のＣＯ2)又は臨界以下の範囲で、圧力と
温度条件を選択したものに従って操作することができ
た。この目的のため、ＣＯ2 容器から圧力モジュールＰ
Ｍ−１０１のサーモスタット中に流入するＣＯ2 を、サ
ーモスタットを使用して−６℃に凝縮した。空気フラス
コポンプで移動相を３００バール〜４００バールの圧力
に圧縮した。圧縮した移動相を、ここに連結した圧力低
下モジュールＰＲ−１０２で目的の圧力に低下させて、
圧力モジュールＰＭ−１０１の操作により起こる更なる
圧力変動を抑制した。移動相は、圧力低下モジュールＰ
Ｒ−１０２で選択した圧力で装置内を流れて、最初に注
入バルブを通過する。ここで６方向バルブ（レオダイン
（Rheodyne）７１２５）を介して、流動する移動相に試
料を注入した。注入する試料の容量は、５μl から数ミ
リリットルまでの適切な試料サイズを種々選択すること
ができる。次に試料は移動相と共にカラムへと進んだ。
ここで、固定相と試料溶液の個々の成分との間の相互作
用の強度が異なることに基づいて、混合物の分離が起こ
った。理想的な場合、混合物の個々の成分は連続してカ
ラムから溶出した。カラムは加熱キャビネット内に置い
てあるため、温度によって溶出挙動に影響を及ぼすこと
も可能であった。カラムで分離した物質は、ＵＶ検出器
を介して記録して、そこからクロマトグラフィーソフト
ウェアに伝達した。このソフトウェアによって、分離さ
れた成分の流出を可能にするバルブのスイッチ切り替え
ができた。続いて圧力放出ユニットＰＥ−１０３を介し
て超臨界相の圧力放出を行った。
【００２８】本発明の実施態様として以下のものが挙げ
られる。
られる。
【００２９】１．酸化アルミニウム又はアルカリで前処
理した酸化アルミニウムが、ビーズ様粒子として可能な
限り均一に充填されており、その粒径が約５〜２５μm
である、請求項１に記載の方法。 ２．アルカリで前処理した酸化アルミニウムが、固定相
として使用され、この前処理は、粒子状酸化アルミニウ
ムをｐＨ範囲約１０〜約１３のアルカリ金属水酸化物又
はアルカリ土類金属水酸化物の水溶液と約８〜約２０時
間接触させることにより行われる、請求項１又は上記１
に記載の方法。 ３．水溶液の粘性を、使用上実用的な値に調整するため
に、その溶液が、水混和性又は水溶性有機溶媒、特にア
セトニトリル又はアセトン、で補充される、上記２に記
載の方法。 ４．アセトニトリルと０．１M 水酸化ナトリウム水溶液
の１０：９０（v/v)混合物が、酸化アルミニウムの前処
理のために使用される、上記３に記載の方法。
理した酸化アルミニウムが、ビーズ様粒子として可能な
限り均一に充填されており、その粒径が約５〜２５μm
である、請求項１に記載の方法。 ２．アルカリで前処理した酸化アルミニウムが、固定相
として使用され、この前処理は、粒子状酸化アルミニウ
ムをｐＨ範囲約１０〜約１３のアルカリ金属水酸化物又
はアルカリ土類金属水酸化物の水溶液と約８〜約２０時
間接触させることにより行われる、請求項１又は上記１
に記載の方法。 ３．水溶液の粘性を、使用上実用的な値に調整するため
に、その溶液が、水混和性又は水溶性有機溶媒、特にア
セトニトリル又はアセトン、で補充される、上記２に記
載の方法。 ４．アセトニトリルと０．１M 水酸化ナトリウム水溶液
の１０：９０（v/v)混合物が、酸化アルミニウムの前処
理のために使用される、上記３に記載の方法。
【００３０】５．場合により前もって精製した、及び／
又は化学処理した魚油が、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導
体の混合物として使用される、請求項１又は、上記１〜
４に記載の方法。 ６．前もってエステル化した魚油、特にエタノールでエ
ステル化した魚油が、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の
混合物として使用される、上記５に記載の方法。 ７．カラムクロマトグラフィ工程が、約３０℃〜約１０
０℃の温度範囲、好ましくは約４５℃〜約７５℃で、か
つ約１４０バール〜約３２０バールの圧力、好ましくは
約２２０バール〜約２６０バールで行われる、請求項１
又は、上記１〜６に記載の方法。 ８．エイコサペンタエン酸又はドコサヘキサエン酸を、
そのまま又はそのエチルエステルとして回収するのに使
用される、請求項１又は、上記１〜７に記載の方法。
又は化学処理した魚油が、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導
体の混合物として使用される、請求項１又は、上記１〜
４に記載の方法。 ６．前もってエステル化した魚油、特にエタノールでエ
ステル化した魚油が、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の
混合物として使用される、上記５に記載の方法。 ７．カラムクロマトグラフィ工程が、約３０℃〜約１０
０℃の温度範囲、好ましくは約４５℃〜約７５℃で、か
つ約１４０バール〜約３２０バールの圧力、好ましくは
約２２０バール〜約２６０バールで行われる、請求項１
又は、上記１〜６に記載の方法。 ８．エイコサペンタエン酸又はドコサヘキサエン酸を、
そのまま又はそのエチルエステルとして回収するのに使
用される、請求項１又は、上記１〜７に記載の方法。
【図１】成分のクロマトグラフィーからの回収を調べる
のに用いたカルロエルバ・インスツルメンツによる装
置。
のに用いたカルロエルバ・インスツルメンツによる装
置。
【図２】得られたクロマトグラム。
【図３】得られたクロマトグラム。
【図４】内径の大きなカラムの操作に用いたニューウェ
イズオブアナリティクス（ＮＷＡ）装置。
イズオブアナリティクス（ＮＷＡ）装置。
【図５】ＮＷＡ装置を用いて得られた、固定相として粉
砕酸化アルミニウムを用いた後のＵＶクロマトグラム。
砕酸化アルミニウムを用いた後のＵＶクロマトグラム。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｃ 57/12 2115−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 57/12 Ｃ１１Ｂ 3/10 Ｃ１１Ｂ 3/10 7/00 7/00 (72)発明者 フランク・ライヒマン ドイツ連邦共和国、デー−31303 ブルク ドルフ、シラースラーガー・シュトラーセ 34
Claims (1)
- 【請求項１】 酸化アルミニウム又はアルカリで前処理
した酸化アルミニウムを固定相として使用し、超臨界又
は液体二酸化炭素を移動相とするカラムクロマトグラフ
ィーにより、脂肪酸及び／又は脂肪酸誘導体の混合物か
ら、分子中に少なくとも１６個の炭素原子を有する不飽
和脂肪酸又はこの脂肪酸の誘導体を回収する方法。
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|---|---|---|---|
| CH235595 | 1995-08-17 | ||
| CH02355/95-1 | 1995-08-17 |
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|---|---|
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| WO2000058734A1 (en) * | 1999-03-26 | 2000-10-05 | Martek Biosciences Corporation | Specific binding assay for docosahexaenoic acid |
| DE19923558A1 (de) * | 1999-05-21 | 2000-11-23 | K D Pharma Bexbach Gmbh | Verfahren zur Herstellung von geruchs- und geschmacksfreien ungesättigten Fettsäuren aus Naturölen und deren Verwendung |
| US6878540B2 (en) * | 1999-06-25 | 2005-04-12 | Cepheid | Device for lysing cells, spores, or microorganisms |
| ITMI20010129A1 (it) | 2001-01-25 | 2002-07-25 | Pharmacia & Upjohn Spa | Acidi grassi essenziali nella terapia di insufficienza cardiaca e scompenso cardiaco |
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| GB201111594D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New improved process |
| GB201111589D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New modified process |
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| GB201300354D0 (en) | 2013-01-09 | 2013-02-20 | Basf Pharma Callanish Ltd | Multi-step separation process |
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| US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| US10151733B2 (en) * | 2013-09-13 | 2018-12-11 | Waters Technologies Corporation | Catalytic oxidation of polar modifiers in chromatographic mobile phases |
| EP2883860B1 (fr) | 2013-12-11 | 2016-08-24 | Novasep Process | Procédé chromatographique de production d'acides gras polyinsaturés |
| JP6303017B2 (ja) | 2014-01-07 | 2018-03-28 | ノヴァセプ プロセスＮｏｖａｓｅｐ Ｐｒｏｃｅｓｓ | 芳香族アミノ酸を精製する方法 |
| EP3345987A4 (en) | 2015-08-31 | 2019-04-17 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | FREE MULTIPLE UNSATURATED FATTY ACID WITH A COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING THEREOF |
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|---|---|---|---|---|
| DE741359C (de) * | 1937-09-08 | 1943-11-10 | Dr Hans P Kaufmann | Verfahren zur Fraktionierung von Gemischen aus Fettsaeuren u. dgl. |
| JPH0653702B2 (ja) * | 1986-06-11 | 1994-07-20 | エーザイ株式会社 | ビタミンｋ▲下２▼異性体の分離精製法 |
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| DE3929555A1 (de) * | 1989-09-06 | 1991-03-07 | Sueddeutsche Kalkstickstoff | Verfahren zur entfernung von cholesterin bzw. cholesterinestern aus lebensmitteln |
| DE4206539A1 (de) * | 1992-03-02 | 1993-09-09 | K D Pharma Gmbh | Verfahren zum gewinnen ungesaettigter fettsaeuren |
| WO1994025552A1 (en) * | 1993-04-29 | 1994-11-10 | Norsk Hydro A.S | Processes for chromatographic fractionation of fatty acids and their derivatives |
-
1996
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- 1996-08-05 DK DK96112637T patent/DK0760393T3/da active
- 1996-08-05 AT AT96112637T patent/ATE242303T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-08-05 EP EP96112637A patent/EP0760393B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-05 ES ES96112637T patent/ES2200023T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-13 JP JP21351696A patent/JP3739494B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-16 CN CNB961118350A patent/CN1137745C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-16 US US08/699,883 patent/US5777141A/en not_active Expired - Lifetime
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| JP2012530783A (ja) * | 2009-06-22 | 2012-12-06 | ジョンソン、マッセイ、パブリック、リミテッド、カンパニー | プロスタグランジンの精製方法 |
| US8957240B2 (en) | 2009-06-22 | 2015-02-17 | Johnson Matthey Public Limited Company | Method for the purification of prostaglandins |
| US9353055B2 (en) | 2009-06-22 | 2016-05-31 | Johnson Matthey Public Limited Company | Method for the purification of prostaglandins |
| JP2017061523A (ja) * | 2009-06-22 | 2017-03-30 | ジョンソン、マッセイ、パブリック、リミテッド、カンパニーＪｏｈｎｓｏｎ Ｍａｔｔｈｅｙ Ｐｕｂｌｉｃ Ｌｉｍｉｔｅｄ Ｃｏｍｐａｎｙ | プロスタグランジンの精製方法 |
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