JPH1189573A - アポトーシス関与遺伝子 - Google Patents
アポトーシス関与遺伝子Info
- Publication number
- JPH1189573A JPH1189573A JP6249226A JP24922694A JPH1189573A JP H1189573 A JPH1189573 A JP H1189573A JP 6249226 A JP6249226 A JP 6249226A JP 24922694 A JP24922694 A JP 24922694A JP H1189573 A JPH1189573 A JP H1189573A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- apoptosis
- expression
- present
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4747—Apoptosis related proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
(57)【要約】
【構成】本発明は、図１に示されるアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列を含むことを特徴とするアポトーシス関
与遺伝子を提供するものである。 【効果】本発明遺伝子は、アポトーシス関与蛋白の発現
及び検出に利用でき、かくしてアポトーシスの関与する
各種の疾患の診断、病態解明等や、アポトーシスの誘導
乃至抑制によるアポトーシス関連疾患の予防及び治療に
有用である。
ドする塩基配列を含むことを特徴とするアポトーシス関
与遺伝子を提供するものである。 【効果】本発明遺伝子は、アポトーシス関与蛋白の発現
及び検出に利用でき、かくしてアポトーシスの関与する
各種の疾患の診断、病態解明等や、アポトーシスの誘導
乃至抑制によるアポトーシス関連疾患の予防及び治療に
有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は，アポトーシス（apopto
sis ）関与遺伝子、より詳しくはアポトーシスの過程に
おいて高発現する新規な遺伝子に関する。
sis ）関与遺伝子、より詳しくはアポトーシスの過程に
おいて高発現する新規な遺伝子に関する。
【０００２】
【従来技術とその課題】アポトーシスは、細胞及び個体
の発生、分化、成熟におけるプログラムされた細胞死に
おいて、或は種々の状況下に誘導される細胞死におい
て、認められる細胞が死に至る過程を意味し[Br. J. Ca
ncer, 265, p239 (1972)］、これは生理学上の種々の条
件下に起こるとされている。その形態学的特徴として
は、周囲の細胞との接触の欠乏、細胞質の濃縮化、エン
ドヌクレアーゼの活性に関連したクロマチンの凝縮及び
核凝縮、核の分節化等を挙げることができ、更に細胞表
面の微絨毛の消失、細胞表面の平滑化（細胞表面の水泡
形成：membranece blebbing ）等も観察される。またエ
ンドヌクレアーゼ活性により、ＤＮＡフラグメンテーシ
ョンも観察され、アポプティック体の細胞の最終断片
は、隣接する細胞により貪食される機構として論じられ
ている[Immunology Today, 7(4), 115-119 (1986); Sci
ence, 245, 301-305 (1989)］。
の発生、分化、成熟におけるプログラムされた細胞死に
おいて、或は種々の状況下に誘導される細胞死におい
て、認められる細胞が死に至る過程を意味し[Br. J. Ca
ncer, 265, p239 (1972)］、これは生理学上の種々の条
件下に起こるとされている。その形態学的特徴として
は、周囲の細胞との接触の欠乏、細胞質の濃縮化、エン
ドヌクレアーゼの活性に関連したクロマチンの凝縮及び
核凝縮、核の分節化等を挙げることができ、更に細胞表
面の微絨毛の消失、細胞表面の平滑化（細胞表面の水泡
形成：membranece blebbing ）等も観察される。またエ
ンドヌクレアーゼ活性により、ＤＮＡフラグメンテーシ
ョンも観察され、アポプティック体の細胞の最終断片
は、隣接する細胞により貪食される機構として論じられ
ている[Immunology Today, 7(4), 115-119 (1986); Sci
ence, 245, 301-305 (1989)］。
【０００３】かかるアポトーシスは、各種多様な疾患に
おいて重要な係わりを有することが明らかにされてきて
おり、これらの疾患の診断における利用価値及び細胞の
アポトーシスを誘導ないし抑制することによりこれら疾
患の予防及び治療を図る試みが近年殊に注目されてい
る。
おいて重要な係わりを有することが明らかにされてきて
おり、これらの疾患の診断における利用価値及び細胞の
アポトーシスを誘導ないし抑制することによりこれら疾
患の予防及び治療を図る試みが近年殊に注目されてい
る。
【０００４】その遺伝子発現或は遺伝子産物によって細
胞のアポトーシスを制御するアポトーシス関与遺伝子が
提供できれば、各細胞での発現レベルやその構造及び機
能解析或はその発現物に関する解析等により、上記アポ
トーシス或は関連疾患の病態解明やその診断と治療方法
も確立可能となると考えられる。
胞のアポトーシスを制御するアポトーシス関与遺伝子が
提供できれば、各細胞での発現レベルやその構造及び機
能解析或はその発現物に関する解析等により、上記アポ
トーシス或は関連疾患の病態解明やその診断と治療方法
も確立可能となると考えられる。
【０００５】しかしながら、アポトーシスに関するこれ
らの解析は、現在アポトーシス関与遺伝子が単離されて
おらず未知であるが故に不可能である。
らの解析は、現在アポトーシス関与遺伝子が単離されて
おらず未知であるが故に不可能である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、アポト
ーシスに至る過程においてその関与が必要な特定遺伝子
が明らかにされる。かかる遺伝子はその一過的な発現後
にアポトーシスの特徴であるＤＮＡフラグメンテーショ
ンが観察され、その一時的な発現増大とその後の減少が
細胞のアポトーシスの過程に必要であることが明らかに
された。
ーシスに至る過程においてその関与が必要な特定遺伝子
が明らかにされる。かかる遺伝子はその一過的な発現後
にアポトーシスの特徴であるＤＮＡフラグメンテーショ
ンが観察され、その一時的な発現増大とその後の減少が
細胞のアポトーシスの過程に必要であることが明らかに
された。
【０００７】しかして、本発明はかかる特定のアポトー
シス関与遺伝子を提供するものである。また、本発明は
かかる遺伝子或はその発現物の検出やそれらの人工的制
御等により、アポトーシスの関与する各種の疾患の診
断、病態解明、アポトーシスの誘導乃至抑制を行なうた
めの上記遺伝子の利用を提供するものである。
シス関与遺伝子を提供するものである。また、本発明は
かかる遺伝子或はその発現物の検出やそれらの人工的制
御等により、アポトーシスの関与する各種の疾患の診
断、病態解明、アポトーシスの誘導乃至抑制を行なうた
めの上記遺伝子の利用を提供するものである。
【０００８】本発明によれば、図１に示されるアミノ酸
配列をコードする塩基配列を含むアポトーシス関与遺伝
子が提供される。
配列をコードする塩基配列を含むアポトーシス関与遺伝
子が提供される。
【０００９】以下、本明細書におけるアミノ酸、ペプチ
ド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、ＩＵＰＡ
Ｃ、ＩＵＢの規定、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む
明細書等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）及
び当該分野における慣用記号に従うものとする。
ド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、ＩＵＰＡ
Ｃ、ＩＵＢの規定、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む
明細書等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）及
び当該分野における慣用記号に従うものとする。
【００１０】本発明により提供される遺伝子は、細胞の
アポトーシスの過程において一過的に発現される遺伝子
であることにおいて特徴付けられる。かかる遺伝子の１
具体例は、図１に示される塩基配列を有するｃＤＮＡク
ローンであり、これは２６４アミノ酸をコードする７９
２ヌクレオチド（核酸）のオープンリーディングフレー
ムを有している。
アポトーシスの過程において一過的に発現される遺伝子
であることにおいて特徴付けられる。かかる遺伝子の１
具体例は、図１に示される塩基配列を有するｃＤＮＡク
ローンであり、これは２６４アミノ酸をコードする７９
２ヌクレオチド（核酸）のオープンリーディングフレー
ムを有している。
【００１１】本発明遺伝子は、例えば図１に示されるよ
うに、一本鎖ＤＮＡ配列で表されるが、本発明はかかる
一本鎖ＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ配列やこれらの両者
を含むコンポーネントもまた包含する。尚、第１図に示
す本発明遺伝子の配列は、これによりコードされる各ア
ミノ酸残基を示すコドンの一つの組合わせ例であり、本
発明遺伝子はこれに限らず、各アミノ酸残基に対して任
意のコドンを組合わせ選択したＤＮＡ塩基配列を有する
ことも勿論可能である。該コドンの選択は常法に従うこ
とができ、例えば利用する宿主のコドン使用頻度を考慮
することができる［Ncl.Acids Res., 9, 43-74 (1981)
］。
うに、一本鎖ＤＮＡ配列で表されるが、本発明はかかる
一本鎖ＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ配列やこれらの両者
を含むコンポーネントもまた包含する。尚、第１図に示
す本発明遺伝子の配列は、これによりコードされる各ア
ミノ酸残基を示すコドンの一つの組合わせ例であり、本
発明遺伝子はこれに限らず、各アミノ酸残基に対して任
意のコドンを組合わせ選択したＤＮＡ塩基配列を有する
ことも勿論可能である。該コドンの選択は常法に従うこ
とができ、例えば利用する宿主のコドン使用頻度を考慮
することができる［Ncl.Acids Res., 9, 43-74 (1981)
］。
【００１２】更に本発明遺伝子には、上記で示されるア
ミノ酸配列の一部のアミノ酸乃至アミノ酸配列を置換、
欠失、付加等により改変してなり、同様の機能を有する
同効物をコードするＤＮＡ配列もまた包含される。これ
らポリペプチドの製造、改変（変異）等は天然に生じる
こともあり、また翻訳後の修飾により、或は遺伝子工学
的手法により天然の遺伝子（本発明遺伝子）を、例えば
サイトスペシフィック・ミュータゲネシス［Methods in
Enzymology, 154, p350, 367-382 (1987)；同100, p46
8 (1983) ；Nucleic Acids Research, 12, p9441 (198
4)；続生化学実験講座１「遺伝子研究法ＩＩ」、日本生
化学会編, p105 (1986) ］等の方法により改変したり、
リン酸トリエステル法やリン酸アミダイト法等の化学合
成手段［J. Am. Chem. Soc.,89, p4801 (1967)；同91,
p3350 (1969)；Science, 150, p178 (1968) ；Tetrahed
ron Lett.,22, p1859 (1981)；同24, p245 (1983) ］に
より変異させたＤＮＡを合成したり、それらの組合せに
より収得することができる。
ミノ酸配列の一部のアミノ酸乃至アミノ酸配列を置換、
欠失、付加等により改変してなり、同様の機能を有する
同効物をコードするＤＮＡ配列もまた包含される。これ
らポリペプチドの製造、改変（変異）等は天然に生じる
こともあり、また翻訳後の修飾により、或は遺伝子工学
的手法により天然の遺伝子（本発明遺伝子）を、例えば
サイトスペシフィック・ミュータゲネシス［Methods in
Enzymology, 154, p350, 367-382 (1987)；同100, p46
8 (1983) ；Nucleic Acids Research, 12, p9441 (198
4)；続生化学実験講座１「遺伝子研究法ＩＩ」、日本生
化学会編, p105 (1986) ］等の方法により改変したり、
リン酸トリエステル法やリン酸アミダイト法等の化学合
成手段［J. Am. Chem. Soc.,89, p4801 (1967)；同91,
p3350 (1969)；Science, 150, p178 (1968) ；Tetrahed
ron Lett.,22, p1859 (1981)；同24, p245 (1983) ］に
より変異させたＤＮＡを合成したり、それらの組合せに
より収得することができる。
【００１３】実際に、v-fos トランスフォーメーション
エフェクター遺伝子として知られているラットＦｔｅ−
１遺伝子［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 2200-220
4 (1992)］に対応するヒトＦｔｅ−１遺伝子（GenBank
Accession No. M84711）は、図１の塩基配列においてそ
の６２０番目の塩基が（Ａ）である、従って対応する１
９６番目のアミノ酸が Aspである、同効物であり、本発
明におけるアポトーシス関与遺伝子に包含される。
エフェクター遺伝子として知られているラットＦｔｅ−
１遺伝子［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 2200-220
4 (1992)］に対応するヒトＦｔｅ−１遺伝子（GenBank
Accession No. M84711）は、図１の塩基配列においてそ
の６２０番目の塩基が（Ａ）である、従って対応する１
９６番目のアミノ酸が Aspである、同効物であり、本発
明におけるアポトーシス関与遺伝子に包含される。
【００１４】本発明遺伝子は、これを利用して、即ち例
えばこれを微生物のベクターに組込み、形質転換された
微生物を培養することによって、上記アポトーシス関与
蛋白を容易にかつ安定して発現できる。
えばこれを微生物のベクターに組込み、形質転換された
微生物を培養することによって、上記アポトーシス関与
蛋白を容易にかつ安定して発現できる。
【００１５】また本発明の遺伝子を利用して得られるア
ポトーシス関与蛋白は、これを用いて、特異抗体を作成
することもできる。ここで抗原として用いられるコンポ
ーネントは、上記遺伝子工学的手法に従って大量に産生
される蛋白を用いることができ、得られる抗体はポリク
ローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれでもよ
く、之等抗体はアポトーシス関与蛋白の精製、測定、識
別等に有利に利用できる。
ポトーシス関与蛋白は、これを用いて、特異抗体を作成
することもできる。ここで抗原として用いられるコンポ
ーネントは、上記遺伝子工学的手法に従って大量に産生
される蛋白を用いることができ、得られる抗体はポリク
ローナル抗体及びモノクローナル抗体のいずれでもよ
く、之等抗体はアポトーシス関与蛋白の精製、測定、識
別等に有利に利用できる。
【００１６】殊に、本発明遺伝子は、その一部又は全部
の塩基配列を利用することによって、各種ヒト組織／細
胞におけるアポトーシス関与遺伝子の発現を検出する上
で極めて良好に使用できる点で特徴付けられる。
の塩基配列を利用することによって、各種ヒト組織／細
胞におけるアポトーシス関与遺伝子の発現を検出する上
で極めて良好に使用できる点で特徴付けられる。
【００１７】本発明遺伝子の製造は、本発明によって開
示された本発明遺伝子についての配列情報によれば、一
般的遺伝子工学的手法により容易に実施できる［Molecu
larCloning 2nd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory P
ress (1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法Ｉ、Ｉ
Ｉ、ＩＩＩ」、日本生化学会編 (1986) 等参照］。
示された本発明遺伝子についての配列情報によれば、一
般的遺伝子工学的手法により容易に実施できる［Molecu
larCloning 2nd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory P
ress (1989)；続生化学実験講座「遺伝子研究法Ｉ、Ｉ
Ｉ、ＩＩＩ」、日本生化学会編 (1986) 等参照］。
【００１８】これは例えばヒトｃＤＮＡライブラリー
（アポトーシス関与遺伝子の発現される適当な起源細胞
より常法に従い調製されたもの）から、本発明遺伝子に
特有の適当なプローブや抗体を用いて所望クローンを選
択することにより実施できる［Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 78, 6613 (1981) ; Science, 222, 778 (1983)
等］。
（アポトーシス関与遺伝子の発現される適当な起源細胞
より常法に従い調製されたもの）から、本発明遺伝子に
特有の適当なプローブや抗体を用いて所望クローンを選
択することにより実施できる［Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 78, 6613 (1981) ; Science, 222, 778 (1983)
等］。
【００１９】上記方法において、起源細胞としては、ア
ポトーシス関与遺伝子を発現する各種の細胞、組織や之
等に由来する培養細胞等が例示され、これからの全ＲＮ
Ａの分離、ｍＲＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡへの変換
（合成）とそのクローニング等はいずれも常法に従い実
施できる。また、ｃＤＮＡライブラリーは市販されても
おり、本発明においてはそれらｃＤＮＡライブラリー、
例えばクローンテック社（Clontech Lab. Inc.）より市
販の各種ｃＤＮＡライブラリー等を用いることもでき
る。
ポトーシス関与遺伝子を発現する各種の細胞、組織や之
等に由来する培養細胞等が例示され、これからの全ＲＮ
Ａの分離、ｍＲＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡへの変換
（合成）とそのクローニング等はいずれも常法に従い実
施できる。また、ｃＤＮＡライブラリーは市販されても
おり、本発明においてはそれらｃＤＮＡライブラリー、
例えばクローンテック社（Clontech Lab. Inc.）より市
販の各種ｃＤＮＡライブラリー等を用いることもでき
る。
【００２０】ｃＤＮＡライブラリーからの本発明遺伝子
のスクリーニングは、前記通常の方法に従い実施するこ
とができる。該スクリーニング方法としては、例えばｃ
ＤＮＡの産生する蛋白質に対して、アポトーシス関与蛋
白特異抗体を使用した免疫的スクリーニングにより、対
応するｃＤＮＡクローンを選択する方法、目的のＤＮＡ
配列に選択的に結合するプローブを用いたプラークハイ
ブリダイゼーション、コロニーハイブリダイゼーション
等や之等の組合せを例示できる。ここで用いられるプロ
ーブとしては、本発明遺伝子のＤＮＡ配列に関する情報
をもとにして化学合成されたＤＮＡ配列等を用いるのが
一般的であり、勿論既に取得された本発明遺伝子やその
断片もかかるプローブとして利用できる。
のスクリーニングは、前記通常の方法に従い実施するこ
とができる。該スクリーニング方法としては、例えばｃ
ＤＮＡの産生する蛋白質に対して、アポトーシス関与蛋
白特異抗体を使用した免疫的スクリーニングにより、対
応するｃＤＮＡクローンを選択する方法、目的のＤＮＡ
配列に選択的に結合するプローブを用いたプラークハイ
ブリダイゼーション、コロニーハイブリダイゼーション
等や之等の組合せを例示できる。ここで用いられるプロ
ーブとしては、本発明遺伝子のＤＮＡ配列に関する情報
をもとにして化学合成されたＤＮＡ配列等を用いるのが
一般的であり、勿論既に取得された本発明遺伝子やその
断片もかかるプローブとして利用できる。
【００２１】また、本発明遺伝子の取得に際しては、Ｐ
ＣＲ法［Science, 230, 1350-1354(1985)］によるＤＮ
Ａ／ＲＮＡ増幅法が好適に利用できる。殊にライブラリ
ーから全長のｃＤＮＡが得られ難いような場合にレース
法（ＲＡＣＥ：Rapid amplification of cDNA ends；実
験医学、12(6), 35-38 (1994))の採用が好適である。か
かるＰＣＲ法の採用に際して使用されるプライマーは、
既に本発明によって明らかにされた本発明遺伝子の配列
情報に基づいて適宜設定することができ、これは常法に
従い合成することができる。
ＣＲ法［Science, 230, 1350-1354(1985)］によるＤＮ
Ａ／ＲＮＡ増幅法が好適に利用できる。殊にライブラリ
ーから全長のｃＤＮＡが得られ難いような場合にレース
法（ＲＡＣＥ：Rapid amplification of cDNA ends；実
験医学、12(6), 35-38 (1994))の採用が好適である。か
かるＰＣＲ法の採用に際して使用されるプライマーは、
既に本発明によって明らかにされた本発明遺伝子の配列
情報に基づいて適宜設定することができ、これは常法に
従い合成することができる。
【００２２】尚、増幅させたＤＮＡ／ＲＮＡ断片の単離
精製は前記のとうり常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。
精製は前記のとうり常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。
【００２３】上記で得られる本発明遺伝子或は各種ＤＮ
Ａ断片等の塩基配列の決定も、常法に従うことができ、
例えばジデオキシ法［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 7
4, 5463-5467 (1977)］やマキサム−ギルバート法［Met
hod in Enzymology, 65, 499(1980)］等により行なうこ
とができる。かかる塩基配列の決定は、市販のシークエ
ンスキット等を用いても容易に行ない得る。
Ａ断片等の塩基配列の決定も、常法に従うことができ、
例えばジデオキシ法［Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 7
4, 5463-5467 (1977)］やマキサム−ギルバート法［Met
hod in Enzymology, 65, 499(1980)］等により行なうこ
とができる。かかる塩基配列の決定は、市販のシークエ
ンスキット等を用いても容易に行ない得る。
【００２４】本発明遺伝子の利用によれば、通常の遺伝
子組換え技術［例えば、Science, 224, p1431 (1984) ;
Biochem. Biophys. Res. Comm., 130, p692 (1985) ；
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, p5990 (1983)及び前
記引用文献等参照］に従うことにより、組換え体アポト
ーシス関与蛋白を得ることができる。該アポトーシス関
与蛋白の製造は、より詳細には、本発明遺伝子が宿主細
胞中で発現できる組換えＤＮＡを作成し、これを宿主細
胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養すること
により行なわれる。
子組換え技術［例えば、Science, 224, p1431 (1984) ;
Biochem. Biophys. Res. Comm., 130, p692 (1985) ；
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, p5990 (1983)及び前
記引用文献等参照］に従うことにより、組換え体アポト
ーシス関与蛋白を得ることができる。該アポトーシス関
与蛋白の製造は、より詳細には、本発明遺伝子が宿主細
胞中で発現できる組換えＤＮＡを作成し、これを宿主細
胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養すること
により行なわれる。
【００２５】ここで宿主細胞としては、真核生物及び原
核生物のいずれも用いることができる。該真核生物の細
胞には、脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細
胞としては、例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞［Cel
l, 23, 175-182 (1981)］やチャイニーズ・ハムスター
卵巣細胞及びそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株［Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216-4220 (1980)］等
がよく用いられているが、之等に限定される訳ではな
い。
核生物のいずれも用いることができる。該真核生物の細
胞には、脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細
胞としては、例えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞［Cel
l, 23, 175-182 (1981)］やチャイニーズ・ハムスター
卵巣細胞及びそのジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株［Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 4216-4220 (1980)］等
がよく用いられているが、之等に限定される訳ではな
い。
【００２６】脊椎動物の発現ベクターとしては、通常発
現しようとする遺伝子の上流に位置するプロモーター、
ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写
終了配列等を保有するものを使用でき、これは更に必要
により複製起点を有していてもよい。該発現ベクターの
例としては、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーターを保
有するｐＳＶ２dhfr［Mol. Cell. Biol., 1, 854-764］
等を例示できる。また、真核微生物としては、酵母が一
般によく用いられ、中でもサッカロミセス属酵母を有利
に利用できる。該酵母等の真核微生物の発現ベクターと
しては、例えば酸性ホスフアターゼ遺伝子に対するプロ
モーターを有するｐＡＭ８２［Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 80, 1-5 (1983)］等を利用できる。
現しようとする遺伝子の上流に位置するプロモーター、
ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写
終了配列等を保有するものを使用でき、これは更に必要
により複製起点を有していてもよい。該発現ベクターの
例としては、例えば、ＳＶ４０の初期プロモーターを保
有するｐＳＶ２dhfr［Mol. Cell. Biol., 1, 854-764］
等を例示できる。また、真核微生物としては、酵母が一
般によく用いられ、中でもサッカロミセス属酵母を有利
に利用できる。該酵母等の真核微生物の発現ベクターと
しては、例えば酸性ホスフアターゼ遺伝子に対するプロ
モーターを有するｐＡＭ８２［Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 80, 1-5 (1983)］等を利用できる。
【００２７】原核生物の宿主としては、大腸菌や枯草菌
が一般によく用いられる。之等を宿主とする場合、本発
明では、例えば該宿主菌中で複製可能なプラスミドベク
ターを用い、このベクター中に本発明遺伝子が発現でき
るように該遺伝子の上流にプロモーター及びＳＤ（シヤ
イン・アンド・ダルガーノ）塩基配列、更に蛋白合成開
始に必要な開始コドン（例えばＡＴＧ）を付与した発現
プラスミドを利用するのが好ましい。上記宿主としての
大腸菌としては、エシエリヒア・コリ（Escherichia co
li）Ｋ１２株等がよく用いられ、ベクターとしては一般
にｐＢＲ３２２及びその改良ベクターがよく用いられる
が、之等に限定されず公知の各種の菌株及びベクターを
も利用できる。プロモーターとしては、例えばトリプト
ファン(trp) プロモーター、lpp プロモーター、lac プ
ロモーター、PL/PR プロモーター等を使用できる。
が一般によく用いられる。之等を宿主とする場合、本発
明では、例えば該宿主菌中で複製可能なプラスミドベク
ターを用い、このベクター中に本発明遺伝子が発現でき
るように該遺伝子の上流にプロモーター及びＳＤ（シヤ
イン・アンド・ダルガーノ）塩基配列、更に蛋白合成開
始に必要な開始コドン（例えばＡＴＧ）を付与した発現
プラスミドを利用するのが好ましい。上記宿主としての
大腸菌としては、エシエリヒア・コリ（Escherichia co
li）Ｋ１２株等がよく用いられ、ベクターとしては一般
にｐＢＲ３２２及びその改良ベクターがよく用いられる
が、之等に限定されず公知の各種の菌株及びベクターを
も利用できる。プロモーターとしては、例えばトリプト
ファン(trp) プロモーター、lpp プロモーター、lac プ
ロモーター、PL/PR プロモーター等を使用できる。
【００２８】かくして得られる所望の組換えＤＮＡの宿
主細胞への導入方法及びこれによる形質転換方法として
は、一般的な各種方法を採用できる。また得られる形質
転換体は、常法に従い培養でき、該培養により本発明遺
伝子によりコードされる目的のアポトーシス関与蛋白が
生産、発現される。該培養に用いられる培地としては、
採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜
選択利用でき、その培養も宿主細胞の生育に適した条件
下で実施できる。
主細胞への導入方法及びこれによる形質転換方法として
は、一般的な各種方法を採用できる。また得られる形質
転換体は、常法に従い培養でき、該培養により本発明遺
伝子によりコードされる目的のアポトーシス関与蛋白が
生産、発現される。該培養に用いられる培地としては、
採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜
選択利用でき、その培養も宿主細胞の生育に適した条件
下で実施できる。
【００２９】上記により、形質転換体の細胞内、細胞外
乃至は細胞膜上に目的とする組換えアポトーシス関与蛋
白が発現、生産、蓄積乃至分泌される。
乃至は細胞膜上に目的とする組換えアポトーシス関与蛋
白が発現、生産、蓄積乃至分泌される。
【００３０】組換えアポトーシス関与蛋白は、所望によ
り、その物理的性質、化学的性質等を利用した各種の分
離操作［「生化学データーブックＩＩ」、1175-1259
頁、第１版第１刷、1980年 6月23日株式会社東京化学同
人発行；Biochemistry, 25(25), 8274-8277 (1986); Eu
r. J. Biochem., 163, 313-321 (1987) 等参照］により
分離、精製できる。該方法としては、具体的には例えば
通常の再構成処理、蛋白沈澱剤による処理（塩析法）、
遠心分離、浸透圧ショック法、超音波破砕、限外濾過、
分子篩クロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニ
ティクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）等の各種液体クロマトグラフィー、透析
法、之等の組合せ等を例示できる。
り、その物理的性質、化学的性質等を利用した各種の分
離操作［「生化学データーブックＩＩ」、1175-1259
頁、第１版第１刷、1980年 6月23日株式会社東京化学同
人発行；Biochemistry, 25(25), 8274-8277 (1986); Eu
r. J. Biochem., 163, 313-321 (1987) 等参照］により
分離、精製できる。該方法としては、具体的には例えば
通常の再構成処理、蛋白沈澱剤による処理（塩析法）、
遠心分離、浸透圧ショック法、超音波破砕、限外濾過、
分子篩クロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニ
ティクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）等の各種液体クロマトグラフィー、透析
法、之等の組合せ等を例示できる。
【００３１】本発明は、アポトーシスの過程において、
その発現による関与が必要な特定遺伝子を明らかにする
ものであり、かかる新規な機能の解明にその貢献の基礎
をおくものである。
その発現による関与が必要な特定遺伝子を明らかにする
ものであり、かかる新規な機能の解明にその貢献の基礎
をおくものである。
【００３２】しかして、本発明は、殊に診断及び医薬分
野において有用である。
野において有用である。
【００３３】例えば、本発明によって明らかにされた本
発明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の
一部又は全部の塩基配列を利用することにより、各種の
ヒト組織におけるアポトーシス関与遺伝子の発現の検出
を行うことができる。これは常法に従い行うことがで
き、例えばＲＴ−ＰＣＲ［Kawasaki, E.S., Amplificat
ion of RNA. In PCR Protocol, A Guide to methods an
d applications, Academic Press, Inc., SanDiego, 21
-27 (1991)］によるＲＮＡ増幅により、またノーザンブ
ロッティング解析［Molecular Cloning, Cold Spring H
arbor Laboratory(1989) ］等によりいずれも良好に実
施し得る。
発明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の
一部又は全部の塩基配列を利用することにより、各種の
ヒト組織におけるアポトーシス関与遺伝子の発現の検出
を行うことができる。これは常法に従い行うことがで
き、例えばＲＴ−ＰＣＲ［Kawasaki, E.S., Amplificat
ion of RNA. In PCR Protocol, A Guide to methods an
d applications, Academic Press, Inc., SanDiego, 21
-27 (1991)］によるＲＮＡ増幅により、またノーザンブ
ロッティング解析［Molecular Cloning, Cold Spring H
arbor Laboratory(1989) ］等によりいずれも良好に実
施し得る。
【００３４】尚、ＰＣＲ法を採用する場合において、プ
ライマーは、本発明遺伝子のみを特異的に増幅できる本
発明遺伝子に特有のものである限りにおいて、何等制限
はなく、本発明情報に基づき適宜設定することができ
る。これは常法に従い、通常、２０〜３０ヌクレオチド
程度の部分配列を有するものであることができる。
ライマーは、本発明遺伝子のみを特異的に増幅できる本
発明遺伝子に特有のものである限りにおいて、何等制限
はなく、本発明情報に基づき適宜設定することができ
る。これは常法に従い、通常、２０〜３０ヌクレオチド
程度の部分配列を有するものであることができる。
【００３５】しかして、本発明はかかるアポトーシス関
与遺伝子の検出に有用なプライマー及び／又はプローブ
をも提供するものである。
与遺伝子の検出に有用なプライマー及び／又はプローブ
をも提供するものである。
【００３６】また、本発明遺伝子の発現制御或は遺伝子
産物の活性の制御によれば、アポトーシスを制御するこ
とができ、アポトーシスが関与する各種の疾患の処置に
利用できる。
産物の活性の制御によれば、アポトーシスを制御するこ
とができ、アポトーシスが関与する各種の疾患の処置に
利用できる。
【００３７】各種の病態・病因に冠する組織・細胞にお
いて、本発明遺伝子（産物）の発現が高い場合には、こ
れを阻害することによりアポトーシスを誘導することが
できる。例えば、本発明遺伝子の発現が高い腫瘍に対し
ては、この発現を抑制することにより、或はこの遺伝子
産物の活性を阻害することにより、腫瘍に対して所望の
アポトーシスを誘導することができる。一方、アポトー
シスが病態・病因であり、アポトーシスを抑制すること
が治療に結びつく場合は、本発明遺伝子（産物）の減少
を抑制することにより、従って、本発明遺伝子の発現を
誘導或は促進することにより、或はこの遺伝子産物の活
性を保持することにより、アポトーシスを抑制すること
ができる。
いて、本発明遺伝子（産物）の発現が高い場合には、こ
れを阻害することによりアポトーシスを誘導することが
できる。例えば、本発明遺伝子の発現が高い腫瘍に対し
ては、この発現を抑制することにより、或はこの遺伝子
産物の活性を阻害することにより、腫瘍に対して所望の
アポトーシスを誘導することができる。一方、アポトー
シスが病態・病因であり、アポトーシスを抑制すること
が治療に結びつく場合は、本発明遺伝子（産物）の減少
を抑制することにより、従って、本発明遺伝子の発現を
誘導或は促進することにより、或はこの遺伝子産物の活
性を保持することにより、アポトーシスを抑制すること
ができる。
【００３８】これら本発明遺伝子の発現の抑制及び誘導
乃至促進は、常法に従うことができ、対象とする遺伝子
が明らかにされている以上、当業者が適宜選択採用し得
るであろう。例えば、遺伝子抑制には、アンチセンスヌ
クレオチドによる方法、例えばｍＲＮＡからの翻訳を阻
害する方法［Science, 261, 1004-1012 (1993)］や、Ｄ
ＮＡからＲＮＡへの転写を阻害するトリプルヘリックス
法［Trend Biotech.,10, 132-136 (1992)］等による手
段が、また、誘導乃至促進には、ウイルスベクター等に
よる遺伝子導入［Science, 260, 926-932 (1993)］等に
より本発明遺伝子を発現させる手段等が採用し得る。遺
伝子産物の活性阻害には、前記した特異抗体の使用も有
利であろう。
乃至促進は、常法に従うことができ、対象とする遺伝子
が明らかにされている以上、当業者が適宜選択採用し得
るであろう。例えば、遺伝子抑制には、アンチセンスヌ
クレオチドによる方法、例えばｍＲＮＡからの翻訳を阻
害する方法［Science, 261, 1004-1012 (1993)］や、Ｄ
ＮＡからＲＮＡへの転写を阻害するトリプルヘリックス
法［Trend Biotech.,10, 132-136 (1992)］等による手
段が、また、誘導乃至促進には、ウイルスベクター等に
よる遺伝子導入［Science, 260, 926-932 (1993)］等に
より本発明遺伝子を発現させる手段等が採用し得る。遺
伝子産物の活性阻害には、前記した特異抗体の使用も有
利であろう。
【００３９】しかして、本発明は、本発明遺伝子を人工
的に制御することを特徴とするアポトーシスの制御方法
をも提供するものである。
的に制御することを特徴とするアポトーシスの制御方法
をも提供するものである。
【００４０】
【発明の効果】本発明によれば、アポトーシス関与遺伝
子が提供され、該遺伝子を用いれば、アポトーシス関与
遺伝子の各組織での発現の検出やアポトーシス関与蛋白
の遺伝子工学的製造ができ、これらにより各種アポトー
シス関与疾患の診断及びアポトーシス誘導剤或は抑制剤
のスクリーニング並びに評価に良好に採用することがで
きる。
子が提供され、該遺伝子を用いれば、アポトーシス関与
遺伝子の各組織での発現の検出やアポトーシス関与蛋白
の遺伝子工学的製造ができ、これらにより各種アポトー
シス関与疾患の診断及びアポトーシス誘導剤或は抑制剤
のスクリーニング並びに評価に良好に採用することがで
きる。
【００４１】更に、本発明遺伝子の発現を制御すること
によりアポトーシスの誘導又は抑制ができ、これにより
アポトーシスが関与する各種疾患の予防及び治療に有用
である。
によりアポトーシスの誘導又は抑制ができ、これにより
アポトーシスが関与する各種疾患の予防及び治療に有用
である。
【００４２】
【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、実
施例を挙げる。
施例を挙げる。
【００４３】（１）ｎｂｌ ｃＤＮＡのクローニング： ナマルバ・バーキット・リンパ腫（Namalwa Burkit
t Lymphoma）細胞より、グアニジウム・セシウムクロラ
イド法により全ＲＮＡを抽出後、オリゴ（ｄＴ）−セル
ロースのカラムクロマトグラフィーによりポリ（Ａ）＋
ＲＮＡを調整した（Molecular Cloning, p.196-198, Co
ld Spring Harbor Laboratory, 1982 ）。
t Lymphoma）細胞より、グアニジウム・セシウムクロラ
イド法により全ＲＮＡを抽出後、オリゴ（ｄＴ）−セル
ロースのカラムクロマトグラフィーによりポリ（Ａ）＋
ＲＮＡを調整した（Molecular Cloning, p.196-198, Co
ld Spring Harbor Laboratory, 1982 ）。
【００４４】上記ポリ（Ａ）＋ＲＮＡからオリゴ（ｄ
Ｔ）をプライマーにして、逆転写酵素及びＤＮＡポリメ
ラーゼＩを用いて２本鎖ｃＤＮＡを調整し、ｄＣ・ｄＧ
テイル法に従いｃＤＮＡのクローニングを行った（Mole
cular Cloning, p.239-242, Cold Spring Harbor Labor
atory, 1982 ）。
Ｔ）をプライマーにして、逆転写酵素及びＤＮＡポリメ
ラーゼＩを用いて２本鎖ｃＤＮＡを調整し、ｄＣ・ｄＧ
テイル法に従いｃＤＮＡのクローニングを行った（Mole
cular Cloning, p.239-242, Cold Spring Harbor Labor
atory, 1982 ）。
【００４５】即ち、２本鎖ｃＤＮＡの３’末端にターミ
ナル・デオキシヌクレオチジル・トランスフェラーゼを
用いてｄＣテイリングを行ない、一方、プラスミドベク
ターｐＢＲ３２２を制限酵素ＰｓｔＩで切断後３’末端
にターミナル・デオキシヌクレオチジル・トランスフェ
ラーゼを用いてｄＧテイリングを行なった。かくして得
たｄＣテイリングｃＤＮＡとｄＧテイリングｐＢＲ３２
２をアニーリングさせた後、大腸菌ＨＢ１０１のコンピ
テント・セルに形質転換し、テトラサイクリン耐性クロ
ーンを１７００個得た。ｃＤＮＡの長さが０．３ｋｂ以
上のクローンをランダムに１４９個選択し、それらにつ
いて制限酵素ＨｉｎｆＩで切断し、その切断断片のパタ
ーンより最も多いｃＤＮＡクローン（１４９クローン当
たり８クローン）を選択しこれを「ｎｂｌ」と命名し
た。ｎｂｌの内でｃＤＮＡの長さが約８８０ｂｐのクロ
ーンを「Ｎａ８８０」と命名した。
ナル・デオキシヌクレオチジル・トランスフェラーゼを
用いてｄＣテイリングを行ない、一方、プラスミドベク
ターｐＢＲ３２２を制限酵素ＰｓｔＩで切断後３’末端
にターミナル・デオキシヌクレオチジル・トランスフェ
ラーゼを用いてｄＧテイリングを行なった。かくして得
たｄＣテイリングｃＤＮＡとｄＧテイリングｐＢＲ３２
２をアニーリングさせた後、大腸菌ＨＢ１０１のコンピ
テント・セルに形質転換し、テトラサイクリン耐性クロ
ーンを１７００個得た。ｃＤＮＡの長さが０．３ｋｂ以
上のクローンをランダムに１４９個選択し、それらにつ
いて制限酵素ＨｉｎｆＩで切断し、その切断断片のパタ
ーンより最も多いｃＤＮＡクローン（１４９クローン当
たり８クローン）を選択しこれを「ｎｂｌ」と命名し
た。ｎｂｌの内でｃＤＮＡの長さが約８８０ｂｐのクロ
ーンを「Ｎａ８８０」と命名した。
【００４６】該Ｎａ８８０は、図１の塩基配列におい
て、６５番目の塩基から３′末端までの配列を有するこ
とが確認された。
て、６５番目の塩基から３′末端までの配列を有するこ
とが確認された。
【００４７】 前記ポリ（Ａ）＋ＲＮＡの２μｇより
オリゴ（ｄＴ）をプライマーにして４６４ｎｇのｃＤＮ
Ａを合成した（ｃＤＮＡ合成システム・プラス：Amersh
am社製）。このｃＤＮＡの３７ｎｇより、市販キット
（ｃＤＮＡクローニングシステムλｇｔ１０・アダプタ
ー法：Amersham社製及び Gigapack II Gold ： Stratag
ene 社製）により、２０５０００ｐｆｕのλｇｔ１０ｃ
ＤＮＡライブラリーを作成した。
オリゴ（ｄＴ）をプライマーにして４６４ｎｇのｃＤＮ
Ａを合成した（ｃＤＮＡ合成システム・プラス：Amersh
am社製）。このｃＤＮＡの３７ｎｇより、市販キット
（ｃＤＮＡクローニングシステムλｇｔ１０・アダプタ
ー法：Amersham社製及び Gigapack II Gold ： Stratag
ene 社製）により、２０５０００ｐｆｕのλｇｔ１０ｃ
ＤＮＡライブラリーを作成した。
【００４８】このライブラリーの１１００００クローン
で、大腸菌ＭＮ５１４を宿主にプラークを作り、ハイボ
ンドＮ＋フィルター（Amersham社製）に固定した。これ
を５×ＳＳＣ（ＳＳＣ：150mM NaCl-15mM クエン酸ナト
リウム(pH7.0) ）、１０×デンハルト（Denhardt's) 溶
液（デンハルト溶液：0.02% 牛血清アルブミン−0.02%
フィコール−0.02% ポリビニルピロリドン）、０．１％
ＳＤＳ及び１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡの溶液中で
６５℃約２０時間のプレハイブリダイゼーションを行な
った。更に、５×ＳＳＣ、１０×デンハルト溶液、０．
１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ及びプロ
ーブの溶液中で、６５℃約２０時間のハイブリダイゼー
ションを行なった。
で、大腸菌ＭＮ５１４を宿主にプラークを作り、ハイボ
ンドＮ＋フィルター（Amersham社製）に固定した。これ
を５×ＳＳＣ（ＳＳＣ：150mM NaCl-15mM クエン酸ナト
リウム(pH7.0) ）、１０×デンハルト（Denhardt's) 溶
液（デンハルト溶液：0.02% 牛血清アルブミン−0.02%
フィコール−0.02% ポリビニルピロリドン）、０．１％
ＳＤＳ及び１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡの溶液中で
６５℃約２０時間のプレハイブリダイゼーションを行な
った。更に、５×ＳＳＣ、１０×デンハルト溶液、０．
１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ及びプロ
ーブの溶液中で、６５℃約２０時間のハイブリダイゼー
ションを行なった。
【００４９】尚、プローブは、４０ｎｇのＮａ８８０Ｄ
ＮＡフラグメントをマルチ・プライマーラベルキット
（Amersham社製）で標識したものを用いた。
ＮＡフラグメントをマルチ・プライマーラベルキット
（Amersham社製）で標識したものを用いた。
【００５０】ハイブリダイゼーション後、フィルターを
２×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの溶液中、室温１５分間
２回、０．１×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの溶液中で６
５℃３０分間２回、それぞれ洗浄した。風乾後、Ｘ線フ
ィルム（XAR-5 ：Kodak 社製) に露光した。フィルム上
のポジティブシグナルの位置に相当するプラーク領域を
かき取り、ＳＭ溶液に懸濁し、ファージ溶液とした。こ
のファージ溶液を用いて、再度上記の条件によりプラー
クハイブリダイゼーションを行ない、３８個のポジティ
ブクローンを単離した。この３８個のファージ溶液の一
部を煮沸水浴中で２分間インキュベートし、λｇｔ１０
プライマー及びＬＡ−ＰＣＲキット（宝酒造社製）によ
りＰＣＲを行なった。尚、ＰＣＲは、９４℃−３０秒、
５５℃−３０秒、７２℃−３０秒（extension timeは各
サイクルにつき４秒）の条件で３０サイクル行なった。
ＰＣＲ産物は、クロロホルム抽出後、１％アガロースゲ
ル電気泳動にかけ、ｃＤＮＡクローンを幾つか選びその
塩基配列を決定した（Sequencing PCR Kit：東洋紡社
製）。
２×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの溶液中、室温１５分間
２回、０．１×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの溶液中で６
５℃３０分間２回、それぞれ洗浄した。風乾後、Ｘ線フ
ィルム（XAR-5 ：Kodak 社製) に露光した。フィルム上
のポジティブシグナルの位置に相当するプラーク領域を
かき取り、ＳＭ溶液に懸濁し、ファージ溶液とした。こ
のファージ溶液を用いて、再度上記の条件によりプラー
クハイブリダイゼーションを行ない、３８個のポジティ
ブクローンを単離した。この３８個のファージ溶液の一
部を煮沸水浴中で２分間インキュベートし、λｇｔ１０
プライマー及びＬＡ−ＰＣＲキット（宝酒造社製）によ
りＰＣＲを行なった。尚、ＰＣＲは、９４℃−３０秒、
５５℃−３０秒、７２℃−３０秒（extension timeは各
サイクルにつき４秒）の条件で３０サイクル行なった。
ＰＣＲ産物は、クロロホルム抽出後、１％アガロースゲ
ル電気泳動にかけ、ｃＤＮＡクローンを幾つか選びその
塩基配列を決定した（Sequencing PCR Kit：東洋紡社
製）。
【００５１】かくして得たＮａ８８０に相当する全長ク
ローン「ｎｂｌ−８」の５′側と３′側の配列の確認に
より、図１に示す塩基配列が決定された。
ローン「ｎｂｌ−８」の５′側と３′側の配列の確認に
より、図１に示す塩基配列が決定された。
【００５２】（２）ＤＮＡフラグメンテーションの分
析：組織を溶解緩衝液（50mM Tris-Hcl(pH8.0), 10mM E
DTA, 0.5% SDS 中でホモジナイズ後、２００μｇ／ｍｌ
のプロテイネースＫ（Proteinase K）存在下に５０℃で
一晩インキュベートした。ＤＮＡは、フェノール・クロ
ロホルムにより抽出し、エタノール沈殿後、ＲＮａｓｅ
ＡによりＲＮＡを分解し、ＤＮＡフラグメンテーション
の解析に用いた。
析：組織を溶解緩衝液（50mM Tris-Hcl(pH8.0), 10mM E
DTA, 0.5% SDS 中でホモジナイズ後、２００μｇ／ｍｌ
のプロテイネースＫ（Proteinase K）存在下に５０℃で
一晩インキュベートした。ＤＮＡは、フェノール・クロ
ロホルムにより抽出し、エタノール沈殿後、ＲＮａｓｅ
ＡによりＲＮＡを分解し、ＤＮＡフラグメンテーション
の解析に用いた。
【００５３】ＤＮＡ１０μｇを４０ｍＭトリスアセテー
ト（Tris-acetate）（pH7.8 ）及び１ｍＭ ＥＤＴＡか
らなる１％アガロース・ゲルで電気泳動を行ない、泳動
終了後のゲルの写真のネガをデンシトメーターで測定す
ることによりＤＮＡフラグメンテーションの定量化を行
なった。
ト（Tris-acetate）（pH7.8 ）及び１ｍＭ ＥＤＴＡか
らなる１％アガロース・ゲルで電気泳動を行ない、泳動
終了後のゲルの写真のネガをデンシトメーターで測定す
ることによりＤＮＡフラグメンテーションの定量化を行
なった。
【００５４】（３）ノーザンブロット分析：全ＲＮＡ
は、酸性グアニジウム・チオシアネート・フェノール・
クロロホルム抽出による１段階抽出法（Anal. Bioche
m., 162, 156-159 (1987) ）に従って調整した。
は、酸性グアニジウム・チオシアネート・フェノール・
クロロホルム抽出による１段階抽出法（Anal. Bioche
m., 162, 156-159 (1987) ）に従って調整した。
【００５５】即ち、組織を４Ｍグアニジウム・イソチオ
シアネート−２５ｍＭクエン酸ナトリウム−０．２Ｍ酢
酸ナトリウム（pH4.0 ）でホモジナイズ後、１容量のフ
ェノール及び 1/5容量のクロロホルム−イソアミルアル
コール（４９：１）を加え振盪後、遠心して得られた水
層にイソプロパノール（１容量）を加え、遠心によりＲ
ＮＡペレットを得た。これを再度、４Ｍグアニジウム・
イソチオシアネート−２５ｍＭクエン酸ナトリウム−
０．２Ｍ酢酸ナトリウム（pH4.0 ）に溶解し、１容量の
イソプロパノールを加え、遠心によりＲＮＡペレットを
得、８０％エタノールで洗浄後、乾燥し、水に溶解し
た。
シアネート−２５ｍＭクエン酸ナトリウム−０．２Ｍ酢
酸ナトリウム（pH4.0 ）でホモジナイズ後、１容量のフ
ェノール及び 1/5容量のクロロホルム−イソアミルアル
コール（４９：１）を加え振盪後、遠心して得られた水
層にイソプロパノール（１容量）を加え、遠心によりＲ
ＮＡペレットを得た。これを再度、４Ｍグアニジウム・
イソチオシアネート−２５ｍＭクエン酸ナトリウム−
０．２Ｍ酢酸ナトリウム（pH4.0 ）に溶解し、１容量の
イソプロパノールを加え、遠心によりＲＮＡペレットを
得、８０％エタノールで洗浄後、乾燥し、水に溶解し
た。
【００５６】全ＲＮＡのアガロース電気泳動は、２０ｍ
Ｍ ３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸（3-
(N-Morphorino)-propane sulfonic acid）（pH7.0 ）−
５ｍＭ酢酸ナトリウム−１ｍＭ ＥＤＴＡ−２．２Ｍホ
ルムアルデヒドを含む１．２％アガロース・ゲルで２０
μｇのＲＮＡを用いて行なった。電気泳動終了後、ニト
ロセルロース・フィルターへＲＮＡを移した。
Ｍ ３−（Ｎ−モルフォリノ）プロパンスルホン酸（3-
(N-Morphorino)-propane sulfonic acid）（pH7.0 ）−
５ｍＭ酢酸ナトリウム−１ｍＭ ＥＤＴＡ−２．２Ｍホ
ルムアルデヒドを含む１．２％アガロース・ゲルで２０
μｇのＲＮＡを用いて行なった。電気泳動終了後、ニト
ロセルロース・フィルターへＲＮＡを移した。
【００５７】ハイブリダイゼーションは、５０％ホルム
アミド−２５ｍＭＫＨ2 ＰＯ4 （pH7.4 ）−５×ＳＳＣ
−５×デンハルト溶液及び２００μｇ／ｍｌサケ精子Ｄ
ＮＡの溶液中で、32Ｐ−標識ＤＮＡプローブ（約２×１
０6 cpm/ml、４２℃で一晩行なった。
アミド−２５ｍＭＫＨ2 ＰＯ4 （pH7.4 ）−５×ＳＳＣ
−５×デンハルト溶液及び２００μｇ／ｍｌサケ精子Ｄ
ＮＡの溶液中で、32Ｐ−標識ＤＮＡプローブ（約２×１
０6 cpm/ml、４２℃で一晩行なった。
【００５８】尚、32Ｐ−標識ＤＮＡプローブは、ランダ
ム・プライマー法にて［α−32Ｐ］デオキシアデノシン
三リン酸を用いて調製した。用いたＤＮＡプローブは、
次のとうりである。
ム・プライマー法にて［α−32Ｐ］デオキシアデノシン
三リン酸を用いて調製した。用いたＤＮＡプローブは、
次のとうりである。
【００５９】ｎｂｌプローブ：Ｎａ８８０の０．９ｋｂ
のＰｓｔＩ断片。
のＰｓｔＩ断片。
【００６０】ｍｙｃプローブ：９ｋｂのヒトｍｙｃ染色
体ＤＮＡクローンに由来する１．３ｋｂのＣｌａＩ−Ｅ
ｃｏＲＩ断片。
体ＤＮＡクローンに由来する１．３ｋｂのＣｌａＩ−Ｅ
ｃｏＲＩ断片。
【００６１】ユビキチンプローブ：ヒトＵｂＢ遺伝子の
１．０４ｋｂのＤｒａＩ−ＢａｍＨＩ断片。
１．０４ｋｂのＤｒａＩ−ＢａｍＨＩ断片。
【００６２】１８ＳリボゾームＤＮＡプローブ：プラス
ミドｐＸ１ｒ１４Ｆに由来する０．７７ｋｂのＰｓｔＩ
断片。
ミドｐＸ１ｒ１４Ｆに由来する０．７７ｋｂのＰｓｔＩ
断片。
【００６３】ハイブリダイゼーション後、フィルターを
１×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳ、続いて０．１×ＳＳＣ−
０．１％ＳＤＳ溶液中で６５℃３０分間それぞれ洗浄し
た。洗浄後、増感スクリーンを用いて−７０℃でオート
ラジオグラフィーを行なった。ハイブリダイゼーション
のシグナルの相対的強度は、レーザー・デンシトメータ
ーにより定量化し、またホスホイメージャー分析機も使
用した。
１×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳ、続いて０．１×ＳＳＣ−
０．１％ＳＤＳ溶液中で６５℃３０分間それぞれ洗浄し
た。洗浄後、増感スクリーンを用いて−７０℃でオート
ラジオグラフィーを行なった。ハイブリダイゼーション
のシグナルの相対的強度は、レーザー・デンシトメータ
ーにより定量化し、またホスホイメージャー分析機も使
用した。
【００６４】（４）マウス組織におけるアポトーシスと
ｎｂｌ遺伝子発現：マウスの種々の正常組織と腫瘍組織
について、アポトーシスの程度を前記ＤＮＡフラグメン
テーションの分析に従い調べた。
ｎｂｌ遺伝子発現：マウスの種々の正常組織と腫瘍組織
について、アポトーシスの程度を前記ＤＮＡフラグメン
テーションの分析に従い調べた。
【００６５】正常組織として、４週令のマウス（Balb/
c、オス）より摘出した小脳、胸腺、肺及び肝臓組織を
採用した。腫瘍組織としては、変異を有するヒトｃ−Ｈ
−ｒａｓ遺伝子でトランスフォームしたマウスＮＩＨ３
Ｔ３細胞由来のフィブロザルコーマ（Fibrosarcoma）株
１−６並びに１−５及びリンパ腫の細胞株ＡＫＲ−２を
用いた。フィブロザルコーマ１−６及び１−５は、オス
のヌードマウスの皮下に植えられた。一方、ＡＫＲ−２
はＡＫＲマウスの腹腔に植えられた。
c、オス）より摘出した小脳、胸腺、肺及び肝臓組織を
採用した。腫瘍組織としては、変異を有するヒトｃ−Ｈ
−ｒａｓ遺伝子でトランスフォームしたマウスＮＩＨ３
Ｔ３細胞由来のフィブロザルコーマ（Fibrosarcoma）株
１−６並びに１−５及びリンパ腫の細胞株ＡＫＲ−２を
用いた。フィブロザルコーマ１−６及び１−５は、オス
のヌードマウスの皮下に植えられた。一方、ＡＫＲ−２
はＡＫＲマウスの腹腔に植えられた。
【００６６】ＤＮＡフラグメンテーションを調べた結
果、正常組織では認められず、フィブロザルコーマ１−
６では、腫瘍の増殖後期及び１−６を複数ヶ所に植えた
場合に初期の増殖期に認められた。また１−５では程度
は弱いが、はっきりとＤＮＡフラグメンテーションが認
められた。ＡＫＲ−２においてもＤＮＡフラグメンテー
ションが認められた。
果、正常組織では認められず、フィブロザルコーマ１−
６では、腫瘍の増殖後期及び１−６を複数ヶ所に植えた
場合に初期の増殖期に認められた。また１−５では程度
は弱いが、はっきりとＤＮＡフラグメンテーションが認
められた。ＡＫＲ−２においてもＤＮＡフラグメンテー
ションが認められた。
【００６７】一方、上記の各種組織におけるｎｂｌ遺伝
子の発現をノーザン・ブロット法で解析した結果、正常
組織（小脳、肝臓、胸腺、肺）ではその発現が低いこと
が認められた。これに対して、アポトーシスが誘導され
ている、フィブロザルコーマ１−５及びＡＫＲ−２並び
に１−６の腫瘍小塊（small nodule）においては、いず
れもｎｂｌｍＲＮＡの発現が高いことが、また増殖後期
の１−６においても上昇していることが認められた。
子の発現をノーザン・ブロット法で解析した結果、正常
組織（小脳、肝臓、胸腺、肺）ではその発現が低いこと
が認められた。これに対して、アポトーシスが誘導され
ている、フィブロザルコーマ１−５及びＡＫＲ−２並び
に１−６の腫瘍小塊（small nodule）においては、いず
れもｎｂｌｍＲＮＡの発現が高いことが、また増殖後期
の１−６においても上昇していることが認められた。
【００６８】以上のことから、ｎｂｌ遺伝子の発現とＤ
ＮＡフラグメンテーションの関係は、必ずしも比例的で
はないが、アポトーシスの過程においてこの遺伝子の発
現が関与していると考えられる。
ＮＡフラグメンテーションの関係は、必ずしも比例的で
はないが、アポトーシスの過程においてこの遺伝子の発
現が関与していると考えられる。
【００６９】（５）グルココルチコイド誘導アポトーシ
スとｎｂｌ遺伝子の発現： ２５０μｇのデキサメサゾンをＰＢＳに溶解し、４
週令のオスのＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔に投与した。投
与前（０時間）、投与３、６、９、１２、１８、２４及
び４８時間後に胸腺を摘出し、前記に従いＤＮＡフラグ
メンテーションの解析を行なった。また、前記に従いｎ
ｂｌ、ｍｙｃ及びユビキチンのｍＲＮＡ発現をノーザン
・ブロット法で分析した。
スとｎｂｌ遺伝子の発現： ２５０μｇのデキサメサゾンをＰＢＳに溶解し、４
週令のオスのＢａｌｂ／ｃマウスの腹腔に投与した。投
与前（０時間）、投与３、６、９、１２、１８、２４及
び４８時間後に胸腺を摘出し、前記に従いＤＮＡフラグ
メンテーションの解析を行なった。また、前記に従いｎ
ｂｌ、ｍｙｃ及びユビキチンのｍＲＮＡ発現をノーザン
・ブロット法で分析した。
【００７０】その結果のまとめを図２に示す。図２にお
いて黒丸はＤＮＡフラグメンテーションの結果（％）
を、白丸はｎｂｌｍＲＮＡのレベルを、黒三角はｍｙｃ
ｍＲＮＡのレベルをそれぞれ示す。
いて黒丸はＤＮＡフラグメンテーションの結果（％）
を、白丸はｎｂｌｍＲＮＡのレベルを、黒三角はｍｙｃ
ｍＲＮＡのレベルをそれぞれ示す。
【００７１】ＤＮＡフラグメンテーションは、デキサメ
サゾン投与９後時間後にピークに達し、その後減少し、
２４時間後にはわずかに認められる程度となった。ｎｂ
ｌｍＲＮＡの発現は、デキサメサゾン投与後著しく増大
し、６時間後にピークに達し、その後の３時間で急激に
減少し、そして２４時間後には未処理のマウス胸腺に見
られるレベルに回復した。ｍｙｃｍＲＮＡの発現は、デ
キサメサゾン投与後に減少し、その後ＤＮＡフラグメン
テーションが減少（９時間以降）するにつれて上昇し
た。
サゾン投与９後時間後にピークに達し、その後減少し、
２４時間後にはわずかに認められる程度となった。ｎｂ
ｌｍＲＮＡの発現は、デキサメサゾン投与後著しく増大
し、６時間後にピークに達し、その後の３時間で急激に
減少し、そして２４時間後には未処理のマウス胸腺に見
られるレベルに回復した。ｍｙｃｍＲＮＡの発現は、デ
キサメサゾン投与後に減少し、その後ＤＮＡフラグメン
テーションが減少（９時間以降）するにつれて上昇し
た。
【００７２】 アクチノマイシンＤは、インビボ（in
vivo ）では特定の臓器、例えば腎臓にすぐに取り込ま
れ尿として排泄される。従って、血中でのアクチノマイ
シンＤの効果濃度も、投与後すぐに減少する。このこと
は、アクチノマイシンＤを invivoで一過的な阻害剤と
して使用できることを示している。
vivo ）では特定の臓器、例えば腎臓にすぐに取り込ま
れ尿として排泄される。従って、血中でのアクチノマイ
シンＤの効果濃度も、投与後すぐに減少する。このこと
は、アクチノマイシンＤを invivoで一過的な阻害剤と
して使用できることを示している。
【００７３】ｎｂｌｍＲＮＡの前記一過的な発現が、デ
キサメサゾン誘導胸腺アポトーシスに関係するかどうか
をアクチノマイシンＤを用いて調べた。
キサメサゾン誘導胸腺アポトーシスに関係するかどうか
をアクチノマイシンＤを用いて調べた。
【００７４】即ち、アクチノマイシンＤを水に溶解し、
体重１ｇ当たり１．５μｇを腹腔に、デキサメサゾン投
与の１５分前、３時間後、５．７５時間後又は８時間後
に、それぞれ投与した。デキサメサゾン投与９時間後に
胸腺を摘出し、ＤＮＡフラグメンテーションの分析を行
なった。
体重１ｇ当たり１．５μｇを腹腔に、デキサメサゾン投
与の１５分前、３時間後、５．７５時間後又は８時間後
に、それぞれ投与した。デキサメサゾン投与９時間後に
胸腺を摘出し、ＤＮＡフラグメンテーションの分析を行
なった。
【００７５】その結果、デキサメサゾン投与の５．７５
時間後にアクチノマイシンＤを投与すると、ＤＮＡフラ
グメンテーションが強く阻害された。
時間後にアクチノマイシンＤを投与すると、ＤＮＡフラ
グメンテーションが強く阻害された。
【００７６】一方、アクチノマイシンＤをデキサメサゾ
ン投与時及び５．５時間後に投与し、デキサメサゾン投
与６時間後に胸腺を摘出し前記に従いｎｂｌｍＲＮＡ発
現を分析した。
ン投与時及び５．５時間後に投与し、デキサメサゾン投
与６時間後に胸腺を摘出し前記に従いｎｂｌｍＲＮＡ発
現を分析した。
【００７７】その結果、アクチノマイシンＤをデキサメ
サゾン投与の５．５時間後に投与すると、ｎｂｌｍＲＮ
Ａの発現が抑制された。従って、グルココルチコイド誘
導胸腺の in vivoアポトーシスには、ｎｂｌ遺伝子の一
過的な発現が関与していると考えられた。
サゾン投与の５．５時間後に投与すると、ｎｂｌｍＲＮ
Ａの発現が抑制された。従って、グルココルチコイド誘
導胸腺の in vivoアポトーシスには、ｎｂｌ遺伝子の一
過的な発現が関与していると考えられた。
【００７８】 以上の結果によれば以下のことが分か
る。
る。
【００７９】マウスにステロイド剤であるデキサメサゾ
ンを投与することにより生じる胸腺のアポトーシスで
は、ｎｂｌ遺伝子の一過的な発現（一時的に急激な増大
とその後の減少）後に、アポトーシスの特徴であるＤＮ
Ａフラグメンテーションが認められる。この結果によれ
ば、アポトーシスに至る過程においてｎｂｌ遺伝子（遺
伝子産物）の一時的な関与が必要であると考えられる。
ンを投与することにより生じる胸腺のアポトーシスで
は、ｎｂｌ遺伝子の一過的な発現（一時的に急激な増大
とその後の減少）後に、アポトーシスの特徴であるＤＮ
Ａフラグメンテーションが認められる。この結果によれ
ば、アポトーシスに至る過程においてｎｂｌ遺伝子（遺
伝子産物）の一時的な関与が必要であると考えられる。
【００８０】また、正常組織では、ｎｂｌ遺伝子の発現
が低いのに対し腫瘍組織・細胞では同遺伝子の発現が高
い場合が認められる。このことは、ｎｂｌ遺伝子の発現
が高い腫瘍組織・細胞では、上記胸腺のアポトーシスに
至る過程でのｎｂｌ遺伝子の一過的な発現時のピーク時
に相当し、該遺伝子の発現が維持されている為にアポト
ーシスが誘導されないものと考えられる。従って、腫瘍
組織・細胞では、この場合ｎｂｌ遺伝子の発現を抑制す
れば、胸腺の場合と同様に、腫瘍組織・細胞にアポトー
シスを誘導できるものと考えられる。
が低いのに対し腫瘍組織・細胞では同遺伝子の発現が高
い場合が認められる。このことは、ｎｂｌ遺伝子の発現
が高い腫瘍組織・細胞では、上記胸腺のアポトーシスに
至る過程でのｎｂｌ遺伝子の一過的な発現時のピーク時
に相当し、該遺伝子の発現が維持されている為にアポト
ーシスが誘導されないものと考えられる。従って、腫瘍
組織・細胞では、この場合ｎｂｌ遺伝子の発現を抑制す
れば、胸腺の場合と同様に、腫瘍組織・細胞にアポトー
シスを誘導できるものと考えられる。
【図１】本発明アポトーシス遺伝子の有する塩基配列及
びこれによりコードされる対応アミノ酸配列を示す。
びこれによりコードされる対応アミノ酸配列を示す。
【図２】本発明実施例（５）のに従うデキサメサゾン
誘導アポトーシスをＤＮＡフラグメンテーション、ｎｂ
ｌｍＲＮの発現レベル及びｍｙｃｍＲＮＡの発現レベル
にて調べた結果を示すグラフである。
誘導アポトーシスをＤＮＡフラグメンテーション、ｎｂ
ｌｍＲＮの発現レベル及びｍｙｃｍＲＮＡの発現レベル
にて調べた結果を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (71)出願人 594169798 ナオラ ヒロト オーストラリア国 エー．シー．ティ. 2611 ウエストン ヒルダーストリート 89 (72)発明者 進藤 裕 徳島県板野郡松茂町中喜来稲本68−９ (72)発明者 西田 勉 徳島県鳴門市大津町大代245−１ (72)発明者 足立 正一 群馬県高崎市石原町3493−９ (72)発明者 直良 博人 オーストラリア国 エー．シー．ティ. 2611 ウエストン ヒルダーストリート 89
Claims (1)
- 【請求項１】図１に示されるアミノ酸配列をコードする
塩基配列を含むことを特徴とするアポトーシス関与遺伝
子。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6249226A JPH1189573A (ja) | 1994-10-14 | 1994-10-14 | アポトーシス関与遺伝子 |
| KR1019970702429A KR970707282A (ko) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | 세포소멸 관련된 유전자(gene participating in apoptosis) |
| PCT/JP1995/002090 WO1996012017A1 (fr) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | Gene participant a l'apoptose |
| EP95934284A EP0781844A1 (en) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | Gene participating in apoptosis |
| CA002202628A CA2202628A1 (en) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | Apoptosis-associated gene |
| AU36733/95A AU3673395A (en) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | Gene participating in apoptosis |
| CN95196609A CN1171133A (zh) | 1994-10-14 | 1995-10-12 | 细胞凋亡相关基因 |
| MXPA/A/1997/002754A MXPA97002754A (en) | 1994-10-14 | 1997-04-14 | Gene associated with the apopto |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6249226A JPH1189573A (ja) | 1994-10-14 | 1994-10-14 | アポトーシス関与遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1189573A true JPH1189573A (ja) | 1999-04-06 |
Family
ID=17189802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6249226A Pending JPH1189573A (ja) | 1994-10-14 | 1994-10-14 | アポトーシス関与遺伝子 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0781844A1 (ja) |
| JP (1) | JPH1189573A (ja) |
| KR (1) | KR970707282A (ja) |
| CN (1) | CN1171133A (ja) |
| AU (1) | AU3673395A (ja) |
| CA (1) | CA2202628A1 (ja) |
| WO (1) | WO1996012017A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7983477B2 (en) * | 2003-12-18 | 2011-07-19 | The University Of Durham | Method and apparatus for generating a stereoscopic image |
| JP4936417B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2012-05-23 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | ｐ５３依存性新規アポトーシス関連タンパク質、およびアポトーシス調節剤のスクリーニング方法 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6160106A (en) * | 1993-10-12 | 2000-12-12 | Yeda Research & Development Co., Ltd. | Tumor suppressor genes, proteins encoded thereby and use of said genes and proteins |
| GB9620028D0 (en) * | 1996-09-26 | 1996-11-13 | Ludwig Inst Cancer Res | Factors which interact with oncoproteins |
| CN1065876C (zh) * | 1998-07-22 | 2001-05-16 | 南京医科大学 | 细胞骨架样基因的编码蛋白特异性抗体 |
| CN107868784B (zh) * | 2017-11-09 | 2021-06-15 | 贵州医科大学 | 一种能降低氟致细胞凋亡的shRNA及其应用 |
| CN112048506B (zh) * | 2020-08-20 | 2021-05-11 | 华南师范大学 | BmKRP基因的dsRNA及其在害虫防治中的应用 |
| CN112480232B (zh) * | 2020-12-14 | 2022-07-15 | 上海交通大学 | 一种生物活性肽vsladlqndevafr及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0633934A1 (en) * | 1992-04-02 | 1995-01-18 | Imperial Cancer Research Technology Limited | Modified cells and method of treatment |
| IT1255770B (it) * | 1992-05-22 | 1995-11-15 | Consiglio Nazionale Ricerche | Oligonucleotidi antisenso ad attivita' antitumorale, composizioni farmaceutiche che li comprendono, e loro impieghi |
| US5646008A (en) * | 1993-06-22 | 1997-07-08 | The Regent Of The University Of Michigan | Vertebrate apoptosis gene: compositions and methods |
| US5539094A (en) * | 1993-11-12 | 1996-07-23 | La Jolla Cancer Research Foundation | DNA encoding Bcl-2-associated proteins |
| WO1995015084A1 (en) * | 1993-11-30 | 1995-06-08 | Lxr Biotechnology Inc. | Novel apoptosis-modulating proteins, dna encoding the proteins and methods of use thereof |
-
1994
- 1994-10-14 JP JP6249226A patent/JPH1189573A/ja active Pending
-
1995
- 1995-10-12 CA CA002202628A patent/CA2202628A1/en not_active Abandoned
- 1995-10-12 EP EP95934284A patent/EP0781844A1/en not_active Withdrawn
- 1995-10-12 CN CN95196609A patent/CN1171133A/zh active Pending
- 1995-10-12 AU AU36733/95A patent/AU3673395A/en not_active Abandoned
- 1995-10-12 WO PCT/JP1995/002090 patent/WO1996012017A1/ja not_active Application Discontinuation
- 1995-10-12 KR KR1019970702429A patent/KR970707282A/ko not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4936417B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2012-05-23 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | ｐ５３依存性新規アポトーシス関連タンパク質、およびアポトーシス調節剤のスクリーニング方法 |
| US7983477B2 (en) * | 2003-12-18 | 2011-07-19 | The University Of Durham | Method and apparatus for generating a stereoscopic image |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9702754A (es) | 1998-12-31 |
| KR970707282A (ko) | 1997-12-01 |
| EP0781844A1 (en) | 1997-07-02 |
| AU3673395A (en) | 1996-05-06 |
| WO1996012017A1 (fr) | 1996-04-25 |
| CN1171133A (zh) | 1998-01-21 |
| CA2202628A1 (en) | 1996-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Heinzel et al. | Molecular cloning and expression of cDNA for human antileukoprotease from cervix uterus | |
| JP4106391B2 (ja) | 神経細胞アポトーシスの抑制タンパクとその遺伝子配列、並びに脊髄性筋萎縮症の原因となる当該遺伝子の突然変異 | |
| WO1998004689A1 (en) | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease | |
| US20030190639A1 (en) | Genes involved in intestinal inflamatory diseases and use thereof | |
| JP4146353B2 (ja) | マウス精子形成遺伝子とヒト男性不妊関連遺伝子、ならびにこれらを用いた診断システム | |
| JPH1189573A (ja) | アポトーシス関与遺伝子 | |
| JP2002519027A (ja) | 網膜芽腫結合タンパク質（ｒｂｐ−７）をコードする核酸および前記核酸に関連する多型マーカー | |
| EP1323732B9 (en) | Beta-catenin nuclear localizing protein | |
| Fiucci et al. | Genomic organization and expression of mouse Tpt1 gene☆ | |
| US6555670B1 (en) | Testis-specific gene | |
| Eriksson et al. | A mammalian radial spokehead-like gene, RSHL1, at the myotonic dystrophy-1 locus | |
| US20070128645A1 (en) | Use of KIAA0172 gene in treatment and diagnosis of diseases as well as in pharmaceutical development | |
| EP1201754A1 (en) | Apoptosis-associated factor | |
| JP4297209B2 (ja) | Ｋｉａａ０１７２遺伝子の疾病治療及び診断並びに創薬への利用 | |
| WO2000043522A1 (fr) | Gene a l'origine du syndrome de rothmund-thomson et produit genique | |
| KR100644364B1 (ko) | 파킨슨병 유전자 마커 및 이를 이용한 파킨슨병 진단킷트 | |
| Iwano et al. | Molecular cloning and expression of a novel peptide (LN1) gene: reduced expression in the renal cortex of lupus nephritis in MRL/lpr mouse | |
| JPH1132766A (ja) | ヒトｂａｉ遺伝子及びその利用 | |
| US6677118B1 (en) | Process for the determination of CTp11 and for determining whether a tumor sample has metastatic potential | |
| AU712403B2 (en) | Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease | |
| JPH0889257A (ja) | アポトーシス関与遺伝子 | |
| CA2468145A1 (en) | Transcriptional factors for the huntington's disease gene | |
| CA2493263A1 (en) | Novel gene associated with rheumatoid arthritis | |
| Lips et al. | The molecular basis of polypeptide hormone production by medullary thyroid cancer | |
| JPH10234378A (ja) | ミオシン軽鎖結合サブユニット類縁タンパク質およびその遺伝子 |