JPH11511462A - 骨粗鬆症の処置に有用な化合物の経鼻投与用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 そのアミノ酸残基（２２−３１）が両親媒性α−らせんを形成しており、該残基（２２−３１）が配列番号８５、８６、２６、２７、２８、２９および３０から選択されるものである、ＰＴＨのまたはＰＨＴrpの各生理学的に活性な切断類似体、またはそれらの塩、の有効量；ジメチル−β−シクロデキストリンおよび胆汁酸界面活性剤からなる群から選択される吸収増強剤；および水、を含んでなる、骨粗鬆症の処置に有用な化合物の経鼻投与用医薬組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 骨粗鬆症の処置に有用な化合物の経鼻投与用医薬組成物発明の背景 a ）発明の分野 本発明は、ある種の新規パラチロイドホルモン類似体およびパラチロイドホル モン関連ペプチド類似体の治療有効量の経鼻投与による骨粗鬆症の処置用医薬組 成物に関する。b ）関連技術の記載 骨粗鬆症は、代謝性骨疾患の最も一般的な形態であり、徴候的骨折段階の骨減 少（オステオペニア）と考えることができる。骨粗鬆症は、多くの根元的疾患か ら続発的に起こり得るが、全ケースの９０％が特発性であると思われる。閉経後 の女性は、特に、特発性骨粗鬆症の危険がある（閉経後またはＩ型骨粗鬆症）。 特発性骨粗鬆症の危険性の高いその他のグループは、男女いずれかの老年者であ る（老人性またはII型骨粗鬆症）。骨粗鬆症は、コルチコステロイド使用、固定 または長期臥床、アルコール中毒、糖尿病、性腺毒性化学療法、過プロラクチン 血症、神経性食欲不振、原発性および続発性無月経、および卵巣摘出にも関連し ている。 様々な形態の骨粗鬆症において、骨減少が機械的不全に到達した結果として骨 折が頻繁に起こる。閉経後骨粗鬆症は手首および背骨の骨折を特徴とするのに対 し、老人性骨粗鬆症の方では大腿骨頸骨折が顕著な特徴であるようである。 骨粗鬆症において骨が減少する機構は、骨格が再生するプロセスの不均衡に関 連すると考えられている。このプロセスは、骨改造（リモデリング）と呼ばれる 。これは、一連の別個の活性ポケットで起こる。これらのポケットは、骨吸収部 位としての所定の骨表面上の骨基質内に自発的に現れる。破骨細胞（骨溶解性ま たは骨吸収性の細胞）は、一般に一定寸法の骨の一部の吸収を担う。この吸収プ ロセスの次に、骨芽細胞（骨形成細胞）が現れ、次いで、破骨細胞が残した窩に 新たな骨を補充するのである。 健康な成人対象では、破骨細胞および骨芽細胞が形成される速度は、骨形成お よび骨吸収が均衡であるような速度である。しかしながら、骨粗鬆症では、骨リ モデリングプロセスの不均衡が生じ、骨は形成されるよりも早い速度で減少する ことになる。この不均衡は、加齢につれてほとんどの個体である程度起こるが、 閉経後骨粗鬆症または卵巣摘出後の骨粗鬆症では、非常に深刻であり、より若い 年齢で起こる。 Adachi等は、Seminars in Arthritis and Rheumatism,22:6,375-84（１９９３ 年６月）において、コルチコステロイド誘導骨粗鬆症の病態生理学に関する多く の相反するデータにもかかわらず、骨形成の相対的減少および骨吸収の相対的増 加のあることが全体的に同意されたと報告している。骨折および骨壊死をもたら す骨減少は、コルチコステロイド療法の結果、頻繁に起こる。骨減少はコルチコ ステロイド療法の最初の６ないし１２カ月以内に迅速に起こり、また骨減少速度 とコルチコステロイド用量との間に緊密な関係があるらしいという証拠がある。 人間は等しくコルチコステロイドの作用を受け易い。骨折および骨壊死の推定罹 病率は、３０から５０％の範囲である。 骨粗鬆症の処置は、更なる骨減少の遅延またはより望ましくは骨量の正味増加 の産出のいずれかを目標として多くの試みがなされてきた。エストロゲンおよび ビスホスホネート類などのある種の薬剤類は、骨粗鬆症における更なる骨減少を 遅らせるようである。骨減少を遅らせる薬剤類は、骨吸収継続時間と骨形成継続 時間が別個であるため、骨量を増大（３ないし７％オーダー）するように見える 場合もある。しかしながら、この見かけの増大は、時間制限されており、進行性 ではなく、また“リモデリング空間”の低減に起因する。更に、吸収と形成が緊 密に関係しているため、骨吸収を妨げる処置は、結局、骨形成も妨げることにな る。 パラチロイドホルモン（ＰＴＨ）による処置が骨回転増大および陽性カルシウ ム均衡の両方を導くことが示唆されている。しかしながら、ヒトの臨床治験では 、海面骨の増加は皮質骨の減少により相殺されるので骨全体での正味増加はない ことが示された。 Hefti等は、Clinical Science 62,389-396(1982)において、ｂＰＴＨ（１−８ ４）またはｈＰＴＨ（１−３４）のいずれかを毎日皮下投与すると、骨正常成体 雌ラットおよび骨粗鬆症成体雌ラットにおける個々の骨の全身カルシウム重量お よび骨灰重量を増大することを報告している。 Liu等は、J.Bone Miner.Res.6:10,1071-1080(1991)において、成体雌ラットの 卵巣摘出により、骨芽細胞および海面破骨細胞数の顕著な増大を伴い、近位脛骨 の骨幹端において海面骨割合の４７％の減少がもたらされたことを指摘している 。ｈＰＴＨ（１−３４）の毎日皮下注射は、海面骨の減少を完全に一変させ、模 擬操作対照の海面骨量を上回る海面骨量をもたらした。 Hock等は、J.Bone Min.Res.7:1,65-71(1992)において、ｈＰＴＨ（１−３４） を健康成体雄ラットに１２日間毎日皮下注射したところ、海面骨および皮質骨カ ルシウムおよび乾燥重量を増大したことを報告している。全骨量、海面骨容量、 海面骨厚および数、および骨芽細胞表面が増した。 哺乳類パラチロイドホルモン、例えば、ヒト（ｈＰＴＨ）、ウシ（ｂＰＴＨ） 、およびブタ（ｐＰＴＨ）は、８４アミノ酸残基の単一ポリペプチド鎖であり、 分子量およそ９５００を有する。生物学的活性は、最低限必要とされると思われ る残基（１−３４）を有するＮ−末端部分に関連する。 ヒトＰＴＨのＮ−末端セグメントは、ウシおよびブタのホルモンのＮ−末端セ グメントと、それぞれほんの３および２アミノ酸残基異なるだけである。 ｈＰＴＨ（１−３４）： ＰＴＨの主な機能は、細胞外液中のＣa²⁺濃度を一定に維持するように働く適 応変化を誘導することである。ＰＴＨは、腎臓において、カルシフェジオールか らカルシトリオールへの変換を刺激するのと同時に尿からのＣa²⁺の尿細管(tubu lar)再吸収を増大させるように作用し、腸からのＣa²⁺吸収を担う。優れた作用 の１つは、骨からのＣa²⁺移動を促進することである。ＰＴＨは、骨において、 Ｃa²⁺およびリン酸塩の吸収速度を増大させるように作用する。ＰＴＨは、破骨 細胞による骨吸収速度を刺激し、間葉細胞から破骨細胞への分化速度を増大させ 、さらに後者の細胞の半減期を延ばす。ＰＴＨ作用の延長に伴い、骨形成骨芽細 胞数もまた増大するため、骨回転およびリモデリングの速度が上昇する。しかし ながら、個々の骨芽細胞は、正常よりも低活性であるようである。 Rosenblatt等は、米国特許第４,４２３,０３７号、第４,９６８,６６９号およ び第５,００１,２２３号において、Ｎ−末端（１−６）アミノ酸の欠失およびＰ he⁷、Ｍet^8.18、およびＧly¹²の選択的置換により得られたＰＴＨアンタゴニス ト類を開示している。報告されたところでは、Ｔyr³⁴−ＮＨ₂はこれらの化合物 類の活性および安定性を増強した。 パラチロイドホルモン関連ペプチド（ＰＴＨrp）、１４０＋アミノ酸タンパク 質、およびそれらのフラグメントは、ＰＴＨの主な生物学的作用を再現する。Ｐ ＴＨrpは、ヒトおよび動物腫瘍の多く、およびその他の組織により同化され、悪 性疾患の高カルシウム血症において役目を果すことができる。ｈＰＴＨrp（１− ３４）の配列は、下記のとおりである： ｈＰＴＨとｈＰＴＨrpとの配列相同性は、主にＮ末端１３残基に限られており 、そのうちの８残基が同一であって、ｈＰＴＨの(２５−３４)受容体結合領域の １０アミノ酸のうち１つのみが、ｈＰＴＨrpに保存されている。Cohen等は、J.B iol.Chem.266:3,1997-2004(1991)において、ＰＴＨ(１−３４)とＰＴＨrp(１− ３４)の配列の多く、特に領域(５−１８)および(２１−３４)は、α−らせん構 造をとることを示し、ただし、この構造が生理学的条件下でカルボキシル末端に ついても同様であるのかどうか多少の疑問は残るとしている。このような二次構 造は、脂質相互作用、受容体相互作用、および／または構造安定性に関して重要 であり得る。 我々は、骨粗鬆症罹病対象を含む哺乳動物対象の骨量の回復のための改良治療 剤の開発を目的としてＰＴＨの類似体およびＰＴＨrpの類似体を合成した。これ らの薬剤の投与は、患者の都合および予想されるペプチドコストの高さの両方を 考慮して最も有効と考えられる手段によるのが非常に望ましい。ＰＴＨに類似す る化合物類は、間欠様式（pulsatile fashion）にて最も効果的に投与されるよ うである。皮下注射もこの目的に矛盾しないが、この投与様式には決定的な不利 点があり、毎日の注射には少なからず痛みを伴う。経口投与は、不運にも、胃腸 管で分解されて摂取される薬物のバイオアベイラビリティーが低く（＜１％）な るため、ペプチド薬剤の投与には特に役立たない。 経皮、経肺および経鼻投与などの別の非慣用の投与様式がこれらの不安定な薬 剤の投与にはより魅力的であることを証明できる。本発明は、経鼻投与にとって 特定の有用性を持つ液体組成物の発見および開発を包含する。ペプチドの経鼻投 与は、子宮内膜症の処置に必要とされる強力なデカペプチド（ナファレリン）で 、かつ約３％までのバイオアベイラビリティーを獲得しているSynarel（登録商 標）経鼻溶液（Syntex Corporation、Palo Alto、CA）などのある限られた商業 的成 功をもたらした。ナファレリンを含む、顕著に高いバイオアベイラビリティーを 有するＬＨ−ＲＨ類似体の増強経鼻製剤は、Anikにより米国特許第４,４７６,１ １６号および第５,１１６,８１７号に報告されている。Merkus等は、ＰＣＴ特許 公報第９２／０１４４０号に吸収増強剤としてジメチル−β−シクロデキストリ ンを含む、ペプチドの、特に、インシュリンの経鼻投与用組成物を報告している 。Aliverti等は、米国特許第５,１８３,８０２号に、骨粗鬆症の処置における経 鼻投与用のカルシトニン医薬組成物およびグリシルリジネート吸収増強剤を開示 している。しかしながら、現在までに開発された経鼻組成物の中には、許容でき るレベルのバイオアベイラビリティーを伴ってペプチド化合物を投与するという 点で完全に満足の行くものはない。 発明の概要 本発明は、そのアミノ酸残基（２２−３１）が両親媒性α−らせんを形成して おり、該残基（２２−３１）が配列番号８５、８６、２６、２７、２８、２９お よび３０から選択されるものである、ＰＴＨのまたはＰＨＴrpの各生理学的に活 性な切断類似体、またはそれらの塩、の有効量；ジメチル−β−シクロデキスト リンおよび胆汁酸界面活性剤からなる群から選択される吸収増強剤；および水、 を含んでなる、骨粗鬆症の処置に有用な化合物の経鼻投与用医薬組成物を提供す るものである。 発明の詳細な説明 略号および定義 様々な共通のヌクレオチド塩基およびアミノ酸についての１文字または３文字 略号は、Pure Appl.Chem.31,639-645(1972)および40,277−290(1974)およびIUPA C-IUB生化学命名委員会にて推奨されているとおりであり、３７ ＣＦＲ §１． ８２２（５５ ＦＲ １８２４５、１９９０年５月１日）に従う。その１文字また は３文字略号は次の通りである： アミノ酸略号 略号は、特にＤ−またはＤ,Ｌ−を指定しない限りＬ−アミノ酸を表す。ある 種のアミノ酸、例えばグリシンは、天然のものも天然以外のものもアキラルであ る。ペプチド配列は全て、左側をＮ−末端アミノ酸、右側をＣ−末端アミノ酸と して表す。 本明細書で使用した更にその他のアミノ酸および化合物の略号は： “親水性アミノ酸(Ｈaa)”は、ペプチド結合形成に必要なもの以外に少なくと も１つの親水性官能基を有するアミノ酸を表し、例えば、アルギニン、アスパラ ギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、リジン、セリ ン、トレオニン、およびそれらの同族体である。 “脂質親和性アミノ酸(Ｌaa)”は、非電荷の脂肪族または芳香族アミノ酸を表 し、例えば、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプ トファン、チロシン、またはバリン、およびそれらの同族体である。 本発明の目的には、アラニンは、“両親媒性”、即ち、親水性としても脂質親 和性としても作用できるものとして分類する。 “ＰＴＨのまたはＰＴＨrpの各生理的に活性な切断同族体または類似体”は、 ＰＴＨまたはＰＴＨrpで見られる完全なアミノ酸より少ない配列を有するが、し かし、類似の生理学的応答を誘起するポリペプチドを表す。切断ＰＴＨまたはＰ ＴＨrpは、類似の生理学的応答を誘起するのに、ＰＴＨまたはＰＴＨrpと完全に 相同である必要はない。ＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨrp（１−３４）がこの グループの好ましい代表物であるが、これに限定されない。 “両親媒性α−らせん”は、アミノ酸がらせん軸に沿って配向した向かい合わ せの極性および非極性面を持つα−らせん構造をとる、ある種のペプチドによっ て示される二次構造を表す。対象となるポリペプチドがα−らせん構造をとる可 能性は、適切なピッチの“シファー−エドマンソン・ホイール(Schiffer-Edmund son wheel)”(M.SchifferおよびA.B.Edmundson,Biophys.J.7,121(1967))の構築 およびらせんに外接する円筒の背中合わせの面上の親水性残基と脂質親和性残基 のセグリゲーション（分離）に注目することによりある程度まで探求できる。あ るいは、円偏光二色性分光分析またＸ線回析データなどの経験的証拠もまた、所 定のポリペプチド中のα−らせん領域の存在を示すのに利用できる。理想的なα −らせんは、１ターン当たり３.６アミノ酸残基を有し、隣接する側鎖とは弧１ ００°離れている。Eisenberg等は、Nature 299:371-374(1982)およびProc.Nat. Acad.Sci.USA 81:140-144(1984)において、疎水性度とらせん車輪を組み合わせ て両親媒性らせんの概念を定量している。平均疎水性モーメントは、らせんを構 成する成分アミノ酸の疎水性のベクトル和として定義される。下記のアミノ酸の 疎水性は、Eisenberg(1984)により“コンセンサス”スケールとして報告された ものである： １ターン当たり３.６残基(または側鎖間１００°弧(＝３６０°／３.６))を有 する理想的なα−らせんの疎水性モーメント、μ_Hは： μ_H＝[(Σ Ｈ_Nsinδ(Ｎ−１))²＋(Σ Ｈ_Ncosδ(Ｎ−１))²]^1/2 式中、Ｈ_Nは、第Ｎ番目のアミノ酸の疎水性値であり、その和は、周期律δ＝１ ００°の配列のＮ個のアミノ酸から算出する、 から計算できる。疎水性モーメントは、μ_HをＮで割って＜μ_H＞を得ることによ り１残基当たりの平均疎水性モーメントとして表現し得る。１００°±２０°で の ＜μ_H＞値が約０.２０またはそれ以上であれば、両親媒性らせん形成を示唆して いる。ｈＰＴＨrp（２２−３１）およびｈＰＴＨ（２２−３１）の＜μ_H＞値は 、それぞれ０.１９および０.３７である。 Cornett等は、J.Mol.Biol.,195:659-685(1987)において、両親媒性を予想する ものとして“両親媒性指数”を導入することにより両親媒性α−らせんの研究を 更に進めている。彼らは、知られている全てのα−らせんの約半分が両親媒性で あること、およびその優勢頻度は１００°よりむしろ９７.５°であり、１ター ン当たりの残基数が３.６よりも３.７に近いと結論した。このような改良理論は 、科学的に興味深いが、Eisenberg等の基本的アプローチでも、特に、両親媒性 α−らせんを形成するような配列を最初から設計している場合には所定の配列を 両親媒性として分類するのには十分である。 置換両親媒性α−らせんアミノ酸配列は、天然ポリペプチドの所定のセグメン トの配列との相同性を欠くことがあるが、生理学的環境下では類似の二次構造、 即ち、向かい合わせの極性および非極性面を有するα−らせんを誘導する。天然 アミノ酸配列の代替配列での置換は、変化させた元のポリペプチドの生理活性、 安定性、またはその他の特性に有益な影響を与えることもある。このような配列 の設計および選択に関するガイダンスは、なかでもJ.L.Krstenansky等，FEBS Le tters 242:2,409-413(1989)およびJ.P.Segrest等，Proteins:Structure,Functio n,and Genetics 8:103-117(1990)によって提供されている。 本発明の１０アミノ酸両親媒性α−らせんは、式： Ｈaa (Ｌaa Ｌaa Ｈaa Ｈaa)₂ Ｌaa 式中、上記定義のとおり、各Ｈaaは親水性アミノ酸のグループから選択され、各 Ｌaaは脂質親和性アミノ酸のグループから選択される、 を有する。理想的なα−らせん構造をとる場合、残基１、４、５、８および９は 互いに約１４０°弧以内のらせんの一面（Ａ）に沿って分布し、一方、残基２、 ３、６、７および１０はらせんのもう一方の面（Ｂ）上の反対の１４０°弧を占 める。好ましくは、一方の面上の残基は全て同一極性であるが、もう一方の面上 の残基は全て反対極性である、即ち、面Ａが全て親水性であるならば、面Ｂは全 て脂質親和性であり、逆もまた同じである。当業者ならば、本発明のらせんが、 Ｈaa (Ｌaa Ｌaa Ｈaa Ｈaa)₂ Ｌaa と記載されていても、その逆の配列、 Ｌaa (Ｈaa Ｈaa Ｌaa Ｌaa)₂ Ｈaa もまた、残基分布基準に合致し、かつ本発明のらせんと均等な記述子であること を認識するであろう。 アラニンは両親媒性α−らせんのいずれかの面に容易に存在できるので、これ を親水性または脂質親和性アミノ酸のいずれかの代わりに使用することができる のだが、Ａla₁₀は両親媒性α−らせんを形成しない。一般に、プロリン、システ インおよびチロシンは使用されない；しかしながら、配列中にそれらが存在する ことや、またはその他の無作為エラー、例えば、脂質親和性面上の親水性残基は 、そのセグメントの残りのアミノ酸が親水性面−脂質親和性面境界に実質的に順 応する限り、黙許できる。配列が、本発明の配列であるために十分に両親媒性で あるかどうかを測定する便利な方法は、上記の平均疎水性モーメントを計算する ことである。１００°±２０°での１残基当たりのピーク平均モーメントが約０ .２０を越える場合、その配列は、両親媒性らせんを形成するであろうし、本発 明の配列である。 例えば、Ｘaa＝Ｇluである配列番号２６の場合、１００°での１残基当たりの 平均疎水性モーメントは、下記のように計算する： この配列では、平均ピーク疎水性モーメントは、９２°で起こり、０.４８の 値を有する。 この概念をパラチロイドホルモンおよびパラチロイドホルモン関連ペプチドに 適用すると、領域（７−１６）および（２２−３１）のいずれかまたは両方がα −らせん二次構造を示すことができ、生物学的活性を損失したり、または免疫反 応を誘引することなく、類似の構造的傾向を有する非相同性配列で置換できる。 好ましい実施態様 一態様では、本発明は、アミノ酸残基（２２−３１）が両親媒性α−らせんを 形成しており、該残基（２２−３１）の配列が： Ｘaa¹およびＸaa⁴は、独立して、Ｇlu、Ｇlu(ＯＣＨ₃)、Ｈis、またはＰheであ り；Ｘaa²はＬeuまたはＰheであり；Ｘaa⁵はＬysまたはＨisであり；Ｘaa⁷およ びＸaa¹⁰は、独立して、ＬeuまたはＩleであり；Ｘaa⁸がＡla、ＡrgまたはＧlu であり；さらにＸaa⁹がＬysまたはＧluである（配列番号８５）；好ましくは、 ＸaaはＧluまたはＡrgである（配列番号２６）； Ｘaa¹およびＸaa⁴は、独立して、Ｇlu、Ｇlu(ＯＣＨ₃)、Ｈis、またはＰheであ り；Ｘaa²はＬeuまたはＰheであり；Ｘaa⁸がＧlu、ＬysまたはＬys(COCH₂PEGX) であり、PEGXが分子量１００ないし１０,０００のポリ(エチレングリコールメチ ルエーテル)基である（配列番号８６）；好ましくは、 ＸaaはＧlu、Ｌys、またはＬys(COCH₂PEGX)であり、PEGXが分子量１００ないし １０,０００のポリ(エチレングリコールメチルエーテル)基である（配列番号２ ７）； から選択される、ＰＴＨの類似体、ＰＴＨrp、およびＰＴＨのおよびＰＴＨrpの 生理的に活性な切断類似体および同族体、またはそれらの塩類を提供する。 その他の態様では、本発明は、配列： Ｘaa¹は、無いかまたはＡlaであり； Ｘaa²は、無いかまたはＶalであり； Ｘaa³は、無いかまたはＳerであり； Ｘaa⁴は、無いかまたはＧluまたはＧlu(ＯＣＨ₃)であり； Ｘaa⁵は、無いかまたはＨisまたはＡlaであり； Ｘaa⁶は、無いかまたはＧlnであり； Ｘaa⁷は、無いかまたはＬeuであり； Ｘaa¹⁰およびＸaa¹⁷は、独立してＡspまたはＡsp(ＯＣＨ₃)であり； Ｘaa¹¹は、Ｌys、Ａrg、またはＬeuであり； Ｘaa¹³は、Ｌys、Ａrg、Ｔyr、Ｃys、Ｌeu、Ｃys(ＣＨ₂ＣＯＮＨ(ＣＨ₂)₂ＮＨ( ビオチニル))、Ｌys(７−ジメチルアミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンキソピ ラン−４−アセチル)、またはＬys(ジヒドロシンナモイル)であり； Ｘaa²⁰は、ＡrgまたはＬeuであり； Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹は、独立してＬys、Ａla、またはＡrgであり； Ｘaa^22-31は、配列番号２６、２７、２８、２９または３０から選択され； Ｘaa³²は、Ｈis、Ｐro、またはＬysであり； Ｘaa³³は、無いかまたはＰro、Ｔhr、Ｇlu、またはＡlaであり； Ｘaa³⁴は、無いかまたはＰro、Ａrg、Ｍet、Ａla、hＳer、hＳerラクトン、Ｔyr 、 Ｌeu、または１，４−ジアミノブチリルラクタムであり； Ｘaa³⁵は、無いかまたはＰro、Ｇlu、Ｓer、Ａla、またはＧlyであり； Ｘaa³⁶は、無いかまたはＡla、Ａrg、またはＩleであり； Ｘaa³⁷は、無いかまたはＡrg、Ｔrp、または３−(２−ナフチル)−Ｌ−アラニン であり； Ｘaa³⁸は、無いかまたはＡlaまたはhＳerであるか、またはＸaa^38-42は、Ｔhr Ａrg Ｓer Ａla Ｔrpであり； Termは、ＯＲまたはＮＲ²であり、各Ｒは独立してＨ、(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキルまた はフェニル(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキルである、 およびそれらの医薬的に許容され得る塩類で示される、ＰＴＨの類似体、ＰＴＨ rp、およびＰＴＨのおよびＰＴＨrpの生理的に活性な切断類似体および同族体、 またはそれらの塩類を提供する。 更にその他の態様では、本発明は、式（Ｉ）： Ｘaa⁵はＨisまたはＡlaであり； Ｘaa¹¹およびＸaa¹³は独立してＬys、ＡrgまたはＬeuであり； Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹は独立してＬys、ＡlaまたはＡrgであり； Ｘaa^22-31は： ＸaaはＧluまたはＡrgである（配列番号２６）； ＸaaはＧlu、Ｌys、またはＬys(COCH₂PEGX)であり、PEGXが分子量１００ないし １０,０００のポリ(エチレングリコールメチルエーテル)基である（配列番号２ ７）； から選択され； Ｘaa³²は、ＨisまたはＬysであり； Ｘaa³³は、Ｔhr、Ｇlu、またはＡlaであり； Ｘaa³⁴は、Ａla、hＳer、Ｔyr、またはＬeuであり； Termは、Ｇly Ａrg Ａrg、ラクトン、ＯＨまたはＮＲ₂、ここで各Ｒは、Ｈまた は(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキルである、 およびそれらの医薬的に許容され得る塩類（式Ｉ）で示される、生理的に活性な 切断同族体ｈＰＴＨrp（１−３４）のポリペプチド類似体を含む。 本発明のより具体的な態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２６であるような式（Ｉ ）のポリペプチドを含み、その場合、１００°での＜μ_H＞は０.４５を越える。 本発明の更により具体的な態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２６であり；Ｘaa¹¹お よびＸaa¹³が両方Ｌysであり；Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹が両方Ａrgであるような式（ Ｉ）のポリペプチドを含む。代表的なポリペプチドには、これに限定されないが ： がある。 本発明の別の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２６であり；Ｘaa¹¹およびＸaa¹³ が両方Ｌysであり；Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹の一方がＡrgであり、他方がＡlaである ような式（Ｉ）のポリペプチドを含む。この亜属の代表的なポリペプチドには、 これに限定されないが： がある。 本発明の別の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２６であり；Ｘaa¹¹およびＸaa¹³ の一方がＬeuであり、他方がＬysであり；Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹が両方Ａrgである ような式（Ｉ）のポリペプチドを含む。この亜属の代表的なポリペプチドには、 これに限定されないが： がある。 本発明のその他の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２７であるような式（Ｉ）の ポリペプチドを含み、その場合、１００°での＜μ_H＞は０.５０を越える。本発 明の更なる態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２７であり；Ｘaa¹¹およびＸaa¹³が両 方Ｌysであるか両方Ａrgであり；Ｘaa¹⁹およびＸaa²¹が両方Ａrgであるような式 （Ｉ）のポリペプチドを含む。代表的なポリペプチドには、これに限定されない が： がある。 本発明の別の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２８であるような式（Ｉ）のポリ ペプチドを含み、その場合、１００°での＜μ_H＞は約０.２５である。この亜属 の代表的なポリペプチドには、これに限定されないが： がある。 本発明の別の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号２９であるような式（Ｉ）のポリ ペプチドを含み、その場合、１００°での＜μ_H＞は約０.２８である。この亜属 の代表的なポリペプチドには、これに限定されないが： がある。 本発明の別の態様は、Ｘaa^22-31が配列番号３０であるような式（Ｉ）のポリ ペプチドを含み、その場合、１００°での＜μ_H＞は約０.２９である。この亜属 の代表的なポリペプチドには、これに限定されないが： がある。 本発明の更にその他の態様では、式（II）： Ｘaa¹は、ＳerまたはＡlaであり； Ｘaa⁷は、ＬeuまたはＰheであり； Ｘaa⁸は、ＭetまたはＮleであり； Ｘaa¹⁶は、ＡsnまたはＳerであり； Ｘaa¹⁸は、Ｌeu、Ｍet、またはＮleであり； Ｘaa¹⁹は、ＧluまたはＡrgであり； Ｘaa²¹は、ＶalまたはＡrgであり； Ｘaa^22-31は、配列番号２６、２７、２８、２９および３０から選択され； Ｘaa³⁴は、ＰheまたはＴyrであり； Termは、ＯＨまたはＮＲ₂、ここで各Ｒは、Ｈまたは(Ｃ₁−Ｃ₄)アルキルである 、およびそれらの医薬的に許容され得る塩類（式II）で示される、生理的に活性 な切断同族体ｈＰＴＨ（１−３４）のポリペプチド類似体を含む。代表的なポリ ペプチドには、これに限定されないが： がある。 本発明の更にその他の態様では、驚くべきことに、３４アミノ酸以下のＰＴＨ のおよびＰＴＨrpの各同族体および類似体もまた強力な骨リモデリング剤である ことが分かった。これらの化合物は、一般式： である。 代表的なポリペプチドには、これらに限定されないが： 物理データ m.p．142.8-166.1℃ [α]^D ₂₅-53.80（c 0.38，H₂O） FAB(Ｃ₁₇₃Ｈ₂₉₅Ｎ₅₅Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3929 AAA: Asx 2.0（2） Glx 5.7（6） Ser 1.8（2） His 3.0（3） Gly 1.1（1） Ala 0.9（1） Arg 2.8（3） Vel 1.2（1） Ile 0.9（1） Leu 7.4（8） Lys 4.4（4） Pro 0.9（1） 物理データ m.p．161.0-177.0℃ [α]^D ₂₅-61.97（c 0.19，H₂O） FAB(Ｃ₁₆₇Ｈ₂₈₈Ｎ₅₂Ｏ₄₈₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3792.0 AAA: Asx 2.2（2） Glx 5.9（6） Ser 1.9（2） His 2.1（2） Gly 1.1（1） Ala 1.0（1） Arg 3.0（3） Vel 1.1（1） Ile 1.0（1） Leu 7.9（8） Lys 4.3（4） Pro 0.9（1） がある。 当業者ならば、１００°±２０°での平均疎水性モーメント約０.２０以上を 有するアミノ酸配列を位置（２２−３１）に挿入する条件で、本明細書に記載し た ものの所望の特性を有するポリペプチド類似体の多くの置換物を合成できること を認識するであろう。ポリペプチドの古典的合成 本発明のポリペプチドは、固相合成については、J.M.StewartおよびJ.D.Young ,Solid Phase Peptide Synthesis，2nd ed.,Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill inois(1984)およびJ.Meienhofer,Hormonal Proteins and Peptides,Vol.2,Acade mic Press,New York,(1973)に、液相合成についてはE.SchroderおよびK.Lubke,T he Peptides,Vol.1,Academic Press,New York,(1965)に記載のような方法により 合成できる。 一般には、これらの方法は、伸長ペプチド鎖への保護アミノ酸の連続添加を含 む。通常、第１アミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかと、あらゆ る反応性側鎖基を保護する。この保護アミノ酸を次いで、不活性固体支持体に結 合させるか、または溶液に利用するかし、配列における次のアミノ酸もまた適切 に保護しておき、これをアミド結合形成に従う条件下で加える。所望のアミノ酸 全てを適切な配列に結合させた後、保護基および固相支持体を除いて粗ポリペプ チドを得る。ポリペプチドを脱塩し、好ましくはクロマトグラフィーにより精製 して最終生成物を得る。 約４０以下のアミノ酸を有する生理的に活性な切断ポリペプチドの類似体の好 ましい製法には固相ペプチド合成がある。この方法では、α−アミノ（Ｎ^α）機 能およびあらゆる反応性側鎖を酸または塩基感受性基により保護する。保護基は 、ペプチド結合形成条件に安定であるが、実在のポリペプチド鎖に影響をあたえ ぜすに容易に除去可能であるべきである。適切なα−アミノ保護基には、これら に限定されないが、ｔ−ブトキシカルボニル(Ｂoc)、ベンジルオキシカルボニル (Ｃbz)、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシ カルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル(Ａmoc)、イソボルニルオキシカルボ ニル、α,α−ジメチル−３,５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニ トロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオ レニルメトキシカルボニル(Ｆmoc)などがあり、好ましくは、ｔ−ブトキシカ ルボニル（Ｂoc）である。適切な側鎖保護基には、これらに限定されないが：ア セチル、ベンジル(Ｂzl)、ベンジルオキシメチル(Ｂom)、ｏ−ブロモベンジルオ キシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル (Ｃl-z)、２,６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプ ロピル、ピバリル、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔos）、トリメチ ルシリル、およびトリチルがある。 固相合成では、Ｃ−末端アミノ酸をまず、適切な樹脂支持体に結合させる。適 切な樹脂支持体は、試薬やステップワイズ濃縮および脱保護反応の反応条件に対 して不活性であり、並びに使用した媒質に不溶性であるような物質である。市販 の樹脂の例には、反応性基で修飾したスチレン／ジビニルベンゼン樹脂、例えば 、クロロメチル化コ−ポリ−(スチレン−ジビニルベンゼン)、ヒドロキシメチル 化コ−ポリ−(スチレン−ジビニルベンゼン)などがある。ベンジル化ヒドロキシ メチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂が好ましい。化合物のＣ− 末端がアミドであるとき、好ましい樹脂は、ｐ−メチルベンズヒドリルアミノ− コ−ポリ(スチレン−ジビニル−ベンゼン)樹脂である。 ＰＡＭ樹脂への結合は、高い温度で、例えば、約４０℃から６０℃の間、好ま しくは約５０℃で、約１２から７２時間、好ましくは約４８時間、エタノール、 アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）など中、Ｎ^α−保護 アミノ酸、好ましくはＢoc−アミノ酸のアンモニウム塩、セシウム塩、トリエチ ルアンモニウム塩、１,５−シセアザビシクロ−[５.４.０]ウンデケ−５−エン 塩、テトラメチルアンモニウム塩、または類似の塩と、好ましくはＤＭＦ中セシ ウム塩と、樹脂を反応させることにより達成され得る。 Ｎ^α−Ｂoc−アミノ酸は、例えば、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミ ド、好ましくはジクロロメタンなどの溶媒中、約２から約２４時間、好ましくは 約２時間、約１０℃から５０℃の温度、好ましくは２５℃でＮ,Ｎ'−ジイソプロ ピルカルボジイミド(ＤＩＣ)／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)媒 介カップリング法によりベンズヒドリルアミン樹脂に結合させることができる。 保護アミノ酸のカップリングは、当分野でよく知られた方法により、典型的に は、自動ペプチド合成機にて首尾よく実施できる。トリエチルアミンまたは類似 塩基の中性化に続き、各保護アミノ酸を好ましくはおよそ１.５ないし２.５倍モ ル過剰で導入し、カップリングを不活性の非水性、極性溶媒、例えば、ジクロロ メタン、ＤＭＦ、またはそれらの混合物、好ましくはジクロロメタン中、周辺温 度で実施する。代表的なカップリング剤は、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジ イミド(ＤＣＣ)、Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）またはそ の他のカルボジイミドであり、単独か、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾー ル(ＨＯＢｔ)、Ｏ−アシルウレア、ベンゾトリアゾル−１−イル−オキシトリス (ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(ＰyＢop)、Ｎ−ヒドロ キシスクシンイミド、その他のＮ−ヒドロキシイミド、またはオキシムの存在下 のものである。あるいは、保護アミノ酸活性エステル(例えば、ｐ−ニトロフェ ニル、ペンタフルオロフェニル、など)または対称無水物を使用してもよい。 固相合成の最後に、完全に保護されたペプチドを樹脂からはずす。樹脂支持体 の結合がベンジルエステル型のものであれば、約−１０℃から５０℃の間の温度 、好ましくは約２５℃で、約１２から２４時間の間、好ましくは約１８時間、ア ルキルアミドＣ−末端をもつペプチドの場合はアルキルアミンまたはフルオロア ルキルアミンを用いるアミノリシスにより、または、非置換アミドＣ−末端をも つペプチドの場合は、例えば、アンモニア／メタノールまたはアンモニア／エタ ノールを用いるアミノリシスにより切断を行うことができる。ヒドロキシＣ−末 端をもつペプチドは、ＨＦまたはその他の強力な酸性脱保護法により、またはケ ン化により切断できる。あるいは、このペプチドは、例えばメタノールによるエ ステル転移反応（トランスエステリフィケーション）、続く、アミノリシスまた はケン化により樹脂からはずすことができる。保護ペプチドは、シリカゲルクロ マトグラフィーにより精製できる。 側鎖保護基は、アニソールまたは他のカルボニウムイオンスカベンジャーの存 在下でアミノリシス産物を、約−１０℃から＋１０℃の間の温度、好ましくは約 ０℃で、約１５分から２時間の間、好ましくは約１.５時間、例えば、無水液体 フッ化水素で処理し、フッ化水素／ピリジン複合体で処理し、トリス(トリフル オロアセチル)ボロンおよびトリフルオロ酢酸で処理することにより、水素およ びパラジウム炭素またはポリビニルピロリドンで還元することにより、または、 液体アンモニア中ナトリウム、好ましくは液体フッ化水素およびアニソールで還 元することにより、ペプチドからはずすことができる。ベンズヒドリルアミン樹 脂上のペプチドの場合、樹脂切断および脱保護工程は、上記のように液体フッ化 水素およびアニソールを利用して一段階で組み合わせることができる。 溶液を脱塩（例えば、BioRad AG-3（登録商標）アニオン交換樹脂を用いて） でき、ペプチドを下記の型のいずれかまたは全てを採用する一連のクロマトグラ フィー工程により精製できる：アセテート形弱塩基性樹脂でのイオン交換；非誘 導化コ−ポリ(スチレン−ジビニルベンゼン)、例えば、アンバーライト（登録商 標）ＸＡＤでの疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲル吸着クロマトグラフ ィー；カルボキシメチルセルロースでのイオン交換クロマトグラフィー；例えば 、セファデックス（登録商標）Ｇ−２５での分配クロマトグラフィー；逆流分布 ；またはオクチル−またはオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合相カラムパ ッキングでの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、特に逆相ＨＰＬＣ。 従って、本発明のその他の態様は、適切な樹脂支持体上に保護アミノ酸を連続 的に縮合させ、保護基と樹脂支持体をはずし、さらに生成物を精製して、上記の ように(２２−３１)位のアミノ酸が両親媒性α−らせんペプチド配列を形成する 、ＰＴＨおよびＰＴＨrpの生理的に活性な切断同族体および類似体、好ましくは ＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨrp（１−３４）を得ることを含んでなる、ポリ ペプチドおよびそれらの医薬的に許容され得る塩類の製法に関する。ポリペプチドの組換え合成 あるいは、本発明のポリペプチドは、所望のポリペプチドをコードする遺伝子 をクローニングおよび発現させることにより、製造することもできる。この方法 では、所望のＤＮＡ配列を含むプラスミドを製造し、これを適切な宿主微生物、 典型的には、Ｅ．coliなどの細菌、またはサッカロマイセス・セレビジエなどの 酵母に挿入して、宿主微生物がプラスミドの、故に本発明のポリペプチド類似体 をコードするｃＤＮＡの多数のコピーを産生するように誘導する。 まず、選択したＰＴＨまたはＰＴＨrp類似体をコードする合成遺伝子は、続く 変化を助長するために常用の制限酵素切断部位を用いて設計する。米国特許第４ ,６８３,１９５号および第４,６８３,２０２号においてMullisが教示しているポ リメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いてその配列を増幅できる。 増幅させた合成遺伝子を単離し、その中に遺伝子の４コピーをタンデムに挿入 することができる、Ｔrp ＬＥプラスミドなどの適切なプラスミドにライゲート できる。Ｔrp ＬＥプラスミドの製造は、米国特許第４,７３８,９２１号および ヨーロッパ特許公開第０２１２５３２に記載されている。Ｔrp ＬＥプラスミド は、一般に、Ｔrp Ｅプラスミドの８−１０倍以上のタンパク質を産生する。次 いで、多くのコピー遺伝子をＥ．coliまたはＳ．セレビジエなどの適切な宿主内 で発現させることができる。 ここに使用した特異的発現ベクターは、下記のエレメントを含有するＴrp Ｌ Ｅ１８ Ｐrot（Ｉle³、Ｐro⁵）であった：アンピシリン耐性遺伝子およびプラス ミド複製起点を含有するｐＢＲ３２２フラグメント（ＥcoＲＩ−ＢamＨＩ）；tr pプロモーターおよびtrpＥ遺伝子を含有するＥcoＲＩ−ＳacIIフラグメント；Ｈ ＩＶプロテアーゼ（Ｉle³、Ｐro⁵）遺伝子フラグメント（ＳacII−ＨindIII）； ｂＧＲＦ遺伝子フラグメント（ＨindIII−ＢamＨＩ）；およびＥ．coli ropc遺 伝子由来の転写ターミネーター。ＨＩＶプロテアーゼおよびｂＧＲＦ遺伝子フラ グメントは、重要ではなく、所望ならば他のコード配列に置き換えてもよい。 発現多量体融合タンパク質は、安定な封入体（inclusion bodies）へと細胞内 的に蓄積し、残りの細胞性タンパク質から遠心分離により分離できる。単離した 融合タンパク質を単量体ＰＴＨまたはＰＴＨrp類似体に変換し、カチオン交換お よび／または逆相ＨＰＬＣにより精製できる。 クローニング、増幅、発現および精製の別法は、当業者には明らかである。代 表的な方法は、Maniatis等、Molecular Cloning,a Laboratory Manual,2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory(1989)に開示されている。有用性および投与 本発明のポリペプチドは、骨量の減少により現れる哺乳動物の様々な症状の予 防および処置に有用である。特に、本発明の化合物類は、ヒトでの骨粗鬆症およ びオステオペニアの予防的および治療的処置にも望ましい。 一般に、本発明のポリペプチドまたはそれらの塩類は、１日当たり約０.００ ２から１０μg／kg体重の間の量、好ましくは、約０.０４から約０.２量μg／kg 体重の量で投与する。５０kgのヒト女性患者の場合、有効成分の毎日用量は、約 ０.１から約５００μgs、好ましくは約２.０から約１００μgsである。ウマ、イ ヌ、および家畜などのその他の哺乳動物では、より高用量を必要とする場合もあ る。この投与量は、最も効果的な結果に到達するために必要とされるのに合わせ て、常用の医薬組成物にて単回投与により、複数適用により、または制御放出に より、投与でき、好ましくは注射により毎日１またはそれ以上の回数である。 正確な用量および組成物、および最も適切な投与法の選択は、とりわけ、選択 したポリペプチドの薬理学的特性、処置する症状の性質および深刻さ、レシピエ ントの体調および精神的鋭敏さに影響される。 コルチコステロイド誘導オステオペニアでは、コルチコステロイド用量が多く なればなる程、ポリペプチドの必須用量は多いであろう。 代表的な投与法には、経口、非経口（皮下、筋肉内、および静脈内を含む）、 直腸、口内（舌下を含む）、肺、経皮、および経鼻がある。 医薬的に許容され得る塩類は、毒性の副作用なく、元のポリペプチドの所望の 生物学的活性を保持する。このような塩類の例は、（ａ）無機酸類、例えば、塩 酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸および同等物により形成される付加塩類； および有機酸類、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フ マル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニ ン酸、パモイン(pamoic)酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホ ン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクチュロン酸および同等物などにより 形成される塩類；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム 、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、および同等物などの多 価金属カチオンにより；またはＮ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンまたはエチ レンジアミンから形成される有機カチオンにより形成される塩基付加塩；または 、 （ｃ）(ａ)と(ｂ)の組み合わせ、例えば、タンニン酸亜鉛塩および同等物、があ る。 本発明の更なる態様は、有効成分として本発明のポリペプチド、またはそれら の医薬的に許容され得る塩を医薬的に許容され得る非毒性キャリアーと組み合わ せて含む医薬組成物に関し、かかる組成物は、非経口（皮下、筋肉内、または静 脈内）投与用に、特に液体溶液または懸濁液の形態で；または経口または口内投 与用に、錠剤またはカプセルの形態で；肺または経鼻投与用に、特に粉末、点鼻 液、またはエアゾールの形態で；さらに、直腸または経皮投与用に製造できる。 組成物は、適宜、用量ユニット形態で投与でき、例えば、Remington's Pharma ceutical Sciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,PA.(1985)に記 載のように医薬分野ではよく知られた方法のいずれかにより製造できる。非経口 投与用製剤は、賦形剤として滅菌水または食塩水、プロピレングリコールなどの アルキレングリコール類、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコ ール類、植物性油、水素化ナフタレン、および同等物を含有できる。経鼻投与用 製剤は、固体であってよく、賦形剤、例えば、ラクトースまたはデキストランを 含有してもよく、また、点鼻液または計量スプレーの形態で使用するための水性 または油状溶液であってもよい。口内投与の場合、典型的な賦形剤には、糖、ス テアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、プレゼラチン化澱粉、およ び同等物があるる 経鼻投与用に処方する場合、約０.２から１５重量パーセントの間の範囲、好 ましくは約０.５から４重量パーセントの間の範囲、より好ましくは約２重量パ ーセントの量の、例えば、グリココール酸、コール酸、タウロコール酸、エトコ ール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸、グリコ デオキシコール酸、シクロデキストリン類、および同等物などの界面活性剤の酸 により鼻粘膜からの吸収を高めることができる。 所望の放出期間に十分な有効成分を含有する制御放出システムの単一投与によ り、本発明の化合物類を対象へ長期間にわたり、例えば、１週間から１年の間、 投与することができる。様々な制御放出システム、例えば、モノリシックまたは 貯蔵型マイクロカプセル、デポット・インプラント、浸透性ポンプ、小胞、ミセ ル、リポソーム、経皮パッチ、イオン導入装置、およびその他の注射投薬形態が 本目的に利用できる。有効成分の送達が望まれる部位の位置測定は、いくつかの 制御放出装置の更なる特徴であり、これは、ある種の異常の処置に有利なことを 証明できる。 制御放出製剤の一形態は、Kent,Lewis,SandersおよびTice、米国４,６７５,１ ８９の先駆的研究に記載のように、ゆっくりと分解する非毒性の非抗原性ポリマ ー、例えば、コポリ(乳酸／グリコール酸)に分散させるかまたはカプセル封入さ せたポリペプチドまたはその塩を含有する。この化合物類、または好ましくはそ れらの比較的不溶性の塩類は、コレステロールまたはその他の脂質マトリックス ペレット、またはシラストマー・マトリックス・インプラントに製剤化すること ができる。更に緩慢放出、デポット・インプラントまたは注射製剤は当業者には 自明である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Syste ms,J.R.Robinson ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978およびR.W.Baker,Cont rolled Release of Biologically Active Agents,John Wiley & Sons,New York, 1987参照。経鼻投与システム 市販の噴霧ポンプおよびボトルを用いて、経鼻液剤を送達し、雄カニクイザル において評価を行った。投薬量５０および１００μlの噴霧ポンプはValois社か ら得られた。最初の研究では、成人用サイズの噴霧チップを使用した。後の研究 では、小児用サイズの噴霧チップを使用した。チップのサイズは噴霧ポンプの性 能に影響しなかった。噴霧ポンプの各ロットのサンプルを試験して、各ポンプを 満たす（prime）のに必要なアクチュエーションの数、それらの投薬量の正確性 および噴霧パターンの一定性を測定した。 投与前にサルを麻酔し、投与時に仰向けにした。４mg用量のペプチドを投与す るために、１００mg／ml液剤１噴霧１００μlをそれぞれの鼻孔に投与した。１m g用量のペプチドを投与するために、２０mg／ml液剤１噴霧５０μlをそれぞれの 鼻孔に投与した。続く研究では、各サルにペプチド５０μgを皮下投与して、そ れ自 身の対照とした。経鼻バイオアベイラビリティーは、皮下注射と対比して算出し た。血液サンプルは、投与後０、０.２５、０.５、１、２、４、６および８時間 で採血し、ＲＩＡによりペプチドについて検定した。薬物動態パラメーターは血 漿プロフィールから算出した。血漿濃度プロフィールの血中濃度曲線下領域（Ａ ＵＣ）は台形法則によって算出し、バイオアベイラビリティーは全動物について の皮下投与の平均ＡＵＣと対比して測定した 本発明の組成物では５０％近い平均バイオアベイラビリティーが得られた。経 鼻用製剤のＴmaxは皮下投与にて測定されたＴmax（０.６時間）と同様の０.３な いし０.７時間の間であった。 本発明に有用な胆汁酸界面活性剤の中には、グリココール酸、コール酸、タウ ロコール酸、コラン酸、エトコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール 酸、およびナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマ グネシウム塩、並びにその他の非毒性有機および無機カチオンを含むそれらの医 薬的に許容し得る塩類がある。好ましくは胆汁酸界面活性剤は、グリココール酸 またはタウロコール酸のアルカル金属塩、最も好ましくはナトリウム塩である。 その他の材料、例えば、保存剤、等張性にするための塩類、緩衝剤、および同 等物を経鼻製剤に加えてもよい。典型的には、ペプチドは約１mg／mlから約１０ ０mg／mlの量で存在し、吸収増強剤濃度は約０.５mg／mlから約５０mg／mlであ る。 下記の具体的な実施例は、本発明の代表的な化合物の合成および試験を例示説 明する意図のものであり、請求の範囲を限定するものと解釈すべきではない。実 施例において、“m.p.”は融点であり、“[α]_D ²⁵”は指定の溶媒中の所定濃度 での２５℃での光学活性であり、“ＦＡＢ”は、高速原子衝突質量分析であり、 “ＡＡＡ”は、アミノ酸分析であり、実測値の後のかっこ内は予測値である。ア ミノ酸分析は、製造元推薦プトロコールに従い、Hewlett-Packard AminoQuant A nalyzerにて行った。一次アミノ酸はｏ−フタルアルデヒドで誘導体化し、二次 アミノ酸はＦmocで誘導体化した。誘導体化アミノ酸の蛍光検出を定量化に用い た。保護アミノ酸は、Applied Biosystems Inc.(Foster City,CA)から入手した 。 実施例Ｉ 化合物１（配列番号７）は、Applied Biosystems Model 430A自動ペプチド合 成機を用いて、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂上で固相法により０.５mmo lスケールで製造した。α−アミノ基は、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂoc）で保 護した。側鎖保護基は：Ａsp、Ｇlu、およびＳerではベンジル（Ｂzl）；Ａrgで はトシル（Ｔos）；Ｈisではベンジルオキシメチル（Ｂom）；およびＬysでは２ −クロロベンジル（Ｃl-z）であった。Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド ／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＣＣ／ＨＯＢt）を用いてStewartおよ びYoung（前掲）に従い、アミノ酸を連続的にカップリングした。各アミノ酸カ ップリング後、ペプチドを、Ｎ−メチルピロリドン中、無水酢酸およびジイソプ ロピルエチルアミンの混合物を用いてアセチル化した。完成したペプチドを、ア ニソール（２.５ml）の存在下−１０℃で３０分間、および０℃で６０分間、無 水ＨＦ（２５ml）を用いて側鎖保護基の脱保護を同時に行いながら樹脂から切断 した。ＨＦを真空蒸発させた後、残渣を無水エーテルで洗浄し、粗ペプチドを１ ０％酢酸で抽出した。１０％酢酸抽出物を凍結乾燥させて、粗生成物９００mgs を得た。ペプチドを０.１％ＴＦＡ中、２２−４５％ＣＨ₃ＣＮの勾配を用いる中 圧ＯＤＳ逆相カラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物を３つの画分に 溶出させ、これを濃縮および凍結乾燥させて、純度＞９８％の白色固体１３０mg sを得た。 化合物１： 物理データ: m.p．150-159℃ [α]_D ²⁵-34.88°（c 0.16，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₃₀₀Ｎ₅₆Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4005.5 AAA: Asp，1.9(2); Glu，5.6(6); Ser，1.6(2); His，2.7(3); Gly 1.0(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，2.8(3); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，7.3(8); Lys，4.0(4). 同様に、化合物２、５〜１８、２１〜２７、２９〜３６、３８〜４８、５０〜５ ４、５８〜６４および６６〜７０を、ヒドロキシル末端ポリペプチドの合成に必 要とされるＰＡＭ樹脂を用いて、製造し、特性化した。 化合物２： 物理データ: m.p．154-170℃ [α]_D ²⁵-49.35°（c 0.46，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₃₀Ｎ₅₇Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4005.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，5.9(6); Ser，1.7(2); His，2.9(3); Gly 1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，1.9(2); Arg，3.0(3); Val，1.2(1); Ile，1.0(1); Leu，7.8(8); Lys，4.2(4). 化合物５： 物理データ: m.p．147-165℃ [α]_D ²⁵-49.17°（c 0.66，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₂₉₉Ｎ₅₉Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4061 AAA: Asp，2.1(2); Gly，6.1(6); Ser，1.8(2); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，5.0(5); Val，1.0(1)；Ile，0.9(1); Leu，7.7(8); Lys，1.9(2). 化合物６： 物理データ: m.p．150-170℃ [α]_D ²⁵-48.65。（c 0.54，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₂₉₉Ｎ₆₃Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4118.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，6.1(6); Ser，1.8(2); His，3.2(3); Gly，1.2(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，6.9(7); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，7.8(8). 化合物７： 物理データ: m.p．177-182℃ [α]_D ²⁵-46.17°（c 0.14，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₄Ｎ₆₄Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4117 AAA: Asp，2.0(2); Glu，4.8(5); Ser，1.8(2); His，3.2(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，6.7(7); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Lys，7.7(8); Lys，0.9(1). 化合物８： 物理データ: m.p．147-165℃ [α]_D ²⁵-49.17°（c 0.66，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₅Ｎ₅₉Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4033.0 AAA: Asp，2.0(2); Glu，4.8(5); Ser，1.8(2); His，2.7(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，2.0(2); Arg，3.9(4); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，7.9(8); Lys，4.0(4). 化合物９： 物理データ: m.p．158-160℃ [α]_D ²⁵-44.76°（c 0.1，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₉Ｈ₃₂₆Ｎ₆₄Ｏ₅₅)：[Ｍ]⁺4375.0 AAA: Asp，2.0(2); Glu，5.9(6); Ser，1.7(2); His，2.9(3); Gly，2.3(2); Thr，1.0(1); Ala，1.9(2); Arg，5.0(5); Val，1.2(1); Ile，1.0(1); Leu，7.8(8); Lys，4.3(4). 化合物１０： 物理データ: m.p．170-175℃ [α]_D ²⁵-31.59°（c 0.54，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₄Ｈ₃₀₀Ｎ₅₂Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3936.0 AAA: Asp，2.0(2); Glu，6.0(6); Ser，1.8(2); His，2.0(2); Gly，1.2(1); Ala，3.0(3); Arg，2.8(3); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，9.9(10); Lys，3.0(3). 化合物１１： 物理データ: m.p．172-174℃ [α]_D ²⁵-43.29°（c 0.2，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₉Ｈ₃₁₁Ｎ₅₅Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4065.8 AAA: Asp，2.2(2); Glu，7.7(7); Ser，1.7(2); His，2.0(2); Gly，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，9.3(9); Lys，5.1(5). 化合物１２： 物理データ: m.p．178℃ [α]_D ²⁵-36.88°（c 0.4，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₂Ｈ₂₉₅Ｎ₅₀Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4001.6 AAA: Asp，2.1(2); Glu，6.5(6); Ser，2.7(3); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Ala，1.0(1); Arg，1.0(1); Tyr，0.8(1); Val，2.0(2); Phe，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu＋Nle，8.5(7＋2); Lys，3.1(3). 化合物１３： 物理データ: m.p．260℃ [α]_D ²⁵-37.02°（c 0.2，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₄Ｈ₃₀₄Ｎ₅₆Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4084 AAA: Asp，2.1(2); Glu，5.5(5); Ser，2.6(3); His，3.1(3); Ala，1.0(1); Gly，1.1(1); Arg，3.2(3); Tyr，1.0(1); Val，1.0(1); Phe，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，9.0(9); Lys，3.0(3). 化合物１４： 物理データ: m.p．190-225℃ [α]_D ²⁵-56.58°（c 0.36，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₆₁Ｈ₂₇₂Ｎ₅₄Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3747.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，4.9(5); Ser，1.7(2); His，2.6(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，7.6(7); Arg，2.8(3); Val，1.2(1); Ile，1.0(1); Leu，6.6(6); Lys，1.9(2). 化合物１５： 物理データ: m.p．170-180℃ [α]_D ²⁵-48.19°（c 0.2，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₂Ｈ₂₉₃Ｎ₅₃Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3919.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，6.1(6); Ser，1.7(2); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，3.0(3); Arg，2.1(2); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.0(8); Lys，4.4(4). 化合物１６： 物理データ: m.p．190-195℃ [α]_D ²⁵-50.50°（c 0.4，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₂Ｈ₂₉₃Ｎ₅₃Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3919.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，6.0(6); Ser，1.8(2); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，3.0(3); Arg，2.1(2); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，7.5(8); Lys，4.2(4). 化合物１７： 物理データ: m.p．195-204℃ [α]_D ²⁵-67.11°（c 0.3，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₆₃Ｈ₂₈₀Ｎ₅₄Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3796.0 AAA: Asp，2.1(2); Glu，2.9(3); Ser，6.8(7); His，3.1(3); Gly，1.2(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.0(3); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，8.2(8); Lys，2.0(2). 化合物１８： 物理データ: m.p．200-207℃ [α]_D ²⁵-60.26°（c 0.6，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₄Ｈ₂₈₄Ｎ₅₆Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3960.0 AAA: Asp，2.9(3)，Glu，3.5(4); Ser，1.4(2); His，2.6(3); Gly，0.9(1); Thr，1.0(1); Ala，4.0(4); Arg，3.0(3); Tyr，0.9(1); Val，1.9(2); phe，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，3.6(4); Lys，4.1(4). 化合物２１： 物理データ: m.p．148-155℃ [α]_D ²⁵-45.97（c 0.26，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₄Ｈ₃₀₄Ｎ₅₆Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4084 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.0(5); Ser，2.7(3); His，3.0(3); Gly，1.0(1); Ala，0.9(1); Arg，3.1(3); Tyr，0.9(1); Val，1.0(1); Phe，0.9(1); Ile，0.9(1); Leu，9.3(9); Lys，3.2(3). 化合物２４： 物理データ: m.p．175-182℃ [α]_D ²⁵-49.99（c 0.47，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₂₉₉Ｎ₄₉Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3906.5 AAA: Asx，2.1(2); Glx，6.5(6); Ser，1.8(2); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，9.1(9); Lys，6.5(6). 化合物２５： 物理データ: m.p．136.5-153.5℃ [α]_D ²⁵-32.57（c 0.13，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₃₀₀Ｎ₆₀Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4060.8 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.2(6); Ser，1.8(2); His，3.2(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Arg，5.2(5); Val，1.1(1); Ile，1.1(1); Leu，8.4(8); Lys，2.2(2). 化合物２６： 物理データ: m.p．125.8-127.2℃ [α]_D ²⁵-54.62（c 0.23，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₃₀₆Ｎ₆₀Ｏ₅₃)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4158.0 AAA: ASX，2.1(2); Glx，6.2(6); Ser，1.8(2); His，2.9(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，5.1(5); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，8.0(8); Lys，2.1(2); Pro，1.1(1). 化合物２７： 物理データ: m.p．106-137.3℃ [α]_D ²⁵-39.55（c 0.67，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₉Ｈ₃₂₆Ｎ₆₈Ｏ₅₅)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4430.5 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.9(6); Ser，1.6(2); His，2.7(3); Gly，2.2(2); Thr，1.0(1); Ala，1.8(2); Arg，7.3(7); Val，0.8(1); Ile，1.0(1); Leu，8.1(8); Lys，2.1(2). 化合物２９： 物理データ: m.p．160-172℃ [α]_D ²⁵-49.85（C 0.34，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₁Ｈ₃₀₄Ｎ₅₆Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4096.9 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.6(6); Ser，1.7(2); His，3.1(3); Gly，1.1(2); Thr，0.9(1); Ala，0.9(2); Arg，3.0(3); Tyr，0.9(1); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，7.7(8); Lys，4.4(4). 化合物３０： 物理データ: m.p．130-171℃ [α]_D ²⁵-40.65（C 0.34，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₈Ｈ₂₉₇Ｎ₅₅Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4039.4 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.5(6); Ser，1.8(2); His，3.4(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，2.9(3); Tyr，0.8(1); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，7.9(8)；Lys，3.4(3). 化合物３１： 物理データ: m.p．140-160℃ [α]_D ²⁵ -44.48（C 0.25，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₂Ｈ₂₉₃Ｎ₅₅Ｏ₅₁Ｓ₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3979 AAA: Asx＋Cys，3.0(2＋1); Glx，5.6(6); Ser，1.7(2); His，3.0(3); Gly，1.0(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，2.5(3); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8)；Lys，3.3(3). 化合物３２： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵（測定せず） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₆Ｈ₃₁₆Ｎ₅₉Ｏ₅₄Ｓ₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4306.6 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.1(6); Ser，1.8(2); His，3.8(3); Gly，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.1(3); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，8.3(3)；Lys，3.3(3). 化合物３３： 物理データ: m.p．135-205℃ [α]_D ²⁵-26.92（c 0.104，50%水性HOAc） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₈Ｈ₃₁₁Ｎ₅₇Ｏ₅₄)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4233 AAA: ASX，1.9(2); Glx，6.3(6); Ser，1.7(2); His，3.2(3); Gly，1.0(1); Thr，1.1(1); Ala，2.0(2); Arg，3.2(3); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，8.2(8); Lys，4.5(4). 化合物３４： 物理データ: m.p．92.1-146.6℃ [α]_D ²⁵-40.76（c 0.34，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₇Ｈ₃₀₂Ｎ₅₆Ｏ₅₃)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4062.0 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.7(6); Ser，1.8(2); His，3.0(3); Gly，2.2(2); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，2.8(3); Val，1.2(1); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8); Lys，4.2(4). 化合物３５： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵-21.96（c 0.132，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₁Ｈ₃₁₁Ｎ₅₅Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4089.0 AAA: Asx，2.1(2); Glx，6.3(6); Ser，1.8(2); His，3.3(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.1(3); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，8.0(8); Lys，4.2(4). 化合物３６： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵-46.80（c 0.07，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₂Ｈ₃₁₃Ｎ₅₅sＯ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4103 AAA: Asx，2.1(2); Glx，6.2(6); Ser，1.4(2); His，3.0(3); Gly，1.1(1); Thr，1.1(1); Ala，1.7(2); Arg，3.2(3); Val，0.6(1); Ile，0.9(1); Leu，8.0(8); Lys，4.1(4). 化合物３８： 物理データ: m.p．152.1-186.5℃ [α]_D ²⁵-55.91（c 0.33，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₃₀₆Ｎ₅₆Ｏ₅₃)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4102.6 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.6(6); Ser，1.7(2); His，2.9(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，2.9(3); Val，1.2(1); Ile，1.0(1); Leu，7.7(8); Lys，4.3(4). 化合物３９： 物理データ: m.p．120-148.2℃ [α]_D ²⁵-52.78（c 0.47，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₇Ｈ₃₀₁Ｎ₅₅Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4031.0 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.5(6); Ser，1.8(2); His，2.9(3); Gly，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，0.9(1); Arg，2.9(3); Val，1.2(1); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8); Lys，3.6(3); Pro，0.9(1). 化合物４０： 物理データ: m.p．133.9-155.1℃ [α]_D ²⁵-54.22（c 0.37，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₇Ｈ₃₀₂Ｎ₅₆Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4030.7 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.6(6); Ser，1.9(2); His，2.9(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，0.9(1); Arg，2.8(3); Val，1.2(1); Ile，1.1(1); Leu，7.8(8); Lys，4.2(4); Pro，0.9(1). 化合物４１： 物理データ: m.p．142.8-166.1℃ [α]_D ²⁵-53.80（c 0.38，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₃Ｈ₂₉₅Ｎ₅₅Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3929 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.7(6); Ser，1.8(2); His，3.0(3); Gly，1.1(1); Ala，0.9(1); Arg，2.8(3); Val，1.2(1); Ile，0.9(1); Leu，7.4(8); Lys，4.4(4); Pro，0.9(1). 化合物４２： 物理データ: m.p．161.0-177.0℃ [α]_D ²⁵-61.97（c 0.19，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₆₇Ｈ₂₈₈Ｎ₅₂Ｏ₄₈)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3792.0 AAA: Asx，2.2(2); Glx，5.9(6); Ser，1.9(2); His，2.1(2); Gly，1.1(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，7.9(8); Lys，4.3(4); Pro，0.9(1). 化合物４３： 物理データ: m.p．181-202℃ [α]_D ²⁵-45.14（c 0.19，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₅Ｈ₃₂₆Ｎ₆₂Ｏ₅₆)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4435.2 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.8(6); Ser，2.8(3); His，2.8(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，3.7(4); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8); Lys，4.3(4); Trp，0.9(1). 化合物４４： 物理データ: m.p．130-132.2℃ [α]_D ²⁵-46.66（c 0.195，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₂₁₆Ｈ₃₆₅Ｎ₈₁Ｏ₆₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺5088.8 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.0(6); Ser，2.7(3); His，3.0(3); Gly，2.2(2); Thr，2.1(2); Ala，3.0(3); Arg，10.5(10); Val，0.9(1); Ile，1.0(1); Leu，8.2(8); Trp，1.0(1). 化合物４５： 物理データ: m.p.158-174℃ [α]_D ²⁵-43.57（c 0.53，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₂₁₆Ｈ₃₆₆Ｎ₈₂Ｏ₆₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺5087.4 AAA: Asx，1.9(2); Glx，5.6(6); Ser，2.6(3); His，3.3(3); Gly，2.1(2); Thr，2.0(2); Ala，2.9(3); Arg，10.1(10); Val，0.9(1); Ile，1.0(1); Leu，8.3(8); Trp，1.1(1). 化合物４６： 物理データ: m.p．165.4-175.2℃ [α]_D ²⁵-40.43（c 0.20，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₂₂₅Ｈ₃₇₄Ｎ₈₀Ｏ₆₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺5191 AAA: Asx，2.1(2)，Glx，6.3(6); Ser，2.8(3); His，3.2(3); Gly，2.1(2); Thr，2.0(2); Ala，3.2(3); Arg，9.9(9); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，8.6(8); Lys，1.1(1); Trp，1.1(1). 化合物４７： 物理データ: m.p．140-160℃ [α]_D ²⁵-56.88（c 0.16，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₂₈₇Ｎ₅₅Ｏ₅₈)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3989.8 AAA: Asx，3.0(3); Glx，2.9(3); Ser，3.7(4); His，2.8(3); Gly，1.1(1); Thr，0.9(1); Ala，1.9(2); Arg，2.0(2); Tyr，1.0(1); Val，1.7(2); Phe，0.9(1); Ile，0.9(1); Leu＋Nle 5.8(2＋4); Lys，3.4(3); Trp，1.1(1). 化合物４８： 物理データ: m.p．140-210℃ [α]_D ²⁵-47.75（c 0.178，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₃₀₉Ｎ₅₇Ｏ₅₂Ｓ₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4135.0 AAA: Asx，2.3(2); Glx，6.6(6); Ser，1.4(2); His，3.2(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.1(3); Val，0.9(1); Met，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.8(8); Lys，4.4(4). 化合物５０： 物理データ: m.p．136.5-156.8℃ [α]_D ²⁵-49.89（c 0.24，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₂Ｈ₃₀₀Ｎ₅₆Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4056.0 AAA: Asx，2.2(2); Glx，5.0(5); Ser，1.9(2); His，3.3(3); Gly，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Arg，3.1(3); Val，1.0(1); Phe，2.0(2); Ile，0.9(1); Leu，7.2(7); Lys，3.5(4). 化合物５１： 物理データ: m.p．80.7-141.0℃ [α]_D ²⁵-55.38（c 0.23，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₀Ｎ₅₈Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4012.8 AAA: Asx，2.2(2); Glx，4.9(5); Ser，1.8(2); His，4.3(4); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.1(3); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.1(8); Lys，3.9(4). 化合物５２： 物理データ: m.p．134.3-157.9℃ [α]_D ²⁵-50.72（c 0.45，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₂₉₅Ｎ₅₇Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4012.8 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.9(6); Ser，1.8(2); His，4.2(4); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.0(3); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，8.1(8); Lys，3.1(3). 化合物５３： 物理データ: m.p．142.7-159.8℃ [α]_D ²⁵-54.01（c 0.21，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₃Ｈ₂₉₈Ｎ₅₆Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3946.0 AAA: Asx，2.2(2); Glx，4.9(5); Ser，1.8(2); His，3.1(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，3.1(3); Arg，3.1(3); Val，1.0(1); Ile，1.9(2); Leu，7.0(7); Lys，4.3(4). 化合物５４： 物理データ: m.p．138-185℃ [α]_D ²⁵-50.17（c 0.14，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₄Ｈ₂₉₅Ｎ₅₅Ｏ₅₃)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4005 AAA: Asx，2.2(2); Glx，7.1(7); Ser，1.7(2); His，2.8(3); Gly，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Arg，3.1(3); Val，1.1(1); Ile，1.7(2); Leu，7.1(7); Lys，2.7(3). 化合物５８： 物理データ: m.p．158-163℃ [α]_D ²⁵-46.06（c 0.17，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₅Ｈ₃₂₇Ｎ₆₃Ｏ₅₅)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4434.8 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.5(6); Ser，2.7(3); His，3.1(3); Gly，1.0(1); Ala，1.8(2); Arg，4.0(4); Thr，0.9(1); Val，0.9(1); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8); Lys，3.9(4); Trp，1.0(1). 化合物５９： 物理データ: m.p．156-162℃ [α]_D ²⁵-44.44(c 0.189，H₂O) ＦＡＢ(Ｃ₁₉₇Ｈ₃₂₈Ｎ₆₂Ｏ₅₅)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4445.6 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.5(6); Ser，2.8(3); His，2.9(3); Gly，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，4.0(4); Thr，0.9(1); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，7.5(8); Lys，4.2(4); Nal，1.1(1). 化合物６０： 物理データ: m.p．159-164℃ [α]_D ²⁵-50.94（c 0.29，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₂Ｈ₃₂₀Ｎ₆₀Ｏ₅₅)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4349.0 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.6(6); Ser，2.7(3); His，3.2(3); Gly，1.0(1); Ala，3.1(3); Arg，2.8(3); Thr，1.0(1); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，7.6(8); Lys，4.0(4); Trp，1.0(1). 化合物６１： 物理データ: m.p．155-210℃ [α]_D ²⁵-46.15（c 0.12，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₅Ｈ₃₃₄Ｎ₆₂Ｏ₅₈)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4475.8 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.9(7); Ser，1.7(2); His，3.2(3); Gly，1.1(1); Ala，3.1(3); Arg，4.0(4); Thr，0.9(1); Val，1.1(1); Ile，1.9(2); Leu，8.1(8); Lys，4.1(4). 化合物６２： 物理データ: m.p．186-218℃ [α]_D ²⁵-52.73（c 0.265，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₂Ｈ₃₂₉Ｎ₆₁Ｏ₅₇)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4404.4 AAA: Asx，2.0(2); Glx，6.6(7); Ser，1.9(2); His，3.4(3); Gly，1.1(1); Ala，2.0(2); Arg，3.8(4); Thr，1.0(1); Val，1.1(1); Ile，1.7(2); Leu，7.9(8); Lys，4.0(4). 化合物６３： 物理データ: m.p．169-205℃ [α]_D ²⁵-50.78（c 0.51，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₆Ｈ₃₁₇Ｎ₅₇Ｏ₅₆)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4248.0 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.8(7); Ser，1.8(2); His，3.3(3); Gly，1.0(1); Ala，2.0(2); Arg，3.0(3); Thr，1.0(1); Val，1.0(1); Ile，1.8(2); Leu，7.8(8); Lys，3.6(4). 化合物６４： 物理データ: m.p．199-205℃ [α]_D ²⁵-52.47（c 0.41，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₃₀₆Ｎ₅₆Ｏ₅₅)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4135.0 AAA: Asx，2.0(2); Glx，6.6(7); Ser，1.9(2); His，3.3(3); Gly，1.1(1); Ala，2.0(2); Arg，2.9(3); Thr，1.0(1); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.2(8); Lys，3.8(4). 化合物６６： 物理データ: m.p．134.2℃ [α]_D ²⁵-48.12（c 0.36，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₆₇Ｈ₂₈₆Ｎ₅₄Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3834.4 AAA: ASX，2.0(2); Glx，5.7(6); Ser，1.7(2); His，2.9(3); Gly，1.0(1); Thr，0.9(1); Ala，1.0(1); Arg，2.8(3); Ile，0.9(1); Leu，7.4(8); Lys，4.3(4). 化合物６７： 物理データ: m.p．128.5-184.5℃ [α]_D ²⁵-6.53（c 0.69，MeOH） ＦＡＢ(Ｃ₁₄₈Ｈ₂₅₉Ｎ₄₇Ｏ₄₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3353 AAA: Asx，2.0(2); Glx，4.1(4); Ser，0.9(1); His，2.1(2); Gly，1.0(1); Thr，0.9(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Ile，1.0(1); Leu，8.1(8); Lys，4.2(4). 化合物６８： 物理データ: m.p．165-210℃ [α]_D ²⁵-36.05（c 0.12，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₄₂Ｈ₂₄₈Ｎ₄₆Ｏ₄₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3239.0 AAA: Asx，2.0(2); Glx，3.9(4); Ser，0.9(1); His，1.9(2); Gly，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，2.9(3); Ile，0.9(1); Leu，6.8(7); Lys，4.2(4). 化合物６９： 物理データ: m.p．150-210℃ [α]_D ²⁵-18.0（c 0.64，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₂₀₈Ｈ₃₅₁Ｎ₇₉Ｏ₆₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4918.6 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.2(6); Ser，2.8(3); His，3.1(3); Gly，2.2(2); Thr，2.2(2); Ala，2.2(2); Arg，10.4(10); Ile，1.0(1); Leu，8.0(8); Trp，1.1(1) 化合物７０： 物理データ: m.p．150-210℃ [α]_D ²⁵-41.70（c 0.36，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₉Ｈ₃₂₄Ｎ₇₂Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4437.14 AAA: Asx，2.1(2); Glx，4.1(4); Ser，1.9(2); His，2.0(2); Gly，2.1(2); Thr，2.0(2); Ala，2.1(2); Arg，9.7(10); Ile，0.9(1); Leu，7.4(8). 側鎖環化類似体（化合物５７）を、Ｎ^α−Ｂoc-Ｎ^ε−Ｆmoc−ＬysおよびＮ^α− Ｂoc-Ｎ^γ−Ｆmoc−Ａspを１３位および１７位にそれぞれ配置した以外は上記の 通りにして合成した。Ｂocアミノ酸合成が完了したら、樹脂をＤＭＦ中２０％ピ ペリジンで室温で３０分間処理した。その樹脂を濾過し、ＤＭＦ、ＭeＯＨおよ びＣＨ₂Ｃl₂で洗浄した。樹脂（１.１ｇ）をＰyＢＯＰ ２５０mgを含有するＤＭ Ｆ １０ml中に懸濁した。ＤＩＥＡを用いてｐＨを８−９に調節し、樹脂を１時 間撹拌した。その樹脂を濾過し、ＤＭＦおよびＣＨ₂Ｃl₂で洗浄し、次いで、Ｄ ＭＦに再懸濁させた。ＰyＢＯＰ １２５mgを用いて結合を繰り返した。樹脂を濾 過し、ＤＭＦ、ＭeＯＨおよびＣＨ₂Ｃl₂で洗浄し、乾燥させた。次いで、樹脂を ＨＦで処理し、ペプチドを上記のとおり精製した。 化合物５７： 物理データ: m.p．142.5-163.5℃ [α]_D ²⁵-34.31（c 0.17，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₅Ｈ₂₉₈Ｎ₅₆Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺3986.4 AAA: Asx，1.9(2); Glx，5.9(6); Ser，1.8(2); His，3.2(3); Gly，1.1(1); Ala，2.0(2); Arg，3.0(3); Thr，1.0(1); Val，1.1(1); Ile，0.9(1); Leu，8.0(8); Lys，4.0(4). 実施例II ［Met³⁴，Ala³⁵］化合物１、AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEK-LLEKLHTMA-NH₂(配 列番号２５)を、実施例Ｉの方法に従い製造および精製した。このポリペプチド は、以下のようにホモセリンラクトンに変換させた。精製ペプチド（１６０mg） を４４％ギ酸（４ml）に溶解した。この溶液を、４４％ギ酸（４ml）中予め混合 しておいたシアノゲンブロミド（７００mg）およびフェノール（１.６mg）の溶 液と０℃で合わせた。この溶液を０℃で２時間、更に室温で２時間撹拌した。生 成物の形成はＨＰＬＣにより監視した（Ｖydac(登録商標)Ｃ−１８、３００Å、 ４.６×２５０mm、１.２ml／分の流速、０.１％ＴＦＡ中２５−４５％アセトニ トリル勾配で１０分）。反応は４時間以内に完了した。試料の半分を濃縮して分 取ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｖydac(登録商標)Ｃ−１８、０.１％ＴＦＡ中２５−４５％ アセトニトリル勾配）により精製した。ホモセリンラクトンペプチド画分を集め 、凍結乾燥させて、純度＞９５％の白色固体、化合物４の２８mgを得た。 化合物４ 物理データ: m.p．138-142℃ [α]_D ²⁵-50.66°（c 0.1，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₂₉₉Ｎ₅₅Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4017.61 AAA: Asp，2.1(2); Glu，6.1(6); Ser，1.8(2); His，3.0(3); Thi，1.1(1); Ala，1.1(1); Arg，2.7(3); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，8.2(8); Lys，3.8(4); Gly 1.09(1); hSer，1.09(1). 同様に、化合物６５をこの方法に従い製造した。 化合物６５： 物理データ: m.p．166-176℃ [α]_D ²⁵-52.22（c 0.25，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₀Ｈ₂₈₈Ｎ₅₄Ｏ₅₀)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4008.6 AAA: Asx，3.1(3); Glx，4.8(5); Ser，2.9(3); His，2.9(3); Gly，1.1(1); Ala，1.1(1); Arg，2.0(2); Val，2.7(3); Phe，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu＋Nle，5.9(4＋2); Lys，2.8(3). 実施例III ホモセリンアミドを製造するために、粗hＳerラクトン類似体、化合物４を濃 縮し、メタノール中飽和ＮＨ₃２５mlで処理した。溶液を０℃で２時間、更に室 温で１６時間撹拌した。反応はＨＰＬＣ（Ｖydac(登録商標)Ｃ−１８、３００Å 、４.６×２５０mm、１.２ml／分の流速、０.１％ＴＦＡ中２５−４５％アセト ニトリル勾配）で監視し、１８時間以内に完了した。溶液を濃縮して分取ＲＰ− ＨＰＬＣ（Ｖydac(登録商標)Ｃ−１８、０.１％ＴＦＡ中２５−４５％アセトニ トリル勾配）により精製した。ホモセリンアミドペプチド画分を集め、凍結乾燥 させて、純度＞９８％の白色固体、化合物３の３０mgを得た。 化合物３ 物理データ: m.p．138-142℃ [α]_D ²⁵-45.97°（c 0.25，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₂Ｎ₅₆Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4033.9 AAA: Asp，2.1(2);Glu，6.1(6); Ser，1.6(2); His，2.8(3); Gly，0.97(1); hSer，0.97(1); Thi，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，2.9(3); Val，1.0(1); Ile，1.0(1); Leu，7.6(8); Lys，3.9(4). 化合物２２： 物理データ: m.p．69.4-128℃ [α]_D ²⁵-43.93（c 0.15，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₉Ｈ₃₀₂Ｎ₅Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4022.9 AAA: Asx，2.0(2); Glx，4.9(5); Ser，2.6(3); His，2.8(3); Gly，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Val，1.0(1); Phe，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，8.8(9); Lys，3.4(3). 化合物２３： 物理データ: m.p．87.1-142.1℃ [α]_D ²⁵-52.14（c 0.41，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₉Ｈ₃₀₃Ｎ₅₇Ｏ₄₉)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4038 AAA: Asx，2.1(2); Glx，4.9(5); Ser，2.7(3); His，2.8(3); Gly，1.0(1); hSer，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Val，1.1(1); Phe，0.9(1); Ile，0.9(1); Leu，7.9(8); Lys，3.7(4). 化合物２８： 物理データ: m.p．80℃ [α]_D ²⁵-48.64（c 0.09，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₉₃Ｈ₃₃₄Ｎ₇₀Ｏ₅₆)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4530.0 AAA: Asx，2.2(2); Glx，6.1(6); Ser,1.7(2); His，3.0(3); Gly，1.9(2); hSer，1.0(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Arg，7.2(7); Val，0.8(1); Ile，1.0(1); Leu，8.4(8); Lys，2.1(2). ホモセリンアルキルアミド類は、同様にして、ホモセリンラクトンを過剰の対 応するアルキルアミンを含有するＤＭＦに溶解することにより、ホモセリンラク トンから製造した。室温で数日撹拌後（反応は分析用ＨＰＬＣにより監視した） 、混合物を蒸発乾固させ、ペプチドを分取ＨＰＬＣにより精製した。代表的なホ モセリンアルキルアミド類は、化合物５５および５６である。 化合物５５： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵（測定せず） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₈Ｈ₃₀₆Ｎ₅₆Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4063.0 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.8(6); Ser，1.7(2); His，3.1(3); Gly，0.9(1); Thr，1.0(1); Ala，0.9(1); Arg，3.0(3); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.4(8); Lys，3.7(4); hSer，0.9(1). 化合物５６： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵（測定せず） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₄Ｈ₃₁₀Ｎ₅₆Ｏ₅₂)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4138.8 AAA: Asx，2.0(2); Glx，5.9(6); Ser，1.7(2); His，2.9(3); Gly，0.9(1); Thr，1.0(1); Ala，0.9(1); Arg，3.0(3); Val，1.0(1); Ile，0.9(1); Leu，8.0(8); Lys，4.1(4); hSer，0.9(1). 実施例IV Ｎ^α−Ｂoc−Ｎ^γ−Ｆmoc-Ｌ−２,４−ジアミノ酪酸のセシウム塩をメリーフ ィールド樹脂（ＤＭＦ、５０℃、４８時間）に結合させ、実施例Ｉにおけるよう なＢoc−Ａla樹脂の代わりに固相合成に使用した。合成が完了したら、ペプチド をＤＭＦ中２０％ピペリジンで室温で３０分間処理して側鎖Ｆmoc保護基を除去 した。保護ペプチドが自発的に環化してラクタムとなり、それによって樹脂から 切り離された。溶液を樹脂から濾過し、油状物が残るまで真空蒸発させた。残渣 を実施例Ｉにおけるように液体ＨＦで処理して、粗非保護ペプチドを得た。この ペプチドを実施例Ｉにおけるように処理し、精製した。 化合物４９： 物理データ: m.p．161-181℃ [α]_D ²⁵-48.38（c 0.25，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₀Ｎ₅₆Ｏ₅₁)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4016.8 AAA: Asx，2.1(2); Glx，6.3(6); Ser，1.7(2); His，3.3(3); Gly，1.1(1); Thr，1.0(1); Ala，2.1(2); Arg，2.9(3); Val，0.9(1); Ile，0.9(1); Leu，8.0(8); Lys，3.8(4). 実施例Ｖ 実施例II由来のホモセリンラクトン類似体の水性溶液をブタ肝臓エステラーゼ （Sigma Chemical Company，St.Louis,MO）で処理した。ラクトンのＣ−末端ホ モセリンへの加水分解は、分析用ＨＰＬＣにより監視した。加水分解が完了した と判断されたら、実施例Ｉにおけるようにその物質を分取ＨＰＬＣにより精製し た。 化合物３７： 物理データ: m.p．(測定せず) [α]_D ²⁵（測定せず） ＦＡＢ(Ｃ₁₇₆Ｈ₃₀₁Ｎ₅₅Ｏ₅₃)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4035.1 AAA: Asx，2.1(2); Glx，5.9(6); Ser，2.0(2); His，3.1(3); Gly，0.8(1); hSer，0.8(1); Thr，1.0(1); Ala，1.0(1); Arg，3.0(3); Val，1.3(1); Ile，1.0(1); Leu，8.1(8); Lys，3.8(4). 実施例VI 実施例Ｉに従い、保護ペプチド樹脂BocAVS(Bzl)E(OBz)H(Bom)QLLHD(OBzl)R(Ts)G R(Ts)S(Bzl)IQD(OBz)LR(Ts)R(Ts)E(OBz)LLE(OBzl)R(Ts)LLK(Fmoc)R(Ts)LH(Bom)T (Bzl)A-O-PAMを０.３５mmol規模で合成した。Ｎ^α基はすべてｔ−ブトキシカル ボニル（Ｂoc）で保護し、側鎖保護基は指示通りであった。合成完了後、ペプチ ド樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中２０％ピペリジン５０mlで室温で３ ０分間処理してリジンのフルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）保護基をはず した。続いて、樹脂をＤＭＦ、ＭeＯＨ、ＣＨ₂Ｃl₂で洗浄し、乾燥して、部分的 保護ペプチド１.６gを得た。部分的保護ペプチド０.８g（０.１７５mmol）を、 ＤＭＦ２０ml中、ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウ ムヘキサフルオロホスフェート（ＰyＢop）０.１６g（０.３mmol）およびジイソ プロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）０.０６７g（０.５２５mmol）の存在下、メ トキシジ(エチレンオキシ)酢酸［ＰＥＧ(２)ＣＨ₂ＣＯＯＨ］０.４４g（０.３mm ol）を用い、室温で５時間、リジン上でアシル化した。５時間後、樹脂を濾過し 、続いてＤＭＦ、ＭeＯＨおよびＣＨ₂Ｃl₂で洗浄した。アシル化工程は、樹脂の ニンヒドリン処理結果が陰性になるまで２回繰り返した。最終ペプチドは、実施 例Ｉにおけるように側鎖保護基の除去および精製により樹脂から切り離した。化 合物１９の１００mgsが得られた。 化合物１９ 物理データ: m.p．145-195℃ [α]_D ²⁵-44.60°(c 0.2，H₂O） ＦＡＢ(Ｃ₁₈₃Ｈ₃₁₆Ｎ₆₄Ｏ₅₄)：[Ｍ＋Ｈ]⁺4276.2 AAA: Asp，2.1(2); Glu，5.0(5); Ser，1.6(2); His，2.9(3); Gly，0.9(1); Thr，1.9(2); Arg，7.1(7); Val，1.1(1); Ile，1.0(1); Leu，8.0(8); Lys，0.9(1). 実施例VII ペプチドを、２−メトキシポリル(エチレン−オキシ)酢酸[ＰＥＧ(5000)ＣＨ₂ ＣＯ₂Ｈ]をアシル化剤として使用した以外は実施例IVと同様にして合成し、切り 離し、精製した。部分的保護ペプチド０.８g（０.１７５mmol）から純粋な化合 物２０を３００mgs得た。 化合物２０ 物理データ: m.p．105℃ [α]_D ²⁵-22.95°（c 0.11，50％水性HOAc） AAA: Asp，2.0(2); Glu，4.8(5); Ser，1.6(2); His，2.6(3); Gly，1.1(1); Thr，1.1(1); Arg，7.3(7); Val，0.8(1); Ile，0.9(1); Leu，8.3(8); Lys，1.1(1); Ala,1.8(2). 実施例VIII ｈＰＴＨrp（１−３４）類似体遺伝子の合成 図１に示したヌクレオチド配列および酵素制限部位をもつｈＰＴＨrp（１−３ ４）類似体化合物４（配列番号９）をコードする合成遺伝子を設計した。必須オ リゴデオキシヌクレオチドは、Sinha等、Nucleic Acid Research 12,4539-4557( 1984)のホスホルアミダイト法を用いてＤＮＡ合成機（Milligen/Biosearch）に より製造した。脱保護後、粗オリゴヌクレオチドを分取１５％ポリアクリルアミ ドゲルでのゲル電気泳動により精製した。オリゴヌクレオチドをＵＶで位置付け し、ゲルから摘出し、Waters C18 Sep-pak（登録商標）カートリッジで脱塩し、 凍結乾燥させた。 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による増幅を、“ＧeneＡmp”ＤＮＡ増幅キ ット（Perkin-Elmer Cetus）由来のＴaqポリメラーゼを含む試薬を用いてPerkin -Elmer Cetus熱循環器にて、９４℃で１分、５０℃で２分、７２℃で３分の２５ サイクルで実施した。 ２つの重複するオリゴヌクレオチドである８８量体(２μg)、ＰＴＨ３（配列 番号３１）： およびアンチセンス９０量体（２μg）、ＰＴＨ４（配列番号３２）： をｈＰＴＨrp（１−３４）類似体遺伝子の鋳型ＤＮＡ配列として製造した。２つ のフランキングプライマー、ＰＴＨＰＣＲ１：CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAG（配 列番号３３）およびＰＴＨＰＣＲ２：CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC（配列番号３ ４）を利用して、遺伝子全体をＰＣＲにより増幅した。増幅ＤＮＡ生成物を４％ ＮuＳieve（登録商標）アガロースゲルでのゲル電気泳動により精製した。合成 ｈＰＴＨrp（１−３４）類似体遺伝子を含有する、長さおよそ１５０塩基のバン ドをゲルから摘出し、およそ２００ngのＤＮＡをElu-Quik（登録商標）ガラスゲ ルＤＮＡ抽出（Schleicher & Schuell，Keene，NH）により単離した。 実施例IX ｈＰＴＨrp(１−３４)１類似体遺伝子の分子クローニング 実施例ＶＩのｈＰＴＨrp（１−３４）類似体遺伝子をサブクローンするために 、増幅ＤＮＡ２００ngを単離し、制限酵素Ｈind IIIおよびＳac IIにより切断し た。図２に示したように、ＤＮＡを予めＨind IIIおよびＳac IIで切断しておい たＴ rpＬＥ １８ Ｐrot（Ｉle³，Ｐro⁵）プラスミド２μgにライゲートさせた。 次いで、ｈＰＴＨrp（１−３４）類似体遺伝子の１コピーを含有する得られた プラスミド、ＴrpＬＥ １８ ｈＰＴＨrp（１−３４）１をコンピーテントなＥ． coli ＨＢ １０１細胞（CLONTECH,Palo Alto,CA）に形質転換させた。形質転換 体をＰＣＲ分析にかけ、その挿入を確認した。形質転換細胞コロニーを選択し、 水２００μl中で５分間煮沸し、２μlを、その挿入物にフランクしている２つの プライマーを用いてＰＣＲにかけた。次いで、ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル にて分析し、ｈＰＴＨrp（１−３４）遺伝子挿入物の１コピーの存在を確認した 。次いで、ＴrpＬＥ １８ ｈＰＴＨrp（１−３４）１構築物を、ベンダーのDye Deoxy Terminator Sequencingキットを用いて、自動ＤＮＡシーケンサー（Appli ed Biosystemms Model 373A，Foster City,CA）でのＤＮＡ配列決定により確認 した。 実施例Ｘ ｈＰＴＨrp(１−３４)類似体遺伝子の多数コピーを含有する Ｔrp ＬＥ １８ベクターの構築 唯一(unique)のＮheＩおよびＸbaＩ制限部位は、ｈＰＴＨrp(１−３４)類似体 遺伝子配列の始めと終わり近くに位置している。これらの２つの部位は、異なる 配列を認識するが同一の一本鎖付着末端を生じるので、Ｔrp ＬＥ １８ベクター 内での多数コピーｈＰＴＨrp(１−３４)遺伝子の構築を可能にするものである。 別の反応において、その遺伝子の単一コピーを含有するプラスミドＴrp ＬＥ １８ｈＰＴＨrp(１−３４)１ ５μgをＢamＨＩ＋Ｎhe ＩおよびＸbaＩ＋ＢamＨ Ｉで切断した。各消化物から、ｈＰＴＨrp(１−３４)類似体遺伝子を含有するフ ラグメント約３００ngを単離した。これら２つのフラグメントを混合し、ライゲ ートさせて、Ｔrp ＬＥ １８ ｈＰＴＨrp(１−３４)２プラスミドを形成した。 このプラスミドを用いて、コンピーテントなＥ．coli ＨＢ １０１細胞を形質転 換させた。１％アガロースゲルでの形質転換ＰＣＴ産物のサイジングを用いて２ コピーのｈＰＴＨrp(１−３４)遺伝子挿入物が存在することを測定した。２コピ ーの遺伝子を含有するＴrp ＬＥ １８ｈＰＴＨrp(１−３４)２を、次いで、ＤＮ Ａ 配列決定により確認した。２つのｈＰＴＨrp(１−３４)遺伝子が正確に融合した ので、ＮheＩおよびＸbaＩ部位をその接合点で除去した。これにより、タンデム 遺伝子とフランキングしている残りのＸbaＩおよびＮheＩ部位を唯一（ユニーク ）にする。 この方法を繰り返すことにより、図４に示したように、ｈＰＴＨrp(１−３４) 遺伝子の４コピーを含有する最終のプラスミドＴrp ＬＥ １８ｈＰＴＨrp(１− ３４)４を構築した。Ｔrp ＬＥ １８ｈＰＴＨrp(１−３４)４の配列は、ＤＮＡ 配列分析により、正確であることが分かった。 実施例XI Ｔrp ＬＥ １ ８ｈＰＴＨrp(１−３４)４の発現および精製 Ｔrp ＬＥ １８ｈＰＴＨrp(１−３４)４の導入 アンピシリン５０μg／mlおよびトリプトファン１００μg／mlを含有するＬＢ 培地５０mlのスターター培養物、出典明示により本明細書の一部としたJ.H.Mill er,“Experiments in Molecular Genetics,”p.431(1972)、にＴrp ＬＥ １８ｈ ＰＴＨrp(１−３４)４プラスミドを含有するＥ．coli細胞を接種し、Ａ₅₅₀約６ になるまで勢いよく撹拌しながら３７℃で一晩、生育させた。産生用のＬＢ培地 ２リットルを予め３７℃に加温し、スターター培養物２０mlに与えて、Ａ₅₅₀を 約０.０６にした。この培養物を次いで、Ａ₅₅₀約０.６から０.８の間まで勢いよ く撹拌しながら生育させ、それから１０mg／mlのインドールアクリル酸（ＩＡＡ ）溶液２mlを加えた。十分に通気しながら約１６時間、最終Ａ₅₅₀約６（典型的 には、４から１０の間）まで生育を続けさせた。細胞を遠心分離により濃縮し、 ５０mＭトリス−ＨＣl、ｐＨ７.５、０.１mＭＥＤＴＡ緩衝溶液（トリス緩衝液 ）５００mlに再懸濁させた。 この懸濁液を、オーバーヒートを避けるため最大能力の５０％で操作したHeat Systems-Ultrasonics,Inc.モデル２２０Ｆソニケーター（３/４”ホーン装備） を用いて超音波処理した。 導入の度合いを測定するために、細胞全体をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。Ｔ rp ＬＥ １８ ｈＰＴＨrp(１−３４)４構築物由来の遺伝子産物が予測ＭＷ約１ ７,０００の主要バンドとして観察された。これは、全細胞タンパク質の１０％ 程度と思われる。 融合タンパク質の単離 細胞溶解物を約３６００×gで１５分遠心分離して、Ｔrp ＬＥ １８ ｈＰＴＨ rp(１−３４)４融合タンパク質をペレット状にし、上清は捨てた。ペレットをト リス緩衝液２００ml（典型的には４０−５０Ａ₅₅₀／ml）に再懸濁した。 実施例XII融合タンパク質のプロセッシングおよびホモＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４) ペプチドの精製 ｈＰＴＨrp(１−３４)多量体融合タンパク質にフランキングするメチオニン残 基のＣＮＢrでの切断により、所望のホモＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４)ポ リペプチドが遊離し、これを下記のように精製した。 融合タンパク質のＣＮＢr処理 洗浄したＴrp ＬＥ １８ ｈＰＴＨrp(１−３４)４融合タンパク質のペレット を７０％ギ酸６０ml中で穏やかに撹拌しながら再懸濁した（約２０mg／ml総タン パク質；典型的には、１０００Ａ₅₅₀ユニットの細胞由来の物質を３mlに溶解す る）。２、３滴のオクタノールを加え、その溶液に２０分間、Ｎ₂を通気させた 後、ＣＮＢr５.５gを加えた。この反応を２５℃で６時間進行させ、その後、等 容量の５０：５０ ＭeＯＨ：Ｈ₂Ｏを試料と混合し、続いて、それを回転蒸発に より除去した。このプロセスを２ないし４回繰り返し、大部分のギ酸およびＣＮ Ｂrを実質的に除去した。それから、試料を蒸発乾固させ、水２００mlに再溶解 し、貯蔵のために凍結乾燥させた。 ホモＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４)の精製 ＣＮＢr切断上清をＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ６.５で２４時間、何度も替えながら透析 した。透析中、ｐＨは６.５に維持した。透析後、沈澱物を高速遠心により除去 した。上清をゲルマン０.４５μフィルター装置（Acrodisc 4184）により透明に した。 カチオン交換クロマトグラフィー 最初の精製は、Bio-Gel TSK-SP-5PW ＨＰＬＣカラム（２１.５×１５０mm）で のカチオン交換クロマトグラフィーにより行った。流速８ml／分および高度に精 製したホモＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４)ペプチドの収量をおよそ１２mgに するためのクロマトグラフィー条件は： １．５０mＭ ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ６.５でカラム平衡化 ２．透明化上清１０mlの充填(培養ブロスおよそ１.５Ｌまたは封入物２.４ｇ) ３．ベースラインが安定するまで５０mＭ ＮaＣlを含有する５０mＭ ＫＨ₂Ｐ Ｏ₄、ｐＨ６.５でカラム洗浄 ４．９０mＭ ＮaＣlを含有する５０mＭ ＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ６.５でカラム溶出 約４５分間、画分を集める ５．プールおよび貯蔵の前に、Ｃ１８ＨＰＬＣにより９０mＭ ＮaＣl画分をホ モＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４)含量について分析 逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー 逆相Ｐoros Ｒ／Ｈ ４.６×１００mmカラム（Perseptive Biosystems,Cambrid ge,MA）を最終精製工程に使用した。クロマトグラフィー条件は下記の通りであ る： 移動相Ａ： ０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水 Ｂ： ０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ＣＨ₃ＣＮ 時間 流速 ％Ｂ ０分 ４ml/分 １５ ５.０分 ４ml/分 ４０ ５.２分 ４ml/分 １００ ６.８分 ４ml/分 １００ ７.０分 ４ml/分 １５ ホモＳerラクトンｈＰＴＨrp(１−３４)、化合物４の保持時間は、およそ２. ９４３分であった。精製ペプチドは、質量分析により測定したところ純度およそ ９８％であった。 実施例XIII 総括的にGunness-HeyおよびHock,Metab.Bone Dis.5:177 181(1984)の方法に従 い、本発明の化合物を卵巣摘出ラットの骨量に対するその効果について評価した 。 成体スプラーグ−ダウレイ雌ラットを環境に順応させ、体重グループで分け( ｎ＝９、１０または１２)、左右の卵巣摘出（ＯＶＸ）、または模擬手術を行っ た。投与は、手術後１７日で開始し、２０日間続けた。試験化合物は２％ラット 血清／食塩水媒体で１日に１回、皮下投与した。 投与２０日後、ラットを屠殺し、右大腿骨を摘出した。大腿骨を半分に切り、 遠位半分大腿骨（distal half femures）（ＤＨＦ）を更に、ドリルを使って、 海面骨（ＴＢ）と皮質骨（ＣＢ）に分けた。カルシウムを抽出し、Calcetteカル シウム分析機により測定し、mg／ＤＨＦ／１００g体重における平均骨Ｃaとして 現した。 ２つの試料のｔ検定を用いて、ＯＶＸおよび模擬グループを比較した。一方向 ＡＮＯＶＡを用いてＯＶＸグループを比較し、続いて、フィッシャーのＬＳＤ多 重比較により、各処置グループと媒体を比較した。 卵巣摘出は、主に、海面骨からの実質的な骨全体の減少を誘導した。骨全体の カルシウムは、模擬手術対照よりも４７ないし５４％低かった。 ８０μg／kg／日でのｂＰＴＨ(１−３４)およびｈＰＴＨrp(１−３４)は、統 計的に、処置ＯＶＸラットについて骨全体のカルシウムをそれぞれ５３から９５ ％および１８から４０％の範囲で有意に増大させたが、しかし、皮質骨カルシウ ムの有意な増大はなかった。 本発明の化合物を８０μg／kg／日で投与すると、骨全体のカルシウムが６６ から１３８％まで増大し、海面骨のカルシウムが８７から１２８％まで増大した 。皮質骨カルシウム、海面骨厚、および骨体積は、非処置ＯＶＸ対照でも有意に 増大した。 このアッセイでは、下記の化合物を試験した： 同様の研究にて、卵巣摘出ラットに５、１０および２０日間、４０μg／kg／ 日投与した結果は、下記である： 実施例XIV 成熟ニュージーランド・ホワイト雌ウサギ（Hazelton Research Products,Inc .,３.６kg，ｎ＝９−１１／処置グループ）に、媒体をまたはプレドニソン０.１ ５mg／kgを１３カ月毎日注射した。骨密度（ＢＭＤ）を二重エネルギーＸ線吸光 光度計（Hologic Model QDR-1500W,Hologic，Inc.,Waltham,MA）により測定し、 骨代謝の生化学的マーカーを追跡した。９カ月後、サブグループには、更に、化 合物１（配列番号７）を０.０５、０.１５、または０.５μg／kg／日、皮下投与 した。２カ月後、用量を０.５、３および１０μg／kg／日に上げた。プレドニソ ン処置の結果、迅速な初期減少（２−４カ月）、続いて残りの研究期間、安定な ＢＭＤをもたらした。ベースライン１２.４±１.３％、１８.１±１.９％、およ び１１.８±２.５％からのＢＭＤの最終的な減少は、腰部脊椎Ａ／Ｐ面、側部面 、および遠位大腿骨において観察された。大腿部骨幹ではより少ない減少(７.８ ±２.２％)が観察された。初期用量を低くしてもこれらの特徴は変わらなかった 。３０−６０日後、プレドニソンを与え続けた動物に化合物１ １０μg／kg／日 を与えると、全ての部位で、媒体単独で１２カ月処置した対照ウサギで観察され た値と有意に相異しない値までＢＭＤを回復した。血清オステオカルシンは、プ レドニソン処置ウサギにおいてベースライン５０±８ng／mlからから６.４倍低 下したが、化合物１ １０μg／kg／日を同時に与えることにより正常に戻った。 実施例XV 本発明化合物１のペプチド（配列番号７）の経鼻製剤を調製し、高いバイオア ベイラビリティーを持つその化合物を送達する効率を評価した。 ２０mg／ml化合物１、０.２mg／mlクエン酸、２.６mg／mlクエン酸ナトリウム 、０.２mg／mlベンズアルコニウムクロリドおよび様々な量のソルビトールを含 有する液剤と別個の増強剤を滅菌水中で調製し、１Ｎ ＮaＯＨを用いてｐＨを６ .０に調整した。 液剤をカニクイザルに経鼻投与し、上記のようして薬物動態を評価した。 試験した製剤の組成およびそのインビボ試験結果は表１に示すが、これから、 本発明の製剤は皮下注射により達成できるバイオアベイラビリティーの５０％に 近いバイオアベイラビリティーを提供すること、故に、骨粗鬆症の処置における 臨床使用に適し得ることが理解できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ラドムスキー，マイケル・ロイド アメリカ合衆国94043カリフォルニア州 マウンテン・ビュー、ロック・ストリート 2005番、アパートメント10 (72)発明者 クルステナンスキー，ジョン・レナード アメリカ合衆国94306カリフォルニア州 パロ・アルト、ラムボー・ドライブ3455番 (72)発明者 ネストー，ジョン・ジョゼフ・ジュニア アメリカ合衆国95014カリフォルニア州 クペルティノ、フェアーウッズ・コート 20937番 (72)発明者 ビッカリー，ブライアン・ヘンリー アメリカ合衆国94040カリフォルニア州 マウンテン・ビュー、ウッドリーフ・ウェ イ 111番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．そのアミノ酸残基（２２−３１）が両親媒性α−らせんを形成しており、 該残基（２２−３１）が配列番号８５、８６、２６、２７、２８、２９および３ ０から選択されるものである、ＰＴＨのまたはＰＨＴrpの各生理学的に活性な切 断類似体、またはそれらの塩、の有効量；ジメチル−β−シクロデキストリンお よび胆汁酸界面活性剤からなる群から選択される吸収増強剤；および水、を含ん でなる、骨粗鬆症の処置に有用な化合物の経鼻投与用医薬組成物。 ２．胆汁酸界面活性剤がグリココール酸およびタウロコール酸の塩類から選択 される、請求の範囲第１項に記載の組成物。 ３．胆汁酸界面活性剤がタウロコール酸ナトリウムである、請求の範囲第２項 に記載の組成物。 ４．胆汁酸界面活性剤がグリココール酸ナトリウムである、請求の範囲第２項 に記載の組成物。 ５．ＰＴＨ類似体またはＰＨＴrp類似体の濃度が約１mg／mlないし約１００mg ／mlである、請求の範囲第１項に記載の組成物。 ６．吸収増強剤の濃度が約０.５mg／mlないし約５０mg／mlである、請求の範 囲第１項に記載の組成物。 ７．ＰＴＨrp類似体が配列番号７の化合物である、請求の範囲第１項に記載の 組成物。 ８．吸収増強剤がジメチル−β−シクロデキストリンである、請求の範囲第７ 項に記載の組成物。 ９．吸収増強剤がタウロコール酸ナトリウムである、請求の範囲第７項に記載 の組成物。 10．吸収増強剤がグリココール酸ナトリウムである、請求の範囲第７項に記載 の組成物。 11．配列番号７の化合物約１mg／mlないし約１００mg／ml、ジメチル−β−シ クロデキストリン、グリココール酸ナトリウム、およびタウロコール酸ナトリウ ムからなる群から選択される吸収増強剤約０.５mg／mlないし約５０mg／ml、お よび水を含んでなる、医薬組成物。