JPH11511127A

JPH11511127A - 抗腫瘍剤としてのフェノール置換ジホスホネートの使用

Info

Publication number: JPH11511127A
Application number: JP9507232A
Authority: JP
Inventors: ナイザー，エリック; ベンゼン，クレイグ，レイ; ヌイアン，ラーン，マーン; セルラード，ジーン−リュック; ファン，ハイアー，トラング; フラッチ，ジーン
Original assignee: シンファーエス．アー．
Priority date: 1995-07-28
Filing date: 1996-07-26
Publication date: 1999-09-28
Also published as: EP0845991A2; DE69619117D1; US6127350A; EP0845991B1; DE69619117T2; ES2172675T3; HK1015686A1; CN1091601C; DK0845991T3; ATE212847T1; CN1192148A; AU6787496A; CA2228212A1; WO1997004785A1; PT845991E; ZA966364B; AU723094B2; CH690163A5

Abstract

(57)【要約】本発明は、腫瘍性疾患、特にｒａｓ依存性の癌を治療または予防する医薬品を生産するために、式（Ｉ）の化合物群から選択されたフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネートを使用する。ここで、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、同一かまたは異なっており、ＯＲ（ここでＲはＨ、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基である）、ＯＭ（ここでＭは陽イオンである）、ＮＲ²（ここでＲは上で規定したのと同じ意味を有する）であり、Ｚ¹、Ｚ²およびＺ³、Ｚ⁴は、２−８個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ｘ¹およびＸ²は、同一かまたは異なっており、Ｈ、ハロゲン原子、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基またはアルコキシ基である。Ｘ³は、Ｈ、１−４個の炭素原子を有するアルキル基Ｒ¹、アシル基Ｃ（Ｏ）Ｒ¹、カルバミル基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ¹（ここでＲ¹は上記したものである）である。Ｘ³Ｏと、他の二つの置換基Ｘ¹とＸ²との一方とは、１−４個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−（ＣＨ₂）_n−、−Ｏ（ＣＨ₂）_n−、−Ｓ−、−ＳＯ₂−、−Ｓ（ＣＨ₂）_n−、−ＳＯ₂（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは１−７の整数である）、またはＢと共に式−（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝のアルキリデン基を形成する（ここでｋは０または１であり、ｄは０−４の整数である）。Ｂは、Ｈ、１−４の炭素原子を有するアルキル基である。ｔは、０または１であり、ただしＡが（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝（ここでｋとｄとは前記している）である場合のみにｔが０である。

Description

【発明の詳細な説明】抗腫瘍剤としてのフェノール置換ジホスホネートの使用本発明は、抗腫瘍剤に関するものであり、特に腫瘍疾患の治療にフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネートの誘導体を使用することに関するものである。一層特定的には、本発明は、癌と転移との治療および予防に有用な、特にｒａｓ腫瘍遺伝子に依存する癌および転移侵入の治療と予防とに対して特に有用な薬剤組成物を調製するために、特定のフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネート誘導体を使用するものである。現存する抗ガン剤の大部分は、腫瘍細胞だけを殺す特異性を持たない細胞毒性の化合物であり、従って正常細胞にも影響し、毒性の副作用をもたらす。従って、正常な細胞の増殖に対して影響を与えることなく、癌細胞の増殖の阻害をもたらす経路を示す、細胞に一層特異的に作用する薬剤を進歩させる必要がある〔「腫瘍崩壊性薬剤：Oncolytic Drugs」J．R．Prous「The New Years Drug News」1 994年版４５頁および「癌化学療法におけるRas 腫瘍遺伝子を標的とするアプローチ :Ras Oncogene Directed Approach in Cancer Chemotherapy」G．Bolton e t al.「Annual Reports in Medicinal Chemistry」1994年、29:165-174頁］。 Ras 腫瘍遺伝子の突然変異は、広範囲のヒト腫瘍中に存在することが示されてきており、ヒトの癌全体の１／５もの多くに対して寄与している可能性がある。特に、５０％を越える大腸癌と、９０％を越える膵臓癌とにRas 腫瘍遺伝子が発見されている。従って、Ｒａｓの突然変異は、癌の生成と発生との引き金を引くのに際して鍵を握っているものと考えられている（J．L．Bos.「Cancer Res.」 1989年、49:4682-4689頁）。また、ｒａｓタンパク質の突然変異形は、癌患者の腫瘍中にのみ存在しており、正常な組織中には存在していないことが確認されてきた。従って、正常細胞を癌細胞へと形質転換させるのと共に、癌細胞および腫瘍の発生を更に促進する、ｒａｓの突然変異の活性を阻害することは、魅力のある治療上の標的である。欧州特許第０，３３９，２３７号に対応する米国特許第５，０４３，３３０号（１９９１年）には、一組のフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネートの誘導体の合成と、例えば循環器系疾患の治療に脂質減少剤としてこれらを利用することとが開示されている。ここで本出願人が見いだしたところでは、米国特許第５，０４３，３３０号に開示されている型のジホスホネートが、驚くべきことに、正常細胞に対する細胞毒性なしに、癌細胞の増殖を特異的に阻害するだけでなく、癌細胞にアポトーシスを引き起こすのに有効であった。従って、本発明の一つの態様では、腫瘍性疾患を治療する医薬品を生産するために、ある化合物を使用することを提供し、この化合物は、次の式（Ｉ）を有している。ここで、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、同一かまたは異なっており、ＯＲ（ここでＲはＨ、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基である）、ＯＭ（ここでＭは陽イオンである）、ＮＲ₂（ここでＲは上で規定したのと同じ意味を有する）であり、Ｚ¹、Ｚ²およびＺ³、Ｚ⁴は、２−８個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ｘ¹およびＸ²は、同一かまたは異なっており、Ｈ、ハロゲン原子、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基またはアルコキシ基である。Ｘ³は、Ｈ、１−４個の炭素原子を有するアルキル基Ｒ¹、アシル基Ｃ（Ｏ）Ｒ¹ 、カルバミル基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ¹（ここでＲ¹は上記したものである）である。Ｘ³Ｏと、他の二つの置換基Ｘ¹とＸ²との一方とは、１−４個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−（ＣＨ₂）_n−、−Ｏ（ＣＨ₂）_n−、−Ｓ− 、−ＳＯ₂−、−Ｓ（ＣＨ₂）_n−、−ＳＯ₂（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは１−７の整数である）、またはＢと共に式（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝のアルキリデン基を形成する（ここでｋは０または１であり、ｄは０−４の整数である）。Ｂは、Ｈ、１−４の炭素原子を有するアルキル基である。ｔは、０または１であり、ただしＡが（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝（ここでｋとｄとは前記している）である場合のみにｔが０である。式（Ｉ）の化合物は、塩類としても存在でき、式（Ｉ）の化合物を以下で参照するときには、文脈上そうでない限りは、この化合物の塩形を含むものとする。塩の例は、式（Ｉ）の化合物において、基Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³、Ｚ⁴のうちの一つ以上が基ＯＭ（ここでＭはアルカリ金属またはアルカリ土類金属イオン）、またはアンモニウム基ＮＲ₄（ここでＲは前記したものと同じ意味を有している）によって構成されている。本発明の他の態様においては、充実性腫瘍、例えば大腸、膵臓、甲状腺、肺、胸部、頭部および頸部の腫瘍を治療する医薬品を生産するために、前に規定した式（Ｉ）の化合物を使用する。本発明の他の態様においては、造血系および免疫系の腫瘍、例えばリンパ腫および白血病を治療する医薬品を生産するために、前に規定した式（Ｉ）の化合物を使用する。本発明の更に他の態様においては、原発性の腫瘍が転移している患者を治療する医薬品を生産するために、前に規定した式（Ｉ）の化合物を使用する。本発明の他の態様においては、正常な細胞の形質転換を予防し、癌細胞による正常組織の転移攻撃を阻害するための医薬品を生産するのに、式（Ｉ）の化合物を使用する。本発明の更に他の態様においては、腫瘍性疾患を治療し、癌の転移を予防する方法、特にｒａｓ−依存癌を治療する方法を提供しており、この方法は、前記癌を持つ患者または癌発生の可能性のある患者に対して、前に規定した式（Ｉ）の化合物を治療上有効な量投与することを含む。また、本発明の範囲内には、癌細胞を選択的に除去する方法が含まれており、患者からの癌細胞と正常細胞との混合物を、生体外（ｅｘｖｉｖｏ）の方法で式（Ｉ）の化合物によって処理し、これに加えて更に患者中へと細胞を再導入することを含む。従って、例えば、この方法に従って、患者から血液、血漿や他の液体を引出し、式（Ｉ）の化合物によって生体外で処理し、次いで患者へと再導入することができる。式（Ｉ）の化合物において、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴基の例には、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、ｓｅｃ−ブチルオキシ基およびｔｅｒｔ−ブチルオキシ基が含まれる。好ましい基はイソプロピルオキシ基である。現在のところ、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴基が同一であることが好ましく、本発明の特に好適な態様においては、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴はすべてイソプロピルオキシ基である。Ｘ¹およびＸ²基の例には、水素、１−５個、一層特定的には１−４個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖のアルキル基およびアルコキシ基が含まれる。好適なＸ¹およびＸ²基は、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、メトキシ基およびエトキシ基が含まれ、特に好適な基はｔｅｒｔ−ブチル基である。Ｘ³基の例には、水素、炭素原子数１−４のアルキル基および炭素原子数１− ４のアルカノイル基が含まれ、現在のところ水素が特に好ましい。式（Ｉ）の化合物には、フェノール置換アルキリデンジホスホネート（Ｉａ）とフェノール置換アルケニリデンジホスホネート（Ｉｂ）が含まれる。ここで、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、Ａ、Ｂ、ｋ、ｄ、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、前記したものである。式（Ｉａ）の化合物には、例えば、Ｘ¹およびＸ²が同一かまたは異なっており、１−８個の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｘ³は水素であり、Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−（ＣＨ₂）_n、Ｓ、ＳＯ₂、Ｓ（ＣＨ₂）_n、ＳＯ₂（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは１−７である）、Ｂは、水素または炭素原子数１−４のアルキル基であり、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、同一かまたは異なっており、ＯＨ、炭素原子数１ −８のアルコキシ基であり、Ｚ¹、Ｚ²およびＺ³、Ｚ⁴の対の一方または双方が、２−８個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ基であるものが含まれる。式（Ｉｂ）の化合物には、例えばＸ¹およびＸ²が同一かまたは異なっており、１−８個の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｘ³は水素であり、ｋは０または１であり、ｄは０−４であり、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、同一かまたは異なっており、ＯＨ、炭素原子数１ −８のアルコキシ基であり、またはＺ¹、Ｚ²およびＺ³、Ｚ⁴の各組の一方または双方が、２−８個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ基であるものが含まれる。本発明で使用する式（Ｉ）の化合物の特定の例には、表ＩａおよびＩｂに示す化合物が含まれる。本発明は、腫瘍疾患の治療および癌と転移との防止、一層特定的にはｒａｓ依存性であるものの治療および予防に対する、式（Ｉ）のｇｅｍ−ジホスホネートの新しい用途を提供する。特に好適な実施形態においては、式（Ｉ）の化合物１（ここでＸ¹およびＸ²は、それぞれ３−位置または５−位置で、双方共にｔｅｒｔ−ブチル基であり、Ｘ³は４−位置で水素であり、ＡはＣＨ₂であり、ＢはＨであり、ｔは１であり、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴はすべてイソプロピルオキシ基である）を、癌の治療に有効な薬剤組成物を調製するのに使用する新しい用途を提供する。前記化合物１は、次の構造式と物理化学的な特性とを有する。テトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートＣ₂₈Ｈ₅₂Ｏ₇Ｐ₂：融点＝10 4−105℃ 本発明の化合物は、欧州特許第０，３３９，２３７号に記載されている方法またはこれに類似の方法に従って製造できる。この開示は、参照によって本明細書に包含する。この類縁体の幾つかは新規である。従って、本発明の他の態様は、テトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートおよびテトライソプロピル１−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−ブチリデン−２，２−ジホスホネートから選択された新規な化合物を提供する。式（Ｉ）の化合物は、経口投与でき、または他の粘膜表面を通した（例えば鼻粘膜、頬粘膜、気管支粘膜または直腸粘膜を通した）デリバリーで投与でき、経皮的に投与でき、あるいは注射（例えば皮内、腹腔内、静脈内または筋肉内注射）によって投与できる。前記化合物が経口投与を意図されている場合には、これらを例えば錠剤、カプセル剤、顆粒、丸薬、ボンボン、ドロップ、粉剤、溶液、乳剤、シロップ、懸濁液、または経口投与に適した他のあらゆる薬剤組成物として調剤できる。経口調剤形態は、所望であれば、一種以上の放出遅延コーティングによって被覆し、活性化合物の放出を、消化管の特定部分で制御し、または標的化することができる。錠剤と他の固形または液状の経口調剤形態は、式（Ｉ）の化合物と、薬剤学上許容される可溶化剤、希釈剤または担体とから標準法で調製できる。可溶化剤、希釈剤または担体の例には、ラクトースのような糖類、デンプン、セルロースおよびその誘導体、粉末トラガカンス、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油、グリセリン、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールのようなポリオール類、アルギン酸、アルギン酸塩、寒天、無発熱物質水、等張性塩類、燐酸緩衝液、および必要に応じて崩壊剤のような他の薬剤学上許容される賦形剤、潤滑剤、ラウリル硫酸ナトリウムのような湿潤剤、着色剤、香料および防腐剤等が含まれる。カプセル剤は、固いまたは柔らかい種類のものであってよく、前記活性成分を固形、液状または半固形の形で含有できる。典型的には、こうしたカプセル剤は、ゼラチンまたは同等の物質から形成することができ、コーティングしてもよく、しなくともよい。カプセル剤が胃を通過して腸内に入るまで活性成分の放出を遅らせることが望ましければ、十二指腸または回腸内で見いだされるｐＨで溶解するのに適合したｐＨ感受性のコーティングをカプセル剤に設けることができる。こうしたコーティングの例には、「ユーオラジッツ：Euoragits」が含まれ、その使用は周知である。注射用の調合剤は、通常は、洗剤のような適切な可溶化剤からなっているであろうし、緩衝剤のような化合物および賦形剤を含有させ、正確な生理学的ｐＨを持つ等張液をもたらすこともできる。この注射可能な溶液は、典型的には発熱物質を含有しておらず、単位用量当たりの化合物を含有するシールされたビンまたはアンプル中に収容できる。本発明の化合物の単位用量形態は、典型的には、０．１重量％−９９重量％の活性物質を含有しえるし、一層普通には５−７５重量％の活性物質を含有しえる。例えば、単位用量形態は、１ｍｇから１ｇの化合物を含有していてよく、一層普通には１０ｍｇから５００ｍｇ、例えば５０ｍｇ−４００ｍｇ、典型的には１００ｍｇ−２００ｍｇの用量を含有できる。本発明の化合物は、所望の治療効果をもたらすのに有効な量、投与されるであろう。所望の治療効果をもたらすのに必要な濃度は、とりわけ、疾患の正確な性質、寸法、患者の体重と年齢、疾患の深刻さに従って、変化し得る。この投与用量は、好ましくは患者に対して非毒性であり得るが、しかし特定の環境下では、治療中の疾患のひどさによって、幾らかの毒性の兆候をもたらす量の化合物を投与することが必要となり得る。典型的には、本発明の化合物は、体重に対して０．０１ｍｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇの範囲の量投与でき、一層好ましくは体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇ− １０ｍｇ／ｋｇの量投与でき、特には体重に対して１ｍｇ／ｋｇ−５ｍｇ／ｋｇの量投与できる。体重７０ｋｇの平均的なヒトに対しては、本発明の化合物の典型的な一日当たりの用量は、７０ｍｇ−７００ｍｇの範囲であろう。こうした用量は、例えば、一日に２回から４回投与できる。しかし、結局は、投与される調剤の寸法と投与の頻度とは、患者を治療する医者の裁量と判断とによるであろう。例Ｋは、化合物１のカプセル剤を調製するために本出願人が採用した代表的なバッチ処方を示すために提供する。本発明の炭素原子の薬理学的活性は、ヒト膀胱癌Ｔ２４（Ｈ−ｒａｓ）腫瘍遺伝子でトランスフェクションされたＮＩＨ３Ｔ３細胞のクローンを使用して、インビトロのスクリーニングモデルによって示すことができる。この細胞系（ＰＡＰ２）は、高水準のｒａｓ形質発現と、高水準の転移能と相関するｒａｓ依存活性という特徴（S.A．ヒル等、「国立癌研究所誌:J．of National Cancer Institu te」1988年、80:484頁-490頁およびA．チェンバース等、「Invation and Metastas is」1990年:10:225-240頁）に基づいて、選択されてきた。このＰＡＰ２細胞系は、転移プロセスに関係して、ｒａｓ依存性のカプテシン、システイン、プロテナーゼの形質発現の増大を示すことが示されてきた（A．チェンバース等「分子発癌:Molecular Carcinogenesis」1992年:5,238-248頁）。このように、ＰＡＰ２細胞は、ヒトの癌の病原性に関連する機能を示す。これらの細胞は、細胞の増殖、タンパク質分解活性（転移）およびアポトーシス（プログラムされた細胞死）に対する化合物のインビトロの作用を試験するのに使用した。免疫不全（ヌード）マウスに注射すると、これらの細胞は急速に充実性腫瘍を生成し、試験化合物の抗腫瘍活性を、経口投与の後にインビボで測定した。一連のインビトロおよびインビボの実験結果から、本出願人は、式（Ｉ）の代表的化合物と特に化合物１とは、組織培養物での癌細胞の成長を阻害し、組織培養物中で癌細胞のアポトーシスを引き起こし、転移に関与する癌細胞中のプロテアーゼを阻害し、充実性腫瘍を持つヌードマウスにおいて抗癌活性を示すことを見いだした。表１−７ｂに示す実験結果からもたらされる証拠によれば、式（Ｉ）の化合物および特に化合物１は、リンパ腫および白血病のような、造血系および免疫系の癌だけでなく、膵臓、大腸、胸部、甲状腺、脳、肺、頭部および頸部の癌を含む、腫瘍性疾患の治療に有効である可能性がある。この最近発見された式（Ｉ）の化合物の抗癌活性は、予期されなかったものであり、脂質減少剤としての以前に報告された活性とは別個のものである。結果は平均値±偏差として表示する。差異の顕著性は、対になっていないデータについては、スチューデント−ｔ試験を使用して評価した。例１式（Ｉ）の化合物によるｒａｓ依存性の細胞増殖の阻害一連の式（Ｉ）の化合物をスクリーニングし、最も活性の化合物と構造と活性との関係を測定した。ＰＡＰ２細胞の増殖の阻害は、初期スクリーニング試験として選択した。簡潔に述べれば、ＰＡＰ２細胞を、２４個のウエルを有するプレートにウエル１つ当たり３×１０⁴の濃度で播種し、２４時間付着させた。試験化合物を、１％エタノール溶液中で、１０−２０μＭの最終濃度で添加した。細胞を４８時間の培養の後にトリプシン化し、生存細胞（トリパンブルーを除く）を計数した。得られた結果を、化合物（Ｉａ）および（Ｉｂ）の各系列についてそれぞれ表１ａ、１ｂに列記する。本試験においてスクリーニングした化合物は、欧州特許第０３３９２３７号に対応する米国特許５，０４３，３３０（１９９１年）に記載されている手順に従って合成した。幾つかの試料（例Ａ−Ｊ）は、上記した従来技術文献に記載されている手順に従って、新規な誘導体の合成を更に説明するために提供する。例２インビトロの結果ｒａｓ依存性の細胞増殖の阻害細胞培養Ｈ−ｒａｓ−トランスフェクションされたＮＩＨ−３Ｔ３細胞（ＰＡＰ２）（ S．A．Hill 等「J．Natl．Cancer Inst．1988年:80、484-490頁）を、３７℃で、５％ＣＯ₂雰囲気中で、２５ｍＭのＨＥＰＥＳと１０％のウシ胎児血清とを含有するダルベコ社（Dulbecco）の修正イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で成長させた。ＰＡＰ２細胞をトリプシン化し、集密状態に先立って週に２回継代培養した。１．細胞増殖の阻害細胞の増殖に対する化合物１の作用を、二つの方法によって監視した。 −血球計算板および共存ＤＮＡの測定による細胞の計数 −比色測定による細胞数の評価１．１細胞の計数とＤＮＡの含有量簡潔に述べると、ＰＡＰ２細胞を、２４個のウエルを有するプレートにディッシュ１つ当たり３×１０⁴の濃度で播種し、４時間後に試験化合物の濃度を上昇させて添加した。細胞を１日ごとにトリプシン化した。細胞の懸濁液の等画分を、血球計算板を使用して計数した。残留する細胞を、０．０１ＮのＮａＯＨ中で溶菌し、４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドールを蛍光源として使用し、ウシ胸腺ＤＮＡを標準として使用して、蛍光分光光度分析によってＤＮＡ濃度を測定した。ＰＡＰ２細胞の成長を阻害する化合物１のＩＣ５０の計算値は、１．０２μＭである。ＰＡＰ２細胞のＤＮＡ含有量を減少させる化合物１のＩＣ５０の計算値は、２．７７μＭである。表２ａおよび２ｂの結果に示されているように、式（Ｉ）の化合物、特に化合物１は、培養物内でＰＡＰ２細胞の成長を阻害する。１．２比色ＭＴＴアッセイ細胞数を、ＭＴＴアッセイによって、実質的にＴ．モスマン「J．Immunol．Me thod」1983年、65、55-63頁に記載されているようにして実施した。簡潔に述べると、ＰＡＰ２細胞を、平坦な９６個のウエルを有するプレート（ファルコン社）中に１デッシュ当たり１×１０⁴の濃度で播種し、５時間後に試験薬剤を添加した。２４時間、４８時間、７２時間の培養期間に続いて、ＰＢＳ中に５ｍｇ／ｍｌで溶解された１０μｌのＭＴＴ〔３−（４，５−ジメチルチアゾール−２− イル）−２．５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド〕を、各ウエルに添加し、３７℃で４時間培養した。次いで、この培地を除去し、０．０４ＮのＨＣｌを含有するイソプロパノール１００μｌをウエルに添加した。変質した染料の吸収を５７０ｎｍで微小平板読み取り器によって６２０ｎｍのバックグラウンド控除を行って測定した。ＰＡＰ２細胞の増殖を阻害する化合物１のＩＣ５０の計算値は、（７２時間の培養後に）ＭＴＴ法で測定したところ、８．０５μＭであった。表３ａ、３ｂ、３ｃの結果は、他のアッセイによって、式（Ｉ）の化合物、特に化合物１が、培養物中でＰＡＰ２細胞の成長を阻害することを確認した。ＭＴＴアッセイによって測定した、ＰＡＰ２細胞の増殖に対する化合物１の作用３．ＤＮＡ合成の阻害ＤＮＡの合成を、培養されたＰＡＰ２細胞によるトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）沈殿物質中へのトリチエートされたチミジンの移入によって測定した。ＰＡＰ２細胞を、２４個のウエルを有するプレートに各ウエル当たり３×１０⁴の細胞を２日間にわたって播種した。次いで、エタノール中に溶解された化合物１による前培養に続いて、０．５μＣｉのメチル−〔３Ｈ〕−チミジン（特異的活性８２Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を添加し、標識を４時間進行させた。次いで、この細胞を１ｍｌの冷リン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって洗浄し、０．２ｍｌの４％ドデシル硫酸ナトリウムによって可溶化した。この細胞性抽出物を、１ｍｌの３０％ＴＣＡによって沈殿させ、氷上で１時間保持した。この沈殿物をガラスファイバーフィルター上へと濾過によって回収し、５ｍｌの５％ＴＣＡによって洗浄した。このフィルター上の放射能を、液体シンチレーションカウンター中で計数した。ＰＡＰ２細胞中でＤＮＡ合成を阻害する、化合物１のＩＣ５０の計算値は、３．７５μＭであった。表４の結果が示すように、式（Ｉ）の化合物、特に化合物１は、ｒａｓトランスフェクションされた細胞中でＤＮＡ合成を阻害する。４．アポトーシスの誘起また、式（Ｉ）の化合物は、５μＭまたはこれ以上の濃度で、ＰＡＰ２細胞系の特異的な細胞死を刺激するという選択的作用を有していることを見いだした。癌細胞のプログラムされた細胞死を選択的に刺激するというこの特異的な作用は、化合物１を用いて、他の二種類のヒト癌細胞系（ＨｅｐＧ２およびＳＷ４８０）においても検証しており、これらの化合物が、細胞の成長を阻害するだけでなく、更に癌細胞の自己破壊を引き起こすことも示している（表５）。これはゲル電気泳動によって確認しており、アポトーシスの指標であるＤＮＡの断片化を示した。・細胞は、処理前に４８時間、２４個のウエルを有するプレート中で培養した。・処理は、１０μＭの化合物で２４時間・計数：細胞をトリプシン化し、生存細胞を計数する。５．広範なヒト癌細胞系に対する化合物１の作用化合物１を、広範な確立されたヒト由来の癌細胞系中での抗増殖活性について試験し、関連するヒトの癌にこれらの化合物を使用できる可能性を確認した（表６）。これらの結果が示すところでは、化合物１は、試験した５０を越えるヒト癌細胞系のうちの９０％以上において、細胞の増殖を減少させるのに有効であった。従って、式（Ｉ）の化合物は、ｒａｓ突然変異の有無に係わりなく、広範なヒト癌を治療する上で有効であると考えることができる。例２インビボの結果腫瘍の成長の阻害７週間から９週間の年齢のメスのヌードマウス（スイスｎｕ／ｎｕ）に、０日目に、０．５ｍｌのＰＡＰ２細胞（０．５ｍｌのＤＭＥＭ当たり５×１０⁵個の細胞）をｓ．ｃ．注射した。これと同じ日に、化合物１（５０ｍｇ／ｋｇ）による経口処理を開始した。処理した群（ｎ＝１８）は、食餌に混合された化合物１（０．０３％ｗ／ｗ）を摂取し、対照例の群（ｎ＝２２）は、化合物を添加していない食餌を摂取した。１５日目に、マウスの体重を測定し、殺し、腫瘍を切除し、秤量した。表７ａの結果が示すように、処理された群の腫瘍の平均重量は顕著に減少しており、化合物１が抗腫瘍剤であることを示している。マウスの体重は、対照例と処理群との双方において同じであり、従って、化合物１に毒性がないことを確証している。他の組の実験においては、化合物１を、１２．５、５０および１００ｍｇ／ｋｇの用量で試験した。表７ｂの結果が示すように、化合物１は、１２．５ｍｇ／ｋｇという低い用量で、そして用量に依存する状態で、ヌードマウスにおける腫瘍の成長を阻害している。これらの結果が示すように、式（Ｉ）の化合物、特に化合物１は、正常な細胞、組織または器官に対して毒性作用を有していない、経口的に活性な抗腫瘍性の化合物であり得る。例Ａテトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート四塩化チタン（１３．８３ｇ、７３ｍｍｏｌ）を、０℃に保持されている乾燥ＴＨＦ（８０ｍｌ）に対して滴下した。得られた混合物を、０℃で、３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（５．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）、テトライソプロピルメチレンジホスホネート（１０．８５ｇ、３２ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（１４．７１ｇ、１４６ｍｍｏｌ）によって、順に処理した。この反応混合物を、１２時間、室温で攪拌し、８０ｍｌの水を加えた。こうしてクエンチした反応混合物を、ジエチルエーテルによって抽出し（６０ｍｌで３回）、エーテル画分を合わせて、洗浄水が中性のｐＨを持つようになるまで、飽和ＮａＣｌ溶液によって抽出した。ＭｇＳＯ₄で乾燥した後、この有機溶媒を留去し、この残滓を、カラムクロマトグラフィーによってシリカ上で、ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（９５：５）の混合物を溶離剤として使用して精製し、８ｇ（６２％）の固体を得た。融点は８７−８８℃。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５３２、Ｍ⁺：３６７：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝８．２２（ｄｄ、Ｊ＝３１および４８Ｈｚ、１Ｈ）：Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＰ₂ ７．７（ｓ、２Ｈ）：芳香環のＨ５．６（ｓ、１Ｈ）ＯＨ４．８５−４．６３（２ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ３．１６（セプテット、２Ｈ）Ｐｈ−ＣＨＭｅ₂ １．３９、１．３６、１．２７、１．２３および１．１６（８ｄ、全体で３６Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂およびＰｈ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｂテトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート（５ｇ、９．４ｍｍｏｌ）をエタノール（５０ｍｌ）中に溶解し、この溶液を４時間、２ｇの１０％パラジウムでカーボン上で５０ｐｓｉで室温で水素添加した。この触媒は濾過し、この溶媒を留去し、この残滓を、カラムクロマトグラフィーによってシリカ上で、ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ（９５：５）の混合物を溶離剤として使用して精製し、２．５ｇ（５０％）の固体を得た。融点は９０−９１℃。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５３４、Ｍ⁺：３６９：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝６．９４（ｍ、２Ｈ）：芳香環のＨ４．８−４．７（ｍ、５Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂およびＯＨ３．２−３．１（幾つかのｍ、全体で６Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨおよびＰｈ −ＣＨＭｅ₂ ２．５１（ｔｔ、Ｊ＝６および２４Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ１．３３−１．２１（幾つかのｄ、全体で３６Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂およびＰｈ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｃテトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート３，４，５−トリメトキシベンズアルデヒド（７ｇ、３５．７ｍｍｏｌ）を、四塩化チタン、テトライソプロピルメチレンジホスホネートおよびＮ−メチルモルホリンによって、ＴＨＦ中で、例Ａに記載したようにして処理し、１１．５ｇ（６２％）の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５２２、Ｍ⁺：３５７：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝８．２１（ｄｄ、Ｊ＝３０および４８Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ＝Ｃ−Ｐ₂ ７．２８（ｓ、２Ｈ）芳香環のＨ４．８５−４．６３（２ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ３．９（ｔ、９Ｈ）Ｐｈ−ＯＭｅ１．４、１．３６および１．２２（４ｄ、全体で２４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｄテトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エチリデン −１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート（７ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を、例Ｂに記載されているようにして、１０％Ｐｄ／Ｃによって水素添加し、５．７ｇ（８１％）の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５２４、Ｍ⁺：３５９：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝６．５５（ｓ、２Ｈ）：芳香環のＨ４．８−４．７（ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ３．８５および３．８１（ｓ、９Ｈ）Ｐ−ＯＭｅ３．１７（ｄｔ、Ｊ＝６および１６Ｈｚ、２Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂− ＣＨ２．５０（ｔｔ、Ｊ＝６および２４Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ１．３３−１．２６（幾つかのｄ、全体で２４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｅテトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルベンズアルデヒド（６ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）を、四塩化チタン、テトライソプロピルメチレンジホスホネートおよびＮ−メチルモルホリンによって、ＴＨＦ中で、例Ａに記載したようにして処理し、４．２ｇ（６２％）の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５１８、Ｍ⁺：３５３：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝８．１９（ｄｄ、Ｊ＝３０および４８Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ＝Ｃ−Ｐ₂ ７．７１−７．６７（ｍ、２Ｈ）芳香環のＨ５．６（ｓ、１Ｈ）ＯＨ４．８−４．７（２ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ２．２６（ｓ、３Ｈ）Ｐｈ−Ｍｅ１．４０（ｓ、９Ｈ）Ｐｈ−ｔ−Ｂｕ１．３８、１．３６、１．２４および１．２０（８ｄ、全体で２４Ｈ）Ｐ− Ｏ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｆテトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート（５ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を、例Ｂに記載されているようにして、１０％Ｐｄ／Ｃによって水素添加し、２．９ｇ（５８％）の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５２０、Ｍ⁺：３５５：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝７．０２および６．９２（２ｍ、２Ｈ）：芳香環のＨ４．８−４．７（ｍ、５Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂およびＯＨ３．１１（ｄｔ、Ｊ＝６および１７Ｈｚ、２Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ２．４９（ｔｔ、Ｊ＝６および２４Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ２．２１（ｓ、３Ｈ）Ｐｈ−Ｍｅ１．３９（ｓ、９Ｈ）Ｐｈ−ｔ−Ｂｕ１．３１、１．２６および１．２４（３ｄ、２４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｇテトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート３−エトキシ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（６ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）を、四塩化チタン、テトライソプロピルメチレンジホスホネートおよびＮ−メチルモルホリンによって、ＴＨＦ中で、例Ａに記載したようにして処理し、４．２ｇ（６２％）の表題の化合物を得た。融点は１４３−１４４℃。マススペクトル：ｍ／ｅ＝４９２、Ｍ⁺：３２７：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝８．１９（ｄｄ、Ｊ＝３１および４８Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ＝Ｃ−Ｐ₂ ７．９、７．３および６．９１（３ｍ、３Ｈ）芳香環のＨ６．２（ｓ、１Ｈ）ＯＨ４．８５−４．６３（２ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ４．１９（ｑ、Ｊ＝７Ｈｚ）Ｐｈ−ＯＣＨ₂−ＣＨ₃ １．４６（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）Ｐｈ−ＯＣＨ₂−ＣＨ₃ １．３９、１．３６、１．２３および１．２１（４ｄ、全体で２４Ｈ）Ｐｈ −ＣＨＭｅ₂ 例Ｈテトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートテトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート（５ｇ、１０．１６ｍｍｏｌ）を、例Ｂに記載されているようにして、１０％Ｐｄ／Ｃによって水素添加し、４．５ｇ（９０％）の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝４９４、Ｍ⁺：３２９：Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉＰｒ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝６．８５−６．７５（幾つかのｍ、３Ｈ）：芳香環のＨ５．６５（ｓ、１Ｈ）ＯＨ４．８−４．７（ｍ、４Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨＭｅ₂ ４．１０（ｑ、Ｊ＝７Ｈｚ）Ｐｈ−ＯＣＨ₂ＣＨ₃ ３．１４（ｄｔ、Ｊ＝６および１６Ｈｚ、２Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ２．４５（ｔｔ、Ｊ＝６および２４Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ₂−ＣＨ１．４３（ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）Ｐｈ−ＯＣＨ₂ＣＨ₃ １．３２−１．２５（４つの部分的に重複しているｄ、全体で２４Ｈ）Ｐ− Ｏ−ＣＨＭｅ₂ 例Ｉテトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシフェニル） −エテニリデン−１，１−ジホスホネート３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシベンズアルデヒド（２．０ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を、四塩化チタン、テトラエチルメチレンジホスホネートおよびＮ−メチルモルホリンによって、ＴＨＦ中で、例Ａに記載したようにして処理し、３．０ｇ（７２％）の表題の化合物を得た。融点は６６−６７℃ マススペクトル：ｍ／ｅ＝５１８、Ｍ⁺：３８１：Ｍ⁺−ＰＯ₃Ｅｔ₂ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） δ＝８．２６（ｄｄ、Ｊ＝３０および４８Ｈｚ、１Ｈ）Ｐｈ−ＣＨ＝Ｃ−Ｐ₂ ７．８（ｓ、２Ｈ）芳香環のＨ４．２５−４．００（２ｍ、８Ｈ）Ｐ−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₃ ３．６９（ｓ、３Ｈ）Ｐｈ−ＯＭｅ１．４４（ｔ、１８Ｈｚ）Ｐｈ−ｔ−Ｂｕ１．３８および１．７０（２ｔ、１２Ｈ）Ｐｈ−ＯＣＨ₂−ＣＨ₃ 例Ｊテトライソプロピル１−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−ブチリデン−２，２−ジホスホネートテトライソプロピルメチレンジホスホネートと３等量のヨウ化エチルとを、ＴＨＦ中で、ＮａＦの存在下に反応させることによって、テトライソプロピルプロピリデン−１，１−ジホスホネートを調製した。テトライソプロピルプロピリデン−１，１−ジホスホネート（２．２ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中で、６０％ＮａＨ（０．５ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）の懸濁液へと添加し、この混合物を、ＮａＨが消失するまで攪拌した。１０ｍｌのＴＨＦ中の３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジルクロリド（１．５ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、終夜還流した。作業終了後、シリカ上で、ＣＨＣｌ₃：ＡｃＯＥｔ（８：２）を溶離剤として使用してカラムクロマトグラフィーを行い、１.５ｇ(４２％)の表題の化合物を得た。マススペクトル：ｍ／ｅ＝５９０、Ｍ⁺：４２５、Ｍ⁺−ＰＯ₃ｉｐｒ₂、ベースピーク３４１、Ｍ^-−２×プロペン融点＝１３１−１３２℃例Ｋ化合物の調合物の典型例活性成分化合物１不活性成分予めゼラチン化された澱粉サイズ３の不透明な暗青色のゼラチンカプセル代表的なバッチ処方典型的なバッチサイズ２０００のカプセル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ヌイアン，ラーン，マーンスイス国，シーエイッチ−1260 ネイオン，ララヴレート，14 (72)発明者セルラード，ジーン−リュックスイス国，シーエイッチ−1264 セイント −サーグ，チャンプ−ド−ジョウクス, 660 (72)発明者ファン，ハイアー，トラングスイス国，シーエイッチ−1295 タネイ, ケミンドベヌアイヤー，８ (72)発明者フラッチ，ジーンスイス国，シーエイッチ−1004 ロウゼン，アヴェニュードエチャレンズ，38

Claims

【特許請求の範囲】１．腫瘍性疾患を治療または予防する医薬品を生産するために、式（Ｉ）の化合物群から選択されたフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネートを使用する方法。〔ここで、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、同一かまたは異なっており、ＯＲ（ここでＲはＨ、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基である）、ＯＭ（ここでＭは陽イオンである）、ＮＲ₂（ここでＲは上で規定したのと同じ意味を有する）であり、Ｚ¹、Ｚ²およびＺ³、Ｚ⁴は、２−８個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ｘ¹およびＸ²は、同一かまたは異なっており、Ｈ、ハロゲン原子、１−８個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖または環状のアルキル基またはアルコキシ基である。Ｘ³は、Ｈ、１−４個の炭素原子を有するアルキル基Ｒ¹、アシル基Ｃ（Ｏ）Ｒ¹ 、カルバミル基Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ¹（ここでＲ¹は上記したものである）である。Ｘ³Ｏと、他の二つの置換基Ｘ¹とＸ²との一方とは、１−４個の炭素原子を有するアルキリデンジオキシ環を形成していてよい。Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−（ＣＨ₂）_n−、−Ｏ（ＣＨ₂）_n−、−Ｓ− 、−ＳＯ₂−、−Ｓ（ＣＨ₂）_n−、−ＳＯ₂（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは１−７の整数である）、またはＢと共に式−（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝のアルキリデン基を形成する（ここでｋは０または１であり、ｄは０−４の整数である）。Ｂは、Ｈ、１−４の炭素原子を有するアルキル基である。ｔは、０または１であり、ただしＡが（ＣＨ＝ＣＨ）_k−（ＣＨ₂）_d−ＣＨ＝（ここでｋとｄとは前記している）である場合のみにｔが０である。〕２．前記腫瘍性疾患が、リンパ腫および白血病を含む造血系および免疫系の癌、および膵臓、大腸、胸部、甲状腺、脳、肺、頭部および頸部の癌から選択されている、請求項１記載の使用方法。３．癌細胞による正常組織の転移攻撃を予防する医薬品を生産するために、式（Ｉ）の化合物群の中から選択されたジホスホネートを使用する、請求項１記載の使用方法。４．式（Ｉａ）の化合物群の中から選択されたフェノール置換アルキリデンジホスホネートを使用する、請求項１−３のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。〔ここで、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、Ａ、Ｂ、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、請求項１に規定されている〕５．式（Ｉｂ）の化合物群の中から選択されたフェノール置換アルケニリデンジホスホネートを使用する、請求項１−３のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。〔ここで、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、ｋ、ｄ、Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は、請求項１に規定されている〕６．Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴は同一であるかまたは異なっており、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基およびｔ−ブチル基から選択されている、請求項１−５のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。７．Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴が同一である、請求項６記載の使用方法。８．Ｚ¹、Ｚ²、Ｚ³およびＺ⁴がイソプロピル基である、請求項７記載の使用方法。９．Ｘ¹基およびＸ²基は同一であるかまたは異なっており、１− ５個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖のアルキル基およびアルコキシ基から選択されている、請求項１−８のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。１０．Ｘ¹とＸ²基とは同一であるかまたは異なっており、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、メトキシ基およびエトキシ基から選択されている、請求項９記載の使用方法。１１．Ｘ¹とＸ²とが同一である、請求項１０記載の使用方法。１２．Ｘ¹とＸ²とが共にｔ−ブチル基である、請求項１１記載の使用方法。１３．Ｘ³が、水素、炭素原子数１−４のアルキル基および炭素原子数１−４のアルカノイル基から選択されている、請求項１−１２のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。１４．Ｘ³が水素である、請求項１３記載の使用方法。１５．式（Ｉ）の化合物がテトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ− ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネートである、請求項１−３のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。１６．２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホン酸、テトラメチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラ−ｎ−プロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラ−ｎ−ブチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｓｅｃ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）− エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニルチオメチレン−ジホスホネート、テトライソプロピル３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニルチオメチレン−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、ジブチルジエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、ジエチルジイソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル１−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−ブチリデン−２，２−ジホスホネート、２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ビス（２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン）、テトライソプロピル１−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−ブチリデン−２，２−ジホスホネート、２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホン酸、テトラメチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラ−ｎ−プロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラ−ｎ−ブチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｓｅｃ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジ−イソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシフェニル） −エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル４−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−１，３−ブタジエニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル４−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−１，３−ブタジエニリデン−１，１−ジホスホネート、ジブチルジエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）エテニリデン−１，１−ジホスホネート、ジエチルジイソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−エテニリデン− １，１−ジホスホネートおよびテトラエチル２−（３，４−エチレンジオキシフェニル）−エテニリデン− １，１−ジホスホネートの中から選択されたフェノール置換ｇｅｍ−ジホスホネートを使用する、請求項１−３のいずれか一つの請求項に記載の使用方法。１７．請求項１−１６のいずれか一つの請求項で規定した式（Ｉ）の化合物を、治療上有効な量投与する、患者の腫瘍性疾患を治療または予防する方法。１８．前記腫瘍性疾患が、リンパ腫および白血病を含む造血系および免疫系の癌、および膵臓、大腸、胸部、甲状腺、脳、肺、頭部および頸部の癌から選択されている、請求項１７記載の方法。１９．前記癌がｒａｓ依存性の癌である、請求項１７または１８記載の方法。２０．患者の癌細胞による正常組織の転移攻撃を予防または阻害する方法であって、請求項１−１６のいずれか一つの請求項に規定した式（Ｉ）の化合物を有効量、患者に投与して転移プロセスを阻害する方法。２１．変異したｒａｓ活性によって誘起される腫瘍細胞への正常細胞の形質転換を防止する方法であって、前記ｒａｓ活性を阻害するのに有効な量の、請求項１ −１６のいずれか一つの請求項に規定した式（Ｉ）の化合物によって、前記細胞を処理する方法。２２．前記正常細胞を患者中に存在させる、請求項２１記載の方法。２３．癌細胞を選択的に除去する方法であって、患者からの正常細胞と癌細胞との混合物を式（Ｉ）の化合物によって生体外（ｅｘｖｉｖｏ）で処理し、これに加えて前記細胞を患者へと再導入する方法。２４．前記細胞を注射または注入によって患者へと再導入する、請求項２３記載の方法。２５．テトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，５−ジイソプロピル−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネート、テトライソプロピル２−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）−エチリデン−１，１−ジホスホネート、テトラエチル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−エテニリデン−１，１−ジホスホネートおよびテトライソプロピル２−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−ブチリデン−１，１−ジホスホネートからなる群より選ばれた化合物。２６．請求項２５記載の化合物および薬剤学上許容される担体を含有する、薬剤組成物。２７．癌、特にｒａｓ依存性の癌の治療に使用される、請求項２５記載の化合物。