JPH11508605A

JPH11508605A - 自己免疫疾患および特にインスリン―依存性糖尿病の治療のためのｉｌ―７の使用

Info

Publication number: JPH11508605A
Application number: JP9530667A
Authority: JP
Inventors: バック，ジャン―フランソワ; ゴンベール，ジャン―マルク; エルベラン，アンドレ; モル，ミシェル
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 1996-02-28
Filing date: 1997-02-26
Publication date: 1999-07-27
Anticipated expiration: 2017-02-26
Also published as: WO1997031648A1; NO983917D0; NO983917L; DK0883406T3; BR9707776A; US20040180037A1; DE69728654T2; FR2745185B1; DE69728654D1; US6713053B1; AU1929397A; PT883406E; FR2745185A1; JP3138481B2; ATE264112T1; EP0883406B1; EP0883406A1; ES2217396T3; NO321569B1

Abstract

(57)【要約】自己免疫疾患、特にＣＤ４⁺Ｔ細胞によって誘発された自己免疫疾患を治療するための薬剤または医薬組成物を調製するための、インターロイキン−７またはＩＬ−７の存在下で予めインキュベートされたＴ細胞の使用が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】自己免疫疾患および特にインスリン−依存性糖尿病の治療のためのＩＬ−７の使用本発明は、自己免疫疾患、特にインスリン−依存性糖尿病の治療のためのインターロイキン−７（ＩＬ−７）の新規な使用に関する。１型糖尿病またはインスリン−依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）は、現今では、自己免疫疾患であると考えられ(Endocr．Rev．1994，15(4)，516-542)、抗−ベータ細胞抗体の存在によっておよび免疫抑制治療に対するその感受性によって特徴付けられる。ヒトおよび非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスの両方において、ＩＤＤＭは、優勢な細胞型免疫応答に起因し、その体液性応答は抗-膜抗体の分泌および分泌性ベータ細胞抗−産生物によって特徴付けられている(N．Engl．J．Med．19 81，304，1454-1465，N．Engl．J．Med.，1992，327，302)。細胞型免疫応答は、マクロファージならびにＢおよびＴリンパ球型炎症および免疫細胞の、膵臓のランゲルハンス島の入口への侵入によって引き起こされる、組織学的欠損またはインスリン炎によって特徴付けられる(Diabetologia，1989，32，282-289；Insu litis and type １ diabetes，cademic Press Tokyo，1986，35-50)。ＮＯＤマウスは、自己免疫性糖尿病または１型糖尿病の自然発症モデルである。理論を収束すると、疾患の発症がＣＤ４⁺免疫調節Ｔ細胞の調節下であることを示す。それは３週齢で行われる胸腺摘出によって促進され(Eur．J．Immuno．1 989，19，889-895)、転移系において、若くてまだ糖尿病でないＮＯＤマウス由来の胸腺細胞またはＣＤ４⁺脾臓細胞のコーインジェクションによって防ぐことができる(J．Exp．Med.，1989，169，1669-1680)。インターロイキン−４（ＩＬ−４）を産生するそれらの能力のおかげで、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）リンパ球が免疫調節ＣＤ４⁺細胞であることが、間接的に示され、証明された(Autoimmunity，1993，15，113-122)。ＩＬ−４（J．Exp．Med ．1993，178(1)，87-99）または抗−γ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）モノクローナル抗体の投与が糖尿病の発症を妨げ、インターロイキン−１２(ＩＬ −１２)、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）リンパ球インデューサーの投与が糖尿病の発症を促進すること（J．Exp．Med.，1995，181(2)，817-821）が、証明された。しかしながら、さらなる研究は、糖尿病学的にランゲルハンス島内に侵入した発見されたＴｈ２−様細胞が糖尿病を発症させない一方で、有意な保護を提供しないことを示した(Science，1995，268(5214)，1185-1188)。したがって、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症がＴｈ２細胞の調節下にあることが間接的に示されたが、かかる動物における糖尿病の起源にて抗−ランゲルハンス島内自己免疫の出現の起源である生理学的プロセスを引き起こす生理学的プロセスのＮＯＤマウスにおける異常の存在の特徴に関して何の説明も与えられずまたは示されていない。また、近年、Ｔｈ２細胞分化が、成熟表現型（熱安定抗原の非−発現、ＨＳＡ）を有し、活性化マーカーＣＤ４４を選択的に発現する、ＴＣＲ−αβによって特徴付けられるＴ細胞サブタイプ、ＣＤ４^-ＣＤ８^-（二重陰性、ＤＮ）またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-（単陽性）表現型によって調節されることが示された。また他の系統においてＮＫ１．１マーカーによっても特徴付けられるこのサブ−集団は、抗−ＴＣＲ−αβポリクローナル抗体（ＴＣＲ−αβ：Ｔ細胞のαβレセプター）での刺激の後に大量のＩＬ−４を産生する能力を有する(J．Immunol.1995， 155(10)，4544-4550)。また、該サブタイプは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）のクラスＩ分子によって拘束され得、好ましくはＴレセプターのためのＶβ８遺伝子を使用し(J．Exp. Med.，1993，178，901-908)、そのサブタイプ増殖は、特異的にインターロイキン−７によって誘発される（J．Exp．Med.，1994，180(2)，653-661）ことが示された。特にヒトおよびマウスにおける哺乳動物インターロイキン−７タンパク質(サイトカインＩＬ−７)、対応するＤＮＡ、ＩＬ−７をコードする発現ベクターおよび組換え系を含むそれらの産生のための方法が記載された(米国特許第４,９６５,１９５号)。哺乳動物インターロイキン−７タンパク質は、本明細書中で以後「ＩＬ−７」と称される。ＩＬ−７は、骨髄細胞の発達および増殖を刺激することができるリンパ球生成成長因子である(ＷＯ８９／０３８８４)。巨核球の誘導および増殖による血小板産生の刺激（ＷＯ９０／０９１９４）は、ＩＬ−７の最初の応用の１つであった。また、他のＩＬ−７の応用は、ＩＬ−７を産生する修飾細胞由来の免疫治療による、イン・ビボでの修飾細胞の直接注入もしくは注入前の先のイン・ビトロでの治療段階のいずれかによる癌治療またはウイルス感染の治療のごとく記載された(ＷＯ９２／０１４５９)。潜在的ＡＩＤＳ治療としての特異的抗− ＨＩＶヒトＴリンパ球を増殖させるための(J．of Leucocyte Biology，1995，58 (6)，623-633)、皮膚科学における悪性黒色腫を治療するための(Hautarzt，1995 ，46(10)，676-682)、および潜在的なものとして、感染（細菌性およびウイルス性）および腫瘍を防ぐためのワクチンのための（ＷＯ９４／２２４７３）ＩＬ− ７の使用もまた記載された。生理学的および病理学的プロセスを、特にリンパ球の分化および増殖に関して（ＷＯ９４／２８４６０）研究および調査するための抗−ＩＬ−７抗体の使用もまた記載された。ＩＬ−７と他のサイトカインを組み合わせた他の応用が記載され、例えば、イン・ビトロでのプレＢ細胞分化の誘導の場合ＩＬ−４と(ＷＯ９４／０４６５８)、または白血球減少症を治療するために（ＷＯ９２／０４４６５）および癌治療または骨髄移植の後の骨髄欠損を防ぐために（ＷＯ９３／０３０６１）ＩＬ−３と組み合わせる。本発明の発明者らは、ＨＳＡ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４４およびＶβ８マーカーを用いるフローサイトメトリーを使用する表現型研究に基づいて、表現型ＣＤ４４⁺ＴＣＲ−αβＨＳＡ^-を有し、好ましくはＴレセプターのＶβ８遺伝子を使用する胸腺細胞のサブ集団が、３週齢のＮＯＤマウス（ＣＤ４^-ＣＤ８^-ＤＮ（二重陰性ＣＤ４^-ＣＤ８^-）およびＣＤ４⁺（単陽性）の両方）集団および８週齢マウス（ＤＮ集団の）において数的に減少されることを本明細書に示した。また、どちらの齢でも該サブ集団は、ＩＬ−４をわずかに産生するかまたは全く産生しないことが発見された。最後に、本発明の発明者らは、この二重の数的なおよび機能的な異常がイン・ビトロおよびイン・ビボでの該細胞のサブ集団の成長因子であるＩＬ−７によって補正されること、ならびにＩＬ−７は、Ｔｈ２細胞による、特に前記の細胞サブ集団によるＩＬ−４の産生における欠損によって発症される全自己免疫疾患、および一般には特にＣＤ４⁺細胞による免疫調節における欠損によって発症される全自己免疫疾患にわたり得る特徴を有する糖尿病、特にインスリン依存性糖尿病から、哺乳動物を保護することができることを示した。したがって、第１の態様において、本発明は、自己免疫疾患、特にＣＤ４⁺Ｔ細胞による免疫調節における欠損によって発症された自己免疫疾患を治療するための薬剤または医薬組成物の調製のためのＩＬ−７またはＩＬ−７の存在下でインキュベートされたＴリンパ球またはＩＬ−７を産生する修飾されたリンパ球の使用を提供する。好ましくは、自己免疫疾患は、Ｔｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損によって発症される自己免疫疾患である。特に好ましくは、自己免疫疾患は、表現型ＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞サブタイプの量的および機能的欠如に関連するＩＬ−４の産生における欠損によって発症される自己免疫疾患である。インスリン依存性糖尿病に加えて、他の自己免疫疾患、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性慢性関節リウマチ、多発性関節炎、自己免疫性２型肝炎、自己免疫性胃炎、自己免疫性硬化症、唾液腺炎、副腎炎、卵巣炎、糸球体腎炎、および自己免疫性甲状腺炎は、好ましくは、ＡＩＤＳの治療と結びつけられる治療におけるいずれかの自己免疫型発症メカニズムを処理できるような、該薬剤または組成物によって治療することができる。自己免疫疾患は、好ましくはインスリン依存性糖尿病である。有利なことに、本発明で使用される予めＩＬ−７存在下でインキュベートされたＴリンパ球は、それらを含む組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系の細胞である。本発明はまた、ＣＤ４⁺Ｔ細胞による免疫調節における欠損により発症される自己免疫疾患を治療するための新規なアプローチを提供する医薬組成物を包含する。特に、本発明は、Ｔｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症される自己免疫疾患、特に表現型ＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^- 、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞サブタイプの量的および機能的欠如に関連するＩＬ−４産生における欠損により発症される自己免疫疾患、特にインスリン依存性糖尿病を治療するための新規なアプローチを提供する医薬組成物を包含する。かかる組成物は、活性素因として好ましくはその可溶形態でＩＬ−７を、および／またはＩＬ−７存在下で予めインキュベートされている、その医薬組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系Ｔリンパ球を含み、それらは、また、他の活性素因、例えば他の免疫調節試薬との組み合わせの形態であることができる。これらの異なる組成物は、関連される組成物の型に依存して当業者が決定できるような、多くの異なる方法で投与することができる。ＩＬ−７を活性素因として含む組成物は、全身的に、例えば、好ましくは静脈内、筋内、皮内または経口的に投与することができる。Ｔリンパ球を活性素因として含む組成物は、好ましくは静脈内または腹膜内投与される。好ましい投与様式、また投薬量および最適な生薬形態は、一般に、患者に合わせて調整される治療的処置を確立することにおいて考慮される基準、例えば患者の年齢または体重、それらの全身の状態の重傷度、処置およびいずれかの既知副作用に対する耐性を用いて決定できる。本発明はまた、自己免疫疾患、特にＣＤ４⁺Ｔ細胞による免疫調節における欠損により発症される自己免疫疾患を治療するための薬剤または医薬組成物の製法であって、ＩＬ−７および／または予めＩＬ−７の存在下で医薬上許容されるビヒクルまたは希釈剤とともにインキュベートされている、その組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系Ｔリンパ球を混合し、他の活性素因と組み合わせてもよいことを特徴とする方法に関する。特に、本発明は、Ｔｈ２細胞によるＩＬ−４産生における欠損によって発症される自己免疫疾患、特に表現型ＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^- 、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞サブタイプの量的および機能的欠如に関連するＩＬ−４産生における欠損により発症される自己免疫疾患、特にインスリン依存性糖尿病を治療するための薬剤または医薬組成物の製法に関する。本発明は、ＩＬ−７または予めＩＬ−７存在下でインキュベートされた治療上有効投薬量のＴリンパ球を自己免疫疾患、特にＣＤ４⁺細胞による免疫調節における欠損により発症される自己免疫疾患を有する患者に投与することを特徴とする治療的処置方法に関する。有利なことに、本発明の方法は、インスリン依存性糖尿病の治療に応用できる。本発明は、図１および２を添付することによって図解される。図１は、若い（図１ａ）および成体（図１ｂ）ＮＯＤならびにＣ５７ＢＬ／６マウスにおける成熟ＨＳＡ^-ＣＤ８^-胸腺細胞によるＩＬ−４産生に対するＩＬ− ７のイン・ビトロでの補正効果を示す。示される実験において、若い（３週齢）または成体（８週齢）ＮＯＤあるいはＣ５７ＢＬ／６マウスから新たに獲得したＨＳＡ^-ＣＤ８^-胸腺細胞を１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ−７の存在下（斜線カラム）または不在下（白抜きカラム）で抗− ＴＣＲ−αβモノクローナル抗体とともに、１．０ｘ１０⁵細胞／ウェルまで培養した。上清をインキュベーションの４８時間後に回収し、ＥＬＩＳＡを用いてＩＬ−４に関して測定した(３または４回の独立した実験の平均)。本発明の他の特徴および利点は、実施例および実験の結果を概説する表を包含する残りの記載から明らかである。図２は、脾臓細胞による主なＩＬ−４産生に対するＩＬ−７でマウスを処理する効果を示す。示される実験において、８ないし１２週齢の異なる系統のマウスは、連続７日にわたり日に２μｇのＩＬ−７またはウシ血清アルブミン（賦形剤）の皮下注射を受けた。８日目に、マウスを抗−ＣＤ３抗体で処理し、次いで脾臓細胞を培養し(５ｘ１０⁶細胞／ウェル)、ＩＬ−４産生をＣＴ．４Ｓ試験を用いて測定した。ＩＬ−４産生におけるパーセンテージ増加は：((ＩＬ−７での処理後に産生されたＩＬ−４の量)／賦形剤での処理後に産生されたＩＬ−４の量)−１）ｘ１００として計算された。結果は、典型的な実験の結果である。賦形剤で処理したマウス脾臓細胞によるＩＬ−４の産生（Ｕ／ｍｌ）は、各々、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＮＯＤおよびＣ５７ＢＬ／６β２ｍ^-/-につき９４．３；５３．５；１１．０；および１１．４であった。実施例１非糖尿病Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較したＮＯＤマウスにおけるＣＤ４４⁺ＴＣＲ−αβ⁺胸腺細胞の固体発生の研究雌ＮＯＤおよびC５７ＢＬ／６マウスを非病原特異的環境条件下で保持した。ＮＯＤマウスの全てが糖尿病の明白なサインを表さない（糖尿または高血糖でない）ことを証明された。約５ないし１５の貧血マウスの胸腺を注意深く除去し、混合した。次いで、成熟二重陰性（ＤＮ）およびＣＤ４⁺単陽注胸腺細胞を３７ ℃にて４０分間、抗−ＣＤ８抗体(３−１５５；J．Immunol．1980，125，2665-2 672に記載されたラットＩｇＭ)、抗−ＨＳＡ（Ｊｌｌｄ；ラットＩｇＭ、Pharmi gen）および抗−補体（ウサギ補体、Low Tox，Cederlane，Ontario，Canada）とのインキュベーションによって豊富にした。次いで死滅細胞を密度勾配遠心分離によって除去した(J．Prep.，Techgen，Les Ulis，France)。細胞溶解に使用されるものとは異なる特異的抗体のフローサイトメトリーは、回収細胞の９５％より多くがＨＳＡ^-ＣＤ８^-の表現型であることを示した。マーキングは、J．Exp．Med．1994，180，653-661に記載の通りに行った。使用した抗体は、市販のハイブリドーマを用いて製造した。ビオチン化またはフルオレセイン（ＦＩＴＣ）で標識化した、抗−ＴＣＲ−αβ（H57-597クローン、P harmigen）または抗−Ｖβ８抗体（J．immunol．143，3994-4000に記載のＦ２３．１クローン）は、フィコエリトリン（ＰＥ）で標識された抗−ＣＤ４抗体（ＲＭ４．５クローン、Pharmigen）および／またはＦＩＴＣで標識された抗−ＣＤ４４抗体（ＩＭ７．８クローン、pharmigen）と組合わせて使用された。３−色標識の場合、ビオチン化抗体の存在下でのインキュベーション後、次いで細胞をＦＩＴＣおよびＰＥで標識した適当なモノクローナル抗体とともにインキュベートし、ストレプトアビジン−トリカラー（streptavidin-Tricolor(SAV- Tri，Caltag)）と結合させた。非−特異的標識化対照を同時にモニターした。使用した装置は、ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Becton Dickinson，Mountain View，CA）であった。最小試料は、約１ｘ１０⁴生存細胞であった。サイトカイン産生をJ．of Immunol.，1995，155(10)，4544-4550およびJ．Exp ．Med.，1994，180，653-661に記載のように培地中で培養した細胞から測定した。約１０⁵細胞を９６ウェルミクロプラク（Nunc．Roskilde，Denmark）の丸底カップにおけるウェルごとに置き、各試験を３回繰り返した。カップを１０μｇ／ｍｌの抗−ＴＣＲ−αβ抗体（クローンＨ５７−５９７）で被覆し、細胞をウェルあたり２００μｌの最終容量あたり１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ−７（Sanofi，To ulouse，France）の存在下または不在下で４８時間インキュベートし、次いで上清を回収し、ＩＬ−４の測定まで−７０℃で保存した。ＩＬ−４は、J．of Immunol．1995，155(10)，4544-4550に記載のように、サンドウィッチ型ＥＬＩＳＡを用いて測定した。下記表１において得られたおよび示された結果は、ＨＳＡ^-ＣＤ８^-Ｔ細胞のなかで定量化された表現型ＴＣＲ−αβ⁺ＣＤ４４⁺を有する胸腺細胞のサブ集団の出現が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比べてＮＯＤマウスにおいて、３週齢にて観察された非常に有意な減少をもって妨げられたことを示す。結果は、４ないし５の独立した実験で得られた平均および分布を表す。３週齢ＮＯＤマウスに対し^★ｐ＜０．００１（スチューデント検定）下記の表２は、８ないし１０週齢ＮＯＤおよびＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて二重陰性胸腺細胞集団（ＣＤ４^-ＣＤ８^-）およびＣＤ４⁺に関して得られた結果を示す。ＮＯＤマウスにおけるＣＤ４４⁺ＴＣＲ−αβ⁺サブ集団のレベルは、依然として、自己免疫疾患を有さないマウスと比べて８週にて減少した。３または４の異なる実験にわたって得られた平均および分布ＮＯＤ系統に対して^★ｐ＜０．００１（スチューデント検定）また、表現型ＨＳＡ^-ＣＤ８^-ＣＤ４４⁺によって特徴付けられた胸腺細胞が前記のＶβ８遺伝子拘束を示したことが証明された。同様に、ＨＳＡ^-ＣＤ８^-ＣＤ４４⁺細胞の減少数を考慮に入れてさえも(表１) 、対照マウスにおけるＨＳＡ^-ＣＤ８^-ＣＤ４４⁺胸腺細胞は、抗−ＴＣＲ−αβ モノクローナル抗体で刺激されると大量のＩＬ−４を産生するであろうが、ＮＯＤマウスにおいては、該産生が３および８週にて劇的に落ちたことが示された( 図１)。実施例２ＮＯＤマウスにおける胸腺細胞サブ集団における機能欠損のＩＬ−７によるイン・ビトロでの補正すでに、ＩＬ−７が特異的にＨＳＡ^-ＣＤ８^-ＣＤ４４⁺ＤＮ胸腺細胞のサブ集団の増殖を誘発することが明らかにされているが(J．Exp．Med.，1994，180，65 3-661)、図１に示された得られた結果は、特に、驚くべきことに、ＩＬ−７および抗−ＴＣＲ−αβ抗体の存在下でのインキュベーションの４８時間後の胸腺細胞で測定されたＩＬ−４産生が、成体ＮＯＤマウス（８週齢）において同じ齢でのＣ５７ＢＬ／６マウスと比べて再び正常になったことを示す。実施例３ＮＯＤマウスにおける糖尿病の発症に対するＩＬ−７の保護的効果を示すイン・ビボでの実験下記の２つの実験は、３週齢のＮＯＤマウスの胸腺から生じるリンパ性細胞がコートランスファーモデルにおいて糖尿病の発症を防ぐことができることを示す。より正確には、照射を受けた１０週齢ＮＯＤレセプターに糖尿病ＮＯＤマウス由来の５百万ないし１千万の脾臓細胞と同時に注射された３週齢ＮＯＤマウス由来の５千万の全胸腺細胞は、脾臓細胞のみが注射されるとき通常観察される糖尿病の発症を妨げた。１千万より少ない胸腺細胞の注射は、保護的効果を有さなかつた。しかしながら、胸腺細胞を予めＩＬ−７の存在下３７℃にて６０時間イン・ビトロでインキュベートしたとき、百万の胸腺細胞が前記のコートランスファーモデルにおいて保護を提供した。さらに、シクロホスファミド(２００ｍｇ／ｋｇ)の１回の注射が糖尿病の自然発症期間（２ないし４ヶ月）よりも大いに短い期間（１０ないし２０日）で８週齢雄ＮＯＤマウスにおいて糖尿病の発症を引き起こすことができることが知られている。シクロホスファミド注射前の日および後の日に投与されるＩＬ−７の２回の注射からなるＩＬ−７でのイン・ビトロでの処理は、シクロホスファミドによって誘発される糖尿病の発症を防いだ。これらの２つの一連の実験は、ＩＬ−７が一般的に前処理されたマウスにおける糖尿病の発症に対して保護的役割を果たすことを示す。３．１コートランスファーモデルにおけるインターロイキン−７の存在下でインキュベートされた胸腺細胞による糖尿病に対する保護胸腺細胞は、３週齢雌ＮＯＤマウスから調製した。これらの胸腺細胞をＩＬ− ７（５００−１０００Ｕ／ｍｌ）を添加した１０％胎児コウシ血清を含有するＲＰＭＩ培地中において３７℃にて６０ないし７２時間イン・ビトロでインキュベートした。該インキュベーション後、４百万、２百万または百万のこれらの胸腺細胞および最近糖尿病になったＮＯＤマウス由来の５百万または１千万の脾臓細胞を同時に７００ｒａｄの量で照射を受けた１０週齢雄ＮＯＤマウスに注射した。糖尿病の発症は、糖尿を捜すことによって週に３回モニターし、高血糖の形跡によって糖尿が観察されるとき確認された。下記の表３に示される結果は、ＩＬ−７の存在下でインキュベートされた胸腺細胞が、ＩＬ−７の存在下でインキュベートされなかった胸腺細胞を使用するとき保護的でない量で、糖尿病を防ぐことを示す。ＮＴ：試験せず^★ ｗ：週３．２インターロイキン−７の注射を用いる、シクロホスファミドを注射することによって誘発される糖尿病に対する保護６ないし７週雌ＮＯＤマウスは２００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの１回の注射を受け、その日の−１および＋１日に１μｇのＩＬ−７の静脈注射を行った。糖尿病の発症は、実施例１の記載のように糖尿および高血糖を捜すことによって検出した。表４に示される結果は、ＩＬ−７での処理が有意なことに、ＩＬ−７で処理せずシクロホスファミドを受けたマウスと比べて糖尿病の発症を防いだことを示す。これらの結果は、ＮＯＤマウスが、Ｖβ８拘束を有するマーカーＣＤ４４を発現し、ＩＬ−４を産生する能力を有する胸腺細胞のＨＳＡ^-ＣＤ８^-ＴＣＲ−αβ⁺ 細胞のサブ集団の未成熟欠損を有することを示す(ＴＮＫ１⁺細胞と称される、近年、非−自己免疫系統において同定された)。この数的欠損は、驚くべきことに、ＩＬ−４産生における大きな減少として発現された機能的欠損と関連付けられる。結果は、ＣＤ４^-ＣＤ８^-（ＤＮ）およびＣＤ４⁺（単陽性）胸腺細胞のサブ集団の両方に影響を及ぼすＮＯＤマウスにおける該欠損の異常が、ＩＬ−７を用いることによってイン・ビトロで補正されることを示す。さらに、イン・ビボでの実験は、予めＩＬ−７の存在下でインキュベートした細胞を注射することによってかまたは有効量のＩＬ−７をマウスに直接注射することによって、ＩＬ−７の使用が自己免疫疾患、特に糖尿病の発症に対して保護的効果を有したことを証明した。実施例４イン・ビボでのＩＬ−７での処理イン・ビボでのＩＬ−７での処理は、脾臓Ｔ細胞によるＩＬ−４の産生の可能性をもたせる(図２)。ＩＬ−７のこの効果は、試験したマウス系統（Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＯＤ）の全てにおいて得られ、末梢性ＩＬ−４産生の欠損を有した自己免疫ＮＯＤマウスにおいて最大であった(図２の凡例参照)。β２ −ミクログロブリン遺伝子なしのＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＩＬ−４産生における増加の欠如、したがってＴＮＫ１⁺細胞における欠損は、ＩＬ−７の作用がＴＮＫ１⁺細胞に向けられることを示す。皮下ＩＬ−７注射プロトコールは、連続の４ないし７日間に１日あたり２μｇの２回の投薬量からなる。対照マウスは、同一容量の賦形剤溶液（ウシ血清アルブミン）で処理した。ＩＬ−４産生は、特異的にネズミＣＤ３分子に向けた抗体（抗−ＣＤ３、クローン１４５−２Ｃ１１、ハムスターＩｇＧ）の１回の静脈注射（１．３３μｇ）後に増加した。動物を抗−ＣＤ３抗体の注射後９０分で殺し；脾臓を直ちに除去し、脾臓細胞をいかなる刺激も与えずに９０分間培養した(Y oshimoto et al.，J．Exp．Med.，179，1285-1295)。補足無しの胎児コウシ血清 (１０％)、β-メルカプトエタノール（０．０５ｍＭ）および抗生物質（ペニシリン、１００Ｕｌ／ｍｌおよびストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌ）を含有するＲＰＭＩ培地を全細胞培養実験に用いた。上清を除去し、ＩＬ−４に依存する系であるＣＴ．４Ｓ生物学的試験を用いてそれらのＩＬ−４含量を測定した(H u-Li et al.，J．Immunol.，142，800-807)。ＩＬ−４濃度を組換えネズミＩＬ −４の連続希釈で確立した標準曲線によってＵ／ｍｌ（１ユニットはおよそ１ｐｇに相当する）として表した。試験の感受限界は、約１０Ｕ／ｍｌであった。ＮＯＤマウスにおけるＴＮＫ１⁺細胞による末梢性ＩＬ−４産生の欠如は、該系統における自己免疫疾患の原因である糖尿病誘発性Ｔｈ１型細胞の出現を付随するＴｈ２機能における欠損を説明することができた。ＴＮＫ１⁺細胞によるＩＬ−４の産生に対するＩＬ−７のイン・ビボでの薬理学的効果の最初の証明を構成するこれらの結果は、自己免疫性糖尿病の発症に関して、ＩＬ−７の保護的役割を解明する。さらに一般的には、実験データは、Ｔｈ２型プロフィールのために免疫応答をそらすための治療的手段としてＩＬ−７を使用することを目的とすることを可能にする。

【手続補正書】【提出日】１９９８年９月１８日【補正内容】補正した請求の範囲１．活性素因としてインターロイキン−７または予めＩＬ−７の存在下でインキュベートしたＴリンパ球を含有してなる、自己免疫疾患の治療のための医薬組成物。２．該自己免疫疾患がＴｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症されている、請求項１記載の医薬組成物。３．該自己免疫疾患がサブタイプＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞の量的および機能的欠如に関連したＩＬ−４の産生における欠損により発症されている、請求項１または請求項２記載の医薬組成物。４．該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性慢性関節リウマチ、多発性関節炎、自己免疫性２型肝炎、自己免疫性胃炎、自己免疫性硬化症、唾液腺炎、副腎炎、卵巣炎、糸球体腎炎、または自己免疫性甲状腺炎またはＡＩＤＳの治療に結びつけられる治療における自己免疫型発症メカニズムである、請求項１、２または３記載の医薬組成物。５．該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である請求項１、２、３または４記載の医薬組成物。６．該Ｔリンパ球がそれらを含む医薬組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系細胞である、請求項１〜５のいずれか１項記載の医薬組成物。７．自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、予め医薬上許容されるビヒクルまたは希釈剤とともにＩＬ−７の存在下でインキュベートされている該組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系Ｔリンパ球を混合し、他の活性素因を結合させてもよいことからなる製法。８．請求項７記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がＴｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症されている製法。９．請求項７または請求項８記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がサブタイプＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞の量的および機能的欠如に関連したＩＬ−４の産生における欠損により発症されている製法。１０．請求項７、８または９記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である製法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者モル，ミシェルフランス、エフ―92100ブローニュ、リュ・ナショナル67番、アパルトマン71デ

Claims

【特許請求の範囲】１．自己免疫疾患の治療のための薬剤または医薬組成物を調製するための、インターロイキン−７または予めＩＬ−７の存在下でインキュベートしたＴリンパ球の使用。２．該自己免疫疾患がＴｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症されている、請求項１記載の使用。３．該自己免疫疾患がサブタイプＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞の量的および機能的欠如に関連したＩＬ−４の産生における欠損により発症されている、請求項１または請求項２記載の使用。４．該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性慢性関節リウマチ、多発性関節炎、自己免疫性２型肝炎、自己免疫性胃炎、自己免疫性硬化症、唾液腺炎、副腎炎、卵巣炎、糸球体腎炎、または自己免疫性甲状腺炎またはＡＩＤＳの治療に結びつけられる治療における自己免疫型発症メカニズムである、請求項１、２または３記載の使用。５．該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である請求項１、２、３または４記載の使用。６．該Ｔリンパ球がそれらを含む医薬組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系細胞である、前記の請求項のいずれか１項記載の使用。７．自己免疫疾患を治療するための医薬組成物であって、活性素因として、予めＩＬ−７の存在下でインキュベートされているその医薬組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系Ｔリンパ球を含む医薬組成物。８．Ｔｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症される自己免疫疾患を治療するための請求項７記載の医薬組成物。９．サブタイプＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^-またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺の細胞の量的および機能的欠如に関連したＩＬ−４の産生における欠損により発症される自己免疫疾患を治療するための、請求項７または請求項８記載の医薬組成物。１０．インスリン依存性糖尿病を治療するための請求項７、８または９のいずれか１項記載の医薬組成物。１１．自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、予め医薬上許容されるビヒクルまたは希釈剤とともにＩＬ−７の存在下でインキュベートされている該組成物が向けられる患者の細胞由来の自己由来または同系Ｔリンパ球を混合し、他の活性素因を結合させてもよいことからなる製法。１２．請求項１１記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がＴｈ２細胞によるＩＬ−４の産生における欠損により発症されている製法。１３．請求項１１または請求項１２記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がサブタイプＨＳＡ^-、ＣＤ４^-ＣＤ８^- またはＣＤ４⁺ＣＤ８^-、ＣＤ４４⁺、ＴＣＲ−αβ⁺、Ｖβ８⁺、ＮＫ１．１⁺を有するＴ細胞の量的および機能的欠如に関連したＩＬ−４の産生における欠損により発症されている製法。１４．請求項１１、１２または１３記載の自己免疫疾患を治療するための医薬組成物の製法であって、該自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である製法。１５．治療上有効投薬量のインターロイキン−７または予めＩＬ−７の存在下でインキュベートされたＴリンパ球を自己免疫疾患を有する患者に投与する、治療的処置方法。１６．治療上有効投薬量のインターロイキン−７または予めＩＬ−７の存在下でインキュベートされたＴリンパ球をインスリン依存性糖尿病を有する患者に投与する、治療的処置方法。