JPH1128093A - 新規ヒト・７−トランスメンブラン受容体をコードしているｃＤＮＡクローンＨＤＰＢＩ３０ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドおよびポリヌク
レオチド、ならびに組み換え法によりかかるポリペプチ
ドを製造する方法、ならびにＨＤＰＢＩ３０のバランス
不良関連症状の治療プロトコールの設計におけるＨＤＰ
ＢＩ３０ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用を
提供する。 【解決手段】 配列番号：２のポリペプチドもしくはそ
の対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列
に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列または上記ヌクレオチド配列に対して相補的なヌ
クレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチ
ド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細に
は、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドはＧ蛋
白結合受容体（以下、ＨＤＰＢＩ３０という）に関連し
ている。また本発明は、かかるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの阻害または活性化にも関する。

【０００２】

【従来の技術】医学的に重要な多くの生物学的プロセス
が、Ｇ蛋白および／または第２のメッセンジャー（例え
ば、ｃＡＭＰ）を含むシグナル伝達経路に関与している
蛋白により行われているということは、十分にわかって
いる（Lefkowitz,Nature,1991,351,353-354）。本明細
書では、これらの蛋白を、Ｇ蛋白またはＰＰＧ蛋白に関
する経路に関与する蛋白という。これらの蛋白のいくつ
かの例としては、ＧＰＣ蛋白（例えば、アドレナリン作
用性因子およびドパミン（Kobilka,B.K.,et al.,Proc.N
atl.Acad.Sci.,USA,1987,84:46-50;Kobolka,B.K. et a
l.,Science,1987,238:650-656;Bunzow,J.R.,et al.,Nat
ure,1988,336:783-787））、Ｇ蛋白自体、エフェクター
蛋白（effector proteins）（例えば、ホスホリパーゼ
Ｃ、アデニルシクラーゼおよびホスホジエステラー
ゼ）、ならびにアクチュエーター蛋白（actuator prote
ins）（例えば、蛋白キナーゼＡおよび蛋白キナーゼ
Ｃ）（Simon,M.I.,et al.,Science,1991,252:802-80
8））が挙げられる。例えば、シグナル伝達の１の形態
において、ホルモン結合の効果は細胞内酵素アデニレー
トシクラーゼの活性化である。ホルモンによる酵素の活
性化はヌクレオチドＧＴＰの存在による。ＧＴＰはホル
モン結合にも影響する。Ｇ蛋白は、ホルモン受容体によ
り活性化された場合に、ＧＴＰを結合ＧＤＰに交換する
ことが示された。次いで、ＧＴＰ担持形態は活性化アデ
ニレートシクラーゼに結合する。Ｇ蛋白自体により触媒
されるＧＴＰからＧＤＰへの加水分解によりＧ蛋白はそ
の基底不活性形態に戻る。かくして、Ｇ蛋白は２重の役
割、すなわち、受容体からエフェクターへのシグナルを
遅延させる中間体およびシグナル間隔を制御する時計と
しての作用を行う。

【０００３】Ｇ蛋白結合受容体の膜蛋白遺伝子スーパー
ファミリーは、７つの推定上のトランスメンブランドメ
インを有するものと特徴づけられている。ドメインは、
細胞外または細胞質ループにより結合されたトランスメ
ンブランα−ヘリックスを示すと考えられている。Ｇ蛋
白結合受容体は、広範な生物学的活性受容体を包含し、
例えば、ホルモン、ウイルス、成長因子および神経受容
体を包含する。Ｇ蛋白結合受容体（あるいは７ＴＭ受容
体としても知られる）は、少なくとも８個の種々異なる
親水性ループに結合した約２０ないし３０個のアミノ酸
からなるこれら７個の保存された疎水的配列を含むもの
として特徴づけられている。Ｇ蛋白ファミリーの結合受
容体はドパミン受容体を包含し、それは精神病および神
経学的疾病の治療に使用される神経遮断薬に結合する。
このファミリーのメンバーの他の例は、カルシトニン、
アドレナリン作動性物質、エンドセリン、ｃＡＭＰ、ア
デノシン、ムスカリン作動性物質、アセチルコリン、セ
ロトニン、ヒスタミン、スロンビン、キニン、卵胞刺激
ホルモン、オプシン、内皮分化遺伝子−１、ロドプシ
ン、オドラント、およびサイトメガロウイルス受容体が
挙げられるが、これらに限らない。たいていのＧ蛋白結
合受容体は、最初の２個の細胞外ループ中にそれぞれ１
個の保存されたシステイン残基を有し、ジスルフィド結
合を形成して機能的蛋白構造を安定化していると考えら
れている。７個のトランスメンブラン領域はＴＭ１、Ｔ
Ｍ２、ＴＭ３、ＴＭ４、ＴＭ５、ＴＭ６、およびＴＭ７
と命名されている。ＴＭ３がシグナル伝達に関与してい
る。

【０００４】システイン残基のホスホリレーションおよ
びリピデーション（パリミチレーションまたはファルネ
シレーション）により、いくつかのＧ蛋白結合受容体の
シグナル伝達が影響を受ける可能性がある。たいていの
Ｇ蛋白結合受容体は、３番目の細胞質ループおよび／ま
たはカルボキシ末端に潜在的なホスホリレーション部位
を有する。いくつかのＧ蛋白結合受容体、例えばβ−ア
ドレナリン受容体については、蛋白キナーゼＡおよび／
または特異的受容体キナーゼによるホスホリレーション
により受容体脱感作が媒介される。いくつかの受容体に
ついては、Ｇ蛋白結合受容体のリガンド結合部位は、い
くつかのＧ蛋白結合受容体トランスメンブランドメイン
により形成された親水性ソケットを含むと考えられてお
り、該ソケットはＧ蛋白結合受容体の疎水性残基により
囲まれていると考えられている。各Ｇ蛋白結合受容体ト
ランスメンブランヘリックスの親水性部位は内側を向
き、極性リガンド結合部位を形成すると考えられる。Ｔ
Ｍ３は、リガンド結合部位（例えば、ＴＭ３のアスパラ
ギン酸残基）を有するようないくつかのＧ蛋白結合受容
体中に含まれている。ＴＭ５のセリン、ＴＭ６のアスパ
ラギンおよびＴＭ６もしくはＴＭ７のフェニルアラニン
もしくはチロシンもまたリガンド結合に関与している。
ヘテロ３量体Ｇ蛋白により、Ｇ蛋白結合受容体は種々の
細胞内酵素、イオンチャンネルおよびトランスポーター
に細胞内で結合されうる（Johnson et al.,Endoc.Rev.,
1989,10:317-331参照）。別のＧ蛋白α−サブユニット
は特定のエフェクターを優先的に刺激して、細胞中の種
々の生物学的機能を転調させる。Ｇ蛋白結合受容体の細
胞質残基のホスホリレーションは、いくつかのＧ蛋白結
合受容体のＧ蛋白結合の調節のための重要な機構である
と同定されている。Ｇ蛋白結合受容体は哺乳動物宿主中
の多くの部位に見いだされている。

【０００５】過去１５年間にわたり、７トランスメンブ
ラン（７ＴＭ）受容体を標的とする約３５０種の治療薬
の市場導入が成功している。このことは、これらの受容
体が、治療標的として確立され証明された歴史を有する
ことを示すものである。細菌、真菌、原生動物およびウ
イルス感染のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１または
ＨＩＶ−２による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘
息；パーキンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；
尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギ
ー；良性前立腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱
病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運動障害（例
えば、Huntington病またはGilles dela Toutrett症候
群）を包含する精神病および神経学的疾病を包含（これ
らに限らない）する機能不全を予防、改善または修正す
ることにおいて役割りを果たすことのできるさらなる受
容体の同定および特徴づけが明らかに必要である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】１の態様において、本
発明は、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドならびにその製造
のための組み換え物質および方法に関する。本発明のも
う１つの態様は、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドの使用方法に関する。かかる方法は、細
菌、真菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染
症；詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；
痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急
性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心
症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；な
らびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の
精神遅滞および運動障害（例えば、Huntington病または
Gilles dela Toutrett症候群）を包含する精神病および
神経学的疾病の治療を包含する。さらにもう１つの態様
において、本発明は、本発明により提供される材料を用
いるアンタゴニストおよびアゴニストの同定方法、なら
びに同定された化合物を用いるＨＤＰＢＩ３０のバラン
ス不良関連症状の治療方法に関する。さらにもう１つの
態様は、不適当なＨＤＰＢＩ３０活性またはレベルに関
連した疾病の検出のための診断アッセイに関する。

【０００７】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】定義 下記定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の
理解を容易にするためのものである。「ＨＤＰＢＩ３
０」は、一般的には、配列番号：２に示すアミノ酸配列
を有するポリペプチド、またはその対立遺伝子変種をい
う。「受容体活性」または「受容体の生物学的活性」
は、該ＨＤＰＢＩ３０の代謝的または生理学的機能をい
い、類似の活性または改善された活性または望ましくな
い副作用を減じられたこれらの活性を包含する。該ＨＤ
ＰＢＩ３０の抗原性および免疫原性の活性も含まれる。
「ＨＤＰＢＩ３０遺伝子」は、配列番号：１に示すヌク
レオチド配列を有するポリヌクレオチドまたはその対立
遺伝子変種および／またはそれらの相補物をいう。

【０００８】本明細書の用語「抗体」は、ポリクローナ
ルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、ならび
にヒト化抗体、さらにはＦａｂフラグメントを包含し、
Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生
成物も包含する。

【０００９】「単離」とは、「人間の手により」天然の
状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在
する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除
く、またはその両方を行ったことを意味する。例えばポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生
物中に存在する場合は、「単離」されていないが、同一
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存
する物質から分離されている場合は、本明細書に用いる
用語である、「単離」がなされている。

【００１０】「ポリヌクレオチド」とは、一般的には、
修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾さ
れたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリ
ボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを
意味する。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本
鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本
鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一
本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖
領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより通常的
には二本鎖もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖
領域の混合物であってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含む
ハイブリッド分子を意味するが、これらに限定するもの
ではない。さらに、本明細書で用いるポリヌクレオチド
は、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両
方を含む三本鎖領域を意味する。安定性またはその他の
理由で修飾した骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、本
明細書の用語「ポリヌクレオチド」に含まれる。イノシ
ン等の通常的でない塩基、またはトリチル化塩基等は
「修飾」された塩基に含まれる。種々の修飾がＤＮＡお
よびＲＮＡについて行われているので、「ポリヌクレオ
チド」は、典型的には、天然において見いだされるよう
なポリヌクレオチドのかかる化学的、酵素的または代謝
的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞に特
徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。ま
た、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオ
チドと称される短いポリヌクレオチドを包含する。

【００１１】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合により互いに結合している２個ま
たはそれ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意
味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプチド、
オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖のも
の、および一般的に蛋白と称される長鎖のものの両方を
意味する。ポリペプチドは遺伝子によりコードされた２
０種のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有していてもよ
い。「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその
他の翻訳後修飾のような天然プロセスにより修飾された
ものが含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっ
ても修飾される。かかる修飾は基礎的な参考書およびさ
らに詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載
されており、これらは当業者に周知である。修飾は、ペ
プチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキ
シル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こりうる。
同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位で、同
一または異なる程度で存在し得ることが理解されよう。
また、ポリペプチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポ
リペプチドは、ユビキチネーションの結果として分枝状
となったものであってもよく、ポリペプチドは分枝あり
またはなしの環状のものであってもよい。修飾には、ア
セチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、
フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチ
ドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂
質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有
結合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチ
ル化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログル
タメート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、
グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プ
ロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリ
コシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガン
マ−カルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、
セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごときトランス
ファーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸の添加、ならびに
ユビキチネーションなどがある。例えばProteins-Struc
ture and Molecular Properties、第２版、T.E.Creight
on、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（1993）
およびPosttranslational Covalent Modification of P
roteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニュー
ヨーク（1983）のWold,F.,Posttranslational ProteinM
odifications ：Perspective and Prospects、1〜12
頁；Seifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1990）お
よびRattanら、Protein Synthesis：Posttranslational
Modifications and Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-
62（1992）を参照されたい。

【００１２】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の差異は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチ
ドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、
全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なもの
に限られる。変種および対照ポリペプチドは、１または
それ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こ
ることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコー
ドされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種
のような自然発生的なものでもよく、または自然発生す
ることが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチド
およびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技術
または直接的合成により製造できる。

【００１３】「同一性」とは、ヌクレオチド配列または
アミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最高
の合致が得られるように配列を並置する。「同一性」は
それ自体当該分野で認識されている意味を有し、公表さ
れた手法を用いて計算できる。例えば、Computational
Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・
ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Bi
ocomputing：Informatics and Genome Projects，Smit
h,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993
年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，
Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレ
ス、ニュージャージー、1994年；Sequence Analysis in
Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデミック・
プレス、1987年；およびSequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレ
ス、ニューヨーク、1991年参照。二つのポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列の間の同一性および類似
性を測定する方法は多くあるが、用語「同一性」は当業
者に周知である（Carillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.
Applied Math.，48:1073（1988））。配列間の同一性ま
たは類似性を測定するために通常用いられる方法は、Gu
ide to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed.,Academic
Press,San Diego,1994およびCarilo,H.,and Lipton,
D.,SIAM J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示さ
れているが、これらに限定するものではない。同一性を
決定するための好ましい方法は、試験する配列間で最も
良く適合するように設計される。同一性および類似性を
決定する方法は、公に入手できるコンピュータープログ
ラムに集成されている。二つの配列間の同一性および類
似性を測定する好ましいコンピュータープログラム法に
は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nuc
leic Acids Research 12(1):387（1984）、BLASTP、BLA
STN、およびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol（19
90） 215:403））等があるが、これらに限定するもので
はない。

【００１４】本発明のポリペプチド １の態様において、本発明は、本発明ＨＤＰＢＩ３０に
関する。該ポリペプチドは、配列番号：２のポリペプチ
ド；および配列番号：２のアミノ酸配列を含むポリペプ
チド；および配列番号：２に対して全長にわたり少なく
とも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペ
プチド、さらに好ましくは少なくとも９０％の同一性、
そのうえさらに好ましくは少なくとも９５％の同一性を
有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。配
列番号：２のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対し
て全長にわたり少なくとも８０％の同一性、さらに好ま
しくは少なくとも９０％の同一性、そのうえさらに好ま
しくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列
を有するポリペプチドもＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドに
含まれる。好ましくは、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチド
は、その受容体の生物学的活性のうちの少なくとも１つ
を示す。ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドは「成熟」蛋白の
形態であってもよく、あるいは融合蛋白のごとき大型の
蛋白の一部であってもよい。分泌またはリーダー配列、
プロ配列、複数のヒスチジン残基のごとき精製を促進す
る配列、または組み換え生産を行っている間の安定性の
ためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含ん
でいることがしばしば有利である。

【００１５】生物学的に活性のあるＨＤＰＢＩ３０のフ
ラグメントも本発明に含まれる。フラグメントは、前述
のＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのアミノ酸配列のすべて
ではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドである。ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチド
では、フラグメントは「独立して存在するもの（freest
anding）」であるか、あるいはより大きなポリペプチド
内に含まれていてもよく、その中でフラグメントは一部
分もしくは領域を形成している。最も好ましくは、単一
の連続した領域として、より大きなポリペプチドに含ま
れる。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例は、例
えば、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのアミノ酸番号約１
〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜
１００および１０１から末端までからなるフラグメント
を包含する。この意味において、「約」とは、片方の端
または両端において、示された数よりも数個、５個、４
個、３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含
む。好ましいフラグメントは、例えば、アミノ末端を含
む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を含む一連
の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でもう一方が
カルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失している
こと以外はＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのアミノ酸配列
を有する末端切断ポリペプチドを包含する。また、構造
的または機能的属性により特徴づけられるフラグメン
ト、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘリ
ックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成
領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイ
ル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親
媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領
域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラ
グメントなども好ましい。受容体活性を媒介する、生物
学的に活性な領域も好ましく、類似の活性もしくは改善
された活性のある、または望ましくない活性を減じたフ
ラグメント等がある。動物、とりわけヒトにおいて抗原
的または免疫原的なフラグメントもまた含まれる。

【００１６】好ましくは、これらのポリペプチドのすべ
ては、抗原的活性を包含する受容体の生物学的活性を保
持している。上記配列およびフラグメントの変種もこの
グループに含まれる。好ましい変種は、保存的アミノ酸
置換により変化したものであり、すなわち、同様の特徴
を有するアミノ酸により置換されているものである。典
型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩ
ｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；ＡｓｐおよびＧｌｕ
間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基Ｌｙｓ
およびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙ
ｒ間におけるものである。数個、５ないし１０個、１な
いし５個、または１ないし２個のアミノ酸がいずれかの
組み合わせで置換、欠失または付加されている変種が特
に好ましい。

【００１７】いずれの適当な方法でも本発明ＨＤＰＢＩ
３０ポリペプチドを製造することができる。かかるポリ
ペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法
によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、また
はこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含
する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野におい
てよく知られている。

【００１８】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう１つの態様は、ＨＤＰＢＩ３０ポリヌクレ
オチドに関する。ＨＤＰＢＩ３０ポリヌクレオチドは、
ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドおよびフラグメントをコー
ドしているポリヌクレオチド、ならびにそれらに密接に
関連しているポリヌクレオチドを包含する。より詳細に
は、本発明ＨＤＰＢＩ３０ポリヌクレオチドは、配列番
号：２のＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドをコードしている
配列番号：１に示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
オチド、ならびに配列番号：１の特定の配列を有するポ
リヌクレオチドを包含する。さらにＨＤＰＢＩ３０ポリ
ヌクレオチドは、配列番号：２のＨＤＰＢＩ３０ポリペ
プチドをコードしているポリヌクレオチドに対して全長
にわたり少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチド、配列番号：１の配列を
有するポリヌクレオチドに対して全長にわたり少なくと
も８０％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む。こ
の点において、詳細には、少なくとも９０％同一である
ポリヌクレオチドが好ましく、少なくとも９５％同一で
あるものが特に好ましい。さらにそのうえ、少なくとも
９７％同一のものが非常に好ましく、少なくとも９８−
９９％同一のものが最も非常に好ましい。配列番号：１
に含まれるヌクレオチド配列に対して十分な同一性を有
し、増幅に使用可能であるかまたはプローブもしくはマ
ーカーとして使用される条件下でハイブリダイゼーショ
ンするヌクレオチド配列もＨＤＰＢＩ３０ポリヌクレオ
チドに包含される。また本発明は、かかるＨＤＰＢＩ３
０ポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチド
も提供する。ヒト・ＨＤＰＢＩ３０をコードしているｃ
ＤＮＡの配列決定の結果により示されるように、本発明
ＨＤＰＢＩ３０は、Ｇ蛋白結合受容体の他の蛋白に構造
的に関連している。そのｃＤＮＡ配列は、３７１個のア
ミノ酸残基の蛋白をコードしている読み枠を含む。図１
および２のアミノ酸配列（配列番号：２）は、ＧＰＲ４
（O'Dowd,B.F.ら、受託番号Ｌ３６１４８、DNA Cell Bi
ol.14(1),25-35,1995）に対して２８１個のアミノ酸残
基において約３７．７％の同一性を有する（ＦＡＳＴＡ
を用いた場合）。さらにそのうえ、ＨＤＰＢＩ３０（配
列番号：２）は、ラット・Ｐ２Ｙプリン受容体（受託番
号Ｐ４９６５１、Tokuyama,Y.et al,Biochem Biophys.R
es.Commun.211:211-218,1995）に対して２８９個のアミ
ノ酸残基について２９．４％の同一性を有する。さらに
そのうえ、ＨＤＰＢＩ３０（配列番号：２）は、特許出
願に掲載されたドパミン受容体配列（米国特許第５５０
８３８４号、１９９６年４月４日付与）に対して９６個
のアミノ酸について３３．３３％の同一性を有する。図
１および２のヌクレオチド配列（配列番号：１）は、Ｇ
ＰＲ４Ａ（受託番号Ｌ３６１４８、O'Dowd,B.F.et al.,
DNA Cell Biol.14(1),25-35,1995）に対して３１４個の
ヌクレオチド残基において約６７．７２％の同一性があ
る（ＢＬＡＳＴを用いた場合）。さらにそのうえ、ＨＤ
ＰＢＩ３０（配列番号：１）は、Ｇ蛋白結合受容体（受
託番号Ｕ３５３９９、Goezl,E.J.ら、未公表）に対して
６７．４１％の同一性がある。

【００１９】標準的クローニングおよびスクリーニング
を用い、ヒト・白血球、肺および初期樹枝状細胞中のｍ
ＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリーから、発現配列タグ
（ＥＳＴ）分析（Adams,M.D.,et al.Science(1991)252:
1651-1656;Adams,M.D.et al.,Nature(1992)355:632-63
4;Adams,M.D.,et al.,Nature(1995)377 Supp:3-174）を
用いて、ＨＤＰＢＩ３０をコードしている本発明の１の
ポリヌクレオチドを得てもよい。ゲノムＤＮＡライブラ
リーのごとき天然起源から本発明ポリヌクレオチドを得
ることもでき、あるいはよく知られ市販されている手段
方法を用いて合成することもできる。

【００２０】配列番号：２のＨＤＰＢＩ３０ポリペプチ
ドをコードしているヌクレオチド配列は図１および２の
コーディング配列（配列番号：１）に対して全長にわた
って同一であってもよく、あるいは配列番号：２のポリ
ペプチドをコードしているヌクレオチド配列の縮重形態
であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチド
をコードしているヌクレオチド配列に対して非常に高い
同一性を有するものであってもよい。好ましくは、本発
明ポリヌクレオチドは、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドを
コードしているヌクレオチド配列に対して高い同一性、
少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、
あるいは図１および２（配列番号：１）に示すヌクレオ
チド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌ
クレオチド配列、あるいは配列番号：２のポリペプチド
をコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも
８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

【００２１】本発明ポリヌクレオチドをＨＤＰＢＩ３０
ポリペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレ
オチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグ
メントのコーディング配列を含むものであってもよく；
あるいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟
ポリペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を
含むものであってもよい。他のコーディング配列として
は、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プ
レプロ蛋白配列をコードするコーディング配列、または
他の融合ペプチド部分が挙げられる。例えば、融合ポリ
ペプチドの精製を促すマーカー配列をコードしていても
よい。本発明のこの態様の１の好ましい具体例におい
て、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）
に提供されるようなヘキサ−ヒスチジンペプチド（Gent
zら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，86:821-824（1989）に
記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，37:767
（1984））である。本発明のポリヌクレオチドはまた、
構造遺伝子および遺伝子発現を調節する天然の配列をも
含むが、これらに限定するものではない。ポリヌクレオ
チドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグナ
ル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列、
イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻訳配
列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディング
配列のごとき非コーディング５'および３'配列を含有し
ていてもよい。

【００２２】さらに好ましい具体例は、図１および２に
示すＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのアミノ酸配列（配列
番号：２）を含むＨＤＰＢＩ３０変種をコードしている
ポリヌクレオチドであり、数個、５ないし１０個、１な
いし５個、１ないし３個、１ないし２個または１個のア
ミノ酸残基がいずれかの組み合わせで置換、欠失または
付加されているものである。さらに本発明は、上記配列
にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドにも関
する。この点において、本発明は、厳密な条件下で上記
ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌ
クレオチドに特別に関連する。本明細書の用語「厳密な
条件」とは、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少
なくとも９７％の同一性がある場合にのみハイブリダイ
ゼーションが起こることを意味する。

【００２３】配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列
に対して十分に同一である本発明ポリヌクレオチドをｃ
ＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーション
プローブとして用いて全長のｃＤＮＡおよびＨＤＰＢＩ
３０をコードしているゲノムクローンを単離し、またＨ
ＤＰＢＩ３０遺伝子に対して高い類似性を有する配列を
有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単
離してもよい。かかるハイブリダイゼーション法は当業
者に知られている。典型的には、これらのヌクレオチド
配列は、対照に対して７０％、好ましくは８０％、より
好ましくは９０％の同一性を有する。一般的には、プロ
ーブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む。好まし
くは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレオチ
ドを有し、少なくとも５０個のヌクレオチドを有してい
てもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０個の
範囲のヌクレオチドを含む。１の具体例において、Ｇ蛋
白結合受容体をコードしているポリヌクレオチドを得る
ことは、配列番号：１またはそのフラグメント配列を有
する標識プローブを用いて厳密なハイブリダイゼーショ
ン条件下で適当なライブラリーをスクリーニングし、次
いで、該ポリヌクレオチド配列を有する全長のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離する工程を含む。かかるハ
イブリダイゼーション法は当業者によく知られている。
厳密なハイブリダイゼーション条件は上で定義したもの
であるか、または５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１
５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウ
ム）、５０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５
ｘデンハーツ溶液、１０％デキストラン硫酸、および２
０マイクログラム／ｍｌの変性剪断サケ・精子ＤＮＡを
含む溶液中、４２℃で一晩、次いで、約６５℃での０．
１ｘＳＳＣ中での洗浄といった条件であってもよい。本
発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、動物およ
びヒトの疾病の研究試薬ならびに治療および診断のため
の材料として用いてもよい。

【００２４】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作する宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。本発明のＤＮＡ構築物に由
来するＲＮＡを用いる、かかる蛋白の製造に無細胞翻訳
系を用いてもよい。組換え体を製造するために、宿主細
胞を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、ま
たは本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができ
る。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、
Davisら、Basic Methods in Molecular Biology（198
6）；Sambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory M
anual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラ
ボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバ
ー、ニューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実
験マニュアルに記載される方法により行うことができ、
例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランス
ベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質
媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、
トランスダクション、スクレイプ負荷（scrapeloadin
g）、バリスティック導入（Ballistic introduction）
および感染等がある。

【００２５】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（Streptococci）、ブドウ球菌属
（Staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セスおよび枯草菌（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞
例えば酵母細胞およびアスペルギルス属（Aspergillu
s）細胞；昆虫細胞例えばショウジョウバエＳ２（Droso
phila S2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf
9）細胞；動物細胞例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、
Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bow
s）黒色腫細胞；ならびに植物細胞等がある。

【００２６】非常に多くの発現系を使用できる。かかる
系は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせた物に由来す
るベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファー
ジ遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミド
およびファージミドを包含する。発現系は、発現を制御
ならびに発生させる制御領域を含有していてもよい。一
般的には、宿主中でポリヌクレオチドを保持、伸長また
は発現してポリペプチドを発現するのに適した系または
ベクターを用いてもよい。例えばSambrookら、Molecula
rCloning，A Laboratory Manual（上述）に記載されて
いるような周知のおよび常套的な種々の技術により、適
当なＤＮＡ配列を発現系に挿入できる。

【００２７】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを所望ポリペプチド中に含ませてもよ
い。これらのシグナルはポリペプチドに本来的なもので
あってもく、あるいは異種性のシグナルでもよい。

【００２８】ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドをスクリーニ
ングアッセイのために発現させる場合、一般的には、細
胞表面にポリペプチドを生成させるのが好ましい。この
場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集
めてもよい。ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドを培地中でス
クリーニングする場合、培地を回収してポリペプチドを
回収し精製することができる。細胞内に生成される場
合、まず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収し
なければならない。ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドは周知
の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製で
き、その方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノ
ール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマ
トグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、
疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
およびレクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体
クロマトグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。
ポリペプチドが単離および／または精製中に変性した場
合、再び活性な立体配座にするために、蛋白再生のため
の周知の技法を用いることができる。

【００２９】診断アッセイ 本発明はまた診断試薬としての本発明ＨＤＰＢＩ３０ポ
リヌクレオチドの使用にも関する。真核生物とりわけ哺
乳動物、特にヒトにおけるＨＤＰＢＩ３０の検出は、疾
患の診断のための診断法を提供する。真核生物（本明細
書において「個体」とも称する）とりわけ哺乳動物、特
にヒトがＨＤＰＢＩ３０遺伝子を含む生物に感染する
と、種々の方法によりＤＮＡレベルで検出できる。診断
用の核酸は、感染した個体の細胞および組織、例えば
骨、血液、筋肉、軟骨および皮膚より得ることができ
る。ゲノムＤＮＡは検出に直接使用できるか、または分
析の前にＰＣＲもしくはその他の増幅法を用いることに
より酵素的に増幅できる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同様
の方法で用いることができる。正常な遺伝子型と比較し
た場合の増幅生成物のサイズの変化により、欠失および
挿入を検出することができる。点突然変異は、増幅ＤＮ
Ａを標識化ＨＤＰＢＩ３０ポリヌクレオチド配列にハイ
ブリダイズさせることにより同定できる。好ましくは、
完全に対合した配列は、ＲＮアーゼ消化または融解温度
の差により、誤対合二重らせんから区別できる。ＤＮＡ
配列の差はまた、変性剤含有または不含のゲル中のＤＮ
Ａフラグメントの電気泳動の可動性の変化を検出するこ
とにより、または直接的なＤＮＡの配列決定により検出
できる。例えばMeyers et.al.Science，230:1242（198
5）参照。特異的な位置での配列の変化はまた、ヌクレ
アーゼ保護アッセイ例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護ま
たは化学的切断法によっても明らかにすることができ
る。例えばCotton et al.Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，8
5:4397-4401（1985）参照。もう１つの具体例におい
て、ＨＤＰＢＩ３０ヌクレオチド配列またはそのフラグ
メントを含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイ（ar
ray）を構築して、例えば遺伝学的変異の有効なスクリ
ーニングを行うことができる。アレイ法はよく知られて
おり、広い適用範囲があり、遺伝子発現、遺伝学的連関
および遺伝学的変化を包含する分子遺伝学における種々
の問題を解明するためにこの方法を用いることができる
（例えば、M.Chee et al.,Science,Vol 274,pp 610-613
(1996)）。

【００３０】診断アッセイは、本明細書記載の方法によ
りＨＤＰＢＩ３０遺伝子の変異を検出することにより、
細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染
症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；
痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急
性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心
症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；な
らびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の
精神遅滞および運動障害（例えば、Huntington病または
Gilles dela Toutrett症候群）を包含する精神病および
神経学的疾病に対する感受性の診断または決定方法を提
供する。

【００３１】さらに、対象由来の試料の異常に上昇また
は低下したＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドもしくはＨＤＰ
ＢＩ３０ ｍＲＮＡレベルを調べることを特徴とする方
法によって、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染
のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２
による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキ
ンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗
鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立
腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴
呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、Huntingt
on病またはGilles dela Toutrett症候群）を包含する精
神病および神経学的疾病を診断することができる。ＨＤ
ＰＢＩ３０ポリヌクレオチドの発現の増加または低下
は、ポリヌクレオチドの定量法として当該分野で周知の
方法の任意の方法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣ
Ｒ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッティングおよびそ
の他のハイブリダイゼーション法を用いて測定できる。
宿主由来のサンプル中のＨＤＰＢＩ３０蛋白のレベルを
決定するために用いることができるアッセイ法は、当業
者に周知である。このようなアッセイ法には、ラジオイ
ムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット
分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００３２】染色体アッセイ 本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。本発明配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置
を標的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本
発明による重要な部分の染色体へのマッピングは、それ
らの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程
である。配列を正確な染色体位置にマッピングしたなら
ば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデー
タと関連づけることができる。かかるデータは、例え
ば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns
Hopkins University Weich Medical Libraryからオン
ラインで利用できる）に見いだされる。次いで、連関
（物理的に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、
同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関
係を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡ
またはゲノム配列の相違も調べることができる。罹病個
体のいくつかまたは全部において変異が観察されるが正
常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の
原因である可能性がある。

【００３３】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそ
れらを発現する細胞は、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドに
対して免疫特異的な抗体を産生する免疫原として用いる
ことができる。本明細書で用いる「免疫特異的」とは、
抗体が、先行技術における他の関連ポリペプチドに対し
てよりも、本発明ポリペプチドに対して実質的に大きい
アフィニティーを有することを意味する。本発明のポリ
ペプチドに対して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエ
ピトープが付いたフラグメント、アナログまたは細胞
を、好ましくはヒトはでない動物に、通常の実験法を用
いて投与することにより得ることができる。連続的細胞
系培養により産生される抗体を提供する、当業者周知の
技術を用いて、モノクローナル抗体を調製することがで
きる。例としては、Kohler,G. and Milstein,C.，Natur
e，256:495-497（1975）；Kozbor et al.Immunology To
day，4:72（1983）；Cole et al.Monoclonal Antibodie
s and Cancer Therapy,Alan R Liss,Inc.,77-96頁（198
5）に記載されるような種々の技法がある。

【００３４】一本鎖抗体の産生のために記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプ
チドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。ま
た、トランスジェニックマウスまたはその他の生物、例
えばその他の哺乳動物は、ヒト化抗体等の抗体を発現す
るのに用いることができる。上記抗体を用いて、ポリペ
プチドを発現するクローンを単離または同定してもよ
く、あるいはアフィニティークロマトグラフィーにより
ポリペプチドを精製してもよい。

【００３５】ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドに対する抗体
を用いて、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染の
ごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に
よる感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；パーキン
ソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆
症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺
肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴
呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、Huntingt
on病またはGilles dela Toutrett症候群）を包含する精
神病および神経学的疾病を治療してもよい。

【００３６】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を
誘導する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ
細胞を産生させるに十分なＨＤＰＢＩ３０またはそれら
のフラグメントを哺乳動物に接種して、細菌、真菌、原
生動物およびウイルス感染のごとき感染症、詳細にはＨ
ＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；痛み；癌；拒食
症；大食症；喘息；パーキンソン病；急性心臓疾患；低
血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰
瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；ならびに不安症、分
裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運
動障害（例えば、Huntington病またはGilles dela Tout
rett症候群）を包含する精神病および神経学的疾病から
該動物を防御することを特徴とする。本発明のもう１つ
の態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方
法に関し、該方法は、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドをイ
ンビボで発現させるベクターを介してＨＤＰＢＩ３０ポ
リペプチドを送達し、かかる免疫学的応答を誘導して該
動物を疾患から保護する抗体を生させることを特徴とす
る。

【００３７】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）に関するものであり、それは、哺乳動
物宿主中に導入された場合、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチ
ドに対する哺乳動物の免疫学的応答を誘導する。該組成
物はＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドまたはＨＤＰＢＩ３０
遺伝子を含んでなる。ワクチン処方は、さらに適当な担
体を含んでいてもよい。ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドは
胃で分解される可能性があるので、好ましくは非経口投
与する（皮下、筋肉内、静脈、皮内等への注射を包
含）。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファ
ー、静細菌剤および処方をレシピエントの血液と等張に
する溶質を含んでいてもよい水性または非水性滅菌注射
用溶液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよ
い水性または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回
量または複数回量として容器に入れて提供してもよく、
例えば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提供して
もよく、また使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要
とする凍結乾燥状態として保存してもよい。またワクチ
ン処方は、水中油系および当該分野で知られた他の系の
ごとき処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を
含んでいてもよい。用量は、個々のワクチンの活性に左
右され、通常の実験により容易に決定することができ
る。

【００３８】スクリーニングアッセイ 本発明受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化（ア
ゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物の
スクリーニングプロセスにおいて本発明ＨＤＰＢＩ３０
を用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用い
て、小型分子基質とリガンドとの結合を、例えば細胞、
無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物
において評価してもよい。これらの基質およびリガンド
は天然の基質およびリガンドであってもよく、あるいは
構造または機能を模倣したものであってもよい。Coliga
n et al.,Current Protocols in Immunology 1(2):Chap
ter5(1991)参照。

【００３９】ＨＤＰＢＩ３０蛋白は哺乳動物宿主に広く
存在し、多くの生物学的機能に関与しており、多くの病
気にもかかわっている。したがって、ＨＤＰＢＩ３０を
刺激する化合物および薬剤、あるいはまたＨＤＰＢＩ３
０を阻害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望ま
れる。一般的には、細菌、真菌、原生動物およびウイル
ス感染のごとき感染症、詳細にはＨＩＶ−１またはＨＩ
Ｖ−２による感染；痛み；癌；拒食症；大食症；喘息；
パーキンソン病；急性心臓疾患；低血圧；高血圧；尿
閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；
良性前立腺肥大；ならびに不安症、分裂病、躁鬱病、せ
ん妄、痴呆、重度の精神遅滞および運動障害（例えば、
Huntington病またはGilles dela Toutrett症候群）を包
含する精神病および神経学的疾病のごとき状態を治療ま
たは予防するためにアゴニストが用いられる。細菌、真
菌、原生動物およびウイルス感染のごとき感染症、詳細
にはＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２による感染；痛み；
癌；拒食症；大食症；喘息；パーキンソン病；急性心臓
疾患；低血圧；高血圧；尿閉；骨粗鬆症；狭心症；心筋
梗塞；潰瘍；アレルギー；良性前立腺肥大；ならびに不
安症、分裂病、躁鬱病、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞
および運動障害（例えば、Huntington病またはGilles d
ela Toutrett症候群）を包含する精神病および神経学的
疾病のごとき状態の種々の治療または予防のためにアン
タゴニストを用いてもよい。

【００４０】一般的には、かかるスクリーニング手順
は、細胞表面に本発明受容体ポリペプチドを発現する適
当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動
物由来の細胞、酵母、ショウジョウバエ（Drosophila）
または大腸菌（E.coli）を包含する。次いで、受容体発
現細胞（または発現された受容体を含む細胞膜）を試験
化合物と接触させて、結合または機能的応答の刺激もし
くは阻害を観察する。

【００４１】１のスクリーニング方法は、本発明受容体
を発現する細胞（例えば、トランスフェクションされた
ＣＨＯ細胞）を系に使用し、受容体活性化により引き起
こされる細胞外ｐＨまたは細胞内カルシウム変化を測定
する。この方法において、本発明受容体ポリペプチドを
発現する細胞に化合物を接触させてもよい。次いで、２
次的メッセンジャー応答、例えば、シグナル伝達、ｐＨ
変化、またはカルシウムレベル変化を測定して候補化合
物が受容体を活性化または阻害するかどうかを決定す
る。

【００４２】もう１つの方法は、受容体により伝達され
るｃＡＭＰおよび／またはアデニレートシクラーゼ蓄積
の阻害または刺激を調べることにより受容体阻害剤をス
クリーニングすることを包含する。かかる方法は、本発
明受容体で真核細胞をトランスフェクションして細胞表
面に受容体を発現させることを用いる。次いで、本発明
受容体存在下において細胞を候補アンタゴニストと接触
させる。次いで、ｃＡＭＰ蓄積量を測定する。候補アン
タゴニストが受容体に結合し、受容体結合を阻害する場
合には、受容体により伝達されるｃＡＭＰのレベルまた
はアデニレートシクラーゼ活性が低下または上昇するで
あろう。

【００４３】本発明受容体のアゴニストまたはアンタゴ
ニストを検出するためのもう１つの方法は、米国特許第
５４８２８３５号記載の酵母による方法である。そのア
ッセイは候補化合物の結合を試験するだけでよく、候補
化合物に直接的または間接的に結合した標識を用いるこ
とにより、あるいは標識競争物質との競争を用いるアッ
セイにおいて、受容体を有する細胞への付着を検出す
る。さらに、これらのアッセイにおいて、受容体を表面
に有する細胞に適する検出系を用いて、受容体活性化に
より発生するシグナルを候補化合物が生じるかどうかを
試験してもよい。一般的には、既知アゴニスト存在下に
おいて活性化阻害剤をアッセイし、アゴニストによる活
性化に対する候補化合物の存在の影響を観察する。かか
るスクリーニングアッセイを行うための標準的方法は当
該分野においてよく理解されている。潜在的なＨＤＰＢ
Ｉ３０アンタゴニストの例は、抗体、あるいはいくつか
の場合にはオリゴヌクレオチドまたはＨＤＰＢＩ３０の
リガンドに密接に関連した蛋白（例えば、リガンドのフ
ラグメント、または受容体に結合するが応答を誘発せ
ず、その結果受容体活性を保持する小型分子）を包含す
る。

【００４４】予防および治療方法 本発明は、過剰または不十分な量のＨＤＰＢＩ３０活性
に関連する異常な状態の処置方法を提供する。ＨＤＰＢ
Ｉ３０活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いること
ができる。１の方法は、有効量の上記阻害剤化合物（ア
ンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に
投与して、ＨＤＰＢＩ３０へのリガンドの結合をブロッ
クすることあるいは第２のシグナルを阻害することによ
り活性化を阻害し、そのことにより異常な状態を改善す
ることを特徴とする。

【００４５】もう１つのアプローチにおいて、内在性Ｈ
ＤＰＢＩ３０と競争してリガンドに結合する能力をやは
り有している可溶性形態のＨＤＰＢＩ３０ポリペプチド
を投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例は
ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのフラグメントを含む。

【００４６】さらにもう１つの方法において、発現ブロ
ック法を用いて内在性ＨＤＰＢＩ３０をコードしている
遺伝子の発現を阻害してもよい。知られているかかる方
法には、細胞内で生成した、あるいは別個に投与された
アンチセンス配列を用いる。例えば、Oligodeoxynucleo
tides as Antisense Inhibitors of Gene Expression,C
RC Press,Boca Raton, FL(1988)中、O'Connor,J.Neuroc
hem(1991)56:560を参照のこと。別法として、遺伝子と
ともに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを提供
してもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res(1
979)6:3073;Cooney et al.,Science(1988)241:456;Derv
an et al.,Science(1991)251:1360参照。これらのオリ
ゴマーはそれ自体投与することができ、あるいは重要な
オリゴマーをインビボで発現させることもできる。

【００４７】ＨＤＰＢＩ３０およびその活性の発現不足
に関連する異常な症状の治療には、いくつかの方法が用
いられる。１の方法は、ＨＤＰＢＩ３０を活性化する治
療上有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬
上許容される担体とともに投与し、そのことにより異常
な状態を改善することを特徴とする。別法として、遺伝
子治療を用いて、対象中の細胞によるＨＤＰＢＩ３０の
細胞内での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記
のごとく本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠
損レトロウイルスベクターに入れて発現するようにして
もよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、
本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレト
ロウイルスプラスミドベクターでトランスダクションし
たパッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージ
ング細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成
するようにしてもよい。これらのプロデューサー細胞を
対象に投与して細胞をインビボで処理加工して、インビ
ボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺伝子
治療の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Str
achan and A.P.Read,BIOS Scientific Publishers Ltd
(1986)中、第２０章、Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches（およびそ
の中の引用文献）参照。

【００４８】処方および投与 可溶性形態のＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドのごときペプ
チド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチ
ドまたは小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処
方してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプ
チドまたは化合物、および医薬上許容される担体または
賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライ
ン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロ
ール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられる
が、これらに限らない。処方は投与経路に適したものと
すべきであり、当業者によく知られている。さらに本発
明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填し
た、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パック
およびキットにも関する。

【００４９】本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。

【００５０】必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。

【００５１】しばしば「遺伝子治療」と称される上記治
療方法において、治療に使用するポリペプチドを対象中
において得ることもできる。よって、例えば、レトロウ
イルスプラスミドベクターを用いて対象由来の細胞をＤ
ＮＡまたはＲＮＡのごときポリヌクレオチドを用いてエ
クスビボで処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に
導入する。

【００５２】

【実施例】特記しないかぎり、当業者によく知られた標
準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明を
例示説明するものであり、本発明を限定するものではな
い。 実施例１ ｃＤＮＡ配列をコードしている７−ＴＭドメインを伴う
発現配列タグ（ＥＳＴ）として知られる短い配列からな
るHuman Genome SciencesからのランダムｃＤＮＡデー
タベースをＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて検索するこ
とにより、ＡＴＰ／Ｐ２Ｕ様受容体と相同的なＥＳＴが
示された。全長のクローンを得るために、自動ＤＮＡ配
列決定を用いてインサートの完全ＤＮＡ配列を推定し
た。ＧＣＧソフトウェアを用いるＤＮＡ配列のマップ分
析により、３７１個のアミノ酸残基からなる読み枠（Ｏ
ＲＦ）が示された。FASTAおよびBLASTアルゴリズムによ
るＤＮＡ配列のさらなる分析により、７−トランスメン
ブラン様Ｇ蛋白結合受容体に対するこのポリペプチドの
相同性が示された。さらに、lasergene proteanソフト
ウェアを用いる疎水性プロット分析により、Ｇ蛋白結合
受容体と共通したいくつかの特徴が示された。最大の特
徴は、それぞれ約２０ないし３０個のアミノ酸からなる
７つの疎水的領域の存在であり、それらはＧ蛋白結合ス
ーパーファミリーの受容体に見いだされる７−トランス
メンブラン構造トポロジーを形成する膜貫通ドメインと
なっている可能性がある。当該クローンの同一性をさら
に確認するために、読み枠（ＯＲＦ）のヌクレオチド配
列を用いてＰＣＲプライマーを設計し、２つのさらなる
ライブラリー（ヒト・白血球およびヒト・肺）からＤＮ
Ａ配列を増幅した。正しいサイズのＰＣＲバンドをＰＣ
Ｒ２.１ベクター（Invitrogen Incから得た）中にサブ
クローンし、配列決定した。

【００５３】実施例２：哺乳動物細胞での発現 本発明受容体は、ヒト胚腎臓２９３細胞（ＨＥＫ２９
３）または付着性ｄｈｆｒ ＣＨＯ細胞のいずれかにお
いて発現される。受容体発現を最大にするために、ＣＤ
ＮまたはｐＣＤＮＡ３ベクターに挿入する前にすべての
５’および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を受容体ｃＤＮＡ
から除去した。リポフェクチンにより個々の受容体ｃＤ
ＮＡで細胞をトランスフェクションし、４００ｍｇ／ｍ
ｌのＧ４１８存在下で選択した。３週間の選択期間後、
個々のクローンを拾い、さらなる分析のために増殖させ
た。ベクターのみでトランスフェクションされたＨＥＫ
２９３またはＣＨＯ細胞は負の対照として役立った。個
々の受容体を安定に発現する細胞系を単離するために、
典型的には、約２４個のクローンを選択し、ノーザンブ
ロット分析により分析した。受容体ｍＲＮＡは、分析し
たＧ４１８耐性クローンの約５０％において検出され
た。

【００５４】実施例３：結合アッセイおよび機能のアッ
セイのためのリガンドバンク スクリーニングのために、２００個以上の推定受容体の
バンクを集めた。バンクは、ヒトの７トランスメンブラ
ン（７ＴＭ）受容体を介して作用することが知られてい
る伝達物質、ホルモンおよびケモカイン；ならびにヒト
・７ＴＭ受容体の推定アゴニストである天然の化合物、
哺乳動物の相当物がまだ同定されていない非哺乳動物の
生物学的活性ペプチド；ならびに天然には存在しないが
未知の天然リガンドとともに７ＴＭ受容体を活性化する
化合物を含む。機能（すなわち、カルシウム、ｃＡＭ
Ｐ、マイクロフィジオメーター（microphysiometer）、
卵母細胞の電気生理学的性質等）のアッセイならびに結
合のアッセイを用い、このバンクを用いて、まず、既知
リガンドの受容体をスクリーニングする。

【００５５】実施例４：リガンド結合アッセイ リガンド結合アッセイは、受容体機能を確認するための
直接的方法を提供し、高処理量フォーマットに適用可能
である。受容体に対する精製リガンドを放射性標識して
高比活性（５０ないし２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）とし、
結合の研究に備える。次いで、放射性標識のプロセスが
受容体に対するリガンドの活性を減じないように測定を
行う。バッファー、イオン、ｐＨおよびヌクレオチドの
ごとき他のモジュレーターに関するアッセイ条件を最適
化して、膜および全細胞受容体源に関して測定可能な雑
音対シグナル比を得る。これらのアッセイのために、過
剰の未標識競争リガンドの存在下で測定した放射活性を
全結合放射活性から差し引いたものを、特異的受容体結
合と定義する。可能ならば、１種よりも多い競争リガン
ドを用いて残りの非特異的結合を決定する。

【００５６】実施例５：アフリカツメガエル・卵母細胞
における機能のアッセイ 本発明受容体ｃＤＮＡをコードしている直鎖状にしたプ
ラスミド鋳型由来のキャップしたＲＮＡ転写物を、標準
的手順に従ってＲＮＡポリメラーゼを用いて合成する。
インビトロ転写物を水に懸濁して最終濃度０．２ｍｇ／
ｍｌとする。卵巣葉を成体メスのカエルから取り、段階
Ｖの脱卵胞した卵母細胞を得て、Drummond微量注入装置
を用いてＲＮＡ転写物（１０ｎｇ／卵母細胞）を５０μ
ｌのボーラスとして注入する。２個の電極電圧クランプ
を用いて個々のアフリカツメガエル卵母細胞からの電流
を測定する。室温のＣａ²⁺不含Barth培地中で記録を行
う。アフリカツメガエルの系を用いて、リガンド活性化
に関して既知リガンドおよび組織／細胞抽出物をスクリ
ーニングすることができる。

【００５７】実施例６：マイクロフィジオメトリックア
ッセイ（Microphysiometric Assays） 種々の２次メッセンジャー系の活性化により、少量の酸
が細胞から生じる。大まかにいえば、生じた酸は、細胞
内シグナリングプロセスの燃料として必要な代謝活性の
増大の結果である。細胞周辺の培地のｐＨ変化は非常に
小さいが、サイトセンサー・マイクロフィジオメーター
（CYTOSENSOR microphysiometer）（Molecular Devices
Ltd.,Menlo Park,CA）により検出可能である。よっ
て、CYTOSENSORは、本発明Ｇ蛋白結合受容体のごときエ
ネルギーを使用する細胞内シグナリング経路に連動した
受容体の活性化を検出することができる。

【００５８】実施例７：抽出物／細胞上清のスクリーニ
ング 多数の哺乳動物受容体が存在するが、いままでのとこ
ろ、同族活性物質（アゴニスト）は存在していない。よ
って、これらの受容体に対する活性リガンドが、現在に
至るまで同定されてきたようなリガンドバンク中に含ま
れていない可能性がある。したがって、組織抽出物に対
しても本発明７ＴＭ受容体を機能面でスクリーニング
（カルシウム、ｃＡＭＰ、マイクロフィジオメーター等
を用いる機能のスクリーニング）して天然リガンドを同
定する。次いで、正の機能の応答を示す抽出物をサブフ
ラクションに分けて、活性化リガンドを単離、同定する
ことができる。

【００５９】実施例８：カルシウムおよびｃＡＭＰ機能
アッセイ ＨＥＫ２９３細胞において発現される７ＴＭ受容体は、
ＰＬＣおよびカルシウム可動化の活性化および／または
ｃＡＭＰ刺激もしくは抑制に機能的に連動していること
が示されている。受容体でトランスフェクションされて
いる、あるいはベクターで制御されているＨＥＫ２９３
細胞における基底カルシウムレベルが正常であること、
すなわち１００ｎＭないし２００ｎＭの範囲であること
が観察された。組み換え受容体を発現するＨＥＫ２９３
細胞をfura2とともに負荷し、１日で１５０個以上の選
択リガンドまたは組織／細胞抽出物を、アゴニストによ
り誘導されるカルシウム可動化について評価する。同様
に、標準ｃＡＭＰ定量アッセイを用いて、組み換え受容
体を発現するＨＥＫ２９３細胞をｃＡＭＰ産生の刺激も
しくは抑制について評価する。カルシウムトランジエン
トまたはｃＡＭＰ変動を示すアゴニストをベクターで制
御された細胞において試験して、応答が受容体を発現す
るトランスフェクション細胞に独自のものであるかどう
かを決定する。

【００６０】

【配列表】

【００６１】（１）一般的情報： （ｉｉ）発明の名称：新規ヒト・７−トランスメンブラ
ン受容体をコードしているｃＤＮＡクローンＨＤＰＢＩ
３０ （ｉｉｉ）配列の数：２ （ｖｉ）連絡先： （Ａ）宛て名：スミスクライン・ビーチャム （Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード７０９番 （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：ペンシルベニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖｉ）本願のデータ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：１９９７年２月２４日 （Ｃ）分類：不明 （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：ハン，ウィリアム・ティ （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ５０００３ （ｘｉ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６１０−２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：６１０−２７０−４０２６ （Ｃ）テレックス：

【００６２】（２）配列番号：１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１３９５塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： CCGGGTCGAC CCACGCGTCC GCAGGGAGGG GTGCGAGGCT AGCCACGCAG GCGGGGCCCT 60 GGGTCATTTT AAACTCTCAG AGTGAACGTC TTGATAGGAC CGACAAGACG CATGACATGT 120 ACTTAGAAAG CTTATCTTAG AGCCACACTG AGATTGGAAC CCGCAAAATA TGCCAGGAAA 180 CGCCACCCCA GTGACCACCA CTGCCCCGTG GGCCTCCCTG GGCCTCTCCG CCAAGACCTG 240 CAACAACGTG TCCTTCGAAG AGAGCAGGAT AGTCCTGGTC GTGGTGTACA GCGCGGTGTG 300 CACGCTGGGG GTGCCGGCCA ACTGCCTGAC TGCGTGGCTG GCGCTGCTGC AGGTACTGCA 360 GGGCAACGTG CTGGCCGTCT ACCTGCTCTG CCTGGCACTC TGCGAGCTGC TGTACACAGG 420 CACGCTGCCA CTCTGGGTCA TCTATATCCG CAACCAGCAC CGCTGGACCC TAGGCCTGCT 480 GGCCTGCAAG GTGACCGCCT ACATCTTCTT CTGCAACATC TACGTCAGCA TCCTCTTCCT 540 GTGCTGCATC TCCTGCGACC GCTTCGTGGC CGTGGTGTAC GCGCTGGAGA GTCGGGGCCG 600 CCGCCGCCGG AGGACCGCCA TCCTCATCTC CGCCTGCATC TTCATCCTCG TCGGGATCGT 660 TCACTACCCG GTGTTCCAGA CGGAAGACAA GGAGACCTGC TTTGACATGC TGCAGATGGA 720 CAGCAGGATT GCCGGGTACT ACTACGCCAG GTTCACCGTT GGCTTTGCCA TCCCTCTCTC 780 CATCATCGCC TTCACCAACC ACCGGATTTT CAGGAGCATC AAGCAGAGCA TGGGCTTAAG 840 CGCTGCCCAG AAGGCCAAGG TGAAGCACTC GGCCATCGCG GTGGTTGTCA TCTTCCTAGT 900 CTGCTTCGCC CCGTACCACC TGGTTCTCCT CGTCAAAGCC GCTGCCTTTT CCTACTACAG 960 AGGAGACAGG AACGCCATGT GCGGCTTGGA GGAAAGGCTG TACACAGCCT CTGTGGTGTT 1020 TCTGTGCCTG TCCACGGTGA ACGGCGTGGC TGACCCCATT ATCTACGTGC TGGCCACGGA 1080 CCATTCCCGC CAAGAAGTGT CCAGAATCCA TAAGGGGTGG AAAGAGTGGT CCATGAAGAC 1140 AGACGTCACC AGGCTCACCC ACAGCAGGGA CACCGAGGAG CTGCAGTCGC CCGTGGCCCT 1200 TGCAGACCAC TACACCTTCT CCAGGCCCGT GCACCCACCA GGGTCACCAT GCCCTGCAAA 1260 GAGGCTGATT GAGGAGTCCT GCTGAGCCCA CTGTGTGGCA GGGGGATGGC AGGTTGGGGG 1320 TCCTGGGGCC AGCAATGTGG TTCCTGTGCA CTGAGCCCAC CAGCCACAGT GCCCATGTCC 1380 CCTCTGGAAG ACAAA 1395

【００６３】（２）配列番号：２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３７１アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：蛋白 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Pro Gly Asn Ala Thr Pro Val Thr Thr Thr Ala Pro Trp Ala Ser 1 5 10 15 Leu Gly Leu Ser Ala Lys Thr Cys Asn Asn Val Ser Phe Glu Glu Ser 20 25 30 Arg Ile Val Leu Val Val Val Tyr Ser Ala Val Cys Thr Leu Gly Val 35 40 45 Pro Ala Asn Cys Leu Thr Ala Trp Leu Ala Leu Leu Gln Val Leu Gln 50 55 60 Gly Asn Val Leu Ala Val Tyr Leu Leu Cys Leu Ala Leu Cys Glu Leu 65 70 75 80 Leu Tyr Thr Gly Thr Leu Pro Leu Trp Val Ile Tyr Ile Arg Asn Gln 85 90 95 His Arg Trp Thr Leu Gly Leu Leu Ala Cys Lys Val Thr Ala Tyr Ile 100 105 110 Phe Phe Cys Asn Ile Tyr Val Ser Ile Leu Phe Leu Cys Cys Ile Ser 115 120 125 Cys Asp Arg Phe Val Ala Val Val Tyr Ala Leu Glu Ser Arg Gly Arg 130 135 140 Arg Arg Arg Arg Thr Ala Ile Leu Ile Ser Ala Cys Ile Phe Ile Leu 145 150 155 160 Val Gly Ile Val His Tyr Pro Val Phe Gln Thr Glu Asp Lys Glu Thr 165 170 175 Cys Phe Asp Met Leu Gln Met Asp Ser Arg Ile Ala Gly Tyr Tyr Tyr 180 185 190 Ala Arg Phe Thr Val Gly Phe Ala Ile Pro Leu Ser Ile Ile Ala Phe 195 200 205 Thr Asn His Arg Ile Phe Arg Ser Ile Lys Gln Ser Met Gly Leu Ser 210 215 220 Ala Ala Gln Lys Ala Lys Val Lys His Ser Ala Ile Ala Val Val Val 225 230 235 240 Ile Phe Leu Val Cys Phe Ala Pro Tyr His Leu Val Leu Leu Val Lys 245 250 255 Ala Ala Ala Phe Ser Tyr Tyr Arg Gly Asp Arg Asn Ala Met Cys Gly 260 265 270 Leu Glu Glu Arg Leu Tyr Thr Ala Ser Val Val Phe Leu Cys Leu Ser 275 280 285 Thr Val Asn Gly Val Ala Asp Pro Ile Ile Tyr Val Leu Ala Thr Asp 290 295 300 His Ser Arg Gln Glu Val Ser Arg Ile His Lys Gly Trp Lys Glu Trp 305 310 315 320 Ser Met Lys Thr Asp Val Thr Arg Leu Thr His Ser Arg Asp Thr Glu 325 330 335 Glu Leu Gln Ser Pro Val Ala Leu Ala Asp His Tyr Thr Phe Ser Arg 340 345 350 Pro Val His Pro Pro Gly Ser Pro Cys Pro Ala Lys Arg Leu Ile Glu 355 360 365 Glu Ser Cys 370

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒト・ＨＤＰＢＩ３０のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図２へ続く）。

【図２】 ヒト・ＨＤＰＢＩ３０のヌクレオチド配列お
よび推定アミノ酸配列（配列番号：１および２）を示す
図である（図１から続く）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＵ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ ＡＥＤ 21/08 39/395 ＡＤＺ Ｃ１２Ｑ 1/02 48/00 ＡＤＹ 1/68 Ａ Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｇ０１Ｎ 33/566 16/28 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＭ Ｃ１２Ｎ 5/10 ＡＡＮ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＢＦ 21/08 ＡＣＶ Ｃ１２Ｑ 1/02 ＡＤＵ 1/68 ＡＥＤ Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ステファニー・バン・ホーン アメリカ合衆国19464ペンシルベニア州ポ ッツタウン、バターナット・ドライブ129 番

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：２のポリペプチドをコードし
   ているヌクレオチド配列に対して全長にわたり少なくと
   も８０％の同一性を有するヌクレオチド配列または上記
   ヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を
   含む単離ポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項１のポ
   リヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一
   性を有するものである請求項１のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列が配列番号：１に含ま
   れるＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドをコードしている配列
   を含むものである請求項３のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 請求項１のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドの少なくと
   も１５個の連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチ
   ドプローブまたはプライマー。
7. 【請求項７】 適合する宿主細胞中に存在する場合に、
   配列番号：２のポリペプチドに対して少なくとも８０％
   の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＤＰＢＩ３０ポ
   リペプチドを生成する能力のある発現系を含むＤＮＡま
   たはＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７の発現系を含む宿主細胞。
9. 【請求項９】 ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドの生成に十
   分な条件下で請求項８の宿主を培養することを特徴とす
   るＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドの製造方法。
10. 【請求項１０】 該ポリペプチドが該細胞の表面に発現
    される請求項９の方法。
11. 【請求項１１】 培地からポリペプチドを回収すること
    をさらに特徴とする、請求項９の方法。
12. 【請求項１２】 請求項７の発現系で宿主細胞を形質転
    換またはトランスフェクションして、適当な培養条件下
    で宿主細胞がＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドを生成するよ
    うにすることを特徴とする、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチ
    ド生成する細胞の製造方法。
13. 【請求項１３】 請求項１２の方法により製造される細
    胞。
14. 【請求項１４】 配列番号：２のアミノ酸配列に対して
    全長にわたり少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列
    を含むＨＤＰＢＩ３０ポリペプチド。
15. 【請求項１５】 配列番号：２のアミノ酸配列を含む請
    求項１４のポリペプチド。
16. 【請求項１６】 配列番号：２のポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１１の方法により製造されるＨ
    ＤＰＢＩ３０ポリペプチド。
18. 【請求項１８】 請求項１４のＨＤＰＢＩ３０ポリペプ
    チドに免疫特異的な抗体。
19. 【請求項１９】 （ａ）受容体に対する治療上有効量の
    アゴニストを対象に投与すること；および／または
    （ｂ）インビボで該受容体活性を生じる形態のＨＤＰＢ
    Ｉ３０ポリヌクレオチドを対象に与えることを特徴とす
    る、ＨＤＰＢＩ３０活性の増強を必要とする対象の治療
    方法。
20. 【請求項２０】 （ａ）受容体に対する治療上有効量の
    アンタゴニストを対象に投与すること；および／または
    （ｂ）該受容体をコードしているヌクレオチド配列の発
    現を阻害する核酸分子を対象に投与すること；および／
    または（ｃ）リガンドを求めて受容体と競争する治療上
    有効量のポリペプチドを対象に投与することを特徴とす
    る、ＨＤＰＢＩ３０活性の阻害を必要とする対象の治療
    方法。
21. 【請求項２１】 （ａ）対象のゲノム中のＨＤＰＢＩ３
    ０をコードしているヌクレオチド配列中の変異の存在ま
    たは不存在を決定すること；および／または（ｂ）該対
    象由来の試料中のＨＤＰＢＩ３０の発現の存在または量
    を分析することを特徴とする、対象におけるＨＤＰＢＩ
    ３０の発現または活性に関連した疾病またはかかる疾病
    に対する感受性の診断方法。
22. 【請求項２２】 （ａ）請求項１３の細胞を候補化合物
    と接触させること； （ｂ）次いで、該候補化合物の該細胞への結合能を評価
    することを特徴とする、ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチドに
    結合する化合物の同定方法。
23. 【請求項２３】 候補化合物が細胞表面におけるＨＤＰ
    ＢＩ３０ポリペプチドの活性化により発生するシグナル
    を生じさせるかどうかを決定することをさらに特徴と
    し、該シグナルを発生させる候補化合物がアゴニストで
    あると同定される、請求項２２の方法。
24. 【請求項２４】 請求項２３の方法により同定されるア
    ゴニスト。
25. 【請求項２５】 細胞を該ＨＤＰＢＩ３０ポリペプチド
    に対する既知アゴニストと接触させること；次いで、 該アゴニストにより発生するシグナルが該候補化合物の
    存在下において減少するかどうかを決定することをさら
    に特徴とし、該シグナルを減少させる候補化合物が該Ｈ
    ＤＰＢＩ３０ポリペプチドに対するアンタゴニストであ
    ると同定される、請求項２２の方法。
26. 【請求項２６】 請求項２５の方法により同定されるア
    ンタゴニスト。
27. 【請求項２７】 厳密なハイブリダイゼーション条件下
    で配列番号：１の配列またはそのフラグメントの配列を
    有するプローブを用いてＨＤＰＢＩ３０遺伝子を含む適
    当なライブラリーをスクリーニングし、次いで、ＤＮＡ
    配列を単離することにより得ることのできるＤＮＡ配列
    を必須としてなるポリヌクレオチド。
28. 【請求項２８】 配列番号：１のヌクレオチド配列を含
    むヌクレオチド配列を発現することにより得ることので
    きるポリペプチド。