JPH11217328A - 抗ｈｉｖ活性を発現する脂質集合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】リンパ節に特異選択的に移行して抗HIV活性を
発現する薬物調製物の提供。 【解決手段】一般式（Ｉ）： 【化１】 〔R₁は飽和・不飽和の長鎖脂肪酸残基又は飽和・不飽和
の炭化水素残基、R₂はＨ,飽和・不飽和の長鎖脂肪酸残
基又は飽和・不飽和の炭化水素残基；Xは式(II)： 【化２】 （R₃は水素,アジド基;R₄は水素,低級アルキル基;Yは式
(III),(IV),(V)又は(VI)： 【化３】 [R₅はハロゲン，Ｈ又は分岐していてもよい低級アルキ
ル基；R₆はハロゲン，Ｈ，低級アルキル基を表し；R₇は
アミノ基，ハロゲン又はヒドロキシ基；R₈はハロゲン，
Ｈ又はハロゲンで置換されていてもよいアルケニル基；
R₉及びR₁₀は各々Ｈ，アミノ基，ヒドロキシ基又はハロ
ゲン；R₁₁はアミノ基，ヒドロキシ基又はハロゲン]のい
ずれかで示される塩基）で表される基。〕で示され、少
なくともホスフォリパーゼＤ又はＣ下で抗ＨＩＶ活性を
発現する脂質類似型化合物又はその薬学的に許容される
塩を脂溶性微粒子キャリアーに含有する脂質集合体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、リンパ系、特にリ
ンパ節に特異選択的に移行して抗ＨＩＶ活性を発現する
ことを特徴とする脂質集合体に関する。詳細には、抗Ｈ
ＩＶ活性を発現するヌクレオシド誘導体の脂溶性調製物
を脂溶性微粒子キャリアーに含有する脂質集合体、特に
リポソーム体及びエマルジョン体に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体の中で血管系と共に脈管系を構成
し、末梢組織から組織液を回収して体液循環を調節して
いるのがリンパ系である。リンパ液は毛細リンパ管から
中心方向に一方向に流れ、リンパ節において他の部位か
ら流出したリンパ液と合流を重ねて、最終的には胸管に
代表される中心リンパ管を経て左鎖骨下静脈に注ぐ。リ
ンパ系はしばしば細菌感染の拡大の経路となる。またリ
ンパ系は免疫システムの中で重要な役割を果たしてお
り、後天性免疫不全症であるエイズはレトロウイルスＨ
ＩＶがリンパ系に集まり、免疫調整能が破壊されて発症
する疾患である。

【０００３】従来より、ヌクレオシド誘導体又は疑似ヌ
クレオシドが逆転写酵素阻害剤として、ＨＩＶによる誘
発されるＨＩＶ感染の予防及び治療に有効であることが
判明している。

【０００４】近年のエイズ治療法においては、かかる逆
転写酵素阻害剤をプロテアーゼ阻害剤と併用することに
より、年間死亡者数の減少が認められているが、その反
面、逆転写酵素阻害剤が循環血を介して骨髄に移行する
ことによって生じる骨髄系の重篤な副作用や、耐性ウイ
ルス株の出現が問題となっている。

【０００５】また従来の逆転写酵素阻害剤は、経口投与
形態であるが、例えばＤＤＩ（didanosine）と称される
逆転写酵素阻害剤は消化管内での代謝が大きいため、経
口投与後のバイオアベイラビリティーは非常に低い（３
〜７％）。更にＡＺＴ（azido thymidine）は、血中半
減期が短いために１日の投与量及び投与回数を多くしな
ければ効き目がなく（１２００ｍｇ ６分服）、長期間
投与によって循環血中のＡＺＴが骨髄に移行して毒性を
発揮するという欠点がある。さらに血中から逆転写酵素
阻害剤がリンパ液に移行する量は限られているため、リ
ンパ節内に潜むＨＩＶを有意に破壊させるには、今の薬
剤の使用量また投与形態では不十分である。

【０００６】ＨＩＶに感染した患者では、リンパ節が腫
れる等の初期症状を示すことが報告されている。リンパ
移行性を示す薬物を経口投与した場合であっても、薬物
は腸リンパ本幹から吸収され、乳ビ槽、胸管を経て、比
較的速やかに鎖骨下静脈から血中に入ってしまう。その
ため、経口投与ではこの経路中のリンパ節に存在するウ
イルスしか攻撃することができない可能性もある。

【０００７】しかして、副作用を軽減しながらＨＩＶの
根治を実現するためには、ウイルスが巣くうリンパ節に
選択特異的に移行し、該ターゲッティング部位において
有意に抗ＨＩＶ活性を発現する抗ＨＩＶ剤の開発が求め
られている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、エイズ治療
薬のリンパターゲッティングを目的とする。つまり本発
明は、リンパ節中に選択的に移行して該部位において有
意に抗ＨＩＶ活性を発現する化合物の調製物を提供する
ことを目的とするものである。

【０００９】更に本発明は、該化合物の調製物を有効成
分とすることによって、リンパ節内に選択的に移行し、
有意な抗ＨＩＶ活性を発揮し、副作用の低減された抗Ｈ
ＩＶ剤を提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】従来から、種々の薬物を
リポソーム体として組織内に投与すると、選択的にリン
パ系から吸収されることが知られている。このため、本
発明者らは前記目的を達成するために、ＡＺＴ等の抗Ｈ
ＩＶ活性を有するヌクレオシド誘導体のリポソーム化を
試みた。しかしながら、これらのヌクレオシド誘導体は
水溶性が高く分子量が小さいためリポソームへの封入率
は極端に少なく、その上封入された薬物も速やかに漏出
することが判明した。

【００１１】一方、脂溶性を高めて膜透過性を向上させ
る目的で、種々の水溶性薬物にリン脂質官能基を導入す
る試みが種々なされている。しかしながら、本発明者ら
によって、ＡＺＴ等の抗ＨＩＶ活性を有するヌクレオシ
ド誘導体の場合はリン脂質官能基を導入しても、脂溶性
は向上するものの、予想に反して膜透過性は逆に減少し
てしまうことが確認された。

【００１２】これらの検討結果をもとにして、本発明者
らは、核酸系逆転写酵素阻害剤として有用な各種ヌクレ
オシド誘導体にリン脂質官能基を導入して調製される脂
質類似型ヌクレオシド誘導体をリポソーム化又は水中油
（ｏ／ｗ）型エマルジョン化することを試みたところ、
薬物はほぼ１００％安定してリポソーム化又はエマルジ
ョン化することができ、しかもかかるリポソーム体及び
エマルジョン体は、上記目的に合致した優れた特性を有
しており、特に筋肉内投与により殆ど血漿中に移行する
ことなく速やかにリンパ系を介して吸収され、リンパ節
内で活性型ヌクレオシド誘導体となって有意に抗ＨＩＶ
活性を発揮することが見いだされた。本発明は、かかる
知見に基づくものである。

【００１３】すなわち、本発明は、下記（１）〜（６）
のいずれかに示される、脂質類似型化合物若しくはその
薬学的に許容される塩を脂溶性微粒子キャリアーに含有
する脂質集合体である。

【００１４】（１）一般式（Ｉ）：

【００１５】

【化８】

【００１６】〔式中、Ｒ₁は飽和若しくは不飽和の長鎖
脂肪酸残基または飽和若しくは不飽和の炭化水素残基を
表し、Ｒ₂は水素原子，飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪
酸残基または飽和若しくは不飽和の炭化水素残基を表
し；Ｘは式(II)：

【００１７】

【化９】

【００１８】（式中、Ｒ₃は水素原子またはアジド基を
表し、Ｒ₄は水素原子又は低級アルキル基を表し；Ｙは
式(III),(IV),(V)又は(VI)：

【００１９】

【化１０】

【００２０】[Ｒ₅はハロゲン，水素原子又は分岐してい
てもよい低級アルキル基を表し；Ｒ₆はハロゲン，水素
原子，分岐しているか若しくは置換基を有していてもよ
い低級アルキル基を表し；Ｒ₇はアミノ基，ヒドロキシ
基又はハロゲンを表し；Ｒ₈はハロゲン，水素原子又は
ハロゲンで置換されていてもよいアルケニル基を表し；
Ｒ₉及びＲ₁₀は、それぞれ水素原子，アミノ基，ヒドロ
キシ基又はハロゲンを表し；Ｒ₁₁アミノ基，ヒドロキシ
基又はハロゲンを表す。]のいずれかで示される塩基を
表す。）で表される基である。〕で示され、少なくとも
ホスフォリパーゼＤ若しくはホスフォリパーゼＣ下で抗
ＨＩＶ活性を発現することを特徴とする脂質類似型化合
物またはその薬学的に許容される塩を、脂溶性微粒子キ
ャリアーに含有する脂質集合体。

【００２１】（２）上記の脂質類似型化合物（Ｉ）にお
いて、Ｒ₁が炭素数１２〜１８の飽和若しくは不飽和の
長鎖脂肪酸残基であり、Ｒ₂が水素原子または炭素数１
２〜１８の飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基である
ことを特徴とする、（１）記載の脂質集合体。

【００２２】（３）前記の脂質類似型化合物(Ｉ)におい
て、Ｘが式（II）

【００２３】

【化１１】

【００２４】（式中、Ｒ₃は水素原子又はアジド基を表
し、Ｒ₄は水素原子を表し、Ｙは式(III),(IV),(V)又は
(VI)：

【００２５】

【化１２】

【００２６】[式中、Ｒ₅は分岐していても良い炭素数１
〜５の低級アルキル基を表し、Ｒ₆は水素原子を表し、
Ｒ₇はアミノ基を表し、Ｒ₈，Ｒ₉及びＲ₁₀はそれぞれ水
素原子を表し、Ｒ₁₁はハロゲンを表す。]のいずれかで
示される塩基を表す。）で表される基であることを特徴
とする、（１）または（２）記載の脂質集合体。

【００２７】（４）前記の脂質類似型化合物（Ｉ）にお
いて、Ｒ₁が炭素数１４〜１６の飽和若しくは不飽和の
長鎖脂肪酸残基であり、Ｒ₂が炭素数１４〜１６の飽和
若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基または水素原子であ
り、Ｘが、式(II)：

【００２８】

【化１３】

【００２９】（式中、Ｒ₃はアジド基を表し、Ｒ₄は水素
原子を表し、Ｙは式(VII)：

【００３０】

【化１４】

【００３１】で示される基である、（１）乃至（３）の
いずれかに記載の脂質集合体。

【００３２】（５）リポソームまたはエマルジョンの形
態を有することを特徴とする（１）乃至（４）のいずれ
かに記載の脂質集合体。

【００３３】さらにまた、本発明は上記脂質集合体を有
効成分とする医薬組成物、特に抗ＨＩＶ剤に関する。ま
た、本発明は上記脂質集合体のリンパ節移行型製剤とし
ても用途を提供するものである。

【００３４】

【発明の実施の形態】本発明の一般式（Ｉ）で示される
ヌクレオシド誘導体において、Ｒ₁及びＲ₂で表される飽
和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基または飽和若しくは
不飽和の炭化水素残基としては、該官能基に起因してヌ
クレオシド誘導体が生体内における細胞膜に対して優れ
た親和性を有するものであって、少なくともホスフォリ
パーゼＤまたはホスフォリパーゼＣで酵素分解されるこ
とによって、式：ＨＯ−Ｘ（式中、Ｘは前記と同意義を
示す。）で表されるヌクレオシド誘導体、またはその
５’リン酸体が解離されるものであれば、特に制限され
ない。

【００３５】具体的には、飽和若しくは不飽和の長鎖脂
肪酸残基としては、通常、炭素数１０〜１８の飽和脂肪
酸残基若しくは炭素数１０〜１８の不飽和脂肪酸残基を
挙げることができる。好ましくは、飽和脂肪酸残基とし
て、例えばラウロイル，ミリストイル，パルミトイル，
ステアロイル，ドデカノイルなどの炭素数１２〜１８の
長鎖脂肪酸残基が挙げられる。また、不飽和脂肪酸残基
として、炭素数１２〜１８の不飽和脂肪酸残基、例えば
パルミトオレオイル，オレオイル，リノレオイル，リノ
レノイル，アラキドノニルなどの１〜４個の不飽和結合
を有する長鎖脂肪酸残基を挙げることができる。

【００３６】炭化水素残基としては、炭素を２〜３０
個、好ましくは１０〜２４個、より好ましくは１２〜２
０個有するものが挙げられ、これらは飽和炭化水素残
基、不飽和炭化水素残基のいずれであってもよい。この
ような炭化水素の例としては、好ましくはラウリル，ミ
リスチル，パルミチル，ステアリル，イコサニルなどの
飽和炭化水素残基、パルミトオレイル，オレイル，リノ
レイル，リノレニル，アラキドニルなどの１〜４個の不
飽和結合を有する不飽和炭化水素残基を挙げることがで
きる。

【００３７】Ｒ₂は、好ましくはホスフォリパーゼＡ₂の
作用により解離し得る官能基であり、好適にはラウロイ
ル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、より
好ましくはミリストイル、パルミトイル等の長鎖脂肪酸
残基を挙げることができる。またＲ₂は水素原子であっ
てもよい。

【００３８】Ｒ₁及びＲ₂の組み合わせ態様は、特に制限
されず、上記いずれかの基を同一又は異なって適宜組み
合わせることができる。例えば、Ｒ₁及びＲ₂がいずれ
も、上記に掲げる同一若しくは異なる長鎖脂肪酸残基で
あっても、上記に掲げる同一若しくは異なる炭化水素残
基であってもよいし、Ｒ₁が長鎖脂肪酸残基又は炭化水
素残基でありＲ₂が水素原子であってもよいし、またＲ₁
が炭化水素残基でありＲ₂が長鎖脂肪酸残基であって
も、またその逆であってもよい。

【００３９】好ましくは、Ｒ₁及びＲ₂がいずれも、同一
又は異なる、飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基であ
る態様、及びＲ₁が飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残
基であってＲ₂が水素原子である態様であり、より好ま
しくはＲ₁及びＲ₂のいずれもが炭素数１０〜１８の飽和
脂肪酸残基であるか、またはＲ₁がこれらの飽和脂肪酸
残基であってＲ₂が水素原子である態様である。より具
体的には、Ｒ₁及びＲ₂が互いに同一のラウロイル基，ミ
リストイル基，パルミトイル基又はステアロイル基等の
炭素数１２〜１８の飽和脂肪酸残基である態様、Ｒ₁が
これらの飽和脂肪酸残基であって、Ｒ₂が水素原子であ
るか若しくはパルミトオレオイル，オレオイル，リノレ
オイル，リノレノイルといった炭素数１２〜１８の不飽
和脂肪酸残基である態様を挙げることができる。

【００４０】本発明においてハロゲンとは、フッ素，臭
素，ヨウ素，塩素を意味するが、好ましくはフッ素，塩
素である。特に、Ｒ₇又はＲ₁₁で示されるハロゲンは塩
素であることが好ましい。

【００４１】Ｒ₅及びＲ₆で表される分岐していてもよい
低級アルキル基とは、炭素数が１〜５の直鎖状または分
枝状のアルキル基であり、例えば、メチル基，エチル
基，プロピル基，イソプロピル基，ブチル基，イソブチ
ル基，sec-ブチル基，tert-ブチル基，ペンチル基，イ
ソペンチル基，ネオペンチル基，tert-ペンチル基，２-
メチルブチル基，１,２-ジメチルプロピル基，ヘキシル
基，イソヘキシル基等を挙げることができる。好ましく
はメチル基，エチル基，プロピル基，イソプロピル基，
ブチル基，イソブチル基，sec-ブチル基，tert-ブチル
基である。より好ましくは炭素数が１〜３の直鎖状また
は分枝状のアルキル基であり、メチル基，エチル基，プ
ロピル基，イソプロピル基が挙げられる。

【００４２】Ｒ₄で表される低級アルキル基またはＲ₆で
表される置換基を有していてもよい低級アルキル基にお
いて、低級アルキル基としては、炭素数１〜５の直鎖状
または分枝状のアルキル基であり、例えば、メチル基，
エチル基，プロピル基，イソプロピル基，ブチル基，イ
ソブチル基等を挙げることができるが、好ましくはメチ
ル基，エチル基，プロピル基等の炭素数１〜３の直鎖状
アルキル基である。

【００４３】ここで置換基としては置換基を有していて
もよいベンジル基を例示することができる。ここでベン
ジル基の置換基としてはハロゲン，ニトロ基，アミノ基
を挙げることができる。

【００４４】Ｒ₈で表されるハロゲンで置換されていて
もよいアルケニル基としては、炭素数２〜５を有する、
例えばビニル基，アリル基，２−プテニル，３−ヘキセ
ニル等を挙げることができる。好ましくはハロゲンで置
換されたビニル基であり、かかるハロゲンとしては臭
素，塩素，ヨウ素を挙げることができる。

【００４５】本発明の脂質類似型化合物（Ｉ）は、塩又
は水和物の形態でも優れた特性を有するものとして存在
し得る。そのような塩としては、特に制限されないが、
例えば塩酸塩や臭化水素酸塩等のハロゲン化水素酸塩，
硫酸塩又はリン酸塩などの無機酸塩、マレイン酸塩，酒
石酸塩，クエン酸塩，コハク酸塩又はメタンスルホン酸
塩等の有機酸塩、Ｎａ，Ｃａ，Ｋ，Ｍｇ又はＡｌ等のア
ルカリ金属塩，アルカリ土類金属塩、またはアミン，ア
ンモニウム塩等を例示することができる。当該塩を医薬
組成物に使用する場合には、薬理学的に許容され得る塩
であることが好ましい。また、水和物としては、特に制
限されないが、本発明の誘導体またはその塩１分子に対
し、０.１〜３分子の水が水和したものを例示すること
ができる。

【００４６】本発明の化合物（Ｉ）には種々の立体異性
体，互変異性体が存在するが、これらの異性体のいずれ
も本発明に含まれる。また、分子中に不斉中心を含む場
合には、不斉中心の立体配置はＲ，Ｓのいずれでも、ま
たそれらの混合物であってもよい。そしてそれらは、光
学活性な化合物を出発原料として用いるか、または得ら
れた異性体混合物をカラムクロマトグラフィーや再結晶
により精製することにより得ることができる。

【００４７】なお、本発明において抗ＨＩＶ活性とは、
ＨＩＶの複製を抑制する作用を意味し、抗ＨＩＶ活性を
発現するとは、被験物をＨＩＶ感染細胞と混合した場合
に、培養液中のウイルス数（ウイルス感染価）を減少さ
せる活性を示すことを意味する。

【００４８】本発明の脂質集合体はホスファリパーゼＤ
またはホスフォリパーゼＣと反応して抗ＨＩＶ活性を発
現するものであればよく、抗ＨＩＶ活性に加えてその他
の抗ウイルス活性を発現するものも包含される。

【００４９】本発明の脂質類似型化合物として、具体的
には、表１〜表５に示される化合物を例示することがで
きる。

【００５０】

【表１】

【００５１】

【表２】

【００５２】

【表３】

【００５３】

【表４】

【００５４】

【表５】

【００５５】本発明の化合物（Ｉ）は、常法に従って製
造することができる。より具体的には、例えば下記の反
応式で示される方法で製造することができる。

【００５６】

【化１５】

【００５７】（式中、Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃，Ｒ₄及びＹは前記
と同意義である。） すなわち、本発明の化合物（Ｉ）は、ホスフォリパーゼ
Ｄの存在下、必要に応じて金属イオンを共存させ、一般
式(VIII)で示されるリン脂質と一般式(IX)で示されるヌ
クレオチド誘導体とを適切な溶媒中で反応させることに
よって製造することができる。

【００５８】なお、これらのリン脂質（VIII）及びヌク
レオチド誘導体（IX）は常法に従って製造することがで
きる（George W.J.Fleet, Jong Chan Son, Andrew E.De
rome, Tetrahedron,44(2),625-636,1988；Chung K.Chu,
J.Warren Beach,Yoshiyuki Kosugi et al.,Tetrahedron
Letters,29(42),5349-5352,1988；Murakami.K.,T.Shir
asaka,J.A.Kelley,H.Mitsuya et al.,J.Med.Chem.,34,1
606-1612,1991等）。

【００５９】本方法において使用されるリン脂質は、前
記Ｒ₁及びＲ₂を有するホスファチジルコリンであり、例
えば１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホ
スフォコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジミリストイル−
ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ
コリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−
グリセロ−３−ホスフォコリン（ＤＬＰＣ）等を挙げる
ことができる。Ｒ₁とＲ₂が脂肪酸残基である場合には、
炭素数１２〜２０の長鎖脂肪酸の混合体であるラジール
（Radyl)基で示される天然のホスファチジルコリンであ
ってもよい。

【００６０】このようなホスファチジルコリンは、常法
に従って製造でき、また簡便には試薬メーカーから購入
することができる。また、Ｒ₂が水素原子である化合物
(VIII)は、上記ホスファチジルコリンを、ホスファリパ
ーゼＡ₂を用いて酵素分解することによって調製するこ
とができる。

【００６１】本方法において使用されるホスフォリパー
ゼＤとしては、特に制限されないが、具体的には、例え
ばストレプトミセ属に属するストレプトミセス・エス・
ピー（Streptmyces sp・TypeVII）由来のホスフォリパー
ゼＤ（Sigma製）を用いることができ、その使用量は、
ホスファチジルコリン１ｍｇあたりホスフォリパーゼ
０.０１ユニット（Ｕ）以上、好ましくは０.１〜１００
ユニットである。

【００６２】本方法において使用される反応溶媒として
は、例えばエーテル，ベンゼン，クロロホルムなどの有
機溶媒、及びｐＨ３〜９、好ましくはｐＨ４〜６の緩衝
液の有機溶媒層−水層の二層系溶媒等が挙げられる。

【００６３】また、酵素反応を促進する目的で反応液中
に金属イオンを共存させてもよく、そのような金属イオ
ン形成のための水溶性塩類としては、通常塩化カルシウ
ムが用いられる。反応温度は通常２０〜６０℃、好まし
くは３０〜５０℃であり、反応時間は３０分〜１０時間
程度である。

【００６４】このようにして製造される本発明の脂質類
似型化合物は、分液法、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー等の常法に従って精製することができる。

【００６５】また、さらに得られた化合物をイオン交換
カラム処理等の既知の方法で処理することによって塩又
は水和物に調製することもできる。

【００６６】本発明は、上記脂質類似型化合物（Ｉ）お
よびその薬学的に許容される塩を脂溶性微粒子キャリア
ーに含有してなる脂質集合体である。

【００６７】微粒子キャリアーとしては、前述する脂質
類似型化合物（Ｉ）およびその薬学的に許容される塩を
保持して、それをリンパ系に選択的に移行させる特性を
有するものであって生体に悪影響を与えないものであれ
ば特に制限されず、いかなるものをも包含される。具体
的には、リポソームまたはエマルジョンを例示すること
ができる。

【００６８】すなわち、本発明の脂質集合体は、基本的
には、リン脂質，グリセロ糖脂質，大豆油，コーン油，
ゴマ油，トリオレイン（トリグリセリド）などの脂質等
とともに前述する本発明の脂質類似型化合物（Ｉ）又は
その薬学的に許容される塩を、水性溶媒中で懸濁するこ
とによって調製できるリポソームまたはエマルジョン等
の微粒子小胞である。

【００６９】本発明において「含有」とは、上記微粒子
キャリアーに前述する脂質類似型化合物（Ｉ）およびそ
の薬学的に許容される塩が含まれるものであれば、その
存在態様を問わない趣旨であり、例えばリポソームの膜
を形成する脂質二重層間に脂質類似型化合物（Ｉ）等が
存在していてもよいし、またエマルジョンの内胞内に含
有存在していても若しくは脂質膜層として存在していて
もよい。

【００７０】本発明の脂質集合体がリポソーム体の態様
である場合、その膜成分として用いられる脂質として
は、ホスファチジルコリン，ホスファチジルセリン，ホ
スファチジルエタノールアミン，ホスファチジルイノシ
トール，ホスファチジルグリセロールなどのグリセロリ
ン脂質を挙げることができ、より具体的には、１，２−
ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォコリン
（ＤＰＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセ
ロ−３−ホスフォコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジラウ
ロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォコリン（ＤＬＰ
Ｃ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−
ホスフォコリン（ＤＳＰＣ）が例示できる。なお、これ
らの脂質は一種若しくは２種以上を組み合わせて用いる
こともできる。

【００７１】このような脂質に加えて、膜成分としてコ
レステロールを用いることもできる。特にコレステロー
ルは、膜安定化剤として有用であり、脂質に対して通常
０〜１００モル％、好ましくは２５〜５０モル％配合さ
れることが好ましい。

【００７２】本発明の脂質類似型化合物（Ｉ）又はその
塩は、前述する脂質に対して通常１０〜１００モル％、
好ましくは２５〜５０モル％の割合で配合される。ま
た、リポソームが脂質，コレステロール及び本発明の化
合物又はその塩から基本的に構成される場合の各配合割
合は、脂質：コレステロール：本発明の化合物又はその
塩＝４：０〜４：１〜４、好ましくは４：１〜２：１〜
２である。

【００７３】また、本発明の脂質類似型化合物（Ｉ）又
はその塩は、ＤＭＰＣ，ホスファチジルセリン及びコレ
ステロールから構成されるアニオン性リポソーム、好ま
しくはＤＭＰＣ／ホスファチジルセリン／コレステロー
ル＝５／１／４から構成されるアニオン性リポソームに
含有させることもできる。

【００７４】本発明のリポソーム体は、一枚膜リポソー
ム（ＳＵＶ：Small Unilamella Vesicle、ＬＵＶ：Larg
e Unilamella Vesicle）〜多重層リポソーム（ＭＬＶ：
Multilamellar Vesicle）のいずれの形態を有していて
も良く、またその粒子径によって限定されるものではな
い。

【００７５】好適な粒子径としては、限定されないが、
数十ｎｍ〜数百ｎｍ、好ましくは４０〜１００ｎｍを挙
げることができ、かかる径を有するリポソームによれば
筋肉内投与に適したリポソーム製剤を調製することがで
きる。

【００７６】リポソームは常法に従って調製することが
できる（Gregoriadis, G.,FEBS Letters,(1973), 36,29
2-296; A.W.Segal, et al.,Clinical Science and Mole
cular Medicine (1975),49, 99-106）。一般には、単純
水和法によって一旦ＭＬＶリポソームを作成して、これ
を超音波処理法、フレンチプレス法またはエクストルー
ション法等によって均一な粒子径を有するＳＵＶリポソ
ームに調製する方法を例示することができる。

【００７７】エマルジョンの態様の本発明の脂質集合体
は、ｏ／ｗ型エマルジョンの調製法を広く用いて調製す
ることができ、一般的に、常温で液状の油及び界面活性
剤を、前述する脂質類似型化合物（Ｉ）またはその薬学
的に許容される塩とともにホモジナイズすることにより
製造することができる。

【００７８】なお、本発明においては、前述する脂質類
似型化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容される塩を、
エマルジョン内胞の液状油を被覆する界面活性剤として
用いることができる。この場合、常温で液状の油を脂質
類似型化合物（Ｉ）またはその薬学的に許容される塩と
ともにホモジナイズすることにより、リピッドマイクロ
スフェアーと称されるエマルジョンを製造することがで
きる。

【００７９】液状の油としては、常温で液状であって生
体に悪影響を与えないものであれば特に制限されない
が、具体的には大豆油、コーン油、ゴマ油、トリオレイ
ン等の植物油が挙げられる。

【００８０】なお、エマルジョン体である本発明の脂質
集合体は、上記の方法及び成分に特に制限されず、生体
に悪影響を及ぼさない常温で油状の有機物、ステロイド
化合物、界面活性剤及び蛋白質等を組み合わせて用いる
こともできる。特に、界面活性剤としてはホスファチジ
ルコリン（レシチン）等のリン脂質、ＨＣＯ−６０等を
挙げることができる。

【００８１】例えば界面活性剤としてＨＣＯ−６０を用
いる場合は、上記の植物油の油相に脂質類似型化合物
（Ｉ）またはその薬学的に許容される塩を溶解し、５〜
１０％程度のＨＣＯ−６０水溶液を容積比６：４程度で
混合し、室温でボルテックスミキサーで撹拌混濁後、更
に超音波発生器で窒素雰囲気下で分散させることによっ
てエマルジョン体である本発明の脂質集合体を調製する
ことができる。

【００８２】脂質類似型化合物（Ｉ）またはその薬学的
に許容される塩を保持する本発明の脂質集合体は、ヒト
及び哺乳動物（例えば、マウス，ラット，ウサギ，イ
ヌ，ネコ等）に筋肉内投与または皮下投与されることに
よって、速やかにリンパ系に移行して、リンパ節内で活
性型に変換して優れた抗ＨＩＶ作用を発揮する。

【００８３】また本発明の脂質集合体によれば、エマル
ジョン化することによって難溶解性薬物を可溶化するこ
とができ、またリン脂質の吸収経路であるカイロミクロ
ンを介してリンパ選択的に薬物を経口吸収させることも
可能となる。また、高分子や微粒子性の老廃物は血管壁
を通過できず、末梢組織からの吸収は内皮細胞間を流れ
ているリンパ系を介して行われているという知見を利用
して、筋肉内投与によってリンパ系に選択的に薬物を送
り込むことができる。

【００８４】更に、脂溶性微粒子キャリアーに保持され
ている脂質類似型化合物（Ｉ）は脂溶性が高いため生体
膜への親和性が高く、生体内で長期間滞留して活性を持
続し、キナーゼの関与なしに抗ＨＩＶ活性を発揮するヌ
クレオシド誘導体の５’−リン酸体が細胞内で生成する
等の利点がある。すなわち、本発明の脂質集合体は、生
体内で活性が持続、増強されるという効果を有し、また
高い生体内利用率を有しており、更に選択的にリンパ節
に移行し血流に移行する量を軽減できるため、低毒性で
あるという利点がある。

【００８５】よって、本発明の脂質集合体は、リンパ節
移行型製剤として有用である。

【００８６】さらに、本発明の脂質集合体は、抗ウイル
ス剤、特に抗ＨＩＶ剤として、後天性免疫不全症候群の
予防又は治療剤として極めて有用である。

【００８７】本発明の医薬組成物の投与方法は、特に制
限されることなく、各種製剤形態、患者の年齢，性別そ
の他の条件、疾患の程度等に応じて適宜選択決定され
る。具体的には、経口投与、静脈投与，皮下・皮内投
与，筋肉内投与，関節内投与，直腸投与，経粘膜投与等
の非経口投与などを挙げることができるが、好ましくは
経口投与、筋肉内投与，皮下投与であり、より好ましく
は筋肉内投与である。

【００８８】各単位投与形態中で配合される本発明の化
合物またはその薬学的に許容される塩の量は、患者の症
状や剤形等によって種々選択され、一律に規定すること
ができないが、一般に経口投与剤では約１ｍｇ〜１０
ｇ、注射剤では０．５ｍｇ〜５ｇ、坐剤では０．５ｍｇ
〜５ｇの範囲から適宜選択使用されるのが好ましい。

【００８９】また、上記投与形態を有する薬剤の１日あ
たりの投与量は、疾病の種類、患者の症状・重篤度，体
重，年齢，性別，薬物に対する認容度やその他の条件等
に応じて、約１ｍｇ／body〜１０ｇ／bodyの範囲から適
宜選択して用いられ、これを１日に１回乃至は数回に分
けて投与することができる。

【００９０】

【実施例】以下に、参考例及び実施例を挙げて本発明を
さらに説明する。ただし、本発明はこれら実施例に限定
されるものでない。

【００９１】参考例１ ５”−（１，２−ジパルミトイ
ル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ）−３”−アジド−
３’−デオキシチミジン・ナトリウム塩 アジドチミジン（ＡＺＴ）（和光純薬工業製）２００ｍ
ｇ（0.75mmol)を１００ｍＭ塩化カルシウムを含有する
１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５.７）に溶解し、ホスフ
ォリパーゼＤ（TypeVII）（Sigma製）２５０ユニット及
びクロロホルムに溶解した１，２−ジパルミトイル−ｓ
ｎ−グリセロ−３−ホスフォコリン（ＤＰＰＣ）１８３
ｍｇ（0.25mmol)を加え、４５℃で撹拌しながら６時間
反応させた。反応後、反応液を放冷し、クロロホルム２
０ｍｌ，メタノール２０ｍｌ、水５ｍｌ加えて分液し、
下層をメタノール−水（１：１）１０ｍｌで３回洗浄し
た後、溶媒を留去した。残渣をクロロホルム−メタノー
ル（９：１）少量に溶解してシリカゲルに吸着させ、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。まず溶離
液として、クロロホルム−メタノール（９：１）を用い
て未反応のＡＺＴを溶出回収し、次いでクロロホルム−
メタノール（４：１）を用いてリン脂質化されたＡＺＴ
（lipoidＡＺＴ）を溶出回収した。

【００９２】更に、得られたlipoidＡＺＴをクロロホル
ム−メタノール−水（１０：５：１）に溶解し、ダイア
イオンＷＫ−２０樹脂カラム（Ｎａ⁺ 型）にかけて、同
溶媒で溶出して標記の５”−（１，２−ジパルミトイル
−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ）−３”−アジド−
３’−デオキシチミジンのナトリウム塩９２ｍｇ（収率
４０％）を得た。

【００９３】以下、本明細書において、５”−（１，２
−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ）−
３”−アジド−３’−デオキシチミジンのナトリウム塩
を「lipoidＡＺＴ_DPPC」と称する。

【００９４】 （a）元素分析（Ｃ₄₅Ｈ₇₉Ｎ₅ＮａＯ₁₁Ｐ）：９２０．１ 理論値 Ｃ：５８.７ Ｈ：８.７ Ｎ：７.６ 測定値 Ｃ：５７.５ Ｈ：８.６ Ｎ：６.９ （b）ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）： フリー体（ＭＷ＝８９８）→ ｍ／ｚ９２１（ＭＮａ⁺） Ｎａ塩 （ＭＷ＝９２１）→ ｍ／ｚ９４３（ＭＮａ₂ ⁺） （c）ＵＶスペクトル：λmax（ＣＨＣｌ₃）２６７ｎｍ：AZT（-C=C-）由来 （d）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃）： 7.6（H-C(6)）、6.1（H-C(1')）、5.1（CH ₂CHCH₂）、 4.4-3.8（H-C(3'),H-C(4')）,H-C(5')）、1.8（Me-C(5)）、 1.3（2Me(CH ₂ )₁₂CH₂CH₂CO）、0.9（2Me(CH₂)₁₄CO） （e）ＩＲスペクトル：νmax（ＫＢｒ）２１１０ｃｍ^ー1：AZT（-Ｎ₃）由来 （f）ＴＬＣ−Ｒｆ値（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ＝６５／２５／３）：0.47 （g）ＨＰＬＣ保持時間（Ｒｔ）：８.４分 （条件；カラム：COSMOSIL（ナカライテスク、type:waters, 4.6×150mm） 移動相：15ｍＭ KH₂PO₄(pH6.5)/MeOH=5/95 流速：１ml/min 検出波長：267nm 温度：３０℃ 参考例２ ５”−（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−
グリセロ−３−ホスフォ）−３”−アジド−３’−デオ
キシチミジン アジドチミジン（ＡＺＴ）（和光純薬工業製）２００ｍ
ｇ（0.75mmol)を１００ｍＭ塩化カルシウムを含有する
１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５.７）に溶解し、ホスフ
ォリパーゼＤ（TypeVII）（Sigma製）２５０ユニット及
びクロロホルムに溶解した１，２−ジミリストイル−ｓ
ｎ−グリセロ−３−ホスフォコリン（ＤＭＰＣ）１７４
ｍｇ（0.25mmol)を加え、４５℃で撹拌しながら６時間
反応させた。反応後、反応液を放冷し、クロロホルム２
０ｍｌ，メタノール２０ｍｌ、水５ｍｌ加えて分液し、
下層をメタノール−水（１：１）１０ｍｌで３回洗浄し
た後、溶媒を留去した。残渣をクロロホルム−メタノー
ル（９：１）少量に溶解してシリカゲルに吸着させ、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。まず溶離
液として、クロロホルム−メタノール（９：１）を用い
て未反応のＡＺＴを溶出回収し、次いでクロロホルム−
メタノール（４：１）を用いてlipoidＡＺＴを溶出回収
した。

【００９５】更に、得られたlipoidＡＺＴをクロロホル
ム−メタノール−水（１０：５：１）に溶解し、ダイア
イオンＷＫ−２０樹脂カラム（Ｎａ⁺ 型）にかけて、同
溶媒で溶出して標記の５”−（１，２−ジミリストイル
−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ）−３”−アジド−
３’−デオキシチミジンのナトリウム塩８２ｍｇ（収率
３８％）を得た。本明細書において、当該５”−（１，
２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォ）
−３”−アジド−３’−デオキシチミジンのナトリウム
塩を「lipoidＡＺＴ_DMPC」と称する。

【００９６】 （a）元素分析（Ｃ₄₁Ｈ₇₁Ｎ₅ＮａＯ₁₁Ｐ）：８６４.０ 理論値 Ｃ：５７.０ Ｈ：８.３ Ｎ：８.１ 測定値 Ｃ：５６.５ Ｈ：８.５ Ｎ：７.４ （b）ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）： フリー体（ＭＷ＝８４２）→ ｍ／ｚ８６４（ＭＮａ⁺） （c）ＵＶスペクトル：λmax（ＣＨＣｌ₃）２６７ｎｍ：AZT（-C=C-）由来 （d）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃）： 7.7（H-C(6)）、6.1（H-C(1')）、5.0（CH ₂CHCH₂）、 4.5-3.7（H-C(3'),H-C(4')）,H-C(5')）、1.9（Me-C(5)）、 1.2（2Me(CH ₂ )₁₀CH₂CH₂CO）、0.8（2Me(CH₂)₁₂CO） （e）ＩＲスペクトル：νmax（ＫＢｒ）２１１０ｃｍ^ー1：AZT（-Ｎ₃）由来 （f）ＴＬＣ−Ｒｆ値（ＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏ＝６５／２５／３）：0.47 （g）ＨＰＬＣ保持時間（Ｒｔ）：４.８分 （条件；カラム：COSMOSIL（ナカライテスク、type:waters, 4.6×150mm ） 移動相：15ｍＭ KH₂PO₄(pH6.5)/MeOH=5/95 流速：１ml/min 検出波長：267nm 温度：３０℃ 実施例１ lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソーム（１）の調
製 （１）ＤＰＰＣ又はＤＭＰＣ１０μｍｏｌ（１０ｍ
Ｍ），コレステロール５μｍｏｌ、実施例１で調製した
lipoidＡＺＴ_DPPC２.５μｍｏｌ（２.５ｍＭ）（リン脂
質：コレステロール：lipoidＡＺＴ＝４：２：１）をナ
スフラスコに量りとり、有機溶媒（クロロホルム／メタ
ノール）を加えて、エバポレーターを用いて溶媒を留去
して薄膜を形成後、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を加え
てボルテックスミキサーで脂質を水和させ、Multilamel
lar Vesicle（ＭＬＶ）を形成した。次いで、該ＭＬＶ
をプローブ型ソニケーターで１０分間超音波処理して、
Small Unilamellar Vesicle（ＳＵＶ）リポソームを形
成させた 。これを０．４５μｍメンブランフィルター
で濾過して、３７℃で１５分間インキュベーションし
た。

【００９７】（２）ゲルカラム溶出曲線による含有の確
認 lipoidＡＺＴ_DPPC（分子量：ＭＷ８９８）がリポソーム
に含有されているかを確認するために、lipoidＡＺＴ
_DPPC含有リポソーム調製後の溶液を分画分子量が1,000
〜5,000であるゲルカラム（Sephadex G-50）にかけて溶
出性を調べた。なお、比較サンプルとして、同様の調製
法でlipoidＡＺＴの代わりにＡＺＴを用いてリポソーム
化した溶液をゲルカラムにかけた。lipoidＡＺＴ_DPPC及
びＡＺＴの検出はＨＰＬＣで行い、リン脂質（リポソー
ム）の検出はリン脂質のコリン基を基にした定量法（コ
リンオキシダーゼ・ＤＡＯＳ法）を用いて行った。

【００９８】その結果、lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソー
ムの流出曲線は、リン脂質（リポソーム）の流出曲線と
重なり、かつこの溶出量は該カラムのボイドボリューム
に一致することから、lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソーム
にはlipoidＡＺＴ_DPPCが取り込まれていることが示され
た（図１Ａ）。

【００９９】（３）リポソームへの保持封入率の測定 lipoidＡＺＴ_DPPCのリポソームへの封入率を遠心式濾過
ユニットウルトラフリーＣＬ（MILLPORE)を用いて測定
した。溶液を遠心限外濾過後、濾液の薬物濃度と原液の
薬物濃度を求めることにより、リポソームへの封入率を
算出した。比較対照試験として、lipoid修飾していない
ＡＺＴを（１）の方法を用いてリポソームに封入して、
その封入率を同様に遠心式濾過ユニットウルトラフリー
ＣＬ（MILLPORE)を用いて測定した。

【０１００】その結果、lipoid修飾されたlipoidＡＺＴ
_DPPCはリポソームに１００％保持されることが分かり、
この結果は（２）で示したゲルカラム溶出曲線の結果を
支持するものであった（図１Ａ参照）。

【０１０１】一方、lipoid修飾されていないＡＺＴを用
いた場合は、図１Ｂに示すように、高分子量の分画に全
くＡＺＴ薬物が存在せず、ＡＺＴの溶出位置はフェノー
ルレッドやカルボキシフルオレセイン等の水溶性低分子
の色素の溶出位置とほぼ一致した。このことからＡＺＴ
はリポソームに殆ど保持封入できず、外水層に存在して
いることが分かった。なお、ＡＺＴのリポソーム保持封
入率は０．０６％であった（図１Ｂ参照）。

【０１０２】このことから、ＡＺＴ等の抗ＨＩＶ活性を
有するヌクレオシド誘導体をlipoid修飾することによ
り、脂溶性が向上し、リン脂質に対する相溶性が非常に
高まることによって、リポソームの脂質二重層間にほぼ
１００％封入保持することができることが判明した。一
方、水溶性の高いＡＺＴ等のヌクレオシド誘導体は、安
定にリポソームに保持させることは難しいために保持封
入率は極めて低く、更にＡＺＴをリポソーム体に調製し
ても筋肉内投与後、リポソームがリンパ系に移行する前
に薬物が漏出してしまう可能性が示唆された。

【０１０３】（４）lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソームの
粒径分布 動的光散乱法によってlipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソーム
の粒径分布を測定した。具体的には上記（１）で調製し
たlipoidＡＺＴ含有リポソーム（ＤＰＰＣ/コレステロ
ール/lipoidＡＺＴ＝４／２／１；又はＤＭＰＣ/コレス
テロール/lipoidＡＺＴ＝４／２／１）を測定サンプル
として、該リポソーム粒子を含有する溶液にレーザーを
照射した。各粒子からの散乱光は入射光の中心振動数に
対してシフトを示し、線幅が広がるが、この信号を計測
して求められる散乱強度分布を重量分布換算係数によっ
て補正して、重量分布図を作成した。また、個数分布図
を、各分布における重量を粒子１個当たりの重量とその
分布中の総個数の積と考え、重量分布値をその粒子経の
３乗で除することによって作成した。結果を図２に示
す。また係る図から求めた重量分布の平均及び個数分布
の平均を表６に示す。

【０１０４】

【表６】

【０１０５】実施例２ lipoidＡＺＴ_DPPC含有アニオン
性リポソーム 実施例１（１）に記載する方法に従って、ＤＭＰＣ／ホ
スファチジルセリン／コレステロール＝５／１／４のモ
ル比で構成されたアニオン性リポソーム（Antiviral Ch
emistry&Chemotherapy, 2(3), 143-148, 1991）に、実
施例１で調製したlipoidＡＺＴ_DPPCを含有して、lipoid
ＡＺＴ_DPPC含有リポソームを作成した（粒径：約５０ｎ
ｍ）。更に実施例１（２）と同様にして、該リポソーム
にlipoidＡＺＴ_DPPCが含有されていることを確認した。

【０１０６】実施例３ lipoidＡＺＴ_DMPC含有エマルジ
ョン 参考例２で調製したlipoidＡＺＴ_DMPC５ｍｇをトリオレ
インまたはゴマ油５０〜２００μｌに溶解混合した。こ
れに生理食塩水またはリン酸緩衝液（ｐＨ７.４）を１
〜２ｍｌ加えて混合撹拌し、次いでソニケーターで１〜
２分間超音波照射し、均一分散したエマルションを調製
した。終わりに、これをアミコン社のフレンチプレッシ
ャーセルプレスに５回通過させて、平均粒子径０．２〜
０．４μｍのlipoidＡＺＴ_DMPC含有エマルジョンを得
た。

【０１０７】

【実験例】実験例１ lipoidＡＺＴ_DPPCの脂溶性評価 参考例１で調製したlipoidＡＺＴ_DDPCについて、その脂
溶性をＡＺＴと比較した。脂溶性の評価には、有機溶媒
と水系緩衝液間の分配係数（logPc）、及び逆相ＨＰＬ
Ｃの保持時間から求めるLipophilic Index(logK'₀)（T.
Yamana, A.Tsuji, E.Miyamoto and O.Kubo, J.Pharm.Sc
i.,66, 747 (1977)）を採用した。

【０１０８】なお、分配係数（logPc）は、溶媒とし
て、(i)ｎ−オクタノール／ＰＢＳ（ｐＨ７.４）及び(i
i)クロロホルム／ＰＢＳ（ｐＨ７.４）の２種類を使用
して求め、Lipophilic Index(logK'₀)は下記のＨＰＬＣ
移動相を用いて求めた。

【０１０９】 lipoidＡＺＴ_DDPC ：15mM KH₂PO₄(pH6.5)/CH₃OH=5/95 ＡＺＴ ：50mM CH₃COONH₄(pH5.5)/CH₃CN=85/15

【０１１０】

【表７】

【０１１１】結果を表７に示す。lipoidＡＺＴのlogPc
及びlogK'₀は、ＡＺＴに比べて顕著に増加し、リン脂質
修飾により脂溶性が増大していることが分かる。

【０１１２】実験例２ lipoidＡＺＴ_DPPCの消化管内で
の安定性 脂質類似型化合物の消化管内での安定性を調べるため
に、被験化合物として参考例１で調製したlipoidＡＺＴ
_DPPCを用いて、ラット十二指腸，空腸，回腸のホモジネ
ート溶液及び血漿中でのその分解半減期を求めた。

【０１１３】＜実験方法＞ １．ラット消化管ホモジネートの調製方法 (1) ラット（Wister雄性、２５０ｇ）の消化管内を洗浄
後、胃の幽門下１０ｃｍを十二指腸、盲腸から上１５ｃ
ｍを回腸、それ以外を空腸として分離切断し、氷冷下粘
膜を剥いだ。

【０１１４】(2) 粘膜の３倍容のＰＢＳ（ｐＨ７.４、P
hosphate buffer solution）を加え、氷冷下でホモジナ
イズした後、４℃下で３０００Ｇ×１０分間遠心分離
し、各上澄を消化管（十二指腸，空腸，回腸）ホモジネ
ート溶液とした。

【０１１５】(3) ホモジネート溶液をLowry法を用いて
蛋白定量し、その結果をもとにして、ホモジネート液に
ＰＢＳを加えて希釈し、蛋白濃度を２ｍｇ／ｍｌに調製
した。

【０１１６】２．安定性試験 （被験化合物の最終濃度：0.1mM；ホモシ゛ネート溶液の蛋白
量：１mg蛋白質/ml） (1) 被験化合物（０.２ｍＭ）、ホモジネート溶液（２
ｍｇ／ｍｌ）を３７℃で１５分間インキュベーションし
た。

【０１１７】(2) 双方の溶液を等量混合し、以後１５分
間隔で経時的にサンプリングし、サンプル１００μｌに
直ちに冷メタノール３００μｌを加え、10,000rpm×５
分間の遠心分離後、被験化合物の濃度をＨＰＬＣで測定
した。

【０１１８】(3) 同様にして、ラットの血漿を用いて、
血漿中のlipoid−ヌクレオシド誘導体の分解半減期を求
めた。

【０１１９】なお、ＨＰＬＣは実験例１と同じ条件を使
用した。

【０１２０】＜結果＞lipoidＡＺＴ_DPPCの各消化管のホ
モジネート溶液中での安定性及び血漿中での安定性を図
３に示す。薬物の残存率（％）の対数を時間に対してプ
ロットして得られる値の直線の傾きから、分解半減期
(Ｔ_1/2)を求めた（表８）。表８から分かるように、lip
oidＡＺＴ_DPPCの分解半減期は消化管内では数時間であ
り、消化管内で比較的安定性が高いことがわかった。

【０１２１】

【表８】

【０１２２】実験例３ lipoidＡＺＴ_DPPCのホスフォリ
パーゼ分解による活性本体ＡＺＴの生成 ＜実験方法＞ １．被験薬液及び酵素の調製 (1) 被験物として、参考例１で調製したlipoidＡＺＴ
_DPPCを用いて、Tris-HCl緩衝液９ｍｌ中に、lipoidＡＺ
Ｔ_DPPC４.６ｍｇ（５μmol），ＣａＣｌ₂５.９ｍｇ（２
０μmol）及びTritonX-100 ２５ｍｇを溶解して被験薬
液を調製した。

【０１２３】(2) ホスフォリパーゼＤ（ＰＬＤ：TypeVI
（Stereptomyces Chromofuscus由来））を用いて、Tris
-HCl緩衝液５ｍｌに、ＰＬＤ２５００ユニット及びＢＳ
Ａ２.５ｍｇを溶解して酵素溶液（ＰＬＤ溶液）を調製
した。

【０１２４】２．酵素分解反応 (1) 予め、被験薬液及びＰＬＤ溶液の双方を別個に３７
℃で１０分間インキュベーションした後、ＰＬＤ溶液0.
５ｍｌを被験薬液４.５ｍｌに加えて直ちにボルテック
スした。

【０１２５】(2) 反応開始直後、５，１５，３０，４
５，６０分の時点で反応液を５０μｌサンプリングし、
メタノール０.６ｍｌを添加して反応を停止させ、遠心
分離後（10,000rpm×５分間）、lipoidＡＺＴの残量及
びＡＺＴの生成量をＨＰＬＣで定量した。なお、ＨＰＬ
Ｃ条件は実験例１と同じである。

【０１２６】＜結果＞結果を図４に示す。図から明らか
なように、lipoidＡＺＴは、ホスフォリパーゼＤの作用
により速やかに活性本体であるＡＺＴに解離し、本発明
のlipoid−ヌクレオシド誘導体がプロドラッグとしての
特性を有するものであることが確認された。

【０１２７】参考実験例１ ＡＺＴのラット大腿伸筋内
投与（筋注）時のバイオアベイラビリティーの測定 ＜実験方法＞掛見等の方法（K.Kakemi, H.Sezaki, K.Ok
umura and S.Ashida, Chem.Pharm.Bull., 1332 (196
9)）に従って、絶食Wistar雄性ラット（２５０ｇ）をネ
ンブタールで麻酔し、ラット一匹あたりＡＺＴ２ｍｇ／
０.４ｍｌＰＢＳの投与量で左右の大腿伸筋に０.２ｍｌ
ずつ、計０.４ｍｌ投与した。投与後、１，３，５，３
０，６０，９０，１２０分後に頚静脈から採血して血漿
中のＡＺＴ薬物濃度を測定し、血中薬物濃度下面積ＡＵ
Ｃ筋注（μg/ml・min）を求めた。バイオアベイラビリテ
ィーを求めるために、ＡＺＴの同量を静脈から投与し
て、同様にして経時的に血漿中のＡＺＴ濃度を測定し、
ＡＵＣ静注（μg/ml・min）を求めた。

【０１２８】＜結果＞結果を表９に示す。

【０１２９】

【表９】

【０１３０】台形法に基づいて、バイオアベイラビリテ
ィーを下式に従って求めた： Bioavailability＝（AUC筋注/Dose筋注）÷（AUC静注/Dose静注）×１００ ＝（393.3/2000）÷（387.5/2000）×１００ ＝ 100.7％ ＡＺＴを筋注投与すると、Ｔmaxは１〜３分であり、バ
イオアベイラビリティーは約１００％であった。このこ
とから、ＡＺＴは筋肉内投与が有効な投与形態であるこ
とが示唆された。

【０１３１】参考実験例２ ＡＺＴのラット経口投与及
び筋注投与による腸骨リンパ節内への移行性 ＜実験方法＞ １．絶食Wistar雄性ラット（２２０〜２５０ｇ）を用い
て、エーテル麻酔下で実験を行った。筋注投与は、大腿
部を切開後、左右の大腿伸筋にＡＺＴを８ｍｇ／ｋｇ
（ラット一匹あたり約２ｍｇ）の投与量で投与した。経
口投与は、経口ゾンデを用いて同量投与した。ラット
は、麻酔覚醒後一定時間ゲージで飼育した。

【０１３２】２．投与後５，３０，６０分の時点で下大
動脈から脱血致死させ、左右の腸骨リンパ節を摘出し
た。

【０１３３】３．ＰＢＳ ０.５ｍｌを加えて、リンパ節
を氷冷下でホモジナイズした。

【０１３４】４．ホモジナイズ液０.１ｍｌにメタノー
ル１ｍｌ加えて、ＡＺＴを抽出し、遠心分離して上澄の
ＡＺＴ量をＨＰＬＣで測定した。

【０１３５】＜結果＞結果を図５に示す。図からわかる
ように、筋肉内投与は経口投与に比べてリンパ節移行性
が高く、リンパ節内薬物濃度の増大が認められた。筋注
投与は、参考実験例１で示すようにバイオアベイラビリ
ティーが１００％と高く、薬物の設計によっては直接リ
ンパ系に流入させることが可能となることから、有効な
投与形態として位置づけられる。

【０１３６】実験例４ lipoidＡＺＴ_DPPC、lipoidＡＺ
Ｔ_DPPC含有リポソームを筋注した場合のリンパ移行性
（筋注時の腸骨リンパ節内薬物濃度） ＜実験方法＞ １．被験物： ・lipoidＡＺＴ_DPPC（参考例１）、 ・lipoidＡＺＴ_DPPC含有ＤＰＰＣリポソーム（DPPC/コレス
テロール/lipoidAZT_DPPC＝4/2/1：実施例１）、 ・lipoidＡＺＴ_DPPC含有ＤＭＰＣリポソーム（DMPC/コレス
テロール/lipoidAZT_DPPC＝4/2/1：実施例１） ・ＡＺＴ（対照被験物） ２．方法 (1) 絶食Wistar雄性ラット（２２０〜２５０ｇ）をエー
テルで麻酔し、大腿部皮膚を切開後左右の大腿伸筋に下
記の投与量で薬液を注入し、麻酔覚醒後ゲージで飼育し
た。

【０１３７】 投与量：lipoidＡＺＴ_DPPC 3.7mg/kg（約1μmol／ラット） lipoidＡＺＴ_DPPC含有DPPCリポソーム 3.7mg/kg（約1μmol／ラット） lipoidＡＺＴ_DPPC含有DMPCリポソーム 3.7mg/kg（約1μmol／ラット） ＡＺＴ 8.0mg/kg（約2.0mg／ラット） (2) ５，３０，６０分後に下大動脈から脱血致死させ、
左右の腸骨リンパ節を摘出して重量を測定した。

【０１３８】(3) ＰＢＳ ０.５ｍｌを加えて、リンパ節
を氷冷下、ホモジナイズした。

【０１３９】(4) サンプル２００μｌにメタノール１ｍ
ｌを加えて遠心分離（3,000×１０分間）し、上澄に存
在する薬物及びその量をＨＰＬＣで確認した。

【０１４０】＜結果＞ １．lipoidＡＺＴ_DPPC及びlipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソ
ームのいずれを筋注した場合も、腸骨リンパ節ホモジネ
ート中にlipoidＡＺＴ_DPPCが検出された。このことは、
lipoidＡＺＴ_DPPC及びlipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソーム
は、筋注することによりlipoidＡＺＴの態様で、リンパ
系に移行することを示す。

【０１４１】２．筋注後の腸骨リンパ節内における各被
験物の経時的濃度変化を図６に示す。

【０１４２】(1) lipoidＡＺＴ_DPPCを単独で筋注した場
合は、ＡＺＴを筋注した場合よりも腸骨リンパ節内にお
ける各被験物の濃度が持続する傾向を示したが、リンパ
節に移行する量は、脂溶性にもかかわらず、水溶性ＡＺ
Ｔの投与の場合と殆ど変わらなかった。

【０１４３】(2) lipoidＡＺＴ_DPPC含有DPPCリポソーム
及びlipoidＡＺＴ_DPPC含有DMPCリポソームの結果から明
らかなように、lipoidＡＺＴ_DPPCをリポソームに保持さ
せることによって、腸骨リンパ節内のlipoidＡＺＴ_DPPC
濃度は著しく上昇し、かつ長時間にわたって持続する傾
向が顕著に見られた。

【０１４４】以上の結果は、水溶性薬物の脂溶性を向上
させる目的でリン脂質官能基を導入しても必ずしも膜透
過性は向上しないことを示す。特に本発明におけるＡＺ
Ｔ等のヌクレオシド誘導体はその傾向が顕著であり、例
えばＡＺＴにリン脂質基を付与した脂質類似型ＡＺＴ
は、薬物の脂溶性はＡＺＴに比して顕著に向上するもの
の、膜透過性は予想に反してＡＺＴに比して減少するこ
とが確認された。

【０１４５】更に、上記結果から膜透過性を向上させる
手段として脂質類似型ＡＺＴをリポソーム化する方法を
採用することにより、筋肉内投与によるリンパ移行性が
顕著に向上するとともに、ターゲッティング細胞への細
胞親和性を高めることができることが確認できた。

【０１４６】なお、実施例３で調製したエマルジョンを
同様にラット大腿伸筋に投与したところ、上記のリポソ
ーム体と同様な傾向を示した。

【０１４７】これらのことから、本発明の脂質類似型ヌ
クレオシド誘導体を含有するリポソーム体及びエマルジ
ョン体は、リンパ系に選択的に移行するリンパターゲッ
ティング剤（リンパ節移行型製剤）として極めて有効で
あることが分かる。

【０１４８】実験例５ lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソー
ム筋注時の腸骨リンパ節−血漿中のlipoidＡＺＴ_DPPC濃
度、及びリンパ節中での活性本体ＡＺＴの生成 実験例４において最もリンパ移行性が高かったlipoidＡ
ＺＴ_DPPC含有ＤＭＰＣリポソームを用いて、投与後１２
０分まで経時的に腸骨リンパ節及び血漿中のlipoidＡＺ
Ｔ濃度を測定し、ＡＺＴを投与した場合と比較した。さ
らに、lipoidＡＺＴ_DPPCから生成するＡＺＴの量を測定
した。

【０１４９】＜実験方法＞絶食Wistar雄性ラット（２２
０〜２５０ｇ）をエーテルで麻酔し、大腿部皮膚を切開
後左右の大腿伸筋に下記の投与量で薬液を注入し、５，
１５，３０，６０，１２０分の時点で、左右の腸骨リン
パ節を採取するとともに、頚静脈より採血して、リンパ
節中及び血漿中の薬物濃度をＨＰＬＣを用いて測定し
た。

【０１５０】 投与量：lipoidＡＺＴ_DPPC含有DMPCリポソーム 3.7mg/kg（約1μmol／ラット ） ＡＺＴ 8.0mg/kg（約2mg／ラット） ＜結果＞結果を図７に示す。

【０１５１】(1)lipoidＡＺＴ_DPPC含有ＤＭＰＣリポソ
ームを投与した場合は（図中、●で示す。）、血中には
ほとんどlipoidＡＺＴ_DPPCは出現しないのに対して、腸
骨リンパ節内への出現濃度は顕著に高くかつ長時間維持
されていた。また、該lipoidＡＺＴ_DPPCから生成するＡ
ＺＴ量を測定したところ、lipoidＡＺＴ_DPPCの濃度に比
例して標準品のＡＺＴの保持時間（Rt)と一致するピー
クが出現した。

【０１５２】(2)ＡＺＴ溶液投与の場合は（図中、△で
示す。）、血漿中のＡＺＴ濃度は高いものの、腸骨リン
パ節中のＡＺＴ濃度は低く、投与後速やかに減少した。

【０１５３】なお、実施例３で調製したエマルジョンを
同様にラット大腿伸筋に投与して、リンパ節及び血漿中
の薬物濃度を経時的に測定したところ、上記のリポソー
ム体と同様な傾向を示した。

【０１５４】このことから、本発明の脂質類似型化合物
含有リポソーム体及びエマルジョン体は、脂質複合体と
してリンパ節に選択特異的に移行し、且つその移行部で
抗ＨＩＶ活性を有するＡＺＴに変換することが確認でき
た。

【０１５５】このことは、本発明の脂質類似型化合物含
有リポソーム体及びエマルジョン体は、高い生物学的利
用率を有するリンパターゲッティング剤（リンパ節移行
型製剤）であること、及び活性本体である逆転酵素酵素
阻害剤が循環血流に流出することにより生じる骨髄抑制
等の副作用を回避できる、副作用の軽減された有用な抗
ＨＩＶ剤となり得ることを示唆するものである。

【０１５６】実験例６ ＨＩＶ増殖阻害活性の測定 成人末梢リンパ球細胞（ＰＢＭＣ）及びヒト細胞由来樹
立細胞（ＭＴ４）を宿主細胞としてＨＩＶの増殖が、本
発明の脂質集合体によって阻害されるかどうかを調べ
た。

【０１５７】 ＜実験方法＞ １．使用ウイルス株／細胞：ＪＭＨ−１（primary isolate)／ＰＢＭＣ ＪＭＨ−１（primary isolate)／ＭＴ４ ２．被験物 (イ)lipoidＡＺＴ_DPPC含有ＤＭＰＣリポソーム（DMPC/コレ
ステロール/lipoidAZT_DPPC＝４/２/１：実施例１） (ロ)lipoidＡＺＴ_DMPC含有ＤＭＰＣリポソーム（DMPC/コレ
ステロール/lipoidAZT_DMPC＝４/２/１：実施例１） (ハ)lipoidＡＺＴ_DPPC（参考例１） (ニ)ＡＺＴ（対照被験物） ３．方法 （ａ）ＪＭＨ−１（primary isolate)／ＰＢＭＣの場合 健常ヒト血液からＰＢＭＣを密度勾配遠心法（フィコー
ル溶液）にて分離した。具体的には、ヒト血液（３０〜
４０ｍｌ）に１５０ｍｌ ＰＢＳ（又はＲＰＭＩ１６４
０（−ＦＢＳ））を加えて希釈し、遠心管１チューブあ
たり１５ｍｌ容量フィコールを分注したものに希釈血液
を静かに重層した。これを１８００ｒｐｍ、２５分間遠
心し、中間に位置するリンパ球画分（白濁層）を回収し
た。回収液を５０ｍｌ×４本に分け、それぞれ３０ｍｌ
のＰＢＳ（又はＲＰＭＩ１６４０（−ＦＢＳ））を添加
した後、１５００ｒｐｍで、５分間遠心した。上清を除
去後、新たにＰＢＳ（又はＲＰＭＩ１６４０（−ＦＢ
Ｓ））３０ｍｌを加えた。この洗浄操作を３回繰り返し
た後、ＰＢＭＣ用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢ
Ｓ＋６μg/ml ＰＨＡ-Ｐ(phytohemaggulutinin-P)）を
加えて、細胞数を１×１０⁶細胞／ｍｌに調製し、７２
時間培養した。細胞を遠心して回収後新鮮な培地で一回
洗浄し、得られた細胞を新しいＰＢＭＣ用培地（１０ｍ
ｌ）に懸濁して、その結果からＰＢＭＣが４×１０⁶細
胞／ｍｌとなるように希釈した。

【０１５８】次に、この細胞懸濁液を５０μｌ／ウエル
ずつ９６ウエルマイクロプレートに分注し、直ちに被験
物及びＨＩＶ（ＪＭＨ-１：１０⁴ＴＣＩＤ₅₀／ｍｌ）溶
液をそれぞれ５０μｌ／ウエル添加した。これを更に３
７℃、５％ＣＯ₂下で３日間培養を行い、培養上清を回
収してＴＣＩＤ₅₀値（50％ tissue culture infections
dose）を指標として試料のウイルス増殖抑制効果を判
定した。

【０１５９】（ｂ）ＪＭＨ−１（primary isolate)／Ｍ
Ｔ４の場合 対数増殖期のＭＴ４細胞をＭＴ４用培地(RPMI-1640＋10
％FBS)を用いて４×１０⁵細胞／ｍｌに調製して、
（ａ）記載の方法に準じて行った。

【０１６０】ＴＣＩＤ₅₀（５０％感染価）の測定は以下
のようにして行った。ＭＴ４用培地を用いて測定試料を
１０^-1〜１０^-6に段階希釈し、９６ウエルマイクロプレ
ートに１ウエルあたり２０μｌずつ３ウエルに分注し
た。次にＭＴ４細胞を２×１０⁵細胞／ｍｌに調製し、
予め希釈液を加えておいたウエルに１００μｌ／ウエル
ずつ分注した。これを３７℃、５％ＣＯ₂下で４〜５日
間培養し、ウイルス細胞変性効果（ＣＰＥ）の有無を顕
微鏡下で調べた。ＣＰＥが認められないウエルを全量５
００μｌ／ウエルずつ培地を分注した４８ウエルプレー
トに継代してから、さらに３７℃、５％ＣＯ₂下で４〜
５日間培養した。ウイルスのＴＣＩＤ₅₀値は、ＣＰＥの
有無を確認後、Read-Muench法により求めた。具体的に
は、ＣＰＥ陽性になったウエル数を希釈率の高い方か
ら、ＣＰＥ陰性となったウエル数を希釈率の低い方から
累積加算し、５０％感染価を比較配分により算出した。
なお、ＴＣＩＤ₅₀値は、算出した５０％感染価（希釈
率）の逆数となり、これは測定試料中に存在する感染力
をもつウイルス量を示している。

【０１６１】＜結果＞ＪＭＨ−１／ＰＢＭＣ細胞に関す
る結果を表１０に、ＪＭＨ−１／ＭＴ４細胞に関する結
果を表１１に示す。表中の「mediumのみ」（コントロー
ル）のＴＣＩＤ₅₀値に比して値が小さくなれば、被験物
にウイルスの増殖阻害活性があることを示す。なお、表
中の阻害率（％）は、式： 阻害率（％）＝ １００−被験物のTCID₅₀値／コントロールの
TCID₅₀値 から算出したものである。阻害率は高いほど阻害活性が
高いことを示す。

【０１６２】

【表１０】

【０１６３】

【表１１】

【０１６４】表から分かるように、プロドラッグであり
本来抗ＨＩＶ活性を有しないlipoidＡＺＴにＨＩＶ増殖
阻害活性が確認された。このことから、細胞内のホスフ
ォリパーゼの作用によって脂質とＡＺＴの結合が解離し
て、ＡＺＴ若しくは５’−リン酸体が形成され、抗ＨＩ
Ｖ活性が発現したものと考えられた。

【０１６５】実験例７ 細胞障害性試験 本発明の脂質集合体を構成する脂溶性微粒子キャリアー
に包含されるlipoidＡＺＴ_DPPCの細胞毒性をＡＺＴの細
胞毒性と比較した。なお、細胞としてヒト細胞由来樹立
細胞（ＭＴ４）を用いた。

【０１６６】＜実験方法＞ １．被験物 (ハ) lipoidＡＺＴ_DPPC （参考例１） (ニ）ＡＺＴ（対照被験物） ２．方法 （１）対照増殖期のＭＴ４を1000rpm×５分間遠心後、
上清を捨てて新しい培地（ＲＰＭＩ-１６４０＋１０％
ＦＢＳ）を１０ｍｌ加え、細胞数を４×１０⁵細胞／ml
に調製した。次にこの細胞懸濁液を５０μｌ／ウエルず
つ９６ウエルマイクロプレートに分注した。この中に被
験物を５０μｌ／ウエル加えて３７℃、５％ＣＯ₂下で
４日間培養を行った後、各ウエル中の生細胞数をＭＴＴ
アッセイによる比色法を用いて定量した。その結果か
ら、細胞を含まないウエルをブランクとし、被験物無添
加の生細胞数を１００として換算して、各被験物におけ
る細胞障害性を検討した。

【０１６７】（２）ＭＴＴアッセイ ＭＴＴ〔3-(4,5-ジメチルチアル-2-イル)-2,5-ジフェニ
ルテトラゾリウムブロマイド〕は、生存細胞と共にイン
キュベーションされると濃青色生成物（Formazan）を形
成し、形成された色の濃さが試験サンプル中に存在する
生存細胞の濃度に比例する。

【０１６８】具体的には、まずＭＴＴ試薬を２０μｌ／
ウエルずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ₂下で４時間培養
した後、更に２０％ＳＤＳ、０．０１Ｎ ＨＣｌを１０
０μｌ／ウエルずつ添加した。次いでプレートを遮光し
て室温で一晩振盪した。翌日、生成したFormazanが完全
に溶解していることを確認して、６２０ｎｍ、６９０ｎ
ｍの２波長で吸光度を測定した。

【０１６９】＜結果＞結果を表１２に示す。被験物を添
加しない系（コントロール）の生存細胞数を１００とし
て比較した。この値より低い場合を細胞障害性ありと判
定した。

【０１７０】

【表１２】

【０１７１】ＡＺＴ単独処理の場合、２５μＭ〜２５０
μＭ濃度で細胞障害性が見られたが、lipoidＡＺＴでは
殆ど障害性は認められず、このことから、リン脂質修飾
化によって細胞障害性が低下するものと考えられた。

【０１７２】実験例６と実験例７の結果から、本発明の
脂質集合体の有効成分であるlipoidＡＺＴは、ＡＺＴに
比して、抗ＨＩＶという薬理作用は若干弱いものの、安
全性は高い（毒性が低い）ことが分かった。

【０１７３】以上の実験例等から、本発明の脂質集合体
及びそれに保持される脂質類似型化合物（Ｉ）の有用性
については、次のように纏めることができる。

【０１７４】１．本発明で用いる脂質類似型化合物
（Ｉ）は、脂溶性が高い上にリン脂質に対する相溶性が
非常に高いため、ほぼ１００％リポソームの脂質二重層
膜間に封入することができる。これに対して、水溶性が
高いＡＺＴ等の抗ＨＩＶ活性を有するヌクレオシド誘導
体は、リポソームへの封入率は極めて低く、また筋肉内
投与後リポソームがリンパ系（特にリンパ節）に移行す
る前に薬物が漏出して安定してリポソーム化することは
困難である。また、エマルジョンでも同様の傾向が認め
られる。

【０１７５】２．脂溶性を高めたプロドラッグとして
は、水酸基やカルボキシル基にアルキル鎖を導入したエ
ステル型の薬物が多いが、これらは生体内に多く存在す
るエステラーゼで容易に切断され、生体内滞留性を向上
させることは難しい。エイズ治療を目的とするリンパタ
ーゲッティングでは、リンパ節内で高濃度の薬物を持続
的に維持させることが重要と考えられる。これに対して
本発明の脂質集合体は、ホスホリパーゼ系の酵素によっ
て活性化を図るものであるため、活性化型の生成が適度
な速度で生じ、薬物の持続性を担保できる。

【０１７６】３．本発明の脂質集合体を筋肉内投与した
場合には、脂質類似型化合物（Ｉ）の滞留性は顕著であ
り、またリポソームまたはエマルジョンがリンパ節で壊
れた際に流出した薬物は、細胞膜から非常に出にくいと
予想される。そのため、上記２で示したように、活性型
の解離速度が遅くても、長時間にわたって十分の薬効を
示す量の活性型化合物がリンパ節内で維持されるものと
考えられる。

【０１７７】４．ＨＩＶに感染した患者は、初期にリン
パ節が腫れる等の症状を示し、ＨＩＶがリンパ節に集ま
ることが知られている。本発明の脂質集合体によれば、
腫れているリンパ節の近傍や狙ったリンパ系の下流に、
選択的に筋肉内投与若しくは皮下投与等の方法で投与す
ることにより、リンパ節に巣くうＨＩＶを集中的に攻撃
することができる。また、かかる方法によれば、薬物が
リンパ液で余り希釈されないでリンパ節に到達するた
め、その効果も大きいと考えられる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ゲル濾過クロマトグラフィーによって、リポソ
ームにlipoidＡＺＴまたはＡＺＴが保持封入されるか否
かを調べた結果を示す図である（実施例１）。図１Ａ
は、lipoidＡＺＴ_DPPC含有リポソームのゲルカラム（Se
phadex G-50)上の流出曲線を示し、図１Ｂは、ＡＺＴを
リポソームに封入処理してゲルカラムにかけた流出曲線
を示す。

【図２】動的光散乱法によってlipoidＡＺＴ_DPPC含有リ
ポソームの粒径分布を測定した結果を示す（実施例１
（４））。

【図３】lipoidＡＺＴ_DPPCの各消化管（十二指腸、回
腸、空腸）のホモジネート溶液中及び血漿中での安定性
を示す図である（実験例２）。

【図４】lipoidＡＺＴ_DPPCをホスフォリパーゼＤで分解
して活性本体ＡＺＴが生成することを確認した図である
（実験例３）。

【図５】ＡＺＴをラットに経口投与及び筋注投与して、
腸骨リンパ節内への移行性を調べた結果を示す図である
（参考実験例２）。

【図６】lipoidＡＺＴ_DPPC、lipoidＡＺＴ_DPPC含有DPPC
リポソーム、lipoidＡＺＴ_DPPC含有DMPCリポソーム及び
ＡＺＴをそれぞれラットに筋注して、腸骨リンパ節内へ
の移行性を調べた結果を示す図である（実験例４）。

【図７】lipoidＡＺＴ_DPPC含有DMPCリポソーム筋注時の
腸骨リンパ節−血漿中のlipoidＡＺＴ_DPPC濃度、及びリ
ンパ節中での活性本体ＡＺＴの生成をみた図である。図
７Ａは腸骨リンパ節内でのlipoidＡＺＴ及びＡＺＴの濃
度の経時的変化を示し、図７Ｂは血漿中のlipoidＡＺＴ
及びＡＺＴの濃度の経時的変化を示す（実験例５）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 曲渕 俊幸 大阪市淀川区西中島４丁目１番１号 日清 食品株式会社内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、Ｒ₁は飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基ま
   たは飽和若しくは不飽和の炭化水素残基を表し、Ｒ₂は
   水素原子，飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基または
   飽和若しくは不飽和の炭化水素残基を表し；Ｘは式(I
   I)： 【化２】 （式中、Ｒ₃は水素原子またはアジド基を表し、Ｒ₄は水
   素原子又は低級アルキル基を表し；Ｙは式(III),(IV),
   (V)又は(VI)： 【化３】 [Ｒ₅はハロゲン，水素原子又は分岐していてもよい低級
   アルキル基を表し；Ｒ₆はハロゲン，水素原子，分岐し
   ているか若しくは置換基を有していてもよい低級アルキ
   ル基を表し；Ｒ₇はアミノ基、ヒドロキシ基又はハロゲ
   ンを表し；Ｒ₈はハロゲン，水素原子又はハロゲンで置
   換されていてもよいアルケニル基を表し；Ｒ₉及びＲ₁₀
   は、それぞれ水素原子，アミノ基，ヒドロキシ基又はハ
   ロゲンを表しＲ₁₁はアミノ基，ヒドロキシ基又はハロゲ
   ンを表す。]のいずれかで示される塩基を表す。）で表
   される基である。〕で示され、少なくともホスフォリパ
   ーゼＤ若しくはホスフォリパーゼＣ下で抗ＨＩＶ活性を
   発現することを特徴とする脂質類似型化合物またはその
   薬学的に許容される塩を、脂溶性微粒子キャリアーに含
   有する脂質集合体。
2. 【請求項２】上記の脂質類似型化合物（Ｉ）において、
   Ｒ₁が炭素数１２〜１８の飽和若しくは不飽和の長鎖脂
   肪酸残基であり、Ｒ₂が水素原子または炭素数１２〜１
   ８の飽和若しくは不飽和の長鎖脂肪酸残基であることを
   特徴とする、請求項１記載の脂質集合体。
3. 【請求項３】前記の脂質類似型化合物(Ｉ)において、Ｘ
   が式（II） 【化４】 （式中、Ｒ₃は水素原子又はアジド基を表し、Ｒ₄は水素
   原子を表し、Ｙは式(III),(IV),(V)又は(VI)： 【化５】 [式中、Ｒ₅は分岐していても良い炭素数１〜５の低級ア
   ルキル基を表し、Ｒ₆は水素原子を表し、Ｒ₇はアミノ基
   を表し、Ｒ_8,Ｒ₉及びＲ₁₀はそれぞれ水素原子を表し、
   Ｒ₁₁はハロゲンを表す。]のいずれかで示される塩基を
   表す。）で表される基であることを特徴とする、請求項
   １または２記載の脂質集合体。
4. 【請求項４】前記の脂質類似型化合物（Ｉ）において、
   Ｒ₁が炭素数１４〜１６の飽和若しくは不飽和の長鎖脂
   肪酸残基であり、Ｒ₂が炭素数１４〜１６の飽和若しく
   は不飽和の長鎖脂肪酸残基または水素原子であり、Ｘ
   が、式(II)： 【化６】 （式中、Ｒ₃はアジド基を表し、Ｒ₄は水素原子を表し、
   Ｙは式(VII)： 【化７】 で示される基を表す。）で表される基である、請求項１
   乃至３のいずれかに記載の脂質集合体。
5. 【請求項５】リポソームまたはエマルジョンの形態を有
   することを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載
   の脂質集合体。
6. 【請求項６】リンパ節移行型製剤である、請求項１乃至
   ５のいずれかに記載の脂質集合体。
7. 【請求項７】抗ＨＩＶ剤である請求項１乃至６のいずれ
   かに記載の脂質集合体。