JPH11153599A - 免疫学的測定方法 - Google Patents
免疫学的測定方法Info
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- JPH11153599A JPH11153599A JP32111097A JP32111097A JPH11153599A JP H11153599 A JPH11153599 A JP H11153599A JP 32111097 A JP32111097 A JP 32111097A JP 32111097 A JP32111097 A JP 32111097A JP H11153599 A JPH11153599 A JP H11153599A
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- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 測定対象の抗原（Ag）又は抗体（Ab1）
とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原（Ag）との反応
により得られる免疫複合体と、当該免疫複合体を形成し
た抗体に対して特異的に反応する抗体（Ab2）との反応
を用いる抗原（Ag）又は抗体（Ab1）の免疫学的測定方
法。 【効果】 これまで不可能であったモノクローナル抗体
を用いた免疫比濁、ラテックス凝集、血球凝集による抗
原測定系の構築を可能にする共に、一種類の抗体を用い
たEIA法、RIA法による抗原測定系の構築、更に、微量抗
体のラテックス凝集、血球凝集による測定系の構築を可
能にすることができる。
とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原（Ag）との反応
により得られる免疫複合体と、当該免疫複合体を形成し
た抗体に対して特異的に反応する抗体（Ab2）との反応
を用いる抗原（Ag）又は抗体（Ab1）の免疫学的測定方
法。 【効果】 これまで不可能であったモノクローナル抗体
を用いた免疫比濁、ラテックス凝集、血球凝集による抗
原測定系の構築を可能にする共に、一種類の抗体を用い
たEIA法、RIA法による抗原測定系の構築、更に、微量抗
体のラテックス凝集、血球凝集による測定系の構築を可
能にすることができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗原（Ag）と免疫
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）を利用した免疫学的測定方法に関するものであ
る。
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）を利用した免疫学的測定方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、抗原又は特異抗体の測定は、免疫
学的測定法により行われている。
学的測定法により行われている。
【０００３】すなわち、抗原の測定法としては、放射性
物質や酵素を標識した抗体を用いて、抗原抗体反応後の
放射性活性や酵素活性から抗原を測定するラジオイムノ
アッセイ法（RIA法）及びエンザイムイムノアッセイ法
（EIA法）、抗原と抗体との反応で生ずる濁りの吸光度
変化から抗原量を測定する免疫比濁法、抗原と抗体感作
ラテックス粒子もしくは抗体感作赤血球との反応によっ
て起きる凝集反応の度合いから抗原量を測定するラテッ
クス凝集法及び血球凝集法が知られている。
物質や酵素を標識した抗体を用いて、抗原抗体反応後の
放射性活性や酵素活性から抗原を測定するラジオイムノ
アッセイ法（RIA法）及びエンザイムイムノアッセイ法
（EIA法）、抗原と抗体との反応で生ずる濁りの吸光度
変化から抗原量を測定する免疫比濁法、抗原と抗体感作
ラテックス粒子もしくは抗体感作赤血球との反応によっ
て起きる凝集反応の度合いから抗原量を測定するラテッ
クス凝集法及び血球凝集法が知られている。
【０００４】また、抗体の測定法としては、ポリスチレ
ンプレートやポリスチレンボールに固相化された抗原と
抗原抗体反応により特異的に結合した抗体を放射性物質
や酵素を標識した二次抗体を用いて測定するRIA法及びE
IA法、抗体と抗原感作ラテックス粒子もしくは抗原感作
赤血球との反応で起きる凝集反応の度合いから抗体量を
測定するラテックス凝集法及び血球凝集法が知られてい
る。
ンプレートやポリスチレンボールに固相化された抗原と
抗原抗体反応により特異的に結合した抗体を放射性物質
や酵素を標識した二次抗体を用いて測定するRIA法及びE
IA法、抗体と抗原感作ラテックス粒子もしくは抗原感作
赤血球との反応で起きる凝集反応の度合いから抗体量を
測定するラテックス凝集法及び血球凝集法が知られてい
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、抗原の
測定においては、抗原の濃度、性状、使用する抗体等に
より、また抗体の測定においては、濃度等により測定法
が限定されてしまうという問題点があった。
測定においては、抗原の濃度、性状、使用する抗体等に
より、また抗体の測定においては、濃度等により測定法
が限定されてしまうという問題点があった。
【０００６】すなわち、抗原の測定に関しては、単独の
モノクローナル抗体を使用した抗原測定法では、モノク
ローナル抗体の特性から、１価の抗原に対しては、免疫
比濁法、ラテックス凝集法及び血球凝集法による測定は
不可能であった。またハプテンの測定では、その抗原性
からして、数種類の抗体を作製することが極めて難しい
ために、免疫比濁法、ラテックス凝集法及び血球凝集法
による測定は不可能であり、EIA法及びRIA法において
も、多くは競合法を利用した方法に限定されていた。そ
の他の測定法としてサンドイッチ法もあるが、これは２
種以上の抗体を用いることが前提であり煩雑である。
モノクローナル抗体を使用した抗原測定法では、モノク
ローナル抗体の特性から、１価の抗原に対しては、免疫
比濁法、ラテックス凝集法及び血球凝集法による測定は
不可能であった。またハプテンの測定では、その抗原性
からして、数種類の抗体を作製することが極めて難しい
ために、免疫比濁法、ラテックス凝集法及び血球凝集法
による測定は不可能であり、EIA法及びRIA法において
も、多くは競合法を利用した方法に限定されていた。そ
の他の測定法としてサンドイッチ法もあるが、これは２
種以上の抗体を用いることが前提であり煩雑である。
【０００７】また、抗体の測定に関しては、微量抗体の
測定に対しては、ラテックス凝集法及び血球凝集法は、
感度が不足するため不適であった。
測定に対しては、ラテックス凝集法及び血球凝集法は、
感度が不足するため不適であった。
【０００８】従って、本発明は、抗原又は抗体の濃度、
性状、使用する抗体等によって適用対象を限定されるこ
となく種々の測定方式に広く使用できる新規な免疫学的
測定方法を提供することを目的とする。
性状、使用する抗体等によって適用対象を限定されるこ
となく種々の測定方式に広く使用できる新規な免疫学的
測定方法を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意研究を重ねた結果、抗原との反応により
免疫複合体を形成した抗体はその構造の一部が変化する
こと、そしてその変化部分を認識する抗体を用いれば上
述の問題を解決し得ることを見出し、本発明を完成する
に至った。
発明者らは鋭意研究を重ねた結果、抗原との反応により
免疫複合体を形成した抗体はその構造の一部が変化する
こと、そしてその変化部分を認識する抗体を用いれば上
述の問題を解決し得ることを見出し、本発明を完成する
に至った。
【００１０】すなわち本発明は、測定対象の抗原（Ag）
又は抗体（Ab1）とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原
（Ag）との反応により得られる免疫複合体と、当該免疫
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）との反応を用いる抗原（Ag）又は抗体（Ab1）の
免疫学的測定方法を提供するものである。
又は抗体（Ab1）とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原
（Ag）との反応により得られる免疫複合体と、当該免疫
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）との反応を用いる抗原（Ag）又は抗体（Ab1）の
免疫学的測定方法を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明方法に用いられる抗体（Ab
2）としては、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗
体のいずれをも含み、それぞれ以下のようにして製造す
ることができる。
2）としては、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗
体のいずれをも含み、それぞれ以下のようにして製造す
ることができる。
【００１２】ポリクローナル抗体は、例えば、抗原（A
g）とこれに対する抗体（Ab1）との反応により形成され
た免疫複合体を動物に投与して免疫した後、抗血清を採
取し、当該抗血清から抗原（Ag）に対する抗体及び未反
応の抗体（Ab1）に対する抗体を除去することにより製
造される。
g）とこれに対する抗体（Ab1）との反応により形成され
た免疫複合体を動物に投与して免疫した後、抗血清を採
取し、当該抗血清から抗原（Ag）に対する抗体及び未反
応の抗体（Ab1）に対する抗体を除去することにより製
造される。
【００１３】免疫原としての免疫複合体としては、更に
グルタールアルデヒド等の架橋剤で処理したものを用い
るのが特に好ましい。免疫に使用される動物としては、
一般的にはウサギ、ヤギ、ニワトリ等が使用される。免
疫方法は、一般的な手法に従うことができる。例えば、
免疫原を通常の緩衝液や生理食塩水に懸濁させたもの、
あるいは完全フロイントアジュバント等の補液との混合
物を、動物の皮下、皮内、腹腔等に投与して一時刺激
後、必要に応じて同様の操作を繰り返し行う。免疫複合
体の投与量は、投与経路、動物種等に応じて適宜決定さ
れるが、通常、１回当たり10μｇ〜１mg程度とするのが
適当である。免疫動物の血清中に免疫複合体に対する抗
体が十分に確認されたときに、注射器で心臓等から採血
し血清を得る。
グルタールアルデヒド等の架橋剤で処理したものを用い
るのが特に好ましい。免疫に使用される動物としては、
一般的にはウサギ、ヤギ、ニワトリ等が使用される。免
疫方法は、一般的な手法に従うことができる。例えば、
免疫原を通常の緩衝液や生理食塩水に懸濁させたもの、
あるいは完全フロイントアジュバント等の補液との混合
物を、動物の皮下、皮内、腹腔等に投与して一時刺激
後、必要に応じて同様の操作を繰り返し行う。免疫複合
体の投与量は、投与経路、動物種等に応じて適宜決定さ
れるが、通常、１回当たり10μｇ〜１mg程度とするのが
適当である。免疫動物の血清中に免疫複合体に対する抗
体が十分に確認されたときに、注射器で心臓等から採血
し血清を得る。
【００１４】得られた血清中には目的のポリクローナル
抗体（Ab2）以外の抗体が含まれているため、これらの
抗体を免疫吸着法等で除去することが必要である。例え
ば、抗血清を抗原（Ag）結合アフィニティカラム及び抗
体（Ab1）結合アフィニティカラム等を通して、抗原（A
g）に対する抗体及び未反応抗体（Ab1）に対する抗体を
除去することによって、目的のポリクローナル抗体（Ab
2）を得ることができる。
抗体（Ab2）以外の抗体が含まれているため、これらの
抗体を免疫吸着法等で除去することが必要である。例え
ば、抗血清を抗原（Ag）結合アフィニティカラム及び抗
体（Ab1）結合アフィニティカラム等を通して、抗原（A
g）に対する抗体及び未反応抗体（Ab1）に対する抗体を
除去することによって、目的のポリクローナル抗体（Ab
2）を得ることができる。
【００１５】また、モノクローナル抗体は、例えば、抗
原（Ag）とこれに対する抗体（Ab1）との反応により形
成された免疫複合体を動物に投与して免疫し、得られる
抗体産生細胞を骨髄腫細胞と細胞融合せしめ、得られた
ハイブリドーマから免疫複合体を形成した抗体に対して
特異的に反応する抗体（Ab2）を産生するハイブリドー
マを選択し、これを動物腹腔内又は培養液中にて増殖せ
しめ、その腹水又は培養液からモノクローナル抗体（Ab
2）を採取することにより製造される。
原（Ag）とこれに対する抗体（Ab1）との反応により形
成された免疫複合体を動物に投与して免疫し、得られる
抗体産生細胞を骨髄腫細胞と細胞融合せしめ、得られた
ハイブリドーマから免疫複合体を形成した抗体に対して
特異的に反応する抗体（Ab2）を産生するハイブリドー
マを選択し、これを動物腹腔内又は培養液中にて増殖せ
しめ、その腹水又は培養液からモノクローナル抗体（Ab
2）を採取することにより製造される。
【００１６】免疫に使用される動物としては、特に限定
されないが、一般的にはマウス、ラット等が使用され
る。免疫は、前記ポリクローナル抗体の作製と同様の方
法で行うことができる。引き続く細胞融合に用いる抗体
産生細胞は、最終免疫の３〜４日後に摘出した脾臓細胞
が好適である。また、前記抗体産生細胞と融合させる親
細胞としての骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）としては、
既に確立されている公知の各種細胞株、例えばマウスに
おけるNS1(P3/NSI/1-Ag4-1)〔Eur. J. Immunol.6:511-5
19(1976)〕、SP2/0-Ag14〔Nature 276:269(1978)〕、P3
X63-Ag8.653〔J.Immunol. 123:1548(1979)〕、P3X63-Ag
8U.1〔Curr. Top. Microbiol. Immunol.81:1(1978)〕等
や、ラットにおけるY3-Ag1.2.3.〔Nature 277: 131-133
(1979)〕、YB2/0(YB2/3HL/P2.G11.16Ag.20)〔Methods E
nzymol. 73B:1(1981)〕等をいずれも使用することがで
きる。細胞融合には通常用いられるポリエチレングリコ
ール（PEG）、センダイウイルス（HVJ）等を使用するこ
とができる。細胞融合は通常の方法と同様であり、例え
ば免疫細胞は骨髄腫細胞に対して約１〜10倍で、ポリエ
チレングリコールは平均分子量1000〜6000のものを30〜
60％の濃度で使用し、免疫細胞と骨髄腫細胞の混合ペレ
ットに滴下し混ぜ合わせることによって行われる。
されないが、一般的にはマウス、ラット等が使用され
る。免疫は、前記ポリクローナル抗体の作製と同様の方
法で行うことができる。引き続く細胞融合に用いる抗体
産生細胞は、最終免疫の３〜４日後に摘出した脾臓細胞
が好適である。また、前記抗体産生細胞と融合させる親
細胞としての骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）としては、
既に確立されている公知の各種細胞株、例えばマウスに
おけるNS1(P3/NSI/1-Ag4-1)〔Eur. J. Immunol.6:511-5
19(1976)〕、SP2/0-Ag14〔Nature 276:269(1978)〕、P3
X63-Ag8.653〔J.Immunol. 123:1548(1979)〕、P3X63-Ag
8U.1〔Curr. Top. Microbiol. Immunol.81:1(1978)〕等
や、ラットにおけるY3-Ag1.2.3.〔Nature 277: 131-133
(1979)〕、YB2/0(YB2/3HL/P2.G11.16Ag.20)〔Methods E
nzymol. 73B:1(1981)〕等をいずれも使用することがで
きる。細胞融合には通常用いられるポリエチレングリコ
ール（PEG）、センダイウイルス（HVJ）等を使用するこ
とができる。細胞融合は通常の方法と同様であり、例え
ば免疫細胞は骨髄腫細胞に対して約１〜10倍で、ポリエ
チレングリコールは平均分子量1000〜6000のものを30〜
60％の濃度で使用し、免疫細胞と骨髄腫細胞の混合ペレ
ットに滴下し混ぜ合わせることによって行われる。
【００１７】ハイブリドーマの選択は、通常の選択培
地、例えばHAT培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン
及びチミジンを含む培地）を用いて行われる。HAT培地
で培養後、得られたハイブリドーマは、通常の限界希釈
法に従い、目的とする抗体の産生株の検索及び単一クロ
ーン化が行われる。目的抗体産生株の検索には、例え
ば、ELISA法、RIA法等が利用され、免疫複合体を形成し
た抗体に対して特異的に反応する抗体産生ハイブリドー
マを選択する。かくして得られる目的抗体産生ハイブリ
ドーマからのモノクローナル抗体（Ab2）の製造は、常
法に従いハイブリドーマを培養し、培養上清から分離す
る方法、あるいは、前記ハイブリドーマをこれと適合性
のある哺乳類動物に投与し、腹水として回収する方法に
より実施できる。
地、例えばHAT培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン
及びチミジンを含む培地）を用いて行われる。HAT培地
で培養後、得られたハイブリドーマは、通常の限界希釈
法に従い、目的とする抗体の産生株の検索及び単一クロ
ーン化が行われる。目的抗体産生株の検索には、例え
ば、ELISA法、RIA法等が利用され、免疫複合体を形成し
た抗体に対して特異的に反応する抗体産生ハイブリドー
マを選択する。かくして得られる目的抗体産生ハイブリ
ドーマからのモノクローナル抗体（Ab2）の製造は、常
法に従いハイブリドーマを培養し、培養上清から分離す
る方法、あるいは、前記ハイブリドーマをこれと適合性
のある哺乳類動物に投与し、腹水として回収する方法に
より実施できる。
【００１８】本発明の免疫学的測定方法は、かくして得
られた抗体（Ab2）と、測定対象の抗原（Ag）又は抗体
（Ab1）とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原（Ag）と
の反応により得られる免疫複合体との反応を利用したも
のであり、従来の任意の免疫学的測定方法に適用するこ
とができる。
られた抗体（Ab2）と、測定対象の抗原（Ag）又は抗体
（Ab1）とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原（Ag）と
の反応により得られる免疫複合体との反応を利用したも
のであり、従来の任意の免疫学的測定方法に適用するこ
とができる。
【００１９】本発明方法を適用する測定方式としては特
に限定されないが、EIA法、RIA法、免疫比濁法、ラテッ
クス凝集法、血球凝集法等が挙げられる。
に限定されないが、EIA法、RIA法、免疫比濁法、ラテッ
クス凝集法、血球凝集法等が挙げられる。
【００２０】より具体的には、EIA法、RIA法により抗原
又は抗体を測定する場合は、測定対象抗原（Ag）又は測
定対象抗体（Ab1）を含有する試料に固相化した抗体（A
b1）又は抗原（Ag）を添加して免疫複合体を形成させ、
これに酵素、放射性物質、蛍光物質又は化学発光物質で
標識された抗体（Ab2）を反応させ、次いで固相中の標
識活性を測定することにより抗原（Ag）又は抗体（Ab
1）を定量することができる。
又は抗体を測定する場合は、測定対象抗原（Ag）又は測
定対象抗体（Ab1）を含有する試料に固相化した抗体（A
b1）又は抗原（Ag）を添加して免疫複合体を形成させ、
これに酵素、放射性物質、蛍光物質又は化学発光物質で
標識された抗体（Ab2）を反応させ、次いで固相中の標
識活性を測定することにより抗原（Ag）又は抗体（Ab
1）を定量することができる。
【００２１】免疫比濁法により抗原又は抗体を測定する
場合は、測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体（Ab1）
を含有する試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を添加し
て免疫複合体を形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を
加え、その反応による吸光度変化から抗原（Ag）又は抗
体（Ab1）を定量することができる。
場合は、測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体（Ab1）
を含有する試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を添加し
て免疫複合体を形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を
加え、その反応による吸光度変化から抗原（Ag）又は抗
体（Ab1）を定量することができる。
【００２２】ラテックス凝集法又は血球凝集法により抗
原又は抗体を測定する場合は、抗体（Ab2）を担体（ラ
テックス粒子又は血球）に直接感作して使用する方法と
液相抗体として使用する方法がある。前者の方法では、
測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体（Ab1）を含有す
る試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を添加して免疫複
合体を形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を感作した
担体を加え、その反応による吸光度変化又は担体の凝集
の程度から抗原（Ag）又は抗体（Ab1）を定量すること
ができる。一方、後者の方法では、測定対象抗原（Ag）
又は測定対象抗体（Ab1）を含有する試料に抗体（Ab1）
又は抗原（Ag）を感作した担体を添加して免疫複合体を
形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を加え、その反応
による吸光度変化又は担体の凝集の程度から抗原（Ag）
又は抗体（Ab1）を定量することができる。
原又は抗体を測定する場合は、抗体（Ab2）を担体（ラ
テックス粒子又は血球）に直接感作して使用する方法と
液相抗体として使用する方法がある。前者の方法では、
測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体（Ab1）を含有す
る試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を添加して免疫複
合体を形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を感作した
担体を加え、その反応による吸光度変化又は担体の凝集
の程度から抗原（Ag）又は抗体（Ab1）を定量すること
ができる。一方、後者の方法では、測定対象抗原（Ag）
又は測定対象抗体（Ab1）を含有する試料に抗体（Ab1）
又は抗原（Ag）を感作した担体を添加して免疫複合体を
形成させ、次いでこれに抗体（Ab2）を加え、その反応
による吸光度変化又は担体の凝集の程度から抗原（Ag）
又は抗体（Ab1）を定量することができる。
【００２３】以上の測定方式のうち、本発明方法は、特
に、モノクローナル抗体を使用したEIA法、RIA法、免疫
比濁法、ラテックス凝集法、血球凝集法による抗原測定
や、ラテックス凝集法、血球凝集法による抗体の測定に
有用である。
に、モノクローナル抗体を使用したEIA法、RIA法、免疫
比濁法、ラテックス凝集法、血球凝集法による抗原測定
や、ラテックス凝集法、血球凝集法による抗体の測定に
有用である。
【００２４】
【発明の効果】抗原（Ag）と免疫複合体を形成した抗体
に対して特異的に反応する抗体（Ab2）を免疫学的測定
法に利用することにより、これまで不可能であったモノ
クローナル抗体を用いた免疫比濁、ラテックス凝集、血
球凝集による抗原測定系の構築を可能にする共に、一種
類の抗体を用いたEIA法、RIA法による抗原測定系の構
築、更に、微量抗体のラテックス凝集、血球凝集による
測定系の構築を可能にすることができる。
に対して特異的に反応する抗体（Ab2）を免疫学的測定
法に利用することにより、これまで不可能であったモノ
クローナル抗体を用いた免疫比濁、ラテックス凝集、血
球凝集による抗原測定系の構築を可能にする共に、一種
類の抗体を用いたEIA法、RIA法による抗原測定系の構
築、更に、微量抗体のラテックス凝集、血球凝集による
測定系の構築を可能にすることができる。
【００２５】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
るが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００２６】製造例１（ポリクローナル抗体の調製） アンチトロンビンIII（ATIII）とATIIIに対するモノク
ローナル抗体13208（ハイブリドーマ13208：FERM P-164
60により産生されるもの）とを室温で７時間反応後、ヘ
パリン結合セファロース4Bカラム及びプロテインＡ結合
セファロース4Bカラムを用いてATIIIとモノクローナル
抗体13208の免疫複合体を精製した。この免疫複合体を
0.125％グルタールアルデヒドで室温で２時間処理後、P
D-10カラム（ファルマシア社製）で脱塩し免疫原とし
た。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１対１
で混和乳化し、0.1mg/2ml（エマルジョン）でウサギ
（日本白色種）の皮下に２週間間隔で７回投与後、静脈
血を採取し、抗血清を得た。得られた抗血清を、モノク
ローナル抗体13208結合セファロース4Bカラム及びATIII
結合セファロース4Bカラムに添加し、素通りした抗血清
を目的抗体として回収した。
ローナル抗体13208（ハイブリドーマ13208：FERM P-164
60により産生されるもの）とを室温で７時間反応後、ヘ
パリン結合セファロース4Bカラム及びプロテインＡ結合
セファロース4Bカラムを用いてATIIIとモノクローナル
抗体13208の免疫複合体を精製した。この免疫複合体を
0.125％グルタールアルデヒドで室温で２時間処理後、P
D-10カラム（ファルマシア社製）で脱塩し免疫原とし
た。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１対１
で混和乳化し、0.1mg/2ml（エマルジョン）でウサギ
（日本白色種）の皮下に２週間間隔で７回投与後、静脈
血を採取し、抗血清を得た。得られた抗血清を、モノク
ローナル抗体13208結合セファロース4Bカラム及びATIII
結合セファロース4Bカラムに添加し、素通りした抗血清
を目的抗体として回収した。
【００２７】実施例１（ポリクローナル抗体の特異性） ATIII、マウスIgG（モノクローナル抗体13208）及びこ
れらの免疫複合体をそれぞれ20mMリン酸緩衝生理食塩水
（PBS）pH7.2で280nmの吸光度で１mOD/mlに調整後、96
穴ELISAプレート（ヌンク社製）に50μl／ウエル加え、
４℃で一晩インキュベートした。プレートをT-PBS（0.0
5％Tween20を合むPBS）で３回洗浄後、T-PBSを300μl／
ウェル加え、２時間ブロッキングした。T-PBSを除去
後、280nm吸光度で100mOD/mlに調整した製造例１で最終
的に得られた抗血清を50μl／ウエル加え、室温で２時
間インキュベートした。同様にT-PBSで３回洗浄した
後、T-PBSで5000倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗
ウサギIgGを50μl／ウエル加え、室温で２時間インキュ
ベートした。再びT-PBSで３回洗浄後、ペルオキシダー
ゼ基質溶液を50μl／ウエル加えた。15分後、1.5Ｎ硫酸
を50μl／ウエル加え、492nmの吸光度を測定した。この
結果を図１に示す。図１より、製造例１の抗血清は免疫
複合体に対して特異的に反応することが示された。
れらの免疫複合体をそれぞれ20mMリン酸緩衝生理食塩水
（PBS）pH7.2で280nmの吸光度で１mOD/mlに調整後、96
穴ELISAプレート（ヌンク社製）に50μl／ウエル加え、
４℃で一晩インキュベートした。プレートをT-PBS（0.0
5％Tween20を合むPBS）で３回洗浄後、T-PBSを300μl／
ウェル加え、２時間ブロッキングした。T-PBSを除去
後、280nm吸光度で100mOD/mlに調整した製造例１で最終
的に得られた抗血清を50μl／ウエル加え、室温で２時
間インキュベートした。同様にT-PBSで３回洗浄した
後、T-PBSで5000倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗
ウサギIgGを50μl／ウエル加え、室温で２時間インキュ
ベートした。再びT-PBSで３回洗浄後、ペルオキシダー
ゼ基質溶液を50μl／ウエル加えた。15分後、1.5Ｎ硫酸
を50μl／ウエル加え、492nmの吸光度を測定した。この
結果を図１に示す。図１より、製造例１の抗血清は免疫
複合体に対して特異的に反応することが示された。
【００２８】製造例２（モノクローナル抗体の調製） (1)ハイブリドーマの調製 免疫複合体は上記ポリクローナル抗体の作製と同様に調
製した。この免疫複合体を５mMの1-エチル-3-(3-ジメチ
ルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩で室温２時間
処理後、PD-10カラムで脱塩し免疫原とした。この免疫
原を完全フロイントアジュバントと１対１で混和乳化
し、７週令、雌のWistar系ラットの背部皮下に９回投与
し、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓
から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞SP2/0-Ag14とを３対
１の割合で混合し、50％ポリエチレングリコール1540
（和光純薬社製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞
は脾臓細胞として２×106/mlになるようにHAT培地に懸
濁し、24穴培養プレート（コーニング社製）に２mlずつ
分注し、５％CO2インキュベーター中で、37℃にて培養
した。増殖の認められた培養上清につき、ATIII、マウ
スIgG及び免疫複合体のそれぞれとの反応をELISA法によ
り検定し、免疫複合体に対して特異的反応が認められた
ハイブリドーマを限界希釈法によりクローン化を行い、
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ54201（FERM P-
16459）を作製した。
製した。この免疫複合体を５mMの1-エチル-3-(3-ジメチ
ルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩で室温２時間
処理後、PD-10カラムで脱塩し免疫原とした。この免疫
原を完全フロイントアジュバントと１対１で混和乳化
し、７週令、雌のWistar系ラットの背部皮下に９回投与
し、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓
から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞SP2/0-Ag14とを３対
１の割合で混合し、50％ポリエチレングリコール1540
（和光純薬社製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞
は脾臓細胞として２×106/mlになるようにHAT培地に懸
濁し、24穴培養プレート（コーニング社製）に２mlずつ
分注し、５％CO2インキュベーター中で、37℃にて培養
した。増殖の認められた培養上清につき、ATIII、マウ
スIgG及び免疫複合体のそれぞれとの反応をELISA法によ
り検定し、免疫複合体に対して特異的反応が認められた
ハイブリドーマを限界希釈法によりクローン化を行い、
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ54201（FERM P-
16459）を作製した。
【００２９】(2)モノクローナル抗体の調製 (1)で得たハイブリドーマ54201を15％牛胎児血清添加RP
MI1640培地で１×105/mlに調整後、50mlを300mlの培養
ボトル（コーニング社製）に加え、37℃、５％CO2イン
キュベーター中で４日間培養し、遠心処理して培養上清
を得た。培養上清をプロテインＧカラム（ファルマシア
社製）に通して抗体を吸着させた後、0.1Ｍグリシン−
塩酸緩衝液（pH3.0）で溶出させてモノクローナル抗体5
4201を精製した。
MI1640培地で１×105/mlに調整後、50mlを300mlの培養
ボトル（コーニング社製）に加え、37℃、５％CO2イン
キュベーター中で４日間培養し、遠心処理して培養上清
を得た。培養上清をプロテインＧカラム（ファルマシア
社製）に通して抗体を吸着させた後、0.1Ｍグリシン−
塩酸緩衝液（pH3.0）で溶出させてモノクローナル抗体5
4201を精製した。
【００３０】実施例２（モノクローナル抗体の特異性） (1) ELISA法 ATIII、マウスIgG（モノクローナル抗体13208、24214、
26203）、ウサギIgG、ヒトIgG、ヤギIgG、免疫複合体
（ATIIIとモノクローナル抗体13208との免疫複合体）を
20mMリン酸緩衝生理食塩水（PBS；pH7.2）で280nmの吸
光度で1mOD/mlに調整後、96穴ELISAプレート（ヌンク社
製）に50μl／ウエル加え、４℃で一晩インキュベート
した。プレートをT-PBSで３回洗浄後、0.1％スキムミル
クを含むT-PBSを300μl／ウエル加え、２時間ブロッキ
ングした。ブロッキング液を除去後、製造例２(2)で得
たモノクローナル抗体54201を含む培養上清を50μl／ウ
エル加え、室温で２時間インキュベートした。同様にT-
PBSで３回洗浄した後、T-PBSで5000倍に希釈したペルオ
キシダーゼ標識抗ラットIgG（バイオソース社製）を50
μl／ウエル加え、室温で２時間インキュベートした。
再びT-PBSで３回洗浄後、ペルオキシダーゼ基質溶液を5
0μl／ウエル加えた。15分後、1.5Ｎ硫酸を50μl／ウエ
ル加え、492nmにおける吸光度を測定した。この結果を
図２に示す。図２より、モノクローナル抗体54201は免
疫複合体に対して特異的に反応することが示された。
26203）、ウサギIgG、ヒトIgG、ヤギIgG、免疫複合体
（ATIIIとモノクローナル抗体13208との免疫複合体）を
20mMリン酸緩衝生理食塩水（PBS；pH7.2）で280nmの吸
光度で1mOD/mlに調整後、96穴ELISAプレート（ヌンク社
製）に50μl／ウエル加え、４℃で一晩インキュベート
した。プレートをT-PBSで３回洗浄後、0.1％スキムミル
クを含むT-PBSを300μl／ウエル加え、２時間ブロッキ
ングした。ブロッキング液を除去後、製造例２(2)で得
たモノクローナル抗体54201を含む培養上清を50μl／ウ
エル加え、室温で２時間インキュベートした。同様にT-
PBSで３回洗浄した後、T-PBSで5000倍に希釈したペルオ
キシダーゼ標識抗ラットIgG（バイオソース社製）を50
μl／ウエル加え、室温で２時間インキュベートした。
再びT-PBSで３回洗浄後、ペルオキシダーゼ基質溶液を5
0μl／ウエル加えた。15分後、1.5Ｎ硫酸を50μl／ウエ
ル加え、492nmにおける吸光度を測定した。この結果を
図２に示す。図２より、モノクローナル抗体54201は免
疫複合体に対して特異的に反応することが示された。
【００３１】(2) ウエスタンブロッティング法 モノクローナル抗体13208のIgGとF(ab')2とを、SDS-ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、PVDF膜（ミリポ
ア社製）に電気的に転写し、１％スキムミルクを含むT-
PBSで２時間ブロッキングした後、一次抗体としてモノ
クローナル抗体54201、二次抗体としてペルオキシダー
ゼ標識抗ラットIgG抗体を反応させた。PVDF膜をT-PBSで
洗浄後、ジアミノベンジジンを基質として加え、発色さ
せた。図３に示す如く、モノクローナル抗体54201は、I
gGとF(ab')2に対する反応が見られることから、エピト
ープはF(ab')2に存在することが示された。 (3) 上記のELISA法及びウエスタンブロッティング法に
よる検討結果より、モノクローナル抗体54201は、ATIII
とインタクトなマウスIgG（モノクローナル抗体13208）
とは反応せず、SDS変性並びに免疫複合体を形成したマ
ウスIgG（モノクローナル抗体13208）と反応することが
示された。
リアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、PVDF膜（ミリポ
ア社製）に電気的に転写し、１％スキムミルクを含むT-
PBSで２時間ブロッキングした後、一次抗体としてモノ
クローナル抗体54201、二次抗体としてペルオキシダー
ゼ標識抗ラットIgG抗体を反応させた。PVDF膜をT-PBSで
洗浄後、ジアミノベンジジンを基質として加え、発色さ
せた。図３に示す如く、モノクローナル抗体54201は、I
gGとF(ab')2に対する反応が見られることから、エピト
ープはF(ab')2に存在することが示された。 (3) 上記のELISA法及びウエスタンブロッティング法に
よる検討結果より、モノクローナル抗体54201は、ATIII
とインタクトなマウスIgG（モノクローナル抗体13208）
とは反応せず、SDS変性並びに免疫複合体を形成したマ
ウスIgG（モノクローナル抗体13208）と反応することが
示された。
【００３２】実施例３（ELISAによる抗原測定系への適
用） ATIIIに対するモノクローナル抗体13208（0.139μg/m
l）を96穴ELISAプレート（ヌンク社製）に50μl／ウエ
ル加え、４℃で一晩インキュベートした。プレートをT-
PBSで３回洗浄後、0.1％スキムミルクを含むT-PBSを300
μl／ウエル加え、２時間ブロッキングした。ブロッキ
ング液を除去後、各種濃度に希釈したATIII標準溶液
（0，1.6，8，40，200ng/ml）を50μl／ウエル加え、室
温で２時間インキュベートした。プレートをT-PBSで３
回洗浄後、製造例２(2)で得たモノクローナル抗体54201
を含む培養上清を50μl／ウエル加え、室温で２時間イ
ンキュベートした。同様にT-PBSで３回洗浄した後、T-P
BSで5000倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗ラットIg
G（バイオソース社製）を50μl／ウエル加え、室温で２
時間インキュベートした。再びT-PBSで３回洗浄後、ペ
ルオキシダーゼ基質溶液を50μl／ウエル加えた。15分
後、1.5Ｎ硫酸を50μl／ウエル加え、492nmにおける吸
光度を測定した。この結果を図４に示す。図４より、AT
IIIの濃度に依存した吸光度が得られた。
用） ATIIIに対するモノクローナル抗体13208（0.139μg/m
l）を96穴ELISAプレート（ヌンク社製）に50μl／ウエ
ル加え、４℃で一晩インキュベートした。プレートをT-
PBSで３回洗浄後、0.1％スキムミルクを含むT-PBSを300
μl／ウエル加え、２時間ブロッキングした。ブロッキ
ング液を除去後、各種濃度に希釈したATIII標準溶液
（0，1.6，8，40，200ng/ml）を50μl／ウエル加え、室
温で２時間インキュベートした。プレートをT-PBSで３
回洗浄後、製造例２(2)で得たモノクローナル抗体54201
を含む培養上清を50μl／ウエル加え、室温で２時間イ
ンキュベートした。同様にT-PBSで３回洗浄した後、T-P
BSで5000倍に希釈したペルオキシダーゼ標識抗ラットIg
G（バイオソース社製）を50μl／ウエル加え、室温で２
時間インキュベートした。再びT-PBSで３回洗浄後、ペ
ルオキシダーゼ基質溶液を50μl／ウエル加えた。15分
後、1.5Ｎ硫酸を50μl／ウエル加え、492nmにおける吸
光度を測定した。この結果を図４に示す。図４より、AT
IIIの濃度に依存した吸光度が得られた。
【００３３】実施例４（ラテックス凝集による抗原測定
系への適用） (1) モノクローナル抗体54201感作ラテックス系 50mMグリシン緩衝液（pH8.4）に透析したモノクローナ
ル抗体54201（１mg/ml）と、同緩衝液にて２％に調製し
たO.15μｍのラテックス（セキスイ社製）を等量混和
し、４℃にて２時間感作後、0.5％ウシ血清アルブミン
（BSA）を含む50mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてブロッ
キングし、さらに0.1％BSA及び0.005％Tween80を含む50
mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてエージングを行った
後、0.1％BSA及び10％グリセロールを含む50mMグリシン
緩衝液（pH8.4）に懸濁し、モノクローナル抗体54201感
作ラテックスとした。本感作ラテックス（0.05％）600
μｌにATIIIに対するモノクローナル抗体13208（30μg/
ml）を30μｌ加え、そこに各濃度のATIII溶液10μｌを
添加し、分光光度計にて600nmにおける吸光度の変化を
測定した。その結果、図５に示すように、吸光度はATII
I濃度に比例して上昇し、本感作ラテックスによりATIII
量を測定できることが示された。
系への適用） (1) モノクローナル抗体54201感作ラテックス系 50mMグリシン緩衝液（pH8.4）に透析したモノクローナ
ル抗体54201（１mg/ml）と、同緩衝液にて２％に調製し
たO.15μｍのラテックス（セキスイ社製）を等量混和
し、４℃にて２時間感作後、0.5％ウシ血清アルブミン
（BSA）を含む50mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてブロッ
キングし、さらに0.1％BSA及び0.005％Tween80を含む50
mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてエージングを行った
後、0.1％BSA及び10％グリセロールを含む50mMグリシン
緩衝液（pH8.4）に懸濁し、モノクローナル抗体54201感
作ラテックスとした。本感作ラテックス（0.05％）600
μｌにATIIIに対するモノクローナル抗体13208（30μg/
ml）を30μｌ加え、そこに各濃度のATIII溶液10μｌを
添加し、分光光度計にて600nmにおける吸光度の変化を
測定した。その結果、図５に示すように、吸光度はATII
I濃度に比例して上昇し、本感作ラテックスによりATIII
量を測定できることが示された。
【００３４】(2) モノクローナル抗体13208感作ラテッ
クス系 50mMグリシン緩衝液（pH8.4）に透析したATIIIに対する
モノクローナル抗体13208（1.68mg/ml）と、同緩衝液に
て２％に調製した0.15μｍのラテックス（セキスイ社
製）を等量混和し、４℃にて２時間感作後、0.5％ウシ
血清アルブミン（BSA）を含む50mMグリシン緩衝液（pH
8.4）にてブロッキングし、さらに0.1％BSA、0.005％Tw
een80を含む50mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてエージン
グを行った後、0.1％BSA及び10％グリセロールを含む50
mMグリシン緩衝液（pH8.4）に懸濁し、モノクローナル
抗体13208感作ラテックスとした。本感作ラテックス
（0.05％）600μｌに10μg/mlのモノクローナル抗体542
01を10μｌ加え、そこに各濃度のATIII溶液10μｌを添
加し、分光光度計にて600nmにおける吸光度の変化を測
定した。その結果、図６に示すように、吸光度はATIII
濃度に比例して上昇し、本感作ラテックスによりATIII
量を測定できることが示された。
クス系 50mMグリシン緩衝液（pH8.4）に透析したATIIIに対する
モノクローナル抗体13208（1.68mg/ml）と、同緩衝液に
て２％に調製した0.15μｍのラテックス（セキスイ社
製）を等量混和し、４℃にて２時間感作後、0.5％ウシ
血清アルブミン（BSA）を含む50mMグリシン緩衝液（pH
8.4）にてブロッキングし、さらに0.1％BSA、0.005％Tw
een80を含む50mMグリシン緩衝液（pH8.4）にてエージン
グを行った後、0.1％BSA及び10％グリセロールを含む50
mMグリシン緩衝液（pH8.4）に懸濁し、モノクローナル
抗体13208感作ラテックスとした。本感作ラテックス
（0.05％）600μｌに10μg/mlのモノクローナル抗体542
01を10μｌ加え、そこに各濃度のATIII溶液10μｌを添
加し、分光光度計にて600nmにおける吸光度の変化を測
定した。その結果、図６に示すように、吸光度はATIII
濃度に比例して上昇し、本感作ラテックスによりATIII
量を測定できることが示された。
【図１】ELISA法による製造例１のポリクローナル抗体
の特異性を示す図である。
の特異性を示す図である。
【図２】ELISA法による製造例２のモノクローナル抗体5
4201の特異性を示す図である。
4201の特異性を示す図である。
【図３】ウエスタンブロッティング法による製造例２の
モノクローナル抗体54201の特異性を示す図である。
モノクローナル抗体54201の特異性を示す図である。
【図４】モノクローナル抗体54201をELISA法に用いた場
合の抗原（ATIII）濃度と吸光度の関係を示す図であ
る。
合の抗原（ATIII）濃度と吸光度の関係を示す図であ
る。
【図５】モノクローナル抗体54201感作ラテックスをラ
テックス凝集反応系に用いた場合の抗原（ATIII）濃度
と吸光度の関係を示す図である。
テックス凝集反応系に用いた場合の抗原（ATIII）濃度
と吸光度の関係を示す図である。
【図６】モノクローナル抗体54201をラテックス凝集反
応系に用いた場合の抗原（ATIII）濃度と吸光度の関係
を示す図である。
応系に用いた場合の抗原（ATIII）濃度と吸光度の関係
を示す図である。
【手続補正書】
【提出日】平成１０年９月２９日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２６】製造例１（ポリクローナル抗体の調製） アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）とＡＴＩＩＩに
対するモノクローナル抗体１３２０８（ハイブリドーマ
１３２０８：ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２２により産生され
るもの）とを室温で７時間反応後、ヘパリン結合セファ
ロース４Ｂカラム及びプロテインＡ結合セファロース４
Ｂカラムを用いてＡＴＩＩＩとモノクローナル抗体１３
２０８の免疫複合体を精製した。この免疫複合体を０．
１２５％グルタールアルデヒドで室温で２時間処理後、
ＰＤ−１０カラム（ファルマシア社製）で脱塩し免疫原
とした。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１
対１で混和乳化し、０．１ｍｇ／２ｍｌ（エマルジョ
ン）でウサギ（日本白色種）の皮下に２週間間隔で７回
投与後、静脈血を採取し、抗血清を得た。得られた抗血
清を、モノクローナル抗体１３２０８結合セファロース
４Ｂカラム及びＡＴＩＩＩ結合セファロース４Ｂカラム
に添加し、素通りした抗血清を目的抗体として回収し
た。
対するモノクローナル抗体１３２０８（ハイブリドーマ
１３２０８：ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２２により産生され
るもの）とを室温で７時間反応後、ヘパリン結合セファ
ロース４Ｂカラム及びプロテインＡ結合セファロース４
Ｂカラムを用いてＡＴＩＩＩとモノクローナル抗体１３
２０８の免疫複合体を精製した。この免疫複合体を０．
１２５％グルタールアルデヒドで室温で２時間処理後、
ＰＤ−１０カラム（ファルマシア社製）で脱塩し免疫原
とした。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１
対１で混和乳化し、０．１ｍｇ／２ｍｌ（エマルジョ
ン）でウサギ（日本白色種）の皮下に２週間間隔で７回
投与後、静脈血を採取し、抗血清を得た。得られた抗血
清を、モノクローナル抗体１３２０８結合セファロース
４Ｂカラム及びＡＴＩＩＩ結合セファロース４Ｂカラム
に添加し、素通りした抗血清を目的抗体として回収し
た。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２８】製造例２（モノクローナル抗体の調製） （１）ハイブリドーマの調製 免疫複合体は上記ポリクローナル抗体の作製と同様に調
製した。この免疫複合体を５ｍＭの１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
で室温２時間処理後、ＰＤ−１０カラムで脱塩し免疫原
とした。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１
対１で混和乳化し、７週令、雌のＷｉｓｔａｒ系ラット
の背部皮下に９回投与し、最終免疫の３日後に脾臓を摘
出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細
胞ＳＰ２／０−Ａｇ１４とを３対１の割合で混合し、５
０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬社製）
存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として
２×１０６／ｍｌになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、２
４穴培養プレート（コーニング社製）に２ｍｌずつ分注
し、５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７℃にて培養
した。増殖の認められた培養上清につき、ＡＴＩＩＩ、
マウスＩｇＧ及び免疫複合体のそれぞれとの反応をＥＬ
ＩＳＡ法により検定し、免疫複合体に対して特異的反応
が認められたハイブリドーマを限界希釈法によりクロー
ン化を行い、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ５
４２０１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２１）を作製した。☆
受
製した。この免疫複合体を５ｍＭの１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
で室温２時間処理後、ＰＤ−１０カラムで脱塩し免疫原
とした。この免疫原を完全フロイントアジュバントと１
対１で混和乳化し、７週令、雌のＷｉｓｔａｒ系ラット
の背部皮下に９回投与し、最終免疫の３日後に脾臓を摘
出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細
胞ＳＰ２／０−Ａｇ１４とを３対１の割合で混合し、５
０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬社製）
存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として
２×１０６／ｍｌになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、２
４穴培養プレート（コーニング社製）に２ｍｌずつ分注
し、５％ＣＯ２インキュベーター中で、３７℃にて培養
した。増殖の認められた培養上清につき、ＡＴＩＩＩ、
マウスＩｇＧ及び免疫複合体のそれぞれとの反応をＥＬ
ＩＳＡ法により検定し、免疫複合体に対して特異的反応
が認められたハイブリドーマを限界希釈法によりクロー
ン化を行い、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ５
４２０１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２１）を作製した。☆
受
【書類名】 受託番号変更届
【提出日】 平成１０年９月２９日
【旧寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術
研究所
研究所
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１６４５９
【新寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術
研究所
研究所
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２１
【旧寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術
研究所
研究所
【旧受託番号】 ＦＥＲＭ Ｐ−１６４６０
【新寄託機関の名称】 工業技術院生命工学工業技術
研究所
研究所
【新受託番号】 ＦＥＲＭ ＢＰ−６５２２
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 深町 勇 茨城県那珂郡東海村村松2117 第一化学薬 品株式会社診断薬研究所東海研究グループ 内
Claims (5)
- 【請求項１】 測定対象の抗原（Ag）又は抗体（Ab1）
とこれらに対する抗体（Ab1）又は抗原（Ag）との反応
により得られる免疫複合体と、当該免疫複合体を形成し
た抗体に対して特異的に反応する抗体（Ab2）との反応
を用いる抗原（Ag）又は抗体（Ab1）の免疫学的測定方
法。 - 【請求項２】 測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体
（Ab1）を含有する試料に固相化した抗体（Ab1）又は抗
原（Ag）を添加して免疫複合体を形成させ、これに酵
素、放射性物質、蛍光物質又は化学発光物質で標識され
た当該免疫複合体を形成した抗体に対して特異的に反応
する抗体（Ab2）を反応させ、次いで固相中の標識活性
を測定することにより抗原（Ag）又は抗体（Ab1）を定
量するものである請求項１記載の免疫学的測定方法。 - 【請求項３】 測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体
（Ab1）を含有する試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を
添加して免疫複合体を形成させ、次いでこれに当該免疫
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）を加え、その反応による吸光度変化から抗原（A
g）又は抗体（Ab1）を定量するものである請求項１記載
の免疫学的測定方法。 - 【請求項４】 測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体
（Ab1）を含有する試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を
添加して免疫複合体を形成させ、次いでこれに当該免疫
複合体を形成した抗体に対して特異的に反応する抗体
（Ab2）を感作した担体を加え、その反応による吸光度
変化又は担体の凝集の程度から抗原（Ag）又は抗体（Ab
1）を定量するものである請求項１記載の免疫学的測定
方法。 - 【請求項５】 測定対象抗原（Ag）又は測定対象抗体
（Ab1）を含有する試料に抗体（Ab1）又は抗原（Ag）を
感作した担体を添加して免疫複合体を形成させ、次いで
これに当該免疫複合体を形成した抗体に対して特異的に
反応する抗体（Ab2）を加え、その反応による吸光度変
化又は担体の凝集の程度から抗原（Ag）又は抗体（Ab
1）を定量するものである請求項１記載の免疫学的測定
方法。
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP32111097A JPH11153599A (ja) | 1997-11-21 | 1997-11-21 | 免疫学的測定方法 |
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|---|---|---|---|
| JP32111097A JPH11153599A (ja) | 1997-11-21 | 1997-11-21 | 免疫学的測定方法 |
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|---|---|
| JPH11153599A true JPH11153599A (ja) | 1999-06-08 |
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|---|---|---|---|
| JP32111097A Pending JPH11153599A (ja) | 1997-11-21 | 1997-11-21 | 免疫学的測定方法 |
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