JPH11100331A - 薬物含有ポリマーミセルおよびその医薬製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 毒性の低減したポリエン系抗生物質の医薬製
剤の提供。 【解決手段】 製剤用担体として、ポリ（エチレンオキ
シド）−ブロック−ポリ（β−アルキルもしくはアラル
キルＬ−アスパルテート）およびポリ（エチレンオキシ
ド）−ブロック−ポリ（γ−アルキルもしくはアラルキ
Ｌ−グルタメート）からなる群より選ばれるブロックコ
ポリマーのポリマーミセルを用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は薬物を含有するポリ
マーミセルおよびその医薬製剤に関し、より具体的には
ポリエン系抗生物質の毒性を低減できるポリマーミセル
に関する。

【０００２】

【発明の背景】ポリエン系抗生物質（またはポリエンマ
クロライド類）は、真菌その他の真核細胞の細胞膜ステ
ロールと結合して膜流動性を変化させる結果、膜に障害
を与える作用を有することが知れている。そして、真菌
特有のエルゴステロールに対して選択性の高い親和性を
もつものは抗真菌剤として使用されている。なかでも、
最も選択毒性にすぐれており、ポリエン系抗生物質の典
型的な化合物であるアムホテリシンＢ（以下、ＡｍＢと
もいう）について、以下に概観してみる。

【０００３】ＡｍＢは、広域抗真菌性薬物であり、全身
性真菌疾患の治療に使用されている。免疫無防備状態
（易感染性）宿主では、これらの疾患は死をもたらす主
たる原因であり、さらにＡＩＤＳならびにガン治療や臓
器移植等における攻撃的化学療法に付随して増加してき
た疾患でもある。ＡｍＢは３０年間以上も使用されてお
り、新たな抗真菌剤が開発されているにもかかわらず、
いまだ全身性真菌疾患用の薬物として選択されている。
たとえば、ＡｍＢとデオキシコール酸塩との複合体の水
性溶液［たとえば、Fungizone（商標）、Bristol-Myers
Squibb］は深在性真菌症を治療するための注射剤とし
て使用されている。

【０００４】しかしながら、ＡｍＢの特定の製剤は全身
性真菌疾患治療薬として繁用されているものの、毒性、
特に腎毒性が強く、その上、一般的な倦怠感、貧血およ
び静脈炎を惹起することも知られている。また、ＡｍＢ
は水不溶性であり、希釈剤や輸液におけるその沈殿は急
性毒性に関連する可能性もある。このような観点から、
ＡｍＢの化学的な修飾により、その水溶性を高めること
が試みられているが、毒性を低減することに成功してい
ない。

【０００５】したがって、ＡｍＢを薬物担体で包み込む
ことにより、ＡｍＢの効能を改善すべく精力的な研究が
行われている。特に、この１０年間、脂質をベースとす
るＡｍＢ用担体が広範に検討され、それらのある種のも
のは、ＡｍＢの抗菌活性を維持したまま、その毒性を低
減することにある程度成功している。このような製剤に
おけるＡｍＢの毒性が低減される理由は不明であるが、
腎におけるＡｍＢ濃度が低いことが明らかにされている
［J. Brajtburg, et al., Clin. Microbiol. Rev. ９
（１９９６）ｐｐ.５１２ー５３１参照］。その他の提
案されているＡｍＢの製剤は、水中油乳濁質もしくは洗
剤のミセル系である。たとえば、C. Tasset, et al.,
J. Pharm. Pharmacol．４３（１９９１）ｐｐ.２９７−
３０２には、ポリオキシエチレングリコール（ＰＯＥ）
誘導体の混合ミセルを担体に使用した例が記載されてい
る。この報告によると、コレステロールのＰＯＥ誘導体
は、ＡｍＢを可溶化し、in vitro でのＡｍＢの抗真菌
活性を変化させることなく、in vitro および in vivo
でのＡｍＢの毒性を低減でき、そしてステアリン酸のＰ
ＯＥ誘導体もＡｍＢを可溶化し、かつ溶血活性を低減で
きることが教示されている。また、J. Barwicz, et a
l.，Antimicrob. Agents Chemother., ３６（１９９
２）、ｐｐ.２３１０−２３１５には、担体として、上
記デオキシコール酸ナトリウムを用いる Fungizone（商
標）の高い毒性はＡｍＢの凝集（または自己会合）に起
因する可能性があり、一方ラウリルスクロース（ＬＳ）
を担体として用い、ＬＳ対ＡｍＢの混合モル比を選ぶ
（例、ＬＳ／ＡｍＢ 約５０)と、ＡｍＢが媒体中で殆ど
単量体性の形態で存在し、ＡｍＢの毒性が低減すること
が示唆されている。

【０００６】以上のように、ＡｍＢ製剤のいくつかはＡ
ｍＢの毒性を低減することに成功しているが、高レベル
でＡｍＢを含有でき、しかも物理的に安定なＡｍＢ製剤
の提供には、必ずしも成功していない。

【０００７】一方、他の薬物の製剤に使用されている担
体のうち、興味深いものについて概観してみる。

【０００８】本発明者らは、薬物の可溶化および送達用
の担体として、ポリマーミセルの使用を研究してきた
［K. Kataoka, et al., J. Controlled Release ２４
（１９９３）ｐｐ.１１９−１３２；G. S. Kwon, et a
l., Adv. Drug Delivery Rev. １６（１９９５）ｐｐ.
２５９−３０９、他］。これらの論文によると、シェル
形成性ポリ（エチレンオキサイド）（以下、ＰＥＯとも
いう）ブロックと生分解性ポリマーであるコア形成性ポ
リ（Ｌ−アミノ酸）ブロックからなるジブロックコポリ
マー由来のポリマーミセルは、ナノサイズのコア／シェ
ル構造をとり、疎水性薬物、ピレン、ドキソルビシン
［アドリアマイシン（ＡＤＭ）とも称されている］およ
びインドメタシンを可溶化することが教示されている。
さらに、それらの論文には、コア形成性ブロックである
ポリ（Ｌ−アミノ酸）をＬ−アスパラギン酸で構築し、
そのβ−カルボキシル基を介してＡＤＭを共有結合せし
めたコンジュゲート（Conjugate）型のポリマーミセル
は、生体内での薬物の吸収、排泄、および組織（または
器官）の選択性において極めて興味深い性質を示すこと
も記載されている。G. S. Kwon, et al., Pharmaceuti
cal Research, １２（１９９５）ｐｐ.１９２−１９５
には、上記のような薬物が結合されたミセルとは異な
り、Ｌ−アスパラギン酸由来のブロックをポリ（β−ベ
ンジルＬ−アルパルテート）（以下、ＰＢＬＡともい
う）で構築したＰＥＯ−ＰＢＬＡのポリマーミセルがＡ
ＤＭを物理的に安定にミセル内に閉じ込めることがで
き、しかもＡＤＭの薬物動態に著しく影響を及ぼしうる
ことも記載されている。その上、この文献には、ＡＤＭ
がミセル内で自己会合していることも示唆されている。

【０００９】

【発明の構成】上記したように、脂質のリポソームまた
は洗剤の混合ミセルを利用したＡｍＢ製剤が提供され、
ＡｍＢ自体の毒性を低減できることが報告され、それら
の一部は臨床上使用されている。しかし、毒性を低減す
る一方で、製剤における薬物含有率を高め、しかも物理
的に安定なＡｍＢ製剤の提供については、依然として強
い要望がある。

【００１０】本発明者らは、かような要望を満たすため
に、上記のようなポリマーミセル系が担体として使用で
きるかについて、鋭意検討してきた。その結果、構造上
ＡｍＢは、アントラサイクリン系抗生物質ＡＤＭとは明
確に区別され、特に、両親媒性を示すような特異な物質
を有するにもかかわらず、ＰＥＯ−ＰＢＬＡからなるブ
ロックコポリマー由来のポリマーミセル中へ安定に閉じ
込められ、こうして得られる薬物含有ポリマーミセルは
薬物の徐放性を示すことが確認された。

【００１１】ところで、ＡＤＭはＰＥＯ−ＰＢＬＡミセ
ル中で自己会合することが知られている（上記、Kwon,
et al., Pharmaceutical Research, １２（１９９５）
ｐｐ.１９２−１９５参照）にもかかわらず、ＡｍＢを
充填したＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルは、ＡｍＢを単量体の
形態でミセル内に担持し、そして放出することができ、
しかもＡｍＢの毒性を有意に低減できることが、ここに
見出された。この毒性の低減は、ＡｍＢの高い毒性がＡ
ｍＢの自己会合物に起因するとの示唆がある（上記、J.
Barwicz, et al., Antimicrob. Agents Chemother.,
３６（１９９２）ｐｐ.２３１０−２３１５参照）こと
を考慮すれば理解できるであろう。さらに、このような
ＡｍＢとＰＥＯ−ＰＢＬＡ混合ミセル系の挙動は、Ａｍ
Ｂを初めとする広範なポリエン系抗生物質とＰＥＯ−ポ
リ（β−アルキルもしくはアラルキルＬ−アスパルテー
ト）またはＰＥＯ−ポリ（γ−アルキルもしくはアラル
キルＬ−グルタメート）系でも再現できる。

【００１２】したがって、本発明によれば、薬物を含有
するポリマーミセルであって、薬物がポリエン系抗生物
質であり、ポリマーがポリ（エチレンオキシド）−ブロ
ック−ポリ（β−アルキルもしくはアラルキルＬ−アス
パルテート）およびポリ（エチレンオキシド）−ブロッ
ク−ポリ（γ−アルキルもしくはアラルキルＬ−グルタ
メート）よりなる群から選ばれるブロックコポリマーで
あり、そしてポリエン系抗生物質が、好ましくは単量体
の形態で前記ブロックコポリマーのポリマーミセル内に
閉じ込められている、ことを特徴とするポリマーミセル
が提供される。かようなポリマーミセルは水性溶液中で
濾過滅菌できる程安定であり、ポリマーミセルのコアか
ら、長期にわたって薬物をその活性を保持したまま徐々
に放出し、その上、極めてサイズ分布の狭いナノサイズ
の粒状物として提供できるので、それらのポリマーミセ
ルの水性溶液もしくは分散体は、そのまま医薬製剤とし
て使用できる。

【００１３】また、本発明に従う薬物含有ポリマーミセ
ルは凍結乾燥された形態においても安定しており、その
ままで他の医薬成分と混合することができ、またこの凍
結乾燥体を水性媒体にもどすことで出発ポリマーミセル
と同等の挙動を示すポリマーミセル溶液（または分散
体）に再構成することもできる。こうして再構成される
溶液は高い薬物含有量で安定に維持することもできる。

【００１４】したがって、別の態様の本発明としては、
有効成分として前記薬物含有ポリマーミセルが凍結乾燥
状態で含まれている医薬製剤が提供される。

【００１５】さらなる態様の本発明としては、有効成分
として前記薬物含有ポリマーミセルが水性媒体に溶解も
しくは分散された状態で含まれている医薬製剤も提供さ
れる。

【００１６】

【本発明の具体的な記述】本発明に従うポリマーミセル
内に閉じ込められる薬物には、本発明の目的に沿う限
り、ポリエン系抗生物質に属するいかなる化合物も包含
される。ポリエン系抗生物質の具体的なものとしては、
下記式

【００１７】

【化２】

【００１８】で表されるアムホテリシンＢ（ＡｍＢ）、
下記式

【００１９】

【化３】

【００２０】で表されるナイスタチン、下記式

【００２１】

【化４】

【００２２】で表されるピマリジン、下記式

【００２３】

【化５】

【００２４】で表されるペンタマイシン等を挙げること
ができる。特に、最も選択毒性にすぐれるＡｍＢに関す
るポリマーミセルが好適である。

【００２５】本発明で用いることのできるポリマーは、
ＡＢ型ブロックコポリマーに属し、ポリマーブロックが
ポリ（エチレンオキシド）とポリ（β−アルキルもしく
はアラルキルＬ−アスパルテート）またはポリ（γ−ア
ルキルもしくはアラルキルＬ−グルタメート）からな
る。Ｌ−アスパルテートまたはＬ−グルタメートにおけ
るアルキルもしくはアラルキル基は、上記薬物を閉じ込
め、それらをゆっくり放出できるものであればいかなる
基であってもよい。かようなアルキル基の具体的なもの
としては、直鎖もしくは分岐のＣ_1-20アルキル、例えば
メチル、エチル、プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブ
チル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ヘキシル、
オクチル、デカニル、ウンデカニル、テトラデカニル、
ヘキサデカニル、オクタデカニルおよびエイコサニルを
挙げることができ、これらのうち一定の嵩高さを有する
ｔｅｒｔ−ブチル、オクチルテトラデカニル、ヘキサデ
カニルを好ましいものとして挙げるこができる。アラル
キル基は、Ｃ_1-3アルキル基の水素原子が１もしくは２
以上のアリール基で置換された基であって、特にベンジ
ル、ベンズヒドリルを代表的なものとして挙げることが
できる。これらのアルキルおよびアラルキル基のうち、
特に好ましいものはベンジル基である。一方、アミノ酸
に由来するブロックは、ポリ（Ｌ−アスパルテート）が
より安定なポリマーを与えるので好ましい。

【００２６】したがって、本発明において、ポリ（エチ
レンオキシド）−ブロック−ポリ（β−アルキルもしく
はアラルキルＬ−アスパルテート）または−ポリ（γ−
アルキルもしくはアラルキルＬ−グルタメート）の好ま
しいものは、上述のＰＥＯ−ＰＢＬＡからなるブロック
コポリマーである。以下、本発明で使用するＡＢ型ブロ
ックコポリマーは、ＰＥＯ−ＰＢＬＡからなるブロック
コポリマーを引用して説明する。なお、「ＰＥＯ−ＰＢ
ＬＡからなる」にいう「からなる」とは、下記一般式：

【００２７】

【化６】

【００２８】で表され、すなわち、ＰＥＯ−ＰＢＬＡの
両末端または片末端に、あるいはＰＥＯとＰＢＬＡとの
間に、本発明に従うポリマーミセルを形成する際に、悪
影響を及ぼさないどのような基が共有結合してもよいこ
とを意味する。具体的には、ＰＥＯの末端には、エチレ
ンオキシドを重合する際に使用されるイニシエーター由
来の基または水酸基の保護基（上記式中のＸに対応す
る）、たとえばアセタールが結合していてもよく、また
ＰＥＯとＰＢＬＡとの間には、ＰＥＯブロックを形成す
るとともに、ＰＢＬＡブロックを形成するためのイニシ
エーターとして作用しうるように、たとえばイミノ基
（−ＮＨ−）（上記式中のＹに対応する）が存在してい
てもよい。さらに、ＰＢＬＡの末端のβ−ベンジルアス
パルテートのアミノ基はペプチド合成の分野で使用され
るような、いずれかのアミノ保護基（上記式中のＺに対
応する）により保護されていてもよい。なお、かような
保護基を有しない場合、Ｚは水素原子を示す。

【００２９】ＰＥＯ−ＰＢＬＡの各ブロックにおけるＰ
ＥＯおよびＰＢＬＡの分子量は、それらがポリマーミセ
ルを形成しうるものであればどのような範囲にあっても
よい。したがって、限定されるものでないが、ｍは、２
〜１０,０００、好ましくは２０〜１,０００、より好ま
しくは４０〜４００のいずれかの整数である。一方、ｎ
は、２〜１０,０００、好ましくは２０〜１,０００、よ
り好ましくは１０〜１００のいずれかの整数である。

【００３０】たとえば、式（Ｉ）：

【００３１】

【化７】

【００３２】で表されるＰＥＯ−ＰＢＬＡのＰＥＯブロ
ックが約１２,０００ｇ／ｍｏｌ（ｍ＝約２７０）とな
り、ＰＢＬＡブロックが約３,０００ｇ／ｍｏｌ（ｎ＝
約１２）となるように、ｎおよびｍが一定の整数をとる
場合、このようなブロックコポリマーの薬物含有ポリマ
ーミセルは、約２０ｎｍ〜約３０ｎｍの平均粒径をと
る。本発明に従う、ポリマーミセルの平均粒径は、ミセ
ルを構築するブロックコポリマーの種類およびその量に
応じて変動し、平均約５〜ｎｍ〜約１０００ｎｍ、好ま
しくは約１０ｎｍ〜約５００ｎｍ、より好ましくは約２
０ｎｍ〜約１００ｎｍを有する。

【００３３】このような薬物含有ポリマーミセルは、Ａ
ｍＢ／ＰＥＯ−ＰＢＬＡのモル比を、１.０以下とする
ことができ、製剤中の薬物含有密度は可能な限り高い方
が望ましいが、そのモル比が１を超えると Fungizone
（商標）のように溶血活性を示すこともあるので注意が
必要であろう。

【００３４】以上のように、本発明に従う、薬物含有ポ
リマーミセルは、ナノサイズのコア／シェル構造をと
り、濾過滅菌ができる物理的な安定性を有している。ま
た、理論により拘束されるものでないが、本発明の薬物
含有ポリマーミセルは薬物が、好ましくは単量体の形態
のまま充填された（または閉じ込められた）コアが親水
性シェルによりマスクされている点に特徴がある。さら
に、これらのミセルは極めて安定であるにもかかわら
ず、徐々に個々のポリマー、さらにはモノマーに解裂さ
れうる［上記、K. Kataoka, et al., G. S. Kwon, et.
al., 参照］。

【００３５】その上、本発明に従う、薬物含有ポリマー
ミセルは、水性環境下に置いたとき、そのコアから薬物
を単量体の形態で徐々に放出することができる。

【００３６】本発明に従う、薬物含有ポリマーミセルの
さらなる特徴は、凍結乾燥したものが水溶液に数秒間で
容易に溶解できる特性をもつことにある。たとえば、Ｐ
ＥＯ−ＰＢＬＡもＡｍＢも、個別に水溶液中に置いた場
合、両者とも水に難溶性であることを考慮すれば、本発
明に従う、凍結乾燥された薬物含有ポリマーミセルは極
めて特異な性質を示すといえる。こうして、凍結乾燥ポ
リマーミセルを使用すれば、高濃度のＡｍＢ溶液を得る
ことが可能になる。たとえば、水溶液中のＡｍＢ濃度は
５.０ｍｇ／ｍｌ（ＡｍＢ自体の溶解度の約１０,０００
倍に相当）とすることができる。

【００３７】上記のように、本発明に従う薬物含有ポリ
マーミセルを凍結乾燥後、再度水溶液に溶解（再構成）
した場合でも、ポリマーミセルの形態は完全な状態に維
持されており、そのコアからの薬物放出挙動も凍結乾燥
前のものと実質的な変化はみられない。また、このよう
なミセルは、１０μｇ／ｍｌ濃度でも、赤血球に対する
溶血作用を示さない。

【００３８】本発明で使用されるブロックコポリマー
は、それ自体既知の方法に従って、製造することができ
る［たとえば、M. Yokoyama, et al., Bioconjugate Ch
em. ３（１９９２）ｐｐ.２９１−３０１参照］。具体
的には、予め製造したα−メチル−ω−アミノ−ＰＥ
Ｏ：

【００３９】

【化８】

【００４０】をイニシエーターとし、対応するアスパラ
ギン酸β−エステルのＮ−カルボキシ酸無水物（ＮＣ
Ａ）：

【００４１】

【化９】

【００４２】（Ｒは、アルキルもしくはアラルキル基を
示す。）を反応させることにより得ることができる。

【００４３】一方、アミノ酸ブロックとしてポリ（γ−
アルキルもしくはアラルキルＬ−グルタメート）をもつ
ブロックコポリマーは、例えばZ. Hruska et al., Poly
mer３４（１９９３）ｐ．１３３３−１３３５に記載の
方法またはその改良方法に従って得ることができる。

【００４４】上記で提供される薬物含有ポリマーミセル
はそれらを有効成分とする医薬製剤に調製することがで
きる。たとえば、非経口投与用として調製する場合は、
薬物含有ポリマーミセルを、必要により等張性やｐＨを
調節するために糖類や、生理学的に許容される緩衝剤を
加えた生理食塩水に溶解もしくは分散させてもよい。さ
らに、必要により、野菜油（オリーブ油、ひまし油、ご
ま油等）をこのような溶液製剤を静脈注射する場合に
は、患者の年齢、体重、疾患の状態に応じ、医師等の専
門家によって総用量が決定されるが、通常、ＡｍＢレベ
ルで５０〜１００μｇ／ｍｌの溶液として投与される。
また、このような溶液製剤は、凍結乾燥された薬物含有
ポリマーミセルを、使用の時期に合わせて溶液に再構成
したものであってもよい。経口投与剤は、特に凍結乾燥
された薬物含有ポリマーミセルを、必要により経口投与
剤の調製に常用されている希釈剤もしくは賦形剤と混合
して調製することができる。このような経口投与剤は錠
剤、カプセル、顆粒剤等に調製することができ、その際
使用できる賦形剤としては、たとえば充填剤および増量
剤として、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコー
ス、マンニトールおよびケイ酸など、結合剤としてカル
ボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンおよ
びポリビニルピロリドンなど、湿潤剤として、グリセロ
ールなど、崩壊剤として、寒天−寒天、炭酸カルシウム
および炭酸ナトリウムなど、吸収剤としてカオリンおよ
びベントナイトなど、ならびに潤滑剤として、タルク、
ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムお
よび固体状ポリエチレングリコールなど、を挙げること
ができる。

【００４５】

【実施例】以下、薬物としてＡｍＢを、ポリマーとして
ＰＥＯ−ＰＢＬＡを使用して調製したポリマーミセルの
具体例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものでない。

【００４６】例１：ＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル
の調製 （１） この例で使用する上記式（Ｉ）で表されるＰＥ
Ｏ−ＰＢＬＡは、M．Yokoyama，et al.，Bioconjugate
Chem．３（１９９２）ｐｐ．２９１−３０１に記載の方
法に従って製造したものであって、それぞれＰＥＯブロ
ックが１２,０００ｇ／ｍｏｌであり、ＰＢＬＡブロッ
クが３,０００ｇ／ｍｏｌである分量子であった。

【００４７】ＰＥＯ−ＰＢＬＡ（２０ｍｇ）を４.０ｍ
ｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に加温下（４０
℃）で５分間かけて溶解してポリマー溶液とした。所定
量のＡｍＢ（Dumex，Denmark）を前記ポリマー溶液に加
え、撹拌して溶解した。この溶液を蒸留水（ｐＨ＝１
１.３に調節）２Ｌに対して３回透析した（Spectra-po
r，ＭＷＣＯ １２,０００〜１４,０００ｇ／ｍｏｌ使
用）。透析時間は４０時間であった。その後、透析媒体
を１.０ＮＨＣｌでｐＨ５.６に中和した。透析バッグ中
の等張性はデキストロースで調節した。透析バッグ中の
溶液を取り出し、０.２２μｍフィルターで濾過し、４
℃に貯蔵した。

【００４８】（２） 凍結乾燥ポリマーミセルの調製 上記（１）の透析の代わりに、等張性を調節することな
く透析を行い、次いで０.２２μｍフィルターで濾過し
た後、凍結乾燥したこと以外、例１の操作をくり返し
た。

【００４９】上記透析工程の概念図を図１に示す。

【００５０】なお、この工程中、ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセ
ルが自己集成中にＡｍＢの可溶化が起こり、透析を通し
てＤＭＦがアルカリ水溶液で交換される。水溶液をｐＨ
１１.３に保持することにより取り込まれ方が不完全な
ＡｍＢはイオン化され、透析によって除去される。使用
するＡｍＢの初期量を２.０ｍｇおよび４.０ｍｇとした
場合、ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルはＡｍＢを、それぞれ５
７μｇ／ｍｌおよび１４１μｇ／ｍｌのレベルで可溶化
した。収率、その他のデータを下記表Ｉにまとめて示
す。

【００５１】

【表１】

【００５２】例２：ＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル
溶液のＵＶ／ＶＩＳスペクトルの吸収 上記例１（１）で調製したＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡ
ミセルの水溶液（０.０２４重量／重量％）および Fung
izone（商標）（０.００２１５重量／重量％）をSpectr
onic ３０００紫外可視分光光度計（Milton Ray）で測
定したスペクトログラムを図２し示す。Fungizone が低
波長側に主要吸収を有するのに対し、ＡｍＢ含有ＰＥＯ
−ＰＢＬＡミセル溶液は、今まだ高波長側に主要吸収を
有し、ＡｍＢは自己会合していないことが確認できる。

【００５３】例３：ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルの透過型電
子顕微鏡（ＴＥＭ）による検討 ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルの逆染色法を略記すれば、次の
とおりである。ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル溶液（約１.０
ｍｇ／ｍｌ、水中）の１滴を膜被覆されたグリッド上に
置いた。過剰の液体をグリッド表面から濾紙（Whatma
n，No.１）を用いて除去した。すぐさま、１％リンタン
グステン酸の１滴を前記表面に加えた。１分後、過剰の
液体を除去し、表面を通気乾燥し、グリッドを透過電子
顕微鏡（Hitachi H7000）に装填した。１８,０００倍の
倍率（７５ｋＶ）で写真をとった。ＴＥＭはポリマーミ
セルとしてナノ範囲のコロイドを解像できる。上記写真
を図３に示す。写真は球形のＰＥＯ−ＰＢＬＡを明らか
に示し、ポリマーミセルに対する初期の動的光散乱法の
結果と整合する。ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルの平均直径
は、ＴＥＭ写真中のポリマーミセル１００個を無作為に
選択し、直接測定した結果の平均値である。薬剤を含有
しないミセルと薬剤を含有するミセルの平均直径は、そ
れぞれ２０.０±３.９ｎｍと２５.８±４.２ｎｍであっ
た。これらのＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルのサイズ分布は、
極めて狭いことがわかる。 ポリマーミセルとは独立
に、ＡｍＢ自体（ＰＥＯ−ＰＢＬＡを使用しない）のミ
セルを、上記透析法で得たが、これらのミセルの平均直
径は１２.９±２.４ｎｍであった。 例４：ＡｍＢによる溶血性 雄のスプラーグ・ドウレイ（Sprague-Dawley）ラットか
ら、予め酸性クエン酸デキストロースを満していたシリ
ンジを用い、心臓穿刺により血液を集めた。全血を遠心
（２０００ｒｐｍ）し、上清をピペットで除去した。赤
血球細胞（ＲＢＣ）を、等張性ＰＢＳで希釈した。これ
は、２０μｇ／ｍｌの Fungizone（商標）存在下におい
て、５７６ｎｍの吸光度が０.４０を示す。

【００５４】３７℃において、１００ストローク／分の
水浴中で３０分間、各濃度のＡｍＢとＲＢＣ溶液（５.
０ｍｌ）をインキュベートし、溶血性を試験した。溶血
は低温（℃）にすることにより停止し、次いで溶解され
ていないＲＢＣを２０秒間遠心して除去した。上清を集
め、５７６ｎｍにおけるＵＶ／ＶＩＳ分光法でヘモグロ
ビンについて分析した。溶血されたＲＢＣの百分率は、
次の式 溶血(％)＝１００×(Ａｂｓ−Ａｂｓ₀)／(Ａｂｓ₁₀₀−
Ａｂｓ₀) 上等式中、Ａｂｓ、Ａｂｓ₀およびＡｂｓ₁₀₀は、それぞ
れ試料、ＡｍＢ不含対照および２０μｇ／ｍｌの Fungi
zone（商標）の存在下の対照である。

【００５５】結果：ＰＥＯ−ＰＢＬＡ中に閉じ込めたＡ
ｍＢは、ＡｍＢレベルが１０μｇ／ｍｌでさえも、Ａｍ
Ｂの溶血作用を劇的に低下する。デオキシコール酸ナト
リウムでＡｍＢを可溶化した場合［Fungizone（商
標）］、ＡｍＢは強い溶血性を示し、約３.０μｇ／ｍ
ｌのレベルで１００％溶血に到る（図４参照）。ＡｍＢ
ミセルは、デオキシコール酸ナトリウムが共存しないた
め、Fungizone（商標）より若干溶血が少ない。ＰＥＯ
−ＰＢＬＡミセル中に閉じ込めたＡｍＢは、３０分を超
え、５.５時間目でも、３.０μｇ／ｍｌのレベルでは全
く溶血を起こさなかった。このことは、ＰＥＯ−ＰＢＬ
ＡミセルからのＡｍＢの放出が遅いことを示す（図
５）。ＡｍＢか閉じ込められたＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル
は、ＡｍＢ／ＰＥＯ−ＰＢＬＡのモル比が０.４０およ
び１.０のいずれにおいても溶血作用を示していない
（図５）。

【００５６】ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルからのＡｍＢの放
出が遅いことは、それらのコアが固体のような性質を示
すことに起因する可能性がある。また、溶血作用を欠く
ことは、ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルからの単量体性ＡｍＢ
の放出を反映している可能性もある。単量体性ＡｍＢ
は、凝集された状態のＡｍＢより溶血性が低いことが知
られている（前記 J．Brajtburg et．al.，参照）。な
お、ＡｍＢ／ＰＥＯ−ＰＢＬＡのモル比が１.０を超え
ると、Fungizone（商標）のような溶血性を示す。一
方、担体に用いるＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルは、０.７０
ｍｇ／ｍｌのレベルでさえも、全く溶血を起こさない
（図６）。

【００５７】＜凍結乾燥されたＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢ
ＬＡミセルの特性＞例１（２）で得られたＡｍＢ含有Ｐ
ＥＯ−ＰＢＬＡミセル（なお、「含有」および「充填」
は「閉じ込められた」と互換可能に使用している）は、
水溶液に数秒以内で溶解する。ＰＥＯ−ＰＢＬＡおよび
ＡｍＢの溶解性とともに、表ＩＩにまとめて示す。

【００５８】

【表２】

【００５９】溶液中の高ＡｍＢレベル（５.０ｍｇ／ｍ
ｌにおいて）は、ＡｍＢの溶解度の１０,０００倍を示
すので、上記ミセルは、水溶液に対する溶解度は、Ａｍ
Ｂ自体の１０,０００倍以上である。また、これらのミ
セルのＴＥＭ写真を図７に示す。これらのサイズ分布も
また、ＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルの二次凝集が
起こっていないことを示す。

【００６０】例５：ＡｍＢの抗真菌活性 ブロス希釈法により、ＡｍＢ（比較）、Fungizone（商
標）（比較）、ＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセルおよ
びＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル（対照）の下記表ＩＩＩに示
す菌に対する抗菌活性を測定した。結果を最小阻止濃度
で示す。

【００６１】

【表３】

【００６２】本発明のＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセ
ルは、ＡｍＢの抗菌活性に悪影響を及ぼすことなく、む
しろその活性を高めることがわかる。

【図面の簡単な説明】

【図１】透析によるＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル
の調製工程の概念図である。

【図２】例１（１）で調製したＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢ
ＬＡミセルの水溶液および Fungizone のＵＶ／ＶＩＳ
スペクトラムを示す図である。

【図３】ＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル（粒子）の
透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）図に代わる写真である（上
部）。下部は、ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル（白丸）、Ａｍ
Ｂ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル（四角）およびＡｍＢミ
セル（黒丸）のサイズ分布を示すグラフである。

【図４】Fungizone（黒ひし型）、ＡｍＢミセル（四
角）およびＡｍＢ含有ＰＥＯ−ＰＢＬＡミセル（丸）と
しての各種ＡｍＢレベルにおけるラット赤血球細胞（Ｒ
ＢＣ）の溶血性を示すグラフである。ＡｍＢ含有ＰＥＯ
−ＰＢＬＡミセルのＡｍＢ／ＰＥＯ−ＰＢＬＡは０.４
０（モル比）である。

【図５】Fungizone およびＡｍＢ含有ＰＥＯ-ＰＢＬＡ
ミセルのＡｍＢ３.０μｇ／ｍｌレベルでの経時的なラ
ットＲＢＣの溶血性を示すグラフである。後者のＡｍＢ
／ＰＥＯ−ＰＢＬＡのモル比は、０.４および１.０であ
る。

【図６】ＰＥＯ−ＰＢＬＡ、Fungizone としてのＡｍＢ
およびデオキシコール酸ナトリウムの各種レベルにおけ
るラットＲＢＣの溶血性を示すグラフである。

【図７】凍結乾燥粉末を再構成した後のＡｍＢ含有ＰＥ
Ｏ−ＰＢＬＡミセル（粒子）のＴＥＭ図に代わる写真で
ある（上部）。下部は、凍結乾燥前のＡｍＢ含有ＰＥＯ
−ＰＢＬＡミセルのサイズ分布（黒丸）と凍結乾燥のそ
れら（白丸）のサイズ分布を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ボング・ヨー アメリカ合衆国ウイスコンシン州53719マ デイソン・モレインビユードライブ305 1124

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 薬物を含有するポリマーミセルであっ
   て、 薬物がポリエン系抗生物質であり、 ポリマーがポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ
   （β−アルキルもしくはアラルキルＬ−アスパルテー
   ト）およびポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ
   （γ−アルキルもしくはアラルキルＬ−グルタメート）
   よりなる群から選ばれるブロックコポリマーであり、そ
   して ポリエン系抗生物質が前記ブロックコポリマーの
   ポリマーミセル内に閉じ込められている、ことを特徴と
   するポリマーミセル。
2. 【請求項２】 ポリエン系抗生物質が単量体の形態でポ
   リマーミセル内に閉じ込められている請求項１記載のポ
   リマーミセル。
3. 【請求項３】 ポリマーが下記一般式： 【化１】 （上式中、Ｘはポリ（エチレンオキシド）ブロックを誘
   導するためのイニシエーターに由来する基であり、Ｙは
   ポリ（β−アルキルもしくはアラルキルＬ−アスパルテ
   ート）またはポリ（γ−アルキルもしくはアラルキルＬ
   −グルタメート）を誘導するためのイニシエーターとし
   て作用しうる基であり、Ｚは水素原子またはアミノ保護
   基であり、Ｒはアルキル基またはアラルキル基であり、
   ｍおよびｎは独立して、２〜１０,０００のいずれかの
   整数であり、そしてｐは整数１または２である）で表さ
   れる請求項１または２のいずれかに記載のポリマーミセ
   ル。
4. 【請求項４】 ポリエン系抗生物質がアムホテリシンＢ
   （ＡｍＢ）であり、そしてポリマーがポリ（エチレンオ
   キシド）−ブロック−ポリ（β−ベンジルＬ−アスパル
   テート）である請求項１〜３のいずれかに記載のポリマ
   ーミセル。
5. 【請求項５】 ポリマーミセルの平均粒径が５ｎｍ〜１
   ０００ｎｍである請求項１〜４のいずれかに記載のポリ
   マーミセル。
6. 【請求項６】 ポリマーに対する薬物のモル比が１以下
   である請求項１〜５のいずれかに記載のポリマーミセ
   ル。
7. 【請求項７】 有効成分として、請求項１〜６のいずれ
   かに記載のポリマーミセルが凍結乾燥された状態で含ま
   れている医薬製剤。
8. 【請求項８】 有効成分として、請求項１〜６のいずれ
   かに記載のポリマーミセルが水性媒体に溶解もしくは分
   散された状態で含まれている医薬製剤。
9. 【請求項９】 薬物が１０μｇ／ｍｌ〜５.０ｍｇ／ｍ
   ｌの濃度範囲にある請求項８記載の医薬製剤。