JPH107700A - スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチド - Google Patents
スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチドInfo
- Publication number
- JPH107700A JPH107700A JP8163287A JP16328796A JPH107700A JP H107700 A JPH107700 A JP H107700A JP 8163287 A JP8163287 A JP 8163287A JP 16328796 A JP16328796 A JP 16328796A JP H107700 A JPH107700 A JP H107700A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- amino acid
- resin
- residue
- cedar pollen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 スギ花粉症の治療及び予防に有用なペプチド
を提供する。 【解決手段】 配列番号１等のアミノ酸配列から選ばれ
るペプチドであり、スギ花粉症患者末梢血Ｔリンパ球と
反応することを特徴とするペプチドまたはその誘導体、
及び該ペプチドまたはその誘導体を２種以上組み合わせ
てなる、スギ花粉症の治療または予防用組成物。 配列番号１ 配列の長さ：３０アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号１）
を提供する。 【解決手段】 配列番号１等のアミノ酸配列から選ばれ
るペプチドであり、スギ花粉症患者末梢血Ｔリンパ球と
反応することを特徴とするペプチドまたはその誘導体、
及び該ペプチドまたはその誘導体を２種以上組み合わせ
てなる、スギ花粉症の治療または予防用組成物。 配列番号１ 配列の長さ：３０アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号１）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はスギ花粉症の治療ま
たは予防に有用なペプチドまたはその誘導体に関する。
たは予防に有用なペプチドまたはその誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】スギ花
粉症の患者は、国民の約一割ともいわれ、スギ花粉の大
量飛散と大気汚染とにより年々増加の傾向にあり、その
対策が求められている。
粉症の患者は、国民の約一割ともいわれ、スギ花粉の大
量飛散と大気汚染とにより年々増加の傾向にあり、その
対策が求められている。
【０００３】スギ花粉症は、スギ花粉粒子中に含まれる
抗原性物質により引き起こされるアレルギー性疾患で、
くしゃみ、鼻水、鼻閉等の鼻炎症状と目の充血等の結膜
炎症状をともなう。スギ花粉症患者は、体内にスギ花粉
抗原特異的なＩｇＥ抗体を多く持つため、このＩｇＥ抗
体がスギ花粉抗原とともに肥満細胞に結合することによ
り、細胞内からヒスタミン、ロイコトリエン等のケミカ
ルメディエーターが放出され、これらが鼻や目の粘膜組
織を刺激して発症する（信太ら、図説スギ花粉症、金原
出版、1991）。
抗原性物質により引き起こされるアレルギー性疾患で、
くしゃみ、鼻水、鼻閉等の鼻炎症状と目の充血等の結膜
炎症状をともなう。スギ花粉症患者は、体内にスギ花粉
抗原特異的なＩｇＥ抗体を多く持つため、このＩｇＥ抗
体がスギ花粉抗原とともに肥満細胞に結合することによ
り、細胞内からヒスタミン、ロイコトリエン等のケミカ
ルメディエーターが放出され、これらが鼻や目の粘膜組
織を刺激して発症する（信太ら、図説スギ花粉症、金原
出版、1991）。
【０００４】現在、スギ花粉症の治療には、抗ヒスタミ
ン剤、抗アレルギー剤、ステロイド剤といった薬物療法
が主に行われている。一方、スギ花粉より抽出した抗原
を投与する減感作療法も行われ、根本的治療法として期
待されている。減感作療法を行うと、抗原特異的ＩｇＥ
抗体の減少、ケミカルメディエーターの遊離の減少ある
いは遮断抗体の増加にともないアレルギー症状が軽減さ
れる（八倉隆保、免疫学４、195-210 、中山書店、198
2）。
ン剤、抗アレルギー剤、ステロイド剤といった薬物療法
が主に行われている。一方、スギ花粉より抽出した抗原
を投与する減感作療法も行われ、根本的治療法として期
待されている。減感作療法を行うと、抗原特異的ＩｇＥ
抗体の減少、ケミカルメディエーターの遊離の減少ある
いは遮断抗体の増加にともないアレルギー症状が軽減さ
れる（八倉隆保、免疫学４、195-210 、中山書店、198
2）。
【０００５】減感作のメカニズムについては、抗原に特
異的に反応するＴ細胞が減少あるいは免疫不応答（アナ
ジー）の状態になることが重要であるとされている(Bri
ner,T.J.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90;7608-761
2,1993)。Ｔ細胞がアナジーの状態では、ＩＬ−４産生
が低下し、Ｂ細胞からのＩｇＥ産生を誘導しない。ま
た、アレルギー反応の免疫調節をしているＣＤ４陽性Ｔ
細胞のリンフォカイン産生パターンが「IL−４優勢（Th
２型）」から「 IFN−γ優勢（Th１型）」に転換する(W
iereng,E.A.et al.,J.Immunology,144;4651-4656,199
0)。
異的に反応するＴ細胞が減少あるいは免疫不応答（アナ
ジー）の状態になることが重要であるとされている(Bri
ner,T.J.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90;7608-761
2,1993)。Ｔ細胞がアナジーの状態では、ＩＬ−４産生
が低下し、Ｂ細胞からのＩｇＥ産生を誘導しない。ま
た、アレルギー反応の免疫調節をしているＣＤ４陽性Ｔ
細胞のリンフォカイン産生パターンが「IL−４優勢（Th
２型）」から「 IFN−γ優勢（Th１型）」に転換する(W
iereng,E.A.et al.,J.Immunology,144;4651-4656,199
0)。
【０００６】これまでの減感作治療剤は、スギ花粉から
精製した抗原蛋白を使用しており、アナフィラキシーを
誘発する危険性があるため、低濃度に希釈して慎重に投
与する必要があった。しかし、Ｔ細胞のアナジーの誘導
には、抗原蛋白そのものを使用しなくとも、Ｔ細胞エピ
トープペプチドのみで可能であり、なおかつ、アナフィ
ラキシーの危険性が低減する。すなわち、スギ花粉症に
対して、スギ花粉抗原特異的なＴ細胞エピトープペプチ
ドが有用な減感作治療剤になると期待される。抗原のＴ
細胞エピトープを解析するためには、抗原の構造が明ら
かである必要がある。スギ花粉の主要抗原は、分子量約
40kDa の塩基性蛋白CryjＩであることが同定され(Yasue
da,H.et al.,J.Allergy Clin. Immunol.,71;77-86,198
3) 、さらに、第二の抗原として、分子量37kDa のCryjI
Iが存在することが報告されている(Taniai M.et al.,FE
BS Letters,239;329-332,1988) 。CryjＩの構造は、ｃ
ＤＮＡクローニングによりその全アミノ酸配列が解明さ
れ（特開平6-197768号公報、WO9301213)、同様に、Cryj
IIの構造も解明された(WO9411512) 。
精製した抗原蛋白を使用しており、アナフィラキシーを
誘発する危険性があるため、低濃度に希釈して慎重に投
与する必要があった。しかし、Ｔ細胞のアナジーの誘導
には、抗原蛋白そのものを使用しなくとも、Ｔ細胞エピ
トープペプチドのみで可能であり、なおかつ、アナフィ
ラキシーの危険性が低減する。すなわち、スギ花粉症に
対して、スギ花粉抗原特異的なＴ細胞エピトープペプチ
ドが有用な減感作治療剤になると期待される。抗原のＴ
細胞エピトープを解析するためには、抗原の構造が明ら
かである必要がある。スギ花粉の主要抗原は、分子量約
40kDa の塩基性蛋白CryjＩであることが同定され(Yasue
da,H.et al.,J.Allergy Clin. Immunol.,71;77-86,198
3) 、さらに、第二の抗原として、分子量37kDa のCryjI
Iが存在することが報告されている(Taniai M.et al.,FE
BS Letters,239;329-332,1988) 。CryjＩの構造は、ｃ
ＤＮＡクローニングによりその全アミノ酸配列が解明さ
れ（特開平6-197768号公報、WO9301213)、同様に、Cryj
IIの構造も解明された(WO9411512) 。
【０００７】そこで、本発明はスギ花粉抗原CryjＩの 3
53アミノ酸全領域にわたるオーバーラップペプチドを使
用し、スギ花粉症患者の末梢血Ｔリンパ球と反応するス
ギ花粉抗原のＴ細胞エピトープを解明し、スギ花粉症の
治療及び予防に有用なペプチドを提供することを目的と
する。
53アミノ酸全領域にわたるオーバーラップペプチドを使
用し、スギ花粉症患者の末梢血Ｔリンパ球と反応するス
ギ花粉抗原のＴ細胞エピトープを解明し、スギ花粉症の
治療及び予防に有用なペプチドを提供することを目的と
する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、スギ花粉抗
原中のＴ細胞エピトープペプチドを同定するため、スギ
花粉抗原CryjＩの 353アミノ酸全領域にわたるオーバー
ラップペプチドを合成し、スギ花粉症患者の末梢血Ｔリ
ンパ球と反応するペプチドを見出した。
原中のＴ細胞エピトープペプチドを同定するため、スギ
花粉抗原CryjＩの 353アミノ酸全領域にわたるオーバー
ラップペプチドを合成し、スギ花粉症患者の末梢血Ｔリ
ンパ球と反応するペプチドを見出した。
【０００９】即ち、本発明は、配列番号１〜７で表され
るアミノ酸配列から選ばれるペプチドであり、スギ花粉
症患者末梢血Ｔリンパ球と反応することを特徴とするペ
プチドまたはその誘導体に関する。
るアミノ酸配列から選ばれるペプチドであり、スギ花粉
症患者末梢血Ｔリンパ球と反応することを特徴とするペ
プチドまたはその誘導体に関する。
【００１０】また、本発明は、上記のペプチドまたはそ
の誘導体を２種以上組み合わせてなる、スギ花粉症の治
療または予防に用いられる組成物に関する。
の誘導体を２種以上組み合わせてなる、スギ花粉症の治
療または予防に用いられる組成物に関する。
【００１１】強いＴリンパ球活性化能を持つペプチド
は、そのエピトープペプチドを認識するＴリンパ球の免
疫不応答を誘導する能力も高く、そのペプチドの投与に
より抗原蛋白に対する反応性も抑制できるといわれてい
る(O'Hehir,R.e.et al,Eur.J.Clin.Invest.,23;763-77
2,1993)。このように強い活性を持つＴ細胞エピトープ
は、スギ花粉症患者のスギ花粉抗原特異的Ｔ細胞の免疫
不応答を誘導し、サイトカインバランスを「IL−４優
勢」から「 IFN−γ優勢」へと転換させて、スギ花粉症
の治療及び予防に用いる新しい減感作治療剤として使用
できる。
は、そのエピトープペプチドを認識するＴリンパ球の免
疫不応答を誘導する能力も高く、そのペプチドの投与に
より抗原蛋白に対する反応性も抑制できるといわれてい
る(O'Hehir,R.e.et al,Eur.J.Clin.Invest.,23;763-77
2,1993)。このように強い活性を持つＴ細胞エピトープ
は、スギ花粉症患者のスギ花粉抗原特異的Ｔ細胞の免疫
不応答を誘導し、サイトカインバランスを「IL−４優
勢」から「 IFN−γ優勢」へと転換させて、スギ花粉症
の治療及び予防に用いる新しい減感作治療剤として使用
できる。
【００１２】従って、本発明は、スギ花粉症の減感作治
療剤としてのＴ細胞エピトープペプチドを提供する。
療剤としてのＴ細胞エピトープペプチドを提供する。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明は、配列番号１〜７で表さ
れるアミノ酸配列を有するペプチドがスギ花粉抗原のＴ
細胞エピトープペプチドであることを見出したものであ
り、これらのペプチドをスギ花粉症の減感作治療剤とし
て使用する場合には、それらのアミノ酸配列から選ばれ
るペプチドまたはその誘導体であってもよく、また、そ
れらのペプチドまたはその誘導体を組み合わせてなる組
成物であってもよい。
れるアミノ酸配列を有するペプチドがスギ花粉抗原のＴ
細胞エピトープペプチドであることを見出したものであ
り、これらのペプチドをスギ花粉症の減感作治療剤とし
て使用する場合には、それらのアミノ酸配列から選ばれ
るペプチドまたはその誘導体であってもよく、また、そ
れらのペプチドまたはその誘導体を組み合わせてなる組
成物であってもよい。
【００１４】本発明においてペプチドの誘導体として
は、ペプチドがスギ花粉抗原特異的Ｔ細胞の免疫不応答
を誘導する能力を維持するならば、一部アミノ酸の他の
アミノ酸への置換、例えばシステイン残基をアラニン残
基へ、Ｌ体のアミノ酸からＤ体のアミノ酸への置換、ま
たは末端アミノ酸のアセチル化、アミド化、ポリオキシ
エチレングリコール付加等をした誘導体も使用可能であ
る。
は、ペプチドがスギ花粉抗原特異的Ｔ細胞の免疫不応答
を誘導する能力を維持するならば、一部アミノ酸の他の
アミノ酸への置換、例えばシステイン残基をアラニン残
基へ、Ｌ体のアミノ酸からＤ体のアミノ酸への置換、ま
たは末端アミノ酸のアセチル化、アミド化、ポリオキシ
エチレングリコール付加等をした誘導体も使用可能であ
る。
【００１５】本発明のペプチドの合成法とＴリンパ球活
性化能の測定法について以下に説明する。
性化能の測定法について以下に説明する。
【００１６】ペプチドの合成 スギ花粉抗原CryjＩの 353アミノ酸全領域にわたり、30
アミノ酸残基のオーバーラップペプチドを化学合成す
る。オーバーラップ部分は10アミノ酸残基とする。
アミノ酸残基のオーバーラップペプチドを化学合成す
る。オーバーラップ部分は10アミノ酸残基とする。
【００１７】スギ花粉症患者末梢血Ｔリンパ球活性化能
の測定 スギ花粉症を発症している患者の末梢血よりリンパ球を
分離する方法としては、例えば、Ficollを用いた比重遠
心法を用いることができる。すなわち、ヘパリン添加注
射筒にて採血した末梢血を遠心管中のFicoll−Paque 溶
液(Pharmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠
心する。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパス
ツールピペットで採取し、リン酸緩衝液(PBS) または適
当な培地で洗浄することによりリンパ球を得る。
の測定 スギ花粉症を発症している患者の末梢血よりリンパ球を
分離する方法としては、例えば、Ficollを用いた比重遠
心法を用いることができる。すなわち、ヘパリン添加注
射筒にて採血した末梢血を遠心管中のFicoll−Paque 溶
液(Pharmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠
心する。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパス
ツールピペットで採取し、リン酸緩衝液(PBS) または適
当な培地で洗浄することによりリンパ球を得る。
【００１８】Ｔリンパ球活性化能の測定は、スギ花粉症
患者末梢血リンパ球をスギ花粉抗原ペプチドとともに５
〜７日間培養し、その終了前12〜15時間、3H−チミジン
の放射活性を液体シンチレーションカウンターで測定す
ることにより可能である(Coligan,J.E.,et al.eds.,Cur
rent Protocoles in Immunology,Green Publishing Ass
ociates and Wiley-Interscience,1992)。細胞の培養
は、例えば、RPMI−1640に10％ヒトＡＢ型血清と 100μ
g/mlのカナマイシンを添加した培地を用い、５％CO2 存
在下、37℃で行う。抗原提示細胞には、リンパ球画分に
含まれるＢリンパ球及び単球がなりうる。
患者末梢血リンパ球をスギ花粉抗原ペプチドとともに５
〜７日間培養し、その終了前12〜15時間、3H−チミジン
の放射活性を液体シンチレーションカウンターで測定す
ることにより可能である(Coligan,J.E.,et al.eds.,Cur
rent Protocoles in Immunology,Green Publishing Ass
ociates and Wiley-Interscience,1992)。細胞の培養
は、例えば、RPMI−1640に10％ヒトＡＢ型血清と 100μ
g/mlのカナマイシンを添加した培地を用い、５％CO2 存
在下、37℃で行う。抗原提示細胞には、リンパ球画分に
含まれるＢリンパ球及び単球がなりうる。
【００１９】
【実施例】尚、以下の実施例におけるアミノ酸残基、保
護基、試薬、溶媒の慣用記号は以下の通りである。
護基、試薬、溶媒の慣用記号は以下の通りである。
【００２０】アミノ酸残基の慣用記号（括弧内は一文字
略号） Ala (A) ：Ｌ−アラニン残基 Arg (R) ：Ｌ−アルギニン残基 Asn (N) ：Ｌ−アスパラギン残基 Asp (D) ：Ｌ−アスパラギン酸残基 Gln (Q) ：Ｌ−グルタミン残基 Glu (E) ：Ｌ−グルタミン酸残基 Gly (G) ：グリシン残基 His (H) ：Ｌ−ヒスチジン残基 Ile (I) ：Ｌ−イソロイシン残基 Leu (L) ：Ｌ−ロイシン残基 Lys (K) ：Ｌ−リジン残基 Met (M) ：Ｌ−メチオニン残基 Phe (F) ：Ｌ−フェニルアラニン残基 Pro (P) ：Ｌ−プロリン残基 Ser (S) ：Ｌ−セリン残基 Thr (T) ：Ｌ−トレオニン残基 Trp (W) ：Ｌ−トリプトファン残基 Tyr (Y) ：Ｌ−チロシン残基 Val (V) ：Ｌ−バリン残基 Cys (C) ：Ｌ−システイン残基。
略号） Ala (A) ：Ｌ−アラニン残基 Arg (R) ：Ｌ−アルギニン残基 Asn (N) ：Ｌ−アスパラギン残基 Asp (D) ：Ｌ−アスパラギン酸残基 Gln (Q) ：Ｌ−グルタミン残基 Glu (E) ：Ｌ−グルタミン酸残基 Gly (G) ：グリシン残基 His (H) ：Ｌ−ヒスチジン残基 Ile (I) ：Ｌ−イソロイシン残基 Leu (L) ：Ｌ−ロイシン残基 Lys (K) ：Ｌ−リジン残基 Met (M) ：Ｌ−メチオニン残基 Phe (F) ：Ｌ−フェニルアラニン残基 Pro (P) ：Ｌ−プロリン残基 Ser (S) ：Ｌ−セリン残基 Thr (T) ：Ｌ−トレオニン残基 Trp (W) ：Ｌ−トリプトファン残基 Tyr (Y) ：Ｌ−チロシン残基 Val (V) ：Ｌ−バリン残基 Cys (C) ：Ｌ−システイン残基。
【００２１】保護基の慣用記号 Boc ：ｔ−ブトキシカルボニル Cl-Z ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Cl2-Bzl ：2,6 −ジクロロベンジル Bom ：ベンジルオキシメチル Bzl ：ベンジル CHO ：ホルミル Fmoc ：９−フルオレニルメトキシカルボニル MBzl ：４−メチルベンジル OcHex ：シクロヘキシル（エステル） OtBu ：ｔ−ブチル（エステル） Pmc ： 2,2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−６−
スルホニル tBu ：ｔ−ブチル Tos ：トシル Trt ：トリチル。
スルホニル tBu ：ｔ−ブチル Tos ：トシル Trt ：トリチル。
【００２２】試薬、溶媒の慣用記号 DCC ：N,N'−ジシクロヘキシルカルボジイミド DCM ：ジクロロメタン DIEA ：N,N'−ジイソプロピルエチルアミン DIPC ：N,N'−ジイソプロピルカルボジイミド DMF ：N,N −ジメチルホルムアミド HOBt ：N −ヒドロキシベンズトリアゾール TFA ：トリフルオロ酢酸。
【００２３】ペプチドの合成例 スギ花粉抗原CryjＩの 353アミノ酸全領域にわたり、30
アミノ酸残基のオーバーラップペプチドを化学合成した
結果、ペプチドのアミノ酸配列は以下の表１の通りであ
った（オーバーラップ部分は10アミノ酸残基とする）。
以下に、表１に示すペプチド１〜18の合成例を示す。
アミノ酸残基のオーバーラップペプチドを化学合成した
結果、ペプチドのアミノ酸配列は以下の表１の通りであ
った（オーバーラップ部分は10アミノ酸残基とする）。
以下に、表１に示すペプチド１〜18の合成例を示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】〈ペプチド１〜５、７〜11、14及び18の固
相合成〉ペプチド１〜５、７〜11、14及び18の合成はア
プライド・バイオシステムズ社（現パーキンエルマー
社）製ペプチド合成装置(ABI model 430Ａ）を用い、一
般に Boc法と呼ばれる固相合成法で行った。使用した出
発原料はＣ末端アミノ酸残基が導入されたフェニルアセ
タミドメチル(PAM) 樹脂を用いた。いずれも0.5mmol 相
当のアミノ酸残基(Boc−アミノ酸）が導入されているも
のを使用した。反応に用いた保護アミノ酸は Boc基でア
ミノ基を保護したＬ−アミノ酸であり、各アミノ酸の導
入は、対称酸無水物法又はHOBtを用いる活性エステル法
により行った。各縮合反応に用いた試薬及び縮合反応時
間は以下の通りである。
相合成〉ペプチド１〜５、７〜11、14及び18の合成はア
プライド・バイオシステムズ社（現パーキンエルマー
社）製ペプチド合成装置(ABI model 430Ａ）を用い、一
般に Boc法と呼ばれる固相合成法で行った。使用した出
発原料はＣ末端アミノ酸残基が導入されたフェニルアセ
タミドメチル(PAM) 樹脂を用いた。いずれも0.5mmol 相
当のアミノ酸残基(Boc−アミノ酸）が導入されているも
のを使用した。反応に用いた保護アミノ酸は Boc基でア
ミノ基を保護したＬ−アミノ酸であり、各アミノ酸の導
入は、対称酸無水物法又はHOBtを用いる活性エステル法
により行った。各縮合反応に用いた試薬及び縮合反応時
間は以下の通りである。
【００２６】・対称酸無水物法 反応させる Boc−アミノ酸は２mmol、DCC は１mmolを用
いた。縮合反応時間は30分間に設定した。
いた。縮合反応時間は30分間に設定した。
【００２７】・HOBtを用いる活性エステル法 導入するアミノ酸がアルギニン、アスパラギン又はグル
タミンの場合は活性エステル法で反応させた。この場
合、 Boc−アミノ酸、HOBt及びDCC はいずれも２mmol使
用した。また縮合反応時間は 120分間に設定し、２回反
応させた。
タミンの場合は活性エステル法で反応させた。この場
合、 Boc−アミノ酸、HOBt及びDCC はいずれも２mmol使
用した。また縮合反応時間は 120分間に設定し、２回反
応させた。
【００２８】本合成に使用した Boc−アミノ酸は以下の
通りである。いずれも使用量は２mmolである。トリプト
ファン残基の導入ではペプチド９の合成時のみ側鎖無保
護とし、他はホルミル基で保護したものを使用した。 Boc-Ala-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Asp(O
cHex)-OH,Boc-Cys(MBzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Glu(OcH
ex)-OH, Boc-Gly-OH,Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ile-OH, Bo
c-Leu-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH,Boc-Met-OH, Boc-Phe-OH,
Boc-Pro-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-
Trp-OH, Boc-Trp(CHO)-OH, Boc-Tyr(Cl2-Bzl)-OH, Boc-
Val-OH。
通りである。いずれも使用量は２mmolである。トリプト
ファン残基の導入ではペプチド９の合成時のみ側鎖無保
護とし、他はホルミル基で保護したものを使用した。 Boc-Ala-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Asp(O
cHex)-OH,Boc-Cys(MBzl)-OH, Boc-Gln-OH, Boc-Glu(OcH
ex)-OH, Boc-Gly-OH,Boc-His(Bom)-OH, Boc-Ile-OH, Bo
c-Leu-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH,Boc-Met-OH, Boc-Phe-OH,
Boc-Pro-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH,Boc-
Trp-OH, Boc-Trp(CHO)-OH, Boc-Tyr(Cl2-Bzl)-OH, Boc-
Val-OH。
【００２９】以下に、実際の合成操作及びアミノ酸１個
を導入するのに必要なプログラムを示す。
を導入するのに必要なプログラムを示す。
【００３０】〔脱 Boc−中和−洗浄過程〕 (1) Boc−アミノ酸が導入されている出発原料の樹脂
(0.5mmol相当) を合成機の反応槽に添加し、DCM 各10ml
で３回洗浄後、DCM 中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤さ
せる。 (2) 濾過後、樹脂に50％ TFA／DCM 溶液10mlを添加し、
約２分間攪拌し、濾過する。さらに、50％ TFA／DCM 溶
液10mlを加え30分間攪拌処理して、脱 Boc反応を行う。 (3) 反応終了後、 TFA溶液を濾過し、DCM 各10mlで３回
洗浄濾過する。 (4) 10％DIEA／DMF 溶液各10mlで２回中和処理して、残
存するTFA を除去、アミノ基を遊離させる。 (5) DMF 各10mlで６回洗浄濾過を繰り返し、残存するDI
EAを除去する。
(0.5mmol相当) を合成機の反応槽に添加し、DCM 各10ml
で３回洗浄後、DCM 中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤さ
せる。 (2) 濾過後、樹脂に50％ TFA／DCM 溶液10mlを添加し、
約２分間攪拌し、濾過する。さらに、50％ TFA／DCM 溶
液10mlを加え30分間攪拌処理して、脱 Boc反応を行う。 (3) 反応終了後、 TFA溶液を濾過し、DCM 各10mlで３回
洗浄濾過する。 (4) 10％DIEA／DMF 溶液各10mlで２回中和処理して、残
存するTFA を除去、アミノ基を遊離させる。 (5) DMF 各10mlで６回洗浄濾過を繰り返し、残存するDI
EAを除去する。
【００３１】〔活性化過程〕 (6) ここまでの操作と並行して樹脂に反応させる Boc−
アミノ酸を活性化させる。 Ａ： Boc−アミノ酸がアルギニン、アスパラギン、グル
タミン以外の場合 Boc−アミノ酸（２mmol) をDCM 及びDMF の混液４mlに
溶解させ活性化槽に加え、さらに 0.5Ｍ DCC／DCM 溶
液２mlを添加し、窒素気流下、約７分間攪拌させて活性
化させる。 Ｂ： Boc−アミノ酸がアルギニン、アスパラギン、グル
タミンの場合 Boc−アミノ酸及びHOBt各２mmolをDMF ４mlに溶解させ
た後、 0.5Ｍ DCC／DCM 溶液４mlを添加し、窒素気流
下、約40分間攪拌させて活性化させる。
アミノ酸を活性化させる。 Ａ： Boc−アミノ酸がアルギニン、アスパラギン、グル
タミン以外の場合 Boc−アミノ酸（２mmol) をDCM 及びDMF の混液４mlに
溶解させ活性化槽に加え、さらに 0.5Ｍ DCC／DCM 溶
液２mlを添加し、窒素気流下、約７分間攪拌させて活性
化させる。 Ｂ： Boc−アミノ酸がアルギニン、アスパラギン、グル
タミンの場合 Boc−アミノ酸及びHOBt各２mmolをDMF ４mlに溶解させ
た後、 0.5Ｍ DCC／DCM 溶液４mlを添加し、窒素気流
下、約40分間攪拌させて活性化させる。
【００３２】〔縮合反応−洗浄過程〕 (7) (6) の活性化溶液を(5) の操作の後に反応槽に添加
する。 (8) 30分間又は 120分間攪拌後反応液を濾過する。 (9) DMF 各10mlで３回、さらにDCM 各10mlで６回洗浄濾
過する。 なお、アルギニン、アスパラギン、グルタミンを導入す
る場合は、上記の操作後、さらに(4) から中和処理を１
回だけ行った後、(9) までの操作を繰り返して反応を２
回行った。
する。 (8) 30分間又は 120分間攪拌後反応液を濾過する。 (9) DMF 各10mlで３回、さらにDCM 各10mlで６回洗浄濾
過する。 なお、アルギニン、アスパラギン、グルタミンを導入す
る場合は、上記の操作後、さらに(4) から中和処理を１
回だけ行った後、(9) までの操作を繰り返して反応を２
回行った。
【００３３】上記プログラムに従い合成するペプチドの
一次構造に準じ、 Boc−アミノ酸を順次導入した。得ら
れた保護ペプチド樹脂はDCM 適量で充分洗浄後、減圧乾
燥した。
一次構造に準じ、 Boc−アミノ酸を順次導入した。得ら
れた保護ペプチド樹脂はDCM 適量で充分洗浄後、減圧乾
燥した。
【００３４】〈ペプチド６、12、13及び15〜17の固相合
成〉ペプチド６、12、13及び15〜17の合成はアドバンス
トケムテック社製ペプチド合成装置(ACT model 90)を用
い、一般にFmoc法と呼ばれる固相合成法で行った。使用
した出発原料はＣ末端アミノ酸残基が導入されたポリエ
チレングリコール(PEG) 樹脂を用いた。ペプチド６、1
2、13、15、16及び17の合成ではそれぞれ相当するＣ末
端アミノ酸残基が0.19、0.12、0.19、0.17、0.22、0.11
mmol導入されたものを使用した。反応に用いた保護アミ
ノ酸はFmoc基でアミノ基を保護したＬ−アミノ酸であ
り、各アミノ酸の導入は、HOBtを用いる活性エステル法
により行った。ペプチド６、13及び16の合成では、Fmoc
−アミノ酸、DIPC及びHOBtはそれぞれ各0.6mmol 使用し
た。また、ペプチド12及び17の合成ではそれぞれ各0.4m
mol 、ペプチド15の合成では各0.5mmol 使用した。反応
時間はすべて 120分間に設定した。
成〉ペプチド６、12、13及び15〜17の合成はアドバンス
トケムテック社製ペプチド合成装置(ACT model 90)を用
い、一般にFmoc法と呼ばれる固相合成法で行った。使用
した出発原料はＣ末端アミノ酸残基が導入されたポリエ
チレングリコール(PEG) 樹脂を用いた。ペプチド６、1
2、13、15、16及び17の合成ではそれぞれ相当するＣ末
端アミノ酸残基が0.19、0.12、0.19、0.17、0.22、0.11
mmol導入されたものを使用した。反応に用いた保護アミ
ノ酸はFmoc基でアミノ基を保護したＬ−アミノ酸であ
り、各アミノ酸の導入は、HOBtを用いる活性エステル法
により行った。ペプチド６、13及び16の合成では、Fmoc
−アミノ酸、DIPC及びHOBtはそれぞれ各0.6mmol 使用し
た。また、ペプチド12及び17の合成ではそれぞれ各0.4m
mol 、ペプチド15の合成では各0.5mmol 使用した。反応
時間はすべて 120分間に設定した。
【００３５】本合成に使用したFmoc−アミノ酸は以下の
通りである。 Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, F
moc-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-Cys(MBzl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-
OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH,Fmoc-His(Trt)-O
H, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc
-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-O
H,Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tB
u)-OH, Fmoc-Val-OH 。
通りである。 Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pmc)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, F
moc-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-Cys(MBzl)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-
OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH,Fmoc-His(Trt)-O
H, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH,Fmoc
-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-O
H,Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tB
u)-OH, Fmoc-Val-OH 。
【００３６】以下に、実際の合成操作及びアミノ酸１個
を導入するのに必要なプログラムを示す。
を導入するのに必要なプログラムを示す。
【００３７】〔脱Fmoc−洗浄過程〕 (1) Fmoc−アミノ酸が導入されている出発原料の樹脂を
合成機の反応槽に添加し、DCM 各10mlで３回洗浄後、DC
M 中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤させる。 (2) 濾過後、DMF 各10mlで３回洗浄し、樹脂に20％ピペ
リジン／DMF 溶液を加えて約２分間攪拌する。さらに20
％ピペリジン／DMF 溶液を添加し、20分間攪拌処理して
脱Fmoc反応を行う。 (3) 反応終了後ピペリジン溶液を濾過し、DCM 、DMF 及
びNMP 各10mlでそれぞれ３回洗浄濾過して、ピペリジン
を除去する。
合成機の反応槽に添加し、DCM 各10mlで３回洗浄後、DC
M 中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤させる。 (2) 濾過後、DMF 各10mlで３回洗浄し、樹脂に20％ピペ
リジン／DMF 溶液を加えて約２分間攪拌する。さらに20
％ピペリジン／DMF 溶液を添加し、20分間攪拌処理して
脱Fmoc反応を行う。 (3) 反応終了後ピペリジン溶液を濾過し、DCM 、DMF 及
びNMP 各10mlでそれぞれ３回洗浄濾過して、ピペリジン
を除去する。
【００３８】〔活性化過程〕 (4) ここまでの操作と並行して樹脂に反応させるFmoc−
アミノ酸を活性化させる。Fmoc−アミノ酸及びHOBt各相
当量をDMF ４mlに溶解させた後、 0.5Ｍ DIPC／NMP 溶
液４mlを添加し、窒素気流下、約40分間攪拌させて活性
化させる。
アミノ酸を活性化させる。Fmoc−アミノ酸及びHOBt各相
当量をDMF ４mlに溶解させた後、 0.5Ｍ DIPC／NMP 溶
液４mlを添加し、窒素気流下、約40分間攪拌させて活性
化させる。
【００３９】〔縮合反応−洗浄過程〕 (5) (4)の活性化溶液を(3) の操作の後に反応槽に添加
する。 (6) 120分間攪拌後、反応液を濾過する。 (7) DMF 各10mlで３回、さらにDCM 各10mlで６回洗浄濾
過する。
する。 (6) 120分間攪拌後、反応液を濾過する。 (7) DMF 各10mlで３回、さらにDCM 各10mlで６回洗浄濾
過する。
【００４０】上記プログラムに従い合成するペプチドの
一次構造に順じ、Fmoc−アミノ酸を順次導入した。得ら
れた保護ペプチド樹脂はDCM 適量で充分洗浄後、減圧乾
燥した。
一次構造に順じ、Fmoc−アミノ酸を順次導入した。得ら
れた保護ペプチド樹脂はDCM 適量で充分洗浄後、減圧乾
燥した。
【００４１】〈HPLC分析〉各粗生成ペプチド及び精製ペ
プチドの分析はカラムに TSK gel ODS-120Ｔ(4.6×250m
m)カラム（東ソー社製）を使用し、 0.1％ TFA水溶液／
アセトニトリルを溶出液とする直線濃度勾配溶出法によ
り行った。流速は毎分 1.0mlとし、UV波長214nmで検索
した。各精製ペプチドの分析結果（溶出時間）を表２に
示した。
プチドの分析はカラムに TSK gel ODS-120Ｔ(4.6×250m
m)カラム（東ソー社製）を使用し、 0.1％ TFA水溶液／
アセトニトリルを溶出液とする直線濃度勾配溶出法によ
り行った。流速は毎分 1.0mlとし、UV波長214nmで検索
した。各精製ペプチドの分析結果（溶出時間）を表２に
示した。
【００４２】
【表２】
【００４３】〈アミノ酸組成分析〉６Ｎ塩酸で各化合物
を酸分解(110℃、24時間）した後、各化合物のアミノ酸
組成を日立アミノ酸分析装置（L-8500）で分析した。各
精製ペプチドのアミノ酸組成分析結果を表３〜５に示し
た。
を酸分解(110℃、24時間）した後、各化合物のアミノ酸
組成を日立アミノ酸分析装置（L-8500）で分析した。各
精製ペプチドのアミノ酸組成分析結果を表３〜５に示し
た。
【００４４】
【表３】
【００４５】
【表４】
【００４６】
【表５】
【００４７】実施例１（ペプチド１の合成） Boc-Ser(Bzl)-0CH2-PAM樹脂(0.68mmol/ｇ、735mg)を出
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド１に相
当する保護ペプチド樹脂2160mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、
この保護ペプチド樹脂 500mgをHF反応装置((株）ペプチ
ド研究所製）を用い、HF 8ml、アニソール 2ml、エチル
メチルスルフィド 0.1ml及びエタンジチオール１mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣に酢酸エチルを加えて洗
浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を
50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、
ペプチド１を含む粗生成ペプチド250mg を得た。このう
ち44mgの粗生成ペプチドを分取用HPLC（カラム：YMC-Pa
ck AM(20×250mm)(YMC社製))に添加し、 0.1％ TFA水溶
液／アセトニトリルの容積組成比（58／42）で溶出させ
て（流速：毎分８ml、検出波長：214nm)、ペプチド１を
含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物２mg
を得た。
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド１に相
当する保護ペプチド樹脂2160mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、
この保護ペプチド樹脂 500mgをHF反応装置((株）ペプチ
ド研究所製）を用い、HF 8ml、アニソール 2ml、エチル
メチルスルフィド 0.1ml及びエタンジチオール１mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣に酢酸エチルを加えて洗
浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を
50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、
ペプチド１を含む粗生成ペプチド250mg を得た。このう
ち44mgの粗生成ペプチドを分取用HPLC（カラム：YMC-Pa
ck AM(20×250mm)(YMC社製))に添加し、 0.1％ TFA水溶
液／アセトニトリルの容積組成比（58／42）で溶出させ
て（流速：毎分８ml、検出波長：214nm)、ペプチド１を
含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物２mg
を得た。
【００４８】実施例２（ペプチド２の合成） Boc-Pro-0CH2-PAM樹脂(0.76mmol/ｇ、658mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド２に相当する
保護ペプチド樹脂2080mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、先ずこ
の保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF装置を
用いて、HF 8mlとアニソール 2ml及びエチルメチルスル
フィド１mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60
分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチル
を加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹
脂混合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させるこ
とにより、ペプチド２を含む粗生成ペプチド255mg を得
た。このうち80mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分
取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリル
の容積組成比（77／23）で溶出させて、ペプチド２を含
む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物９mgを
得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド２に相当する
保護ペプチド樹脂2080mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、先ずこ
の保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF装置を
用いて、HF 8mlとアニソール 2ml及びエチルメチルスル
フィド１mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60
分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチル
を加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹
脂混合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させるこ
とにより、ペプチド２を含む粗生成ペプチド255mg を得
た。このうち80mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分
取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリル
の容積組成比（77／23）で溶出させて、ペプチド２を含
む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物９mgを
得た。
【００４９】実施例３（ペプチド３の合成） Boc-Ile-0CH2-PAM樹脂(0.76mmol/ｇ、658mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド３に相当する
保護ペプチド樹脂2240mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、先ずこの保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に
記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとエタンジ
チオール５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、
減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水
溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド３
を含む粗生成ペプチド266mg を得た。このうち40mgの粗
生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、
0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（73／2
7）で溶出させて、ペプチド３を含む画分を分取し、凍
結乾燥後、目的とする精製物６mgを得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド３に相当する
保護ペプチド樹脂2240mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、先ずこの保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に
記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとエタンジ
チオール５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、
減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水
溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド３
を含む粗生成ペプチド266mg を得た。このうち40mgの粗
生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、
0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（73／2
7）で溶出させて、ペプチド３を含む画分を分取し、凍
結乾燥後、目的とする精製物６mgを得た。
【００５０】実施例４（ペプチド４の合成） Boc-Lys(Cl-Z)-OCH2-PAM樹脂(0.65mmol/ｇ、769mg)を出
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド４に相
当する保護ペプチド樹脂2550mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実
施例１に記載のHF装置を用いて、HF 5ml、アニソール
0.5ml、エチルメチルスルフィド 0.5mlの混液中で−20
℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。反応液を減
圧留去した後、残渣を再度HF 5ml及びエタンジチオール
５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応液を減圧留
去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥
した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水溶液で抽
出して凍結乾燥させることにより、ペプチド４を含む粗
生成ペプチド 266mgを得た。このうち60mgの粗生成ペプ
チドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA
水溶液／アセトニトリルの容積組成比（67／33）で溶出
させて、ペプチド４を含む画分を分取し、凍結乾燥後、
目的とする精製物８mgを得た。
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド４に相
当する保護ペプチド樹脂2550mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実
施例１に記載のHF装置を用いて、HF 5ml、アニソール
0.5ml、エチルメチルスルフィド 0.5mlの混液中で−20
℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。反応液を減
圧留去した後、残渣を再度HF 5ml及びエタンジチオール
５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応液を減圧留
去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥
した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水溶液で抽
出して凍結乾燥させることにより、ペプチド４を含む粗
生成ペプチド 266mgを得た。このうち60mgの粗生成ペプ
チドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA
水溶液／アセトニトリルの容積組成比（67／33）で溶出
させて、ペプチド４を含む画分を分取し、凍結乾燥後、
目的とする精製物８mgを得た。
【００５１】実施例５（ペプチド５の合成） Boc-Ile-OCH2-PAM樹脂(0.76mmol/ｇ、658mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド５に相当する
保護ペプチド樹脂1900mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、まず、
この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF装置
を用いて、HF 8ml、アニソール 2ml及びエチルメチルス
ルフィド 0.5mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃
で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エ
チルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド
−樹脂混合物を20％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させ
ることにより、ペプチド５を含む粗生成ペプチド 229mg
を得た。このうち65mgの粗生成ペプチドを実施例１記載
の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニト
リルの容積組成比（70／30）で溶出させて、ペプチド５
を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物５
mgを得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド５に相当する
保護ペプチド樹脂1900mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、まず、
この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF装置
を用いて、HF 8ml、アニソール 2ml及びエチルメチルス
ルフィド 0.5mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃
で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エ
チルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド
−樹脂混合物を20％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させ
ることにより、ペプチド５を含む粗生成ペプチド 229mg
を得た。このうち65mgの粗生成ペプチドを実施例１記載
の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニト
リルの容積組成比（70／30）で溶出させて、ペプチド５
を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物５
mgを得た。
【００５２】実施例６（ペプチド６の合成） Fmoc-Val-PEG樹脂(0.19mmol/ｇ、1000mg) を出発原料に
して、上記固相合成法に従ってペプチド６に相当する保
護ペプチド樹脂1040mgを合成した。この樹脂上のペプチ
ド中に含まれるシステイン残基の側鎖はメチルベンジル
基で保護されている。従って、樹脂からのペプチドの切
り出しは TFA処理により行い、 TFAでは除去されないメ
チルベンジル基はさらに低濃度HF処理によって除去し
た。すなわち、まず、 TFA：チオアニソール：フェノー
ル：水：エタンジチオールの比が82.5：５：５：５：2.
5(v/v/w/v/v)となるような TFA試薬を調製した。ペプチ
ド２に相当する保護ペプチド樹脂 700mgをこの TFA試薬
30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過
し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮
した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて
吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾
過後、減圧乾燥させた。この白色粉末 245mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール５mlの混液
中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣
を酢酸エチル各30mlで６回洗浄濾過した。残留物を減圧
乾燥し、ペプチド６を含む白色粉末の粗生成ペプチド 2
01mgを得た。このうち55mgの粗生成ペプチドを実施例１
記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセト
ニトリルの容積組成比（60／40）で溶出させて、ペプチ
ド６を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製
物10mgを得た。
して、上記固相合成法に従ってペプチド６に相当する保
護ペプチド樹脂1040mgを合成した。この樹脂上のペプチ
ド中に含まれるシステイン残基の側鎖はメチルベンジル
基で保護されている。従って、樹脂からのペプチドの切
り出しは TFA処理により行い、 TFAでは除去されないメ
チルベンジル基はさらに低濃度HF処理によって除去し
た。すなわち、まず、 TFA：チオアニソール：フェノー
ル：水：エタンジチオールの比が82.5：５：５：５：2.
5(v/v/w/v/v)となるような TFA試薬を調製した。ペプチ
ド２に相当する保護ペプチド樹脂 700mgをこの TFA試薬
30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過
し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮
した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて
吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾
過後、減圧乾燥させた。この白色粉末 245mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール５mlの混液
中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣
を酢酸エチル各30mlで６回洗浄濾過した。残留物を減圧
乾燥し、ペプチド６を含む白色粉末の粗生成ペプチド 2
01mgを得た。このうち55mgの粗生成ペプチドを実施例１
記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセト
ニトリルの容積組成比（60／40）で溶出させて、ペプチ
ド６を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製
物10mgを得た。
【００５３】実施例７（ペプチド７の合成） Boc-Gly-OCH2-PAM樹脂(0.83mmol/ｇ、602mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド７に相当する
保護ペプチド樹脂2040mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとアニソー
ル５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧
留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾
燥した。このペプチド−樹脂混合物を50％酢酸水溶液で
抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド７を含む
粗生成ペプチド 250mgを得た。このうち80mgの粗生成ペ
プチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ T
FA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（65／35）で溶
出させて、ペプチド７を含む画分を分取し、凍結乾燥
後、目的とする精製物２mgを得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド７に相当する
保護ペプチド樹脂2040mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとアニソー
ル５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧
留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾
燥した。このペプチド−樹脂混合物を50％酢酸水溶液で
抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド７を含む
粗生成ペプチド 250mgを得た。このうち80mgの粗生成ペ
プチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ T
FA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（65／35）で溶
出させて、ペプチド７を含む画分を分取し、凍結乾燥
後、目的とする精製物２mgを得た。
【００５４】実施例８（ペプチド８の合成） Boc-Asn-OCH2-PAM樹脂(0.79mmol/ｇ、633mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド８に相当する
保護ペプチド樹脂1520mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5ml及びエタン
ジチオール５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応
液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過
後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を50％酢
酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチ
ド８を含む粗生成ペプチド 270mgを得た。このうち51mg
の粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加
後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比
（72／28）で溶出させて、ペプチド８を含む画分を分取
し、凍結乾燥後、目的とする精製物５mgを得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド８に相当する
保護ペプチド樹脂1520mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行った。す
なわち、まず、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１
に記載のHF装置を用いてHF 5mlとアニソール 0.5mlの混
液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理した。
反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5ml及びエタン
ジチオール５mlの混液中で０℃で30分間処理した。反応
液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過
後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を50％酢
酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチ
ド８を含む粗生成ペプチド 270mgを得た。このうち51mg
の粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加
後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比
（72／28）で溶出させて、ペプチド８を含む画分を分取
し、凍結乾燥後、目的とする精製物５mgを得た。
【００５５】実施例９（ペプチド９の合成） Boc-Asn-OCH2-PAM樹脂(0.79mmol/ｇ、633mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド９に相当する
保護ペプチド樹脂1020mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂500mgを実施例１に記載のHF装置を用い
てHF 5mlとアニソール 0.5ml及びエタンジチオール 0.5
mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理
した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて
洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物
を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることによ
り、ペプチド９を含む粗生成ペプチド 208mgを得た。こ
のうち58mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HP
LCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積
組成比（71／29）で溶出させて、ペプチド９を含む画分
を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物３mgを得た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド９に相当する
保護ペプチド樹脂1020mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂500mgを実施例１に記載のHF装置を用い
てHF 5mlとアニソール 0.5ml及びエタンジチオール 0.5
mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理
した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて
洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物
を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることによ
り、ペプチド９を含む粗生成ペプチド 208mgを得た。こ
のうち58mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HP
LCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積
組成比（71／29）で溶出させて、ペプチド９を含む画分
を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物３mgを得た。
【００５６】実施例10（ペプチド10の合成） Boc-Asp(OcHex)-OCH2-PAM樹脂(0.74mmol/ｇ、676mg)を
出発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド10に
相当する保護ペプチド樹脂2010mgを合成した。樹脂から
のペプチドの切り出しはHF処理により行った。すなわ
ち、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF
装置を用いてHF５mlとアニソール 0.5ml及びエチルメチ
ルスルフィド 0.1mlの混液中で−20℃で30分間、次いで
０℃で45分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢
酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプ
チド−樹脂混合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥
させることにより、ペプチド10を含む粗生成ペプチド 2
42mgを得た。このうち56mgの粗生成ペプチドを実施例１
記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセト
ニトリルの容積組成比（74／26）で溶出させて、ペプチ
ド10を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製
物３mgを得た。
出発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド10に
相当する保護ペプチド樹脂2010mgを合成した。樹脂から
のペプチドの切り出しはHF処理により行った。すなわ
ち、この保護ペプチド樹脂 500mgを実施例１に記載のHF
装置を用いてHF５mlとアニソール 0.5ml及びエチルメチ
ルスルフィド 0.1mlの混液中で−20℃で30分間、次いで
０℃で45分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢
酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプ
チド−樹脂混合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥
させることにより、ペプチド10を含む粗生成ペプチド 2
42mgを得た。このうち56mgの粗生成ペプチドを実施例１
記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセト
ニトリルの容積組成比（74／26）で溶出させて、ペプチ
ド10を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製
物３mgを得た。
【００５７】実施例11（ペプチド11の合成） Boc-Met-OCH2-PAM樹脂(0.69mmol/ｇ、725mg)を出発原料
にして、上記固相合成法に従ってペプチド11に相当する
保護ペプチド樹脂1810mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂500mgを実施例１に記載のHF装置を用い
てHF 8mlとアニソール２ml及びエチルメチルスルフィド
0.5mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60分間
処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加
えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混
合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることに
より、ペプチド11を含む粗生成ペプチド 232mgを得た。
このうち65mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用
HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容
積組成比（75／25）で溶出させて、ペプチド11を含む画
分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物11mgを得
た。
にして、上記固相合成法に従ってペプチド11に相当する
保護ペプチド樹脂1810mgを合成した。樹脂からのペプチ
ドの切り出しはHF処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂500mgを実施例１に記載のHF装置を用い
てHF 8mlとアニソール２ml及びエチルメチルスルフィド
0.5mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で60分間
処理した。反応液を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加
えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混
合物を50％酢酸水溶液で抽出して凍結乾燥させることに
より、ペプチド11を含む粗生成ペプチド 232mgを得た。
このうち65mgの粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用
HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容
積組成比（75／25）で溶出させて、ペプチド11を含む画
分を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物11mgを得
た。
【００５８】実施例12（ペプチド12の合成） Fmoc-Ile-PEG樹脂(0.12mmol/ｇ、1000mg) を出発原料に
して、上記固相合成法に従ってペプチド12に相当する保
護ペプチド樹脂1380mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処理を行
い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさらに低
濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、ペプチ
ド12に相当する保護ペプチド樹脂 680mgを、実施例６記
載の TFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応混合
物を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾
液を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテルを加え
て固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30ml
で５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉末の一
部（90mg）を実施例１に記載のHF装置を用いて、HF7m
l、アニソール１ml、エチルメチルスルフィド 0.1ml及
びエタンジチオール２mlの混液中で０℃で60分間処理し
た。反応液を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30mlで６
回洗浄濾過した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド12を含
む白色粉末の粗生成ペプチド69mgを得た。このうち60mg
の粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加
後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比
（73／27）で溶出させて、ペプチド12を含む画分を分取
し、凍結乾燥後、目的とする精製物17mgを得た。
して、上記固相合成法に従ってペプチド12に相当する保
護ペプチド樹脂1380mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処理を行
い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさらに低
濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、ペプチ
ド12に相当する保護ペプチド樹脂 680mgを、実施例６記
載の TFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応混合
物を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾
液を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテルを加え
て固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30ml
で５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉末の一
部（90mg）を実施例１に記載のHF装置を用いて、HF7m
l、アニソール１ml、エチルメチルスルフィド 0.1ml及
びエタンジチオール２mlの混液中で０℃で60分間処理し
た。反応液を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30mlで６
回洗浄濾過した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド12を含
む白色粉末の粗生成ペプチド69mgを得た。このうち60mg
の粗生成ペプチドを実施例１記載の分取用HPLCに添加
後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比
（73／27）で溶出させて、ペプチド12を含む画分を分取
し、凍結乾燥後、目的とする精製物17mgを得た。
【００５９】実施例13（ペプチド13の合成） Fmoc-Ala-PEG樹脂(0.19mmol/ｇ、1000mg) を出発原料に
して、上記固相合成法に従ってペプチド13に相当する保
護ペプチド樹脂1380mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは TFA処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂700mg を実施例６記載の TFA試薬30mlで
室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過し、 T
FA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮した。
残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて吸引濾
過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾過後、
減圧乾燥して、ペプチド13を含む白色粉末の粗生成ペプ
チド 190mgを得た。このうち70mgの粗生成ペプチドを実
施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／
アセトニトリルの容積組成比（68／32）で溶出させて、
ペプチド13を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とす
る精製物２mgを得た。
して、上記固相合成法に従ってペプチド13に相当する保
護ペプチド樹脂1380mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは TFA処理により行った。すなわち、この保
護ペプチド樹脂700mg を実施例６記載の TFA試薬30mlで
室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過し、 T
FA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮した。
残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて吸引濾
過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾過後、
減圧乾燥して、ペプチド13を含む白色粉末の粗生成ペプ
チド 190mgを得た。このうち70mgの粗生成ペプチドを実
施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／
アセトニトリルの容積組成比（68／32）で溶出させて、
ペプチド13を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とす
る精製物２mgを得た。
【００６０】実施例14（ペプチド14の合成） Boc-Ser(Bzl)-OCH2-PAM樹脂(0.68mmol/ｇ、735mg)を出
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド14に相
当する保護ペプチド樹脂2250mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂500mg を実
施例１記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール 0.5
mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理
した。反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとア
ニソール５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、
減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水
溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド14
を含む粗生成ペプチド 230mgを得た。このうち73mgの粗
生成ペプチド14を実施例１記載の分取用HPLCに添加後、
0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（79／
21）で溶出させて、ペプチド14を含む画分を分取し、凍
結乾燥後、目的とする精製物12mgを得た。
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド14に相
当する保護ペプチド樹脂2250mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂500mg を実
施例１記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール 0.5
mlの混液中で−20℃で30分間、次いで０℃で45分間処理
した。反応液を減圧留去した後、残渣を再度HF 5mlとア
ニソール５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、
減圧乾燥した。このペプチド−樹脂混合物を20％酢酸水
溶液で抽出して凍結乾燥させることにより、ペプチド14
を含む粗生成ペプチド 230mgを得た。このうち73mgの粗
生成ペプチド14を実施例１記載の分取用HPLCに添加後、
0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（79／
21）で溶出させて、ペプチド14を含む画分を分取し、凍
結乾燥後、目的とする精製物12mgを得た。
【００６１】実施例15（ペプチド15の合成） Fmoc-Val-PEG樹脂(0.17mmol/ｇ、1000mg) を出発原料に
して、上記固相合成法に従ってペプチド15に相当する保
護ペプチド樹脂1390mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処理を行
い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさらに低
濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、ペプチ
ド15に相当する保護ペプチド樹脂 690mgを実施例６記載
の TFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物
を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液
を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて
固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで
５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉末 100mg
を実施例１に記載のHF装置を用いてHF 7ml、アニソール
１ml及びエタンジチオール２mlの混液中で０℃で60分間
処理した。反応液を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30
mlで６回洗浄濾過した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド
15を含む白色粉末の粗生成ペプチド55mgを得た。このう
ち43mgの粗生成ペプチドを、実施例１記載のの分取用HP
LCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積
組成比（69／31）で溶出させて、ペプチド15を含む画分
を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物２mgを得た。
して、上記固相合成法に従ってペプチド15に相当する保
護ペプチド樹脂1390mgを合成した。樹脂からのペプチド
の切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処理を行
い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさらに低
濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、ペプチ
ド15に相当する保護ペプチド樹脂 690mgを実施例６記載
の TFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物
を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液
を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて
固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで
５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉末 100mg
を実施例１に記載のHF装置を用いてHF 7ml、アニソール
１ml及びエタンジチオール２mlの混液中で０℃で60分間
処理した。反応液を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30
mlで６回洗浄濾過した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド
15を含む白色粉末の粗生成ペプチド55mgを得た。このう
ち43mgの粗生成ペプチドを、実施例１記載のの分取用HP
LCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積
組成比（69／31）で溶出させて、ペプチド15を含む画分
を分取し、凍結乾燥後、目的とする精製物２mgを得た。
【００６２】実施例16（ペプチド16の合成） Fmoc-Glu(OtBu)-PEG樹脂(0.22mmol/ｇ、1000mg) を出発
原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド16に相当
する保護ペプチド樹脂1330mgを合成した。樹脂からのペ
プチドの切り出しは TFA処理により行った。すなわち、
この保護ペプチド樹脂700mg を実施例６記載の TFA試薬
30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過
し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮
した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて
吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾
過後、減圧乾燥して、ペプチド16を含む白色粉末の粗生
成ペプチド 205mgを得た。このうち90mgの粗生成ペプチ
ドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水
溶液／アセトニトリルの容積組成比（75／25）で溶出さ
せて、ペプチド16を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目
的とする精製物７mgを得た。
原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド16に相当
する保護ペプチド樹脂1330mgを合成した。樹脂からのペ
プチドの切り出しは TFA処理により行った。すなわち、
この保護ペプチド樹脂700mg を実施例６記載の TFA試薬
30mlで室温で 120分間処理した。反応混合物を吸引濾過
し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過後、濾液を減圧濃縮
した。残渣にイソプロピルエーテルを加えて固化させて
吸引濾過し、イソプロピルエーテル各30mlで５回洗浄濾
過後、減圧乾燥して、ペプチド16を含む白色粉末の粗生
成ペプチド 205mgを得た。このうち90mgの粗生成ペプチ
ドを実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水
溶液／アセトニトリルの容積組成比（75／25）で溶出さ
せて、ペプチド16を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目
的とする精製物７mgを得た。
【００６３】実施例17（ペプチド17の合成） Fmoc-Ser(tBu)-PEG樹脂(0.11mmol/ｇ、1000mg) を出発
原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド17に相当
する保護ペプチド樹脂1290mgを合成した。樹脂からのペ
プチドの切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処
理を行い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさ
らに低濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、
ペプチド17に相当する保護ペプチド樹脂 700mgを実施例
６記載のTFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応
混合物を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過
後、濾液を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテル
を加えて固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル
各30mlで５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉
末 123mgを実施例１に記載のHF装置を用いてHF 5mlとア
ニソール５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30mlで６回洗浄濾過
した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド17を含む白色粉末
の粗生成ペプチド100mg を得た。このうち60mgの粗生成
ペプチドを、実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1
％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（76／24）
で溶出させて、ペプチド17を含む画分を分取し、凍結乾
燥後、目的とする精製物11mgを得た。
原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド17に相当
する保護ペプチド樹脂1290mgを合成した。樹脂からのペ
プチドの切り出しは、実施例６と同様に、まず、 TFA処
理を行い、 TFAでは除去されないメチルベンジル基はさ
らに低濃度HF処理によって除去した。すなわち、まず、
ペプチド17に相当する保護ペプチド樹脂 700mgを実施例
６記載のTFA試薬30mlで室温で 120分間処理した。反応
混合物を吸引濾過し、 TFA試薬各５mlで４回洗浄濾過
後、濾液を減圧濃縮した。残渣にイソプロピルエーテル
を加えて固化させて吸引濾過し、イソプロピルエーテル
各30mlで５回洗浄濾過後、減圧乾燥させた。この白色粉
末 123mgを実施例１に記載のHF装置を用いてHF 5mlとア
ニソール５mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液
を減圧留去し、残渣を酢酸エチル各30mlで６回洗浄濾過
した。残留物を減圧乾燥し、ペプチド17を含む白色粉末
の粗生成ペプチド100mg を得た。このうち60mgの粗生成
ペプチドを、実施例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1
％ TFA水溶液／アセトニトリルの容積組成比（76／24）
で溶出させて、ペプチド17を含む画分を分取し、凍結乾
燥後、目的とする精製物11mgを得た。
【００６４】実施例18（ペプチド18の合成） Boc-Arg(Tos)-OCH2-PAM樹脂(0.60mmol/ｇ、833mg)を出
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド18に相
当する保護ペプチド樹脂1970mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂500mg を実
施例１に記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール
0.5mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧
留去し後、残渣を再度HF 5mlとアニソール５mlの混液中
で０℃で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に
酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペ
プチド−樹脂混合物を15％酢酸水溶液で抽出して凍結乾
燥させることにより、ペプチド18を含む粗生成ペプチド
185mgを得た。このうち40mgの粗生成ペプチド18を実施
例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／ア
セトニトリルの容積組成比（78／22）で溶出させて、ペ
プチド18を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする
精製物11mgを得た。
発原料にして、上記固相合成法に従ってペプチド18に相
当する保護ペプチド樹脂1970mgを合成した。樹脂からの
ペプチドの切り出しはHF（Low-High法) 処理により行っ
た。すなわち、まず、この保護ペプチド樹脂500mg を実
施例１に記載のHF装置を用いて、HF 5mlとアニソール
0.5mlの混液中で０℃で60分間処理した。反応液を減圧
留去し後、残渣を再度HF 5mlとアニソール５mlの混液中
で０℃で60分間処理した。反応液を減圧留去し、残渣に
酢酸エチルを加えて洗浄濾過後、減圧乾燥した。このペ
プチド−樹脂混合物を15％酢酸水溶液で抽出して凍結乾
燥させることにより、ペプチド18を含む粗生成ペプチド
185mgを得た。このうち40mgの粗生成ペプチド18を実施
例１記載の分取用HPLCに添加後、 0.1％ TFA水溶液／ア
セトニトリルの容積組成比（78／22）で溶出させて、ペ
プチド18を含む画分を分取し、凍結乾燥後、目的とする
精製物11mgを得た。
【００６５】実施例19（スギ花粉症患者末梢血Ｔリンパ
球活性化能の測定） スギ花粉症を発症している患者からヘパリン添加注射筒
にて末梢血を採血し、遠心管中のFicoll−Paque 溶液(P
harmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠心し
た。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパスツー
ルピペットで採取し、 PBSで洗浄してスギ花粉症患者末
梢血を得た。この末梢血リンパ球２×105／ウェルを実
施例１〜18で示した合成ペプチド１０μｇ／ｍｌまた
は、安枝らの方法(J.Allergy Clin.Immunol.71,77-86,1
983)に従い精製したCryjＩ抗原10μg/mlとともに、10％
ヒトＡＢ型血清と 100μg/mlのカナマイシンを添加した
培地中で、５％CO2 存在下、37℃、５〜７日間培養し
た。培養終了前12〜15時間、１μCi／ウェルの3H−チミ
ジンを添加しておき、セルハーベスター(Skatron社）に
て細胞をグラスフィルター上に補集し、細胞分画に取り
込まれた放射活性を液体シンチレーションカウンター
（Beckmann社）で測定した。Ｔリンパ球の活性化能は、
ペプチド添加時の放射活性とペプチド無添加時の放射活
性の比(Stimulation Index;S.I) で示した。結果を表６
に示す。
球活性化能の測定） スギ花粉症を発症している患者からヘパリン添加注射筒
にて末梢血を採血し、遠心管中のFicoll−Paque 溶液(P
harmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠心し
た。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパスツー
ルピペットで採取し、 PBSで洗浄してスギ花粉症患者末
梢血を得た。この末梢血リンパ球２×105／ウェルを実
施例１〜18で示した合成ペプチド１０μｇ／ｍｌまた
は、安枝らの方法(J.Allergy Clin.Immunol.71,77-86,1
983)に従い精製したCryjＩ抗原10μg/mlとともに、10％
ヒトＡＢ型血清と 100μg/mlのカナマイシンを添加した
培地中で、５％CO2 存在下、37℃、５〜７日間培養し
た。培養終了前12〜15時間、１μCi／ウェルの3H−チミ
ジンを添加しておき、セルハーベスター(Skatron社）に
て細胞をグラスフィルター上に補集し、細胞分画に取り
込まれた放射活性を液体シンチレーションカウンター
（Beckmann社）で測定した。Ｔリンパ球の活性化能は、
ペプチド添加時の放射活性とペプチド無添加時の放射活
性の比(Stimulation Index;S.I) で示した。結果を表６
に示す。
【００６６】
【表６】
【００６７】末梢血リンパ球を用いたポリクローナルな
反応系により、Ｔ細胞エピトープは抗原蛋白の広範囲に
存在したが、表６に示すように、Ｔリンパ球活性化の指
数、S.I が３以上の強いＴリンパ球活性化能を持つペプ
チドを７種類（ペプチド４、６、７、９〜11、13）見い
だした。
反応系により、Ｔ細胞エピトープは抗原蛋白の広範囲に
存在したが、表６に示すように、Ｔリンパ球活性化の指
数、S.I が３以上の強いＴリンパ球活性化能を持つペプ
チドを７種類（ペプチド４、６、７、９〜11、13）見い
だした。
【００６８】
【発明の効果】スギ花粉症のＴ細胞エピトープペプチド
は、スギ花粉症の発症に関与するＴ細胞を免疫不応答に
することにより、新しいタイプの減感作治療剤として花
粉症の治療及び予防に効果が期待できる。
は、スギ花粉症の発症に関与するＴ細胞を免疫不応答に
することにより、新しいタイプの減感作治療剤として花
粉症の治療及び予防に効果が期待できる。
【００６９】
配列番号１ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号１） Gly Ala Thr Arg Asp Arg Pro Leu Trp Ile Ile Phe Ser Gly Asn Met 1 5 10 15 Asn Ile Lys Leu Lys Met Pro Met Tyr Ile Ala Gly Tyr Lys 20 25 30 。
【００７０】配列番号２ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号２） Ile Gly Asn Gly Gly Pro Cys Val Phe Ile Lys Arg Val Ser Asn Val 1 5 10 15 Ile Ile His Gly Leu Tyr Leu Tyr Gly Ala Ser Thr Ser Val 20 25 30 。
【００７１】配列番号３ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号３） Leu Tyr Leu Tyr Gly Cys Ser Thr Ser Val Leu Gly Asn Val Leu Ile 1 5 10 15 Asn Glu Ser Phe Gly Val Glu Pro Val His Pro Gln Asp Gly 20 25 30 。
【００７２】配列番号４ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号４） Ile Trp Ile Asp His Asn Ser Phe Ser Asn Ser Pro Asp Gly Leu Val 1 5 10 15 Asp Val Thr Leu Thr Ser Thr Gly Val Thr Ile Ser Asn Asn 20 25 30 。
【００７３】配列番号５ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号５） Thr Ser Thr Gly Val Thr Ile Ser Asn Asn Leu Phe Phe Asn His His 1 5 10 15 Lys Val Met Leu Leu Gly His Asp Asp Ala Tyr Ser Asp Asp 20 25 30 。
【００７４】配列番号６ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号６） Leu Gly His Asp Asp Ala Tyr Ser Asp Asp Lys Ser Met Lys Val Thr 1 5 10 15 Val Ala Phe Asn Gln Phe Gly Pro Asn Cys Gly Gln Arg Met 20 25 30 。
【００７５】配列番号７ 配列の長さ：30アミノ酸 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列（配列番号７） Ala Asn Asn Asn Tyr Asp Pro Trp Thr Ile Tyr Ala Ile Gly Gly Ser 1 5 10 15 Ser Asn Pro Thr Ile Lys Ser Glu Gly Asn Ser Phe Thr Ala 20 25 ３０
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年８月２８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１８】Ｔリンパ球活性化能の測定は、スギ花粉症
患者末梢血リンパ球をスギ花粉抗原ペプチドとともに５
〜７日間培養し、その終了前12〜15時間、 3H−チミジン
を添加しておき細胞に取り込まれた 3H−チミジンの放射
活性を液体シンチレーションカウンターで測定すること
により可能である(Coligan,J.E.,et al.eds.,CurrentPr
otocoles in Immunology,Green Publishing Associates
and Wiley-Interscience,1992)。細胞の培養は、例え
ば、RPMI−1640に10％ヒトＡＢ型血清と 100μg/mlのカ
ナマイシンを添加した培地を用い、５％CO2 存在下、37
℃で行う。抗原提示細胞には、リンパ球画分に含まれる
Ｂリンパ球及び単球がなりうる。
患者末梢血リンパ球をスギ花粉抗原ペプチドとともに５
〜７日間培養し、その終了前12〜15時間、 3H−チミジン
を添加しておき細胞に取り込まれた 3H−チミジンの放射
活性を液体シンチレーションカウンターで測定すること
により可能である(Coligan,J.E.,et al.eds.,CurrentPr
otocoles in Immunology,Green Publishing Associates
and Wiley-Interscience,1992)。細胞の培養は、例え
ば、RPMI−1640に10％ヒトＡＢ型血清と 100μg/mlのカ
ナマイシンを添加した培地を用い、５％CO2 存在下、37
℃で行う。抗原提示細胞には、リンパ球画分に含まれる
Ｂリンパ球及び単球がなりうる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００６５】実施例19（スギ花粉症患者末梢血Ｔリンパ
球活性化能の測定） スギ花粉症を発症している患者からヘパリン添加注射筒
にて末梢血を採血し、遠心管中のFicoll−Paque 溶液(P
harmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠心し
た。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパスツー
ルピペットで採取し、 PBSで洗浄してスギ花粉症患者末
梢血を得た。この末梢血リンパ球２×105／ウェルを実
施例１〜18で示した合成ペプチド10μg/mlまたは、安枝
らの方法(J.Allergy Clin.Immunol.71,77-86,1983)に従
い精製したCryjＩ抗原10μg/mlとともに、10％ヒトＡＢ
型血清と 100μg/mlのカナマイシンを添加した培地中
で、５％CO2 存在下、37℃、５〜７日間培養した。培養
終了前12〜15時間、１μCi／ウェルの3H−チミジンを添
加しておき、セルハーベスター(Skatron社）にて細胞を
グラスフィルター上に補集し、細胞に取り込まれた放射
活性を液体シンチレーションカウンター（Beckmann社）
で測定した。Ｔリンパ球の活性化能は、ペプチド添加時
の放射活性とペプチド無添加時の放射活性の比(Stimula
tion Index;S.I) で示した。結果を表６に示す。
球活性化能の測定） スギ花粉症を発症している患者からヘパリン添加注射筒
にて末梢血を採血し、遠心管中のFicoll−Paque 溶液(P
harmacia社）に重層後、 400×ｇ、20℃で40分間遠心し
た。遠心後、中間層に存在するリンパ球画分をパスツー
ルピペットで採取し、 PBSで洗浄してスギ花粉症患者末
梢血を得た。この末梢血リンパ球２×105／ウェルを実
施例１〜18で示した合成ペプチド10μg/mlまたは、安枝
らの方法(J.Allergy Clin.Immunol.71,77-86,1983)に従
い精製したCryjＩ抗原10μg/mlとともに、10％ヒトＡＢ
型血清と 100μg/mlのカナマイシンを添加した培地中
で、５％CO2 存在下、37℃、５〜７日間培養した。培養
終了前12〜15時間、１μCi／ウェルの3H−チミジンを添
加しておき、セルハーベスター(Skatron社）にて細胞を
グラスフィルター上に補集し、細胞に取り込まれた放射
活性を液体シンチレーションカウンター（Beckmann社）
で測定した。Ｔリンパ球の活性化能は、ペプチド添加時
の放射活性とペプチド無添加時の放射活性の比(Stimula
tion Index;S.I) で示した。結果を表６に示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 井上 孝 茨城県つくば市御幸が丘27 ダイセル化学 工業株式会社筑波研究所
Claims (2)
- 【請求項１】 配列番号１〜７で表されるアミノ酸配列
から選ばれるペプチドであり、スギ花粉症患者末梢血Ｔ
リンパ球と反応することを特徴とするペプチドまたはそ
の誘導体。 - 【請求項２】 請求項１記載のペプチドまたはその誘導
体を２種以上組み合わせてなる、スギ花粉症の治療また
は予防に用いられる組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8163287A JPH107700A (ja) | 1996-06-24 | 1996-06-24 | スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8163287A JPH107700A (ja) | 1996-06-24 | 1996-06-24 | スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH107700A true JPH107700A (ja) | 1998-01-13 |
Family
ID=15770960
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8163287A Pending JPH107700A (ja) | 1996-06-24 | 1996-06-24 | スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH107700A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1192497A (ja) * | 1997-09-17 | 1999-04-06 | Sankyo Co Ltd | ペプチド及びその用途 |
| WO2007024026A1 (ja) * | 2005-08-25 | 2007-03-01 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Ｔ細胞認識エピトープペプチドを固定化又は内包化した生分解性ナノ粒子 |
| EP2256189A1 (en) | 2003-03-28 | 2010-12-01 | National Institute Of Agrobiological Sciences | Process for producing a plant storage organ in which a GLP-1 derivative recombinant protein is highly produced. |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06197768A (ja) * | 1993-01-07 | 1994-07-19 | Meiji Seika Kaisha Ltd | スギ花粉抗原およびそれをコードする遺伝子 |
| JPH0847392A (ja) * | 1993-11-05 | 1996-02-20 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンＣｒｙ ｊ ＩＩエピトープ |
-
1996
- 1996-06-24 JP JP8163287A patent/JPH107700A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06197768A (ja) * | 1993-01-07 | 1994-07-19 | Meiji Seika Kaisha Ltd | スギ花粉抗原およびそれをコードする遺伝子 |
| JPH0847392A (ja) * | 1993-11-05 | 1996-02-20 | Meiji Milk Prod Co Ltd | スギ花粉アレルゲンＣｒｙ ｊ ＩＩエピトープ |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1192497A (ja) * | 1997-09-17 | 1999-04-06 | Sankyo Co Ltd | ペプチド及びその用途 |
| EP2256189A1 (en) | 2003-03-28 | 2010-12-01 | National Institute Of Agrobiological Sciences | Process for producing a plant storage organ in which a GLP-1 derivative recombinant protein is highly produced. |
| WO2007024026A1 (ja) * | 2005-08-25 | 2007-03-01 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Ｔ細胞認識エピトープペプチドを固定化又は内包化した生分解性ナノ粒子 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2019118B1 (en) | Method for synthesizing thymosins | |
| JPS61118400A (ja) | 成長ホルモン放出性因子類似体及びその製造方法 | |
| Hashim et al. | Experimental allergic encephalomyelitis: structural specificity of determinants for delayed hypersensitivity | |
| HUT55803A (en) | Process for producing vip-analogues ii | |
| AU631236B2 (en) | Modified transforming growth factor alpha oligopeptides and pharmaceutical compositions thereof | |
| JPH107700A (ja) | スギ花粉抗原のｔ細胞エピトープペプチド | |
| Mihara et al. | Synthesis of the 60 amino acid homeo domain and smaller fragments of the Drosophila gene regulatory protein Antennapedia by a segment synthesis-condensation approach | |
| JPH10259198A (ja) | 連結したｔ細胞エピトープとその用途 | |
| AU664920B2 (en) | Peptide having allergenicity | |
| CN1219548C (zh) | C肽联合胰岛素治疗糖尿病并发症及c肽专一性抗体 | |
| JP3734855B2 (ja) | ペプチド及びその用途 | |
| JP4171794B2 (ja) | ペプチド及びその用途 | |
| CA2030795C (en) | Novel physiologically active peptide and calcium metabolism-regulating agent comprising said peptide as effective ingredient | |
| JP3939401B2 (ja) | ペプチド及びその用途 | |
| NZ229113A (en) | Antitumour toxoplasma gondii water soluble destruction product fraction proteins having a molecular weight of from 4000 to less than 15000 | |
| JP3987562B2 (ja) | ペプチド及びその用途 | |
| JP3987563B2 (ja) | ペプチド及びその用途 | |
| Mezö et al. | Synthesis of linear, branched, and cyclic peptide chimera | |
| JP3294695B2 (ja) | エルカトニン水溶液剤の振とう安定化剤 | |
| JP2003002897A (ja) | ペプチドおよびその用途 | |
| JPS6147498A (ja) | ニワトリカルシトニンの合成法 | |
| Remmer¹ et al. | Chemical Synthesis of Peptides | |
| JPH08333276A (ja) | ペプチド及び気管支拡張剤 | |
| JPH07228600A (ja) | カルシトニン誘導体 | |
| Abiko et al. | SYNTHESIS OF [ARG”! DEACETYL-THYMOSIN & AND |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060207 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060606 |