JPH10511382A - 界面活性剤及びエマルションによる溶血の防止 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、両親媒性化合物の溶血作用を減少させるための、非イオン性界面活性剤又はエマルションの使用に関する。該化合物を非イオン性界面活性剤と共に、又はエマルションの形態で製剤化することを特徴とする該化合物の溶血作用を減少させる方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 界面活性剤及びエマルションによる溶血の防止 本発明は、両親媒性化合物の溶血作用を減少させるための非イオン性界面活性 剤（surface-active agent）（surfactant又は湿潤剤ともいわれる）又はエマル ションの新規な使用に関する。 赤血球を、その内部の液体の浸透圧より小さい浸透圧を有する溶液−即ち溶液 が低張であるとき−に懸濁するときに、赤血球の溶血が観察される。これは、細 胞内への水の拡散によって赤血球が膨潤し、破裂することを引起す効果を有する 。反対に、もし赤血球が高張溶液に懸濁されるならば−即ち浸透圧が細胞内部の 液体のそれより大きい場合−、赤血球は水を失い、収縮する（鋸歯形成）可能性 がある。 溶血のこの古典的な見方により、血漿と同じ浸透圧の“等張溶液”が開発され た。等張溶液（例えば０．９％塩化ナトリウム）では、赤血球は“正常状態”を 保ち、その溶液はヒト赤血球と等張であるといわれる。 医薬製剤の非経口投与の後の溶血は、局在化された組織のダメージ、刺激、貧 血を引起す可能性があり、極端な場合、器官 のダメージ、特に腎臓のダメージに至る可能性がある。 しかし、溶血は低張性の非経口製剤の投与によってのみ引起されるのではない ことが現在明らかである。両親媒性化合物も、等張溶液で投与される場合でさえ 、赤血球での溶血作用を示すことが観察された。 驚くべきことに、現在、非イオン性界面活性剤又はエマルションを使用して、 両親媒性化合物の溶血作用を劇的に減少させることができることが知見された。 それ故、本発明の第１の観点では、両親媒性化合物の溶血作用を減少させるた めの、非イオン性界面活性剤又はエマルションの使用を提供する。 本発明の別の観点では、両親媒性化合物を非イオン性界面活性剤と共に製剤化 すること、又は両親媒性化合物をエマルションの形態で製剤化することを特徴と する、該化合物の溶血作用を減少させる方法を提供する。 界面活性剤（surfactant又は湿潤剤ともいわれる）は、一般的に、疎水性部分 （例えばアルキル鎖）と親水性部分（例えば極性基又はイオン性基）を含む分子 である。 界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両性、及び非イオ ン性を含む多数のクラスに分けることができるが、その内、非イオン性が本発明 に特に有用である。 非イオン性界面活性剤には、脂肪アルコール；天然のモノ、ジ、及びトリグリ セリドなどのグリセリルエステル；脂肪及び他のアルコール（例えばプロピレン グリコール、ポリエチレングリコール、ソルビタン及びコレステロールなど）の 脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；及びポリオキ シエチレンエーテルなどがある。 特に好適な非イオン性界面活性剤は、商品名ツウィーン^TM（Ｔｗｅｅｎ^TM）で 市販のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えばモノオレイン酸エ ステル（ツウィーン８０^TM）である。 使用する非イオン性界面活性剤とその濃度の正確な選択は、選択される界面活 性剤の物理的性質に大きく関わる。本発明の、両親媒性化合物の溶血という性質 は、界面活性剤によるミセルの形成によって遮断されると考えられる。ミセル形 成は、臨界ミセル濃度（ｃｍｃ）といわれる界面活性剤の濃度範囲を超えたとき に起る。それ故、選択される界面活性剤のｃｍｃ範囲内である非イオン性界面活 性剤の濃度を使用することが望ましい。 ミセルは、水の環境に対して界面活性剤分子の疎水性領域がアフィニティを欠く ために界面活性剤により形成される。それ故、ミセルの核での強い疎水性鎖−鎖 相互作用によって凝集が起こり、ミセルの表面で分子の親水性（極性）領域が形 成される。溶血性の両親媒性化合物の親油性又は非極性領域は、ミセルの疎水性 中心に保たれ、注入直後での赤血球細胞膜とのダメージを与える相互作用を防止 する。 非イオン性界面活性剤を含む製剤は、好都合には０．０５〜５％の界面活性剤 及び好ましくは０．１〜２．５％を含む。 エマルションとしての製剤は、市販の脂肪エマルション、例えばイントラリピ ド^TM（Intralipid^TM）、リポシン^TM（Liposyn^TM）、インホヌトロール^TM（Infon utrol^TM）、リポフンジン^TM(Lipofundin^TM)、及びリピフィサン^TM(Lipiphysan^TM )など、と両親媒性化合物を混合して製造できる。化合物は未混合エマルション 製剤に溶解されるか、又は化合物は油（例えば大豆油、サフラワー油、綿実油、 ゴマ油、コーン油又はアーモンド油）に溶解されることができ、エマルションは 、リン脂質（例えば卵リン脂質、大豆リン脂質、又は大豆レシチン）などの乳化 剤と水を混合して形成されうる。 エマルションでの両親媒性化合物の投与は、上記の界面活性剤ミセルのために 記載したものと類似の型で溶血を遮断すると考えられる。溶血性両親媒性化合物 は、エマルションの形態で水性媒体に懸濁している脂肪小滴に溶解すると考えら れる。それ故、両親媒性化合物は、注入直後に赤血球細胞膜と相互作用するのを 妨げられる。 適切なエマルションは典型的には最大２０％の油、例えば５〜２０％の油を含 む。脂肪エマルションは、好ましくは０．１〜１．０μｍ、特に０．１〜０．５ μｍの脂肪小滴を含む。 特に好適なエマルション製剤は、両親媒性化合物とIntralipid^TM又はその成分 （大豆油、卵リン脂質、グリセロール及び水）とを混合して製造されるものであ る。 他の成分を製剤に加えることができることが理解されよう。従って、例えば増 嵩剤又は張度改変剤、即ちグリセリン、乳糖、マンニトール、デキストロース、 塩化ナトリウムもしくは塩化カリウム、硫酸ナトリウム及びソルビトールなどを 、一般的に、選ばれた物質により最大５％の濃度で加えることができる。 他の添加剤には、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアル コール、クロロブタノール、クロロクレゾー ル、クレゾール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルエステル、フェノール、フェニ ルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀及び酢酸フェニル水銀、ｐ−ヒドロキシ 安息香酸プロピルエステル、及びチメロサルなどの抗微生物保存剤；アセトン重 亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、アスコルビン酸エステル、ブチルヒドロア ニソール、ブチルヒドロキシトルエン、システイン、ノルジヒドログアイアレン 酸、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシレートナトリウム、メタ 重亜硫酸ナトリウム、及びトコフェロールなどの抗酸化剤；及び酢酸及び塩、ク エン酸及び塩、グルタミン酸、及びリン酸塩などの緩衝液がある。 本明細書で使用する“両親媒性化合物”という用語は、親水性（例えば極性） 領域と疎水性（例えば非極性）領域の両方を含む分子を意味する。分子の疎水性 領域は、親水性領域よりも大なる脂質溶解度を示すので、赤血球膜は、このよう な両親媒性化合物によって破壊される可能性がある。 典型的には、分子の親水性領域は、アミノ部分、例えばジメチルアミノなどの 第３級アミノ基などの極性基又はイオン性基によって特徴付けられる。このよう な基は局所ｐＨによって影響される可能性がある。疎水性領域は、例えばアルキ ル基又は フェニル基などの一つ以上のアリール部分を有する分子の一部分でありうる。 物理的性質によって意図された作用部位に到達する無数の両親媒性化合物があ ることが理解されよう。例えば、主に中枢神経系（ＣＮＳ）に作用する薬剤分子 は、血液−脳関門を通って脳に侵入できるに違いない。このことは、薬剤分子の 親油性の性質によって容易にされうる。両親媒性化合物が注射によって投与され 、注射針の先端の間近の血液での化合物の濃度が高く、それ故溶血がより起こり やすいときに、上記の性質のみは問題になる。このような例において、薬剤をゆ っくり注射するか、又は可能ならば、薬剤の容量を増大させて、溶血を避けるこ とかできるが、これらの方法は便利でなく、又は実際的でなく、及び臨床医に余 分の重荷をもたらしうる。 溶血は、in vivoで次の方法で測定できる。 オスのSprague-Dawleyラット（２８０〜４５０ｇ）を、イソフランで麻酔する 。尾の動脈及び尾の静脈にポリテンチューブを挿入し（内部直径０．５８ｍｍ、 外部直径０．９６ｍｍ）、少量のヘパリン化生理食塩水（０．２〜０．５ｍｌ） で内部を洗浄する（ヘパリン濃度１０ユニット／ｍｌ）。ラットを固定 器に置き、３０分〜１時間回復させる。試験化合物の投与の１０分前に、ベース ラインの血液サンプルを採取する。それからラットにｔ＝０分で試験化合物を投 与する。典型的には、１−１０ｍｇ／ｍｌ溶液の１−１０ｍｌ／ｋｇを、尾の静 脈のカテーテルを通して２分かけて投与し、ヘパリン化生理食塩水で洗浄する。 投与後、血液小サンプル（約４００μｌ）を尾の動脈カテーテルから１時間に わたって間隔をおいて採取する（典型的には、ｔ＝５、１０、１５、３０、６０ 分）。この間、カテーテルは、前のサンプルで汚されない新鮮な血液を得るため に、カテーテルをきれいにする。採取された血液を、等量の生理食塩水で置換え る。血液サンプルを、ヘパリン化チューブ（典型的には、Microtainers^TM）に直 接移し、氷上に置く。 溶血のアッセイは、血液サンプルを遠心分離し、血漿分画を得て行う。その後 、血漿をプラスチックチューブにデカントで移し、溶血を眼で判定する（分光光 度計を使用する遊離ヘモグロビンの測定のために、比色定量キュベットを使用で きる）。後の分析が必要なら、血漿サンプルを−１８℃以下に凍結できる。 溶血を以下のシステムで評価する。 − ＝差無し ＋／−＝ボーダーライン：非常に僅かのピンク色 ＋ ＝小：僅かのピンク色 ＋＋ ＝中：ピンク−赤色 ＋＋＋＝大：赤色 ＋＋＋＋＝かなり大：非常な暗赤色 以下の表は、化合物２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−ビス（トリフルオロメチル） フェニル）エトキシ）−４−（５−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル）−１，２ ，３−トリアゾル−４−イル）メチル−３−（Ｓ）−フェニルモルホリン（化合 物Ａ）を使用して得られたスコア、及び種々の濃度のTween80^TM（ポリオキシエ チレンソルビタンモノオレイン酸エステル）又はIntralipid^TM（大豆油、卵リン 脂質、グリセロール及び水）中の化合物Ａを使用するアッセイを行う効果を示す 。５％マンニトールを、張度を調製するために、各ベヒクルに含む。 上記結果から、化合物Ａは、５％マンニトール中でのみ投与されたときには、 上記in vivoアッセイで大なる溶血を示すが、非イオン性界面活性剤（Tween80^TM ）と共に製剤化されたとき、又はエマルション（Intralipid^TM）中で製剤化され たときには、溶血性ではないことが明白である。上記結果が示すように、溶液濃 度（即ち、注射時に注射針先端での化合物Ａの濃度）が高い（Tween80^TMで５ｍ ｇ／ｍｌ及びIntralipid^TMで１０ｍｇ／ｍｌ）場合、中なる溶血が観察されるだ けである。 以下の実施例は、本発明で使用されうる医薬製剤を説明する。実施例１−（界面活性剤）注射用製剤 活性成分（単数又は複数） 最大１０ｍｇ／ｋｇ Tween80^TM 最大２．５％ ［５％マンニトール（等張性）］ 活性成分を、市販のTween80^TM（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン 酸エステル）及び５％マンニトール水溶液（等張性）の溶液に直接溶解する。実施例２−（エマルション）注射用製剤 活性成分（単数又は複数） 最大３０ｍｇ／ｋｇ Intralipid^TM（１０−２０％） 活性成分を市販のIntralipid^TM（１０又は２０％）に直接溶解させ、エマルシ ョンを形成させる。実施例３−別の（エマルション）注射用製剤 量 活性成分（単数又は複数） ０．１−１０ｍｇ 大豆油 １００ｍｇ 卵リン脂質 ６ｍｇ グリセロール ２２ｍｇ 注射用水 計１ｍｌにする 全ての物質を滅菌し、パイロジェンを含まない。活性成分を大豆油に溶解する 。それからこの溶液を、卵リン脂質、グリセロール及び水と混合してエマルショ ンを形成させる。それからエマルションを滅菌バイアルに密封する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，Ｂ Ｙ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ Ｎ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．両親媒性化合物の溶血作用を減少させるための、非イオン性界面活性剤又は エマルションの使用。 ２．界面活性剤がアニオン性、カチオン性、両性又は非イオン性であることを特 徴とする請求項１に記載の使用。 ３．界面活性剤が非イオン性であることを特徴とする請求項２に記載の使用。 ４．非イオン性界面活性剤が、脂肪アルコール；グリセリルエステル；脂肪及び 他のアルコールの脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ ル；及びポリオキシエチレンエーテルからなる群から選択されることを特徴とす る請求項３に記載の使用。 ５．非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであ ることを特徴とする請求項４に記載の使用。 ６．エマルションが脂肪エマルションであることを特徴とする請求項１に記載の 使用。 ７.脂肪エマルションが、Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM 及び Lipiphysan^TMからなる群から選択されること を特徴とする請求項６に記載の使用。 ８．両親媒性化合物を非イオン性界面活性剤と共に、又はエマルションの形態で 製剤化することを特徴とする、該化合物の溶血作用を減少させる方法。 ９．界面活性剤がアニオン性、カチオン性、両性又は非イオン性であることを特 徴とする請求項８に記載の方法。 １０．界面活性剤が非イオン性であることを特徴とする請求項９に記載の方法。 １１．非イオン性界面活性剤が、脂肪アルコール；グリセリルエステル；脂肪及 び他のアルコールの脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エス テル；及びポリオキシエチレンエーテルからなる群から選択されることを特徴と する請求項１０に記載の方法。 １２．非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルで あることを特徴とする請求項１１に記載の方法。 １３．製剤が０．０５〜５％の界面活性剤を含むことを特徴とする請求項８〜１ ２のいずれかに記載の方法。 １４．エマルションが脂肪エマルションであることを特徴とす る請求項８に記載の方法。 １５．脂肪エマルションが、Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofund in^TM及び Lipiphysan^TMからなる群から選択されることを特徴とする請求項１４ に記載の方法。 １６．脂肪エマルションが５〜２０％の油を含むことを特徴とする請求項１４又 は１５のいずれかに記載の方法。 １７．脂肪エマルションが０．１〜１．０μｍの脂肪小滴を含むことを特徴とす る請求項１６に記載の方法。 １８．両親媒性化合物を Intralipid^TM又はその成分（大豆油、卵リン脂質、グ リセロール及び水）と混合することによって、エマルション製剤を製造すること を特徴とする請求項１４〜１７のいずれかに記載の方法。