JPH10509144A - ▲viii▼因子の精製方法 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.金属依存性プロテアーゼによって惹起される組換え血液凝固VIII因子の分解 を低減させる方法であって、金属依存性プロテアーゼの阻害剤を採取後の溶液に 添加すること、及び、阻害剤が、 (1)VIII因子分子を安定化する1種または複数のイオンに対するよりもプロテ アーゼのアルカリ土類金属イオンまたは金属イオンに対して強い親和性を有する 錯形成剤、及び、 (2)プロテアーゼの天然基質に構造的に近縁であり電気陰性部分を含んでいる 化合物 から成るグループから選択されることを特徴とする方法。 2.錯形成剤が、窒素含有ポリカルボン酸、複素環アミン、フェナントロリン、 ピリジンカルボン酸、キノリン、サリチル酸塩、コラーゲンのN−アシル誘導体 、β−ジケトンのN−アミノアシル誘導体、チオール化合物、並びに、ジ−及び トリカルボン酸から成るグループから選択されることを特徴とする請求項1に記 載の方法。 3.錯形成剤が窒素含有ポリカルボン酸であることを特徴とす る請求項2に記載の方法。 4.窒素含有ポリカルボン酸が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)であるこ とを特徴とする請求項3に記載の方法。 5.錯形成剤が1,10−フェナントロリン、イミダゾール及びL−ヒスチジン から成るグループから選択されることを特徴とする請求項2に記載の方法。 6.電気陰性部分を含む化合物が、ヒドロキサメート、ホスホラミデート及びカ ルボキシレートから成るグループから選択されることを特徴とする請求項1に記 載の方法。 7.溶液が、採取溶液及び一次単離に供給されるかまたは一次単離後の任意の水 溶液から成るグループから選択されることを特徴とする請求項1から6のいずれ か一項に記載の方法。 8.一次単離が、カチオン交換クロマトグラフイー、アニオン交換クロマトグラ フイー、アフィニティクロマトグラフイー及び疎水性相互作用クロマトグラフイ ーから選択されるクロマトグラフィー段階であることを特徴とする請求項7に記 載の方法。 9.一次単離が、カチオン交換ゲルを用いるクロマトグラフィー段階であること を特徴とする請求項8に記載の方法。 10.ゲルのリガンドがスルホプロピルまたはスルホネートで あることを特徴とする請求項9に記載の方法。 11.阻害剤を採取溶液に添加することを特徴とする請求項1から10のいずれ か一項に記載の方法。 12.阻害剤が約0.01−約10mMの範囲の濃度の窒素含有ポリカルボン酸 であることを特徴とする請求項11に記載の方法。 13.阻害剤を一次単離中にVIII因子分子の洗浄に使用される液体に添加するこ とを特徴とする請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。 14.阻害剤が約0.1−約10mMの範囲の濃度の窒素含有ポリカルボン酸で あることを特徴とする請求項13に記載の方法。 15.阻害剤を溶出用液体に添加することを特徴とする請求項8から10のいず れか一項に記載の方法。 16.阻害剤を一次単離後に得られた溶液に添加することを特徴とする請求項7 に記載の方法。 17.阻害剤が約0.5−約15mMの範囲の濃度の窒素含有ポリカルボン酸で あることを特徴とする請求項15または16に記載の方法。 18.カチオン性ゲルに吸着されたVIII因子分子を少なくとも約0.3Mのイオ ン強度をもつ溶液によって溶出させることを特徴とする請求項9または10に記 載の方法。 19.組換え血液凝固VIII因子を産生するために使用される細胞培養物が、フォ ンビルブラント因子(vWf)を実質的に含有しないことを特徴とする請求項1 から18のいずれか一項に記載の方法。 20.組換え血液凝固VIII因子が血液凝固活性を維持している全長VIII因子の欠 失誘導体であることを特徴とする請求項1から19のいずれか一項に記載の方法 。 21.VIII因子の欠失誘導体が組換えVIIISQ(r−VIIISQ)因子の欠失誘導 体であることを特徴とする請求項20に記載の方法。 22.金属依存性プロテアーゼがメタロプロテアーゼであることを特徴とする請 求項1から21のいずれか一項に記載の方法。 23.メタロプロテアーゼがメタロエンドペプチダーゼであることを特徴とする 請求項22に記載の方法。 24.金属依存性プロテアーゼの活性に必要な金属イオンが、Zn2+、Cu2+、 Fe2+、Fe3+、Mn2+、Co2+及びCd2+から成るグループから選択されるこ とを特徴とする請求項1か ら23のいずれか一項に記載の方法。 25.金属依存性プロテアーゼの活性に必要な金属イオンが、Zn2+であること を特徴とする請求項24に記載の方法。 26.請求項1から25のいずれか一項に記載の方法で精製された組換えVIII因 子を含有する水溶液。 27.血友病の症状を有する患者に投与する医薬を製造するための請求項1から 25のいずれか一項に記載の方法で精製された組換えVIII因子を含有する水溶液 の使用。 28.請求項1から25のいずれか一項に記載の方法で精製された組換えVIII因 子を治療有効量で投与する血友病の治療方法。
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