JPH10502373A - 立体化学的ワートマニン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ＰＩ ３−キナーゼ阻害剤および抗癌剤として有用なワートマニン誘導体、特に、ワートマニンの１１,１７置換誘導体に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 立体化学的ワートマニン誘導体 ワートマニンは公知のホスホチジルイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ−３−キ ナーゼ）の強力な阻害剤であり、強力な抗癌剤としての使用が示唆されている。 ワートマニンは真菌類のペニシリウム ワートマニンの培養ブロスから分離され る天然産生の化合物であり、下記の基本的構造を有する： ワートマニンの欠点の１つは生命体に対する毒性である。低投与量であつても 、ワートマニンの純品は実験動物を死に至らしめる。ワートマニンの誘導体の合 成の試みはこれまで問題があった。 本発明はＰＩ−３−キナーゼ阻害の増強力を示し、抗癌剤としての使用の可能 性を有するワートマニン化合物を提供するものである。本発明の化合物は、ワー トマニン誘導体の１１−置換、１７−置換および１１，１７−二置換誘導体を含 む。一般にこれらの誘導体は基本的な置換基として１１−エステル類を含む。本 発明の化合物は、一般式： （式中、Ｒ₁は、＝０またはＯＲ₃であり； Ｒ₂は、＝ＯまたはＯＲ₃であり； 各Ｒ₃は、独立して、水素、アリールアシル、Ｃ₃−Ｃ₈アシルまたは置換アシ ルであり； Ｒ₁が、＝ＯまたはＯＨであるときは、Ｒ₂は、＝Ｏでない）を有する。 本発明はまた、製薬学的に許容され得る担体、賦形剤または希釈剤と組み合わ せてこの化合物を含む医薬製剤を提供する。本発明はまた、ＰＩ−３−キナーゼ 阻害剤として、例えば、抗癌剤としてのこの化合物の使用を提供する。 「アシル」という語は、カルボニル基に結合したアルキル基をいう。典型的な アルキル基は、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、イソバレリルお よびカプロリルなどのＣ₂−Ｃ₈アシル基を含む。 「Ｃ₃−Ｃ₈アシル」という語は、カルボニル基に結合したＣ₂−Ｃ₇アルキル基 を表す。典型的なＣ₃−Ｃ₈アシル基は、プロピオニル、ブチリル、バレリル、イ ソバレリルおよびカプロリルを含む。 「置換アシル」という語は、カルボニル基に結合した置換アルキル基を表す。 置換アルキル基に存在する置換基の例は、ハロゲン原子、例えば、塩素；アミノ 基、例えば、ジエチルアミノ；およびアルキリデン基、例えば、メチリデンであ る。典型的な置換アシル基は、置換Ｃ₂−Ｃ₈アシル基、例えば、Ｎ,Ｎ−ジメチ ルアミノプロピオニル、アクリロイルおよびクロロアセチルである。 「アリールアシル」という語は、アシル基に結合したアリールまたは置換アリ ール基をいう。 「アリール」という語は、フェニルなどの芳香族分子を表し、また、ナフチル 、フルオレニル、アンスラニルおよびフェナンスリルなどの多核芳香族分子を表 す。「置換アリール」という語は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ₁ −Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、カルボキシ、アセチル、ホルミル、カル ボキシメチル、ヒドロキシメチル、アミノ、アミノエチルまたはトリフルオロメ チルからなる群から選ばれる１個またはそれ以上の基で置換されたアリール基を 表 す。置換アリール基の例には、４−メチルフェニル、２−メチルフェニル、４− メトキシフェニル、４−（ｉ−プロピル）フェニル、４−シクロペンチルフェニ ル、４−（１,１,４,４−テトラメチルブチル）フェニル、４−アセチルフェニ ル、４−トリフルオロメチルフェニル、４−クロロフェニル、２−ブロモフェニ ル、３−ヨードフェニル、６−ブロモナフチル、３,４−メチレンジオキシフェ ニル、インデニル、１,２,３,４−テトラヒドロナフチルおよび１,２,４,４−テ トラメチル−１,２,３,４−テトラヒドロナフチルが含まれる。「アリールアシ ル」の典型的なものはフェニルアセチルである。 すべての式（Ｉ）の化合物は、ＰＩ−３−キナーゼの作用を阻害する能力を有 すると考えられ、数種の化合物は好ましい。好ましい化合物は一般式： （式中、Ｒ₁は、＝０またはＯＲ₃であり； Ｒ₂は、＝ＯまたはＯＲ₃であり； Ｒ₃は、水素、Ｃ₃−Ｃ₈アシルまたは置換アシルである）を有する。 この群の好ましい化合物のうち、最も好ましい化合物は、Ｒ₁がＯ−Ｃ₃−Ｃ₈ であるか、またはＯ−置換Ｃ₂−Ｃ₈アシルであり；Ｒ₂が、＝ＯまたはＯＨであ り、すべての化合物は下記に詳細に記載されている操作を用いてワートマニンか ら合成される。これらの操作は単に説明のために示され挿入されたものであって 、本発明をこれらの工程および記載の具体的な化合物に限定するものとみなされ るべきでないことは勿論である。 ワートマニンの１１−デスアセチル誘導体は最初、下記の反応式にしたがって 当業者に公知の方法によって製造される。 反応式Ｉ 一般反応式において、ワートマニン（ｏ）を溶媒中に懸濁させ、アミンと反応 させて開環化合物（ｂ）を生成させる。化合物（ｂ）は一般に、ＰＩ−３−キナ ーゼ阻害剤として顕著な活性（ＩＣ₅₀＞１０ng／ml）を示さない。化合物（ｋ） は、第３級アミンおよびアクリロイルハライド、ついでジメチルアミンとの反応 、および溶媒中の強酸を用いてフラン環の再形成によって、化合物（ｂ）から製 造する。化合物（ｆ）は溶媒の存在下強酸と化合物（ｂ）を反応させて製造され る。化合物（ｋ）および（ｆ）の精製は周知の方法によって行われる。 化合物（ｆ）は１０ng／mlにおいてＰＩ−３−キナーゼに対して５０％阻害を 示す。最も好ましい化合物は下記の反応式II： 反応式IIa 反応式IIb 反応式IIc に従って化合物（ｆ）から直接的または間接的に製造される。 上記の反応式に従って、好ましい化合物（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）は、化合 物（ｆ）から対応する酸無水物と反応させて１１−置換ワートマニンエステルを 生成させることによって製造される。イソバレリル誘導体（ｉＡ）は、化合物（ ｆ）から、イソバレリルハライドとの反応によって製造される。化合物（ｃ）は 、化合物（ｆ）と酸化剤を反応させ、１１−オキシ誘導体を生成させることによ って製造される。化合物（ｄ）は、化合物（ｆ）の１７−オキシ基をヒドロキシ に還元することによって製造される。 化合物（ｎ）は、化合物（ｆ）をフェニルアセトキシハライドと反応させるこ とによって、化合物（ｍ）は化合物（ｆ）とアシロキシルハライドと反応させる ことによって製造される。 最後に、化合物（ｇ）の還元によって化合物（ｅ）が生成し、化合物（ｅ）は ついで、酸無水物と反応させて化合物（ｊ）を生成させることができる。上記に 概説した操作の詳細な記載は後に明細書中に示される。 本発明はまた、ＰＩ−３−キナーゼの阻害剤としてのこれらの化合物の使用を 提供する。本発明の化合物の活性を証明するために、下記の実験を行った： ホスファチジルイノシトール ３−キナーゼの精製 ＰＩ ３−キナーゼは多種多様の方法によって製造され得る。１つの方法では 、ＰＩ ３−キナーゼはアメリカン タイプ カルチャー コレクション、ロックビ ル、ＭＤから得られた融合性スイス３Ｔ３細胞から製造された。ＰＩ ３−キナ ーゼの精製前に、１０％胎子うし血清で補足したダルベコ修正イーグル培地（Ｄ ＭＥＭ；シグマ、セントルイス、ＭＯ）のバルク培養中に細胞を維持し、０.２ ５％トリプシンおよび０.０２％エタレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）を用 いて接種した。４つの１００mm培養プレート上の２４×１０⁶個の細胞を１０ｍ Ｌハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ；シグマ）、ｐＨ７.４で洗浄し、細胞をＤ胎 子うし血清無添加のＤＭＥＭ中に１時間放置し、血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ ；ゲンザイム、ケンブリッ、ＭＡ）の組換ひとＢＢホモダイマー１００ng／ｍＬ を用 いて１５分間刺激した。培地を吸引し、細胞をＨＢＳＳ１０mLで洗浄し、１３７ mMＮaＣl ３mL、ＭgＣl₂１mMを含むトリス（ｐＨ８.０）２０mM、グリセリン１ ０％、トリトンＸ−１００（ローム・アンド・ハース、フィラデルフィア、ＰＡ ）１％、ロイペプチン２μg／mL、アプロトニン２μg／mL、フェニルメチルスル ホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）およびオルトバナジン酸ナトリウム１mMで融解さ せた。細胞を皿の表面から適当にかきとり、１０分間６，０００×ｇにて遠心分 離した。上清液を、１.５mLチューブ中で洗浄ずみのＩｇＧ２ｂｋアンチホスホ チロシン抗体ビーズ（アップステイトバイオテクノロジーインコーポレーテッド 、レークプラシッド、ＮＹ）50μLと混合させた。チューブに栓をし、２時間４ ℃にて回転させ、ビーズをロイペプチン２μg／mL、アプロトニン４μg／mL、Ｐ ＭＳＦ１mM、アデノシン２００μMおよびオルトバナジン酸ナトリウム１mMを含 むＨＢＳＳ １mLで洗浄した。チロシンホスホリル化ＰＩ ３−キナーゼを１０mM トリス（ｐＨ７.５）、ＮaＣl ２M、ＥＤＴＡ１mM、アデノシン２００μMおよび フェニルりん酸ナトリウム１０mMの２００μL／チューブを用いてビーズから溶 離させた。 別の好ましい方法では、ＰＩ ３−キナーゼは牡うし脳から調製した。２個の 牡うし脳（湿潤重量９００ｇ）を近隣の屠殺場から屠殺数分以内に得、氷づめし 、１時間以内にホモジネートした。脳から過剰の脂肪および血管を除去した後、 ２５０mMスクロース、β−メルカプトメタノール６mM、ロイペプチン１μg／mL 、ペプタチンＡ１μg／mLおよびＰＭＳＦ０.４mMおよびＭgＣl₂１mMを含有する トリス（ｐＨ８.３）２０mM中で４℃にてテクマーティシューマイザー（シンシ ナチ、ＯＨ）を用いてホモジネートした。 ６０分間１００００×ｇにて遠心分離後、上清液（約１２００mL）のｐＨを１ Ｍ酢酸を滴下しつつ添加して、５.７５に低下させた。４℃にてさらに１５分間 撹拌後、溶液を６０分間１３５００×ｇにて遠心分離した。上清液は捨てた。ペ レットをバッファーＡ（β−メルカプトメタノール６mM、エチレングリコール− ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）、 ロイペプチン１μg／mL、ペプスタチンＡ１μg／mLおよびＭgＣl₂１mMを含むト リス２０mM、ｐＨ８.３）に懸濁させ、４℃にて流速５mM／分でファーストフロ ーＱセファローズカラムに充填した。充填後、カラムを０.１M ＫＣlを含むバッ ファーＡ３容で洗浄し、ついで、３mL／分にて７容でバッファーＡ／０.１Ｍ Ｋ ＣlからバッファーＡ／０.６Ｍ ＫＣlの直線勾配で、キナーゼを溶出させた。 各画分のＰＩ ３−キナーゼ活性を、画分１０μLおよび基質としてホスファチ ジルイノシトールを用いて下記のように測定した。ＰＩ ４−キナーゼはブレー クスルーで溶出させた；ＰＩ ３−キナーゼはＫＣl約０.３Ｍで溶出した。ＰＩ ３−キナーゼプールは４０％硫酸アンモニウム沈澱処理を行った。遠心分離（１ ３５００×ｇにて６０分間）後、ペレットをバッファーＢ（りん酸カリウム１０ mM、ｐＨ７.４、β−メルカプトメタノール、ロイペプチン１μg／mL、ペプスタ チンＡおよびＭgＣl₂１mM含有）中に再懸濁させ、ヒドロキシルアパタイト カラ ム（カルバイオケム インコーポレーテッド、ラジョラ、ＣＡ）５０mLに流速２. ５mL／分にて充填した。カラムをバッファーＢ１５０mLにて、Ａ₂₈₀の基底線が ０になるまで洗浄し、ついでキナーゼをＫＨ₂ＰＯ₄１０〜３２０mMの直線勾配に て１mL／分にて４５０分かけて溶出させた。 活性画分を一緒にし、ついで、バッファーＣ（ＭＥＳ ５０mM、ｐＨ６.２、β −メルカプトメタノール、ＥＧＴＡ ０.１mM、ロイペプチン１μg／mL、ペプス タチンＡ１μｇ／分およびＭgＣl₂１mM含有）で平衡化させたMonoSカラム（８ml ）に３mL／分にて充填した。ＰＩ ３−キナーゼはバッファーＣ中０〜０.４MＫ Ｃlの直線勾配で溶出させた。画分の試験ではＰＩ ３−キナーゼ活性の２個のプ ールを決まった処理手順に従って検出した。活性の大部分はフロースルーで検出 したが、活性の２０％は直線勾配で溶出させた。勾配の中の物質はかなりのＰＩ ４−キナーゼ活性を有していたが、本質的にＰＩ ４−キナーゼ活性は、フロー スルー中のＰＩ ３−キナーゼと一緒ではなかった。従って、MonoSフロースルー はミニウルトラセット オメガ５０Ｋ膜（フィルトロン インコーポレーテッド、 ノースボロー、ＭＡ）上で接線方向流濾過(tangential flow filtration)によっ て濃縮し、バッファーＣで希釈し伝導性を低下させた。ついで、材料を上記の条 件を用いてMonoSカラム上に再充填させた。ＰＩ ３−キナーゼは洗浄中にカラム に結合し、勾配で溶出させた。ホスファチジルイノシトール キナーゼ活性の２ 個のプールは勾配中に得られ；各々をＰＩ ３−キナーゼおよびＰＩ ４−キナー ゼ活性について測定した。プールＩは９５％ＰＩ ３−キナーゼ活性（および５ ％ＰＩ ４−キナーゼ）を含むことが判明したが、プールIIは主としてＰＩ ４− キナーゼ活性を含有していた。 MonoSカラムからのプールＩをバッファーＡで希釈し、MonoQ（１ml）のクロマ トグラフにかけ、バッファーＡ中ＫＣl ０〜０.４Mの勾配で溶出させた。最後の プールはＰＩ ３−キナーゼおよびＰＩ ４−キナーゼ活性について測定した。最 後の生成物からＰＩ ３−キナーゼ活性９９％以上が検出された。 精製ＰＩ ３−キナーゼ活性の測定 ＰＩ ３−キナーゼ活性は既述のマター、Ｗ.Ｆ.ら、バイオケミカル アンド バイオフィジカル リサーチ コミュニケーションズ、１８６，６２４−６３１（ １９９２）記載と同様にして測定した。阻害剤の候補は初めにＤＭＳＯに溶解さ せ、ついで、ＭgＣl₂１５mMおよびＥＧＴＡ １mMを含有するｐＨ７.５の５０mM のＨＥＰＥＳバッファーで１０倍に希釈した。この溶液の１０マイクロリットル を精製うし脳ＰＩ ３−キナーゼ（９μL）およびホスファチジルイノシトール（ ＥＧＴＡ１mM含有５０mMのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７.５中２mg／mL保存液 ５μL）とともにインキュベートした。最終反応混合物は阻害剤０.１〜５ｎgお よびＤＭＳＯ ３％(v:v)を含有した。ＤＭＳＯの濃度はキナーゼ活性に何の影響 も与えなかった；対照反応混合物は阻害剤を含まずＤＭＳＯ ３％(v:v)を含んだ 。反応物を環境温度にて１０分間プレインキュベートし、ついで、［γ−³²Ｐ］ ＡＴＰ（２ mCi／mL、保存液５００μM;０.０８ mCi／mL、最終濃度２０μM； デュポン ニューイングランド ヌクレアー、ボストン、ＭＡ）１μLを添加して 酵素反応を開始させた。環境温度下でひんぱんに混合しながら反応を１０分間行 わせ、その後、１Ｎ ＨＣl４０μLを添加して反応を終了させた。脂肪類をＣＨ Ｃl₃： ＭｅＯＨ（１：１、v:v）８０μLを添加して抽出した。試料を混合し、遠心分離 にかけ、下部の有機層をシリカゲルＴＬＣプレート（ＥＭサイエンス、ギフズタ ウン、ＮＪ）にかけ、ＣＨＣl₃：ＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ：ＮＨ₄ＯＨ（４５：３５：８ .５：１.５、v:v）で展開させた。プレートを乾燥させ、キナーゼ反応をオート ラジオグラフィーで可視化させた。ホスファチジルイノシトール ３-モノホスフ ェート領域をプレートから掻きとり、シンチレーション反応混液として用いられ たレディプロテイン（ベックマン インスツルメンツ インコーポレーテッド、フ ラートン、ＣＡ）を用いて液体シンチレーション分光光度計によって定量した。 ワートマニンおよびその類似体についての阻害濃度は対照と比較して、１分当た りの［³²Ｐ］−計数のパーセントとして測定した。 別法として、ＰＩ ３−キナーゼ反応の生成物をウイトマン、Ｍ．、ネイチャ ー、３３２：６４４−６４６（１９８８）に記載と同様にしてＨＰＬＣによって 確認した。ホスホリピドはメチルアミン試剤中で脱アシル化し、既述のオーガー 、Ｋ.Ｒ.、セル、５７：１６７−１７５に記載のホワットマン パーチスフィア ＳＡＸアニオン交換カラムを用いて分離した。ラジオマチック モデル Ａ−１４ ０ フローワン／ベータ オンライン放射活性検出器を脱アシル化［³²Ｐ］−酵素 生成物の観察に用いた；脱アシル化［³Ｈ］ＰＩ ４−モノホスフェートを内部標 準として添加された。 これらの実験に基づいて、ＰＩ ３−キナーゼの阻害につき、下記のＩＣ₅₀値 が得られた。 化合物 ＩＣ₅₀(ng/ml) ｂ ＞１０ ｃ １．６ ｄ ＞１０ ｅ ０.３８ ｆ １０ ｇ ０.６ ｈ ０.４ ｉ（ｉＡ） １.２（１.１６） ｊ ５６.５ ｋ ８.６ ｌ １.３ ｍ ０.９５ ｎ １.５３ 上記の表から判明するように、本発明の化合物はＰＩ ３−キナーゼの阻害剤 として非常に強い活性を有する。従って、ＰＩ ３−キナーゼ活性は種々の良性 および悪性の腫瘍の形成および成長に関係するから、本発明の化合物はまた抗腫 瘍剤としての有用性を有し得る。 本発明はまた、上記化合物および製薬学的に許容され得る担体、賦形剤または 希釈剤を含む医薬製剤を提供する。下記の製剤が挙げられる（活性成分とは本発 明のワートマニン化合物の１種である。）： 製剤１ 硬ゼラチンカプセル剤を、以下の成分を使用して製造する： 量（mg／カプセル） 活性成分 ２５０ 乾燥デンプン ２００ ステアリン酸マグネシウム １０ 合計 ４６０mg 製剤２ 錠剤を以下の成分を使用して製造する： 量（mg／カプセル） 活性成分 ２５０ 微結晶性セルロース ４００ 二酸化ケイ素(fumed) １０ ステアリン酸マグネシウム ５ 合計 ６６５mg 成分を混合し、圧縮し各６６５mg重量の錠剤を形成する。 製剤３ 以下の成分を含むエーロゾル溶液を製造する： 重量 活性成分 ０.２５ エタノール ２９.７５ プロペラント２２(クロロジフルオロメタン) ７０.００ 合計 １００.００ 活性成分をエタノールと混合し、混合物をプロペラント２２の一部に加え、− ３０℃に冷却し、充填装置に移した。ついで所定の量をステンレススチール容器 に注入し、残りのプロペラントで希釈する。ついでバルブユニットを容器に取り 付ける。 製剤４ それぞれ６０mgの活性成分を含む錠剤を以下のように製造する： 活性成分 ６０mg デンプン ４５mg 微結晶性セルロース ３５mg ポリビニルピロリドン（１０％水溶液） ４mg カルボキシメチルデンプンナトリウム ４.５mg ステアリン酸マグネシウム ０.５mg タルク １mg 合計 １５０mg 活性成分、デンプンおよびセルロースを４５番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに 通し、充分に混合する。ポリビニルピロリドン溶液を含む水溶液を、得られた粉 末と混合した後、その混合物を１４番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに通す。この ようにして製造された顆粒を５０℃にて乾燥し、１８番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふ るいに通す。予め６０番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに通しておいたカルボキシ メチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを顆粒に加 え、混合した後、錠剤機で圧縮してそれぞれ１５０mg重量の錠剤を得る。 製剤５ それぞれ８０mgの活性成分を含むカプセルを次のように製造する： 活性成分 ８０mg デンプン ５９mg 微結晶性セルロース ５９mg ステアリン酸マグネシウム ２mg 合計 ２００mg 活性成分、セルロース、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、 ４５番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに通し、硬ゼラチンカプセル２００mg量で封 入する。 製剤６ それぞれ活性成分２２５mgを含む座薬を次のように製造する： 活性成分 ２２５mg 飽和脂肪酸グリセリド ２,０００mg 合計 ２,２２５mg 活性成分を６０番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに通し、必要最小限の熱を使用 して予め溶融しておいた飽和脂肪酸グリセリド中に懸濁する。ついで混合物を名 目２ｇ容量の座薬型に注ぎ、冷却させる。 製剤７ ５mlの投与量につき、それぞれ５０mgの活性成分を含む懸濁剤を次のように製 造する： 活性成分 ５０mg カルボキシメチルセルロースナトリウム ５０mg シロップ １.２５mＬ 安息香酸溶液 ０.１０mＬ 着香料 適量 着色料 適量 精製水 適量を加えて５mＬにする 活性成分を４５番メッシュ（Ｕ.Ｓ.）のふるいに通し、カルボキシメチルセル ロースナトリウムおよびシロップと混合してなめらかなペーストにする。安息香 酸溶液、着香料および着色料を水の一部で希釈し、撹拌しながら加える。ついで 水適量を加えて所定の容量にする。 製剤８ 静脈注射用製剤を次のように製造され得る： 活性成分 １００mg 等張食塩水 １,０００mＬ 実施例１ 化合物（ｂ）の製造 メタノール７００ml中ワートマニン１２.１３ｇの溶液にジエチルアミン７０m lを加えた。この混合物を室温にて２２時間撹拌し、ついで、室温にて減圧下蒸 発させ、開環化合物（ｂ）を生成させた。 実施例２ １１−デスアセチル−ワートマニン（化合物（ｆ））の製造 蒸発後、(ｂ)の粗固形物をジオキサン９００ml中に溶解し、続いて１Ｎ ＨＣl ２４０mlを加えて１９時間撹拌した。混合物を減圧下濃縮し、ついで水で希釈 し、水層をジクロロメタンで抽出した。ジクロロメタンを硫酸ナトリウムで乾燥 させ、減圧下室温にて蒸発させ、粗化合物（ｆ）１２.２ｇを得た。この粗化合 物を、シリカ上クロマトグラフィーかけ、酢酸エチル中２５％ヘキサンで溶出さ せて精製した。黄色ガラス状標題化合物７.３５ｇ（収率６７％）を得た。Ｃ₂₁ Ｈ₂₂Ｏ₇分析−計算値：−６５.２８；Ｈ−５.７４；実測値：Ｃ−６５.５４；Ｈ −５.８１ 実施例３ １１−ジメチルアミノプロピオニル−デスアセチル−ワートマニンの製造 無水ジクロロメタン１０ml中化合物（ｂ）２５２.９mgの溶液に、ジイソプロ ピルエチンアミン４８０μl、続いてアクリロイルクロリド２２３μlを加え、３ 時間室温にて撹拌した。溶媒を減圧下蒸発させ、粘稠な橙色の固形物を得た。こ の粗物質を氷／アセトン浴中で５℃に冷却した。氷冷ジメチルアミン（５ml）を 混合物に加え、１.２５時間−５℃にて撹拌した。混合物を室温に暖め、ジメチ ルアミンを留去した。残渣をシリカ上クロマトグラフィーにかけ、ジクロロメタ ン中１０％メタノール、ついで１段階勾配でジクロロメタン中２０％メタノール で溶出させて分離した。２つのＵＶ活性生成物を単離し、低い方のＲ_f量の生成 物をジオキサン１１mlおよび１Ｎ ＨＣl ２.３ml中に溶解し、混合物を２０時間 室温にて撹拌した。この混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム で洗浄した。有機層を分離し、有機層を一緒に、ついで食塩水で洗浄し、硫酸ナ トリウムで乾燥し、減圧下室温にて蒸発させた。粗生成物をシリカ上クロマトグ ラフィーにかけ、ジクロロメタン中７％メタノールで溶出させて精製した。標題 化合物（収率１４％）３７.４mg（収率１４％）を薄橙色の固形物として単離し た。 実施例４ １１−プロピオニル−デスアセチル−ワートマニンの製造 ピリジン２５ml中化合物（ｆ）４８３.６の溶液に、無水プロピオン酸６８０ μlを加え、混合物を２６時間室温にて撹拌した。混合物を減圧下室温にて蒸発 させ、残渣をシリカ上クロマトグラフィーにかけ、酢酸エチル中５０％ヘキサン で溶出させて精製した。灰白色の固形物として標題化合物５１２.８mg（収率９ ３％）を得た。Ｃ₂₄Ｈ₂₆Ｏ₈分析−計算値−Ｃ：６５.１５；Ｈ：５.９２；実測 値−Ｃ：６５.０７;Ｈ：５.９６ 実施例５ １１，１７−デスアセチル−ジヒドロ−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）１００mgを、窒素雰囲気下無水テトラヒドロフラン３.５ml中１ Ｍ水素化ホウ素２５０μlと反応させ、１Ｍ水素化ホウ素２５０μlを加え、混合 物を２.５時間０℃にて撹拌した。反応を０℃にて水１mlを加えて終了させ、つ いで、放置して室温まで暖め、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ついで洗浄、精製し、白色固形 物として標題化合物６５.８mg（収率６５％）を得た。 実施例６ １１−プロピオニル−１７−アセチル−デスアセチル−ジヒドロ− ワートマニンの製造 ピリジン５ml中実施例１３で製造された化合物（ｅ）１０４.９mgの溶液に、 無水酢酸９５μlを加えた。混合物を２７時間室温にて撹拌した。ついで、混合 物を蒸発させ、残渣をシリカ上クロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中４０％酢 酸エチルで溶出させて精製し、白色固形物として標題化合物８９.９mg（収率７ ７％）を得た。Ｃ₂₆Ｈ₃₀Ｏ₉分析−計算値−Ｃ：６４.１９；Ｈ：６.２２；実測 値−Ｃ：６４.４３；Ｈ：６.３１ 実施例７−１４で製造された化合物はすべて、化合物（ｆ）（１１−デスアセ チルワートマニン）からすぐに製造された。 実施例７ １１−フェニルアセチル−デスアセチル−ワートマニンの製造 無水ジクロロメタン８ml中化合物（ｆ）１００.２mgの溶液に、ジイソプロピ ルエチルアミン１５０μl、続いてフェニルアセチルクロリド１２０μlを加え、 混合物を２３時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナ トリウムで洗浄した。ジクロロメタンを食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥 させ、減圧下蒸発させ、粗精製物２１４.６mgで生成させ、シリカ上でクロマト グラフィーにかけ、酢酸エチル中５０％ヘキサンで溶出させて精製した。薄黄色 ガラス状標題化合物８１.４mgを回収した（収率６２％）。 実施例８ １１−アクリリル−デスアセチル−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）４７６.７mgを実施例７に記載と同様にアクリロイルクロリドと 反応させ、記載と同様にして精製し、薄黄色固形物として標題化合物４７０mg（ 収率８７％）を得た。Ｃ₂₄Ｈ₂₄Ｏ₈分析−計算値−Ｃ：６５.４５；Ｈ：５.４９ ；実測値−Ｃ：６５.１９；Ｈ：５.７０ 実施例９ １１−クロロアセチル−デスアセチル−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）４４２.８mgを実施例７に記載と同様にクロロアセチルクロリド と反応させた。洗浄および精製した後、標題化合物２００.１mg（収率３８％） を薄ベージュ色の固形物として得た。Ｃ₂₃Ｈ₂₃Ｏ₈Ｃ₁分析−計算値−Ｃ：５９. ６８；Ｈ：５.０１；実測値−Ｃ：５９.６６；Ｈ：５.０６ 実施例１０ １１−イソバレリル−デスアセチル−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）４７９.９mgを実施例７に記載と同様にイソバレリルクロリドと 反応させた。洗浄および精製した後、標題化合物３５０.３mg（収率６０％）を 薄橙色の固形物として得た。 実施例１１ １１−バレリル−デスアセチル−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）４５４.１mgを実施例４に記載と同様に無水吉草酸と反応させ、 ついで、精製し、標題化合物５１７.７mg（収率９３％）を白色固形物として得 た。Ｃ₂₆Ｈ₃₀Ｏ₈分析−計算値−Ｃ：６６.３７；Ｈ：６.４３；実測値−Ｃ：６ ６.５３；Ｈ：６.６０ 実施例１２ １１−ブチリル−デスアセチル−ワートマニンの製造 化合物（ｆ）４５７.５mgを実施例４に記載と同様に無水酪酸と反応させ、つ いで、精製し、標題化合物４８６.６mg（収率９０％）を白色固形物として得た 。Ｃ₂₅Ｈ₂₈Ｏ₈分析−計算値−Ｃ：６５.７８；Ｈ：６.１８；実測値−Ｃ：６５. ５２；Ｈ：６.３８ 実施例１３ １１−プロピオニル−１７−ヒドロキシ−デスアセチル−ジヒドロ− ワートマニンの製造 窒素雰囲気下無水テトラヒドロフラン３.５ml中上記実施例４で製造された化 合物（ｇ）３４５mgの氷冷溶液に、１Ｍ水素化ホウ素２５０μlを加え、混合物 を２.５時間０℃にて撹拌した。反応を０℃にて水１mlを加えて終了させ、つい で、放置して室温まで暖め、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを 食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ついで蒸発、上記と同様に精製し 、薄黄色の固形物として標題化合物３０９.９mg（収率８９％）を得た。分析Ｃ_{2 4} Ｈ₂₈Ｏ₈−計算値−Ｃ：６４.８５；Ｈ：６.３５；実測値−Ｃ：６４.６５；Ｈ ：６.３８ 実施例１４ １１−デヒドロ−ワートマニンの製造 無水ジクロロメタン２５ml中化合物（ｆ）４０１.１mgの溶液に、ピリジニウ ムニクロム酸塩１.９６ｇを加え、混合物を２.５時間撹拌した。混合物をセライ トに通して濾過し、セライトを新しいジクロロメタンで洗浄した。ジクロロメタ ン層を一緒にし、減圧下蒸発させ、粗生成物をシリカ上クロマトグラフィーにか け、酢酸エチル中５０％ヘキサンで溶出させて精製し、灰白色の固形物として標 題化合物３１３.９mg（収率７９％）を得た。Ｃ₂₁Ｈ₂₀Ｏ₇分析−計算値−Ｃ：６ ５.６２；Ｈ：５.２４；実測値−Ｃ：６５.４２；Ｈ：５.３３ 上記の実施例は本発明の化合物を製造する有力な方法としてのみ考慮されるべ きで、いずれにしても本化合物を限定するものではない。一般式（Ｉ）で示され る他の化合物は上記で概説された方法の１つを用いて、および上記の方法を周知 方法で修正して製造することができる。当業者は単に上記の一般反応式の１つに 従って、一般式（Ｉ）で示されるいずれの化合物も容易に製造できることは明ら かである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一般式： （式中、Ｒ₁は、＝０またはＯＲ₃であり； Ｒ₂は、＝ＯまたはＯＲ₃であり； 各Ｒ₃は、独立して、水素、アリールアシル、Ｃ₃−Ｃ₈アシルまたは置換アシ ルであり； Ｒ₁が、＝ＯまたはＯＨであるときは、Ｒ₂は、＝Ｏでない） を有する化合物。 ２．Ｒ₁が、Ｏ−アシルであり；Ｒ₂が、＝Ｏである、請求項１記載の化合物。 ３．Ｒ₁が、ＯＲ₃である、請求項１記載の化合物。 ４．Ｒ₃が、Ｃ₃−Ｃ₈アシルまたは置換アシルである、請求項３記載の化合物 。 ５．一般式： （式中、Ｒ₁が、Ｏ−Ｃ₃−Ｃ₈アシルまたはＯ−置換Ｃ₂−Ｃ₈アシルであり； Ｒ₂が、＝ＯまたはＯＨである） を有する化合物。 ６．Ｒ₁が、Ｏ−Ｃ₃−Ｃ₈アシルである、請求項５記載の化合物。 ７．式： を有する、請求項１記載の化合物。 ８．式： を有する、請求項１記載の化合物。 ９．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １０．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １１．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １２．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １３．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １４．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １５．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １６．式： を有する、請求項１記載の化合物。 １７．請求項１記載の化合物の有効量および製薬学的に許容され得る担体、賦 形剤または希釈剤を含む医薬製剤。 １８．ＰＩ ３−キナーゼ阻害剤としての使用のための薬剤の製造のための請 求項１記載の化合物の使用。 １９．癌の処置のための薬剤の製造のための請求項１記載の化合物の使用。