JPH10500109A

JPH10500109A - 多発性硬化症のための組成物および治療方法

Info

Publication number: JPH10500109A
Application number: JP7529103A
Authority: JP
Inventors: デイ−フウエイフス，; ドーンスミレク，; ジア・ドングシ，
Original assignee: イミユロジク・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン
Priority date: 1994-05-10
Filing date: 1995-05-04
Publication date: 1998-01-06
Also published as: HUT76099A; EP0758902A1; WO1995030435A3; PL317197A1; CZ329596A3; IL113661A0; WO1995030435A2; SK145896A3; AU2470595A; CA2189990A1; HU9603116D0; SI9520059A

Abstract

(57)【要約】本発明は多発性硬化症（ＭＳ）を治療するための組成物および方法を提供する。本発明の組成物は、経口、皮下または静脈内投与のための適切な薬学的に許容される媒体中に、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の少なくとも１種のペプチドまたは修飾ペプチド、およびＩＦＮ−βを含んでなる。本発明の方法は、ＭＳを有するかまたはＭＳに感受性であると疑われる個体を、本発明の組成物の治療的有効量を投与することによって、或いは治療的養生法において、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むＭＢＰの少なくとも１種のペプチドまたは修飾ペプチドを含んでなる組成物を投与し、さらにＩＦＮ−βを投与することによって、治療することを含む。

Description

【発明の詳細な説明】多発性硬化症のための組成物および治療方法発明の背景自己免疫疾患は重要な人間の健康上の問題であるが、理解が比較的乏しい。明らかに直接の原因である微生物またはウイルスの犯人はいないのであるから、かかる疾患の予防、治療および診断はこの疾患の病因論に基づいたものでなければならない。これは常に、複雑な一連の内因性代謝中間物、構造成分、細胞などが関与する。しかし、少なくとも１つの自己抗原が、この症状をもたらす一連の事象を作り出すことに関与しているはずであるという見解は、自己免疫症状の性質において暗に示されている。多発性硬化症のような自己免疫脱髄性疾患は例外ではない。ヒト多発性硬化症について通常使用される動物モデルは、実験的アレルギ性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、中枢神経系の脱髄性疾患であり、それらはミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはその免疫優性Ｔ細胞決定基（即ち、Ｔ細胞エピトープ）による免疫処理によってマウスの感受性株中に誘発することができる。ＭＢＰは多発性硬化症（ＭＳ）中の推定自己抗原の１つであり、ヒト（Ｏｔａ等，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：１８３−１８７（１９９０））および超歯動物（Ｚａｍｖｉｌ等，Ｎａｔｕｒｅ，３２４：２５８−２６０（１９８６））の両系でエピトープ・マッピングされた。Ｏｔａ等（上掲）は、ＭＳ患者によって認識された腫瘍Ｔ細胞エピトープ、ＭＢＰアミノ酸残基８４−１０２を同定した。非主要エピトープ（ＭＳ患者からのＴ細胞によって認識されたＭＢＰアミノ酸残基１４３−１６８、６１−８２、１２４−１４２および３１−５０）もまた記載されている。Ｚａｍｖｉｌ等（上掲）は、ＭＢＰアミノ酸残基１−１１が、感受性齧歯動物株中でＥＡＥを起こす主要Ｔ細胞エピトープを含有することを示した。過去１０年に亙って、天然タンパク質抗原の主要Ｔ細胞エピトープに対応するペプチドを使用して、自己に対するまたは天然タンパク質抗原に対するＴ細胞非反応性を誘発することができることが明らかになってきた。Ｇａｕｒ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５８：１４９１−１４９４による研究によって、ＭＢＰのＴ細胞エピトープは成体マウス中でＭＢＰに対する低いＴ細胞反応性を誘発することが示された。これらの研究において、ＭＢＰの主要免疫優性決定基（Ａｃ１−１１および３５−４７）または全ＭＢＰに対応する合成ペプチドに対する寛容は、他のタンパク質またはペプチドに対する寛容誘導の場合に既に記載されたように（Ｆ．Ｒｉａ等，Ｎａｔｕｒｅ，３４３：３８１（１９９０））、非免疫原性型（不完全フロイントアジュバント）のペプチドまたはタンパク質のエマルジョンを使用することによって誘発することができた。ＭＢＰＴ細胞エピトープの投与によって誘発されたこの低いＴ細胞反応性は、ＭＢＰ誘発ＥＡＥを予防することができる。しかし、これらの研究によって、Ａｃ１−１１、２つのエピトープ中の優性体、はＭＢＰに対するその後のＴ細胞反応の約５０％のみの減少を誘発し、そして低い免疫性ペプチド、ａａ３５−４７、はＭＢＰに対するその後の反応の約２０％のみの減少を誘発することが示された。２つのペプチドの混合物によってＭＢＰに対するその後のＴ細胞反応は大きく減少した。ＭＳの治療に対する完全に異なったアプローチでは、臨床研究の結果、インターフェロン（ＩＦＮ）がＭＳの治療に幾つかの見通しが示された。ＩＦＮ −γの投与はＭＳの悪化を促すことが示され、一方調節された臨床試験においては、組換えＩＦＮ−βはそれらを抑制することが示された（ＨｉｌｌｅｌａｎｄＢｅｖｅｒ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４６：１５５−１６４（１９９３））。しかし、ＭＳで悩んでいる患者にＩＦＮ−βを投与すると、ＭＳの発作の頻度および重篤性を減少させるという証拠があるにもかからわず、ＩＦＮ−βは医療社会が希望してきた、長年待たれたＭＳの療法ではない（Ａｒｎａｓｏｎ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，４３：６４１−６４３（１９９３））。Ａｒｎｓｏｎによって記載された臨床研究では、ＩＦＮ−βで治療された殆どすべての患者は結局発作に見舞れ、４人中の１人は悪化した。発明の要旨本発明は多発性硬化症を治療する組成物および方法を提供する。本発明の組成物は、経口、皮下または静脈内投与のための適切な薬学的に許容される媒体中に、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の少なくとも１種のペプチドまたは修飾ペプチド、およびＩＦＮ−βを含んでなる。本発明の方法は、ＭＳを有するかまたはＭＳに感受性であると疑われる個人を、本発明の組成物の治療的有効量を投与することによってか、或いは治療的養生法において、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むＭＢＰの少なくとも１種のペプチドまたは修飾ペプチドを含んでなる組成物を投与し、さらにＩＦＮ −βを投与することによって、治療することを含む。図面の簡単な説明図１ａは、完全アジュバントを加えた百日咳毒素中のモルモットＭＢＰで０日にＥＡＥ誘発され、そして不完全フロイントアジュバントのみを投与されたか（対照）、または９、１２、１６、および２０日（ｘ軸の矢印で示された）に２０００単位のＩＦＮ−βで腹腔内的に処理された、１０匹の（ＳＪＬ×ＴＬＰ）Ｆ₁成体雌性マウスの２群における、ＥＡＥに及ぼすＩＦＮ−βの効果を示す実験のグラフ表示であり、Ｙ軸は、０＝ＥＡＥの臨床的徴候なし、１＝跛行、無反応性の尾部、２＝部分的の後脚麻痺、３＝完全な後脚麻痺、４＝部分的から完全な前脚麻痺、および５＝瀕死による、各群についての平均臨床評点（ＭＣＳ）を表す。図１ｂは、完全アジュバントを加えた百日咳毒素中のモルモットＭＢＰで０日にＥＡＥ誘発され、そしてＰＢＳを投与されたか（対照）、または１０、１３、１７、および２１日（ｘ軸の矢印で示された）に２５０ｎモルのＡｃ１−１１で静脈内的に処理された、１０匹の（ＳＪＬ×ＴＬＰ）Ｆ₁成体雌性マウスの２群における、ＥＡＥの及ぼすＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の効果を示す実験のグラフ表示であり、Ｙ軸は、図１ａに示されるように、各群についての平均臨床評点を表す。図１ｃは、完全アジュバントを加えたプラス百日咳毒素中のモルモットＭＢＰで０日にＥＡＥ誘発され、そしてＰＢＳを投与されたか（対照）、または１０、１３、１７、および２１日（ｘ軸の矢印で示された）に２５０ｎモルのＡｃ１ −１１で静脈内的に処理されそして９、１２、１６、および２０日（ｘ軸の黒色矢印で示された）に２０００単位のＩＦＮ−βで腹腔内的に処理された、１０匹の（ＳＪＬ×ＴＬＰ）Ｆ₁成体雌性マウスの２群における、ＥＡＥに及ぼすＩＦＮ−βと組合せて投与されたＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の効果を示す実験のグラフ表示であり、Ｙ軸は、図１ａに示されるように、各群についての平均臨床評点を表す。図２は、完全アジュバントを加えた百日咳毒素中のモルモットＭＢＰで０日にＥＡＥ誘発され、そしてＰＢＳを投与されたか（対照）、または９、１３、１６日（ｘ軸の黒色矢印で示された）に夫々１０，０００単位および２０００単位のＩＦＮ−βで腹腔内的に処理された、１０匹の（ＳＪＬ×ＴＬＰ）Ｆ₁成体雌性マウスの２群における、誘発されたＥＡＥに及ぼす各投与量のＩＦＮ−β（夫々、１０，０００単位および２，０００単位）の効果を示す実験のグラフ表示であり、Ｙ軸は、図１ａに示されるように、平均臨床評点を表す。図３はヒトＭＢＰの全長アミノ酸配列をで示す。図４は本発明の実施において有用である選択されたＭＢＰペプチドのアミノ酸配列を示す。発明の詳細な説明本発明は、ＩＦＮ−βの治療的有効量を含む治療的養生法において、ＭＢＰの少なくとも１種の抗原性ペプチドの治療的有効量を投与すること含んでなる多発性硬化症を治療する方法を提供する。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド」とは、そのペプチドが誘導されたタンパク質の全アミノ酸配列より少ないアミノ酸残基を有するアミノ酸配列を言う。用語「抗原性ペプチド」とは、本明細書中で使用される場合、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むいずれかペプチドまたは少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むかかるペプチドのいずれかの部分を言う。エピトープについて言及すると、エピトープは塩基性要素であるか、または受容体による認識の最小単位、特に免疫グロブリン、組織適合性抗原およびＴ細胞受容体であり、そこではエピトープは、受容体認識に必須である自己抗原のような天然タンパク質のアミノ酸を含む。Ｔ細胞エピトープは、自己免疫反応の開始および永続化に関与していると考えられる。これらのＴ細胞エピトープは、抗原提示細胞の表面上の適切なＨＬＡ分子によって提示され、エピトープに対する関連Ｔ細胞受容体でＴ細胞亜集団を刺激することによって、Ｔヘルパー細胞の水準で初期の出来事の引金を引くと考えられる。これらの出来事の結果、Ｔ細胞増殖、リンホカイン分泌、局部炎症反応、抗原／Ｔ細胞相互反応の部位へのさらなる免疫細胞の動員および抗体の産生をもたらすＢ細胞カスケードの活性化が起こる。自己抗原の少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドまたはタンパク質に被験者を露呈すると、それらが自己抗原に無反応性になりそして免疫反応を剌激することに参加しなくなるように、Ｔ細胞亜集団が修飾される。さらに、少なくとも１種のＴ細胞を含むタンパク質またはペプチドを投与すると、天然に存在する自己抗原に露呈された場合と比較して、リンホカイン分泌プロフィールを修飾することができる（例えば、ＩＬ−４が増加しおよび／またはＩＬ−２が減少して、ＴＨ１およびＴＨ２集団の修飾が起こる）。さらに、かかるペプチドへの露呈は、通常は自己抗原への反応に参加するＴ細胞亜集団に、これらのＴ細胞が自己抗原への通常露呈の部位（例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）の組織）から誘導されたペプチドの治療的投与の部位に引き離されるように、影響することができる。このＴ細胞の再分布は、個人が自己抗原への通常露呈の部位で通常の免疫反応を剌激して症状の減少をもたらす免疫系の能力を回復および／または低下することができる。ＭＢＰ自己抗原に対する被験者の反応を和らげるＭＢＰから誘導されたいずれのペプチドも本発明の方法および組成物中に含まれることができる。かかるペプチドは、例えば、構造を検討すること、およびペプチドとして製造される適切な領域を選択して（組換え発現系によって、合成的にまたはその他で）、ＭＢＰに対するＴ細胞反応に影響する能力について検討すること、およびこれらの細胞によって認識されたエピトープを含有するペプチドを選択することによって同定することができる。Ｔ細胞エピトープを含む多くのヒトＭＢＰペプチドは当該技術に記載されている。修飾抗原性ペプチドは本発明の範囲内で有用である。例えば、ペプチドは、免疫性型で投与された場合、強い増殖性反応または出来る限りいずれの増殖性反応も誘発する能力なしで、それがＴ細胞アレルギーを誘発し、ＭＨＣタンパク質に結合する能力を維持するように、修飾されることができる。この場合、Ｔ細胞授与体の限界結合残基は既知の技法（例えば、各残基の置換およびＴ細胞反応性の存在または不在の決定）を使用して決定することができる。Ｔ細胞受容体と相互作用するのに必須であると示されたそれらの残基は、必須アミノ酸を、その存在がＴ細胞反応性を増強、減少するが排除または影響しない、他の好適には類似のアミノ酸で置換すること（保存的置換）によって修飾することができる。さらに、Ｔ細胞授与体相互作用に必須でないアミノ酸残基は、その取込みがＴ細胞反応性を増強、減少するが、排除しないか、または影響しない他のアミノ酸で置換することによって修飾することができる。さらに、Ｔ細胞授与体相互作用に必須でないアミノ酸残基は、その取込みがＴ細胞反応性を増強、減少または影響しないが、関連ＭＨＣへの結合を排除しない他のアミノ酸で置換することによって修飾することができる。追加的に、本発明のペプチドは、ＭＨＣタンパク質複合体と相互作用するのに必須であると示されたアミノ酸を、その存在がＴ細胞活性を増強、減少するが、排除しないかまたは影響しない他の好適には類似のアミノ酸残基で置換する（保存的置換）ことによって、修飾することができる。さらに、ＭＨＣタンパク質複合体と相互作用するのに必須ではないアミノ酸残基は、その取込みがＴ細胞活性を増強、影響しない、または減少させるが排除しない他のアミノ酸によって置換することができる。非必須アミノ酸のための好適なアミノ酸置換として、これらに限定されないが、アラニン、グルタミン酸、またはメチルアミノ酸による置換が挙げられる。ペプチドの修飾の他の例は、好適にはジスルフィド結合による二量化を最小にするセリン、スレオニン、ロイシンまたはグルタミン酸によるシステイン残基の置換である。さらに、ペプチドは、薬学的に許容される担体または希釈剤のような緩衝化水性溶液中で使用するためのペプチドの溶解度を増加するために、ペプチド、そのペプチドの末端部分に官能基を添加することによってか、或いは疎水性Ｔ細胞エピトープまたはペプチド中の疎水性エピトープを含有する領域またはタンパク質もしくはペプチドの疎水性領域を含ませないことによって、修飾されることができる。例えば、溶解度を増加させるためには、電荷性アミノ酸または電荷性アミノ酸対もしくはトリプレットを、ペプチドのカルボキシまたはアミノ末端に添加することができる。電荷性アミノ酸の例として、アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）およびアスパラギン酸（Ｄ）が挙げられる。追加的に、「潜在エピトープ」を含むペプチドは、決定されることができ、そして本発明の方法または組成物において有用である。潜在エピトープは、適切なＭＨＣ分子に対する天然タンパク質抗原の加工および提示のために、通常は免疫系に現れない、タンパク質抗原中の決定基である。しかし、潜在エピトープを含むペプチドはＴ細胞を無反応性にすることができ、そして被験者がペプチドを供給された場合、被験者から得られたＴ細胞は、ペプチドが誘導されたペプチドまたはタンパク質抗原に反応して生体内で増殖する。タンパク質抗原から誘導された少なくとも１つの潜在エピトープを含むペプチドは、本明細書では「潜在エピトープ」と呼称する。潜在エピトープの存在を確認するためには、抗原供給されたＴ細胞を各ペプチドの別々の存在下で試験管内で培養してペプチド反応性Ｔ細胞株を確立する、当該技術で既知であるＴ細胞増殖測定法を使用することができる。Ｔ細胞株がある所定のペプチドで確立されることができ、そしてペプチドおよびそのペプチドが誘導されるタンパク質抗原で抗原投与すると、Ｔ細胞が増殖することができる場合、ペプチドは少なくとも１つの潜在エピトープを含むと考えられる。本発明の組成物および方法において有用である抗原性ペプチドとして、図３に示されたヒトＭＢＰタンパク質のアミノ酸残基に対応する残基数を有する以下のペプチド：ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４−１０６のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４−１０２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８９−１０１のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４０−１７２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４３−１６８のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４２−１６７のすべてまたは一部を含むペプチドおよびヒトＭＢＰのアミノ酸残基１３−２５のすべてまたは一部を含むペプチド、またはそれらの部分が挙げられる。選ばれたペプチドの配列は図４に示されている。これらのいずれのペプチドもが上記にように修飾されることができるか、またはそれらが少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むと言うそれらの抗原性特性を維持する限り、それらのカルボキシもしくはアミノ末端から上流または下流に延長することができる。本明細書に記載した研究の結果として、ＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドおよびＩＦＮ−βの組合せが、治療的養生法において投与された場合、単独で投与された場合にＥＡＥの症状を軽減する各々の効果よりも、はるかに大きい程度でマウスのＥＡＥの臨床的症状を驚くほどに軽減し、そしてペプチドとＩＦＮ− βを加えた単なる添加効果の場合に予想されるものより大きい相乗効果（図１ｃ）を有する。ＥＡＥはヒトＭＳのマウスのモデルとして役立ちそしてＭＢＰによって誘発されるから、同様の効果がヒトにも見られることが期待される。それ故、本発明は、ＩＦＮ−βの投与を含む治療的養生法において、非免疫性型のＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドの有効量を投与する（即ち、補助剤なし）ことを含んでなる、多発性硬化症を有するかまたは多発性硬化症の発生に対し感受性がある個人を治療する方法を提供する。ＩＦＮ−βの投与を含む治療的養生法において、ＭＢＰの少なくとも１種の抗原性ペプチドを含んでなる組成物の投与は、投薬時の既知の手順および時間間隔を使用して行って、多発性硬化症に関連する症状を効果的に軽減、排除または予防することができる。抗原性ペプチドまたはＩＦＮ−βの有効量は、治療的養生方法において一緒に投与される場合、個人のＭＳに対する感度と感受性の程度、性別および個人の体重および個人中で抗原性反応を引出す抗原性ペプチドの能力のような要因に応じて変わる。活性化合物（即ち、ＭＢＰペプチドおよびそれらの組成物およびＩＦＮ−β）は、注射（皮下、静脈内など）、経口投与、吸入法、皮膚内適用または直腸投与のような便宜な法で投与することができる。投与の経路に応じて、活性化合物は、化合物を酵素、酸および化合物を不活性化することができる他の天然条件の作用から保護する物質でコーティングすることができる。例えば、好適には単位投与量当たりＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドの約１μｇ〜３ｍｇ、さらに好適には約２０〜５００μｇを注射によって投与することができる。好適には、ＩＦＮ−βの１００〜１０，０００単位の単位投与量が注射によって投与することができる。これらの２つの化合物の投与養生法は最適の治療反応を与えるように調節することができる。例えば、ＩＦＮ−β、およびＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドを含む組成物は、同時に投与することができるか、または好適には少なくとも６時間の間隔で、好適には少なくとも１２時間の間隔で、またはさらに好適には少なくとも２４時間の間隔で投与することができる。抗原性ペプチドおよびＩＦＮ−βの両方を投与する治療養生法は数日または数週の期間に亙って継続することができ、そして治療状況の緊急性によって示されるように、短縮するかまたは延長することができる。本発明はまた、薬学的に許容される担体または希釈剤中に、ＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドとＩＦＮ−βとの物理的混合物を含んでなる新規の組成物を提供する。この組成物は、個人中の多発性硬化症を治療または予防するための治療的養生法の一部として使用することができる。本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、実施例は本発明を制限するものではない。実施例マウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の合成マウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１を、標準Ｆｍｏｃ／ｔＢｏｃ合成法を使用して合成し、ＨＰＬＣ法によって精製した。ペプチドＡｃ１−１１のアミノ酸配列は以下の通りである。ＥＡＥの誘発６〜８週令の雌性（ＳＪＬ×ＰＬ）Ｆ₁マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓ，ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）中で、４００ｐｇＨ３７ＲＡ株結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＤＩＦＣＯＬａｂ．，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）を含有するＣＦＡ（ＧＩＢＣＯＬａｂ．，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，ＮＹ）中の１００μｇ精製モルモットＭＢＰで、尾の基部に皮下的に免疫処置することのよって、ＥＡＥを誘発させた。免疫処置の日および４８時間後の２回、２００ｎｇの百日咳毒素（ＪＨＬＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ，Ｌｅｎｅｘａ，Ｋａｎｓａｓ）を静脈内的に（ｉ．ｖ．）与えた。マウスを疾病症状について毎日監視し、発病度について以下の尺度に従って評点した。０＝ＥＡＥの臨床的徴候なし、１＝跛行、無反応性の尾部、２＝部分的の後脚麻痺、３＝完全な後脚麻痺、４＝部分的ないし完全な前脚麻痺、および５＝瀕死。データは、群中のすべての動物を含めて毎日の発病度の評点の平均値として示す。マウスを２６日間追求した。マウスがＥＡＥで死亡した場合、５の評点をその後のすべての日の計算に加算した。ＥＡＥに及ぼすＩＦＮ−βの効果ＥＡＥに及ぼす各種投与量のＩＦＮ−βの効果を決定する目的のための測定実験において（図２）、マウスの１群を、ＥＡＥ誘発後９、１３、および１６日に、ＰＢＳで腹腔内的に処理し（対照）、マウスの１群を９、１３、および１６日に１０，０００単位のＩＦＮ−βで処理し（白丸）、そしてマウスの１群を９、１３、および１６日に２，０００単位のＩＦＮ−βで処理した（黒丸）。図２に示すように、ＥＡＥの症状は両投与量のＩＦＮ−βの場合各時点で同様であり、このことは低投与量がＩＦＮ−βによる実験に適し、そして高投与量のＩＦＮ− βによる毒性の危険が少なくなりそうであるから、好適な投与量であることを示している。次いで、図１ａ〜１ｃに示した残余実験では、２０００単位の投与量が臨床評点で改善を示したから、２０００単位のＩＦＮ−βを使用した。図１ａに示されるように、マウスの対照群はＰＢＳで処理し、他のマウス群は２０００単位のＩＦＮ−βで腹腔内的に９、１２、１６、および２０日に処理した。図１ａに示されるように、ＩＦＮ−βのみで処理された群は、対照群よりも、経過時間の間少し低い重症度であった。ＥＡＥに及ぼすマウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の効果マウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の効果を決定して、結果を図１ｂに示す。マウスの１群は、ＥＡＥ誘発後１０、１３、１７、および２１日にＰＢＳで腹腔内的に処理し（対照）、そしてマウスの１群は１０、１３、１７、および２１日に２５０ｎモルのペプチドＡｃ１−１１で静脈内的に処理した。マウスを上記の通りに監視した。図１ｂに示されるように、Ａｃ１−１１で処理されたマウスは、対照群よりも、低い重症度であった。ＥＡＥに及ぼすペプチドＡｃ１−１１とＩＦＮ−βとの組合せによる処理の効果ペプチドＡｃ１−１１とＩＦＮ−βとの組合せによる処理の効果を図１ｃに示す。マウスの１群は、ＥＡＥ誘発後にＰＢＳで腹腔内的に処理し（対照）、そしてマウスの１群は、１０、１３、１７、および２１日に２５０ｎモルのペプチドＡｃ１−１１で静脈内的に処理し、そして９、１２、１６、および２０日に２０００単位のＩＦＮ−βで腹腔内的に処理した。図１ｃに示されるように、ペプチドとＩＦＮ−βとの組合せで処理されたマウスの群は、対照群と比較して並びにＩＦＮ−β単独またはペプチド単独での処理と比較して、組合せの相乗効果を示す図１ａおよび図１ｂに示されるように、重症度の顕著な低下を示した。それ故、ペプチドとＩＦＮ−βとの組合せを含む治療養生法は、ＥＡＥの重症度を低下させる顕著な効果を示す。本発明について好適な態様を引用して説明したが、他の態様も同一の結果を達成することができる。本発明の変形および改良は当該技術者には明らかであり、添付の請求の範囲において、本発明の真の精神および範囲から当然生れるようなすべての改良物および均等物に及ぶことが意図されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年５月２２日【補正内容】本発明はまた、薬学的に許容される担体または希釈剤中に、ＭＢＰから誘導された抗原性ペプチドとＩＦＮ−βとの物理的混合物を含んでなる新規の組成物を提供する。この組成物は、個体の多発性硬化症を治療または予防するための治療的養生法の一部として使用することができる。本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、実施例は本発明を制限するものではない。実施例マウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１の合成マウスＭＢＰペプチドＡｃ１−１１を、標準Ｆｍｏｃ／ｔＢｏｃ合成法を使用して合成し、ＨＰＬＣ法によって精製した。ＥＡＥの誘発６〜８週令の雌性（ＳＪＬ×ＰＬ）Ｆ₁マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｓ，ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）中で、４００μｇＨ３７ＲＡ株結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（ＤＩＦＣＯＬａｂ．，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）を含有するＣＦＡ（ＧＩＢＣＯＬａｂ．，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，ＮＹ）中の１００μｇ精製モルモットＭＢＰで、尾の基部に皮下的に免疫処置することのよって、ＥＡＥを誘発させた。免疫処置の日および４８時間後の２回、２００ｎｇの百日咳毒素（ＪＨＬＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ，Ｌｅｎｅｘａ，Ｋａｎｓａｓ）を静脈内的に（ｉ．ｖ．）与えた。マウスを疾病症状について毎日監視し、発病度について以下の尺度に従って評点した。０＝ＥＡＥの臨床的徴候なし、１＝跛行、無反応性尾部、２＝部分的の後脚麻痺、３＝完全な後脚麻痺、４＝部分的ないし完全な前脚麻痺、および５＝瀕死。データは、群中のすべての動物を含めて毎日の発病度の評点の平均値として示す。マウスを２６日間追求した。マウスがＥＡＥで死亡した場合、５の評点をその後のすべての日の計算に加算した。ＥＡＥに及ぼすＩＦＮ−βの効果ＥＡＥに及ぼす各種投与量のＩＦＮ−βの効果を決定する目的のための測定実験において（図２）。マウスの１群を、ＰＢＳで、腹腔内的に、ＥＡＥ誘発後９、１３、および１６日に処理し（対照）、マウスの１群を１０，０００単位のＩＦＮ−βで、９、１３、および１６日に処理し（白丸）、マウスの１群を２，０００単位のＩＦＮ−βで、９、１３、および１６日に処理した（黒丸）。図２に示すように、ＥＡＥの症状は両投与量のＩＦＮ−βの場合各時点で同様であり、このことは低投与量がＩＦＮ−βによる実験に適し、そして高投与量のＩＦＮ− βによる毒性の危険が少なくなりそうであるから、好適な投与量であることを示している。次いで、図１ａ〜１ｃに示した残余実験では、２０００単位の投与量が臨床評点で改善を示したから、２０００単位のＩＦＮ−βを使用した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者シ，ジア・ドングアメリカ合衆国カリフオルニア州94041マウンテンビユウ・ナンバー１・チヤーチストリート98

Claims

【特許請求の範囲】１．ＩＦＮ−βの治療的有効量を投与することを含む治療的養生法においてＭＢＰの少なくとも１種の抗原性ペプチドの治療的有効量を投与することを含んでなる個体の多発性硬化症を治療する方法。２．前記ＭＢＰの抗原性ペプチドおよび前記ＩＦＮ−βが同時に投与される請求の範囲１に記載の方法。３．前記ＭＢＰの抗原性ペプチドおよび前記ＩＦＮ−βが少なくとも２４時間の間隔で投与される請求の範囲１に記載の方法。４．前記の少なくとも１種の抗原性ペプチドが、ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４−１０６のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４ −１０２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８９− １０１のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４０− １７２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４３− １６８のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４２− １６７のすべてまたは一部を含むペプチドおよびヒトＭＢＰのアミノ酸残基１３ −２５のすべてまたは一部を含むペプチドからなる群から選ばれる請求の範囲１に記載の方法。５．薬学的に許容される担体または希釈剤中にヒトＭＢＰの少なくとも１種の抗原性ペプチドの治療的有効量およびＩＦＮ−βの治療的有効量を含んでなる組成物。６．前記の少なくとも１種の抗原性ペプチドが、ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４−１０６のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４ −１０２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８９−１０１のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４０−１７２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４３−１６８のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４２−１６７のすべてまたは一部を含むペプチドおよびヒトＭＢＰのアミノ酸残基１３−２５のすべてまたは一部を含むペプチドからなる群から選ばれる請求の範囲５に記載の組成物。７．多発性硬化症に感受性である個体の多発性硬化症の発症を予防する方法であって、ＩＦＮ−βの治療的有効量を投与することを含む治療的養生法においてＭＢＰの少なくとも１種の抗原性ペプチドの治療的有効量を投与することを含んでなる方法。８．前記の少なくとも１種の抗原性ペプチドが修飾される請求の範囲４に記載の方法。９．少なくとも２種の抗原性ペプチドを含んでなる請求の範囲４に記載の組成物。１０．前記の少なくとも１種の抗原性ペプチドが、ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８４−１０２のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基８９−１０１のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４３−１６８のすべてまたは一部を含むペプチド；ヒトＭＢＰのアミノ酸残基１４２−１６７のすべてまたは一部を含むペプチドおよびヒトＭＢＰのアミノ酸残基１３−２５のすべてまたは一部を含むペプチドからなる群から選ばれ、各々が図４に示された配列を有する請求の範囲５に記載の組成物。１１．図４に示されたアミノ酸残基１４２−１６７を含んでなる単離されたＭＢＰペプチド１２．請求の範囲１１に記載の単離されたペプチドを含んでなる組成物。１３．カルボキシ末端およびアミノ末端を有する単離されたＭＢＰペプチドであって、前記ペプチドはアミノ酸残基１４２−１６７を含み、前記ペプチドが、前記ペプチドのカルボキシ末端から下流に少なくとも１個のアミノ酸残基だけ延長される単離されたＭＢＰペプチド。１４．前記ペプチドが、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含んでなるという抗原性特性を維持する請求の範囲１３に記載の単離されたペプチド。１５．請求の範囲１３に記載の単離されたペプチドを含んでなる組成物。