ES2224105T3

ES2224105T3 - Cadena alfa soluble de receptores de celulas t y derivados utilizados como agentes profilacticos y terapeuticos para enfermedades autoinmunes.

Info

Publication number: ES2224105T3
Application number: ES94906987T
Authority: ES
Inventors: Hiroshi Watanabe; Nobuyuki Yamagata; Masaru Taniguchi
Original assignee: Aventis Pharma Ltd
Current assignee: Sanofi Aventis UK Holdings Ltd
Priority date: 1993-02-22
Filing date: 1994-02-22
Publication date: 2005-03-01
Anticipated expiration: 2014-02-22
Also published as: AU6042894A; KR950701387A; PT667908E; DE69433844D1; KR100333148B1; WO1994019470A1; ATE269409T1; EP0667908A1; JPH06298662A; DK0667908T3; EP0667908B1; CA2134083A1; AU686134B2; DE69433844T2; US5648332A; JP3875730B2; CA2134083C

Abstract

UNA CADENA ALFA RECEPTORA DE CELULAS T SOLUBLES PRODUCIDA POR SUPRESOR DE CELULAS T. LA CADENA ALFA RECEPTORA DE CELULAS T SOLUBLES ES UTIL COMO AGENTE PROFILACTICO Y TERAPEUTICO PARA ENFERMEDADES AUTOINMUNES GENERADAS POR UNA AMPLIA VARIEDAD DE AUTOANTIGENOS IRRESPECTIVOS DE ESPECIFICIDAD A DICHO SUPRESOR DE CELULAS T.

Description

Cadena \alpha soluble de receptores de células T y derivados utilizados como agentes profilácticos y terapéuticos para enfermedades autoinmunes.

1. Campo de la invención

Esta invención se refiere a un agente profiláctico y terapéutico para enfermedades autoinmunes. Más especialmente, trata de un agente profiláctico y terapéutico para enfermedades autoinmunes generadas por una amplia variedad de autoantígenos, que comprende como ingrediente activo una cadena \alpha soluble de un receptor de células T producido por dicho supresor de células T.

2. Descripción de la técnica anterior

Enfermedades autoinmunes se emplea en la presente solicitud como un término genérico para las enfermedades inmunes que causan diversas perturbaciones formando autoanticuerpos y células T citotóxicas al antígeno derivado de los tejidos autólogos. Las enfermedades autoinmunes pueden incluir enfermedades no específicas de ningún órgano tal como lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide crónica, esclerosis sistémica, dermatomiositis/miositis múltiple, síndrome de Sjogren y otras; enfermedades específicas de órganos tal como diabetes, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Grave, esclerosis múltiple, enfermedad idiopática de Adisson, miastenia grave, anemia perniciosa, y otras; así como enfermedades mixtas tal como cirrosis biliar primaria, hepatitis crónica activa y otras, y el número total de esos pacientes que sufren tales enfermedades incluyendo pacientes latentes ha sido enorme.

Hasta ahora la terapia aplicada para el tratamiento de tales enfermedades autoinmunes puede incluir la administración de agentes terapéuticos tales como corticoesteroides, ciclosporina A, ciclofosfamida, azatiopurina, metotrexato y similares, debido a su actividad inmunosupresora; o radiación con rayos-X, timoctomia y otras; o administración de interferon, \gamma-globulina, anticuerpos de marcadores de superficie de células linfoides, preparaciones doradas, penicilamina D y similares, suponiendo su actividad inmunorreguladora.

Muchos de estos inmunosupresores pueden dañar el DNA o RNA en diversas células incluyendo células inmunocompetentes, y por consiguiente, se desarrollarán efectos secundarios graves si se utilizan de manera errónea. Además, su administración a mujeres embarazadas puede causar el nacimiento de bebés con malformaciones y también se ha señalado que puede existir en esos casos el riesgo de infecciones oportunistas debido a la extensión de la inmunosupresión inducida. Por otro lado, no se conoce todavía un mecanismo de acción detallado de un regulador inmune por lo que sería difícil predecir exactamente un efecto terapéutico. Y todavía más, se ha señalado que podría existir un alto riesgo de efectos secundarios debido a la amplia variedad de grupos de células que pueden estar influenciadas.

Como se ha discutido anteriormente, se han encontrado muchos puntos poco satisfactorios en las terapias existentes contra las enfermedades autoinmunes. También, se han encontrado muchos puntos sin resolver en el mecanismo de iniciación de las enfermedades autoinmunes. Ha habido fuertes razones para obstaculizar el desarrollo de un agente terapéutico capaz de actuar específicamente en partes anormales únicamente en el sistema inmune, induciendo enfermedades autoinmunes.

Descripción de la invención

Se cree que existen esperanzas para establecer una terapia completa con menos efectos secundarios, dependiendo de las partes anormales que constituyen el objetivo en el sistema inmune, si se puede desarrollar un agente terapéutico capaz de ejercer un efecto específico sobre las enfermedades inmunes. Así, con la intención de establecer una terapia específica, los inventores de la presente solicitud han intentado establecer un método terapéutico para las enfermedades autoinmunes produciendo una cadena \alpha soluble de un receptor de células T (a partir de ahora abreviado como TCR) como un factor de supresión derivado de células T (a partir de ahora abreviado como TSF), el cual puede prevenir localmente una aceleración anormal del sistema inmune.

El supresor de células T ( a partir de ahora abreviado como Ts) como se utiliza en la presente solicitud significa una serie de aquellos grupos de células capaces de mostrar actividad inmunosupresora, que muestran una acción de antígeno específico en una etapa temprana de inducción de la inmunosupresión y una acción de antígeno no específico en la etapa final en la que ejerce la actividad supresora. A saber, el supresor de células T es un subgrupo de células T que tiene una acción contraria al ayudante de células T (a partir de ahora abreviado como Th) que pueden incrementar específicamente la reacción inmune de antígeno.

En los seres humanos y otros animales que sufren enfermedades autoinmunes, se han descrito varias anormalidades cualitativas o cuantitativas de Ts [McIntosh y Drachman, Science, 232, 401 (1986); Isenberg et al., Br. Ed. Bull., 10, 262 (1984)]. Al inducir la función anormal Ts, la producción de TSF se reduciría, mientras que la actividad Th puede aumentar relativamente. Así, se cree que las células citotóxicas T inductoras de células T y las células T autotóxicas se pueden inducir y activar. Igualmente pueden activarse las células B productoras de auto-anticuerpos.

De acuerdo con esto, donde las células de tejido o factores biológicamente activos son atacados por el sistema inmune con enfermedades autoinmunes, se puede esperar que las porciones a las que se pueden atribuir la anormalidad de tales enfermedades inmunes, se pueden reparar administrando al paciente que las sufre los TsF producidos por los Ts específicos del antígeno objetivo, que puede dar como resultado la recuperación completa de la enfermedad.

La presente Ts específica KLH (keyhole limpet hemocyanin) que puede proceder de ratones inmunizados, como un antígeno con la KLH, se aisló como el hibridoma Ts por Taniguchi et al., Nature, 278, 555 (1979). La selección del hibridoma Ts se llevó a cabo utilizando como estándar la prevención de los anticuerpos específicos de KLH. Taniguchi et al. han confirmado la producción de un TsF soluble por el hibridoma Ts. El TsF se absorbió por el inmunoabsorbente recubierto con la KLH y pudo prevenir in vitro específicamente la producción de anticuerpos contra la KLH. Imai et al. sugirió [Proc. NAtl. Acad. Sci. USA, 83, 8708 (1986)] que, como resultado del análisis del gen de la célula del hibridoma Ts, el TCR al antígeno expresado por el Ts específico de la KLH era la cadena \alpha del TCR y que la cadena \alpha del TCR juega un papel importante en el desarrollo de la función supresora.

Además, Koseki et al. llevaron a cabo la clonación del cDNA y del DNA genómico del receptor de la cadena \alpha a partir de la célula del hibridoma Ts para determinar la secuencia de la base [Int. Immunol., 1, 41 (1989)]. Por consiguiente, encontraron una familia de genes completamente nueva para la región variable de la cadena \alpha (a partir de ahora abreviada como V\alpha) y la denominaron "V\alpha14", que es diferente de cualquier otra familia V\alpha conocida en el estado de la técnica. Más del 90% de la V\alpha14 estaba unida por transposición del gen con J\alpha281, un tipo de región de unión de la cadena \alpha (a partir de ahora abreviada como J\alpha).

Resultados de investigaciones recientes han determinado que el carácter de la TsF provenía de una célula T supresora [Batchelor et al., Immunol. Today, 10, 37 (1989)]. Más específicamente, la función de la TsF de unirse al antígeno ha nacido de la cadena \alpha TCR, que es liberada entonces de la Ts para formar TsF. Según esto, la cadena \alpha debe utilizarse en la terapia de enfermedades autoinmunes ya que la TsF específicamente induce la inmunosupresión. Como la estructura de la cadena \alpha de TCR de la Ts puede considerarse que sea diferente de la cadena \alpha de la Th y de las células citotóxicas [Imai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 8708 (1986)] se cree que el objeto de la invención no puede alcanzarse incluso utilizando la cadena \alpha derivada de Th o de células T citotóxicas. Entonces, la forma más razonable y posible de abordar el desarrollo del agente terapéutico es restringirse a la cadena \alpha producida por
Ts.

Sin embargo, a la vista de informes anteriores se puede considerar que el antígeno específico TsF puede ser aplicado a la supresión de producción de anticuerpos de dicho antígeno extraño, pero no se podría esperar en absoluto aplicarlo a la supresión de respuestas autoinmunes, concretamente, para la terapia de enfermedades autoinmunes.

Por otro lado, Fairchild et al. ha encontrado que el dinitrofenol (a partir de ahora abreviado como DNP), antígeno específico CD (conglomerado de diferenciación) 8 Ts positivo [Fairchild et al., J. Immunol., 141, 3342 (1988); Fairchild et al., ibid, 145, 2001 (1990)] produjo un dímero soluble TsF que consistía en una cadena \alpha y una cadena \beta. Y además, también se conoce que Lider et al. han hecho uso del análisis de TCR del dímero que consiste en la cadena \alpha y la cadena \beta que se encontró muy frecuentemente en células T encefalitogénicas de encefalomielitis alérgica experimental (a partir de ahora abreviada como EAE) [Lider et al., Science, 239, 181 (1988)] y tuvo éxito en la vacunación utilizando péptidos sintéticos de la región V\beta8 [Vanderbark et al., Nature, 341, 541 (1989)] o cadena \beta región VDJ y región J [Howell et al., Science, 246, 668 (1989)] en la presencia de un adyuvante. Sin embargo, experimentos de confirmación llevados a cabo en las mismas condiciones frecuentemente han dado resultados opuestos [Desquenne-Clark et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 7219 (1991)]. Es decir, los experimentos de Desquenne-Clark et al. han revelado que la vacunación de ratas utilizando la cadena sintética de péptidos anteriormente mencionada derivada de células T encefalitogénicas no solo no pudo suprimir la EAE, sino que frecuentemente los síntomas de la EAE empeoraban.

Más aún, la cadena \beta de TCR participa en la restricción del complejo mayor de histocompatibilidad (a partir de ahora abreviada como MHC) y por lo tanto no únicamente la cadena \beta sola sino el dímero de la cadena \alpha y de la cadena \beta no se puede considerar adecuado para utilizarse como agente terapéutico. La razón, por lo tanto, es que los seres humanos individuales tienen MHCs diferentes y no es práctico, pero no imposible, preparar un agente terapéutico adecuado para pacientes individuales. Como la cadena \alpha actual de TCR puede reconocer al antígeno solamente, se puede esperar un efecto terapéutico sin recibir ninguna restricción de la MHC administrando la cadena \alpha a los pacientes. Según esto, un agente terapéutico preparado según la presente invención puede ser aplicable a todos los pacientes que sufran una enfermedad autoinmune sin considerar ninguna diferencia en un MHC individual.

Resumiendo todas las consideraciones anteriores, la cadena \alpha de TCR, producida como TsF y segregada de Ts puede ejercer una actividad inmunosupresora y entonces se puede esperar que ejerza una actividad efectiva como agente terapéutico para las enfermedades autoinmunes. Se cree que la actividad inmunosupresora de antígeno específico es seguida finalmente por inmunosupresión de antígeno no específica en los lugares lesionados por medio de citoquinas tal como la TGF-\beta (transformadora del factor de crecimiento) o IL-10 (interleuquina) y similares. El concepto utilizado en esta invención puede ser aplicado al desarrollo de agentes terapéuticos para todas las enfermedades
autoinmunes.

Entonces, para confirmar la efectividad del concepto anterior por medio de experimentos, los autores de la presente invención han estudiado el efecto terapéutico en la diabetes mellitus dependiente de insulina (a partir de ahora abreviada como IDDM). Han producido una forma soluble de V\alpha14J\alpha281, que es funcionalmente específico de la TCR, por un método de proteínas recombinantes, después de lo cual se administraba en ausencia de adyuvante a los ratones NOD (diabéticos no obesos) con IDDM abiogenética. Más específicamente, los ratones se inmunizaron con un antígeno exógeno KLH, el hibridoma Ts específico de KLH se estableció in vitro y el cDNA que codifica la TCR se clonó a partir del hibridoma de Ts para obtener el cDNA de V\alpha14J\alpha281 utilizado en la presente invención. A continuación, el cDNA de V\alpha14J\alpha281 se insertó en un ratón que contenía un plásmido de expresión C\gamma3 para llevar a cabo la expresión en las células del mieloma como una proteína quimérica. Por medio de esta formación quimérica, el cDNA de V\alpha14J\alpha281 se ha convertido en estructuralmente estable y se pudo obtener como una proteína soluble del sobrenadante del cultivo de células del mieloma transformado. El C\gamma3 derivado de ratones no actúa como trasportador del hapteno en experimentos con cepas de ratones, por lo tanto, no se indujo la reacción inmune contra el C\gamma3 de la proteína quimérica.

Los experimentos indirectos con animales utilizando el anticuerpo monoclonal del V\alpha14 dio unos resultados que sugerían que el TCR de V\alpha14J\alpha281 puede participar también en la reacción de inmunosupresión no específica en un sistema en vivo. También, puede dar como resultado una fuerte sugerencia de que el V\alpha14J\alpha281 que participa en la supresión inmune de antígeno no específico de que la expresión del mRNA que codifica el V\alpha14J\alpha281 fue suprimida en ratones NOD cuando se acercaba el tiempo del inicio de la diabetes mellitus. Como se ha mencionado anteriormente, se esperaba un efecto terapéutico del V\alpha14J\alpha281 soluble sobre la IDDM y un efecto importante de supresión se ha confirmado como resultado de experimentos con animales utilizando IDDM en ratones
modelo.

El V\alpha14J\alpha281 es originalmente funcionalmente específico del Ts del TCR especifico de KLH. Incluso si existe una posibilidad de una alta homología de la KLH con diversos autoantígenos que están especialmente presentes en el páncreas e incluso si como se ha discutido anteriormente el sistema inmunosupresor puede ser antígeno específicamente inducido, se puede dar la generación del estado final de la supresión del antígeno no específico a la célula efectora autorreactiva para explicar tal efecto terapéutico antígeno no específico inmunosupresor en la IDDM.

En cualquier caso, debido al efecto inmunosupresor del antígeno del V\alpha14J\alpha281 no específico anteriormente mencionado, se puede esperar que el TCR soluble ejerza un amplio efecto terapéutico no solo en las IDDM sino también en todas las otras enfermedades autoinmunes.

EL gen TCR V\alpha14 se ha mantenido bien en cepas de ratones salvajes [Koseki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 5248 (1990)]. La homología entre la secuencia de aminoácidos de TCR de V\alpha14 de ratones y la secuencia de aminoácidos del correspondiente TCR V\alpha humano es tal alta como 76%, mientras que la homología de aproximadamente otros 100 miembros de la familia V\alpha, hasta lo que se conoce hoy, es 70% o menos. En vista de una homología tan alta, se cree que dicha familia V\alpha de TCR de humano alcanza una función inmunosupresora similar. Además, de entre numerosas familias de V\alpha, el V\alpha14 de ratón que tiene una función específica de inmunosupresión se cree que es útil como agente terapéutico para diversas enfermedades autoinmunes humanas.

Koseki et al.[Int. Arch Allergy Immunol. 99, 416-418 (1992)] describe la reducción de la expresión en el TCR de V\alpha14J\alpha281 cuando ratones diabéticos no obesos desarrollan enfermedades autoinmunes. Se formó un anticuerpo monoclonal contra una molécula quimérica V\alpha14J\alpha281/C\gamma3.\lambda1 [Toshihiro et al. Internat. Immunol. 3, 991-995 (1991)].

La solicitud de patente WO 91/10438 describe antígenos quiméricos solubles de TCR por fusión con una cadena pesada de una inmunoglobulina en un dominio CH2 o CH3 fundido con ello, y usos terapéuticos y de diagnóstico para dichas proteínas.

La participación en inmunosupresión por el presente receptor V\alpha14J\alpha281 y el efecto terapéutico en IDDM utilizando ratones NOD se ilustrará con detalle por medio de los siguientes Ejemplos.

Ejemplo 1 Restricción de la expresión de mRNA del V\alpha14J\alpha281 de TCR en enfermedades autoinmunes en ratones

La expresión del mRNA que codifica el V\alpha14J\alpha281 en linfocitos del bazo de ratones NOD se ensayó cuantitativamente utilizando el ensayo de protección de la Rnasa [Koseki et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 87, 5248 (1990)]. Con este propósito se integró el cDNA que codifica el V\alpha14J\alpha281C\alpha acoplando el V\alpha14J\alpha281 con la región constante de la cadena \alpha (a partir de ahora abreviada como C\alpha) de la cadena \alpha del TCR, en un plásmido pCEM disponible comercialmente (disponible en Promega Biotec) para sintetizar el V\alpha14J\alpha281C\alpha marcado con un isótopo utilizando Sp6 como promotor. El RNA extraído de los linfocitos se hibridizó con la sonda. La parte sin hibridizar se digirió con fibras específicas individuales de Rnasa. El producto se fraccionó electroforesis en gel de agarosa. Se definió como 100% la concentración de la banda que se iba a hibridizar únicamente con C\alpha y la concentración de la correspondiente banda de V\alpha14J\alpha281 se comparó y se calculó en términos de porcentaje para calcular la frecuencia de la expresión del mRNA que codifica el V\alpha14J\alpha281. También, en grupos de control, se había calculado la frecuencia de la expresión del mRNA que codifica el grupo V\alpha14J\alpha281que consiste en la región J que tiene V\alpha14 excepto J\alpha281 y el del mRNA que codifica los grupos V\alpha14J\alpha281 que consisten en la región V que tienen J\alpha281 excepto V\alpha14,
respectivamente.

Se ha encontrado que la expresión de mRNA de V\alpha14J\alpha281 en ratones NOD era más alto del 2% antes del principio de la enfermedad, mientras que se redujo con envejecimiento al principio de la enfermedad. Por otro lado, no se observaron cambios con el envejecimiento en el grupo de control (Véase Fig.1).

Ejemplo 2 Preparación de V\alpha14J\alpha281 de TCR soluble

Se construyó primero el plásmido pSVEP que contiene la región constante de C\gamma3 de IgG de ratón (Kameyama et al., FEBS Letters, 244, 301 (1989)) en el cual se insertó el cDNA de V\alpha14J\alpha281 en el lugar Sal I (Véase Fig.2). El vector (30\mug) se introdujo en las células (2x10^{6}) J558L de mieloma de ratón por electroporación. Las células introducidas se seleccionaron en 20% de medio FCS-RPMI 1640 conteniendo 20mg/ml de ácido micofenólico y la secreción de V\alpha14J\alpha281 de la proteína quimérica se confirmó en el sobrenadante por un ELISA. La proteína quimérica soluble V\alpha14J\alpha281 segregada en el sobrenadante se purificó del cultivo del sobrenadante por cromatografía de afinidad utilizando la proteína G.

Ejemplo 3 Efecto inhibidor en la producción de anticuerpos de anticuerpos monoclonales anti- V\alpha14

Se inmunizaron ratones con V\alpha14J\alpha281 y los anticuerpos monoclonales al V\alpha14 se prepararon de acuerdo con un método convencional.

Los anticuerpos monoclonales V\alpha14J\alpha281 (100 \mug) se administraron intraperitonealmente a los ratones cada semana empezando desde las dos semanas anteriores al comienzo de la inmunización con DNP-KLH. Y además, se preparó una mezcla de DNP-KLH (100 \mug), vacuna de la tosferina (de ahora en adelante abreviada como PV: Chiba Serum InSTitute) e hidróxido de aluminio (Wako Pure Chemical Ind., Ltd) y los ratones se inmunizaron en la semana 0 como se indica en las Fig.3 y Fig.4. La administración de los anticuerpos monoclonales V\alpha14J\alpha281 a los ratones continuó hasta la 3ª semana después de la inmunización con DNP-KLH. Las cantidades de los anticuerpos anti-KLH y los anticuerpos anti-DNP se calcularon por ELISA.

Como se puede observar en las Fig. 3 y Fig.4, los anticuerpos a KLH y DNP se produjeron bien en los ratones control a los que no se habían dado los anticuerpos monoclonales anti-V\alpha14. En los ratones a los que se habían dado los anticuerpos monoclonales, se inhibió la producción de ambos, los anticuerpos anti-KLH y los anticuerpos anti-DNP. Estos resultados muestran que los anticuerpos monoclonales anti-V\alpha14 pueden estimular los antígenos no específicos Ts y promocionar su actividad inmunosupresora.

Ejemplo 4 Efecto terapéutico sobre la IDDM en un modelo de animal

El modelo de animal para IDDM se preparó de acuerdo con el método de Bendelac et al. [Bendelac et al., J. Exp. Med., 166, 823 (1987); Yasunami y Bach, Eur. J. Immunol., 18, 481 (1988); Pankewycz et al., 21, 873 (1991)]. A saber, a los ratones NOD de 12 semanas de edad se les dio ciclofosfamida en dosis de 4 mg. Después de 2-3 semanas, el 50% de los ratones dieron positivo en un análisis de glicosuria. Los ratones NOD con 5 semanas de edad que habían sido irradiados con 800 rads fueron inyectados intravenosamente con 3x10^{7} linfocitos obtenidos del bazo de los ratones. Se encontró que los ratones transplantados con los linfocitos mostraban una glucosuria elevada después de 2-3 semanas.

Para administrar la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3, se prepararon 8 ratones hembras. Los ratones se dividieron en 2 grupos, un grupo que consistió en 4 animales y al que no se administró nada, como control negativo, y otro grupo de 4 animales, al que se administró la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3. La administración se llevó a cabo mezclando la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 (100\mug) con gel de aluminio e inyectándoselo intraperitonealmente a los ratones NOD transplantados con los linfocitos. A continuación, se administró intraperitonealmente únicamente la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 en dosis de 50 \mug dos veces por semana, continuándose de este modo durante 3 semanas y media (un total de 7 veces). El inicio de la IDDM se evaluó determinando la cantidad de glucosa en orina de acuerdo con el método de ensayo en papel de glucosa en orina. Los resultados se muestran en la Tabla 1.

TABLA 1 Efecto de la administración de V\alpha14J\alpha281C\gamma3 a ratones modelo en el inicio de la IDDM

1

\text{*}: Grupo al que se había administrado la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 y el gel de aluminio.

En el experimento en el que se administró una mezcla de proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 y gel de aluminio, tres de los cuatro ratones a los que no se había dado la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 mostraron el inicio de la enfermedad en la segunda semana después del transplante de linfocitos y el ratón restante tuvo el inicio dos semanas y media después. Por el contrario, los cuatro ratones transplantados con los linfocitos y a los que se había administrado la proteína quimérica no mostraron inicio de la enfermedad durante las 4 semanas. Después de una semana de haber parado la administración de la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3, es decir, después de 4 semanas y media desde el transplante de linfocitos, uno de los ratones de este último grupo tuvo el inicio. Aunque se les observó hasta la séptima semana, no se observó que estos ratones sufrieran más cambios.

Además, para eliminar la influencia del gel de aluminio, se llevó a cabo un experimento en el que se administró únicamente la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 a los ratones NOD, en ausencia de gel de aluminio. Más específicamente, se administraron a los ratones 50 \mug de proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3, a un grupo que consistía en 3 animales, mientras que se administró un tampón salino de fosfato (PBS) a otro grupo de 3 animales. La administración de la proteína quimérica o del PBS se realizó una vez al día cuando se llevaba a cabo el transplante de linfocitos.

Los resultados del experimento en el que se administraba proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 a los ratones sin gel de aluminio mezclado, se muestran en la Tabla 2.

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(Tabla pasa a página siguiente)

3

La evaluación se calculó por el nivel de glucosa en orina y "+" indica que el nivel de glucosa en orina es 200 mg/dl o más, "-" 200 mg/dl o menos y "\pm" valores intermedios aproximados entre los dos anteriores. Ninguno de los tres ratones a los que se dio la proteína quimérica V\alpha14J\alpha281C\gamma3 tuvo el inicio de la enfermedad durante el periodo de observación de 12 semanas. Sin embargo, de los 3 ratones control a los que se dio PBS, uno tuvo el inicio durante todo el periodo después de la segunda semana y dos ratones tuvieron un ataque temporal durante dicho periodo de observación; eventualmente un ataque de ligero a grave se observó en todos los grupos a los que se dio PBS.

Como se ha comentado anteriormente, el V\alpha14J\alpha281 soluble derivado del hibridoma Ts específico de KLH se encontró que previene a los ratones NOD de sus ataques de diabetes como TsF de una forma antígena no específica.

La cadena \alpha del receptor del supresor de células T ilustrado por esta invención puede ser útil como agente profiláctico y terapéutico contra enfermedades autoinmunes generadas por una amplia variedad de autoantígenos que muestran una especificidad diferente de la de las células T del supresor.

Breve descripción de las dibujos

La Figura 1 muestra los resultados en los que los niveles de expresión del mRNA que codifica la cadena \alpha del receptor de células T, V\alpha14J\alpha281 en linfocitos de bazo de ratones NOD se calcularon cada semana de vida. En esta Figura, los círculos cerrados muestran cambios en el mRNA correspondiente a la V\alpha14J\alpha281C\alpha, mientras que los círculos abiertos y cuadrados abiertos muestran cambios en el mRNA correspondiente al Vx14J\alpha281C\alpha y V\alpha14Jx281C\alpha empleado como grupos de control, respectivamente.

La Figura 2 muestra la construcción de la expresión del vector del plásmido del gen que codifica la proteína quimérica de la cadena \alpha del receptor de células T y una región constante de inmunoglobulina.

La Figura 3 muestra la inhibición de la producción de anticuerpo del antígeno de KLH de los ratones pretratados con anticuerpos monoclonales anti-V\alpha14. En esta Figura, los círculos cerrados representan el grupo al que se ha administrado los anticuerpos monoclonales anti-V\alpha14, mientras que los círculos abiertos representan el grupo de control.

La Figura 4 muestra la inhibición de la producción de anticuerpos al antígeno del DNP de los ratones pretratados con anticuerpos monoclonales anti-V\alpha14. En esta Figura, los círculos cerrados representan el grupo al que se administraron los anticuerpos monoclonales al anti-V\alpha14, mientras que los círculos abiertos representan el grupo control.

Claims

1. La utilización de una proteína quimérica que contiene el V\alpha14J\alpha281, formándose dicha proteína quimérica por fusión de la cadena \alpha del receptor soluble de células T, el V\alpha14J\alpha281 producido por un supresor de células T, con una región constante de inmunoglobulina G, para la preparación de un medicamento para la profilaxis o tratamiento autoinmune de diabetes mellitus dependiente de insulina.

2. La utilización de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicha proteína quimérica contiene V\alpha14J\alpha281C\gamma3.