JPH10327852A - 焼酎蒸留残液から微生物増殖促進成分を分離濃縮する方法 - Google Patents
焼酎蒸留残液から微生物増殖促進成分を分離濃縮する方法Info
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- JPH10327852A JPH10327852A JP9138164A JP13816497A JPH10327852A JP H10327852 A JPH10327852 A JP H10327852A JP 9138164 A JP9138164 A JP 9138164A JP 13816497 A JP13816497 A JP 13816497A JP H10327852 A JPH10327852 A JP H10327852A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 焼酎蒸留残液を原料として，乳酸菌等の微生
物の増殖を促進する成分を効率的に製造することを可能
にする乳酸菌等の微生物増殖促進成分の分離濃縮方法の
提供。 【解決の手段】 微生物増殖促進成分を得る目的で，焼
酎蒸留残液から水分を除去し，固液分離後，有機溶剤を
加えて，生じた沈殿をろ過あるいは遠心分離等で分離
し，得られた固形物を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹
脂で処理後，ゲル濾過し，得られた液を濃縮あるいは噴
霧乾燥して製品とする焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生
物の増殖促進物質の製造方法。
物の増殖を促進する成分を効率的に製造することを可能
にする乳酸菌等の微生物増殖促進成分の分離濃縮方法の
提供。 【解決の手段】 微生物増殖促進成分を得る目的で，焼
酎蒸留残液から水分を除去し，固液分離後，有機溶剤を
加えて，生じた沈殿をろ過あるいは遠心分離等で分離
し，得られた固形物を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹
脂で処理後，ゲル濾過し，得られた液を濃縮あるいは噴
霧乾燥して製品とする焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生
物の増殖促進物質の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は，焼酎製造で発生す
る焼酎蒸留残液から乳酸菌等微生物の増殖促進成分を分
離濃縮する方法に関する。
る焼酎蒸留残液から乳酸菌等微生物の増殖促進成分を分
離濃縮する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】焼酎製造工程で発生する焼酎粕は、一部
は原液そのままあるいは濃縮および乾燥後に家畜用飼料
の一部として利用される以外に有効な手段がなく，大部
分は、これまで海洋投棄、大地還元、焼却処分、生物学
的処理などにより廃棄処分されてきた。しかし、近年世
界的環境対策が必要とされる状況において、焼酎粕の廃
棄処分方法として現在最も依存している海洋投棄は，法
的に近く禁止されることになっており，焼酎業界では焼
酎蒸留残液の処理方法の検討が行われている。現在，検
討されている処理方法としては，該残液を蒸留あるいは
加熱乾固して得られる固形分を肥料や試料として利用す
る方法，メタン発酵等の生物的処理による方法，酵素剤
を用いて該残液を調味液の原料とする方法等がある。
は原液そのままあるいは濃縮および乾燥後に家畜用飼料
の一部として利用される以外に有効な手段がなく，大部
分は、これまで海洋投棄、大地還元、焼却処分、生物学
的処理などにより廃棄処分されてきた。しかし、近年世
界的環境対策が必要とされる状況において、焼酎粕の廃
棄処分方法として現在最も依存している海洋投棄は，法
的に近く禁止されることになっており，焼酎業界では焼
酎蒸留残液の処理方法の検討が行われている。現在，検
討されている処理方法としては，該残液を蒸留あるいは
加熱乾固して得られる固形分を肥料や試料として利用す
る方法，メタン発酵等の生物的処理による方法，酵素剤
を用いて該残液を調味液の原料とする方法等がある。
【０００３】ところで，腸内細菌としてのビフィズス菌
および乳酸菌の重要性は周知のことである。例えばこれ
までに見いだされたビフィズス菌の増殖促進物質として
は，大麦タンパク質の酵素分解液を原料とする成分（特
開昭61-282070），米糠麹分解液を原料とする成分（特
開平3-19686），プロピオン酸菌が生産する成分（特開
平7-227207），分子内にトレハロース構造とイソマルト
ース構造を併せ持つ非還元性糖質（特開平8-214871）等
が挙げられる。前記プロピオン酸菌が生産する成分はビ
フィズス菌の増殖を促進することから，ビフィズス菌を
増殖させる培地でプロピオン酸菌をスタートアップとし
て用いる方法である。
および乳酸菌の重要性は周知のことである。例えばこれ
までに見いだされたビフィズス菌の増殖促進物質として
は，大麦タンパク質の酵素分解液を原料とする成分（特
開昭61-282070），米糠麹分解液を原料とする成分（特
開平3-19686），プロピオン酸菌が生産する成分（特開
平7-227207），分子内にトレハロース構造とイソマルト
ース構造を併せ持つ非還元性糖質（特開平8-214871）等
が挙げられる。前記プロピオン酸菌が生産する成分はビ
フィズス菌の増殖を促進することから，ビフィズス菌を
増殖させる培地でプロピオン酸菌をスタートアップとし
て用いる方法である。
【０００４】一方，乳酸菌は腸内細菌として重要である
のはもちろんのこと，例えばサイレージや乳酸生産など
のように，工業的にも重要である。例えばこれまでに見
いだされた乳酸菌の増殖促進物質としては，ゴム抽出廃
液を原料とする成分（特開平6-233689），カカオ豆およ
び/またはカカオハスクを原料とする成分（特開平8-196
268）等が挙げられる。
のはもちろんのこと，例えばサイレージや乳酸生産など
のように，工業的にも重要である。例えばこれまでに見
いだされた乳酸菌の増殖促進物質としては，ゴム抽出廃
液を原料とする成分（特開平6-233689），カカオ豆およ
び/またはカカオハスクを原料とする成分（特開平8-196
268）等が挙げられる。
【０００５】しかしこれらの物質は効果が不十分であっ
たり乳酸菌以外の所望外の細菌類の増殖も促進してしま
う等の問題がある。
たり乳酸菌以外の所望外の細菌類の増殖も促進してしま
う等の問題がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は，焼酎蒸留残
液を原料として，乳酸菌等の微生物の増殖を促進する成
分を効率的に製造する方法を提供することにある。
液を原料として，乳酸菌等の微生物の増殖を促進する成
分を効率的に製造する方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，前記課題
を解決するべく鋭意研究を重ねた結果，本発明を完成す
るに至った。すなわち，本発明によれば，焼酎蒸留残液
の水分を好ましくは，６０〜８５重量％，最も好ましく
は６０〜７０重量％になるように調整し，遠心分離等で
固液分離後，エタノール等の有機溶剤を終濃度５％以
上，好ましくは３０％以上になるように加え，生じた沈
殿をろ過あるいは遠心分離等で分離し，得られた固形物
を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹脂で処理し，ゲル濾
過後，得られた液を濃縮，あるいは噴霧乾燥して製品と
する焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生物の増殖促進物質
を製造方法に係るものである。
を解決するべく鋭意研究を重ねた結果，本発明を完成す
るに至った。すなわち，本発明によれば，焼酎蒸留残液
の水分を好ましくは，６０〜８５重量％，最も好ましく
は６０〜７０重量％になるように調整し，遠心分離等で
固液分離後，エタノール等の有機溶剤を終濃度５％以
上，好ましくは３０％以上になるように加え，生じた沈
殿をろ過あるいは遠心分離等で分離し，得られた固形物
を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹脂で処理し，ゲル濾
過後，得られた液を濃縮，あるいは噴霧乾燥して製品と
する焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生物の増殖促進物質
を製造方法に係るものである。
【０００８】本発明によれば，焼酎残液を原料とした乳
酸菌等の微生物の増殖を促進する物質を効率的に製造す
ることができる。かくして得られる乾燥標品は，乳酸菌
やビフィズス菌等の腸内細菌の増殖を促進することから
食品原料として有効利用ができ，さらに乳酸発酵やサイ
レージ等の乳酸発酵工業においても有効である。以下，
本発明について詳述する。本発明が適用される焼酎は，
特に原料に関わりなく，従来より良く知られた麦，米，
トウモロコシ，いも等の各種穀類乃至他のデンプン質を
原料とするものいずれであってもよい。
酸菌等の微生物の増殖を促進する物質を効率的に製造す
ることができる。かくして得られる乾燥標品は，乳酸菌
やビフィズス菌等の腸内細菌の増殖を促進することから
食品原料として有効利用ができ，さらに乳酸発酵やサイ
レージ等の乳酸発酵工業においても有効である。以下，
本発明について詳述する。本発明が適用される焼酎は，
特に原料に関わりなく，従来より良く知られた麦，米，
トウモロコシ，いも等の各種穀類乃至他のデンプン質を
原料とするものいずれであってもよい。
【０００９】焼酎蒸留残液は通常９５重量％の水分を含
むが，好ましくは水分を６０〜８５重量％，最も好まし
くは６０〜７０重量％まで濃縮したほうが効率的であ
る。その場合，濃縮方法は加熱あるいは非加熱，常圧あ
るいは減圧，いずれの条件であってもよい。焼酎蒸留粕
を固液分離する方法は，デカンタによる遠心分離，フィ
ルタープレス，その他いずれの方法であってもよい。
むが，好ましくは水分を６０〜８５重量％，最も好まし
くは６０〜７０重量％まで濃縮したほうが効率的であ
る。その場合，濃縮方法は加熱あるいは非加熱，常圧あ
るいは減圧，いずれの条件であってもよい。焼酎蒸留粕
を固液分離する方法は，デカンタによる遠心分離，フィ
ルタープレス，その他いずれの方法であってもよい。
【００１０】上記で得られた該焼酎蒸留残液あるいは該
焼酎蒸留濃縮液にエタノール等の有機溶媒を所定の濃度
まで添加する。この場合，有機溶媒はエタノールが好適
であるが，特に限定されることはない。有機溶媒濃度は
成分の生産効率に影響し，該有機溶媒の最適終濃度は，
焼酎蒸留残液あるいは焼酎蒸留濃縮液の水分量によって
異なるが，通常，終濃度５％以上，好ましくは，３０％
以上になるまで添加する。
焼酎蒸留濃縮液にエタノール等の有機溶媒を所定の濃度
まで添加する。この場合，有機溶媒はエタノールが好適
であるが，特に限定されることはない。有機溶媒濃度は
成分の生産効率に影響し，該有機溶媒の最適終濃度は，
焼酎蒸留残液あるいは焼酎蒸留濃縮液の水分量によって
異なるが，通常，終濃度５％以上，好ましくは，３０％
以上になるまで添加する。
【００１１】該有機溶剤添加によって得られた沈殿は，
フィルタープレスあるいは遠心分離のいずれの方法でろ
過してもよい。使用するＯＤＳ樹脂は，市販のＳｅｐ−
ｐａｃｋ等のものでもよい。またゲル濾過に供するカラ
ムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ-６０を使用したが、
分画分子量が３０００から１００００のものであれば良
い。
フィルタープレスあるいは遠心分離のいずれの方法でろ
過してもよい。使用するＯＤＳ樹脂は，市販のＳｅｐ−
ｐａｃｋ等のものでもよい。またゲル濾過に供するカラ
ムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ-６０を使用したが、
分画分子量が３０００から１００００のものであれば良
い。
【００１２】かくして，乳酸菌等の微生物の増殖を促進
する成分が焼酎蒸留残液を原料として得ることができ
る。以下に，ここに至るまでの過程を実験結果を交えな
がら詳述するが，本発明は，なんら拘束されるものでは
ない。
する成分が焼酎蒸留残液を原料として得ることができ
る。以下に，ここに至るまでの過程を実験結果を交えな
がら詳述するが，本発明は，なんら拘束されるものでは
ない。
【００１３】
【実験１】 焼酎蒸留残液の分画 メッシュ１ｍｍでろ過した大麦製の焼酎蒸留残液２Ｌを
３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し，加熱濃縮により約
１Ｌ（水分約８０％）まで濃縮し，さらに終濃度９０％
になるようにエタノール約９Ｌを添加した。生じた沈殿
を遠心分離によって固液分離し，沈殿部をＥＩ画分，液
相部をＥＳ画分とした。ＥＳ画分はさらにエタノールを
除去した後，凍結乾燥した。
３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し，加熱濃縮により約
１Ｌ（水分約８０％）まで濃縮し，さらに終濃度９０％
になるようにエタノール約９Ｌを添加した。生じた沈殿
を遠心分離によって固液分離し，沈殿部をＥＩ画分，液
相部をＥＳ画分とした。ＥＳ画分はさらにエタノールを
除去した後，凍結乾燥した。
【００１４】
【実験２】 ＥＩ画分，ＥＳ画分の乳酸菌およびビフィ
ズス菌に対する影響 菌株には，乳酸菌としてLactococcus lactis subsp
lactis IFO 12007とLactobacillus acidophilus IFO
13951の２株を用い，また，ビフィズス菌としてBifidob
acterium bifidum IFO 14252を用いた。乳酸菌の培地
には，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポリペ
プトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，Ｎａｃｌ
０.５ｗｔ％）にＥＩ画分を１.０ｗｔ％加えたもの，
前記乳酸菌用培地にＥＳ画分を１.０ｗｔ％加えたも
の，および対照として前記乳酸菌用培地のみを用いた。
ビフィズス菌の培地には，ビフィズス菌用培地（グルコ
ース１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキ
ス０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０
ｗｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ
-システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.
３ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ ８０ １ｍｌ/Ｌ）にＥＩ画分
を１.０ｗｔ％加えたもの，前記ビフィズス菌用培地に
ＥＳ画分を１.０ｗｔ％加えたもの，および対照として
前記ビフィズス菌用培地のみを用いた。培養条件は，La
ctococcus lactis subsp lactisIFO 12007について
は，温度３０℃，振とう数（100strokes/min)で２４時
間振とう培養を行い，Lactobacillus acidophilus IF
O 13951については，温度３７℃，振とう数（100strok
es/min)で２４時間振とう培養を行い，Bifidobacterium
bifidum IFO 14252については，温度３７℃で，４８
時間静置培養行った後に菌体量を測定した。表１に，前
記各培地で前記各菌株を前記培養条件で培養後の乾燥菌
体重量を示した。
ズス菌に対する影響 菌株には，乳酸菌としてLactococcus lactis subsp
lactis IFO 12007とLactobacillus acidophilus IFO
13951の２株を用い，また，ビフィズス菌としてBifidob
acterium bifidum IFO 14252を用いた。乳酸菌の培地
には，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポリペ
プトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，Ｎａｃｌ
０.５ｗｔ％）にＥＩ画分を１.０ｗｔ％加えたもの，
前記乳酸菌用培地にＥＳ画分を１.０ｗｔ％加えたも
の，および対照として前記乳酸菌用培地のみを用いた。
ビフィズス菌の培地には，ビフィズス菌用培地（グルコ
ース１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキ
ス０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０
ｗｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ
-システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.
３ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ ８０ １ｍｌ/Ｌ）にＥＩ画分
を１.０ｗｔ％加えたもの，前記ビフィズス菌用培地に
ＥＳ画分を１.０ｗｔ％加えたもの，および対照として
前記ビフィズス菌用培地のみを用いた。培養条件は，La
ctococcus lactis subsp lactisIFO 12007について
は，温度３０℃，振とう数（100strokes/min)で２４時
間振とう培養を行い，Lactobacillus acidophilus IF
O 13951については，温度３７℃，振とう数（100strok
es/min)で２４時間振とう培養を行い，Bifidobacterium
bifidum IFO 14252については，温度３７℃で，４８
時間静置培養行った後に菌体量を測定した。表１に，前
記各培地で前記各菌株を前記培養条件で培養後の乾燥菌
体重量を示した。
【００１５】
【表１】
【００１６】得られた表１の結果から，いずれの菌株に
ついても，ＥＳ画分を添加したものについては乾燥菌体
重量は変わらなかったが，ＥＩ画分を添加したものにつ
いては乾燥菌体重量が増加することが判った。そこで，
ＥＩ画分の影響をさらに詳しく検討するために，前記乳
酸菌Lactococcus lactis subsp lactis IFO 12007
とLactobacillus acidophilus IFO 13951についてはジ
ャー培養を行い，前記ビフィズス菌のBifidobacterium
bifidumIFO 14252についてはフラスコ培養を行った。
ついても，ＥＳ画分を添加したものについては乾燥菌体
重量は変わらなかったが，ＥＩ画分を添加したものにつ
いては乾燥菌体重量が増加することが判った。そこで，
ＥＩ画分の影響をさらに詳しく検討するために，前記乳
酸菌Lactococcus lactis subsp lactis IFO 12007
とLactobacillus acidophilus IFO 13951についてはジ
ャー培養を行い，前記ビフィズス菌のBifidobacterium
bifidumIFO 14252についてはフラスコ培養を行った。
【００１７】
【実験３-１】 ＥＩ画分を添加した乳酸菌のジャー培
養（１） 菌株にLactococcus lactis subsp lactis IFO 1200
7を用い，培地に，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，Ｎａｃｌ ０.５ｗｔ％）にＥＩ画分を１.０ｗｔ％
添加したものを用いて，２Ｌ容のジャーファーメンター
にて温度３０℃，かくはん回転数２００ｒｐｍ，ｐＨ
７.０に調整して１００時間振とう培養を行い，この
際，乾燥菌体重量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変
化を測定した。対照には前記乳酸菌用培地を用いた。
養（１） 菌株にLactococcus lactis subsp lactis IFO 1200
7を用い，培地に，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，Ｎａｃｌ ０.５ｗｔ％）にＥＩ画分を１.０ｗｔ％
添加したものを用いて，２Ｌ容のジャーファーメンター
にて温度３０℃，かくはん回転数２００ｒｐｍ，ｐＨ
７.０に調整して１００時間振とう培養を行い，この
際，乾燥菌体重量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変
化を測定した。対照には前記乳酸菌用培地を用いた。
【００１８】図１、図２および図３に，それぞれ乾燥菌
体重量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変化を示し
た。 図１、図２および図３から明らかなように，ＥＩ
画分を１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地では，培養１
５時間目あたりから，菌体増殖，グルコース消費および
乳酸の生成が著しく促進され，その結果コントロールが
４８時間でグルコースを枯渇して培養を終了したのに対
し，ＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地で
は，３４時間で培養が終了した。このことからＥＩ画分
を添加したものについては菌体量が増加することが明ら
かとなった。
体重量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変化を示し
た。 図１、図２および図３から明らかなように，ＥＩ
画分を１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地では，培養１
５時間目あたりから，菌体増殖，グルコース消費および
乳酸の生成が著しく促進され，その結果コントロールが
４８時間でグルコースを枯渇して培養を終了したのに対
し，ＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地で
は，３４時間で培養が終了した。このことからＥＩ画分
を添加したものについては菌体量が増加することが明ら
かとなった。
【００１９】
【実験３-２】 ＥＩ画分を添加した乳酸菌のジャー培
養（２） 菌株にLactobacillus acidophilus IFO 13951を用い，
培地に，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポリ
ペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ＮａＣ
ｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にＥＩ画分を１.
０ｗｔ％添加したものを用いて，それぞれ別々に２Ｌ容
のジャーファーメンターにて温度３７℃，かくはん回転
数２００ｒｐｍ，ｐＨ７.０に調整して１００時間振と
う培養を行い，この時の乾燥菌体重量，グルコース濃
度，乳酸濃度の経時変化を測定した。
養（２） 菌株にLactobacillus acidophilus IFO 13951を用い，
培地に，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポリ
ペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ＮａＣ
ｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にＥＩ画分を１.
０ｗｔ％添加したものを用いて，それぞれ別々に２Ｌ容
のジャーファーメンターにて温度３７℃，かくはん回転
数２００ｒｐｍ，ｐＨ７.０に調整して１００時間振と
う培養を行い，この時の乾燥菌体重量，グルコース濃
度，乳酸濃度の経時変化を測定した。
【００２０】図４、図５および図６に，それぞれ菌体
量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変化を示した。図
４、図５および図６から明らかなように，ＥＩ画分を
１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地では，培養初期の６
時間目あたりから，菌体増殖，グルコース消費および乳
酸の生成が著しく促進され，培養１００時間目の菌体量
はコントロールの約７倍にまで達した。その効果は前記
実験３-１のLactococcuslactis subsp lactis IFO 1
2007に対するものよりも大きかった。
量，グルコース濃度，乳酸濃度の経時変化を示した。図
４、図５および図６から明らかなように，ＥＩ画分を
１.０ｗｔ％添加した乳酸菌用培地では，培養初期の６
時間目あたりから，菌体増殖，グルコース消費および乳
酸の生成が著しく促進され，培養１００時間目の菌体量
はコントロールの約７倍にまで達した。その効果は前記
実験３-１のLactococcuslactis subsp lactis IFO 1
2007に対するものよりも大きかった。
【００２１】
【実験３-３】 ＥＩ画分を添加したビフィズス菌のフ
ラスコ培養 菌株にBifidobacterium bifidum IFO 14252を用い，
培地に，ビフィズス菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス０.５ｗｔ
％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗｔ％，Ｌ-
アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-システイン
０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３ｗｔ％，Ｔ
ｗｅｅｎ８０ １ｍｌ/Ｌ）と前記ビフィズス菌用培地
にＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加したものを用いて，それ
ぞれ別々の５００ｍｌ容の三角フラスコにて，温度３７
℃で５７時間培養を行い，この時の乾燥菌体重量および
グルコース濃度の経時変化を測定した。
ラスコ培養 菌株にBifidobacterium bifidum IFO 14252を用い，
培地に，ビフィズス菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス０.５ｗｔ
％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗｔ％，Ｌ-
アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-システイン
０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３ｗｔ％，Ｔ
ｗｅｅｎ８０ １ｍｌ/Ｌ）と前記ビフィズス菌用培地
にＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加したものを用いて，それ
ぞれ別々の５００ｍｌ容の三角フラスコにて，温度３７
℃で５７時間培養を行い，この時の乾燥菌体重量および
グルコース濃度の経時変化を測定した。
【００２２】図７および図８に，それぞれ乾燥菌体重量
およびグルコース濃度の経時変化を示した。図７および
図８から明らかなように，ＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加
したビフィズス菌培養においても，培養１２時間目あた
りから，菌体増殖およびグルコース消費が促進され，菌
体量は培養５７時間で，コントロールの約１.３倍にま
で達した。
およびグルコース濃度の経時変化を示した。図７および
図８から明らかなように，ＥＩ画分を１.０ｗｔ％添加
したビフィズス菌培養においても，培養１２時間目あた
りから，菌体増殖およびグルコース消費が促進され，菌
体量は培養５７時間で，コントロールの約１.３倍にま
で達した。
【００２３】以上の実験から大麦焼酎蒸留残液中の水溶
性かつエタノール不溶性であるＥＩ画分中に，乳酸菌お
よびビフィズス菌に対する増殖促進物質が存在し，か
つ，その効果の程度は菌種によってかなり大きな違いが
あることが明らかとなった。そこで，ＥＩ画分中に存在
する，乳酸菌およびビフィズス菌に対する増殖促進因子
について更なる検討を行うために以下の方法により，Ｅ
Ｉ画分のさらなる分画を行った。
性かつエタノール不溶性であるＥＩ画分中に，乳酸菌お
よびビフィズス菌に対する増殖促進物質が存在し，か
つ，その効果の程度は菌種によってかなり大きな違いが
あることが明らかとなった。そこで，ＥＩ画分中に存在
する，乳酸菌およびビフィズス菌に対する増殖促進因子
について更なる検討を行うために以下の方法により，Ｅ
Ｉ画分のさらなる分画を行った。
【００２４】
【実験４】 ＥＩ画分のゲル濾過 １０ｗｔ％のＥＩ画分水溶液を調製し，その１００μｌ
を，カラムYMC PackDiol-60に供し，溶離液に水を用
い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長でゲル濾過を行った。図９に２５４ｎｍ
と４５０ｎｍの２波長で検出したクロマトグラムを示し
た。実線が２５４ｎｍ，破線が４５０ｎｍのモニター結
果を示す。得られた図９のクロマトグラムをもとに，得
られたピーク群を，画分Ａ，画分Ｂ，画分Ｃ，画分Ｄお
よび画分Ｅの５つの画分に分取し，得られた前記画分Ａ
〜画分Ｅの５つの画分それぞれの乳酸菌に対する増殖促
進効果を検討した。
を，カラムYMC PackDiol-60に供し，溶離液に水を用
い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長でゲル濾過を行った。図９に２５４ｎｍ
と４５０ｎｍの２波長で検出したクロマトグラムを示し
た。実線が２５４ｎｍ，破線が４５０ｎｍのモニター結
果を示す。得られた図９のクロマトグラムをもとに，得
られたピーク群を，画分Ａ，画分Ｂ，画分Ｃ，画分Ｄお
よび画分Ｅの５つの画分に分取し，得られた前記画分Ａ
〜画分Ｅの５つの画分それぞれの乳酸菌に対する増殖促
進効果を検討した。
【００２５】
【実験５】 画分Ａ〜画分Ｅの乳酸菌に対する増殖促進
効果 菌株にLactobacillus acidophilus IFO 13951を用い，
培地には，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポ
リペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，Ｎａ
Ｃｌ ０.５ｗｔ％）を使用したもの（対照），前記乳
酸菌用培地に乾燥重量０.１ｇのＥＩ画分を加えたも
の，前記乳酸菌用培地に乾燥重量０.１ｇのＥＩ画分の
前記ゲル濾過により分取して得られる量の画分Ａ，画分
Ｂ，画分Ｃ，画分Ｄおよび画分Ｅをそれぞれ別々に添加
したものを用い，これらの培地でそれぞれ温度３７℃，
振とう数100strokes/minで２４時間振とう培養を行った
後，菌体量を５６０ｎｍにおける吸光度で測定した。表
２に，培養終了後の菌体量を示した。
効果 菌株にLactobacillus acidophilus IFO 13951を用い，
培地には，乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ％，ポ
リペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，Ｎａ
Ｃｌ ０.５ｗｔ％）を使用したもの（対照），前記乳
酸菌用培地に乾燥重量０.１ｇのＥＩ画分を加えたも
の，前記乳酸菌用培地に乾燥重量０.１ｇのＥＩ画分の
前記ゲル濾過により分取して得られる量の画分Ａ，画分
Ｂ，画分Ｃ，画分Ｄおよび画分Ｅをそれぞれ別々に添加
したものを用い，これらの培地でそれぞれ温度３７℃，
振とう数100strokes/minで２４時間振とう培養を行った
後，菌体量を５６０ｎｍにおける吸光度で測定した。表
２に，培養終了後の菌体量を示した。
【００２６】
【表２】
【００２７】得られた表２の結果から，画分Ａを加えた
ものは，ＥＩ画分を加えたものと同等の菌体量の増加を
示し，また画分Ｂを加えたものについても，ＥＩ画分と
比較して約７０％の菌体量の増加を示した。しかし，画
分Ｃ，ＤおよびＥを加えたものは，対照とほぼ同じ菌体
量であった。このことから，ＥＩ画分中の増殖促進成分
は，前記画分Ａおよび画分Ｂに含まれていることが判っ
た。
ものは，ＥＩ画分を加えたものと同等の菌体量の増加を
示し，また画分Ｂを加えたものについても，ＥＩ画分と
比較して約７０％の菌体量の増加を示した。しかし，画
分Ｃ，ＤおよびＥを加えたものは，対照とほぼ同じ菌体
量であった。このことから，ＥＩ画分中の増殖促進成分
は，前記画分Ａおよび画分Ｂに含まれていることが判っ
た。
【００２８】
【実験６】 ＥＩ画分の前処理 そこで，これらの増殖促進活性のある画分Ａおよび画分
Ｂを，さらに効率的に取り出すために，前記ＥＩ画分を
Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに供し，水および５０ｖｏｌ％
メタノールで溶出させ，得られたそれぞれの画分をゲル
濾過に供した。すなわち１０ｗｔ％のＥＩ画分水溶液を
調製し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅ
ｐ−Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記
Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流
し，これにより得られた溶出液をエバポレーターを用い
て３ｍｌまで減圧濃縮し，該濃縮液を水溶性画分とし
た。次に前記Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに，２０ｍｌの５
０ｖｏｌ％メタノールを流し，これにより得られた溶出
液をエバポレーターを用いて３ｍｌまで減圧濃縮し，該
濃縮液を５０％メタノール溶性画分とした。
Ｂを，さらに効率的に取り出すために，前記ＥＩ画分を
Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに供し，水および５０ｖｏｌ％
メタノールで溶出させ，得られたそれぞれの画分をゲル
濾過に供した。すなわち１０ｗｔ％のＥＩ画分水溶液を
調製し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅ
ｐ−Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記
Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流
し，これにより得られた溶出液をエバポレーターを用い
て３ｍｌまで減圧濃縮し，該濃縮液を水溶性画分とし
た。次に前記Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに，２０ｍｌの５
０ｖｏｌ％メタノールを流し，これにより得られた溶出
液をエバポレーターを用いて３ｍｌまで減圧濃縮し，該
濃縮液を５０％メタノール溶性画分とした。
【００２９】
【実験７-1】 ＥＩ画分から得られた水溶性画分のゲル
濾過 次に，前記の水溶性画分をさらに分画するためにゲルろ
過を行った。すなわち，１００μｌの前記水溶性画分
を，カラムYMC-Pack Diol-60に供し，溶離液には水を
用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長は２５４ｎｍと
４５０ｎｍの２波長とした。図１０に２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長で検出したクロマトグラムを示した。実
線が２５４ｎｍ，破線が４５０ｎｍのモニター結果を示
す。得られた図１０のクロマトグラムをもとに，前記実
験４とほぼ同一の画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。なお
前記実験４の画分Ｃ，画分Ｄおよび画分Ｅに相当する画
分は，前記実験５の結果から，菌体量の増加が認められ
なかったため，分取しなかった。
濾過 次に，前記の水溶性画分をさらに分画するためにゲルろ
過を行った。すなわち，１００μｌの前記水溶性画分
を，カラムYMC-Pack Diol-60に供し，溶離液には水を
用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長は２５４ｎｍと
４５０ｎｍの２波長とした。図１０に２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長で検出したクロマトグラムを示した。実
線が２５４ｎｍ，破線が４５０ｎｍのモニター結果を示
す。得られた図１０のクロマトグラムをもとに，前記実
験４とほぼ同一の画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。なお
前記実験４の画分Ｃ，画分Ｄおよび画分Ｅに相当する画
分は，前記実験５の結果から，菌体量の増加が認められ
なかったため，分取しなかった。
【００３０】
【実験７-２】 ＥＩ画分から得られた５０％メタノー
ル溶性画分のゲル濾過 同様にして，前記の５０％メタノール溶性画分について
も，これをさらに分画するためにゲルろ過を行った。す
なわち，１００μｌの前記５０％メタノール溶性画分
を，カラムYMC Pack Diol-60に供し，溶離液に水を用
い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長で，ゲル濾過を行った。
ル溶性画分のゲル濾過 同様にして，前記の５０％メタノール溶性画分について
も，これをさらに分画するためにゲルろ過を行った。す
なわち，１００μｌの前記５０％メタノール溶性画分
を，カラムYMC Pack Diol-60に供し，溶離液に水を用
い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長で，ゲル濾過を行った。
【００３１】図１１に２５４ｎｍと４５０ｎｍの２波長
で検出したクロマトを示した。実線が２５４ｎｍ，破線
が４５０ｎｍのモニター結果を示す。得られた図１１の
クロマトグラムをもとに，得られた２つの重なり合った
ピークを画分Ｆとして分取した。
で検出したクロマトを示した。実線が２５４ｎｍ，破線
が４５０ｎｍのモニター結果を示す。得られた図１１の
クロマトグラムをもとに，得られた２つの重なり合った
ピークを画分Ｆとして分取した。
【００３２】
【実験７-３】 画分Ａ〜画分Ｆの乳酸菌に対する増殖
促進効果 前記実験７-１で得た画分Ａ’，画分Ｂ’および前記実
験７-２で得た画分Ｆの乳酸菌に対する増殖促進効果を
検討した。すなわち，菌株にLactobacillus acidophilu
s IFO 13951を用い，培地には，乳酸菌用培地（グルコ
ース１.０ｗｔ％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキ
ス０.５ｗｔ％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌
用培地に前記実験６で得られた水溶性画分を加えたも
の，前記乳酸菌用培地に前記実験７-１で得た画分
Ａ’，画分Ｂ’および前記実験７-２で得た画分Ｆをそ
れぞれ別々に添加したものを用い，それぞれ温度３７
℃，振とう数100strokes/minで２４時間振とう培養を行
った後，菌体量を５６０ｎｍにおける吸光度で測定し
た。表３に，培養終了後の菌体量を示した。
促進効果 前記実験７-１で得た画分Ａ’，画分Ｂ’および前記実
験７-２で得た画分Ｆの乳酸菌に対する増殖促進効果を
検討した。すなわち，菌株にLactobacillus acidophilu
s IFO 13951を用い，培地には，乳酸菌用培地（グルコ
ース１.０ｗｔ％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキ
ス０.５ｗｔ％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌
用培地に前記実験６で得られた水溶性画分を加えたも
の，前記乳酸菌用培地に前記実験７-１で得た画分
Ａ’，画分Ｂ’および前記実験７-２で得た画分Ｆをそ
れぞれ別々に添加したものを用い，それぞれ温度３７
℃，振とう数100strokes/minで２４時間振とう培養を行
った後，菌体量を５６０ｎｍにおける吸光度で測定し
た。表３に，培養終了後の菌体量を示した。
【００３３】
【表３】
【００３４】得られた表３の結果から，画分Ａ’を加え
たものは，水溶性画分を加えたものと同等の菌体量の増
加を示し，また画分Ｂ’を加えたものについても，水溶
性画分を加えたものと比較して約７０％の菌体量の増加
を示した。しかし，画分Ｆを加えたものは，コントロー
ルとほぼ同じ菌体量であった。このことから，ＥＩ画分
中の増殖促進成分は，前記画分Ａ’および画分Ｂ’に含
まれていることが判った。
たものは，水溶性画分を加えたものと同等の菌体量の増
加を示し，また画分Ｂ’を加えたものについても，水溶
性画分を加えたものと比較して約７０％の菌体量の増加
を示した。しかし，画分Ｆを加えたものは，コントロー
ルとほぼ同じ菌体量であった。このことから，ＥＩ画分
中の増殖促進成分は，前記画分Ａ’および画分Ｂ’に含
まれていることが判った。
【００３５】そこで次に，この促進活性のあった前記画
分Ａ’および画分Ｂ’について，酸加水分解を行い，糖
およびアミノ酸組成を調べた。
分Ａ’および画分Ｂ’について，酸加水分解を行い，糖
およびアミノ酸組成を調べた。
【００３６】
【実験８】 画分Ａ’および画分Ｂ’の糖組成 前記画分Ａ’および画分Ｂ’の乾燥重量１０００ｍｇを
２Ｎ ＨＣＬを用いて９５℃，３.５時間の条件で加水
分解を行い，得られた加水分解物をＨＰＬＣ分析に供
し，糖組成を調べた。さらに前記画分Ａ’および画分
Ｂ’の乾燥重量１０００ｍｇを６Ｎ ＨＣＬを用いて１
１０℃，６時間の条件で加水分解を行い，得られた加水
分解物をアミノ酸アナライザーに供し，アミノ酸組成を
調べた。得られた結果を表４および表５に示す。
２Ｎ ＨＣＬを用いて９５℃，３.５時間の条件で加水
分解を行い，得られた加水分解物をＨＰＬＣ分析に供
し，糖組成を調べた。さらに前記画分Ａ’および画分
Ｂ’の乾燥重量１０００ｍｇを６Ｎ ＨＣＬを用いて１
１０℃，６時間の条件で加水分解を行い，得られた加水
分解物をアミノ酸アナライザーに供し，アミノ酸組成を
調べた。得られた結果を表４および表５に示す。
【００３７】
【表４】
【００３８】
【表５】
【００３９】表４の結果から，前記画分Ａ’および画分
Ｂ’の糖組成は，グルコース，キシロース，アラビノー
スを主体とし，前記画分Ａ’は前記画分Ｂ’に比べて，
グルコースが少なく，キシロースおよびアラビノースが
多く，またトータルの糖含量も多かった。また，表５の
結果から，前記画分Ｂ’は前記画分Ａ’に比べて，アミ
ノ酸含量が高かった。
Ｂ’の糖組成は，グルコース，キシロース，アラビノー
スを主体とし，前記画分Ａ’は前記画分Ｂ’に比べて，
グルコースが少なく，キシロースおよびアラビノースが
多く，またトータルの糖含量も多かった。また，表５の
結果から，前記画分Ｂ’は前記画分Ａ’に比べて，アミ
ノ酸含量が高かった。
【００４０】以上の結果から，前記画分Ａ’および画分
Ｂ’は，いずれも糖が主体であることから，糖とタンパ
クの複合体ではないかと推測された。本発明者らは以上
のような経緯に従って本発明を完成するに至った。
Ｂ’は，いずれも糖が主体であることから，糖とタンパ
クの複合体ではないかと推測された。本発明者らは以上
のような経緯に従って本発明を完成するに至った。
【００４１】
【００４２】
【実施例】本発明を以下の実施例により，さらに具体的
に説明するが，本発明はこれらの実施例によりなんら限
定されるものではない。
に説明するが，本発明はこれらの実施例によりなんら限
定されるものではない。
【００４３】
【実施例１】メッシュ１ｍｍでろ過した大麦製の焼酎蒸
留残液１Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，終濃度９０％になるようにエタノール約９
Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液分離
し、ＥＩ画分を作成した。次に、１０ｗｔ％のＥＩ画分
水溶液を調製し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ
１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた
後，前記Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン
水を流し，これにより得られた溶出液をエバポレーター
を用いて３ｍｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌ
を，カラムＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，
溶離液には水を用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長
２５４ｎｍと４５０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得
られたクロマトグラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分
取した。
留残液１Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，終濃度９０％になるようにエタノール約９
Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液分離
し、ＥＩ画分を作成した。次に、１０ｗｔ％のＥＩ画分
水溶液を調製し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ
１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた
後，前記Ｃ１８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン
水を流し，これにより得られた溶出液をエバポレーター
を用いて３ｍｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌ
を，カラムＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，
溶離液には水を用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長
２５４ｎｍと４５０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得
られたクロマトグラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分
取した。
【００４４】得られたＥＩ画分および画分Ａ’画分Ｂ’
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表６に培養終了後の菌体量を示した。
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表６に培養終了後の菌体量を示した。
【００４５】
【表６】
【００４６】得られた表６の結果から、乳酸菌、ビフィ
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
【００４７】
【実施例２】メッシュ１ｍｍでろ過した大麦製の焼酎蒸
留残液２Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，加熱濃縮により約１Ｌ（水分約８０％）ま
で濃縮し、さらに終濃度９０％になるようにエタノール
約９Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液
分離し、ＥＩ画分を作成した。
留残液２Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，加熱濃縮により約１Ｌ（水分約８０％）ま
で濃縮し、さらに終濃度９０％になるようにエタノール
約９Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液
分離し、ＥＩ画分を作成した。
【００４８】次に、１０ｗｔ％のＥＩ画分水溶液を調製
し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅｐ−
Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記Ｃ１
８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流し，こ
れにより得られた溶出液をエバポレーターを用いて３ｍ
ｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌを，カラムＹ
ＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，溶離液には水
を用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと
４５０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得られたクロマ
トグラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。
し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅｐ−
Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記Ｃ１
８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流し，こ
れにより得られた溶出液をエバポレーターを用いて３ｍ
ｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌを，カラムＹ
ＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，溶離液には水
を用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎで，検出波長２５４ｎｍと
４５０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得られたクロマ
トグラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。
【００４９】得られたＥＩ画分および画分Ａ’画分Ｂ’
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表７に培養終了後の菌体量を示した。
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表７に培養終了後の菌体量を示した。
【００５０】
【表７】
【００５１】得られた表７の結果から、乳酸菌、ビフィ
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
【００５２】
【実施例３】メッシュ１ｍｍでろ過した大麦製の焼酎蒸
留残液３Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，加熱濃縮により約１Ｌ（水分約７０％）ま
で濃縮し、さらに終濃度９０％になるようにエタノール
約９Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液
分離し、ＥＩ画分を作成した。
留残液３Ｌ（水分約９０％）を３０００ｒｐｍで５分間
遠心分離し，加熱濃縮により約１Ｌ（水分約７０％）ま
で濃縮し、さらに終濃度９０％になるようにエタノール
約９Ｌを添加した。生じた沈殿を遠心分離によって固液
分離し、ＥＩ画分を作成した。
【００５３】次に、１０ｗｔ％のＥＩ画分水溶液を調製
し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅｐ−
Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記Ｃ１
８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流し，こ
れにより得られた溶出液をエバポレーターを用いて３ｍ
ｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌを，カラムＹ
ＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，溶離液に水を
用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎ，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得られたクロマトグ
ラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。
し，該水溶液３ｍｌをＷａｔｅｒｓ社製Ｃ１８Ｓｅｐ−
Ｐａｃｋに供し，得られた溶出液を除いた後，前記Ｃ１
８Ｓｅｐ−Ｐａｃｋに２０ｍｌの脱イオン水を流し，こ
れにより得られた溶出液をエバポレーターを用いて３ｍ
ｌまで減圧濃縮した。該濃縮液１００μｌを，カラムＹ
ＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−６０に供し，溶離液に水を
用い，流速１ｍｌ/ｍｉｎ，検出波長２５４ｎｍと４５
０ｎｍの２波長でゲルろ過を行い、得られたクロマトグ
ラムをもとに画分Ａ’と画分Ｂ’を分取した。
【００５４】得られたＥＩ画分および画分Ａ’画分Ｂ’
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表８に培養終了後の菌体量を示した。
の乳酸菌およびビフィズス菌に対する効果を調べた。す
なわち、乳酸菌については、菌株にＬａｃｔｏｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＩＦＯ １３９５
１を、培地には乳酸菌用培地（グルコース１.０ｗｔ
％，ポリペプトン０.５ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ
％，ＮａＣｌ ０.５ｗｔ％）と前記乳酸菌用培地にそ
れぞれの画分を別々に添加したものを用いて、温度３７
℃，振とう数１００ ｓｔｒｏｋｅｓ／ｍｉｎで２４時
間振とう培養を行った後、菌体量を５６０ｎｍにおける
吸光度で測定した。ビフィズス菌については、菌株にＢ
ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ＪＣＭ
１２１７を、培地にはビフィズス菌用培地（グルコー
ス１.０ｗｔ％，酵母エキス０.５ｗｔ％，ビーフエキス
０.５ｗｔ％，カゼイン・トリプシン加水分解物１.０ｗ
ｔ％，Ｌ-アスコルビン酸ナトリウム１.０ｗｔ％，Ｌ-
システイン０.０５ｗｔ％，リン酸水素二カリウム０.３
ｗｔ％，Ｔｗｅｅｎ８０ １ｍｌ／Ｌ）と前記ビフィズ
ス菌用培地にそれぞれの画分を別々に添加したものを用
いて、温度３７℃で４８時間静置培養を行った後菌体量
を測定した。表８に培養終了後の菌体量を示した。
【００５５】
【表８】
【００５６】得られた表８の結果から、乳酸菌、ビフィ
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
ズス菌のどちらについても、ＥＩ画分、画分Ａ’画分
Ｂ’をそれぞれ添加することで、菌体量が対照と比べて
増大した。
【００５７】
【発明の効果】微生物増殖促進成分を得る目的で，焼酎
蒸留残液から水分を除去し，固液分離後，有機溶剤を加
えて，生じた沈殿をろ過あるいは遠心分離等で分離し，
得られた固形物を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹脂で
処理後，ゲル濾過し，得られた液を濃縮あるいは噴霧乾
燥することにより、乳酸菌等の微生物の増殖促進物質を
得ることができる。
蒸留残液から水分を除去し，固液分離後，有機溶剤を加
えて，生じた沈殿をろ過あるいは遠心分離等で分離し，
得られた固形物を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹脂で
処理後，ゲル濾過し，得られた液を濃縮あるいは噴霧乾
燥することにより、乳酸菌等の微生物の増殖促進物質を
得ることができる。
【図１】実験３-１における菌体量の経時変化を示す図
である。
である。
【図２】実験３-１におけるグルコース濃度の経時変化
を示す図である。
を示す図である。
【図３】実験３-１における乳酸濃度の経時変化を示す
図である。
図である。
【図４】実験３-２における菌体量の経時変化を示す図
である。
である。
【図５】実験３-２におけるグルコース濃度の経時変化
を示す図である。
を示す図である。
【図６】実験３-２における乳酸濃度の経時変化を示す
図である。
図である。
【図７】実験３-３における菌体量の経時変化を示す図
である。
である。
【図８】実験３-３におけるグルコース濃度の経時変化
を示す図である。
を示す図である。
【図９】実験４における２５４ｎｍと４５０ｎｍの２波
長で検出したクロマトグラムである。
長で検出したクロマトグラムである。
【図１０】実験７-１における２５４ｎｍと４５０ｎｍ
の２波長で検出したクロマトグラムである。
の２波長で検出したクロマトグラムである。
【図１１】 実験７-２における２５４ｎｍと４５０ｎ
ｍの２波長で検出したクロマトグラムである。
ｍの２波長で検出したクロマトグラムである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 高下 秀春 大分県宇佐市大字山本2231−１ 三和酒類 株式会社内 (72)発明者 古田 吉史 大分県宇佐市大字山本2231−１ 三和酒類 株式会社内
Claims (1)
- 【請求項１】 微生物増殖促進成分を得る目的で，焼酎
蒸留残液から水分を除去し，固液分離後，有機溶剤を加
えて，生じた沈殿をろ過あるいは遠心分離等で分離し，
得られた固形物を再び水で溶解し，それをＯＤＳ樹脂で
処理後，ゲル濾過し，得られた液を濃縮あるいは噴霧乾
燥して製品とする焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生物の
増殖促進物質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9138164A JPH10327852A (ja) | 1997-05-28 | 1997-05-28 | 焼酎蒸留残液から微生物増殖促進成分を分離濃縮する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9138164A JPH10327852A (ja) | 1997-05-28 | 1997-05-28 | 焼酎蒸留残液から微生物増殖促進成分を分離濃縮する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10327852A true JPH10327852A (ja) | 1998-12-15 |
Family
ID=15215529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9138164A Pending JPH10327852A (ja) | 1997-05-28 | 1997-05-28 | 焼酎蒸留残液から微生物増殖促進成分を分離濃縮する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10327852A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009209132A (ja) * | 2008-02-05 | 2009-09-17 | Kitii Corp | 新菌株ラクトバチルス・クリスパタスｋｔ−１１、ｋｔ−２３、およびｋｔ−２５を用いた抗アレルギー用組成物 |
| JP2010200677A (ja) * | 2009-03-04 | 2010-09-16 | Satsuma Shuzo Kk | 焼酎粕機能性エキスおよびその製造方法 |
| JP2021126061A (ja) * | 2020-02-12 | 2021-09-02 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規乳酸菌用培地 |
-
1997
- 1997-05-28 JP JP9138164A patent/JPH10327852A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009209132A (ja) * | 2008-02-05 | 2009-09-17 | Kitii Corp | 新菌株ラクトバチルス・クリスパタスｋｔ−１１、ｋｔ−２３、およびｋｔ−２５を用いた抗アレルギー用組成物 |
| JP2010200677A (ja) * | 2009-03-04 | 2010-09-16 | Satsuma Shuzo Kk | 焼酎粕機能性エキスおよびその製造方法 |
| JP2021126061A (ja) * | 2020-02-12 | 2021-09-02 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規乳酸菌用培地 |
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