KR20180047765A - S-gag 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법에 따르면, 녹용 추출물에 효소를 단독 또는 균주와 함께 처리함으로써, 녹용 추출물의 유용성분인 S-GAG 및 시알산의 함량을 현저하게 증가시킬 수 있었는바, 생리적 효능이 증진된 본 발명의 녹용 추출물은 건강기능식품 및/또는 약학적 조성물 등에 폭넓게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법 {Method for producing deer antler extract with enhanced S-GAG and sialic acid content}

본 발명은 S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

녹용 (Cervi Parvum Corun, Antler)은 자라기 시작한지 2개월 이내의 골질화되지 않은 사슴 (Cervus nippon Temminck, C. elaphus L., C. Canadensis Erxleben)의 뿔을 일컬으며, 상기 녹용은 기원전 168년경 사용된 이래, 대표적인 강장제의 재료로 널리 이용되어 왔다. 동의보감 등의 문헌에 따르면, 녹용은 강장작용, 보혈작용, 강정작용, 진통작용, 조혈작용, 생장발육 촉진작용, 심부전증 치료작용 및 기능 항진작용 등이 있는 것으로 기록되어 있으며, 이 밖에도 피로회복, 신체 활력 증강 및 신장의 이뇨기능 강화 효과 등 많은 효능을 갖고 있는 것으로 알려져 있다.

이러한 녹용은 Ca, P, Na, K, Mg, Fe, Zn, Cu, Cr, Sr, Ni, Co, Mn, W, 및 Sn 등과 같은 미네랄 성분; arginine, histidine, glutamic acid, proline, aspartic acid, serine, threonine, glycine, alanine, isoleucine, leucine, phenylalanine, methionine, lysine, tyrosine, valine, cysteine, hydroxyproline, 및 tryptophan 등과 같은 아미노산 성분; VEGFR-2, FGF-2, VEGF, FGFR1, FGFR2, FGFR3, 및 VEGFR-2 등과 같은 단백질 성분; sulfated-GAGs, GAGs, uronic acid, chondroitin sulfate A, B, C, chondroitin sulfate, phospholipids, sialic acid, keratin sulfate, sphingomyelin, 및 phophatidylcholine 등과 같은 탄수화물 성분; prostaglandin, conjugated linoleic acid, ω-3 fatty acid, hydroxyprogesterone, 및 progesterone 등과 같은 지질 성분들로 이루어져 있으며, 이 중에서도 sulfated-GAGs (Sulfated-glycosaminoglycan) 및 sialic acid는 녹용 추출물의 대표적인 기능성 물질 및 지표 물질로 알려져 있다.

한편, 현재 녹용의 복용 방법으로는 녹용을 여러 종류의 생약제들과 혼합, 분쇄한 후 용매로 가열 추출하여 그 여액을 복용하는 방법과 생약제들을 분쇄하여 가루로 만든 뒤 환으로 복용하는 방법이 주로 이용되고 있다. 다만, 전자의 방법은 상기 녹용의 기능성 물질, 즉 유용성분이 체내 용이하게 흡수될 수 있다는 이점이 있으나, 제조과정에서 녹용의 유용성분이 충분히 추출되지 않을 뿐만 아니라, 수렴작용이 있는 한약재와 함께 사용할 경우 녹용의 효과가 감소될 우려가 있으며, 후자의 방법은 녹용 자체를 섭취한다는 이점이 있으나, 체내에서 유용성분의 완전한 흡수가 어렵다는 문제점이 있었다.

이러한 배경 하에서, 녹용 추출물 내 유용성분, 특히, S-GAG 및 시알산의 함량을 높일 수 있는 신규한 제조방법의 개발이 요구되고 있으나 (한국등록특허 제1000886호), 아직은 미비한 실정이다.

본 발명은 상기와 같은 종래 제조방법의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 녹용 추출물에 효소를 단독 또는 균주와 함께 처리함으로써, 녹용 추출물 내 유용성분의 함량을 현저하게 증가시킬 수 있음을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.

이에, 본 발명의 목적은, 녹용 추출물에 효소, 또는 효소 및 균주 배양액을 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법을 제공하는데 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 방법에 따라 제조된, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물을 제공하는데 있다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은 녹용 추출물에 효소를 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하며, 상기 효소는 알카레이즈, 뉴트라아제, 알칼라인 프로테아제, 및 프로테아제 M 아마노로 이루어진 군으로부터 선택되는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예로서, 상기 녹용 추출물은 열수 추출물일 수 있다.

본 발명의 다른 구현 예로서, 상기 효소는 뉴트라아제 또는 알칼라인 프로테아제일 수 있으며, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여, 1 내지 10% (v/v)의 농도로 첨가될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현 예로서, 상기 발효시키는 단계는, 효소가 첨가된 녹용 추출물을 30 내지 40℃에서, 10 내지 40시간 동안 배양시키는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현 예로서, 상기 발효시키는 단계는, 균주 배양액을 추가로 첨가하여 발효시키는 단계를 포함할 수 있으며, 상기 균주는 바실러스 퍼밀러스 KCTC 13101 (Bacillus pumilus KCTC 13101), 바실러스 퍼밀러스 KCTC 3348 (Bacillus pumilus KCTC 3348), 바실러스 서브틸러스 KCTC 1666 (Bacillus subtillis KCTC 1666), 바실러스 서브틸러스 KCTC 2010 (Bacillus subtillis KCTC 2010), 및 스트렙토코커스 써모필러스 KCTC 5090 (Streptococcus thermophilus KCTC 5090)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현 예로서, 상기 균주 배양액은 6 내지 7 log CFU/ml 농도로 균주를 함유할 수 있으며, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여, 0.1 내지 2% (v/v)의 농도로 첨가될 수 있다.

또한 본 발명은 상기 방법에 따라 제조된, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서, 상기 조성물은 제조 목적에 따라 건강기능식품, 화장품 또는 약학적 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 제조방법에 따르면, 녹용 추출물에 효소를 단독 또는 균주와 함께 처리함으로써, 녹용 추출물의 유용성분인 S-GAG 및 시알산의 함량을 현저하게 증가시킬 수 있었는바, 생리적 효능이 증진된 본 발명의 녹용 추출물은 건강기능식품 및/또는 약학적 조성물 등에 폭넓게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다.

본 발명은 녹용 추출물에 효소, 또는 효소 및 균주 배양액을 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 녹용 추출물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어, "녹용"은 생후 2개월 이내의 골질화되지 않은 사슴의 뿔을 일컬으며, 강장작용, 보혈작용, 강정작용, 진통작용, 조혈작용, 생장발육 촉진작용, 심부전증 치료작용 및 기능 항진작용 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 한편, 녹용의 복용법으로는 생약제들과 혼합 및 분쇄한 후, 용매로 가열 추출하여 그 여액을 복용하는 방법이 널리 이용되고 있으나, 이러한 기존의 방법만으로는 충분한 양의 녹용 유용성분이 함유되지 않을 수 있어 그 효능을 감소시키는 요인이 되어 왔다. 한편, 이러한 녹용 유용성분 중 S-GAG (Sulfated-glycosaminoglycan) 및 시알산 (sialic acid)은 녹용 추출물의 기능성 물질 또는 지표 물질로 알려져 있다. 구체적으로, S-GAG은 관절의 연골과 디스크의 수핵 등의 주 성분으로서, 관절염 치료 효과, 강력한 항염 효과, 및 수분 유지 효과 등이 보고된 바 있으며, 시알산은 바이러스에 대한 리셉터 작용, 독소의 중화, 세포와 분자의 면역학적 인식 부위, 세포접착 또는 암의 전이 등 중요한 생리 기능에 관여하고 있는 산성 당으로 보고된 바 있다. 이에, 본 발명은 녹용 추출물 내 상기 유용성분의 함량을 증진시켜 이에 따른 생리적 효능을 향상시키고자 하였으며, 이를 위한 수단으로서, 녹용 추출물에 효소 단독, 또는 효소와 균주를 첨가 (처리)하여 발효시키는 단계를 제공한다.

본 발명에서, 상기 녹용 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 본 발명에 따른 녹용 추출물의 제조에는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 또는 이들의 혼합 용매가 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 용매로 물을 사용하여 녹용 추출물을 제조할 수 있으나, 이 밖에도 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 아세톤으로 구성된 군 중에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 용매를 혼합한 용매를 사용할 수도 있다. 또한, 녹용으로부터 추출물을 추출하는 방법은 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 초음파 추출 등의 다양한 방법을 통하여 추출할 수 있다. 이후, 상기 제조된 추출물은 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 추출물 내 함유된 용매를 제거할 수 있으며, 필요한 경우, 여과, 농축, 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압 여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결 건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 효소는 바람직하게 프로테아제일 수 있고, 보다 바람직하게, 알카레이즈, 뉴트라아제, 알칼라인 프로테아제, 및 프로테아제 M 아마노로 이루어진 군으부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 가장 바람직하게, 뉴트라아제 또는 알칼라인 프로테아제일 수 있다. 또한 상기 균주는 바람직하게, 바실러스 퍼밀러스, 바실러스 서브틸러스, 및 스트렙토코커스 써모필러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있고, 보다 바람직하게 바실러스 퍼밀러스 KCTC 13101, 바실러스 퍼밀러스 KCTC 3348, 바실러스 서브틸러스 KCTC 1666, 바실러스 서브틸러스 KCTC 2010, 및 스트렙토코커스 써모필러스 KCTC 5090으로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이 뿐만 아니라, 상기 효소 및 군주 배양액을 동시에 첨가할 수 있으며, 한 구체예로서, 상기 효소는 뉴트라아제 또는 알칼라인 프로테아제이며, 상기 균주는 바실러스 퍼밀러스, 바실러스 서브틸러스, 및 스트렙토코커스 써모필러스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이 역시 이에 제한되는 것은 아니다.

한편, 녹용 추출물에 첨가되는 상기 효소는, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여 바람직하게 1 내지 10% (v/v), 보다 바람직하게 3 내지 7% (v/v), 가장 바람직하게는 4 내지 6% (v/v)일 수 있으며, 녹용 추출물에 첨가되는 상기 균주 배양액은 6 내지 7 log CFU/ml 농도로서, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여, 바람직하게 0.1 내지 2% (v/v), 보다 바람직하게 0.5 내지 2% (v/v), 가장 바람직하게 0.8 내지 1.2% (v/v)일 수 있으며, 상기 녹용 추출물의 생리적 기능 등에 영향을 미치지 않는 한, 상기 범위를 벗어나는 함량으로도 이루어질 수도 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "발효"는 미생물이나 이들의 효소로 유기물을 분해하여 인간에게 유용한 물질을 얻어내는 과정을 일컬으며, 상기 발효 과정에 의해 생성된 물질을 발효물이라고 한다. 보다 구체적으로, 상기 발효는, 전술한 효소 단독 또는 효소 및 균주를 복합하여 첨가된 녹용 추출물을 30 내지 40℃에서, 10 내지 40시간 동안 배양시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 본 발명의 목적상 상기 유용한 물질은 S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물을 의미한다.

이에, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조된, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물을 제공한다. 바람직하게, 상기 녹용 추출물에 함유된 S-GAG는 약 55 내지 95㎍/ml, 시알산은 약 8.6 내지 11.3㎍/ml일 수 있으며, 상기 녹용 추출물 내 유용성분의 함량 증가는 녹용 추출물의 생리적 효능 증가로 이어질 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 상기 S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물은 건강기능식품 조성물, 약학 조성물 또는 화장품 조성물의 유효성분으로 활용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[ 제조예 ]

제조예 1. 녹용 추출물 및 발효된 녹용 추출물의 제조

녹용을 90℃에서 12시간 동안 15배수의 물로 열수 추출하여 녹용 추출물을 제조하였다 (비교예 1). 한편, 상기 녹용 추출물을 발효시키기 위한 효소로 Alcalase (Alcalase® 2.4 L; Novozymes Inc. Franklinton, NC, USA), Neutrase (Neutrase® 0.8 L; Novozymes Inc.), Alkaline protease (FoodPro® Alkaline Protease; Danisco, Ardsley, NY, USA), Protease M amano (Protease M amano; Amano Enzyme Inc., Troy, VA, USA)를 사용하였으며, 균주는 Bacillus pumilus KCTC 13101, KCTC 3348, Bacillus subtilus KCTC 1666, KCTC 2010, Streptococcus thermophilus KCTC 5090을 이용하였다. 또한, 균주 배양액을 제조하고자, 영양 배지인 Tryptic Soy Broth (Difco, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA)에 상기 균주를 접종한 후, 37에서 24시간 배양하였으며, 상기 균주 배양액에 함유된 균주의 초기 농도는 6 내지 7 log CFU/mL였다.

이후, 하기 표 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 균주 배양액, 효소, 또는 이들의 조합을 녹용 추출물에 첨가한 뒤, 37℃에서 24시간 동안 배양하여 녹용 추출물을 발효시켰다 (실시예 1 내지 15).

[ 실험예 ]

실험예 1. 미생물 수 분석에 따른 발효 여부 확인

본 실험예에서는, 상기 녹용 추출물에 균주 배양액을 접종한 군 (실시예 1 내지 5)을 대상으로 발효 전과 후의 미생물 수를 측정하여 발효 정도를 비교, 분석하였다. 구체적으로, 0.85% 멸균 생리 식염수를 이용하여 십진 희석시키고, 증균 영양 배지인 Tryptic Soy Agar (Difco)에 도말한 후, 37에서 24시간 배양하였다. 이후, 배지 상에 형성된 콜로니를 계수하여 각 조건 별 미생물 (균주) 농도를 log 값으로 산출하였다.

그 결과, 하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 발효 전과 발효 후 녹용 추출물 내 접종된 미생물 수를 분석한 결과, 분석한 모든 실시예에서, 발효 전보다 발효 후에 약 3 내지 4 log CFU/ml 가량 미생물 수가 증가됨을 확인할 수 있었는바, 균주 배양액 접종에 의한 녹용 추출물의 발효가 원활하게 이루어짐을 알 수 있었다.

실험예 2. S-GAG 함량 분석

본 실험예에서는, 상기 균주 배양액 (실시예 1 내지 5), 효소 (실시예 5 내지 9) 또는 이들의 조합 (실시예 10 내지 15)을 이용하여 녹용 추출물의 발효시킨 경우, 녹용의 대표적 유용성분인 S-GAG의 함량 변화를 비교하였다. 구체적으로, S-GAG 분석 키트 (Glycosaminoglycans assay kit #6022; Chondrex Inc. Redmond, WA, USA)를 이용하였으며, 1,9-dimethylmethylene blue (DMB)와 혼합하고, 525nm에서 흡광도를 측정하여 비교예 및 실시예 추출물 내 S-GAG의 함량을 측정하였다.

그 결과, 하기 표 4에 나타낸 바와 같이, 비 발효된 녹용 추출물 (비교예)에 비해, 균주 배양액만을 첨가하여 발효시킨 녹용 추출물 (실시예 1 내지 5) 내 S-GAG의 함량은 전혀 변화가 없거나 3 내지 6㎍/ml 가량 증가함에 그쳤던 반면, 효소를 첨가하여 발효시킨 녹용 추출물의 경우 (실시예 6 내지 9), 11 내지 36㎍/ml 가량 증가하였으며, 이 중에서도 Neutrase를 첨가한 실시예 7과 Alkaline protease를 첨가한 실시예 8의 S-GAG 함량 증가가 현저하였다. 즉, 균주 배양액에 비해 효소를 첨가한 경우, 녹용 추출물 내 S-GAG 함량을 보다 효과적으로 증가시킬 수 있음을 알 수 있었다.

한편, Neutrase (실시예 10 내지 12) 또는 Alkaline protease (실시예 13 내지 15)와 균주 배양액을 함께 첨가한 결과, 하기 표 5에 나타낸 바와 같이, S-GAG 함량은 각각 34 내지 37㎍/ml 또는 20 내지 22㎍/ml 가량 증가함을 확인할 수 있었는바, 균주 배양액의 첨가에도 불구하고 효소에 의한 S-GAG 함량 증가 효과가 유지됨을 알 수 있었다.

실험예 3. 시알산 ( Sialic acid) 함량 분석

본 실험예에서는, 상기 균주 배양액 (실시예 1 내지 5), 효소 (실시예 5 내지 9) 또는 이들의 조합 (실시예 10 내지 15)을 이용하여 녹용 추출물의 발효시킨 경우, 녹용의 대표적 유용성분인 시알산의 함량 변화를 비교하였다. 우선, 15mM 염산 용액을 이용해 80℃에서 3시간 동안 가수분해시켜 비교예 및 실시예 추출물로부터 시알산을 유리시켰다. 이후, 시알산 분석 키트 (Sialic acid fluorescence labeling kit #4400; Takara Bio Inc. Otsu, Japan)를 이용하여 혼합 용액 (DMB 용액 : coupling 용액 : 증류수 = 1 : 5 : 4)과 50℃에서 2시간 30분 동안 반응시킨 후, 형광 HPLC (High Performance Liquid Chromatography)로 비교예 및 실시예 추출물 내 시알산의 함량을 측정하였다.

그 결과, 하기 표 6에 나타낸 바와 같이, 비 발효된 녹용 추출물 (비교예)에 비해, 균주 배양액만을 첨가하여 발효시킨 녹용 추출물 (실시예 1 내지 5) 내 시알산의 함량은 1.4 내지 1.9㎍/ml 가량 증가하였던 반면, 효소를 첨가하여 발효시킨 녹용 추출물의 경우 (실시예 6 내지 10), 1.3 내지 3.2㎍/ml 가량 증가하였으며, 상기 실험예 2의 결과와 마찬가지로, Neutrase를 첨가한 실시예 7과 Alkaline protease를 첨가한 실시예 8의 시알산 함량 증가가 현저하였다. 즉, 균주 배양액에 비해 효소를 첨가한 경우, 녹용 추출물 내 시알산 함량을 보다 효과적으로 증가시킬 수 있음을 알 수 있었다.

한편, Neutrase (실시예 10 내지 12) 또는 Alkaline protease (실시예 13 내지 15)와 균주 배양액을 함께 첨가한 결과, 하기 표 7에 나타낸 바와 같이, 시알산의 함량은 두 경우 모두 0.5 내지 1.6 ㎍/ml 가량 증가하였는바, 균주 배양액 첨가에 의한 시알산 함량 증가 효과가 어느 정도 유지됨을 알 수 있었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (9)

1. 녹용 추출물에 효소를 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하며,
   상기 효소는 알카레이즈 (Alcalase), 뉴트라아제 (Neutrase), 알칼라인 프로테아제 (Alkaline protease), 및 프로테아제 M 아마노 (Protease M amano)로 이루어진 군으로부터 선택되는, S-GAG (Sulfated-glycosaminoglycan) 및 시알산 (Sialic acid) 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 녹용 추출물은, 열수 추출물인 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 효소는, 뉴트라아제 또는 알칼라인 프로테아제인 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 효소는, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여, 1 내지 10% (v/v)의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 발효시키는 단계는, 효소가 첨가된 녹용 추출물을 30 내지 40℃에서, 10 내지 40시간 동안 배양시키는 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
6. 제1항에 있어서, 상기 발효시키는 단계는, 균주 배양액을 추가로 첨가하여 발효시키는 단계를 포함하며,
   상기 균주는 바실러스 퍼밀러스 KCTC 13101 (Bacillus pumilus KCTC 13101), 바실러스 퍼밀러스 KCTC 3348 (Bacillus pumilus KCTC 3348), 바실러스 서브틸러스 KCTC 1666 (Bacillus subtillis KCTC 1666), 바실러스 서브틸러스 KCTC 2010 (Bacillus subtillis KCTC 2010), 및 스트렙토코커스 써모필러스 KCTC 5090 (Streptococcus thermophilus KCTC 5090)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
7. 제6항에 있어서, 상기 균주 배양액은, 6 내지 7 log CFU/ml 농도로 균주를 함유하는 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
8. 제6항에 있어서, 상기 균주 배양액은, 녹용 추출물의 전체 부피에 대하여, 0.1 내지 2% (v/v)의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물의 제조방법.
   
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된, S-GAG 및 시알산 함량이 증진된 녹용 추출물.