JPH10313888A - Ｌ−アスパラギン酸の製造法 - Google Patents
Ｌ−アスパラギン酸の製造法Info
- Publication number
- JPH10313888A JPH10313888A JP14706097A JP14706097A JPH10313888A JP H10313888 A JPH10313888 A JP H10313888A JP 14706097 A JP14706097 A JP 14706097A JP 14706097 A JP14706097 A JP 14706097A JP H10313888 A JPH10313888 A JP H10313888A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- atcc
- aspartic acid
- rhodococcus
- microorganism
- ammonia
- Prior art date
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- Pending
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/20—Aspartic acid; Asparagine
Landscapes
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
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- Health & Medical Sciences (AREA)
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- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【解決手段】アスパルターゼ活性を有する微生物の作用
によりフマル酸とアンモニアからＬ−アスパラギン酸を
製造する方法において、ロドコッカス（Rhodococcus)属
に属する微生物を使用する。 【効果】ロドコッカス属細菌由来のアスパルターゼを用
いることにより、フマル酸とアンモニアからＬ−アスパ
ラギン酸の製造が可能である。
によりフマル酸とアンモニアからＬ−アスパラギン酸を
製造する方法において、ロドコッカス（Rhodococcus)属
に属する微生物を使用する。 【効果】ロドコッカス属細菌由来のアスパルターゼを用
いることにより、フマル酸とアンモニアからＬ−アスパ
ラギン酸の製造が可能である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アスパルターゼ活
性を有するロドコッカス属の微生物を使用し、フマル酸
とアンモニアから効率的にＬ−アスパラギン酸を製造す
る方法に関する。Ｌ−アスパラギン酸はこれまで医薬や
食品添加物として用いられてきたが、近年、界面活性剤
や生分解性キレート剤の原料としても注目されている。
性を有するロドコッカス属の微生物を使用し、フマル酸
とアンモニアから効率的にＬ−アスパラギン酸を製造す
る方法に関する。Ｌ−アスパラギン酸はこれまで医薬や
食品添加物として用いられてきたが、近年、界面活性剤
や生分解性キレート剤の原料としても注目されている。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−アスパラギン酸は、主として酵素法
によりアスパルターゼを用いてフマル酸とアンモニアか
ら製造されている。例えば、大腸菌を用いる方法（特開
昭 60-133883号公報）、セラチア属細菌を用いる方法
（特開昭 59-113887号公報）、ブレビバクテリウム属細
菌を用いる方法（特開昭 56-26196 号公報）等が知られ
ている。
によりアスパルターゼを用いてフマル酸とアンモニアか
ら製造されている。例えば、大腸菌を用いる方法（特開
昭 60-133883号公報）、セラチア属細菌を用いる方法
（特開昭 59-113887号公報）、ブレビバクテリウム属細
菌を用いる方法（特開昭 56-26196 号公報）等が知られ
ている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、さらに、ア
スパルターゼ活性を有する微生物について探索し、該微
生物を用いて効率的にＬ−アスパラギン酸を製造するこ
とを課題とする。
スパルターゼ活性を有する微生物について探索し、該微
生物を用いて効率的にＬ−アスパラギン酸を製造するこ
とを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ロドコッカス属に
アスパルターゼ活性を有し、効率的にＬ−アスパラギン
酸を製造し得る微生物を見出し、本発明を完成するに至
った。これまで、ロドコッカス属細菌については、アス
パルターゼ活性の存在は知られておらず、報告例は無
い。
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ロドコッカス属に
アスパルターゼ活性を有し、効率的にＬ−アスパラギン
酸を製造し得る微生物を見出し、本発明を完成するに至
った。これまで、ロドコッカス属細菌については、アス
パルターゼ活性の存在は知られておらず、報告例は無
い。
【０００５】すなわち、本発明は、アスパルターゼ活性
を有する微生物の作用によりフマル酸とアンモニアから
Ｌ−アスパラギン酸を製造する方法において、使用する
微生物がロドコッカス(Rhodococcus) 属に属する微生物
であることを特徴とするＬ−アスパラギン酸の製造法、
である。
を有する微生物の作用によりフマル酸とアンモニアから
Ｌ−アスパラギン酸を製造する方法において、使用する
微生物がロドコッカス(Rhodococcus) 属に属する微生物
であることを特徴とするＬ−アスパラギン酸の製造法、
である。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明のロドコッカス属に属する
微生物としては、例えば、ロドコッカス(Rhodococcus)
sp. ＥＡ４〔微工研菌寄第12136 号(FERM P-12136)〕、
ロドコッカスロドクロウス(Rhodococcus rhodochrous)
ATCC 17041、同 ATCC 17895 、同 ATCC 19140 および同
ATCC 33258 等が挙げられる。これらの微生物のうち、
ＥＡ４菌株は上記寄託番号にて工業技術院生命工学工業
技術研究所に寄託されており、その菌学的性質は特開平
4-304892号公報に記載されている。また、ATCC 17041、
ATCC 17895、ATCC 19140および ATCC 33258 菌株はアメ
リカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）から容易
に入手することができる。
微生物としては、例えば、ロドコッカス(Rhodococcus)
sp. ＥＡ４〔微工研菌寄第12136 号(FERM P-12136)〕、
ロドコッカスロドクロウス(Rhodococcus rhodochrous)
ATCC 17041、同 ATCC 17895 、同 ATCC 19140 および同
ATCC 33258 等が挙げられる。これらの微生物のうち、
ＥＡ４菌株は上記寄託番号にて工業技術院生命工学工業
技術研究所に寄託されており、その菌学的性質は特開平
4-304892号公報に記載されている。また、ATCC 17041、
ATCC 17895、ATCC 19140および ATCC 33258 菌株はアメ
リカンタイプカルチャーコレクション（ATCC）から容易
に入手することができる。
【０００７】本発明に使用される微生物の培養は、資化
し得る炭素源（グリセロール、グルコース、サッカロー
ス、ラクトース、フルクトースなど）、窒素源（肉エキ
ス、酵母エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカ
ー、ポリペプトンなど）および各微生物の生育に必須の
無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、塩化カル
シウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫酸亜鉛など）を含有
した通常の培地を用いて行なわれる。また、上記培地に
おいてＬ−アスパラギン酸を炭素・窒素源として、フマ
ル酸を炭素源として用いることができ、その際の添加量
は０．１〜５％であるのが適当である。培養液のｐＨは
４〜１０の範囲で、培養は５〜５０℃の温度範囲で、１
〜７日程度好気的に行ない、活性が最大となるまで継続
すれば良い。
し得る炭素源（グリセロール、グルコース、サッカロー
ス、ラクトース、フルクトースなど）、窒素源（肉エキ
ス、酵母エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカ
ー、ポリペプトンなど）および各微生物の生育に必須の
無機塩（塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、塩化カル
シウム、硫酸マンガン、塩化鉄、硫酸亜鉛など）を含有
した通常の培地を用いて行なわれる。また、上記培地に
おいてＬ−アスパラギン酸を炭素・窒素源として、フマ
ル酸を炭素源として用いることができ、その際の添加量
は０．１〜５％であるのが適当である。培養液のｐＨは
４〜１０の範囲で、培養は５〜５０℃の温度範囲で、１
〜７日程度好気的に行ない、活性が最大となるまで継続
すれば良い。
【０００８】反応は、上記に準じて培養した微生物の培
養液から分離した菌体または菌体処理物（乾燥菌体、菌
体の破壊物、分離された粗・精製酵素、固定化菌体・酵
素など）を水または緩衝液などの水性媒体中に懸濁し、
基質と接触させることによって行なわれる。基質となる
フマル酸とアンモニアは種々の形で反応系に供給するこ
とができ、たとえば、フマル酸アンモニウム塩、また
は、フマル酸もしくはその塩と無機アンモニウム塩など
が用いられる。フマル酸塩としてはフマル酸ナトリウ
ム、フマル酸カリウムが適し、無機アンモニウム塩とし
ては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウムまたはこれらの混合物を用いることができる。
フマル酸もしくはその塩と無機アンモニウム塩のモル比
は１：１．５〜１：２の間にあるのが好ましい。反応温
度は０〜６０℃、好ましくは２０〜５０℃で、０．１〜
１００時間反応させれば良い。反応中、ｐＨは６〜１
０、好ましくは８〜１０に調整する。また、酵素反応に
際しては、通常、カルシウム、マグネシウム等の２価金
属イオンを０．１〜１００ｍＭ、好ましくは１〜１０ｍ
Ｍ添加する。
養液から分離した菌体または菌体処理物（乾燥菌体、菌
体の破壊物、分離された粗・精製酵素、固定化菌体・酵
素など）を水または緩衝液などの水性媒体中に懸濁し、
基質と接触させることによって行なわれる。基質となる
フマル酸とアンモニアは種々の形で反応系に供給するこ
とができ、たとえば、フマル酸アンモニウム塩、また
は、フマル酸もしくはその塩と無機アンモニウム塩など
が用いられる。フマル酸塩としてはフマル酸ナトリウ
ム、フマル酸カリウムが適し、無機アンモニウム塩とし
ては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウムまたはこれらの混合物を用いることができる。
フマル酸もしくはその塩と無機アンモニウム塩のモル比
は１：１．５〜１：２の間にあるのが好ましい。反応温
度は０〜６０℃、好ましくは２０〜５０℃で、０．１〜
１００時間反応させれば良い。反応中、ｐＨは６〜１
０、好ましくは８〜１０に調整する。また、酵素反応に
際しては、通常、カルシウム、マグネシウム等の２価金
属イオンを０．１〜１００ｍＭ、好ましくは１〜１０ｍ
Ｍ添加する。
【０００９】
【実施例】以下、実施例により詳細に説明する。ただ
し、本発明はこれらの実施例により限定されるものでは
ない。
し、本発明はこれらの実施例により限定されるものでは
ない。
【００１０】実施例１ ＭＹＫ培地（０．５％ポリペプトン、０．３％バクトイ
ーストエキス、０．３％バクトモルトエキス、０．２％
Ｋ2 ＨＰＯ4 、０．２％ ＫＨ2 ＰＯ4 ）１０mlに、
それぞれロドコッカス sp. ＥＡ４、ロドコッカス ロ
ドクロウス ATCC 17041 、同 ATCC 17895 、同 ATCC 19
140 および同 ATCC 3325菌株を植菌し、３０℃で３日間
培養した。培養液０．５mlをＡＳＰ培地（１％ Ｌ−ア
スパラギン酸、１％ ポリペプトン、１％ バクトイー
ストエキス、０．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 、ｐＨ７．０）５
０ｍｌに接種し、３０℃で９６時時間培養した。遠心分
離により集菌し、１００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ８．
０）で菌体を洗浄し、最後に少量の緩衝液に懸濁した。
この菌体懸濁液を氷冷下、超音波破壊し、遠心分離によ
って粗酵素液を得、アスパルターゼ活性の測定に供し
た。アスパルターゼ活性の測定は、１Ｍ フマル酸アン
モニウム（ｐＨ８．８、１ｍＭ 塩化マグネシウム含
有）と粗酵素液を接触させ、３０℃で２０時間に生成す
るＬ−アスパラギン酸を、ＯＤＳカラムを使用したＨＰ
ＬＣで定量することにより行った。結果を表１に示す。
ーストエキス、０．３％バクトモルトエキス、０．２％
Ｋ2 ＨＰＯ4 、０．２％ ＫＨ2 ＰＯ4 ）１０mlに、
それぞれロドコッカス sp. ＥＡ４、ロドコッカス ロ
ドクロウス ATCC 17041 、同 ATCC 17895 、同 ATCC 19
140 および同 ATCC 3325菌株を植菌し、３０℃で３日間
培養した。培養液０．５mlをＡＳＰ培地（１％ Ｌ−ア
スパラギン酸、１％ ポリペプトン、１％ バクトイー
ストエキス、０．５％ Ｋ2 ＨＰＯ4 、ｐＨ７．０）５
０ｍｌに接種し、３０℃で９６時時間培養した。遠心分
離により集菌し、１００ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ８．
０）で菌体を洗浄し、最後に少量の緩衝液に懸濁した。
この菌体懸濁液を氷冷下、超音波破壊し、遠心分離によ
って粗酵素液を得、アスパルターゼ活性の測定に供し
た。アスパルターゼ活性の測定は、１Ｍ フマル酸アン
モニウム（ｐＨ８．８、１ｍＭ 塩化マグネシウム含
有）と粗酵素液を接触させ、３０℃で２０時間に生成す
るＬ−アスパラギン酸を、ＯＤＳカラムを使用したＨＰ
ＬＣで定量することにより行った。結果を表１に示す。
【００１１】
【００１２】
【効果】ロドコッカス属細菌由来のアスパルターゼを用
いることにより、フマル酸とアンモニアからＬ−アスパ
ラギン酸を製造できる。
いることにより、フマル酸とアンモニアからＬ−アスパ
ラギン酸を製造できる。
Claims (2)
- 【請求項１】 アスパルターゼ活性を有する微生物の作
用によりフマル酸とアンモニアからＬ−アスパラギン酸
を製造する方法において、使用する微生物がロドコッカ
ス(Rhodococcus) 属に属する微生物であることを特徴と
するＬ−アスパラギン酸の製造法。 - 【請求項２】 ロドコッカス属に属する微生物がロドコ
ッカス(Rhodococcus)sp. ＥＡ４、ロドコッカス ロド
クロウス(Rhodococcus rhodochrous) ATCC 17041、同 A
TCC 17895 、同 ATCC 19140 または同 ATCC 33258 であ
る請求項１に記載のＬ−アスパラギン酸の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14706097A JPH10313888A (ja) | 1997-05-22 | 1997-05-22 | Ｌ−アスパラギン酸の製造法 |
| CN98114909A CN1089807C (zh) | 1997-05-22 | 1998-05-22 | 生产l－天冬氨酸的方法 |
| FR9806455A FR2763599B1 (fr) | 1997-05-22 | 1998-05-22 | Procede de production d'acide l-aspartique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14706097A JPH10313888A (ja) | 1997-05-22 | 1997-05-22 | Ｌ−アスパラギン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10313888A true JPH10313888A (ja) | 1998-12-02 |
Family
ID=15421592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14706097A Pending JPH10313888A (ja) | 1997-05-22 | 1997-05-22 | Ｌ−アスパラギン酸の製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10313888A (ja) |
| CN (1) | CN1089807C (ja) |
| FR (1) | FR2763599B1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10337185A (ja) * | 1997-06-06 | 1998-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | アスパルターゼ活性を有する新規なタンパク質および該タンパク質をコードする遺伝子ｄｎａ |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3391059A (en) * | 1964-02-19 | 1968-07-02 | Sanraku Ocean Kabushiki Kaisha | Process for producing l-aspartic acid |
| JPS5626196A (en) * | 1979-08-10 | 1981-03-13 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | Preparation of l-aspartic acid |
| FR2719045B1 (fr) * | 1994-04-20 | 1996-05-31 | Rhone Poulenc Chimie | Procédé de préparation d'acide L-aspartique à partir d'aspartate d'ammonium. |
| JPH10337185A (ja) * | 1997-06-06 | 1998-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | アスパルターゼ活性を有する新規なタンパク質および該タンパク質をコードする遺伝子ｄｎａ |
-
1997
- 1997-05-22 JP JP14706097A patent/JPH10313888A/ja active Pending
-
1998
- 1998-05-22 CN CN98114909A patent/CN1089807C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-22 FR FR9806455A patent/FR2763599B1/fr not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1089807C (zh) | 2002-08-28 |
| FR2763599B1 (fr) | 2004-11-26 |
| CN1200405A (zh) | 1998-12-02 |
| FR2763599A1 (fr) | 1998-11-27 |
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