JPH1017600A - 血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼおよびその遺伝子 - Google Patents

血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼおよびその遺伝子

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JPH1017600A
JPH1017600A JP8188369A JP18836996A JPH1017600A JP H1017600 A JPH1017600 A JP H1017600A JP 8188369 A JP8188369 A JP 8188369A JP 18836996 A JP18836996 A JP 18836996A JP H1017600 A JPH1017600 A JP H1017600A
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Eiki Adachi
栄樹 安達
Masafumi Tsujimoto
雅文 辻本
Hiroyoshi Arai
洋由 新井
Keizo Inoue
圭三 井上
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Suntory Ltd
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)

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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 従来のＰＡＦアセチルヒドロラーゼに比べ高
純度で、しかも作用の強いヒトＰＡＦアセチルヒドロラ
ーゼの提供。 【解決手段】 特定されたアミノ酸配列またはこれと相
同性を有するアミノ酸配列で表されるヒト血小板活性化
因子アセチルヒドロラーゼ活性を有するタンパク質及び
これをコードするＤＮＡ、発現ベクター、組換え真核宿
主細胞ならびにそのタンパク質に対する抗体。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規な血小板活性化因子
アセチルヒドロラーゼおよびこれをコ−ドする遺伝子に
関する。
【０００２】
【従来の技術】血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ
は、血小板活性化因子（Platelet-activating factor；
以下、「ＰＡＦ」と略す）に作用し、その２位のアセチ
ル基を除去してＰＡＦの活性を失わせる酵素である。
そして、ＰＡＦは、微小血管からの組織液の漏出、血管
拡張、平滑筋収縮、内皮癒着および好中球、マクロファ
ージ、好酸球の活性化等の原因となる炎症のメディエー
ターであるから、ＰＡＦアセチルヒドロラーゼは、ＰＡ
Ｆに起因する種々の疾病の予防、治療剤として利用可能
なものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来、ＰＡＦアセチル
ヒドロラーゼについては、いくつか報告されているが、
医薬として利用するためには、従来のＰＡＦアセチルヒ
ドロラーゼに比べ純度が高く、しかも作用の強いものの
提供が望まれている。 また、安全性の面からは、動物
でなく、ヒトからのＰＡＦアセチルヒドロラーゼが望ま
れている。 本発明はこの課題を解決するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＰＡＦア
セチルヒドロラーゼが動物の脳、腎臓等の臓器に広く分
布していることに着目し、ウシ肝臓を原料として選択
し、各種の分離、精製手段を利用して、酵素活性を追跡
しつつ純度を高めていった結果、純品としてウシＰＡＦ
アセチルヒドロラーゼを得、そのアミノ酸配列を決定す
ることに成功し、更にこのＰＡＦアセチルヒドロラーゼ
のアミノ酸配列から、公知方法に従って当該酵素をコ−
ドする遺伝子を見いだした。
【０００５】また、このウシＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼのｃＤＮＡを用い、ヒト遺伝子ライブラリーから、ヒ
トＰＡＦアセチルヒドロラーゼのｃＤＮＡを見出すこと
に成功した。
【０００６】本発明は、これら知見に基づき完成された
ものであり、ＰＡＦを阻害する物質として重要な役割り
を果たすヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼと、この酵素
を遺伝子工学的に合成するために重要な当該酵素をコ−
ドする遺伝子を提供するものである。
【０００７】
【発明の実施の態様】本発明のヒトＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼは、次の如くして調製することができる。 す
なわち、まず、動物からＰＡＦアセチルヒドロラーゼを
採取し、これから動物ＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤ
ＮＡを求める。 次いで、この動物ＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼｃＤＮＡを利用し、ヒト遺伝子ライブラリーか
らヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを検出し、
これを適当なベクターに組込み、適切な宿主生物中で培
養することにより、ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼが
得られる。
【０００８】本発明の実施に当っては、まず、動物の
脳、肝臓、腎臓等の臓器からＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼ活性を指標に、公知の分離精製手段を繰り返し、精製
することにより動物ＰＡＦアセチルヒドロラーゼ得るこ
とが必要であるが、以下、ウシ肝臓を原料として、ＰＡ
Ｆアセチルヒドロラーゼを得る方法を例に取り説明す
る。
【０００９】原料として用いられるウシ肝臓としては、
好ましくは、屠殺直後のウシから取得したものが利用さ
れる。
【００１０】このウシ肝臓は、まず、適当な緩衝液（例
えば、２５０ｍＭのショ糖と１ｍＭのＥＤＴＡを含むｐ
Ｈ７.４の１０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液）で洗浄後、
同じ緩衝液でホモジナイズし、遠心分離して可溶性画分
を得る。
【００１１】次いで、この可溶性画分を、疎水クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロ
マトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等を組み
合わせて、Ｍｏｎｏ Ｑ ＦＰＬＣで単一ピークを与える
まで精製することにより、ＰＡＦアセチルヒドロラーゼ
を得ることができる。
【００１２】なお、ＰＡＦアセチルヒドロラーゼを含有
する画分を選別するための指標となるＰＡＦアセチルヒ
ドロラーゼ活性は、例えば、特開平７−３９３７３号に
記載されている方法を利用し測定することができる。
【００１３】このようにして得られたウシＰＡＦアセチ
ルヒドロラーゼについて、常法に従いアミノ酸配列を調
べた結果、次の式（III） Met Gly Val Asn Gln Ser Val Ser Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Ser Leu Gln Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Glu Ala Glu Glu Thr Ser Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Ala Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Lys Phe Asn Lys Arg Trp Gly Gly Leu Leu Phe Asn Leu Gly Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile Phe Ser His Gly Met Gly Ala Phe Arg Thr Val Tyr Ser Ala Phe Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu His Arg Asp Gly Ser Ala Ala Ala Thr Cys Phe Cys Lys Gln Thr Pro Glu Glu Asn Gln Pro Asp Asn Glu Ala Leu Lys Glu Glu Trp Ile Pro His Arg Gln Ile Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe Tyr Val Arg Asn Tyr Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Val Arg Val Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Ala Val Leu Asn Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Gly Ile Asp Val Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Met Gln Phe Arg Cys Ala Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu His Asp Phe Tyr Pro Thr Ala Arg Gly Pro Ile Phe Phe Ile Asn Ala Glu Lys Phe Gln Thr Val Glu Thr Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Asp Gln His His Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg Ser Leu Thr Asp Phe Val Phe Val Ala Gly Asn Trp Ile Ser Lys Phe Phe Ser Ser His Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly Gln Glu Thr Val Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asp Gln Trp Asn Asn Phe Ile Glu Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser Ser Leu （III） で示されるものであることがわかった。
【００１４】更に、式（III）のウシＰＡＦアセチルヒ
ドロラーゼのペプチド配列から、公知方法に従って当該
酵素をコ−ドする遺伝子を求めたところ、次の式（IV） GTCGACCCACGCGTCCGAGTTGACCGT CTGGGCTGTTTCTGAGGGTCAACGTGACTCGCCGTCAAGTTCAGCCACTGCCCAAGTCGT CGTTCAGTTCAGTTGGTTATGAG ATG GGG GTC AAC CAG TCT GTG AGC TTC CCA CCC GTC ACG GGA CCC CAC CTC GTA GGC TGT GGG GAT GTG ATG GAG GGT CAG AGC CTC CAG GGC AGC TTC TTT CGA CTG TTC TAC CCG TGC CAA GAG GCA GAG GAG ACC TCG GAG CAG CCC CTG TGG ATT CCC CGC TAT GAG TAC TGC GCT GGC CTG GCC GAA TAC CTA AAG TTT AAT AAG CGC TGG GGG GGG TTA CTG TTC AAC CTG GGT GTG GGA TCT TGT CGC CTG CCT GTT AGC TGG AAT GGC CCC TTT AAA ACA AAG GAC TCT GGA TAC CCC TTG ATC ATC TTC TCT CAT GGC ATG GGA GCC TTC AGG ACA GTG TAT TCA GCC TTC TGC ATG GAG CTG GCT TCT CGT GGC TTT GTG GTT GCT GTA CCA GAG CAC AGG GAT GGG TCA GCT GCG GCC ACC TGT TTC TGC AAG CAG ACC CCA GAG GAG AAC CAG CCT GAC AAT GAG GCC CTG AAG GAG GAA TGG ATC CCC CAC CGT CAA ATT GAG GAA GGG GAG AAG GAA TTC TAT GTT CGG AAC TAC CAG GTG CAT CAG AGG GTG AGC GAG TGT GTG AGG GTG TTG AAG ATC CTA CAA GAG GTC ACT GCT GGG CAG GCC GTT CTC AAC ATC TTG CCT GGC GGA TTG GAT CTG ATG ACC TTG AAG GGC GGC ATT GAC GTG AGC CGT GTG GCT GTA ATG GGA CAT TCA TTT GGA GGG GCC ACA GCT ATT CTG GCC TTG GCC AAG GAG ATG CAA TTT AGG TGT GCT GTG GCT TTG GAC GCT TGG ATG TTT CCT CTG GAG CAT GAC TTT TAC CCC ACG GCC CGA GGC CCT ATC TTC TTT ATC AAT GCT GAG AAG TTC CAG ACA GTG GAG ACT GTC AAC TTG ATG AAA AAG ATT TGT GAC CAG CAC CAC CAA TCC AGG ATC ATA ACT GTC CTT GGT TCT GTT CAT CGG AGT CTA ACC GAC TTT GTT TTT GTG GCT GGT AAC TGG ATT AGT AAA TTC TTC TCC AGT CAC ACC CGT GGA AGC TTG GAC CCC TAT GAA GGT CAG GAG ACC GTG GTG CGG GCC ATG TTG GCC TTC CTG CAG AAG CAT CTT GAC CTG AAA GAG GAC TAT GAC CAG TGG AAC AAC TTC ATT GAA GGC ATT GGC CCA TCA CTG ACC CCA GGG GCC CCA CAC CAT CTG TCC AGC CTG TAG GCACAACTGGTCATCTTGTGGAAG GTCCCTGAGCTGAGTTCCCGTGTGGGGCCTGCCCAGGGATACCCTTGGCCTCCTATCAGG AAGTGATTGCCATGACCCTTCTGTGTTGATTGAGAGGATATAATCACACTGCTGATTGGT AACGGGGTACTTGGATTCTCAGACTTGTCGATCTTAAACTCATGTTGGGACTTGGGTTCA CTTACTGATGGGCAAACGGGCATTCTGAGGACTGAGCCTTAATGGTATGGAGAACAAACA GTGGGATGGGGCTGGGGAAGATCTAAGCCCTAAGCTGGGCACTATGAGCCCTATAAACCC AACCAGCCAACACCCTCACCTTGGGCAAGTATGACTTCTGCAGGTCGACTCT （IV） であることを見い出した（以下、「ウシＰＡＦアセチル
ヒドロラーゼｃＤＮＡ」という）。
【００１５】上記して得られたウシＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼｃＤＮＡから、ヒトＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼを得るには、これを鋳型として用い、常法に従ってヒ
ト遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることにより
ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを得ることが
できる。
【００１６】具体的には、ウシＰＡＦアセチルヒドロラ
ーゼｃＤＮＡを、例えばＰＣＲ法によりフルオレッセイ
ン−１２−ｄＵＴＰを取り込ませて標識し、ＥＣＬ（En
hanced Chemiluminescence; Amersham社）で陽性なコロ
ニーを選択するコロニーハイブリダイゼーション法によ
り、ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを含むコ
ロニーを得ることができる。
【００１７】このようにして得られたヒトＰＡＦアセチ
ルヒドロラーゼｃＤＮＡは、次の式（II）で示されるも
のであった。 GCAGGTCTCGACCCACGCGTCCGCGGACGCGTGGG CGAGAAGTGCTTCCAAGCGTCCATTTTGAGCCTTGGAAACTACGACGACCAAAGGGCCAC GGGTTCCTGGGTCGTTTCTCATTTCCGTCGAGTTAAACGTCTGGGGCTGCTTCTGAGGAA TCAGCTTGGCTGGCCAGCAAGTTCAGCTCCGGCAAGTCATTTGATTCACCCGGTGATGAA ATG GGG GTC AAC CAG TCT GTG GGC TTT CCA CCT GTC ACA GGA CCC CAC CTC GTA GGC TGT GGG GAT GTG ATG GAG GGT CAG AAT CTC CAG GGG AGC TTC TTT CGA CTC TTC TAC CCC TGC CAA AAG GCA GAG GAG ACC ATG GAG CAG CCC CTG TGG ATT CCC CGC TAT GAG TAC TGC ACT GGC CTG GCC GAG TAC CTG CAG TTT AAT AAG CGC TGC GGG GGC TTG CTG TTC AAC CTG GCG GTG GGA TCT TGT CGC CTG CCT GTT AGC TGG AAT GGC CCC TTT AAG ACA AAG GAC TCT GGA TAC CCC TTG ATC ATC TTC TCC CAT GGC CTA GGA GCC TTC AGG ACT TTG TAT TCA GCC TTC TGC ATG GAG CTG GCC TCA CGT GGC TTT GTG GTT GCT GTG CCA GAG CAC AGG GAC CGG TCA GCG GCA ACC ACC TAT TTC TGC AAG CAG GCC CCA GAA GAG AAC CAG CCC ACC AAT GAA TCG CTG CAG GAG GAA TGG ATC CCT TTC CGT CGA GTT GAG GAA GGG GAG AAG GAA TTT CAT GTT CGG AAT CCC CAG GTG CAT CAG CGG GTA AGC GAG TGT TTA CGG GTG TTG AAG ATC CTG CAA GAG GTC ACT GCT GGG CAG ACT GTC TTC AAC ATC TTG CCT GGT GGC TTG GAT CTG ATG ACT TTG AAG GGC AAC ATT GAC ATG AGC CGT GTG GCT GTG ATG GGA CAT TCA TTT GGA GGG GCC ACA GCT ATT CTG GCT TTG GCC AAG GAG ACC CAA TTT CGG TGT GCG GTG GCT CTG GAT GCT TGG ATG TTT CCT CTG GAA CGT GAC TTT TAC CCC AAG GCC CGA GGA CCT GTG TTC TTT ATC AAT ACT GAG AAA TTC CAG ACA ATG GAG AGT GTC AAT TTG ATG AAG AAG ATA TGT GCC CAG CAT GAA CAG TCT AGG ATC ATA ACC GTT CTT GGT TCT GTT CAT CGG AGT CAA ACT GAC TTT GCT TTT GTG ACT GGC AAC TTG ATT GGT AAA TTC TTC TCC ACT GAA ACC CGT GGG AGC CTG GAC CCC TAT GAA GGG CAG GAG GTT ATG GTA CGG GCC ATG TTG GCC TTC CTG CAG AAG CAC CTC GAC CTG AAA GAA GAC TAT AAT CAA TGG AAC AAC CTT ATT GAA GGC ATT GGA CCG TCG CTC ACC CCA GGG GCC CCC CAC CAT CTG TCC AGC CTG TAG GCACAACTGGCCATTTGTAAAGTCACTTCAGCCAAGTTTTCATTTGGG AGCTACCCAAGGGCACCCATGAGCTCCTATCAAGAAGTGATCAACGTGACCCCTTTTCAC AGATTGAAAGGTGTAATCACACTGCTGCTTGGATAACTGGGTACTTTGATCTTAGATTTG ATCTTAAAATCACTTTGGGACTGGGATCCCTTGCTGATTGACAAACAGACTTTCTGGGAC CTTGATGGAGTGGGGAACAAGCAGTAGAGTGGGACTGGGGGAGACCCAGGCCCCGGGCTG AGCACTGTGAGGCCTGGATGTGAAGACTCAGCCCAGCGAAGCTCATTCCCTTACCCCCGG CCAGTGCTGCTGCTTCAGTGGAAGAGATGAAGCCAAAGGACAGAATGAAAATCCCTACCT TCAGAGACTCTAGCCCAGCCCAACACCATCTCTTCCTACCTCTCAGCCTTCTCCCTCCCC AGGGCCACTTGTTGAAGTCTGAGCACTTTATGTAAATTTCTAGGTGTGAGCCGTGATCAC ATTTTCTATTTATTTCCAAGTCTTCTCATTGTATGGAACATAGTACTACTTATACTTACA GTAGTAAGTTATACTTGTGAGCCCACAGAGTGGCAGACAGCATGGCTCTCACAGCACAGG GAGAAAAACTGAGGTACACAGAGGTACCTCAGAAGCTCTGGATGTCTTTGGGGGTTTTGC TAAGTGTATCTTGATAGGAAACAACAAAAGCAGGTTGAGATGGGGAAGATGACAGAACAA CAGTGTTAAATGGCCATTTGCACAGGCCTTTGCCACAACAGAGAAGTAGTTTGGTCAGCT AAAACTCAGCTGCAGCCTGGACAGTAGAGCGAGACCCCATCTTAAAAATAAAGAAGGCTG GGCGTGGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAGGCAGGCAGATCACT TAAGGCCAGGAGTTCAAGACCACCTGGCCAACATGGTGAAACCCCGTCTCTACTAAAAAT ACAAAAAATTAGCCTGGCGTAATGGCAGGCGCCTATAATCCCAGCTACTCAGGAGGCTGA AGCAGAAGAATCACTTGAACCTAGGAGGCGGAGGTTGCAGTGAGTCAAGATCGCGCCACT GCACTCCAGCCTGGGTGACAGAGCAAGACTCTGTCTT （II）
【００１８】次に、常法に従い、上記のようにして得ら
れたヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを適当な
ベクタープラスミドに導入し、常用の遺伝子組換え法に
より哺乳動物細胞等の宿主を形質転換してヒトＰＡＦア
セチルヒドロラーゼを発現させる。 ヒトＰＡＦアセチ
ルヒドロラーゼの発現は、抗ヒトＰＡＦアセチルヒドロ
ラーゼ抗体を用いたウェスタン・ブロッティング法によ
り確認することができる。 プラスミドへの導入、形質
転換株の確立、当該株の培養等は、常用の遺伝子組換え
法に従って行うことができる。
【００１９】発現系は当業者に既知のものから適宜選択
して用いれば良いが、シグナル配列の付加・改良や宿主
の選択によって分泌効率および発現量の向上をはかるこ
ともできる。 宿主細胞としては、特に限定されない
が、細菌類、酵母及び他の真菌類、ヒトおよび他の動物
の培養細胞、植物の培養細胞等が挙げられる。 即ち、
本発明のポリヌクレオチドを遺伝子として適当な発現ベ
クター、例えばｐＵＣ−ＰＬ−ｃｌベクターに挿入し、
該発現ベクターを適当な宿主細胞、例えばＥ.ｃｏｌｉ
Ｗ３１１０等に導入し、該宿主細胞を培養し、そして得
られた培養物（細胞または培地）から目的とするヒトＰ
ＡＦアセチルヒドロラーゼをタンパク質として採取する
ことができる。
【００２０】宿主としては、原核生物または真核生物を
用いることができる。 原核生物としては細菌、特に大
腸菌（Escherichia coli）、バチルス（Bacillus）属細
菌、例えばバチルス・ズブチリス（B.subtilis）等を用
いることができる。 真核生物としては酵母、例えばサ
ッカロミセス（Saccharomyces ）属酵母、例えばサッカ
ロミセス・セレビシエ（S. Serevisiae ）等の真核微生
物、昆虫細胞、例えばヨガ細胞（Spodoptera Frugiperd
a ）、カイコ細胞（Bombyx mori）、動物細胞、例えば
ヒト細胞、サル細胞、マウス細胞、特にサル細胞、例え
ば、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７等を使用することができる。
【００２１】発現ベクターとしては、プラスミド、ファ
ージ、ファージミド、ウィルス［バキュロ（昆虫）、ワ
クチニア（動物細胞）］等が使用できる。 発現ベクタ
ー中のプロモーターは、宿主細菌に依存して選択され、
例えば細菌用プロモーターとしてｌａｃプロモーター、
ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター等が使用さ
れ、酵母用プロモーターとして例えばａｄｈ １プロモ
ーター、ｐｇｋプロモーター等が使用される。 また、
昆虫用プロモーターとしては、バキュロウィルスポリヘ
ドリンプロモーター等、動物細胞としては、Ｓｉｍｉａ
ｎ Ｖｉｒｕｓ４０（ＳＶ４０）の初期または、後期プ
ロモーター等が挙げられる。また、エンハンサーを使用
する場合、例えばＳＶ４０のエンハンサー等を遺伝子の
上流または下流に挿入する。
【００２２】発現ベクターによる宿主の形質転換は、当
業界において良く知られている常法により行うことがで
き、これらの方法は例えば、カレント・プロトコールズ
・イン・モレキュラー・バイオロジー（ Current Proto
cols in Molecular Biology,John Wiley & Sons 社）に
記載されている。
【００２３】形質転換体の培養も常法に従って行うこと
ができる。培養物からヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼ
の精製は蛋白質を単離・精製するための常法に従って、
例えば限外ろ過、各種カラムクロマトグラフィー、例え
ばセファロースを用いるクロマトグラフィー等により行
うことができる。
【００２４】かくして、ヒトＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼを有利に得ることができるが、本発明のヒトＰＡＦア
セチルヒドロラーゼは、次の式（I） Met Gly Val Asn Gln Ser Val Gly Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Asn Leu Gln Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Lys Ala Glu Glu Thr Met Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Thr Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Phe Asn Lys Arg Cys Gly Gly Leu Leu Phe Asn Leu Ala Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile Phe Ser His Gly Leu Gly Ala Phe Arg Thr Leu Tyr Ser Ala Phe Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu His Arg Asp Arg Ser Ala Ala Thr Thr Tyr Phe Cys Lys Gln Ala Pro Glu Glu Asn Gln Pro Thr Asn Glu Ser Leu Gln Glu Glu Trp Ile Pro Phe Arg Arg Val Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe His Val Arg Asn Pro Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Leu Arg Val Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Thr Val Phe Asn Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Asn Ile Asp Met Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gln Phe Arg Cys Ala Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu Arg Asp Phe Tyr Pro Lys Ala Arg Gly Pro Val Phe Phe Ile Asn Thr Glu Lys Phe Gln Thr Met Glu Ser Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Ala Gln His Glu Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg Ser Gln Thr Asp Phe Ala Phe Val Thr Gly Asn Leu Ile Gly Lys Phe Phe Ser Thr Glu Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly Gln Glu Val Met Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asn Gln Trp Asn Asn Leu Ile Glu Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser Ser Leu （I） で表されるもので、ＰＡＦや酸化リン脂質を選択的に分
解し、抗炎症作用等の生理活性作用を有するものであ
る。
【００２５】いうまでもないことではあるが、本発明の
ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼには、上記の式（I）
のペプチドに限られず、これと相同性のあるペプチド、
すなわち配列の一部にアミノ酸の置換、欠失、付加等が
あるが、機能は式（I）で表されるペプチドと同一であ
るものも含まれる。
【００２６】なお、前記式（III）で表されるウシＰＡ
Ｆアセチルヒドロラーゼについても、遺伝子操作の手法
によりヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼと同様に得られ
ると予想されるが、実際には、ウシＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼは、宿主細胞として真核宿主細胞を利用しなけ
れば得ることができない。従って、遺伝子操作の手法に
よりウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼを取得しようとす
る場合は、宿主細胞として真核生物由来のものを利用
し、これに適合するベクターを選択使用することが必要
である。
【００２７】本発明の、ヒトＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼやウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼ（以下、これらを
合わせて「ＰＡＦアセチルヒドロラーゼ」ということが
ある）に対する抗体も、常法にしたがって得ることがで
きる。すなわち、まずＰＡＦアセチルヒドロラーゼで家
兎等の動物に感作し、その血清を分離し、必要に応じて
この血清から免疫グロブリン画分を精製することにより
得られる。 この場合、該物質の感作性を高めるため
に、該物質を牛血清アルブミン（ＢＳＡ）またはメチル
ＢＳＡ等の担体蛋白質と結合させたものを免疫原として
用いても良い。
【００２８】動物に感作する場合、抗体産生を高めるた
めに、フロインドの完全アジュバント（ＦＣＡ）または
フロインドの不完全アジュバント（ＦＩＣＡ）と共に感
作することもできる。 動物に感作する回数は２回以上
が望ましく、試験採血により血清の抗体価をチェックし
ながら感作回数を決定すれば良い。 免疫動物は必要に
応じて屠殺して全血を用いても良いが、適宜追加感作す
ることにより一定の抗体価を保ち、必要に応じて少量を
採血して用事使用することもできる。 さらに、該物質
をマウスに感作し、感作マウスの脾臓細胞とミエローマ
細胞からハイブリドーマを作成し、常法に従ってモノク
ローナル抗体を得ることも可能である。
【００２９】
【発明の効果】本発明のヒトＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼは、選択的にＰＡＦを分解するので、これに起因して
生じる疾患、例えば、喘息、滲出性中耳炎、出血性大腸
炎、成人性呼吸促迫症候群等の疾患の予防・治療用の医
薬や生化学試薬として利用できるものである。
【００３０】
【実施例】以下、実施例および参考例により、本発明を
さらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら
制約されるものではない。
【００３１】参 考 例 １. ＰＡＦアセチルヒドロラーゼ活性の測定： （１） １−Ｏ−［１−14C］ヘキサデシル−リゾＰＡＦ
（New England Nuclear社製；以下、「標識リゾＰＡ
Ｆ」という）を、未標識リゾＰＡＦ（Bachem Feinchemi
kalien 社）を用いて、４,０００ｄｐｍ／ｎｍｏｌに希
釈、調製した。一方、１−Ｏ−ヘキサデシル−２−［3H
−アセチル］−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（以
下、「3H−アセチルＰＡＦ」という）を、未標識リソＰ
ＡＦを用いて、３,２００ｄｐｍ／ｎｍｏｌに希釈、調
製した。ＰＡＦアセチルヒドロラーゼ測定用の標準培養
システムは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７.
４）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ２−メルカプトエタノ
ール（２−ＭＥ）および２０ｎｍｏｌ 3H−アセチルＰ
ＡＦで構成され、サンプルの総容量は０.２５ｍｌであ
った。
【００３２】（２） ＰＡＦアセチルヒドロラーゼの測
定は、上記標準培養システム中で被検試料を３７℃で３
０分間培養し、２.５ｍｌのクロロホルム／メタノール
（４：１ Ｖ／Ｖ）と０.２５ｍｌの水を加えることによ
り反応を停止させた後、各上層の少量（０.６ｍｌ）の
放射活性を測定し、3H−アセチルＰＡＦから遊離したア
セテートの量を求めることにより行った。
【００３３】実 施 例 １ ウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼの取得： （１） 新鮮な牛の肝臓を屠殺場から購入し、屠殺３時
間以内に処理した。 全ての処理は、０−４℃で行っ
た。 肝臓は、５倍量のホモジュナイズ用緩衝液（１０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７.４）、２５０ｍＭ シ
ュークロース、１ｍＭ ＥＤＴＡ）を加え、ワリング・
ブレンダーでホモジュナイズした。 得られたホモジェ
ネートを３０分間、１００,０００×ｇで遠心し、固体
部分を除去し、得られた上清を更に１時間、１００,０
００×ｇで遠心して溶解部分を得た（上清部分）。
【００３４】（２） （１）で得られた上清部分を、Ｎ
ａＣｌで１Ｍに調整し、１５分間撹拌した後、予め５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７.４）、１ｍＭ ＥＤＴ
Ａおよび１ｍＭ ＮａＣｌよりなる緩衝液で平衡化した
ブチルトヨパール６５０Ｍカラムに付した。 カラムを
同じ緩衝液で洗浄した後、プロテインをＮａＣｌ（１−
０Ｍ）の直線グラジュエントにより溶出した。 ＰＡＦ
アセチルヒドロラーゼ活性は、１−０Ｍ ＮａＣｌフラ
クション中において、単一ピークとして溶出された。
【００３５】（３） ブチル−トヨパールカラムからの
活性部分を、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７.
４）、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび２０％（Ｖ／Ｖ）グリセ
ロール（緩衝液Ａ）で平衡化したＱ−セファローズカラ
ムに付した。 カラムを緩衝液Ａで洗浄し、プロテイン
を緩衝液Ａ中のＮａＣｌ（０−５００ｍＭ）の直線グラ
ジュエントにより溶出した。 活性は、約３００ｍＭ Ｎ
ａＣｌで溶出される画分中に存在した。
【００３６】（４） Ｑ−セファローズカラムよりの活
性画分を、ＹＭ−１０メンブレンを用いるアミコン・ウ
ルトラフィルトレーション・セルにより約６ｍｌに濃縮
した。この濃縮された画分を、予め１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ（ｐＨ ７.４）、２００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍ
Ｍ ２−ＭＥ、２０％（Ｖ／Ｖ）グリセロールおよび０.
５％（Ｗ／Ｖ）ＣＨＡＰＳ（緩衝液Ｂ）で平衡化したバ
イオゲル Ａ−１.５ｍゲル濾過カラムに付した。 活性
は、分子量約４０ｋＤａに対応する画分に単一ピークと
して溶出された。
【００３７】（５） バイオゲル Ａ−１.５ｍ カラムの
活性画分を、予め１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
７.４）、５ｍＭ ２−ＭＥ、２０％（Ｖ／Ｖ）グリセロ
ールおよび０.５％（Ｗ／Ｖ）ＣＨＡＰＳ（緩衝液Ｃ）
で平衡化したヒドロキシアパタイトカラムに付した。
プロテインは、緩衝液Ｃ単独から１５０ｍＭ ＫＨ2PＯ4
を含む緩衝液Ｃまでで直線グラジュエントにより溶出し
た。 活性は、約５０ｍＭ ＫＨ2PＯ4で溶出される画分
中に存在した。
【００３８】（６） ヒドロキシアパタイトからの活性
画分は、緩衝液Ｃに対して透析され、予め緩衝液Ｃによ
り平衡化されたＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｑ ＨＲ ５／５カラ
ムに付された。 プロテインは、緩衝液Ｃ中のＮａＣｌ
（０−５００ ｍＭ）の直線グラジュエントにより溶出
された。 活性は、２５０ｍＭ ＮａＣｌにより溶出され
る画分に存在し、これを精製ウシＰＡＦアセチルヒドロ
ラーゼとして得た。以上の各精製工程におけるプロテイ
ン量、全活性、精製倍率等を表にして示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】実 施 例 ２ ウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼのアミノ酸配列の決
定： （１） 約０.２ｍｇの、実施例１で得た精製ＰＡＦアセ
チルヒドロラーゼを、１ｍｇのジチオスレイトールによ
り、室温で２時間還元し、次いで０.６％（Ｗ／Ｖ）４
−ビニルピリジンを用い、室温で２時間Ｓ−アルキル化
した。この反応混合物を、予め０.１％（Ｖ／Ｖ）トリ
フルオロ酢酸を含む２０％（Ｖ／Ｖ）アセトニトリルで
平衡化した４.６ｍｍ×２５０ｍｍ バイダック３０４−
１２５１ Ｃ4カラムを用いる逆相高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）に付し、０.１％（Ｖ／Ｖ）トリフ
ロロ酢酸を含むアセトニトリル（２０−８５％Ｖ／Ｖ）
の直線グラジュエントによりプロテインを溶出した。
【００４１】（２） ＨＰＬＣで精製した４０ｋＤａの
ポリペプチドをリシルエンドペプチダーゼ消化緩衝液
（０.５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ８.５）および４Ｍ
尿素）に対して透析した。 次いで、１μｇのリシルエ
ンドペプチダーゼを試料に加え、反応混合物を１８時
間、３７℃で培養した後、０.１％（Ｖ／Ｖ）トリフロ
ロ酢酸を含むアセトニトリル（５−７０％ Ｖ／Ｖ）の
直線グラジュエントを用いる４.６ｍｍ×２５０ｍｍ バ
イダック３０４−１２５１ Ｃ4カラムの逆相ＨＰＬＣで
分離した。
【００４２】（３） 逆相ＨＰＬＣで得られたペプチド
フラグメントのアミノ酸配列を、アプライド・バイオシ
ステム・モデル４７７Ａ 自動シーケンサーにより定め
た。このペプチドフラグメントのアミノ酸配列から求め
た、ウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼの塩基配列は上記
式（III）の通りであった。
【００４３】また、式（III）のウシＰＡＦアセチルヒ
ドロラーゼのペプチド配列から、公知方法に従って当該
酵素をコ−ドする遺伝子を求めたところ、前記式（IV）
であることを見い出した。
【００４４】実 施 例 ３ 非活性ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡのクロ
ーニング：ヒト胎児肝ｃＤＮＡライブラリー（ｐＲｃ／
ＣＭＶ）およびヒト脳ｃＤＮＡライブラリー（ｐＣＭＶ
ＳＰＯＲＴＳ）各５０万クローンを、実施例２で得た
ウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを鋳型とし、
フルオレッセイン１２−ｄＵＴＰをＰＣＲにより取り込
ませた後、これをＥＣＬで検出するコロニーハイブリダ
イゼーションに付し、クローニングを行った。 この結
果、ヒト脳ライブラリーより１個の陽性クローンを得
た。
【００４５】プラスミドＤＮＡを調製し塩基配列を決定
したところ、このクローンは開始メチオニンをコードす
るＡＴＧを含む完全長クローンで、コードするＮ末端の
４３アミノ酸は、ウシＰＡＦアセチルヒドロラーゼの配
列と４０アミノ酸までが同一であり、３'端にはポリＡ
が存在していた。 更に正確な塩基配列の決定を行った
結果、このｃＤＮＡは、２１８８ｂｐからなり、２５３
アミノ酸からなるＯＲＦを含むものであるが、ウシＰＡ
ＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡと比較した場合、１４
０アミノ酸が欠失したものであった。 欠失した１４０
アミノ酸部分は、触媒活性を担うセリン、ヒスチジンお
よびアスパラギン酸の ”catalytic triad”を含んでお
り、ＰＡＦ分解活性はないものと思われる。
【００４６】そこで、この欠失した領域を挟む位置でプ
ライマーを合成し、ライブラリーＤＮＡを鋳型としてＰ
ＣＲを行ったところ、ヒト脳ｃＤＮＡでは、上記の１４
０アミノ酸が欠失したものと、ウシＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼｃＤＮＡとほぼ同一の長さを有する２本のバン
ドが得られた。 このことから、ヒト脳ライブラリーＤ
ＮＡには、上で得たｃＤＮＡの他、実際にＰＡＦ分解活
性を有するヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡが
存在することが予想された。
【００４７】実 施 例 ４ ヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡのクローニン
グ：ヒト脳ｃＤＮＡライブラリーを２０００クローン／
ウエルとなるように希釈し、９６ウエルプレート５枚で
培養を行った。 １０ウエルからなるサブプールを作製
し、ＰＣＲ法により陽性プールを確認した（１０、２
０、２８、３８）。これらのサブプールについて、１ウ
エル毎にＰＣＲ法を行ない、陽性プールを確認した（１
０−５、２０−１０、３８−１２）。
【００４８】これらのプールについて、希釈後、プレー
トにて培養を行い、非活性ヒトＰＡＦアセチルヒドロラ
ーゼｃＤＮＡをプローブとしてハイブリダイゼーション
によりクローン化を試みた。 ＤＮＡの標識は、フルオ
レッセイン１２−ｄＵＴＰを用いたＰＣＲ法により行な
い、検出はＥＣＬ法で行った。 陽性コロニーを、プー
ル１０−５、２０−１０より得た。 これらのクローン
のプラスミドＤＮＡを複製し、塩基配列の決定を行っ
た。この結果、クローン１０−５より、前記式（II）で
表されるヒトＰＡＦアセチルヒドロラーゼｃＤＮＡを得
ることができた。
【００４９】得られたｃＤＮＡを元に、ヒトＰＡＦアセ
チルヒドロラーゼのアミノ酸配列を求めたところ、前記
式（I）の通りであり、ウシＰＡＦアセチルヒドロラー
ゼとその配列が８８％まで同一であった（３４６／３９
２アミノ酸）。 また、血漿型ヒトＰＡＦアセチルヒド
ロラーゼとは、４２％同一であった（１６２／３９２ア
ミノ酸）。更に、上記ｃＤＮＡをｐＵＣ−ＰＬ−ｃｌベ
クターに組込み、Ｅ.ｃｏｌｉ Ｗ３１１０に導入し、こ
れを発現させたところ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで４２ｋＤａ
の分子量のタンパク質のバンドを検出した。このタンパ
ク質の活性を調べたところ、ヒトＰＡＦアセチルヒドロ
ラーゼ活性が認められた。
【００５０】
【配列表】
配列番号：１ 配列の長さ：３９２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ウシ（Bos taurus） 配列： Met Gly Val Asn Gln Ser Val Ser Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro 1 5 10 15 His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Ser Leu Gln 20 25 30 Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Glu Ala Glu Glu 35 40 45 Thr Ser Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Ala 50 55 60 Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Lys Phe Asn Lys Arg Trp Gly Gly Leu 65 70 75 Leu Phe Asn Leu Gly Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp 80 85 90 Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile 95 100 105 Phe Ser His Gly Met Gly Ala Phe Arg Thr Val Tyr Ser Ala Phe 110 115 120 Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu 125 130 135 His Arg Asp Gly Ser Ala Ala Ala Thr Cys Phe Cys Lys Gln Thr 140 145 150 Pro Glu Glu Asn Gln Pro Asp Asn Glu Ala Leu Lys Glu Glu Trp 155 160 165 Ile Pro His Arg Gln Ile Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe Tyr Val 170 175 180 Arg Asn Tyr Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Val Arg Val 185 190 195 Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Ala Val Leu Asn 200 205 210 Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Gly Ile 215 220 225 Asp Val Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala 230 235 240 Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Met Gln Phe Arg Cys Ala 245 250 255 Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu His Asp Phe Tyr 260 265 270 Pro Thr Ala Arg Gly Pro Ile Phe Phe Ile Asn Ala Glu Lys Phe 275 280 285 Gln Thr Val Glu Thr Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Asp Gln 290 295 300 His His Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg 305 310 315 Ser Leu Thr Asp Phe Val Phe Val Ala Gly Asn Trp Ile Ser Lys 320 325 330 Phe Phe Ser Ser His Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly 335 340 345 Gln Glu Thr Val Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His 350 355 360 Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asp Gln Trp Asn Asn Phe Ile Glu 365 370 375 Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser 380 385 390 Ser Leu 392
【００５１】配列番号：２ 配列の長さ：１６６５ 配列の型：核酸 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ウシ（Bos taurus） 配列： GTCGACCCACGCGTCCGAGTTGACCGTCTGGGCTGTTTCTGAGGGTCAAC 50 GTGACTCGCCGTCAAGTTCAGCCACTGCCCAAGTCGTCGTTCAGTTCAGTTGGTTATGAG 110 ATG GGG GTC AAC CAG TCT GTG AGC TTC CCA CCC GTC ACG GGA CCC 155 Met Gly Val Asn Gln Ser Val Ser Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro 1 5 10 15 CAC CTC GTA GGC TGT GGG GAT GTG ATG GAG GGT CAG AGC CTC CAG 200 His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Ser Leu Gln 20 25 30 GGC AGC TTC TTT CGA CTG TTC TAC CCG TGC CAA GAG GCA GAG GAG 245 Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Glu Ala Glu Glu 35 40 45 ACC TCG GAG CAG CCC CTG TGG ATT CCC CGC TAT GAG TAC TGC GCT 290 Thr Ser Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Ala 50 55 60 GGC CTG GCC GAA TAC CTA AAG TTT AAT AAG CGC TGG GGG GGG TTA 335 Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Lys Phe Asn Lys Arg Trp Gly Gly Leu 65 70 75 CTG TTC AAC CTG GGT GTG GGA TCT TGT CGC CTG CCT GTT AGC TGG 380 Leu Phe Asn Leu Gly Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp 80 85 90 AAT GGC CCC TTT AAA ACA AAG GAC TCT GGA TAC CCC TTG ATC ATC 425 Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile 95 100 105 TTC TCT CAT GGC ATG GGA GCC TTC AGG ACA GTG TAT TCA GCC TTC 470 Phe Ser His Gly Met Gly Ala Phe Arg Thr Val Tyr Ser Ala Phe 110 115 120 TGC ATG GAG CTG GCT TCT CGT GGC TTT GTG GTT GCT GTA CCA GAG 515 Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu 125 130 135 CAC AGG GAT GGG TCA GCT GCG GCC ACC TGT TTC TGC AAG CAG ACC 560 His Arg Asp Gly Ser Ala Ala Ala Thr Cys Phe Cys Lys Gln Thr 140 145 150 CCA GAG GAG AAC CAG CCT GAC AAT GAG GCC CTG AAG GAG GAA TGG 605 Pro Glu Glu Asn Gln Pro Asp Asn Glu Ala Leu Lys Glu Glu Trp 155 160 165 ATC CCC CAC CGT CAA ATT GAG GAA GGG GAG AAG GAA TTC TAT GTT 650 Ile Pro His Arg Gln Ile Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe Tyr Val 170 175 180 CGG AAC TAC CAG GTG CAT CAG AGG GTG AGC GAG TGT GTG AGG GTG 695 Arg Asn Tyr Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Val Arg Val 185 190 195 TTG AAG ATC CTA CAA GAG GTC ACT GCT GGG CAG GCC GTT CTC AAC 740 Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Ala Val Leu Asn 200 205 210 ATC TTG CCT GGC GGA TTG GAT CTG ATG ACC TTG AAG GGC GGC ATT 785 Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Gly Ile 215 220 225 GAC GTG AGC CGT GTG GCT GTA ATG GGA CAT TCA TTT GGA GGG GCC 830 Asp Val Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala 230 235 240 ACA GCT ATT CTG GCC TTG GCC AAG GAG ATG CAA TTT AGG TGT GCT 875 Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Met Gln Phe Arg Cys Ala 245 250 255 GTG GCT TTG GAC GCT TGG ATG TTT CCT CTG GAG CAT GAC TTT TAC 920 Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu His Asp Phe Tyr 260 265 270 CCC ACG GCC CGA GGC CCT ATC TTC TTT ATC AAT GCT GAG AAG TTC 965 Pro Thr Ala Arg Gly Pro Ile Phe Phe Ile Asn Ala Glu Lys Phe 275 280 285 CAG ACA GTG GAG ACT GTC AAC TTG ATG AAA AAG ATT TGT GAC CAG 1010 Gln Thr Val Glu Thr Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Asp Gln 290 295 300 CAC CAC CAA TCC AGG ATC ATA ACT GTC CTT GGT TCT GTT CAT CGG 1055 His His Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg 305 310 315 AGT CTA ACC GAC TTT GTT TTT GTG GCT GGT AAC TGG ATT AGT AAA 1100 Ser Leu Thr Asp Phe Val Phe Val Ala Gly Asn Trp Ile Ser Lys 320 325 330 TTC TTC TCC AGT CAC ACC CGT GGA AGC TTG GAC CCC TAT GAA GGT 1145 Phe Phe Ser Ser His Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly 335 340 345 CAG GAG ACC GTG GTG CGG GCC ATG TTG GCC TTC CTG CAG AAG CAT 1190 Gln Glu Thr Val Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His 350 355 360 CTT GAC CTG AAA GAG GAC TAT GAC CAG TGG AAC AAC TTC ATT GAA 1235 Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asp Gln Trp Asn Asn Phe Ile Glu 365 370 375 GGC ATT GGC CCA TCA CTG ACC CCA GGG GCC CCA CAC CAT CTG TCC 1280 Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser 380 385 390 AGC CTG TAG GCACAACTGGTCATCTTGTGGAAGGTCCCTGAGCTGAGTTCCCGTGT 1336 Ser Leu 392 GGGGCCTGCCCAGGGATACCCTTGGCCTCCTATCAGGAAGTGATTGCCATGACCCTTCTG 1396 TGTTGATTGAGAGGATATAATCACACTGCTGATTGGTAACGGGGTACTTGGATTCTCAGA 1456 CTTGTCGATCTTAAACTCATGTTGGGACTTGGGTTCACTTACTGATGGGCAAACGGGCAT 1516 TCTGAGGACTGAGCCTTAATGGTATGGAGAACAAACAGTGGGATGGGGCTGGGGAAGATC 1576 TAAGCCCTAAGCTGGGCACTATGAGCCCTATAAACCCAACCAGCCAACACCCTCACCTTG 1636 GGCAAGTATGACTTCTGCAGGTCGACTCT 1665
【００５２】配列番号：３ 配列の長さ：３９２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヒト 配列： Met Gly Val Asn Gln Ser Val Gly Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro 1 5 10 15 His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Asn Leu Gln 20 25 30 Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Lys Ala Glu Glu 35 40 45 Thr Met Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Thr 50 55 60 Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Phe Asn Lys Arg Cys Gly Gly Leu 65 70 75 Leu Phe Asn Leu Ala Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp 80 85 90 Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile 95 100 105 Phe Ser His Gly Leu Gly Ala Phe Arg Thr Leu Tyr Ser Ala Phe 110 115 120 Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu 125 130 135 His Arg Asp Arg Ser Ala Ala Thr Thr Tyr Phe Cys Lys Gln Ala 140 145 150 Pro Glu Glu Asn Gln Pro Thr Asn Glu Ser Leu Gln Glu Glu Trp 155 160 165 Ile Pro Phe Arg Arg Val Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe His Val 170 175 180 Arg Asn Pro Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Leu Arg Val 185 190 195 Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Thr Val Phe Asn 200 205 210 Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Asn Ile 215 220 225 Asp Met Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala 230 235 240 Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gln Phe Arg Cys Ala 245 250 255 Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu Arg Asp Phe Tyr 260 265 270 Pro Lys Ala Arg Gly Pro Val Phe Phe Ile Asn Thr Glu Lys Phe 275 280 285 Gln Thr Met Glu Ser Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Ala Gln 290 295 300 His Glu Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg 305 310 315 Ser Gln Thr Asp Phe Ala Phe Val Thr Gly Asn Leu Ile Gly Lys 320 325 330 Phe Phe Ser Thr Glu Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly 335 340 345 Gln Glu Val Met Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His 350 355 360 Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asn Gln Trp Asn Asn Leu Ile Glu 365 370 375 Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser 380 385 390 Ser Leu 392
【００５３】配列番号：４ 配列の長さ：２５６９ 配列の型：核酸 配列の種類：cDNA 起源： 生物名：ヒト 配列： GCAGGTCTCGACCCACGCGTCCGCGGACGCGTGGG 35 CGAGAAGTGCTTCCAAGCGTCCATTTTGAGCCTTGGAAACTACGACGACCAAAGGGCCAC 95 GGGTTCCTGGGTCGTTTCTCATTTCCGTCGAGTTAAACGTCTGGGGCTGCTTCTGAGGAA 155 TCAGCTTGGCTGGCCAGCAAGTTCAGCTCCGGCAAGTCATTTGATTCACCCGGTGATGAA 215 ATG GGG GTC AAC CAG TCT GTG GGC TTT CCA CCT GTC ACA GGA CCC 260 Met Gly Val Asn Gln Ser Val Gly Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro 1 5 10 15 CAC CTC GTA GGC TGT GGG GAT GTG ATG GAG GGT CAG AAT CTC CAG 305 His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Asn Leu Gln 20 25 30 GGG AGC TTC TTT CGA CTC TTC TAC CCC TGC CAA AAG GCA GAG GAG 350 Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Lys Ala Glu Glu 35 40 45 ACC ATG GAG CAG CCC CTG TGG ATT CCC CGC TAT GAG TAC TGC ACT 395 Thr Met Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Thr 50 55 60 GGC CTG GCC GAG TAC CTG CAG TTT AAT AAG CGC TGC GGG GGC TTG 440 Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Phe Asn Lys Arg Cys Gly Gly Leu 65 70 75 CTG TTC AAC CTG GCG GTG GGA TCT TGT CGC CTG CCT GTT AGC TGG 495 Leu Phe Asn Leu Ala Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp 80 85 90 AAT GGC CCC TTT AAG ACA AAG GAC TCT GGA TAC CCC TTG ATC ATC 540 Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile 95 100 105 TTC TCC CAT GGC CTA GGA GCC TTC AGG ACT TTG TAT TCA GCC TTC 585 Phe Ser His Gly Leu Gly Ala Phe Arg Thr Leu Tyr Ser Ala Phe 110 115 120 TGC ATG GAG CTG GCC TCA CGT GGC TTT GTG GTT GCT GTG CCA GAG 630 Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu 125 130 135 CAC AGG GAC CGG TCA GCG GCA ACC ACC TAT TTC TGC AAG CAG GCC 675 His Arg Asp Arg Ser Ala Ala Thr Thr Tyr Phe Cys Lys Gln Ala 140 145 150 CCA GAA GAG AAC CAG CCC ACC AAT GAA TCG CTG CAG GAG GAA TGG 720 Pro Glu Glu Asn Gln Pro Thr Asn Glu Ser Leu Gln Glu Glu Trp 155 160 165 ATC CCT TTC CGT CGA GTT GAG GAA GGG GAG AAG GAA TTT CAT GTT 765 Ile Pro Phe Arg Arg Val Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe His Val 170 175 180 CGG AAT CCC CAG GTG CAT CAG CGG GTA AGC GAG TGT TTA CGG GTG 810 Arg Asn Pro Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Leu Arg Val 185 190 195 TTG AAG ATC CTG CAA GAG GTC ACT GCT GGG CAG ACT GTC TTC AAC 855 Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Thr Val Phe Asn 200 205 210 ATC TTG CCT GGT GGC TTG GAT CTG ATG ACT TTG AAG GGC AAC ATT 900 Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Asn Ile 215 220 225 GAC ATG AGC CGT GTG GCT GTG ATG GGA CAT TCA TTT GGA GGG GCC 945 Asp Met Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala 230 235 240 ACA GCT ATT CTG GCT TTG GCC AAG GAG ACC CAA TTT CGG TGT GCG 990 Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gln Phe Arg Cys Ala 245 250 255 GTG GCT CTG GAT GCT TGG ATG TTT CCT CTG GAA CGT GAC TTT TAC 1035 Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu Arg Asp Phe Tyr 260 265 270 CCC AAG GCC CGA GGA CCT GTG TTC TTT ATC AAT ACT GAG AAA TTC 1080 Pro Lys Ala Arg Gly Pro Val Phe Phe Ile Asn Thr Glu Lys Phe 275 280 285 CAG ACA ATG GAG AGT GTC AAT TTG ATG AAG AAG ATA TGT GCC CAG 1125 Gln Thr Met Glu Ser Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Ala Gln 290 295 300 CAT GAA CAG TCT AGG ATC ATA ACC GTT CTT GGT TCT GTT CAT CGG 1170 His Glu Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg 305 310 315 AGT CAA ACT GAC TTT GCT TTT GTG ACT GGC AAC TTG ATT GGT AAA 1215 Ser Gln Thr Asp Phe Ala Phe Val Thr Gly Asn Leu Ile Gly Lys 320 325 330 TTC TTC TCC ACT GAA ACC CGT GGG AGC CTG GAC CCC TAT GAA GGG 1260 Phe Phe Ser Thr Glu Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly 335 340 345 CAG GAG GTT ATG GTA CGG GCC ATG TTG GCC TTC CTG CAG AAG CAC 1305 Gln Glu Val Met Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His 350 355 360 CTC GAC CTG AAA GAA GAC TAT AAT CAA TGG AAC AAC CTT ATT GAA 1350 Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asn Gln Trp Asn Asn Leu Ile Glu 365 370 375 GGC ATT GGA CCG TCG CTC ACC CCA GGG GCC CCC CAC CAT CTG TCC 1395 Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser 380 385 390 AGC CTG TAG GCACAACTGGCCATTTGTAAAGTCACTTCAGCCAAGTTTTCATTTGGG 1452 Ser Leu * 392 AGCTACCCAAGGGCACCCATGAGCTCCTATCAAGAAGTGATCAACGTGACCCCTTTTCAC 1512 AGATTGAAAGGTGTAATCACACTGCTGCTTGGATAACTGGGTACTTTGATCTTAGATTTG 1572 ATCTTAAAATCACTTTGGGACTGGGATCCCTTGCTGATTGACAAACAGACTTTCTGGGAC 1632 CTTGATGGAGTGGGGAACAAGCAGTAGAGTGGGACTGGGGGAGACCCAGGCCCCGGGCTG 1692 AGCACTGTGAGGCCTGGATGTGAAGACTCAGCCCAGCGAAGCTCATTCCCTTACCCCCGG 1752 CCAGTGCTGCTGCTTCAGTGGAAGAGATGAAGCCAAAGGACAGAATGAAAATCCCTACCT 1812 TCAGAGACTCTAGCCCAGCCCAACACCATCTCTTCCTACCTCTCAGCCTTCTCCCTCCCC 1872 AGGGCCACTTGTTGAAGTCTGAGCACTTTATGTAAATTTCTAGGTGTGAGCCGTGATCAC 1932 ATTTTCTATTTATTTCCAAGTCTTCTCATTGTATGGAACATAGTACTACTTATACTTACA 1992 GTAGTAAGTTATACTTGTGAGCCCACAGAGTGGCAGACAGCATGGCTCTCACAGCACAGG 2052 GAGAAAAACTGAGGTACACAGAGGTACCTCAGAAGCTCTGGATGTCTTTGGGGGTTTTGC 2112 TAAGTGTATCTTGATAGGAAACAACAAAAGCAGGTTGAGATGGGGAAGATGACAGAACAA 2172 CAGTGTTAAATGGCCATTTGCACAGGCCTTTGCCACAACAGAGAAGTAGTTTGGTCAGCT 2232 AAAACTCAGCTGCAGCCTGGACAGTAGAGCGAGACCCCATCTTAAAAATAAAGAAGGCTG 2292 GGCGTGGTGGCTCATGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCAAGGCAGGCAGATCACT 2352 TAAGGCCAGGAGTTCAAGACCACCTGGCCAACATGGTGAAACCCCGTCTCTACTAAAAAT 2412 ACAAAAAATTAGCCTGGCGTAATGGCAGGCGCCTATAATCCCAGCTACTCAGGAGGCTGA 2472 AGCAGAAGAATCACTTGAACCTAGGAGGCGGAGGTTGCAGTGAGTCAAGATCGCGCCACT 2532 GCACTCCAGCCTGGGTGACAGAGCAAGACTCTGTCTT 2569 以 上
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 9282−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 9/14 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 井上 圭三 東京都江東区越中島１−３ 公務員住宅17 −605

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 次の式（I） Met Gly Val Asn Gln Ser Val Gly Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Asn Leu Gln Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Lys Ala Glu Glu Thr Met Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Thr Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Phe Asn Lys Arg Cys Gly Gly Leu Leu Phe Asn Leu Ala Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile Phe Ser His Gly Leu Gly Ala Phe Arg Thr Leu Tyr Ser Ala Phe Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu His Arg Asp Arg Ser Ala Ala Thr Thr Tyr Phe Cys Lys Gln Ala Pro Glu Glu Asn Gln Pro Thr Asn Glu Ser Leu Gln Glu Glu Trp Ile Pro Phe Arg Arg Val Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe His Val Arg Asn Pro Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Leu Arg Val Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Thr Val Phe Asn Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Asn Ile Asp Met Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Thr Gln Phe Arg Cys Ala Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu Arg Asp Phe Tyr Pro Lys Ala Arg Gly Pro Val Phe Phe Ile Asn Thr Glu Lys Phe Gln Thr Met Glu Ser Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Ala Gln His Glu Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg Ser Gln Thr Asp Phe Ala Phe Val Thr Gly Asn Leu Ile Gly Lys Phe Phe Ser Thr Glu Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly Gln Glu Val Met Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asn Gln Trp Asn Asn Leu Ile Glu Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser Ser Leu （I） で表されるアミノ酸配列またはこれと相同性を有するア
    ミノ酸配列で表されるヒト血小板活性化因子アセチルヒ
    ドロラーゼ活性を有するタンパク質。
  2. 【請求項２】 請求項第１項記載のタンパク質をコー
    ドするＤＮＡ。
  3. 【請求項３】 請求項第２項記載のＤＮＡを有する発
    現ベクター。
  4. 【請求項４】 請求項第３項記載の発現ベクターで形
    質転換された組換え宿主細胞。
  5. 【請求項５】 ヒト血小板活性化因子アセチルヒドロ
    ラーゼ活性を有するタンパク質の製造方法であって、請
    求項第４項記載の組換え宿主細胞を培養し、得られた培
    養物から当該タンパク質を採取することを特徴とする当
    該タンパク質の製造法。
  6. 【請求項６】 請求項第１項記載のタンパク質に対す
    る抗体。
  7. 【請求項７】 次の式（III） Met Gly Val Asn Gln Ser Val Ser Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Ser Leu Gln Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Glu Ala Glu Glu Thr Ser Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Ala Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Lys Phe Asn Lys Arg Trp Gly Gly Leu Leu Phe Asn Leu Gly Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile Phe Ser His Gly Met Gly Ala Phe Arg Thr Val Tyr Ser Ala Phe Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu His Arg Asp Gly Ser Ala Ala Ala Thr Cys Phe Cys Lys Gln Thr Pro Glu Glu Asn Gln Pro Asp Asn Glu Ala Leu Lys Glu Glu Trp Ile Pro His Arg Gln Ile Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe Tyr Val Arg Asn Tyr Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Val Arg Val Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Ala Val Leu Asn Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Gly Ile Asp Val Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Met Gln Phe Arg Cys Ala Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu His Asp Phe Tyr Pro Thr Ala Arg Gly Pro Ile Phe Phe Ile Asn Ala Glu Lys Phe Gln Thr Val Glu Thr Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Asp Gln His His Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg Ser Leu Thr Asp Phe Val Phe Val Ala Gly Asn Trp Ile Ser Lys Phe Phe Ser Ser His Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly Gln Glu Thr Val Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asp Gln Trp Asn Asn Phe Ile Glu Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser Ser Leu （III） で表されるアミノ酸配列またはこれと相同性を有するア
    ミノ酸配列で表されるウシ血小板活性化因子アセチルヒ
    ドロラーゼ活性を有するタンパク質をコードするＤＮ
    Ａ。
  8. 【請求項８】 請求項第７項記載のＤＮＡを有する発
    現ベクター。
  9. 【請求項９】 請求項第８項記載の発現ベクターで形
    質転換された組換え真核宿主細胞。
  10. 【請求項１０】 ウシ血小板活性化因子アセチルヒド
    ロラーゼ活性を有するタンパク質の製造方法であって、
    請求項第９項記載の組換え真核宿主細胞を培養し、得ら
    れた培養物から当該タンパク質を採取することを特徴と
    する当該タンパク質の製造法。
  11. 【請求項１１】 次の式（III） Met Gly Val Asn Gln Ser Val Ser Phe Pro Pro Val Thr Gly Pro His Leu Val Gly Cys Gly Asp Val Met Glu Gly Gln Ser Leu Gln Gly Ser Phe Phe Arg Leu Phe Tyr Pro Cys Gln Glu Ala Glu Glu Thr Ser Glu Gln Pro Leu Trp Ile Pro Arg Tyr Glu Tyr Cys Ala Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Lys Phe Asn Lys Arg Trp Gly Gly Leu Leu Phe Asn Leu Gly Val Gly Ser Cys Arg Leu Pro Val Ser Trp Asn Gly Pro Phe Lys Thr Lys Asp Ser Gly Tyr Pro Leu Ile Ile Phe Ser His Gly Met Gly Ala Phe Arg Thr Val Tyr Ser Ala Phe Cys Met Glu Leu Ala Ser Arg Gly Phe Val Val Ala Val Pro Glu His Arg Asp Gly Ser Ala Ala Ala Thr Cys Phe Cys Lys Gln Thr Pro Glu Glu Asn Gln Pro Asp Asn Glu Ala Leu Lys Glu Glu Trp Ile Pro His Arg Gln Ile Glu Glu Gly Glu Lys Glu Phe Tyr Val Arg Asn Tyr Gln Val His Gln Arg Val Ser Glu Cys Val Arg Val Leu Lys Ile Leu Gln Glu Val Thr Ala Gly Gln Ala Val Leu Asn Ile Leu Pro Gly Gly Leu Asp Leu Met Thr Leu Lys Gly Gly Ile Asp Val Ser Arg Val Ala Val Met Gly His Ser Phe Gly Gly Ala Thr Ala Ile Leu Ala Leu Ala Lys Glu Met Gln Phe Arg Cys Ala Val Ala Leu Asp Ala Trp Met Phe Pro Leu Glu His Asp Phe Tyr Pro Thr Ala Arg Gly Pro Ile Phe Phe Ile Asn Ala Glu Lys Phe Gln Thr Val Glu Thr Val Asn Leu Met Lys Lys Ile Cys Asp Gln His His Gln Ser Arg Ile Ile Thr Val Leu Gly Ser Val His Arg Ser Leu Thr Asp Phe Val Phe Val Ala Gly Asn Trp Ile Ser Lys Phe Phe Ser Ser His Thr Arg Gly Ser Leu Asp Pro Tyr Glu Gly Gln Glu Thr Val Val Arg Ala Met Leu Ala Phe Leu Gln Lys His Leu Asp Leu Lys Glu Asp Tyr Asp Gln Trp Asn Asn Phe Ile Glu Gly Ile Gly Pro Ser Leu Thr Pro Gly Ala Pro His His Leu Ser Ser Leu （III） で表されるアミノ酸配列またはこれと相同性を有するア
    ミノ酸配列で表されるウシ血小板活性化因子アセチルヒ
    ドロラーゼ活性を有するタンパク質に対する抗体。
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