JPH0683670B2 - デオキシリボ核酸 - Google Patents

デオキシリボ核酸

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JPH0683670B2
JPH0683670B2 JP58147472A JP14747283A JPH0683670B2 JP H0683670 B2 JPH0683670 B2 JP H0683670B2 JP 58147472 A JP58147472 A JP 58147472A JP 14747283 A JP14747283 A JP 14747283A JP H0683670 B2 JPH0683670 B2 JP H0683670B2
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和雄 村上
重忠 中西
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KITSUKOOMAN KK
Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Fujifilm RI Pharma Co Ltd
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KITSUKOOMAN KK
Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Fujifilm RI Pharma Co Ltd
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • C12N9/6481—Pepsins (3.4.23.1; 3.4.23.2; 3.4.23.3)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は，ヒト・レニンもしくはその前駆体をコードし
たcDNAに関するものである。
ヒト・レニンおよびその不活性型前駆体であるプロレニ
ンは構造未知のポリペプチドで腎臓中に存在しており，
血圧の調節等に大きな役割を果たしていると言われてき
た。これらは，摘出臓器より極く微量が単離されるのみ
であり，それ故正確なアミノ酸配列を解明するには至っ
ていない。
本発明者は，摘出臓器のRNAを基にしてヒト・レニンお
よびプロレニンのcDNAを合成し，その塩基配列を解明し
ポリペプチドの遺伝子光学的製造を可能にした。
すなわち，本発明はヒト・レニンおよびプロレニンのcD
NAに関するものであり，さらにそれらのcDNAから導かれ
るヒト・レニンおよびプロレニンに関するものである。
次に,cDNAの製法を概説し，更に実施例により詳説す
る。
血漿レニン活性が大であった患者より摘出された腎断片
より細胞質内RNAを分離し，これをオリゴ（ dT）セルロ
ースカラムを用いて処理するとmRNAが得られる。これを
もとにしてオカヤマとバーグの方法により環状二重鎖DN
Aを合成する。すなわち，ベクタープライマーと呼ばれ
る環の一部分を欠損し，ポリ（Ｔ）の一端を有するプラ
スミドにポリ（Ａ）端を有するmRNAをアニーリングして
結合させ，逆転写によりcDNAを合成し，末端を処理した
後リンカーと呼ばれる部分を加えて環状となし，さらに
このもののRNA部分を除いてかつDNAポリメラーゼにより
DNAに置き換えてcDNAを組込んだプラスミドを作成す
る。
このプラスミドにより大腸菌を形質転換するとヒト腎臓
のcDNAライブラリーが得られる。上述のプラスミドはア
ンピシリンに対する耐性を有しているのでこれを利用し
てスクリーニングした後，ヒト・レニンと近似したアミ
ノ酸配列を有すると推定されているマウス顎下腺レニン
のcDNAを用いてコロニーハイブリダイゼイションを行な
い，目的とするヒト・レニンcDNAを組込んだプラスミド
を有する大腸菌を選択する。
得られた株からcDNAを取り出し，制限酵素切断地図を作
成し，かつ塩基配列を決定する。この結果，塩基数で42
個の非翻訳領域につづき1218個のペプチド翻訳領域さら
に199個の非翻訳領域の配列が解明された。
実施例 1. メッセンジャーRNAの単離 腎血管性高血圧の患者（血漿レニン活性が正常人の７倍
以上）より摘出した腎断片26gを,4Mグアニジンチオシア
ネート/0.5％N-ラウロイルサルコシン酸ナトリウム/25m
Mクエン酸ナトリウム,pH7.0/0.1M2-メルカプトエタノー
ル/0.1％AntifoamA（Sigma社製）溶液中でホモジェナイ
ズした。8000回転（Kubota,RA-6）10分間の遠心分離で
得た上清から，エタノール沈殿を繰り返すことにより細
胞質内RNA65.5mgを単離した（文献１）。
5.8mgのRNAをオリゴ（dT）セルロースカラムに通し（文
献２），最終的に280μｇのポリ(A)+RNAを得た。
2. cDNAライブラリーの作成 cDNA合成はオカヤマ及びバーグの方法（文献３）に従い
次のように行なった。尚，以下に記載されているベクタ
ープライマー及びリンカーについては文献３に開示され
たものと同じものを使用した。
5.6μｇのベクタープライマー及び22μｇのポリ(A)+RNA
を含む反応溶液（50mM Tris・HCl,pH8.3/8mM MgCl2/30m
M KCl/0.3mMジチオスレイトール/2mM（dATP,dTTP,dGTP,
dCTP）/80μCi〔α‐32P〕dCTP）に170単位の逆転写酵
素を加え37℃で30分間インキュベートし,cDNA第一鎖（m
RNA/cDNA-plasmid）を合成した。このcDNA第一鎖にdCTP
および20単位のターミナルデオキシヌクレオチジルトラ
ンスフェラーゼを37℃で10分間反応させることにより
３′未満にdC残基を付加し，次いでこれにHind III を
反応させHind III 切断部位及びポリdC残基を両端に有
するcDNAを作成した。得られたcDNA約2.7μｇをTEバッ
ファー（10mM Tris・HCl,pH7.4/1mM EDTA）20μに加
え，次いでこれを10X TEバッファー（100mM Tris・HCl,
pH7.4/10mM EDTA）20μ,1M NaCl20μ,dG残基を付加
したリンカー1.62pmolを含んだ水溶液36μ及び滅菌水
104μと混合し65℃で２分間次いで42℃で30分間イン
キュベートし，環状プラスミドを得た。
反応液を０℃で冷却し，このうちの100μを10Xリゲー
ションバッファー（200mM Tris・HCl,pH7.5/40mM MgCl2
/100mM硫酸アンモニウム/1M KCl）100μ,10mMβ‐NAD
10μ,1mg/mlの牛血清アルブミン50μ，滅菌水738
μ及びE.coli DNAリガーゼ４単位を含む水溶液２μ
と混合し12℃で一晩インキュベートした。
この反応液に10mM（dATP,dTTP,dGTP,dCTP）水溶液４μ
,10mMβ‐NAD 10μ,E.coliDNAリガーゼの水溶液1.5
μ（２単位／μ）,RNaseHの水溶液1.5μ（0.74単
位／μ）,DNAポリメラーゼＩの水溶液３μ（10単位
／μ）を混合し12℃で１時間次いで室温で１時間イン
キュベートし，前記の環状プラスミドのRNA鎖部分をDNA
鎖に置き換え環状二重鎖DNAを作成した（文献４）。こ
の反応液５μに滅菌水85μを加え環状二重鎖DNA水
溶液90μを得た。
E.coli HB101（寄託番号:FERMP-7199をLB培地（１％バ
クト‐ペプトン/0.5％バクト‐イースト抽出物/0.5％Na
Cl/0.1％グルコース）で培養する。Ａ650が0.3になった
時集菌し次いでこの菌体を50mM CaCl2溶液で処理しコン
ピテントセルとした。
この処理溶液100μ，前記の環状二重鎖DNA水溶液90μ
および10XTFバッファー（0.1M CaCl2/0.3M MgCl2）10
μを混合し,0℃で20分間次いで室温で10分間インキュ
ベートした。5mlのLB培地を加え37℃で１時間培養し，
集菌した菌体を80μのLB培地に懸濁し形質転換体（ヒ
ト腎臓のcDNAライブラリー）を得た。
3. レニンcDNA保持菌のスクリーニング 得られた形質転換体の懸濁液を，アンピシリン（50μg/
ml）を含んだLB寒天培地（寒天1.5％）に置いたニトロ
セルロースフィルター上に接種し37℃で培養しコロニー
を成育させた（5000〜10000コロニー／フィルター（径8
2mm））。次いでクロラムフェニコール（500μg/ml）を
含むLB寒天培地を用いてプラスミドを増幅させ，グラン
シュタイン‐ホッグネスの方法（文献５）によりプラス
ミドDNAをフィルターに固定した。
ヒト・レニンcDNA配列を持つ菌株を選択するためコロニ
ーハイブリダイゼーションを行なった。即ち，すでにク
ローニングしてあるマウス顎下腺レニンcDNA（文献６）
をニックトランスレーション法（文献７）により37Pで
標識しプローブDNA（比活性：約１×108cpm／μｇ）と
した。50mM Tris・HCl,pH7.6/10mM EDTA/1M NaCl/0.2％
ポリビニルピロリドン/0.2％Ficoll/0.2％牛血清アルブ
ミン/60μg/ml E.coli DNA/5〜10μg/mlプローブDNAの
水溶液に前記のプラスミドDNAを固定したフィルターを
浸し55℃で約18時間インキュベートした。フィルターを
37℃で0.3M NaCl/0.03Mクエン酸ナトリウム/0.1％ラウ
リル硫酸ナトリウムの水溶液を用い十分洗浄し，オート
ラジオグラフィーによりスポットを検出した。得られた
スポットに対応するコロニーについてもう一度コロニー
ハイブリダイゼーションを行ない（数10〜数100コロニ
ー／フィルター）レニンcDNAを持つ大腸菌を単離した。
4. ヒト・レニンcDNAの配列解析 コロニーハイブリダイゼーションの結果ポジティブであ
った形質転換体35株をそれぞれLB培地を用いて37℃で培
養し，各株よりプラスミドDNAをアルカリ法（文献８）
により抽出して制限酵素切断地図を作成した。この結
果，各プラスミドDNAに挿入されたcDNAは800〜1600塩基
対（bp）のサイズを持ち，各種の制限酵素切断部位は共
通に存在していた。最長のcDNAが組込まれたプラスミド
DNAをpHRn321と命名し，この最長レニンcDNAの制限酵素
切断地図を図１に，又マキサム‐ギルバート法（文献
９）により決定した全塩基配列を図２に示した。
図１及び図２において，塩基配列の番号はＮ末端のMet
をコードするATGのＡを１番とし，その上流は（−）を
つけて示した。図１において はタンパク質に翻訳される領域を，−は非翻訳領域を示
した。図２において，アミノ酸番号はＮ末端のMetを１
番とし，又シグナル配列の切断部位及びプロレニンの切
断部位と思われる位置をそれぞれ で示し，更に活性中心のAsp及びグリコシレーションの
可可能な配列を下線で示した。
この最長のレニンcDNAはポリＡ部分を除いて1459ヌクレ
オチドであった。最長のオープン解読フレームは406個
のアミノ酸をコードする1218ヌクレオチドから成り,5′
側に42ヌクレオチド,3′側に199ヌクレオチドの非翻訳
領域が存在していた。（図２参照） また，このレニンcDNAをプローブとしてノーザン法（文
献10）によりレニンmRNAを調べたところ,mRNAの塩基数
は1600ヌクレオチドであり，プラスミドpHRn321がほぼ
完全なレニンcDNAを組込んだプラスミドであることが明
らかとなった。
解読されたヒト・レニンのアミノ酸配列をマウス顎下腺
レニンのアミノ酸配列（文献11,12）と比較した結果，
ヒト・レニンはＮ末端にメチオニンから始まる20個の疎
水性に富むシグナル配列を持ち，又アミノ酸配列におけ
る66番目のアルギニン及び67番目のロイシン間の切断に
より活性型ヒト・レニンタンパク質ができると考えられ
た（図２参照）。活性型ヒト・レニンタンパク質の分子
量は37200であり，活性部位と考えられる103〜107番目
のアミノ酸配列（Phe-Asp-Thr-Gly-Ser）及び291〜294
番目のアミノ酸配列（Val-Asp-Thr-Gly）はマウス顎下
腺レニンの活性部位のアミノ酸配列と完全に一致し，更
に他の酸性プロテアーゼの活性部位とも強い相同性を示
した。又ヒト・レニンのアミノ酸配列とマウス顎下腺レ
ニンのアミノ酸配列との相同性は68％であった。さらに
71〜73番目のアミノ酸配列（Asn-Thr-Thr）及び141〜14
3番目のアミノ酸配列（Asn-Gly-Thr）は糖鎖の付加が可
能な配列であり，ヒト・レニンが糖タンパク質である可
能性が示唆された。
また，材料となる腎臓細胞の起源が相違することによ
り，得られるcDNAの塩基配列に一部相違が生ずることが
ある。さらに，このような相違については，人為的に生
じさせることも可能である。
【図面の簡単な説明】
図１はヒト・レニンcDNAの制限酵素切断地図を，図２は
ヒト・レニンcDNAの塩基配列及びヒト・レニンのアミノ
酸配列を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，1983〔32〕 Ｐ．1591−1598 ＪＰＮ，Ｃｉｒｅ．Ｊ．，1980〔44〕 Ｐ．274−282 Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，1980〔255〕 Ｐ．3498−3502

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記のアミノ酸配列のヒト・レニン又はヒ
    ト・レニン前駆体をコードするDNA: Met Asp Gly Trp Arg Arg Met Pro Arg Trp Gly Leu Leu Leu Leu Leu Trp Gly Ser Cys Thr Phe Gly Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg Met Pro Ser Ile Arg Glu Ser Leu Lys Glu Arg Gly Val Asp Met Ala Arg Leu Gly Pro Glu Trp Ser Gln Pro Met Lys Arg Leu Thr Leu Gly Asn Thr Thr Ser Ser Val Ile Leu Thr Asn Tyr Met Asp Thr Gln Tyr Tyr Gly Glu Ile Gly Ile Gly Thr Pro Pro Gln Thr Phe Lys Val Val Phe Asp Thr Gly Ser Ser Asn Val Trp Val Pro Ser Ser Lys Cys Ser Arg Leu Tyr Thr Ala Cys Val Tyr His Lys Leu Phe Asp Ala Ser Asp Ser Ser Ser Tyr Lys His Asn Gly Thr Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Ser Thr Gly Thr Val Ser Gly Phe Leu Ser Gln Asp Ile Ile Thr Val Gly Gly Ile Thr Val Thr Gln Met Phe Gly Glu Val Thr Glu Met Pro Ala Leu Pro Phe Met Leu Ala Glu Phe Asp Gly Val Val Gly Met Gly Phe Ile Glu Gln Ala Ile Gly Arg Val Thr Pro Ile Phe Asp Asn Ile Ile Ser Gln Gly Val Leu Lys Glu Asp Val Phe Ser Phe Tyr Tyr Asn Arg Asp Ser Glu Asn Ser Gln Ser Leu Gly Gly Gln Ile Val Leu Gly Gly Ser Asp Pro Gln His Tyr Glu Gly Asn Phe His Tyr Ile Asn Leu Ile Lys Thr Gly Val Trp Gln Ile Gln Met Lys Gly Val Ser Val Gly Ser Ser Thr Leu Leu Cys Glu Asp Gly Cys Leu Ala Leu Val Asp Thr Gly Ala Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Glu Lys Leu Met Glu Ala Leu Gly Ala Lys Lys Arg Leu Phe Asp Tyr Val Val Lys Cys Asn Glu Gly Pro Thr Leu Pro Asp Ile Ser Phe His Leu Gly Gly Lys Glu Tyr Thr Leu Thr Ser Ala Asp Tyr Val Phe Gln Glu Ser Tyr Ser Ser Lys Lys Leu Cys Thr Leu Ala Ile His Ala Met Asp Ile Pro Pro Pro Thr Gly Pro Thr Trp Ala Leu Gly Ala Thr Phe Ile Arg Lys Phe Tyr Thr Glu Phe Asp Arg Arg Asn Asn Arg Ile Gly Phe Ala Leu Ala Arg ;又は Thr Phe Gly Leu Pro Thr Asp Thr Thr Thr Phe Lys Arg Ile Phe Leu Lys Arg Met Pro Ser Ile Arg Glu Ser Leu Lys Glu Arg Gly Val Asp Met Ala Arg Leu Gly Pro Glu Trp Ser Gln Pro Met Lys Arg Leu Thr Leu Gly Asn Thr Thr Ser Ser Val Ile Leu Thr Asn Tyr Met Asp Thr Gln Tyr Tyr Gly Glu Ile Gly Ile Gly Thr Pro Pro Gln Thr Phe Lys Val Val Phe Asp Thr Gly Ser Ser Asn Val Trp Val Pro Ser Ser Lys Cys Ser Arg Leu Tyr Thr Ala Cys Val Tyr His Lys Leu Phe Asp Ala Ser Asp Ser Ser Ser Tyr Lys His Asn Gly Thr Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Ser Thr Gly Thr Val Ser Gly Phe Leu Ser Gln Asp Ile Ile Thr Val Gly Gly Ile Thr Val Thr Gln Met Phe Gly Glu Val Thr Glu Met Pro Ala Leu Pro Phe Met Leu Ala Glu Phe Asp Gly Val Val Gly Met Gly Phe Ile Glu Gln Ala Ile Gly Arg Val Thr Pro Ile Phe Asp Asn Ile Ile Ser Gln Gly Val Leu Lys Glu Asp Val Phe Ser Phe Tyr Tyr Asn Arg Asp Ser Glu Asn Ser Gln Ser Leu Gly Gly Gln Ile Val Leu Gly Gly Ser Asp Pro Gln His Tyr Glu Gly Asn Phe His Tyr Ile Asn Leu Ile Lys Thr Gly Val Trp Gln Ile Gln Met Lys Gly Val Ser Val Gly Ser Ser Thr Leu Leu Cys Glu Asp Gly Cys Leu Ala Leu Val Asp Thr Gly Ala Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Glu Lys Leu Met Glu Ala Leu Gly Ala Lys Lys Arg Leu Phe Asp Tyr Val Val Lys Cys Asn Glu Gly Pro Thr Leu Pro Asp Ile Ser Phe His Leu Gly Gly Lys Glu Tyr Thr Leu Thr Ser Ala Asp Tyr Val Phe Gln Glu Ser Tyr Ser Ser Lys Lys Leu Cys Thr Leu Ala Ile His Ala Met Asp Ile Pro Pro Pro Thr Gly Pro Thr Trp Ala Leu Gly Ala Thr Phe Ile Arg Lys Phe Tyr Thr Glu Phe Asp Arg Arg Asn Asn Arg Ile Gly Phe Ala Leu Ala Arg ;又は Leu Thr Leu Gly Asn Thr Thr Ser Ser Val Ile Leu Thr Asn Tyr Met Asp Thr Gln Tyr Tyr Gly Glu Ile Gly Ile Gly Thr Pro Pro Gln Thr Phe Lys Val Val Phe Asp Thr Gly Ser Ser Asn Val Trp Val Pro Ser Ser Lys Cys Ser Arg Leu Tyr Thr Ala Cys Val Tyr His Lys Leu Phe Asp Ala Ser Asp Ser Ser Ser Tyr Lys His Asn Gly Thr Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Ser Thr Gly Thr Val Ser Gly Phe Leu Ser Gln Asp Ile Ile Thr Val Gly Gly Ile Thr Val Thr Gln Met Phe Gly Glu Val Thr Glu Met Pro Ala Leu Pro Phe Met Leu Ala Glu Phe Asp Gly Val Val Gly Met Gly Phe Ile Glu Gln Ala Ile Gly Arg Val Thr Pro Ile Phe Asp Asn Ile Ile Ser Gln Gly Val Leu Lys Glu Asp Val Phe Ser Phe Tyr Tyr Asn Arg Asp Ser Glu Asn Ser Gln Ser Leu Gly Gly Gln Ile Val Leu Gly Gly Ser Asp Pro Gln His Tyr Glu Gly Asn Phe His Tyr Ile Asn Leu Ile Lys Thr Gly Val Trp Gln Ile Gln Met Lys Gly Val Ser Val Gly Ser Ser Thr Leu Leu Cys Glu Asp Gly Cys Leu Ala Leu Val Asp Thr Gly Ala Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Glu Lys Leu Met Glu Ala Leu Gly Ala Lys Lys Arg Leu Phe Asp Tyr Val Val Lys Cys Asn Glu Gly Pro Thr Leu Pro Asp Ile Ser Phe His Leu Gly Gly Lys Glu Tyr Thr Leu Thr Ser Ala Asp Tyr Val Phe Gln Glu Ser Tyr Ser Ser Lys Lys Leu Cys Thr Leu Ala Ile His Ala Met Asp Ile Pro Pro Pro Thr Gly Pro Thr Trp Ala Leu Gly Ala Thr Phe Ile Arg Lys Phe Tyr Thr Glu Phe Asp Arg Arg Asn Asn Arg Ile Gly Phe Ala Leu Ala Arg。
  2. 【請求項２】塩基配列が次の通りである特許請求の範囲
    第１項記載のDNA: ATG GAT GGA TGG AGA AGG ATG CCT CGC TGG GGA CTG CTG CTG CTG CTC TGG GGC TCC TGT ACC TTT GGT CTC CCG ACA GAC ACC ACC ACC TTT AAA GGG ATC TTC CTC AAG AGA ATG CCC TCA ATC CGA GAA AGC CTG AAG GAA CGA GGT GTG GAC ATG GCC AGG CTT GGT CCC GAG TGG AGC CAA CCC ATG AAG AGG CTG ACA CTT GGC AAC ACC ACC TCC TCC GTG ATC CTC ACC AAC TAC ATG GAC ACC CAG TAC TAT GGC GAG ATT GGC ATC GGC ACC CCA CCC CAG ACC TTC AAA GTC GTC TTT GAC ACT GGT TCG TCC AAT GTT TGG GTG CCC TCC TCC AAG TGC AGC CGT CTC TAC ACT GCC TGT GTG TAT CAC AAG CTC TTC GAT GCT TCG GAT TCC TCC AGC TAC AAG CAC AAT GGA ACA GAA CTC ACC CTC CGC TAT TCA ACA GGG ACA GTC AGT GGC TTT CTC AGC CAG GAC ATC ATC ACC GTG GGT GGA ATC ACG GTG ACA CAG ATG TTT GGA GAG GTC ACG GAG ATG CCC GCC TTA CCC TTC ATG CTG GCC GAG TTT GAT GGG GTT GTG GGC ATG GGC TTC ATT GAA CAG GCC ATT GGC AGG GTC ACC CCT ATC TTC GAC AAC ATC ATC TCC CAA GGG GTG CTA AAA GAG GAC GTC TTC TCT TTC TAC TAC AAC AGA GAT TCC GAG AAT TCC CAA TCG CTG GGA GGA CAG ATT GTG CTG GGA GGC AGC GAC CCC CAG CAT TAC GAA GGG AAT TTC CAC TAT ATC AAC CTC ATC AAG ACT GGT GTC TGG CAG ATT CAA ATG AAG GGG GTG TCT GTG GGG TCA TCC ACC TTG CTC TGT GAA GAC GGC TGC CTG GCA TTG GTA GAC ACC GGT GCA TCC TAC ATC TCA GGT TCT ACC AGC TCC ATA GAG AAG CTC ATG GAG GCC TTG GGA GCC AAG AAG AGG CTG TTT GAT TAT GTC GTG AAG TGT AAC GAG GGC CCT ACA CTC CCC GAC ATC TCT TTC CAC CTG GGA GGC AAA GAA TAC ACG CTC ACC AGC GCG GAC TAT GTA TTT CAG GAA TCC TAC AGT AGT AAA AAG CTG TGC ACA CTG GCC ATC CAC GCC ATG GAT ATC CCG CCA CCC ACT GGA CCC ACC TGG GCC CTG GGG GCC ACC TTC ATC CGA AAG TTC TAC ACA GAG TTT GAT CGG CGT AAC AAC CGC ATT GGC TTC GCC TTG GCC CGC。
  3. 【請求項３】塩基配列が次の通りである特許請求の範囲
    第１項記載のDNA: ACC TTT GGT CTC CCG ACA GAC ACC ACC ACC TTT AAA CGG ATC TTC CTC AAG AGA ATG CCC TCA ATC CGA GAA AGC CTG AAG GAA CGA GGT GTG GAC ATG GCC AGG CTT GGT CCC GAG TGG AGC CAA CCC ATG AAG AGG CTG ACA CTT GGC AAC ACC ACC TCC TCC GTG ATC CTC ACC AAC TAC ATG GAC ACC CAG TAC TAT GGC GAG ATT GGC ATC GGC ACC CCA CCC CAG ACC TTC AAA GTC GTC TTT GAC ACT GGT TCG TCC AAT GTT TGG GTG CCC TCC TCC AAG TGC AGC CGT CTC TAC ACT GCC TGT GTG TAT CAC AAG CTC TTC GAT GCT TCG GAT TCC TCC AGC TAC AAG CAC AAT GGA ACA GAA CTC ACC CTC CGC TAT TCA ACA GGG ACA GTC AGT GGC TTT CTC AGC CAG GAC ATC ATC ACC GTG GGT GGA ATC ACG GTG ACA CAG ATG TTT GGA GAG GTC ACG GAG ATG CCC GCC TTA CCC TTC ATG CTG GCC GAG TTT GAT GGG GTT GTG GGC ATG GGC TTC ATT GAA CAG GCC ATT GGC AGG GTC ACC CCT ATC TTC GAC AAC ATC ATC TCC CAA GGG GTG CTA AAA GAG GAC GTC TTC TCT TTC TAC TAC AAC AGA GAT TCC GAG AAT TCC CAA TCG CTG GGA GGA CAG ATT GTG CTG GGA GGC AGC GAC CCC CAG CAT TAC GAA GGG AAT TTC CAC TAT ATC AAC CTC ATC AAG ACT GGT GTC TGG CAG ATT CAA ATG AAG GGG GTG TCT GTG GGG TCA TCC ACC TTG CTC TGT GAA GAC GGC TGC CTG GCA TTG GTA GAC ACC GGT GCA TCC TAC ATC TCA GGT TCT ACC AGC TCC ATA GAG AAG CTC ATG GAG GCC TTG GGA GCC AAG AAG AGG CTG TTT GAT TAT GTC GTG AAG TGT AAC GAG GGC CCT ACA CTC CCC GAC ATC TCT TTC CAC CTG GGA GGC AAA GAA TAC ACG CTC ACC AGC GCG GAC TAT GTA TTT CAG GAA TCC TAC AGT AGT AAA AAG CTG TGC ACA CTG GCC ATC CAC GCC ATG GAT ATC CCG CCA CCC ACT GGA CCC ACC TGG GCC CTG GGG GCC ACC TTC ATC CGA AAG TTC TAC ACA GAG TTT GAT CGG CGT AAC AAC CGC ATT GGC TTC GCC TTG GCC CGC。
  4. 【請求項４】塩基配列が次の通りである特許請求の範囲
    第１項記載のDNA: CTG ACA CTT GGC AAC ACC ACC TCC TCC GTG ATC CTC ACC AAC TAC ATG GAC ACC CAG TAC TAT GGC GAG ATT GGC ATC GGC ACC CCA CCC CAG ACC TTC AAA GTC GTC TTT GAC ACT GGT TCG TCC AAT GTT TGG GTG CCC TCC TCC AAG TGC AGC CGT CTC TAC ACT GCC TGT GTG TAT CAC AAG CTC TTC GAT GCT TCG GAT TCC TCC AGC TAC AAG CAC AAT GGA ACA GAA CTC ACC CTC CGC TAT TCA ACA GGG ACA GTC AGT GGC TTT CTC AGC CAG GAC ATC ATC ACC GTG GGT GGA ATC ACG GTG ACA CAG ATG TTT GGA GAG GTC ACG GAG ATG CCC GCC TTA CCC TTC ATG CTG GCC GAG TTT GAT GGG GTT GTG GGC ATG GGC TTC ATT GAA CAG GCC ATT GGC AGG GTC ACC CCT ATC TTC GAC AAC ATC ATC TCC CAA GGG GTG CTA AAA GAG GAC GTC TTC TCT TTC TAC TAC AAC AGA GAT TCC GAG AAT TCC CAA TCG CTG GGA GGA CAG ATT GTG CTG GGA GGC AGC GAC CCC CAG CAT TAC GAA GGG AAT TTC CAC TAT ATC AAC CTC ATC AAG ACT GGT GTC TGG CAG ATT CAA ATG AAG GGG GTG TCT GTG GGG TCA TCC ACC TTG CTC TGT GAA GAC GGC TGC CTG GCA TTG GTA GAC ACC GGT GCA TCC TAC ATC TCA GGT TCT ACC AGC TCC ATA GAG AAG CTC ATG GAG GCC TTG GGA GCC AAG AAG AGG CTG TTT GAT TAT GTC GTG AAG TGT AAC GAG GGC CCT ACA CTC CCC GAC ATC TCT TTC CAC CTG GGA GGC AAA GAA TAC ACG CTC ACC AGC GCG GAC TAT GTA TTT CAG GAA TCC TAC AGT AGT AAA AAG CTG TGC ACA CTG GCC ATC CAC GCC ATG GAT ATC CCG CCA CCC ACT GGA CCC ACC TGG GCC CTG GGG GCC ACC TTC ATC CGA AAG TTC TAC ACA GAG TTT GAT CGG CGT AAC AAC CGC ATT GGC TTC GCC TTG GCC CGC。
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